Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2012-11-19T18:11:37Z No. of bitstreams: 1 Nadja de Jesus G. dos Santos. Hemoglobina fetal...pdf: 2812470 bytes, checksum: 55476e9f2f10311274d9f1a3382fda56 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-11-19T18:11:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Nadja de Jesus G. dos Santos. Hemoglobina fetal...pdf: 2812470 bytes, checksum: 55476e9f2f10311274d9f1a3382fda56 (MD5) Previous issue date: 2012 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, Bahia, Brasil / O estudo de marcadores associados à síntese de hemoglobina fetal (HbF) é de grande interesse científico, pois contribui para o entendimento dos mecanismos regulatórios dos genes envolvidos na síntese das cadeias globínicas gama, uma vez que esta Hb é importante na modulação genética da anemia falciforme (HbSS). O objetivo desse estudo foi investigar a influência de alterações em genes envolvidos na síntese de HbF e suas associações com marcadores laboratoriais e clínicos na HbSS e caracterizar o fenótipo e o genótipo de indivíduos com o perfil sugestivo de persistência hereditária de hemoglobina fetal (PHHF). Dessa forma, foi realizado um estudo de corte transversal, seguido de caso-controle com a casuística de 43 indivíduos HbSS com HbF> 3,0% e 3 indivíduos com perfil sugestivo de PHHF. O presente estudo foi aprovado pelo CEP-CpGM-Fiocruz. Os polimorfismos HBG2 -396/-391del, HBG2 SNP -369 C>G, HBG2 -309 A>G, HBG2 -157 T>C, HBG1 -499 T>A, HBG1 -369 C>G, HBG1 -271 C>T e HBG1-225/-222del foram investigados por sequenciamento automático de DNA; os haplótipos ligados ao gene da globina beta foram investigados por PCR-RFLP; os polimorfismos BCL11Ars766432, BCL11Ars6732518, OR51B5/6rs4910756, OR51B5/6rs7483122, HMIPrs11759553, HMIPrs35959442 foram investigados por PCR em tempo real; a talassemia alfa 23.7 Kb e as deleções PHHF-1, PHHF-2 e PHHF-4 por PCR. As análises hematológicas foram realizadas em contador automático de células, o perfil de hemoglobina foi confirmado por cromatografia líquida de alto desempenho e as dosagens bioquímicas foram investigadas por quimiluminescência. As concentrações de HbF foram associadas com HbS (p<0,0001), hematócrito (p=0,035), VCM (p=0,010), HCM (p=0,045), colesterol VLDL (p=0,044), ferro (p=0,001) e ferritina (p=0,042). Os polimorfismos estudados apresentaram associação com marcadores laboratoriais e clínicos no grupo estudado. O polimorfismo HBG1 -271 C>T foi associado com a concentração de HbF (p=0,027; RP=4,45; IC95%= 1,14 – 17,41) e ferro (p=0,0076); o HBG1 -499 T>A com as concentrações de glicose (p=0,007) e de alfa-1 antitripsina (p=0,008); o HBG1 -225/-222del com as concentrações de colesterol LDL (p=0,017); o HBG2 -396/-391del com as concentrações de HbS (p=0,017), creatinina (p=0,042) e bilirrubina p=0,030), sendo associado também ao quadro clínico mais grave da doença, com ocorrência frequente de crises vaso-oclusivas (p=0,046), litíase biliar (p=0,021) e o uso de hemoterápicos (p=0,009); o BCL11A rs766432 com a contagem de reticulócitos (p<0,0001) e a concentração de colesterol total (p=0,033); o BCL11Ars6736518 com concentração de glicose (p=0,049) e a contagem de eosinófilos (p=0,012); o HMIPrs35959442 com as concentrações de ferritina (p=0,035), creatinina (p=0,008) e VCM (p=0,022); o HMIPrs11759553 com as concentrações de ácido úrico (p=0,033) e ferritina (p=0,020); e os polimorfismos OR51B5/6rs7483122 e OR51B5/6 rs4910756 com as concentrações de creatinina (p=0,001). A análise multivariada mostrou associação do genótipo CAR/CAR com a concentração diminuída de HbF e o uso de hemoterápicos. A talassemia alfa 23.7 Kb apresentou efeito protetor, sendo associada com as concentrações de ALT (p=0,044), AST (p=0,039) e com a contagem de linfócitos (p=0,050). Os três casos associados ao fenótipo de PHHF não apresentaram alterações clínicas e laboratoriais significativas, inclusive o caso 3, que apresentou o genótipo HbSF. É importante salientar que esses indivíduos não eram portadores de nenhuma das formas de PHHF investigadas. Estudos adicionais devem ser conduzidos com o objetivo de validar os resultados encontrados nesse estudo e de esclarecer os possíveis mecanismos pelos quais os marcadores moleculares investigados interferem na modulação da síntese de HbF e se esses biomarcadores podem apresentar mecanismos diferenciados daqueles comumente investigado, uma vez que foram descritas associações com marcadores importantes para o acompanhamento clínico de indivíduos HbSS. / The study of markers associated with the fetal hemoglobin (HbF) synthesis is of great scientific interest, since it can contribute to understanding regulatory mechanisms of genes involved in the synthesis of globin chains, once that HbF participate in the genetic modulation of sickle cell anemia (HbSS). The aim of this study was to investigate the influence of changes in genes involved in the synthesis of HbF and their associations with clinical and laboratory markers in HbSS and characterize the phenotype and genotype of individuals with the profile suggestive of hereditary persistence of fetal hemoglobin (HPFH). Thus, we performed a cross-sectional study, followed by a case-control, in a group of 43 HbSS individuals with HbF> 3.0% and 3 individuals with a suggestive profile of HPFH. Polymorphisms HBG2 -396/-391del, the HBG2 SNP -369 C> G, HBG2 -309 A> G, HBG2 -157 T> C, HBG1 -499 T> A, HBG1 -369 C> G HBG1 the -271 C> T and HBG1-225/-222del were investigated by automated DNA sequencing; haplotypes linked to the beta globin gene were investigated by PCR-RFLP; single nucleotide polymorphisms of BCL11Ars766432, BCL11Ars6732518, OR51B5/6rs4910756, OR51B5/6rs7483122 , HMIPrs11759553, HMIPrs35959442 were investigated by real-time PCR, alpha thalassemia 2 with 3.7 Kb deletion and HPFH-1 , HPFH-2 and HPFH-4 deletions by PCR Hematological tests were performed in automatic cell counter, the profile of hemoglobin was confirmed by high performance liquid chromatography and biochemical analysis were investigated by immunochemistry assay method. Levels of HbF were associated with HbS (p <0.0001), hematocrit (p= 0.035), MVC (p= 0.010), MHC (p= 0.045), VLDL cholesterol (p= 0.044), iron (p= 0.001) and ferritin (p= 0.042). Polymorphisms were associated with clinical and laboratory markers in the studied group. The polymorphism HBG1 -271 C>T was associated with the concentration of HbF (p = 0.027, PR = 4.45, 