A importância terapêutica e os resultados promissores apresentados pelos antineoplásicos são inquestionáveis, porém a ampla e crescente utilização desses fármacos, em terapia combinada entre duas ou mais destas substâncias químicas, é considerada um importante risco químico para os profissionais expostos. São recomendadas várias medidas, dentre elas a monitorização, visando a proteção à saúde dos trabalhadores e o controle da exposição. Nesse contexto, é de suma importância o desenvolvimento de métodos capazes de identificar e /ou quantificar os fármacos simultaneamente. Assim, este trabalho teve como objetivo desenvolver métodos analíticos para determinação simultânea de antineoplásicos em superfícies e luvas, uma vez que a via dérmica é a principal para a absorção dessas substâncias. Após vários testes, as condições otimizadas para o método de determinação de CF (ciclofosfamida), doxorrubicina (DOX), 5-FU (5-fluoruracila), IFO (ifosfamida) e MTX (metotrexato), em superfícies, utilizando a cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) foram: detecção a 195 nm (UV); coluna C18 (250 x 4,5 mm, 5 μm) com pré-coluna similar; fase móvel constituída de água pH 4,0: metanol: acetonitrila (70:13:17, v/v/v) com vazão de 0,4 mL min-1 até 13 minutos e, 1 mL min-1 até o final da corrida; solução de acetonitrila: metanol (50:50, v/v), como líquido de limpeza das superfícies de trabalho, sem extração prévia. Esse método demonstrou-se linear para a 5-FU e MTX, no intervalo de 0,25 a 20 μg mL-1 e, para DOX, CF e IFO, de 0,5 a 20 μg mL-1, com coeficientes de correlação linear superiores a 0,99. A recuperação obtida foi em torno de 74 a 106% e o coeficiente de variação foi inferior a 11%, na avaliação da repetibilidade. Para o método cromatográfico de determinação em luvas, as condições otimizadas foram, para os analitos 5-FU, MTX e paclitaxel (PAC): detecção em DAD (detector por arranjo de diodos) e quantificação em UV, sendo 195 nm, 265 nm e 302 nm, os comprimentos de onda utilizados para o PAC, 5-FU e MTX, respectivamente; coluna C18 (250 x 4,5 mm, 5 μM) com pré-coluna similar; fase móvel constituída de água pH 4,0: metanol: acetonitrila (35:15:50, v/v/v), com vazão de 1 mL min-1. Recuperação satisfatória foi obtida, para os analitos 5-FU e PAC, quando a amostra foi submetida à ELL, com acetato de etila e, para o MTX, quando submetida ao procedimento de extração em fase sólida (SPE), utilizando-se sílica modificada com C18 e eluição com metanol. O método demonstrou-se linear no intervalo de 0,25 a 20 μg mL-1, com coeficientes de correlação linear superiores a 0,99. A eficiência da extração foi em torno de 71 a 115% e a repetibilidade foi inferior a 15%. O método revelou-se eficiente na quantificação de amostras com concentração igual ou superior a 0,25 μg mL-1 e, na detecção daquelas com valores abaixo do LQ, através da utilização do DAD. Os resultados sugerem que os métodos podem ser utilizados na determinação simultânea de antineoplásicos, nas matrizes estudadas, e constituem ferramentas úteis na monitorização da exposição ocupacional à tais substâncias. / Therapeutic importance and benefits obtained from antineoplastic drugs are unquestionable. However, their side effects are not well-known and extensive use and exposure to multiple agents may put health care workers involved in the preparation and administration of these drugs at risk. Therefore, it is important to have accurate methods for simultaneous analysis and evaluation of the occupational exposure. The aim of this study was to develop methods for simultaneous determination of antineoplastics in surfaces and gloves since, in the occupational exposure, the main contamination route is dermal contact, which may occur by prolonged contact with contaminated surfaces or instruments/materials. The assay was performed by High Performance Liquid Chromatography (HPLC) and the optimized conditions for 5-fluorouracil (5-FU), methotrexate (MTX), doxorrubicin (DOX), cyclophosphamide (CP) and ifosfamide (IFO), in surface samples, were: detection in 195 nm, C18 column (5 μm, 250 x 4 mm) with a similar guard column; mobile phase was constituted by water, pH 4: methanol: acetonitrile (70:13:17, v/v/v) with a flow of 0.4 mL min-1 up to 13 minutes and after this 1 mL min-1 and cleaning of surfaces with acetonitrile: methanol (50:50), without previous extraction. The method presented a linear calibration range from 0.25 to 20 μg mL-1 for 5-FU and MTX and from 0.5 to 20 μg mL-1 for IFO, DOX and CP with determination coefficients (r2) higher than 0.99. The repeatability, expressed in terms of percent relative standard deviation was 11% and extraction efficiency ranged from 74 to 106%. Optimized conditions for 5-FU, MTX and paclitaxel (PAC), in gloves, were: diode array (DAD) detection and UV quantification in 195 nm to PAC, 265 nm to 5-FU and 302 nm to MTX; C18 column (5 μm, 250 x 4 mm) with a similar guard column; mobile phase was constituted by water, pH 4: methanol: acetonitrile (35:15:50, v/v/v) with a flow of 1 mL min-1. The method presented a linear calibration range from 0.25 to 20 μg mL-1 with determination coefficients (r2) higher than 0.99. Extraction efficiency was between 71 to 115% and repeatability, expressed in terms of percent relative standard deviation was 15% and satisfactory extraction efficiency was obtained when liquid extraction, with ethyl acetate, was used for 5-FU and PAC and solid phase, with C18 cartridges and elution with methanol, for MTX. DAD detector allowed drugs detection at concentration below 0.25 μg mL-1, in glove samples. The results obtained suggest that the developed methods can be applied for simultaneous determination of the drugs studied and are considered useful in exposure assessment for health care workers. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

Os parabenos são conservantes largamente utilizados na indústria cosmética, em produtos farmacêuticos e como aditivos alimentares. Têm uma longa história de utilização, uma vez que são economicamente muito rentáveis e pensa-se que são relativamente atóxicos para o homem. No entanto, recentes estudos apontam que os parabenos podem ter atividade estrogênica. O batom é um cosmético amplamente utilizado pelas mulheres e os componentes dele podem ser absorvidos tanto pela mucosa oral, quanto pelo trato digestório. A Cosmetotoxicologia é uma nova especialidade, dentro da Toxicologia, que surgiu graças às demandas do setor produtivo e do regulatório, e visa contribuir para a obtenção e/ou liberação para a população de produtos seguros e normatizados. Nesse contexto, é crescente a demanda para o desenvolvimento de métodos analíticos capazes de quantificar os parabenos nos cosméticos com confiabilidade, para fins de fiscalização e controle de qualidade. Além disso, como não são conhecidos os dados cinéticos dessas substâncias, faz-se necessário também desenvolver métodos para quantificar esses analitos em matrizes biológicas. Desse modo esse trabalho propõe, pela primeira vez, estudar a correlação entre o uso do batom e a concentração de parabenos no soro de mulheres que fazem uso desse cosmético labial. As metodologias de análise de parabenos tanto em batom quanto em sangue foram desenvolvidas e validadas seguindo protocolos de validação e os resultados foram satisfatórios para todos os parâmetros avaliados, tais como seletividade, detectabilidade, linearidade, precisão e exatidão. Foram analisadas amostras de 18 voluntárias em 3 fases, nas quais, em uma delas, as mulheres usaram batom contendo uma concentração conhecida de parabenos. Após tratamento estatístico dos dados, com aplicação de testes não-paramétricos, foi possível concluir que há absorção de parabenos por meio do uso de batom, uma vez que foi demonstrada diferença estatisticamente significativa (p < 0,05, no teste de Friedman) entre as concentrações de parabenos no soro de mulheres que utilizaram batom, contendo essas substâncias, em relação ao não uso do cosmético labial, e foi demonstrada forte correlação (coeficiente de Spearman com r= 0,7205) entre a quantidade usada desse batom e a concentração de parabenos no soro. / Parabens preservatives are widely used in the cosmetic, pharmaceuticals and food industry as additives. They have a long history of use since they are economically very advantageous and it is thought that they are relatively nontoxic to humans. However, recent studies indicate that parabens may have estrogenic activity. Lipstick is a cosmetic widely used by women and the components of it can be absorbed by both the oral mucosa, as the digestive tract. The Cosmetotoxicology is a new specialty within the Toxicology, which came about thanks to the demands of the productive and the regulatory sector, and aims to obtain and release of safe and standardized products to the public. In this context, there is a growing demand for the development of analytical methods to quantify parabens in cosmetics with reliably for inspection and quality control. Furthermore, since the kinetic data of these substances are not known, is also necessary to develop methods to quantify these analytes in biological matrices. Thus this paper proposes, for the first time a correlation between the use of lipstick and the amount of parabens in women who make use of this cosmetic. Methodologies of parabens analysis both in lipstick and in blood were developed and validated following validation protocols and the results were satisfactory for all parameters such as selectivity, detectability, linearity, precision and accuracy. Samples of 18 volunteers were analyzed in three stages, which in one of these stages, they made use of lipstick with parabens in a known concentration. After statistical processing of data, using a non-parametric tests, it was concluded that there is absorption of parabens through the use of lipstick, as was demonstrated statistically significant difference (p <0.05, the Friedman test) between the concentrations of parabens in the serum of women who used lipstick containing these substances, in relation to the non-use of cosmetic lip and was demonstrated strong correlation (Spearman coefficient r = 0.7205) between the used amount of lipstick and the concentration of parabens in serum. / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq

Os praguicidas são uma importante ferramenta na agricultura devido ao seu potencial em prevenir e controlar o crescimento de organismos prejudiciais à lavoura, resultando em um maior rendimento e melhoria da qualidade das plantações. Os fungicidas triazólicos representam uma das classes de praguicida mais empregada na agricultura de frutas, vegetais e grãos, devido ao seu excelente poder protetor, erradicante e curativo contra um amplo espectro de doenças agrícolas. Entretanto, a habilidade desses compostos de alterar a biossíntese de hormônios esteroidais pode resultar em complicações endócrinas para mamíferos, além de alterações nos níveis de colesterol e triglicerídeos e ainda em hepatotoxicidade, fazendo-se necessário o desenvolvimento de técnicas analíticas de preparo de amostras apropriadas para a extração e pré-concentração desses praguicidas nos recursos hídricos e em alimentos. Dentre as técnicas de análise de amostras ambientais, podemos destacar a extração em fase sólida em disco, que permite o emprego de alto volume de amostra e alto poder de pré-concentração dos analitos. Ainda sobre o preparo de amostras, destaca-se o surgimento dos nanotubos de carbono (CNT), um material recentemente empregado como fase extratora com alta capacidade sortiva, elevada área superficial e elevado volume interno, estabilidade e resistência mecânica, química e térmica. Desse modo, este trabalho propõe, pela primeira, vez o