95% CI 1.14 - 17.41) and iron (p= 0.0076); the HBG1 - 499 T> A was associated with the level of glucose (p= 0.007) and alpha-1 antitrypsin (p= 0.008); the HBG1 -225/-222del with LDL cholesterol concentrations (p= 0.017); the HBG2 - 396/-391del with Hb concentrations (p= 0.017), creatinine (p= 0.042) and bilirubin (p= 0.030), and also with a more severe clinical disease, with frequent occurrence of vaso-occlusive crises (p= 0.046), gallstones (p= 0.021) and the use of haemotherapic (p= 0.009); the BCL11A rs766432 with the reticulocyte count (p<0.0001) and the concentration of total cholesterol (p= 0.033) and BCL11Ars6736518 with the level of glucose (p= 0.049) and eosinophil count (p= 0.012); the HMIPrs35959442 with ferritin concentrations (p= 0.035), creatinina (p= 0.008 ) and MCV (p= 0.022), the HMIPrs11759553 with concentrations of uric acid (p= 0.033) and ferritin (p= 0.020); and the polymorphisms OR51B5/6rs7483122 and the OR51B5/6rs4910756 with creatinine concentrations (p= 0.001 ). Multivariate analysis pointed for the association of the genotype CAR / CAR with a decrease in HbF concentration with the use of blood therapy. The alpha thalassemia 2 with 3.7 Kb deletion showed a protective effect, being associated with concentrations of ALT (p= 0.044), AST (p= 0.039) and lymphocyte count (p= 0.050). The three cases associated with HPFH phenotype did not show significant association with clinical and laboratory data, including the case 3, that showed the genotype HbSF. It is noteworthy that these individuals were not classified in any described HPFH type investigated. Further studies should be conducted in order to validate results found in this work and to clarify the possible mechanisms by which those investigated molecular markers can interfere with the modulation of the HbF synthesis and if they have mechanisms differentiate from the ones commonly investigated, once that the present study described association with important biomarkers that have been used for monitoring individuals with HbSS.

LAURENTINO, Marília Rocha. Relação entre polimorfismos do gene BCL11A e biomarcadores de hemólise em pacientes com anemia falciforme. 2016. 57 f. Dissertação (Mestrado em Patologia) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2016-03-29T13:38:57Z No. of bitstreams: 1 2016_dis_mrlaurentino.pdf: 1075884 bytes, checksum: bc1a1825e2afb2255af248d0c4674ba1 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2016-03-29T13:52:39Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_dis_mrlaurentino.pdf: 1075884 bytes, checksum: bc1a1825e2afb2255af248d0c4674ba1 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-29T13:52:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_dis_mrlaurentino.pdf: 1075884 bytes, checksum: bc1a1825e2afb2255af248d0c4674ba1 (MD5) Previous issue date: 2016 / Sickle cell disease (SCD) is a hematological disease caused by a point mutation in the β-globin gene. Sickle hemoglobin (HbS) is generated due to fragile mutation that decreases the red blood cell lifetime due to its chronic destruction, being the main responsible for the signs and symptoms of the disease. The use of hydroxyurea (HU) and genetic polymorphisms on modulates fetal hemoglobin (HbF), the main inhibitor of HbS polymerization, reducing hemolysis and vaso-occlusion. This study aimed to evaluate the association of polymorphisms BCL11A gene on the hemolysis markers reticulocytes, bilirubin, uric acid, lactate dehydrogenase (LDH) and methemoglobin (MetHb). The study included 45 patients with SCD of both sexes, in use of HU, attended in outpatient University Hospital Walter Cantídio (HUWC) in Fortaleza, Ceará, and 80 healthy individuals as a control group. The MetHb, uric acid and bilirubin dosage has performed by spectrophotometric method, the LDH by a kinetic method, the reticulocyte count by manual method and evaluation of BCL11A polymorphisms by PCR in real time. Data were analyzed using the statistical software GraphPad Prism. The level of significance was set at <5%. Patients with SCD and healthy subjects showed a difference between hematological parameters, hemoglobin, hematocrit, mean corpuscular volume (MCV) and platelets. Regarding the hemolysis parameters, it was observed that SCD patients has an increase of reticulocytes, MetHb, LDH and bilirubins compared to control group. The rs7557939 region showed an association with hemolysis biomarkers MetHb and LDH and rs4671393 region with the HbS concentration. The use of HU at doses higher than 10 mg/kg/day and for a longer period than 50 months had association with the decrease of the LDH concentration and the reticulocyte count. We conclude that polymorphisms on BCL11A gene and treatment with HU may modulate the hemolysis biomarkers, however, more research is necessary to study prognostic indicators and the factors involved in the clinical heterogeneity of SCD. / A anemia falciforme (AF) é uma doença hematológica causada por uma mutação pontual no gene da β-globina. A hemoglobina S (HbS) gerada devido à mutação forma hemácias com menor meia-vida devido à sua destruição crônica, sendo a principal responsável pelos sinais e sintomas da doença. Os polimorfismos do gene BLC11A e o uso de hidroxiuréia (HU) modulam a concentração de hemoglobina fetal (HbF), principal inibidora da polimerização da HbS, diminuindo a hemólise e a vaso-oclusão. O presente estudo teve o objetivo de associar os polimorfismos do gene BCL11A com os biomarcadores de hemólise reticulócitos, bilirrubinas, ácido úrico, lactato desidrogenase (LDH), e metemoglobina (MetHb). Participaram do estudo 45 pacientes com AF em uso de HU, de ambos os sexos, atendidos no ambulatório de Hematologia do Hospital Universitário Walter Cantídio (HUWC) em Fortaleza-Ceará e 80 indivíduos saudáveis como grupo controle. A dosagem de MetHb, de ácido úrico e bilirrubinas foi realizada através de método espectrofotométrico, a de LDH por método cinético, a contagem de reticulócitos por metodologia manual e a avaliação dos polimorfismos do BCL11A por PCR em tempo real. Os dados obtidos foram analisados utilizando-se o programa estatístico GraphPad Prism. O nível de significância foi estabelecido em <5%. Pacientes com AF e indivíduos saudáveis apresentaram uma diferença entre os parâmetros hematológicos hemoglobina, hematócrito, volume corpuscular médio (VCM) e plaquetas. Em relação aos parâmetros de hemólise, observou-se que os pacientes com AF apresentaram um aumento de reticulócitos, MetHb, LDH e bilirrubinas (BT, BD, BI) em relação ao grupo controle. A região rs7557939 do gene BCL11A apresentou uma associação com os biomarcadores de hemólise MetHb e LDH e a região rs4671393 com a concentração de HbS. O uso da HU em doses maiores que 10mg/kg/dia e por um período maior que 50 meses apresentou associação com a diminuição da concentração de LDH e com a contagem de reticulócitos. Concluiu-se que polimorfismos no gene BCL11A e o tratamento com a HU podem modular os biomarcadores de hemólise, entretanto, mais pesquisas são necessárias para estudar indicadores de prognóstico e os fatores envolvidos na heterogeneidade clínica da AF.