emprego de membrana de extração impregnada com CNT para a finalidade de extração de toxicantes orgânicos em amostras ambientais. A metodologia desenvolvida foi validada, seguindo protocolos internacionais de validação e foram obtidos limites de quantificação inferiores aos preconizados por legislações específicas – LIQ entre 0,1 e 0,5 ng.L-¹, em uma faixa analítica entre 50 e 100 a 10.000 ng.L-¹, com R² superior a 0,99. / The praguicides are an important tool in agriculture due its potential to prevent and control the growth of harmful organisms to crops, resulting in higher yields and improved quality of crops. The triazol fungicides represent one of pesticide classes mostly employed in agriculture of fruits, vegetables and grains, due to their excellent protective, eradicating and curative power against a broad spectrum of agricultural diseases. However, their ability to change steroid hormone biosynthesis may result in endocrine complications for mammals, as well as changes in cholesterol and triglyceride levels and hepatotoxicity, making necessary the development of analytical techniques for the extraction and pre-concentration of these pesticides on water resources and food. Among the analysis of environmental samples techniques highlight the disk solid phase extraction which allows the use of high sample volume and high pre-concentration power. Still on sample preparation carbon nanotubes (CNT) has been often used as solid extraction phase due to its high sorption capacity, high surface area, high internal volume and mechanical, chemical and thermal strength. Thus, this project proposed for the first time the use of extraction membrane impregnated with CNT for the extraction of organic toxicants in environmental samples. The developed methodology was validated following international validation protocols and quantification limits lower than the recommended by specific legislation were obatined – the limits of quantification were between 0,1 and 0,5 ng.L-¹ – and the analytical range were between 50 and 100 to 10.000 ng.L-¹, with linear coefficient correlation higher than 0,99. / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq

O tolueno (TOL) é um hidrocarboneto aromático amplamente utilizado em colas, tintas, detergentes, corantes, gasolina, solventes para tintas e produtos farmacêuticos. A exposição ao TOL pode ocorrer através da via inalatória e dérmica, no local de trabalho ou como droga de abuso. A literatura tem relatado a influência de alguns fármacos, como o etanol e o fenobarbital, na cinética de biotransformação do TOL devido interações no citocromo P450 (CYP). Os benzodiazepínicos (BZD) são fármacos amplamente utilizados na prática clínica e não há, até o presente momento, informações sobre a sua influência na eliminação de solventes orgânicos voláteis (SOV), utilizados no ambiente laboral. Dessa maneira, neste trabalho investigamos a influência do diazepam (DZP) na excreção do TOL pela determinação de seus produtos de biotransformação na urina, ácido hipúrico (AH) e orto-cresol (o-C). Para tal avaliação, ratos machos Wistar (n = 5, por grupo), de 250 ± 10 g, foram expostos ao solvente na concentração de 20 ppm em uma câmara de exposição do tipo nose only exposure system (6h/dia, 5 dias/semana, durante 6 semanas) com simultânea administração de DZP (10 mg Kg-1/dia) (GTOL/DZP). Animais submetidos às mesmas condições, porém sem receber DZP (GTOL), assim como um grupo de animais expostos ao ar atmosférico e tratados com DZP (10 mg Kg-¹/dia) (GDZP), também foram avaliados. O grupo controle (CTRL) foi submetido apenas à exposição ao ar atmosférico. A urina excretada durante as 16 h que sucederam a última exposição foi coletada e armazenada até o momento das análises. Os níveis de o-C urinário foram determinados pela técnica de extração líquido-líquido (ELL), seguida pela separação e detecção no cromatógrafo gasoso acoplado ao espectrômetro de massas (GC-EM), enquanto que através de uma diluição em água ultrapurificada (1:10, v/v) da urina coletada, AH e creatinina (CR) puderam ser determinados por cromatografia líquida de alta eficiência acoplada ao detector de arranjo de diodos (CLAE-DAD). A coleta de sangue ocorreu após 16 h da última administração de DZP. As concentrações plasmáticas de DZP e seu metabolito, nordiazepam (NOR), foram analisadas por CLAE-DAD com prévio preparo de amostras pela ELL. Todas as metodologias analíticas utilizadas no presente estudo foram satisfatoriamente validadas (r² > 0,99; precisão e exatidão com coeficiente de variação e erro relativo, respectivamente, inferiores a 15%). Após avaliações estatísticas dos dados foi possível observar que o DZP exerce influência sobre a excreção do o-C no grupo GTOL/DZP (teste de Mann-Whitney, p < 0,05), comparado ao grupo GTOL. Os resultados obtidos permitem concluir que o uso de DZP pode influenciar na excreção do TOL através do o-C urinário, sendo esta informação relevante no monitoramento biológico desse solvente. / Toluene (TOL) is an aromatic hydrocarbon widely used in glues, paints, detergents, dyes, gasoline, thinners and pharmaceuticals. Human exposure to TOL occurs through inhalation or skin contact, in the workplace, or as a drug of abuse. It has been reported that some drugs, such as ethanol and phenobarbital, can influence the kinetics of TOL metabolism due the interactions on cytochrome P450 (CYP) isozymes. Benzodiazepines (BZD) are drugs widely used and there is no information on the influence of this class of drugs on the eliminations of volatile organic solvents (VOS) in the labor environment. So, in the present study, we investigated the influence of diazepam (DZP) on the excretion of TOL by determination of their metabolites, hippuric acid (HA) and ortho-cresol (o-C). Male Wistar rats (n = 5 per group), 250 ± 10 g, were exposed to TOL at a concentration of 20 ppm in a nose-only exposure chamber (6h/day, 5 day/week, for 6 weeks) with simultaneous administration of DZP (10 mg Kg-1/day) (GTOL/DZP). A group treated under the same condition, but without DZP (GTOL), and a group exposed to air and treated with DZP (10 mg Kg-¹/day) (GDZP) were executed. The control group (CTRL) was exposed to air only. The urine excreted during the 16 h after the last exposure was collected and stored until the analysis. The urinary o-C levels were determined by liquid-liquid extraction (LLE), followed by separation and detection in a gas chromatography coupled to mass spectrometer (GC-MS), while, with a simple dilution of the collected urine in ultrapure water (1:10, v/v), HA and creatinine (CR) could be determined by high-performance liquid chromatography coupled to the photodiode array detector (HPLC-DAD). Blood collection occurred after 16 hours of the last administration of DZP. The plasma concentrations of DZP and its metabolite, nordiazepam (NOR), were analyzed by HPLC-DAD with prior sample preparation by LLE. All analytical methods used in this study were satisfactorily validated (r¹ > 0.99; accuracy and precision with relative standard deviation and relative error, respectively, less than 15%). After statistical processing of data it was possible to observe that there is influence of DZP on the excretion of o-C (p < 0.05, Mann-Whitney test) on the GTOL/DZP group, when compared to the GTOL group. The results permitted to conclude that the use of DZP seems to influence the excretion of TOL through the urinary o-C and this is a relevant information to be used in the biological monitoring of this solvent. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

Os benzodiazepínicos (BZD) são uma das classes de medicamentos mais consumidas mundialmente e sua utilização deve ser norteada pela administração das menores doses terapêuticas e pelo menor período de tempo possível devido aos riscos de dependência e abuso. Diante disso se faz necessário o acompanhamento farmacoterapêutico de pacientes para mensurar as concentrações plasmáticas dos fármacos e observar a sua efetividade e sua segurança. Para isso foi utilizado uma técnica de polímero de impressão molecular restrito a ligação com macromoléculas (RAM-MIP-BSA). O RAM-MIP-BSA, é um polímero sintetizado pelos métodos tradicionais e posteriormente revestido com uma camada hidrofílica que elimina as macromoléculas das amostras tornando o preparo de amostra mais simples e sendo aplicado diretamente na extração em fase sólida. Este estudo teve como objetivo a síntese de um RAM-MIP-BSA para uma classe farmacêutica (benzodiazepínicos) para fins de monitorização terapêutica. O diazepam foi utilizado como molécula modelo na síntese do polímero que foi acondicionado em cartucho para extração em fase sólida, sendo esta extração SPE-RAM-MIP-BSA a única etapa de preparo de amostra. O eluato da SPE foi levado à secura e ressuspendido para injeção em sistema cromatográfico com fase móvel de tampão fosfato 0,01 M pH 3,0 e acetonitrila (65:35, v/v); fluxo de 1 mL/min; detecção em UV a 220 nm; coluna C8; volume de injeção de 200 μL e tempo de análise cromatográfica de 20 minutos. O método foi validado segundo normas vigentes da ANVISA, demonstrando ser preciso, exato e estável e linear na faixa de 10 a 800 ng/mL. O RAM-MIP-BSA eliminou 100% das proteínas do plasma, sendo o processo de extração rápido, e pequena utilização de solventes orgânicos. Dos 18 voluntários incluídos no estudo em uso de BZD, 66,6% apresentaram níveis muito acima do intervalo terapêutico para cada fármaco. Este dado, que pode contribuir eventos adversos ou tóxicos, pode ser causado por interações entre medicamentos, desde que os pacientes estão em politerapia ou por alterações fisiológicas ocasionadas pelo envelhecimento, uma vez que 62% dos pacientes incluídos apresentam idade acima de 60 anos. / The Benzodiazepines (BZD) are a drugs class of most used worldwide and their use should be guided by administration of smaller doses and for the shortest period of time because due to dependence and abuse situations. Therefore, it is necessary pharmacokinetic and pharmacodynamic patients monitoring in order to determine plasma concentration of drugs and observe its effectiveness and safety. For this purpose a technique of molecular imprinting polymer restricted binding to macromolecules (RAM-MIP-BSA) was used. The RAM-MIP-BSA is a polymer synthesized by traditional methods and subsequently coated with a hydrophilic layer that eliminates the macromolecules of samples by making sample preparation simple in solid phase extraction. This study aims to synthesis of a RAM-MIP-BSA to a pharmaceutical class (benzodiazepines) for therapeutic drug monitoring. Diazepam was used as a model molecule in polymer synthesis; after synthesis, the polymer was packed into a cartridge for solid phase extraction, and extraction single step sample preparation. The eluate from SPE was evaporated to the dryness and resuspended for injection into the chromatographic system with mobile phase of 0.01 M phosphate buffer pH 3.0 and acetonitrile (65:35, v / v), flow rate 1 mL/min, UV detection at 220 nm; C8 column , injection volume of 200 μL and chromatographic analysis time of 20 minutes. The method was validated according to the current standards of ANVISA, proving to be precise, accurate and stable and linear in the range 10-800 ng / mL. The RAM-MIP-BSA eliminated 100% of the plasma proteins, with the rapid extraction process, and little use of organic solvents. The 18 subjects included in the study on the use of BZD, 66.6% presented levels above the therapeutic range for each drug. This data, which may contribute toxic or adverse events may be caused by drug interactions, since patients are on polytherapy or physiological changes caused by aging, since 62% of patients have included age over 60 years..