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Físicas e Matemáticas, Programa de Pós-Graduação em Química, Florianópolis, 2005 / Made available in DSpace on 2013-07-16T00:59:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 282008.pdf: 1984758 bytes, checksum: 4b21d83b606ba896fcfe7104e280c373 (MD5)

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. / Made available in DSpace on 2012-10-18T15:16:42Z (GMT). No. of bitstreams: 0Bitstream added on 2016-01-09T03:36:41Z : No. of bitstreams: 1 170507.pdf: 4637425 bytes, checksum: a8907dec7fa102ed7b831c86c139b600 (MD5) / O presente trabalho tem como objetivo geral verificar a existência de associação entre deficiência de ferro e alimentação de lactentes. Investigou-se uma amostra de 345 crianças com idade entre 8 e 12 meses, residentes no Município de Lages/SC. Destas, 194 foram incluídas na análise final do trabalho. As informações sobre alimentação foram obtidas através do método de inquérito nutricional recordatório 24 horas, realizado durante dois dias. As demais informações sobre a saúde da criança, através de questionário, em entrevista com as mães, no momento da coleta dos exames de sangue e fezes no laboratório. A deficiência de ferro foi classificada quanto às formas, em duas categorias. Leve ou moderada, quando o índice de Hb (hemoglobina) apresentou valor maior que 11g/dL e pelo menos mais 2 dos índices laboratoriais foram anormais (volume corpuscular médio e concentração de hemoglobina corpuscular média, ferritina sérica ou ferro sérico), considerando-se sempre pelo menos um valor diminuído entre os índices bioquímicos de ferro corporal, segundo Instituto Americano de Nutrição (1994). A forma severa de deficiência de ferro foi caracterizada pelo valor da Hb menor que 11g/dl , segundo recomendação da Organização Mundial da Saúde (OMS), além da presença dos índices laboratoriais anormais já mencionados. Os pontos de corte utilizados para os índices laboratoriais foram os seguintes: volume corpuscular médio <70 µm3; concentração de hemoglobina corpuscular média <32 g/dl; Ferro sérico <30 µg/dl e Ferritina sérica <15 µg/L. Verificou-se a prevalência de 58,8% de deficiência de ferro na população total investigada e na amostra incluída na análise, observou-se 55,2% de deficiência de ferro na forma severa e 19% de deficiência de ferro nas formas leve e moderada. Não foram observadas associações significativas entre deficiência de ferro e as variáveis sexo, intervalo interpartal, número de crianças menores de 5 anos na casa, ocorrência de internação hospitalar, freqüência de doenças, parasitoses intestinais, estado nutricional da mãe, anemia materna, idade da mãe, escolaridade materna, duração do aleitamento materno exclusivo, duração do aleitamento materno total, introdução de outros leites, idade de introdução de leite de vaca, consumo de leite de vaca fresco, adequação da introdução de frutas, adequação da introdução de carnes, adequação de energia, adequação de proteína, adequação de vitamina C e adequação de ferro da dieta atual. Encontrou-se associação estatisticamente significante (p<0,05) entre a deficiência de ferro e as variáveis, adequação da biodisponibilidade de ferro da dieta atual menor que 90% em relação a recomendação da OMS (1989), renda familiar menor que 4 salários mínimos e não introdução de cereais enriquecidos com ferro na alimentação.

O vírus da anemia das galinhas – CAV (chicken anemia virus) está presente em praticamente todos os países com produção avícola investigados, inclusive no Brasil. O CAV causa a doença chamada de anemia infecciosa das galinhas em aves jovens, que se caracteriza por anemia, aplasia de medula óssea, retardo no crescimento, mortalidade variável (2 a 20%), atrofia de órgãos linfóides e imunodepressão. O controle da anemia infecciosa das galinhas é baseado na transferência de imunidade passiva das matrizes à progênie. A transferência de anticorpos maternos via ovo em nível suficiente é uma forma de prevenir a transmissão vertical do vírus, reduzindo assim a ocorrência de surtos da doença. Este trabalho teve como objetivo comparar o desempenho entre frangos nascidos positivos e negativos para a presença de anticorpos contra o CAV. Para isso, foram utilizados dois lotes de matrizes pesadas, sendo um vacinado e o outro não. Com a progênie obtida dessas matrizes de ambos os lotes, foram constituídos três tratamentos com 50 fêmeas e 50 machos cada: T1 - pintos oriundos de matrizes vacinadas com títulos protetores; T2 - pintos oriundos de matrizes não vacinadas com títulos médios e; T3 - pintos oriundos de matrizes não vacinadas e negativas ou com títulos baixos. Todos os tratamentos permaneceram em regime de criação intensiva usual por 47 dias em 5 propriedades diferentes, portanto o experimento teve 5 repetições. Os dados analisados foram o peso inicial e final, conversão alimentar e mortalidade. Como resultado, foi observado que não houve diferença significativa (p>0,05) no peso final entre os tratamentos com relação as fêmeas. Já, nos machos, os frangos negativos (T3) foram significativamente (p<0,05) mais pesados que os frangos positivos (T1 e T2). Não houve diferença significativa (p>0,05) entre os tratamentos em relação à mortalidade e a conversão alimentar. A análise do soro e histologia do timo determinaram a não ocorrência do desafio durante o período de criação dos frangos. A vacinação das matrizes contra o CAV não gerou títulos de anticorpos superiores aos obtidos nas matrizes não vacinadas e infectadas naturalmente. Este estudo indicou que a presença de anticorpos contra o CAV em frangos de corte, seja através da vacinação ou da infecção natural das matrizes, não gerou uma progênie com melhor desempenho nas condições de criação testadas.