Made available in DSpace on 2011-03-23T21:19:21Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Item created via OAI harvest from source: http://www.bdtd.ufpa.br/tde_oai/oai2.php on 2011-03-23T21:19:21Z (GMT). Item's OAI Record identifier: oai:bdtd.ufpa.br:144 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / PPBIO/MCT - Programa de Pesquisa em Biodiversidade / Aniba canellila is a large size tree found in Northern region of Brazil and largely used in folk medicine. The infusate of its leaves and bark skin is believed to be a good antispasmodic, antidiarreic, anti-inflammatory, tonic agent and a good stimulant of digestive and the central nervous systems. This study was designed to evaluate the effects 1-nitro-2-phenylethane, main component of Aniba canelilla. We evaluated the antinociceptive and anti-inflammatory effects of the 1-nitro-2-phenylethane which is the main component of essential oil of Aniba canelilla. For nociception models were designed the writhing test, hot plate test and formalin test. For inflammation models were designed the croton oil-induced ear edema, rat paw edema induced by carrageenan and dextran, and leucocyte and neutrophil migration on carrageenan-induced peritonitis. In the writhing test, the 1-nitro-2-phenylethane dosed at 15, 25 and 50 mg/kg reduced the abdominal writhes in a significant manner. In the hot plate test (55 ? 0.5? C), the 1-nitro-2-phenylethane dosed at 50, 100 and 200 mg/kg did not induced alterations in the latency time when compared to the control. In the formalin test, the 1-nitro-2-phenylethane dosed at 50 and 25 mg/kg reduced in a significant manner the second phase of the algic stimulous. In addition, its antinociception was reversed by naloxone in the second phase. The 1-nitro2-phenyletahne produced inhibition of rat paw edema induced by carrageenan and dextran in a dose-dependent manner at the doses of 25 and 50 mg/kg. Doses of 25 and 50 mg/kg caused a dose-dependent inhibition of croton oil-induced ear edema in mice (with inhibition of 73% and 79%, respectively). Pretreatment (60 min) of rats with 1-nitro-2-phenylethane (25 mg/kg) significantly decreased leucocyte and neutrophil migration on carrageenan-induced peritonitis (with inhibition of 22,55% and 38,13%, respectively). Our results suggest that 1-nitro-2-phenylethane has analgesic activity which, according to the tests employed, is probably of peripheral origin. The mechanism involved is not completely understood, however these results suggest that opiod receptors are involved in the antinociceptive action of the 1-nitro-2-phenylethane. Further, our results suggest that 1-nitro-2-phenylethane has anti-inflammatory activity which, according to the tests employed, is probably of peripheral origin. / A Aniba canelilla (H.B.K) Mez, conhecida popularmente como casca-preciosa é uma espécie da família Lauraceae que apresenta ampla distribuição na região amazônica. O chá das folhas e das cascas são utilizados na medicina popular como digestivo, carminativo e antiinflamatório. Neste estudo decidiu-se avaliar se esta atividade é devida a um de seus principais constituintes, o 1-nitro-2-feniletano. A amostra obtida por purificação do óleo essencial de Aniba canelilla possui 97,5% de 1-nitro-2-feniletano foi fornecida pelo Laboratório de Engenharia Química da UFPA. Nos modelos de nocicepção foram realizados os testes da contorção abdominal, placa quente e formalina. Enquanto que nos modelos de inflamação foram realizados a dermatite induzido pelo óleo de croton, edema de pata induzido por dextrana e carragenina e peritonite induzido pela carragenina. No teste de contorção abdominal induzido por ácido acético, o 1-nitro-2-feniletano nas doses de 15, 25 e 50 mg/kg reduziu de maneira significativa o número de contorções abdominais. No teste de placa quente (55 0,5 C), o 1-nitro-2-feniletano nas doses de 50, 100 e 200 mg/kg não induziu alterações no tempo de latência quando comparado ao grupo controle. No teste de formalina, o 1-nitro-2-feniletano nas doses de 25 e 50 mg/kg reduziu de maneira significativa o estímulo álgico na 2 fase do teste. Além disso, a antinocicepção foi revertida pela naloxona na segunda fase. Na dermatite induzida pelo óleo de croton, o 1-nitro-2-feniletano nas doses de 25 e 50 mg/kg reduziu de maneira significativa o eritema em relação ao grupo controle (inibição de 73% e 79%, respectivamente). Nos edemas de pata induzido por carragenina e dextrana, o 1-nitro-2-feniletano foi capaz de impedir o desenvolvimento do edema, nas doses de 25 e 50 mg/kg, em comparação com o grupo controle. Na peritonite induzida por carragenina, o 1-nitro-2-feniletano na dose de 25 mg/kg reduziu o número de células globais e o número de neutrófilos quando comparado ao grupo controle (inibição de 22,55% e 38,13%, respectivamente). Nossos resultados sugerem que o 1-nitro-2-feniletano tem atividade antinociceptiva e antiinflamatória, provavelmente, de origem periférica, além disso, os resultados sugerem que os receptores opióides estão envolvidos no efeito antinociceptivo do 1-nitro-2-feniletano.

Submitted by Cristiane Chim (cristiane.chim@ucpel.edu.br) on 2016-08-08T12:45:35Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_Mestrado_Josi _Ok entrega.pdf: 1279441 bytes, checksum: b07d8cf9a6b4075d879e41b64c62ec12 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-08T12:45:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_Mestrado_Josi _Ok entrega.pdf: 1279441 bytes, checksum: b07d8cf9a6b4075d879e41b64c62ec12 (MD5) Previous issue date: 2015-03-26 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq# / #-2555911436985713659# / #600 / Pesticides are highly neurotoxic and may produce a series of health problems. The aim of this study was to look at correlations between the cholinergic syndrome symptoms and biological markers with depressive episode in a rural population. The study involved 100 workers involved in family agriculture of tobacco from southern Brazil. AChE and BChE activities and serum oxidative stress parameters were evaluated and no association was found between cholinergic syndrome, major depression and biological parameters. Of total sample 18% have psychiatric disorders, time of exposure was 23.4±25.5 years. The time of pesticides exposure was higher in depressive subjects than non-depressed one. Symptoms of cholinergic syndrome for muscarinic effects, nicotinic effects, and central effects were higher in depressive than non-depressed subjects, respectively. Correlation analysis shows that symptoms of cholinergic syndrome affecting central nervous system was positively correlated with BChE activity, and nitric oxide levels only in depressive subjects. In conclusion, although the use of pesticides did not increase the risk for major depressive episode in our sample, depressive subjects had increased disturbances in cholinergic system probably due an increase in the oxidative stress and alterations in cholinergic system arising from the chronic exposure to pesticides. / Introdução: Os pesticidas são altamente neurotóxicos e podem produzir uma série de problemas de saúde. Objetivo: O objetivo deste estudo é avaliar as correlações entre os sintomas da síndrome colinérgica e marcadores biológicos na depressão maior em uma população rural. Métodos: O estudo envolveu 100 trabalhadores envolvidos na agricultura familiar de tabaco do Sul do Brasil. As atividades da AChE e BChE e parâmetros de estresse oxidativo foram avaliados no sangue, e correlação entre a síndrome colinérgica e parâmetros biológicos foram investigados de acordo com o diagnóstico de depressão maior. Resultados: Da amostra total 18% apresentaram transtornos psiquiátricos, o tempo de exposição aos agrotóxicos foi de 23,4±25,5 anos. O tempo de exposição a pesticidas foi maior em indivíduos com depressão atual do que em não deprimidos. Os sintomas da síndrome colinérgica para efeitos muscarínicos, efeitos nicotínicos, e os efeitos centrais foram maiores nos indivíduos com depressão maior do que nos indivíduos não deprimidos, respectivamente. A análise de correlação mostra que os sintomas da síndrome colinérgica que afetam o sistema nervoso central foi positivamente correlacionada com a atividade BChE e com os níveis de óxido nítrico, apenas em indivíduos depressivos. Conclusão: Em conclusão, verificamos que o uso de agrotóxicos não aumentou o risco de depressão em nossa amostra, mas os indivíduos depressivos apresentaram aumento nos sintomas do sistema colinérgico provavelmente devido a um aumento do estresse oxidativo e alterações no sistema colinérgico decorrentes do tempo de exposição aos agrotóxicos.