Orientadora: Profª. Drª. Neiva Isabel Rodrigues Magdalena / Coorientadores: Profª. Drª. Melissa Rodrigues de Araújo, Prof. Dr. Cassius Torres, Profª. Drª. Sônia Raboni / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Saúde da Criança e do Adolescente. Defesa: Curitiba, 05/12/2014 / Inclui referências : f. 88-98 / Área de concentração: hemato-Oncologia e Genética pediátrica / Resumo: A anemia de Fanconi (AF) é uma doença geneticamente herdada de maneira autossômica recessiva caracterizada por fragilidade cromossômica e distúrbios hematológicos associados às malformações congênitas. A doença pode evoluir para anemia aplástica severa em decorrência de falência da medula óssea. Pacientes com AF têm susceptibilidade aumentada para neoplasias de cabeça e pescoço - Carcinoma Espinocelular (CEC), do trato anogenital e da cavidade bucal. Embora o tratamento eficaz para AF seja o transplante de células tronco hematopoiéicas (TCTH), é sabido que o risco de desenvolvimento de neoplasias aumenta progressivamente após o mesmo. Recentemente, o papilomavírus humano (HPV) tem sido considerado como um agente co-carcinogênico e propõe-se a participação do mesmo na carcinogênese em AF. No presente estudo foram realizados anamnese, exame físico da boca e coleta de amostras de células epiteliais bucais por meio de bochechos com solução salina para detecção do HPV por meio da técnica de Polimerase Chain Reaction (PCR) em tempo real. A amostra do estudo (n = 150) foi dividida em três grupos: indivíduos com AF não transplantados (n = 50) e transplantados (n = 50) e indivíduos saudáveis (controle) (n = 50). Houve semelhança entre os grupos em relação à idade, sexo e escolaridade. Os pacientes com AF foram provenientes de 21 estados brasileiros, sendo os de maior frequência: SC (17%), PR e SP (15%) e BA (10%). A doença do enxerto contra hospedeiro (DECH) foi encontrada apenas em pacientes com AF transplantados (6%, p = 0,04). Lesões leucoplásicas foram mais encontradas em pacientes transplantados (10%) do que em pacientes não-transplantados (2%) (p = 0,02) e lesões aftosas apareceram apenas em pacientes não-transplantados (6%) (p = 0,02). Observou-se apenas um caso de HPV de alto risco com genótipo não especificado. Em análise pareada para HPV de alto e baixo risco, selecionou-se 12 pacientes de cada grupo e todos os resultados foram negativos para HPV. Em conclusão, verificou-se maior frequência de lesões bucais nos pacientes com AF, mas não se observou diferença entre pacientes com AF transplantados, não transplantados e controles em relação à frequência de HPV. Palavras-Chave: Anemia de Fanconi; Papilomavírus Humano; Reação em Cadeia da Polimerase; Boca. / Abstract: Fanconi anemia (FA) is usually inherited as an autosomal recessive disorder characterized by progressive pancytopenia, congenital abnormalities and a predisposition to the development of hematological malignancies as well as squamous cell carcinoma of head and neck and anogenital region. Whereas effective treatment for the hematological complications of FA is hematopoietic stem cell transplantation (HSCT), it is also known that the risk of developing cancer increases progressively thereafter. Recently, the human papillomavirus (HPV) has been considered as a co-carcinogen agent and could be involved in the carcinogenesis of FA. In the present study we performed anamnesis and physical examination of the mouth and we also collected samples of oral epithelial cells by gargling with saline for HPV detection by the polymerase chain reaction technique (PCR) in real time. The study sample (n = 150) were divided into three groups: nontransplanted patients with FA (n = 50) and transplanted patients with FA (n = 50) and healthy individuals (controls) (n = 50). There was no difference between the groups regarding age, sex and levels of education. Patients with FA were from 21 Brazilian states, with the highest frequency as follows: States of Santa Catarina (17%), Parana and Sao Paulo (15%) and Bahia (10%). There was no difference in the frequency of caries and gingivitis among study groups (p > 0.05). The identification of Graft versus host disease (GVHD) was found only in transplanted FA patients. Leukoplakic lesions (p = 0.02) were found more frequently in transplanted patients (10%) than non-transplanted patients (2%) and aphthous lesions appeared only in non-transplant patients (6%) (p = 0.02). It was found only one case of high-risk HPV genotype unspecified. In paired analysis for HPV high and low risk, we selected 12 patients in each group and all results were negative for HPV. In conclusion, A higher frequency of oral lesions were identified in patients with FA but no difference was observed between transplanted , non transplanted patients and healthy controls regarding the presence of HPV. Keywords: Fanconi Anemia; Human Papillomavirus; Polymerase Chain Reaction; Mouth.

Resumo: Os avanços tecnológicos e metodológicos na biologia molecular criaram a possibilidade de obter DNA de amostras teciduais estocadas em blocos de parafina, alternativa esta que permite estudos retrospectivos de grandes bancos de tecidos, contendo inúmeras doenças raras. A quantidade e a qualidade do DNA obtido são considerados de suma importância para os procedimentos pós-extração e a presença de contaminantes pode inibir a amplificação, especialmente em condições de escassez de DNA. Nosso objetivo é realizar a análise quantitativa e qualitativa do DNA extraído de blocos de parafina de casos de anemia aplásica severa (AAS) e analisar a eficiência/qualidade das técnicas de espectrofotometria tradicional e PCR na mensuração da qualidade e quantidade de DNA. Foram utilizadas 48 amostras de blocos de parafina contendo fragmentos de biópsia de medula óssea, do Serviço de Anatomia Patológica do Hospital de Clinicas da UFPR em Curitiba, nas quais o DNA foi extraído pelo método do fenol-clorofórmio. Os resultados estatísticos levantaram a suspeita da não confiabilidade da técnica de espectrofotometria na avaliação da eficiência do DNA extraído para amplificação e a comparação com os resultados da amplificação por PCR confirmam nossa suspeição. Foi realizado análise de correlação, no sentido de tornar mais evidente esta conclusão, a qual demonstrou a não ocorrência de correlação entre os níveis de pureza e a positividade da amostra (amplificação positiva), com rpb= -0.19. A amplificação por PCR ocorreu adequadamente em 45.85% (22 amplificações em 48 amostras) para o gene HLA-DRB1, sendo considerada satisfatória para o tipo de amostra utilizada, extremamente hipocelular e submetida previamente a protocolos de processamento considerados deletérios ao material genético. O estudo da qualidade e da quantidade de DNA também depende das técnicas de mensuração utilizadas; estas são influenciadas por diversos fatores,e podem distorcer o entendimento dos resultados finais. Concluímos que a análise da qualidade e da quantidade de DNA deve ser ponderada conforme as técnicas que estão sendo utilizadas. Por fim, salienta-se a relevância da natureza da amostra sobre os resultados finais de qualidade e quantidade de DNA mensurado.

Introdução: As Glicogenoses (GSD) hepáticas são doenças genéticas relativamente frequentes. Entre as suas manifestações clínicas, a que mais se destaca é a ocorrência de hipoglicemias de repetição. O tratamento com amido de milho cru é o mais largamente utilizado atualmente. Contudo, tem sido observado na prática clínica que os pacientes apresentam resposta metabólica diferente ao uso de diferentes amidos de milho. Além disso, complicações a longo prazo vêm sendo descritas nos pacientes com GSD hepáticas, especialmente na GSD I, considerada a mais grave, entre elas anemia ferropriva e de doença crônica. Objetivos: 1) Analisar a digestão de amidos de milho de diferentes marcas e provenientes de diferentes países, e de possíveis substitutos aos mesmos, por meio do modelo gastrointestinal, in vitro, TIM-1 (TNO in vitro model of the gastrointestinal tract - 1); 2) Determinar as frações de amido e a razão de amilose/amilopectina de amidos de milho de diferentes marcas e provenientes de diferentes países, e possíveis substitutos aos mesmos; 3) Caracterizar o perfil de hepcidina, de IL-6 e de outros parâmetros do metabolismo do ferro (ferritina, ferro e saturação de transferrina), em plasma de pacientes com GSD hepáticas, e avaliar a sua associação com a presença de anemia, de forma a contribuir para a melhor compreensão da fisiopatogenia dessa complicação nessas condições. Metodologia: Para as análises com amidos, foram estudados as seguintes marcas: Argo® e Great Value® provenientes dos Estados Unidos da América; Maizena Duryea® e Yoki® provenientes do Brasil; Maizena Duryea® proveniente dos Países Baixos; Glycosade®, um amido modificado; e polvilho doce, amido brasileiro extraído da mandioca. As frações de amido (amido rapidamente disponível – RAG; amido lentamente disponível – SAG; e amido resistente – RS) foram analisadas por meio do método GTI (Glycemic TNO Index). A razão de amilose/amilopectina foi determinada por meio de ensaio com kit comercial. A digestão dos amidos foi determinada por meio do sistema TIM-1 (TNO in vitro model of the gastrointestinal tract - 1), um modelo gastrointestinal dinâmico, controlado por computador, que simula os processos sucessivos do estômago e do intestino curto. Para estudo de hepcidina e IL-6 nos pacientes com GSD hepáticas, foi realizado um estudo transversal com amostragem por conveniência. Foram determinadas as concentrações de hepcidina e de IL-6, por meio de kits comerciais ELISA, e de parâmetros do metabolismo do ferro (Hb, ferro, ferritina, transferrina e saturação de transferrina), em 32 pacientes com GSD hepática em tratamento com amido de milho (GSD Ia= 18, GSD Ib= 7, GSD III= 3, GSD IXa= 3; GSD IXb= 1; sexo feminino= 17; mediana de idade= 9,5 anos). Dados adicionais de tratamento, clínicos e bioquímicos, foram obtidos por meio de revisão de prontuário dos pacientes. Para fins de comparação, foram determinadas concentrações de hepcidina em 20 controles, não aparentados aos pacientes (sexo feminino= 10, mediana de idade= 12 anos). Adicionalmente foram determinados níveis de hepcidina e IL-6 em 8 indivíduos heterozigotos para GSD hepáticas (mediana de idade= 33,5 anos; mães de pacientes= 6). Para análise dos dados, foram utilizados métodos não paramétricos. Resultados: Nos experimentos com os amidos, todos os amidos de milho estudados apresentaram valores semelhantes de frações de amido, o Glycosade® apresentou valor superior de RAG e inferior de RS, enquanto o polvilho doce apresentou valor inferior de RAG e superior de RS, comparado aos demais amidos. O estudo da razão de amilose/amilopectina apresentou valores semelhantes para os amidos de milho, o Glycosade® apresentou valor superior de amilopectina, conforme descrito pelo fabricante, e o polvilho apresentou valor ligeiramente superior de amilopectina, comparado aos amidos de milho, e apresentou estabilidade nos diferentes lotes estudados. No estudo de digestão, utilizando a TIM-1, a quantidade final digerida foi entre 84 e 86% para os amidos de milho e para o Glycosade®, e foi de 75,5% para o polvilho doce. Aos 180 minutos do experimento, um ponto de tempo importante para pacientes com GSD, a quantidade digerida dos amidos era correspondente a 67,9-71,5% para os amidos de milho e o Glycosade®, enquanto para o polvilho doce esse valor era de 55,5%. No experimento realizado com uma mistura de amido de milho (Maizena Duryea® brasileira) e polvilho doce, a quantidade final digerida foi de 78,4%, enquanto o valor no momento de 180 minutos foi de 61,7%. No estudo com pacientes com GSD hepática, nove pacientes (GSD Ia= 3; GSD Ib= 6) apresentavam anemia (leve= 4; moderada=5). Cinco pacientes apresentavam adenoma hepático. A hepcidina correlacionou-se positivamente com os níveis de ferritina (r = 0,375; p= 0,034). Já a IL-6 correlacionou-se com níveis de Hb (r= - 0,572; p= 0,001), ferro (r= -0,538; p= 0,001), transferrina (r = -0,550; p= 0,001) e saturação de transferrina (r= -0,425; p= 0,015). Não foi encontrada correlação entre os níveis de hepcidina e IL-6 (p= 0,057) e dessas variáveis em relação a outros parâmetros bioquímicos e nutricionais estudados. Os pacientes com GSD Ib apresentaram níveis mais elevados de IL-6. Não foi encontrada relação entre a presença de adenomas e anemia, e pacientes com doença inflamatória intestinal apresentaram valores superiores de hepcidina. Pacientes apresentaram níveis de IL-6 superiores aos indivíduos heterozigotos (p= 0,003). Além disso, os níveis de hepcidina diferiram entre os grupos estudados (p= 0,006), estando aumentados em pacientes (mediana= 58,6 ng/mL; IQR= 41,7-71,9) e em indivíduos heterozigotos (mediana= 60,7 ng/mL, IQR= 51,7-68,3) quando comparados aos controles (mediana= 42,8 ng/mL, IQR= 30,9-50,5) (p= 0,005 e 0,006, respectivamente). Conclusões: Os amidos de milho e o amido comercial estudados apresentaram pequenas diferenças na liberação de glicose nos experimentos realizados no sistema TIM-1. Esses achados sugerem que diferenças nas respostas glicêmicas em pacientes com GSD hepáticas, podem ser relacionadas à variações inter- e intraindivíduos e/ou ainda relacionadas à adesão ao tratamento. Cabe ressaltar que as pequenas diferenças encontradas na digestão in vitro podem ter o seu efeito amplificado in vivo, quando variáveis como a resposta hormonal e o fenótipo da doença estão presentes. O polvilho doce apresentou uma liberação de glicose mais lenta e parece ser um produto interessante para ser melhor estudado como alternativa de tratamento, com intuito de prolongar a normoglicemia, para pacientes com GSD hepáticas. Em relação a anemia, a mesma apresentou-se como um achado frequente nas GSD hepáticas, sendo mais frequente na GSD Ib, tipo que apresenta os níveis mais elevados de IL-6. Nossos achados sugerem que a inflamação está relacionada à ocorrência de anemia nas GSD hepáticas, principalmente na GSD Ib. / Background: The hepatic glycogen storage diseases (GSD) are relatively common genetic disorders. Among their clinical manifestations, the most remarkable is recurrent hypoglycemia. Uncooked cornstarch (UCCS) administration is the most widely used treatment today. However, it has been observed in clinical practice that patients exhibit different metabolic responses to different cornstarches. Furthermore, long-term complications – including iron deficiency anemia and the anemia of chronic disease – have been described in patients with hepatic GSD, especially those with type I, which is considered the most severe form. Objectives: 1) To analyze the digestion of different brands of cornstarch from different countries, and of possible substitutes for these substances, using the TIM-1 (TNO in vitro model of the gastrointestinal tract - 1); 2) To determine the starch fractions and amylose/amylopectin ratios of cornstarches from different brands and countries and of possible substitutes for these substances; 3) To characterize levels of hepcidin, IL-6, and other markers of iron metabolism (ferritin, iron, transferrin saturation) in plasma of patients with hepatic GSD and evaluate the association of these parameters with the presence of anemia, so as to contribute to a better understanding of the pathogenesis of this complication in GSD. Methodology: The following brands and types of straches were studied: Argo® and Great Value®, from the United States of America; Maizena Duryea® and Yoki®, from Brazil; Maizena Duryea®, from the Netherlands; Glycosade®, a modified starch; sweet polvilho, a cassava-derived starch, from Brazil. Starch fractions (rapidly available glucose, RAG; slowly available glucose, SAG; and resistant starch, RS) were analyzed by the glycemic TNO index (GTI) method. The amylose/amylopectin ratio was determined using a commercial kit. Starch digestion was determined in the TIM-1 system, a dynamic, computer-controlled in vitro model of the gastrointestinal tract that simulates successive digestive processes in the stomach and small intestine. To study hepcidin and IL-6 profiles in patients with hepatic GSD, a cross-sectional study with convenience sampling was conducted. Plasma hepcidin and IL-6 levels (using commercial enzyme-linked immunoassay kits) and iron metabolism parameters (hemoglobin, iron, ferritin, transferrin, and transferrin saturation) were measured in 32 patients with hepatic GSD on cornstarch treatment (GSD Ia =18; GSD Ib= 7; GSD III= 3; GSD IXa= 3; GSD IXb= 1; 17 females; median age, 9.5 years). Additional data, about treatment, clinical and biochemical variables, were obtained from patients’ medical records. For comparison purposes, hepcidin levels were quantitated in 20 unrelated healthy controls (10 females; median age= 12 years). Additionally, hepcidin and IL-6 levels were evaluated in eight subjects heterozygous for hepatic GSD (median age= 33.5 years; 6 were mothers of patients with GSD). Nonparametric methods were used for data analysis. Results: All analyzed cornstarches displayed similar values for all starch fractions. Glycosade® had higher RAG and lower RS values, while sweet polvilho had lower RAG and higher RS values, as compared with the other starches. Analysis of amylose/amylopectin ratio revealed similar values for the tested UCCS. Glycosade® had a higher amylopectin content, as described by the manufacturer, whereas sweet polvilho had a slightly higher amylopectin content as compared with cornstarches and was stable across different studied batches. In the digestion study using the TIM-1 system, the final digested amount ranged from 84–86% for the UCCS and Glycosade®, but was 75.5% for sweet polvilho. In an experiment conducted with a mixture of cornstarch (Brazilian Maizena Duryea®) and sweet polvilho, a final digested amount of 78.4% was found, while the value at 180 min was 61.7%. On analysis of GSD patients, nine (GSD Ia= 3; GSD Ib= 6) were anemic (mild= 4; moderate= 5). Five patients had hepatic adenomas. Hepcidin correlated positively with ferritin levels (r= 0.375; p= 0.034), while IL-6 correlated with hemoglobin (r= -0.572; p= 0.001), iron (r= -0.538; p= 0.001), transferrin (r= -0.550; p= 0.001), and transferrin saturation (r= -0.425; p= 0.015). There was no correlation between hepcidin and IL-6 levels (p= 0.057), or between these variables and the other biochemical and nutritional parameters of interest. Patients with GSD Ib had the highest IL-6 levels. There was no association between presence of hepatic adenoma and anemia. Patients with inflammatory bowel disease exhibited higher hepcidin levels. Patients exhibited IL- 6 levels higher than those of heterozygotes (p=0.003). Furthermore, hepcidin levels were significantly different across the tested groups (p= 0.006), being elevated in patients (median= 58.6 ng/mL, IQR 41.7–71.9) and in heterozygous individuals (median= 60.7 ng/mL, IQR 51.7–68.3) as compared with controls (median= 42.8 ng/mL, IQR 30.9–50.5) (p= 0.005 and 0.006, respectively) Conclusions: In experiments performed in the TIM-1 system, the cornstarches and commercial modified starch analyzed in this study displayed only small differences in glucose release. These findings suggest that the differences in glucose response reported in GSD patients may be related to inter- and intraindividual variations and/or to treatment compliance. It is important to take into account that the small difference in glucose release found among the starches could be clinically important in vivo when taking variables such as hormonal responses and disease phenotype into account. Sweet polvilho was associated with slower glucose release and seems to be an interesting product that warrants more in-depth study as an alternative treatment, aiming to extend normoglycemia in patients with hepatic GSD. Anemia is a common finding in hepatic GSD, and was most common in GSD Ib, the type of GSD associated with the highest IL-6 levels. These findings suggest that inflammation is associated with development of anemia in hepatic GSD, particularly in GSD Ib.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2006. / Submitted by Fernanda Weschenfelder (nandaweschenfelder@gmail.com) on 2009-11-03T14:42:14Z No. of bitstreams: 1 Tese de LISLIÊ CAPOULADE NOGUEIRA ARRAIS DE SOUZA.pdf: 2294666 bytes, checksum: 798316819fc6ceea292943eb627bb1a7 (MD5) / Approved for entry into archive by Gomes Neide(nagomes2005@gmail.com) on 2010-07-26T20:33:22Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese de LISLIÊ CAPOULADE NOGUEIRA ARRAIS DE SOUZA.pdf: 2294666 bytes, checksum: 798316819fc6ceea292943eb627bb1a7 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-07-26T20:33:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese de LISLIÊ CAPOULADE NOGUEIRA ARRAIS DE SOUZA.pdf: 2294666 bytes, checksum: 798316819fc6ceea292943eb627bb1a7 (MD5) Previous issue date: 2006 / Introdução: anemia falciforme é a doença hereditária mais prevalente no Brasil, acometendo de 0,1 a 0,3% da população negra. Estima-se também o nascimento de 1-3/1000 novos casos anuais no país, caracterizando assim importante problema de saúde pública em nosso meio. Sabe-se também que a prevalência de dessaturação noturna da hemoglobina em crianças e adolescentes com AF é superior a 40% e que anormalidade da função pulmonar pode estar presente antes mesmo de qualquer evidência clínica de crise vaso-oclusiva ou síndrome torácica aguda. Em adultos, com anemia falciforme, a hipertensão arterial pulmonar tem emergido como o maior fator de risco independente para morte. Objetivos: estudar a qualidade do sono e função cardio-respiratória de pacientes com anemia falciforme clinicamente estável; investigar a presença de distúrbios respiratórios nesses pacientes, avaliando o papel desses distúrbios nas possíveis alterações do sono e investigar, também, a presença de alterações cardíacas. Pacientes e Métodos: estudo observacional transversal descritivo, que incluiu pacientes portadores de anemia falciforme (SS), com idade >10 e <18 anos e ausência de diagnóstico prévio de doença respiratória ou de distúrbio do sono. Os pacientes realizaram avaliação clínica, questionário de sono, polissonografia noturna, espirometria e volumes pulmonares, eletrocardiografia, ecocardiografia, hemograma, tomografia de tórax e das vias aéreas superiores e videonasofaringolaringoscopia. Resultados: foram estudados 50 pacientes, dos quais 25 (50%) pertenciam ao sexo masculino. A média da idade foi de 14+2,5 anos, do peso de 39+11 Kg e da estatura de 150+14 cm. Quarenta pacientes (80%) referiram roncarem e dentre estes 48% na maioria das noites. As queixas de dormir de boca aberta e babar no travesseiro estavam presentes em 80% e 62% dos pacientes, respectivamente. Já 38% dos pacientes afirmaram ter fumantes em domicílio. O TTS teve média de 410+64 minutos, a latência média do sono de 18+20 minutos e a latência de sono REM de 182+100 minutos, sendo que dois pacientes não apresentaram sono REM. A média de mudança de estágio foi de 86+26, do número total de despertares 106+73 e da movimentação em sono 29+12. Observamos diminuição do estágio REM que foi de 13+6%, aumento do E2= 57+8%, ficando o restante dentro da normalidade para a idade. A média do IDR foi de 2+3 eventos/hora, do IAO de 0,2+0,8/h e 20 pacientes (40%) apresentam SAOS. A média de SpO2 em vigília foi de 87+6%. Os pacientes foram subdivididos em dois grupos com relação à SpO2 em sono REM, sendo maior número de distúrbios respiratórios e sono menos fragmentado no grupo com dessaturação noturna. Na análise geral, os valores médios das variáveis espirométricas encontravam-se dentro da normalidade para a faixa-etária, com exceção do volume residual e da relação VR/CPT que estavam aumentadas. A média do hematócrito foi de 25,3+3,9 % e da hemoglobina de 8,3+1,3 g/dl. A média da PAS foi de 113+14 mmHg e PAD de 63+10 mmHg e da PSAP de 38,3+17 mmHg. O eletrocardiograma foi normal em 56% dos pacientes. O ecocardiograma mostrou aumento isolado de ventrículo esquerdo em 34% dos pacientes. Tonsila faríngea hipertrófica foi encontrada em 22 pacientes (44%) e tonsila palatina hipertrófica em 52%. À tomografia de tórax, 73% dos pacientes não apresentavam qualquer alteração de parênquima pulmonar. Conclusões: para o grupo de pacientes estudados podemos concluir que existe perda de qualidade de sono, e que essa perda provavelmente se correlaciona com a dessaturação da hemoglobina. Existe alteração da função pulmonar caracterizada por hiperreatividade da via aérea, decorrente de exposição à fumaça de cigarro, e alterações eletro e ecocardiográficas e presença de hipertensão arterial pulmonar. ____________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Introduction: sickle cell anemia is the most prevalent hereditary disease in Brazil, occurring in 0,1 to 0,3% of the negro population. The occurrence of 1-3/1000 new annual cases in the country are also estimated, thus characterizing an important public health problem in our environment. It’s also know that the prevalence of nocturnal desaturation of hemoglobin in children and teenagers with SS is higher than 40% and that abnormality of the pulmonary function may be present even before any clinical evidence of vaso-occlusive crisis or acute chest syndrome. In adults, with sickle cell disease, pulmonary arterial hypertension has emerged as the biggest independent risk factor for death. Objectives: to study the quality of sleep and cardio-respiratory function of patients with clinically stable sickle cell disease; investigate the presence of respiratory disorders in these patients, evaluating the role of such disorders in the possible sleep alterations and also investigate the presence of cardiac alterations. Patients and Methods: observational descriptive cross-sectional study, that included patients with sickle cell disease (SS), with ages >10 and >18 years old and absence of previous diagnosis of respiratory disease or sleep disorder. The patients underwent clinical evaluation, sleep questionnaire, overnight polysomnography, spirometry and pulmonary volumes, electrocardiography, hemogram, upper airway and chest tomography and nasal fiber optic examination. Results: 50 patients were studied, from which 25 (50%) were male. The average age was 14±2,5 years, average weight 39±11 Kg and average height 150±14 cm. Forty patients (80%) referred to snoring and among these 48% in most nights. The complaints about sleeping with the mouth open and dribbling on the pillow were present in 80% and 62%, respectively. 38% of the patients stated to have smokers at home. The total sleep time had an average of 410±64 minutes, the average latency of sleep 18±20 minutes and the latency of REM sleep 182±100 minutes, being that two patients did not present REM sleep. The average of stage shifts was 82±26, of the total number of awakenings 106±73 and movement during sleep 29±12. We observed a decrease of the REM stage that was of 13±6%, an increase of the E2= 57±8%, and the remaining was within normality for the age. The average of the respiratory disorder index was of 2±3 events/hour, of the obstructive apnea index of 0,2±0,8/h and 20 patients (40%) presented obstructive sleep apnea syndrome. The average of SpO2 in alertness was of 87±6%. The patients were subdivided into two groups regarding SpO2 in REM sleep, the greater number of respiratory disorders and less fragmented sleep being in the nocturnal desaturation group. In the general analysis, the mean values of the spirometric variables were within normality for the age group, with the exception of the residual volume and the RV/TLC relationship that were increased. The average of the hematocrit was of 25,3±3,9% and of hemoglobin of 8,3±1,3 g/dl. The average systolic artery pressure was of 113±14 mmHg and dyastolic artery pressure of 63±10 mmHg and of pulmonary artery systolic pressure of 38,3±17 mmHg. The electrocardiogram was normal in 56% of the patients. The echocardiogram showed an isolated increase of the left ventricle in 34% of the patients. Hypertrophic pharyngeal tonsils were found in 22 patients (44%) and hypertrophic palatal tonsils in 52%. Regarding chest tomography, 73% of the patients didn’t present any alterations of lung tissue. Conclusions: from the group of patients studied we can conclude that there is loss of sleep quality, and that this loss probably correlates to the desaturation of hemoglobin. There is alteration of the pulmonary function characterized by hyperactivity of the airway, as a consequence to the exposure to cigarette smoke, and electro and echocardiographic alterations and presence of pulmonary arterial hypertension.

FundaÃÃo Cearense de Apoio ao Desenvolvimento Cientifico e TecnolÃgico / Sickle cell anemia (SCA) is the most common hereditary disease in Brazil and is present in about 0.1 to 0.3% of the population of African origin. This disease is caused by homozygous mutation of a single nucleotide (Glu6Val gene Hb S) that modify the function of the red cell in the body, which implies changes in membrane components and, consequently, the event sickling of red blood cells, causing vaso-occlusion. In this work we aim to identify, quantify and correlate changes in erythrocyte membrane glycoproteins associated with the framework and clinical evolution of the disease, using ion exchange chromatography (IEC) and SDS-PAGE. Were performed ion exchange chromatography on membrane proteins extracted from peripheral blood erythrocytes of 31 patients with AF. The chromatograms showed significant differences in the concentration of protein present in the membranes of red blood cells when we relate absorbance / elution range between seizure freedom and volunteers without a diagnosis of AF, depending on the clinical manifestations, patients may show differences in protein concentration. 1D SDS-PAGE revealed the presence of distinct proteins, suggesting that there are differences in the type and concentration of membrane proteins in sickle erythrocytes (both in patients without crisis as a crisis), when related to those extracted from red cells not anemic. In SDS-PAGE 2D 254 spots were identified, of which 8 spots were not identified by the program TagIdent. Most spots were distributed in the pH range 7-10, with a predominance of proteins with molecular weight less than or equal to 20 kDa. Our results suggest that analysis of sickle cells by IEC, followed by SDS-PAGE (1D and 2D), allowed differentiation and partially characterize membrane proteins of erythrocytes of patients (symptomatic and asymptomatic) with AF when related to volunteers without a diagnosis of AF . Our data reinforce the variety of biomodulation related AF, suggesting that their identification is of paramount importance for the study of adhesion between these cells sickle and the endothelium, which triggers vaso-occlusion, resulting in various symptoms. / A anemia falciforme (AF) à a doenÃa hereditÃria mais comum no Brasil e està presente em cerca de 0,1 a 0,3% da populaÃÃo afrodescente. A doenÃa à uma homozigotia causada pela mutaÃÃo de um Ãnico nucleotÃdeo (Glu6Val no gene Hb S) que altera a funÃÃo da cÃlula vermelha no organismo, o que implica em alteraÃÃes nos componentes da membrana e, em conseqÃÃncia, o evento de falcizaÃÃo das hemÃcias, desencadeando crises de vaso-oclusÃo. Nesse trabalho objetivamos identificar, quantificar e correlacionar alteraÃÃes em glicoproteÃnas da membrana eritrocitÃria associados com o quadro e evoluÃÃo clÃnica da enfermidade, utilizando cromatografia de troca iÃnica (IEC) e SDS-PAGE. Foram realizadas cromatografias de troca iÃnica em proteÃnas de membrana extraÃdas de hemÃcias de sangue perifÃrico de 31 portadores de AF. Os cromatogramas revelaram diferenÃas significativas quanto à concentraÃÃo de proteÃnas presentes nas membranas das hemÃcias quando relacionamos absorbÃncia/faixa de eluiÃÃo entre pacientes sem crises e voluntÃrios sem diagnÃstico de AF; dependendo das manifestaÃÃes clÃnicas, pacientes podem apresentar diferenÃas nas concentraÃÃes protÃicas. SDS-PAGE 1D revelou a presenÃa de proteÃnas distintas, sugerindo que hà diferenÃas no tipo e na concentraÃÃo das proteÃnas de membrana de hemÃcias falcÃmicas (tanto em pacientes sem crise, quanto em crise) quando relacionadas Ãquelas extraÃdas da membrana de hemÃcias nÃo falcÃmicas. Na SDSâPAGE 2D foram identificados 254 spots, dos quais 8 spots nÃo foram identificados pelo programa TagIdent. A maioria dos spots estavam distribuÃdos na faixa de pH 7-10, com predomÃnio de proteÃnas com massa molecular menor ou igual a 20 KDa. Nossos resultados sugerem que anÃlise das cÃlulas falcÃmicas por IEC, acompanhadas de SDS-PAGE (1D e 2D), permitiu diferenciar e caracterizar parcialmente proteÃnas de membrana de hemÃcias de pacientes (sintomÃticos e assintomÃticos) com AF quando relacionadas ao controle, sem diagnÃstico de AF. Nossos dados reforÃam a variedade de biomoduladores relacionados AF, sugerindo que sua identificaÃÃo à de suma importÃncia para o estudo da adesÃo entre cÃlulas falcÃmicas e destas ao endotÃlio, o que pode desencadear a vasoclusÃo, resultando em diversos sintomas.