Este trabalho versa sobre o desenvolvimento de um polímero de impressão molecular restrito à ligação com macromoléculas por meio de revestimento com albumina (RAMIP-BSA) para a extração direta de antidepressivos inibidores da receptação de serotonina (ISRS) em plasma humano em sistema cromatográfico multidimensional. A síntese do material foi realizada em três etapas. Primeiramente os sítios seletivos foram formados empregando síntese por precipitação e os seguintes reagentes: fluoxetina, ácido metacrílico, etileno glicol dimetacrilato, 2,2 – azo-isso-butironitrila, e metanol como, molécula modelo (MM), monômero funcional (MF), etileno glicol dimetacrilato como agente de ligação cruzada (ALC), iniciador radicalar (IR) e solvente, respectivamente. A segunda etapa consitiu na formação de uma camada hidrofílica pelo recobrimento químico da superfície do material com os monômeros hidrofílicos hidróxi etil metacrilato e glicidil metacrilato. Na terceira etapa o polímero foi revestido com albumina bovina utilizando glutaraldeído como agente de ligação cruzada, formando assim uma cápsula protéica ao redor das partículas. O RAMIP-BSA obtido foi capaz de excluir cerca de 99% das proteinas por ele percoladas, além de apresentar capacidade máxima adsortiva para fluoxetina de cerca de 69 mg g-1, e comprovada seletividade à fluoxetina frente os outros fármacos ISRS. Uma coluna com o RAMIP-BSA foi empregada como fase extratora em um sistema de cromatografia líquida multidimensional para análise direta de ISRS em plasma humano. Foram construídas curvas de calibração para os fármacos venlafaxina (VEN), citalopram (CIT), fluvoxamina (FLUV), duloxetina (DUL), fluoxetina (FLUO) e sertralina (SER) utilizando um pool de plasma humano (n=6) de indivíduos que não utilizam nenhum dos fármacos. Todas as curvas apresentaram r > 0,99 na faixa linear de 20 a 500 μg L-1. A precisão e exatidão foram avaliadas com base no desvio relativo do padrão e no erro relativo respectivamente. Os limites de detecção e quantificação foram de 10 e 20 μg L-1. A recuperação absoluta foi de 85% à 93%. Todos os resultados estão de acordo com as normas do FDA mostraram-se aceitáveis de acordo com as normas do FDA. / In this work, we developed a new restricted access molecularly imprinted polymer coated with albumin (RAMIP-BSA) for the direct extraction of antidepressants receiving serotonin inhibitors (SSRIs) in human plasma in a multidimensional chromatographic system. The synthesis of the material was performed in three steps. Firstly, the selective binding sites were formed by using fluoxetine, methacrylic acid, ethylene glycol dimethacrylate, 2-2'-azoisobutyronitrile, and methanol as template, functional monomer, cross linking agent, radical initiator and solvent, respectively. In the second step, the polymer was chemically covered with a hydrophilic layer by using the monomers hydroxyethyl methacrylate and glycidyl methacrylate. In the third step, the polymer particles were coated with an albumin capsule by using glutaraldehyde as cross linker. The obtained RAMIP -BSA was able to exclude about 99% of the proteins percolated through it, with a maximum adsorption capacity of 69 mg g-1 for the fluoxetine, and good selectivity for the fluoxetine in comparison with other SSRIs. A RAMIP-BSA column was employed as extraction phase in a multidimensional liquid chromatography system for the analyses of SSRIs in human plasma samples. Validation calibration curves were constructed for venlafaxine (VEN) , citalopram (CIT), fluvoxamine (FLUV) , duloxetine (DUL) , fluoxetine (FLUO) and sertraline (SER) using pooled human plasma (n=) individuals who do not use any of drugs. The analytical curves ranged from 20 to 500 mg L-1, with correlation coefficients larger than 0.99 for all the analytes. The precisions and accuracies (intra and inter-day) were evaluated as relative standard deviation and relative error, respectively. The limits of detection and quantification were 10 and 20 mg L-1 for all the analytes. All the validation parameters are in accordance with the FDA recommendation.

A ação de espécies reativas de oxigênio e/ou de nitrogênio (ERO/ERN), produzidas por neutrófilos através do complexo NADPH oxidase (Nox2) e óxido nítrico sintase (iNOS), estão diretamente associadas à capacidade microbicida de fagócitos. Entretanto, se a produção destes oxidantes escapa ao controle da homeostase bioquímica, ocorrem danos oxidativos aos tecidos circunvizinhos do foco inflamatório, quando, então, há necessidade de intervenção farmacológica. Neste trabalho foi testado o efeito dos nitróxidos piperídinicos 2,2,6,6-tetrametil-1-piperidina-1-oxil (Tempo) e 4-((9 acridinecarbonil)amino)-2,2,6,6-tetrametil-1-piperidina-1-oxil (Ac-Tempo) sobre a atividade de Nox2 de neutrófilos inflamatórios e suas consequências sobre a capacidade fungicida dos fagócitos. Neutrófilos isolados de cavidade peritoneal de camundongos foram incubados (37°C, 10 min) com Tempo (50-400 μM) ou Ac-Tempo (25-200 μM) e estimulados com Candida albicans (ATCC 10231) opsonizadas (107 C. albicans/105 neutrófilos). A atividade de Nox2 foi determinada polarograficamente, pelo consumo de oxigênio mensurado através de eletrodo de Clark, ou espectrofotometricamente, medindo-se a redução de citocromo c (550nm). A atividade de Nox2 (119,311,6 nmol de O2-•.min-1) foi diminuída pelo tratamento com ambos os nitróxidos, de forma dose-dependente, embora Ac-Tempo tenha sido mais eficaz (ED50 31 M) que Tempo (ED50 160 M). Paralelamente, foi verificada a fluorescência (λexc361, λemi440) emitida pelo grupo acridina após reação de espécies radicalares com Ac-Tempo, corroborando a hipótese de que nitróxidos depletam radicais produzidos por neutrófilos estimulados com C. albicans. O nitróxido Tempo não mostrou nenhuma ação direta sobre culturas de C. albicans, conforme análises de antifugigramas padrões. Entretanto, testes de capacidade microbicida de neutrófilos mostraram que o tratamento prévio das células com Tempo (300 µM) causou decréscimo de 80% na efetividade fungicida sobre C. albicans. Testes in vivo mostraram que Tempo administrado em dose oral única (26,52 mg/kg) foi capaz de diminuir o edema de pata originado em resposta à inoculação do fungo (107 C. albicans) cujo ponto máximo de efeito foi 18 horas após a administração do nitróxido, bem como determinou significativa diminuição de nitração de proteínas em tecido muscular das patas dos animais, conforme resultados de ensaios com anticorpos anti-nitrotirosina. Em conjunto, os resultados corroboram a premissa de que a atividade de Nox2 é essencial para a resposta do hospedeiro a C. albicans e que a administração de nitróxidos para modular a produção de oxidantes nos focos infecciosos pode diminuir a resposta do sistema imune à infecção fúngica. / Production of oxidants species by neutrophils through NADPH oxidase complex (Nox2) is directly associated with the microbicidal activity of phagocytes. In this work we tested the effect of the nitroxides 2,2,6,6-tetramethylpiperidine-1-piperidine-1-oxil (Tempo) and 4-((9 acridinecarbonil)amino)-2,2,6,6-tetramethyl-1-piperidine-1-oxil (Ac-Tempo) on the activity of inflammatory neutrophil Nox2 complex and the consequences on the fungicidal phagocytes capability. Neutrophils were incubated with Tempo (50-400 mM) or Ac-Tempo (25-200 mM) and stimulated with Candida albicans. Nox2 activity was determined polarographically by oxygen consumption measured by Clark electrode. Oxidase activity decreased by treatment with both nitroxides in a dose-dependent manner. However, Ac-Tempo was more effective (ED5044M) that Tempo (ED50160M). In parallel, the fluorescence intensity elicited by acridine after reaction with free radicals was determined. Neutrophils stimulation elicited significant fluorescent response in direct correlation with Ac-Tempo doses (R2=0.997), supporting the hypothesis that nitroxide is consumed by free radicals neutrophils-released. Fungicidal neutrophils activity assay explicited that pretreatment of cells with Tempo caused 80% decrease in the effectiveness on C. albicans death. Oral administration of a Tempo single dose was able to reduce paw edema elicited in response to inoculation of the fungus. Also, a significant decrease in protein nitration in paw tissues was found in this condition. Together, the results support the premise that Nox2 activity is essential for the host response against C. albicans and that nitroxides cause a decrease on the oxidant immune response to fungal infection.

Os poluentes orgânicos emergentes vêm se tornando fonte crescente de preocupação ambiental. Entre as classes mais comumente encontradas em amostras de águas estão os antibióticos, com destaque para as tetraciclinas. A ocorrência destes analitos em níveis muito baixos torna necessária a utilização de técnicas de extração seletivas e sensíveis capazes de pré-concentrar tais analitos na presença de concomitantes mais abundantes. Nesse sentido, acredita-se que os polímeros de impressão molecular (MIP) se enquadram perfeitamente para tal aplicação principalmente devido a características como seletividade e sensibilidade. Adicionalmente, o emprego de 2-hidroxietil metacrilato (HEMA) e o glicerol dimetacrilato (GDMA) durante a síntese aumenta a quantidade de hidroxilas superficiais, que por sua vez tornam o material mais compatível com sistemas aquosos, uma vez que há predomínio de interações de hidrogênio entre a água e as hidroxilas superficiais, minimizando a perturbação desse solvente na ligação analito-MIP. Sendo assim, o objetivo do presente trabalho foi desenvolver um disco de MIP com revestimento superficial hidrofílico para extração de tetraciclinas de amostras de águas seguida de análise por HPLC-UV. O MIP foi sintetizado utilizando-se oxitetraciclina como molécula-modelo, ácido metacrílico como monômero funcional, etileno glicol dimetacrilato como agente de ligação cruzada, 2,2’-azo-bis-iso-butironitrila como iniciador radicalar e HEMA e GDMA como comonômeros hidrofílicos. O material (1 g) foi então comprimido na forma de um disco de 40 mm de d.i. por 2 mm de espessura e empregado em procedimentos de extração em fase sólida em disco. A metodologia mostrou-se promissora para a extração seletiva de tetraciclinas com linearidade, precisão e exatidão adequadas e, com limites de quantificação da ordem de 5 µg L-1. / Emerging organic pollutants have caused great environmental concern. Among the most common pharmaceuticals, antibiotics are in focus, especially tetracyclines. The occurrence of these analytes at low levels makes necessary the use of selective and sensitive extraction techniques to enrich those compounds even in the presence of other concomitant interferents. In this way, it is thought that molecularly imprinted polymers (MIPs) fit perfectly to this application mainly due to their characteristics of selectivity and sensitivity. In addition, the use of 2-hydroxyethyl methacrylate (HEMA) and glycerol dimethacrylate (GDMA) during the synthesis increases the number of surface hydroxyl groups, which in turns makes the polymer more compatible with aqueous systems, since they enhance the hydrogen bonds between the water and surface hydroxyl groups, minimizing the interference of this solvent in the complex analyte-polymer. Thus, the objective of this project was to develop a MIP disk for the extraction of tetracyclines from water samples followed by the HPLC-UV analysis. The MIP was synthesized using oxytetracycline as template, methacrylic acid as functional monomer, ethylene glycol dimethacrylate as the cross-linker agent, 2,2’-azo-bis-iso-butyronitrile as radical initiator and HEMA and GDMA as hydrophilic monomers. The polymer was then compressed in a disk form of 40 mm of internal diameter and 2 mm of thickness and this system was used in solid-phase extraction procedures. The developed method showed great results for selective extraction of tetracyclines with good linearity, precision and accuracy showing limits of quantification of 5 µg L-1. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES