Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2012-11-19T18:11:37Z No. of bitstreams: 1 Nadja de Jesus G. dos Santos. Hemoglobina fetal...pdf: 2812470 bytes, checksum: 55476e9f2f10311274d9f1a3382fda56 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-11-19T18:11:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Nadja de Jesus G. dos Santos. Hemoglobina fetal...pdf: 2812470 bytes, checksum: 55476e9f2f10311274d9f1a3382fda56 (MD5) Previous issue date: 2012 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, Bahia, Brasil / O estudo de marcadores associados à síntese de hemoglobina fetal (HbF) é de grande interesse científico, pois contribui para o entendimento dos mecanismos regulatórios dos genes envolvidos na síntese das cadeias globínicas gama, uma vez que esta Hb é importante na modulação genética da anemia falciforme (HbSS). O objetivo desse estudo foi investigar a influência de alterações em genes envolvidos na síntese de HbF e suas associações com marcadores laboratoriais e clínicos na HbSS e caracterizar o fenótipo e o genótipo de indivíduos com o perfil sugestivo de persistência hereditária de hemoglobina fetal (PHHF). Dessa forma, foi realizado um estudo de corte transversal, seguido de caso-controle com a casuística de 43 indivíduos HbSS com HbF> 3,0% e 3 indivíduos com perfil sugestivo de PHHF. O presente estudo foi aprovado pelo CEP-CpGM-Fiocruz. Os polimorfismos HBG2 -396/-391del, HBG2 SNP -369 C>G, HBG2 -309 A>G, HBG2 -157 T>C, HBG1 -499 T>A, HBG1 -369 C>G, HBG1 -271 C>T e HBG1-225/-222del foram investigados por sequenciamento automático de DNA; os haplótipos ligados ao gene da globina beta foram investigados por PCR-RFLP; os polimorfismos BCL11Ars766432, BCL11Ars6732518, OR51B5/6rs4910756, OR51B5/6rs7483122, HMIPrs11759553, HMIPrs35959442 foram investigados por PCR em tempo real; a talassemia alfa 23.7 Kb e as deleções PHHF-1, PHHF-2 e PHHF-4 por PCR. As análises hematológicas foram realizadas em contador automático de células, o perfil de hemoglobina foi confirmado por cromatografia líquida de alto desempenho e as dosagens bioquímicas foram investigadas por quimiluminescência. As concentrações de HbF foram associadas com HbS (p<0,0001), hematócrito (p=0,035), VCM (p=0,010), HCM (p=0,045), colesterol VLDL (p=0,044), ferro (p=0,001) e ferritina (p=0,042). Os polimorfismos estudados apresentaram associação com marcadores laboratoriais e clínicos no grupo estudado. O polimorfismo HBG1 -271 C>T foi associado com a concentração de HbF (p=0,027; RP=4,45; IC95%= 1,14 – 17,41) e ferro (p=0,0076); o HBG1 -499 T>A com as concentrações de glicose (p=0,007) e de alfa-1 antitripsina (p=0,008); o HBG1 -225/-222del com as concentrações de colesterol LDL (p=0,017); o HBG2 -396/-391del com as concentrações de HbS (p=0,017), creatinina (p=0,042) e bilirrubina p=0,030), sendo associado também ao quadro clínico mais grave da doença, com ocorrência frequente de crises vaso-oclusivas (p=0,046), litíase biliar (p=0,021) e o uso de hemoterápicos (p=0,009); o BCL11A rs766432 com a contagem de reticulócitos (p<0,0001) e a concentração de colesterol total (p=0,033); o BCL11Ars6736518 com concentração de glicose (p=0,049) e a contagem de eosinófilos (p=0,012); o HMIPrs35959442 com as concentrações de ferritina (p=0,035), creatinina (p=0,008) e VCM (p=0,022); o HMIPrs11759553 com as concentrações de ácido úrico (p=0,033) e ferritina (p=0,020); e os polimorfismos OR51B5/6rs7483122 e OR51B5/6 rs4910756 com as concentrações de creatinina (p=0,001). A análise multivariada mostrou associação do genótipo CAR/CAR com a concentração diminuída de HbF e o uso de hemoterápicos. A talassemia alfa 23.7 Kb apresentou efeito protetor, sendo associada com as concentrações de ALT (p=0,044), AST (p=0,039) e com a contagem de linfócitos (p=0,050). Os três casos associados ao fenótipo de PHHF não apresentaram alterações clínicas e laboratoriais significativas, inclusive o caso 3, que apresentou o genótipo HbSF. É importante salientar que esses indivíduos não eram portadores de nenhuma das formas de PHHF investigadas. Estudos adicionais devem ser conduzidos com o objetivo de validar os resultados encontrados nesse estudo e de esclarecer os possíveis mecanismos pelos quais os marcadores moleculares investigados interferem na modulação da síntese de HbF e se esses biomarcadores podem apresentar mecanismos diferenciados daqueles comumente investigado, uma vez que foram descritas associações com marcadores importantes para o acompanhamento clínico de indivíduos HbSS. / The study of markers associated with the fetal hemoglobin (HbF) synthesis is of great scientific interest, since it can contribute to understanding regulatory mechanisms of genes involved in the synthesis of globin chains, once that HbF participate in the genetic modulation of sickle cell anemia (HbSS). The aim of this study was to investigate the influence of changes in genes involved in the synthesis of HbF and their associations with clinical and laboratory markers in HbSS and characterize the phenotype and genotype of individuals with the profile suggestive of hereditary persistence of fetal hemoglobin (HPFH). Thus, we performed a cross-sectional study, followed by a case-control, in a group of 43 HbSS individuals with HbF> 3.0% and 3 individuals with a suggestive profile of HPFH. Polymorphisms HBG2 -396/-391del, the HBG2 SNP -369 C> G, HBG2 -309 A> G, HBG2 -157 T> C, HBG1 -499 T> A, HBG1 -369 C> G HBG1 the -271 C> T and HBG1-225/-222del were investigated by automated DNA sequencing; haplotypes linked to the beta globin gene were investigated by PCR-RFLP; single nucleotide polymorphisms of BCL11Ars766432, BCL11Ars6732518, OR51B5/6rs4910756, OR51B5/6rs7483122 , HMIPrs11759553, HMIPrs35959442 were investigated by real-time PCR, alpha thalassemia 2 with 3.7 Kb deletion and HPFH-1 , HPFH-2 and HPFH-4 deletions by PCR Hematological tests were performed in automatic cell counter, the profile of hemoglobin was confirmed by high performance liquid chromatography and biochemical analysis were investigated by immunochemistry assay method. Levels of HbF were associated with HbS (p <0.0001), hematocrit (p= 0.035), MVC (p= 0.010), MHC (p= 0.045), VLDL cholesterol (p= 0.044), iron (p= 0.001) and ferritin (p= 0.042). Polymorphisms were associated with clinical and laboratory markers in the studied group. The polymorphism HBG1 -271 C>T was associated with the concentration of HbF (p = 0.027, PR = 4.45, 95% CI 1.14 - 17.41) and iron (p= 0.0076); the HBG1 - 499 T> A was associated with the level of glucose (p= 0.007) and alpha-1 antitrypsin (p= 0.008); the HBG1 -225/-222del with LDL cholesterol concentrations (p= 0.017); the HBG2 - 396/-391del with Hb concentrations (p= 0.017), creatinine (p= 0.042) and bilirubin (p= 0.030), and also with a more severe clinical disease, with frequent occurrence of vaso-occlusive crises (p= 0.046), gallstones (p= 0.021) and the use of haemotherapic (p= 0.009); the BCL11A rs766432 with the reticulocyte count (p<0.0001) and the concentration of total cholesterol (p= 0.033) and BCL11Ars6736518 with the level of glucose (p= 0.049) and eosinophil count (p= 0.012); the HMIPrs35959442 with ferritin concentrations (p= 0.035), creatinina (p= 0.008 ) and MCV (p= 0.022), the HMIPrs11759553 with concentrations of uric acid (p= 0.033) and ferritin (p= 0.020); and the polymorphisms OR51B5/6rs7483122 and the OR51B5/6rs4910756 with creatinine concentrations (p= 0.001 ). Multivariate analysis pointed for the association of the genotype CAR / CAR with a decrease in HbF concentration with the use of blood therapy. The alpha thalassemia 2 with 3.7 Kb deletion showed a protective effect, being associated with concentrations of ALT (p= 0.044), AST (p= 0.039) and lymphocyte count (p= 0.050). The three cases associated with HPFH phenotype did not show significant association with clinical and laboratory data, including the case 3, that showed the genotype HbSF. It is noteworthy that these individuals were not classified in any described HPFH type investigated. Further studies should be conducted in order to validate results found in this work and to clarify the possible mechanisms by which those investigated molecular markers can interfere with the modulation of the HbF synthesis and if they have mechanisms differentiate from the ones commonly investigated, once that the present study described association with important biomarkers that have been used for monitoring individuals with HbSS.

LAURENTINO, Marília Rocha. Relação entre polimorfismos do gene BCL11A e biomarcadores de hemólise em pacientes com anemia falciforme. 2016. 57 f. Dissertação (Mestrado em Patologia) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2016-03-29T13:38:57Z No. of bitstreams: 1 2016_dis_mrlaurentino.pdf: 1075884 bytes, checksum: bc1a1825e2afb2255af248d0c4674ba1 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2016-03-29T13:52:39Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_dis_mrlaurentino.pdf: 1075884 bytes, checksum: bc1a1825e2afb2255af248d0c4674ba1 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-29T13:52:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_dis_mrlaurentino.pdf: 1075884 bytes, checksum: bc1a1825e2afb2255af248d0c4674ba1 (MD5) Previous issue date: 2016 / Sickle cell disease (SCD) is a hematological disease caused by a point mutation in the β-globin gene. Sickle hemoglobin (HbS) is generated due to fragile mutation that decreases the red blood cell lifetime due to its chronic destruction, being the main responsible for the signs and symptoms of the disease. The use of hydroxyurea (HU) and genetic polymorphisms on modulates fetal hemoglobin (HbF), the main inhibitor of HbS polymerization, reducing hemolysis and vaso-occlusion. This study aimed to evaluate the association of polymorphisms BCL11A gene on the hemolysis markers reticulocytes, bilirubin, uric acid, lactate dehydrogenase (LDH) and methemoglobin (MetHb). The study included 45 patients with SCD of both sexes, in use of HU, attended in outpatient University Hospital Walter Cantídio (HUWC) in Fortaleza, Ceará, and 80 healthy individuals as a control group. The MetHb, uric acid and bilirubin dosage has performed by spectrophotometric method, the LDH by a kinetic method, the reticulocyte count by manual method and evaluation of BCL11A polymorphisms by PCR in real time. Data were analyzed using the statistical software GraphPad Prism. The level of significance was set at <5%. Patients with SCD and healthy subjects showed a difference between hematological parameters, hemoglobin, hematocrit, mean corpuscular volume (MCV) and platelets. Regarding the hemolysis parameters, it was observed that SCD patients has an increase of reticulocytes, MetHb, LDH and bilirubins compared to control group. The rs7557939 region showed an association with hemolysis biomarkers MetHb and LDH and rs4671393 region with the HbS concentration. The use of HU at doses higher than 10 mg/kg/day and for a longer period than 50 months had association with the decrease of the LDH concentration and the reticulocyte count. We conclude that polymorphisms on BCL11A gene and treatment with HU may modulate the hemolysis biomarkers, however, more research is necessary to study prognostic indicators and the factors involved in the clinical heterogeneity of SCD. / A anemia falciforme (AF) é uma doença hematológica causada por uma mutação pontual no gene da β-globina. A hemoglobina S (HbS) gerada devido à mutação forma hemácias com menor meia-vida devido à sua destruição crônica, sendo a principal responsável pelos sinais e sintomas da doença. Os polimorfismos do gene BLC11A e o uso de hidroxiuréia (HU) modulam a concentração de hemoglobina fetal (HbF), principal inibidora da polimerização da HbS, diminuindo a hemólise e a vaso-oclusão. O presente estudo teve o objetivo de associar os polimorfismos do gene BCL11A com os biomarcadores de hemólise reticulócitos, bilirrubinas, ácido úrico, lactato desidrogenase (LDH), e metemoglobina (MetHb). Participaram do estudo 45 pacientes com AF em uso de HU, de ambos os sexos, atendidos no ambulatório de Hematologia do Hospital Universitário Walter Cantídio (HUWC) em Fortaleza-Ceará e 80 indivíduos saudáveis como grupo controle. A dosagem de MetHb, de ácido úrico e bilirrubinas foi realizada através de método espectrofotométrico, a de LDH por método cinético, a contagem de reticulócitos por metodologia manual e a avaliação dos polimorfismos do BCL11A por PCR em tempo real. Os dados obtidos foram analisados utilizando-se o programa estatístico GraphPad Prism. O nível de significância foi estabelecido em <5%. Pacientes com AF e indivíduos saudáveis apresentaram uma diferença entre os parâmetros hematológicos hemoglobina, hematócrito, volume corpuscular médio (VCM) e plaquetas. Em relação aos parâmetros de hemólise, observou-se que os pacientes com AF apresentaram um aumento de reticulócitos, MetHb, LDH e bilirrubinas (BT, BD, BI) em relação ao grupo controle. A região rs7557939 do gene BCL11A apresentou uma associação com os biomarcadores de hemólise MetHb e LDH e a região rs4671393 com a concentração de HbS. O uso da HU em doses maiores que 10mg/kg/dia e por um período maior que 50 meses apresentou associação com a diminuição da concentração de LDH e com a contagem de reticulócitos. Concluiu-se que polimorfismos no gene BCL11A e o tratamento com a HU podem modular os biomarcadores de hemólise, entretanto, mais pesquisas são necessárias para estudar indicadores de prognóstico e os fatores envolvidos na heterogeneidade clínica da AF.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2006. / Submitted by Fernanda Weschenfelder (nandaweschenfelder@gmail.com) on 2009-11-03T14:42:14Z No. of bitstreams: 1 Tese de LISLIÊ CAPOULADE NOGUEIRA ARRAIS DE SOUZA.pdf: 2294666 bytes, checksum: 798316819fc6ceea292943eb627bb1a7 (MD5) / Approved for entry into archive by Gomes Neide(nagomes2005@gmail.com) on 2010-07-26T20:33:22Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese de LISLIÊ CAPOULADE NOGUEIRA ARRAIS DE SOUZA.pdf: 2294666 bytes, checksum: 798316819fc6ceea292943eb627bb1a7 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-07-26T20:33:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese de LISLIÊ CAPOULADE NOGUEIRA ARRAIS DE SOUZA.pdf: 2294666 bytes, checksum: 798316819fc6ceea292943eb627bb1a7 (MD5) Previous issue date: 2006 / Introdução: anemia falciforme é a doença hereditária mais prevalente no Brasil, acometendo de 0,1 a 0,3% da população negra. Estima-se também o nascimento de 1-3/1000 novos casos anuais no país, caracterizando assim importante problema de saúde pública em nosso meio. Sabe-se também que a prevalência de dessaturação noturna da hemoglobina em crianças e adolescentes com AF é superior a 40% e que anormalidade da função pulmonar pode estar presente antes mesmo de qualquer evidência clínica de crise vaso-oclusiva ou síndrome torácica aguda. Em adultos, com anemia falciforme, a hipertensão arterial pulmonar tem emergido como o maior fator de risco independente para morte. Objetivos: estudar a qualidade do sono e função cardio-respiratória de pacientes com anemia falciforme clinicamente estável; investigar a presença de distúrbios respiratórios nesses pacientes, avaliando o papel desses distúrbios nas possíveis alterações do sono e investigar, também, a presença de alterações cardíacas. Pacientes e Métodos: estudo observacional transversal descritivo, que incluiu pacientes portadores de anemia falciforme (SS), com idade >10 e <18 anos e ausência de diagnóstico prévio de doença respiratória ou de distúrbio do sono. Os pacientes realizaram avaliação clínica, questionário de sono, polissonografia noturna, espirometria e volumes pulmonares, eletrocardiografia, ecocardiografia, hemograma, tomografia de tórax e das vias aéreas superiores e videonasofaringolaringoscopia. Resultados: foram estudados 50 pacientes, dos quais 25 (50%) pertenciam ao sexo masculino. A média da idade foi de 14+2,5 anos, do peso de 39+11 Kg e da estatura de 150+14 cm. Quarenta pacientes (80%) referiram roncarem e dentre estes 48% na maioria das noites. As queixas de dormir de boca aberta e babar no travesseiro estavam presentes em 80% e 62% dos pacientes, respectivamente. Já 38% dos pacientes afirmaram ter fumantes em domicílio. O TTS teve média de 410+64 minutos, a latência média do sono de 18+20 minutos e a latência de sono REM de 182+100 minutos, sendo que dois pacientes não apresentaram sono REM. A média de mudança de estágio foi de 86+26, do número total de despertares 106+73 e da movimentação em sono 29+12. Observamos diminuição do estágio REM que foi de 13+6%, aumento do E2= 57+8%, ficando o restante dentro da normalidade para a idade. A média do IDR foi de 2+3 eventos/hora, do IAO de 0,2+0,8/h e 20 pacientes (40%) apresentam SAOS. A média de SpO2 em vigília foi de 87+6%. Os pacientes foram subdivididos em dois grupos com relação à SpO2 em sono REM, sendo maior número de distúrbios respiratórios e sono menos fragmentado no grupo com dessaturação noturna. Na análise geral, os valores médios das variáveis espirométricas encontravam-se dentro da normalidade para a faixa-etária, com exceção do volume residual e da relação VR/CPT que estavam aumentadas. A média do hematócrito foi de 25,3+3,9 % e da hemoglobina de 8,3+1,3 g/dl. A média da PAS foi de 113+14 mmHg e PAD de 63+10 mmHg e da PSAP de 38,3+17 mmHg. O eletrocardiograma foi normal em 56% dos pacientes. O ecocardiograma mostrou aumento isolado de ventrículo esquerdo em 34% dos pacientes. Tonsila faríngea hipertrófica foi encontrada em 22 pacientes (44%) e tonsila palatina hipertrófica em 52%. À tomografia de tórax, 73% dos pacientes não apresentavam qualquer alteração de parênquima pulmonar. Conclusões: para o grupo de pacientes estudados podemos concluir que existe perda de qualidade de sono, e que essa perda provavelmente se correlaciona com a dessaturação da hemoglobina. Existe alteração da função pulmonar caracterizada por hiperreatividade da via aérea, decorrente de exposição à fumaça de cigarro, e alterações eletro e ecocardiográficas e presença de hipertensão arterial pulmonar. ____________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Introduction: sickle cell anemia is the most prevalent hereditary disease in Brazil, occurring in 0,1 to 0,3% of the negro population. The occurrence of 1-3/1000 new annual cases in the country are also estimated, thus characterizing an important public health problem in our environment. It’s also know that the prevalence of nocturnal desaturation of hemoglobin in children and teenagers with SS is higher than 40% and that abnormality of the pulmonary function may be present even before any clinical evidence of vaso-occlusive crisis or acute chest syndrome. In adults, with sickle cell disease, pulmonary arterial hypertension has emerged as the biggest independent risk factor for death. Objectives: to study the quality of sleep and cardio-respiratory function of patients with clinically stable sickle cell disease; investigate the presence of respiratory disorders in these patients, evaluating the role of such disorders in the possible sleep alterations and also investigate the presence of cardiac alterations. Patients and Methods: observational descriptive cross-sectional study, that included patients with sickle cell disease (SS), with ages >10 and >18 years old and absence of previous diagnosis of respiratory disease or sleep disorder. The patients underwent clinical evaluation, sleep questionnaire, overnight polysomnography, spirometry and pulmonary volumes, electrocardiography, hemogram, upper airway and chest tomography and nasal fiber optic examination. Results: 50 patients were studied, from which 25 (50%) were male. The average age was 14±2,5 years, average weight 39±11 Kg and average height 150±14 cm. Forty patients (80%) referred to snoring and among these 48% in most nights. The complaints about sleeping with the mouth open and dribbling on the pillow were present in 80% and 62%, respectively. 38% of the patients stated to have smokers at home. The total sleep time had an average of 410±64 minutes, the average latency of sleep 18±20 minutes and the latency of REM sleep 182±100 minutes, being that two patients did not present REM sleep. The average of stage shifts was 82±26, of the total number of awakenings 106±73 and movement during sleep 29±12. We observed a decrease of the REM stage that was of 13±6%, an increase of the E2= 57±8%, and the remaining was within normality for the age. The average of the respiratory disorder index was of 2±3 events/hour, of the obstructive apnea index of 0,2±0,8/h and 20 patients (40%) presented obstructive sleep apnea syndrome. The average of SpO2 in alertness was of 87±6%. The patients were subdivided into two groups regarding SpO2 in REM sleep, the greater number of respiratory disorders and less fragmented sleep being in the nocturnal desaturation group. In the general analysis, the mean values of the spirometric variables were within normality for the age group, with the exception of the residual volume and the RV/TLC relationship that were increased. The average of the hematocrit was of 25,3±3,9% and of hemoglobin of 8,3±1,3 g/dl. The average systolic artery pressure was of 113±14 mmHg and dyastolic artery pressure of 63±10 mmHg and of pulmonary artery systolic pressure of 38,3±17 mmHg. The electrocardiogram was normal in 56% of the patients. The echocardiogram showed an isolated increase of the left ventricle in 34% of the patients. Hypertrophic pharyngeal tonsils were found in 22 patients (44%) and hypertrophic palatal tonsils in 52%. Regarding chest tomography, 73% of the patients didn’t present any alterations of lung tissue. Conclusions: from the group of patients studied we can conclude that there is loss of sleep quality, and that this loss probably correlates to the desaturation of hemoglobin. There is alteration of the pulmonary function characterized by hyperactivity of the airway, as a consequence to the exposure to cigarette smoke, and electro and echocardiographic alterations and presence of pulmonary arterial hypertension.

FundaÃÃo Cearense de Apoio ao Desenvolvimento Cientifico e TecnolÃgico / Sickle cell anemia (SCA) is the most common hereditary disease in Brazil and is present in about 0.1 to 0.3% of the population of African origin. This disease is caused by homozygous mutation of a single nucleotide (Glu6Val gene Hb S) that modify the function of the red cell in the body, which implies changes in membrane components and, consequently, the event sickling of red blood cells, causing vaso-occlusion. In this work we aim to identify, quantify and correlate changes in erythrocyte membrane glycoproteins associated with the framework and clinical evolution of the disease, using ion exchange chromatography (IEC) and SDS-PAGE. Were performed ion exchange chromatography on membrane proteins extracted from peripheral blood erythrocytes of 31 patients with AF. The chromatograms showed significant differences in the concentration of protein present in the membranes of red blood cells when we relate absorbance / elution range between seizure freedom and volunteers without a diagnosis of AF, depending on the clinical manifestations, patients may show differences in protein concentration. 1D SDS-PAGE revealed the presence of distinct proteins, suggesting that there are differences in the type and concentration of membrane proteins in sickle erythrocytes (both in patients without crisis as a crisis), when related to those extracted from red cells not anemic. In SDS-PAGE 2D 254 spots were identified, of which 8 spots were not identified by the program TagIdent. Most spots were distributed in the pH range 7-10, with a predominance of proteins with molecular weight less than or equal to 20 kDa. Our results suggest that analysis of sickle cells by IEC, followed by SDS-PAGE (1D and 2D), allowed differentiation and partially characterize membrane proteins of erythrocytes of patients (symptomatic and asymptomatic) with AF when related to volunteers without a diagnosis of AF . Our data reinforce the variety of biomodulation related AF, suggesting that their identification is of paramount importance for the study of adhesion between these cells sickle and the endothelium, which triggers vaso-occlusion, resulting in various symptoms. / A anemia falciforme (AF) à a doenÃa hereditÃria mais comum no Brasil e està presente em cerca de 0,1 a 0,3% da populaÃÃo afrodescente. A doenÃa à uma homozigotia causada pela mutaÃÃo de um Ãnico nucleotÃdeo (Glu6Val no gene Hb S) que altera a funÃÃo da cÃlula vermelha no organismo, o que implica em alteraÃÃes nos componentes da membrana e, em conseqÃÃncia, o evento de falcizaÃÃo das hemÃcias, desencadeando crises de vaso-oclusÃo. Nesse trabalho objetivamos identificar, quantificar e correlacionar alteraÃÃes em glicoproteÃnas da membrana eritrocitÃria associados com o quadro e evoluÃÃo clÃnica da enfermidade, utilizando cromatografia de troca iÃnica (IEC) e SDS-PAGE. Foram realizadas cromatografias de troca iÃnica em proteÃnas de membrana extraÃdas de hemÃcias de sangue perifÃrico de 31 portadores de AF. Os cromatogramas revelaram diferenÃas significativas quanto à concentraÃÃo de proteÃnas presentes nas membranas das hemÃcias quando relacionamos absorbÃncia/faixa de eluiÃÃo entre pacientes sem crises e voluntÃrios sem diagnÃstico de AF; dependendo das manifestaÃÃes clÃnicas, pacientes podem apresentar diferenÃas nas concentraÃÃes protÃicas. SDS-PAGE 1D revelou a presenÃa de proteÃnas distintas, sugerindo que hà diferenÃas no tipo e na concentraÃÃo das proteÃnas de membrana de hemÃcias falcÃmicas (tanto em pacientes sem crise, quanto em crise) quando relacionadas Ãquelas extraÃdas da membrana de hemÃcias nÃo falcÃmicas. Na SDSâPAGE 2D foram identificados 254 spots, dos quais 8 spots nÃo foram identificados pelo programa TagIdent. A maioria dos spots estavam distribuÃdos na faixa de pH 7-10, com predomÃnio de proteÃnas com massa molecular menor ou igual a 20 KDa. Nossos resultados sugerem que anÃlise das cÃlulas falcÃmicas por IEC, acompanhadas de SDS-PAGE (1D e 2D), permitiu diferenciar e caracterizar parcialmente proteÃnas de membrana de hemÃcias de pacientes (sintomÃticos e assintomÃticos) com AF quando relacionadas ao controle, sem diagnÃstico de AF. Nossos dados reforÃam a variedade de biomoduladores relacionados AF, sugerindo que sua identificaÃÃo à de suma importÃncia para o estudo da adesÃo entre cÃlulas falcÃmicas e destas ao endotÃlio, o que pode desencadear a vasoclusÃo, resultando em diversos sintomas.

Orientador: Nicola Amanda Conran Zorzetto / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-10T04:12:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Almeida_CamilaBononide_M.pdf: 1751160 bytes, checksum: 34725ba06e7511a0cd3632322e61fd59 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: A anemia falciforme é um distúrbio genético causado por uma mutação de ponto (Ácido Glutâmico-Valina) que produz uma hemoglobina S. Esta, quando desoxigenada, polimeriza causando deformação dos eritrócitos que se agregam às paredes da micro circulação culminando em crises vaso-oclusivas. Existem algumas moléculas de adesão que colaboram no bloqueio da circulação aderindo eritrócitos, células brancas e plaquetas à parede dos túbulos sanguíneos. A hidroxiuréia (HU) vem sendo utilizada no tratamento da doença devido à sua habilidade em aumentar a produção de hemoglobina fetal (HbF). No entanto, nem todos os pacientes respondem positivamente ao tratamento com HU. Estudos mostram que a HU quando degradada, produz óxido nítrico (NO), o qual ativa a enzima guanilato ciclase solúvel (GCs). Esta, por sua vez, transforma GTP em GMPc que atua como segundo mensageiro ativando provavelmente a transcrição do gene ?-globina aumentando assim, a concentração de HbF e melhorando o quadro clínico dos pacientes com essa doença. Por isso, o NO tornou-se fonte de grandes estudos, uma vez que é um importante vasodilatador. O objetivo desse trabalho foi elucidar qual família de fosfodiesterase (PDE) atua na degradação do GMPc das células de linhagem eritróide e se as drogas inibidoras dessas PDEs seriam capazes de aumentar a produção de ?-globina e conseqüentemente HbF em células eritróides de cultura. Para isso foram realizadas culturas de células K562 tratadas com diferentes drogas inibidoras de PDE (vinpocetina, sildenafil, dipiridamol e zaprinast) e com estimulador de guanilato ciclase, BAY41-2272. Observamos que os níveis de GMPc aumentaram principalmente nas células tratadas com 10µg/ml de dipiridamol e em alguns pontos de coletas com 10 e 50µM de vinpocetina. O mesmo não foi observado nas células tratadas com sildenafil e zaprinast. No entanto, todas as células tratadas com as diferentes concentrações de BAY41-2272 apresentaram aumento na concentração de GMPc. Com relação à expressão gênica relativa de ?-globina, observamos que as drogas dipiridamol, vinpocetina, sildenafil e zaprinast não foram capazes de provocar um aumento da expressão. Diferentemente, BAY41-2272 estimulou um aumento da expressão de ?-globina nas células K562 tratadas com 60 e 300nM após 48 horas de cultura. Além disso, estudamos a expressão das PDEs 1, 5 e 9 em células hematopoéticas e diferentes tecidos. Observamos que PDE9 é significativamente mais expressa em células K562, reticulócitos e neutrófilos. Além disso, observamos também que a expressão dessa PDE é significativamente maior nos reticulócitos e neutrófilos de paciente com anemia falciforme. Já naqueles que se encontravam sob terapia com HU, a expressão da PDE9 nos reticulócitos reverteu aos níveis do controle diferentemente dos neutrófilos, cuja expressão de PDE9 não se alterou entre os pacientes com ou sem terapia com HU. A expressão da PDE9 em outros tecidos (T98G, cólon, ovário, mama, fígado, pele, baço, testículo, útero e linfonodo) é significativamente menor do que nestas células hematopoéticas. Assim sendo, como aumento nos níveis celulares de GMPc pode ser importante tanto para a produção de HbF em células eritróides como para inibir a adesão de leucócitos, bloquear a ação da PDE9 pode representar uma nova estratégica célula-especifica para o tratamento da anemia falciforme / Abstract: Sickle cell disease (SCD) is a systemic disease with a multifaceted pathophysiology; the polymerisation of the sickle haemoglobin molecule (HbS), when deoxygenated, has many consequences that include haemolysis, inflammation, dysregulated nitric oxide (NO) homeostasis and oxidative abnormalities. Agents, such as hydroxyurea (HU), that increase levels of fetal hemoglobin (HbF), with consequent inhibition of HbS polymerization, and that may counteract other aspects of the disease's pathophysiology characterize important therapies for the disorder. Whilst HU therapy successfully augments HbF levels in many patients, not all patients respond to treatment. Studies demonstrate that HU, when degraded, produces nitric oxide (NO), in turn activating the enzyme, soluble guanylate cyclase (GC) in erythroid lineage cells. GC converts GTP to cGMP, which acts as a second messenger for NO, possibly activating the transcription of the ?-globin gene and, consequently, increasing the concentration of HbF. Due to evidence that NO bioavailability may be decreased in SCD individuals, recent research into SCD has focused on the role of NO in the disease, particularly since this gas is an important vasodilator. The objective of this study was to investigate which family(ies) of phosphodiesterases (PDE) may mediate the degradation of cGMP in erythroid lineage cells and whether drugs that inhibit these PDEs are capable of augmenting the production of ?-globin and, consequently, HbF in erythroid cells in culture. For this, cultures of K562 erythroleukemic cells were treated with different PDE inhibitors; vinpocetine, sildenafil citrate, dipyridamole and zaprinast. In addition, cultures were also treated with the guanylate cyclase stimulator, BAY41-2272. Increased levels of cGMP were observed principally in cells treated with 10µg/ml dipyridamole and at some time-points in the presence of 10 and 50µM vinpocetine. No changes in cGMP levels were observed in cells treated with sildenafil nor with zaprinast. However, cells treated with BAY 41-2272 demonstrated augmented cGMP levels at all concentrations used. With regard to relative ?-globin gene expression, dipyridamole, vinpocetine, sildenafil and zaprinast did not increase ?-globin gene expression; in contrast, BAY 41-2272 (60 and 300nM) stimulated increased ?-globin expression after 48h of culture. The gene expressions of PDEs 1, 5 and 9 were also studied in different hematopoietic cell types and other tissues. PDE9 is expressed, at significantly higher levels, in K562 cells (erythroleukemic cells), reticulocytes and neutrophils than in numerous other cell types tested (T98G, colon, mammary, ovary, testicle, liver, skin, spleen, uterus, limphonode). Furthermore, the expression of this PDE was even higher in the reticulocytes and neutrophils of patients with SCD. In patients on HU therapy, the expression of PDE9 in reticulocytes was reversed back to levels similar to those seen in controls. In contrast, PDE9 expression in neutrophils was similar in patients on or of HU therapy. Thus, since the increase in intracellular levels of cGMP may be important for the production of HbF in erythroid cells and also to inhibit leukocyte adhesion, the inhibition of the action of PDE9 may represent a novel drug target for cell-specific treatment of SCD / Mestrado / Ciencias Basicas / Mestre em Clinica Medica

ARAÚJO, Antonio Roberto Lucena de, também é conhecido(a) em citações bibliográficas por: LUCENA-ARAUJO, Antonio Roberto / Submitted by Fernanda Rodrigues de Lima (fernanda.rlima@ufpe.br) on 2018-09-25T22:37:32Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Betania Lucena Domigues Hatzlhofer.pdf: 3470778 bytes, checksum: fc4fe715fb48dc315921ddd24c081cd9 (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-09-27T22:05:28Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Betania Lucena Domigues Hatzlhofer.pdf: 3470778 bytes, checksum: fc4fe715fb48dc315921ddd24c081cd9 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-27T22:05:28Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Betania Lucena Domigues Hatzlhofer.pdf: 3470778 bytes, checksum: fc4fe715fb48dc315921ddd24c081cd9 (MD5) Previous issue date: 2016-09-20 / A anemia falciforme (AF) é uma doença monogênica caracterizada por um fenótipo variável, com complicações clínicas graves e grande heterogeneidade clínica. Evidências mostram que fatores genéticos podem estar envolvidos como moduladores desta doença. A coexistência com a alfa talassemia e os haplótipos do cluster βˢ são considerados os principais determinantes na expressão dos múltiplos fenótipos da AF, no entanto a real influência desses marcadores ainda é uma questão controversa. O estudo teve como objetivo, avaliar a influência da alfa talassemia e dos haplótipos βˢ nas manifestações clínicas da AF em 714 pacientes provenientes do Estado de Pernambuco. Diversas variáveis clínicas, como crises vaso-oclusiva, colelitíase, síndrome torácica aguda, úlcera de perna, osteonecrose, acidente vascular cerebral (AVC) e priapismo foram investigadas. A deleção -ᵅ3.7 da alfa talassemia e os haplótipos do cluster βˢ foram genotipados por gap-PCR e PCRRFLP, respectivamente. O haplótipo Bantu esteve presente na maioria dos pacientes (92,4%), com uma alta frequência alélica (74.3%) e genotípica (56,5%). A análise comparativa dos haplótipos não mostrou associação com nenhuma das manifestações clínicas estudadas. A alfa talassemia esteve presente em 23,7% dos pacientes e foi associada a um menor risco para o desenvolvimento das manifestações clínicas hemolíticas: AVC, priapismo e colelitíase. A alfa talassemia não foi associada com úlcera de perna, complicações vaso-oclusivas e sobrevida global dos pacientes. Nossos resultados mostram que a alfa talassemia é um modulador fenotípico para a maioria das manifestações clínicas hemolíticas da AF e os haplótipos βˢ não estão associados à heterogeneidade clínica da doença no Estado de Pernambuco. / Sickle cell anemia (SCA) is a monogenic disease characterized by a variable phenotype, with severe clinical complications and significant clinical heterogeneity. Evidences show that genetic factors may be involved in the disease modulation. Alpha thalassemia coexistence and βˢ cluster haplotype are considered the main determinants of SCA phenotypes, however the real role of these markers is still controversial. The aim of this study was to evaluate the influence of alpha thalassemia and βˢ haplotypes on SCA clinical manifestations in 714 patients from Pernambuco state. Several clinical variables, such as vaso-occlusive crisis, cholelithiasis, acute chest syndrome, leg ulcers, osteonecrosis, stroke and priapism were investigated. The -ᵅ3.7 deletion of alpha-thalassemia and βˢ-globin cluster haplotype were genotyped by PCR-RFLP and gap-PCR respectively. The Bantu haplotype was present in most patients (92.4%) with a high allele (74.3%) and genotypic (56.5%) frequency. The comparative analysis of haplotypes was not associated with any studied clinical manifestations. Alpha thalassemia was present in 23.8% of patients and it was related to a protective effect on the development of hemolytic clinical manifestations, such as stroke, cholelithiasis and priapism. Alpha thalassemia was not associated with leg ulcers, vaso-occlusive complications and overall survival. Our results indicate that alpha thalassemia is a phenotypic modulator for most hemolytic clinical manifestations of SCA. In addition, βˢ haplotypes are not associated with clinical heterogeneity of the disease in Pernambuco state.

Orientador: Sara Terezinha Olalla Saad / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-07-23T18:13:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Terra_HeloisaTerezinhaMeneghiniBichir_M.pdf: 3475163 bytes, checksum: 352c24fb1c5c45244ee98a2129f6aacd (MD5) Previous issue date: 1997 / Resumo: O eritrócito humano contém uma tirosina quinase associada à sua membrana que fosforila a banda 3. O sítio de fosforilação tem sido identificado preferencialmente na tirosina 8, no N-terminal da banda 3, mas também na tirosina 21 e, essa região tem sítios de ligação com alta afinidade por várias proteínas periféricas incluindo hemoglobinas, hemicromos e enzimas glicolíticas. Muitas das funções das proteínas são controladas por sucessivas modificações reversíveis como seu estado de fosforilação. A fosforilação do domínio citoplasmático da banda 3 do eritrócito humano purificado, por uma proteína tirosina quinase, resultou na inibição da ligação com aldolase, G3PD, fosfofrutoquinase e hemoglobina e ativação de glicólise. No presente estudo, examinamos o grau de fosforilação da tirosina da banda 3 em 34 pacientes com hemoglobinopatias: 15 com anemia falciforme, 6 com S¿BETA¿ talassemia, 6 com hemoglobinopatia SC e 7 com p talassemia. Para esta avaliação foi utilizada a técnica de immunoblotting com anticorpo anti-fosfotirosina. No grupo de pacientes com doenças falciformes, a fosforilação aumentou de 2 a 10 vezes comparada com a fosforilação do controle normal (SS=7.8±2.7 vezes; SC=3.8±1.3 vezes; Sp= 5.2±2.0 vezes). No grupo de ß talassemia a fosforilação também aumentou ('BETA¿ tal=4.3±t3.7 vezes), mas nesse grupo 3 pacientes apresentaram fosforilação da tirosina da banda 3 próximo do nível apresentado pelo controle normal (1, 1.5 e 1.7 vezes). No entanto, não houve diferença significativa na fosforilação da tirosina da banda 3 entre os vários grupos testados, exceto quando comparamos a fosforilação em hemácias intactas de pacientes com anemia falciforme(SS) e pacientes com hemoglobinopatia SC (U=6, p<0.02). As conseqüências do aumento da fosforilação em tiro sina em hemoglobinopatias ainda não estão claras, mas além da estimulação da glicólise, é possível uma ligação inadequada da banda 3 com anquirina, com instabilidade do esqueleto. Os mecanismos desta lesão necessitam de maior investigação / Abstract: The band 3 protein is the main erythrocyte protein phosphorylated by tyrosine kinase and this phosphorylation is observed in ghost and intact cells when vanadate is present. The major phosphate acceptor site is at tyrosine residue 8 in the N-terminus of band 3. This region of the cytoplasmic domain has high affinity binding sites for several proteins including hemoglobin. With the aim to investigate the tyrosine phosphorylation of band 3, we performed immunoblotting of intact red cells using anti-phosphotyrosine antibody of 21 patients with sickle cell disorders (11 SS, 5 Sß, 5 SC), 7 patients with 'BETA¿ thalassaemias (5 'BETA¿ thal intermedia, 2 'OMEGA¿¿BETA¿ thal ), 10 normal controls and one patient with hereditary spherocytosis. They had not received transfusion for the last 4 months and all were clinically stable. Our results showed an increased tyrosine phosphorylation of two proteins, in the 100kD and 80kD regions, in sickle cell and ß-thalassaemic red cells when compared to the normal controls and to the patient with hereditary spherocytosis. Immunoprecipitation of the lysed red cells with anti-band 3 antibody and immunoblotting with anti-phosphotyrosine antibody confirm that the 100kDa tyrosine phosphorylated protein was band 3. In the sickle cell disease group, the band 3 tyrosine phosphorylation varied from 2 to 10 fold increase compared to control (SS= 7.8±2.7 fold; SC= 3.8±1.3 fold; SJ3= 5.2±2.0 fold). It was also higher in the ß-thalassaemic group ('BETA¿-thal= 4.3±3.7 fold). There was no significant difference in tyrosine phosphorylation among the various groups tested, except when we compared the phosphorylation in intact red cells of patients with sickle cell anaemia and haemoglobinopathy SC (U=6, p<0.02). The tyrosme phosphorylation of band 3 was increased in Haemoglobinopathies even in the absence of high reticulocyte count. At least two mechanisms might be involved in the increased tyrosine phosphorylation of band 3 in these haemoglobin disorders, probably related to the endogenous reactive oxygen intermediates generated by the abnormal erythrocyte: an inhibition of protein tyrosine phosphatase activity or an activation of the protein tyrosine kinase p72syk / Mestrado / Farmacologia / Mestre em Ciências

Orientadores : Helena Zerlotti Wolf Grotto, Carmen Silvia Passos Lima / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-01T18:09:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Borba_Ronaldo_M.pdf: 2686096 bytes, checksum: 9c069274b60d010afb07b8626a0cebf5 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: A hemoglobina Fetal (HbF) é um inibidor eficaz da polimerização da HbS. A hidroxiuréia (HU) é usada para aumentar a síntese de HbF e melhorar a evolução clínica de pacientes com síndromes fa1ciformes. Foram estudados uma série de parâmetros laboratoriais relativos à produção de HbF e à resposta dos reticulócitos (RTC), e foram comparados os dados entre 2 grupos: 13 pacientes com síndromes falciformes tratados com HU e 33 pacientes com síndromes fa1ciformes sem tratamento. No grupo tratado com HU, os resultados mostraram uma maior concentração de Hb, no volume corpuscular médio (VCM), na hemoglobina corpuscular média (HCM), no volume corpuscular médio dos RTC (VCMr), na concentração de HbF, na porcentagem de células F e na quantidade de Hb F/célula F. O número de RTC, o índice médio de fluorescência (MFI) e o número de neutrófilos foram significativamente menores em pacientes usando HU. Houve uma correlação significativa entre o VCMr e os níveis de HbF e entre o VCMr e as células F em pacientes tomando HU. A concentração de HbF/célula F foi significativamente maior em pacientes tratados com HU, mas este aumento aparentemente é independente da produção de células F. Esses dados demonstram que os parâmetros reticulocitários fornecidos por analisadores hematológicos de última geração, podem ser úteis para acompanhar as mudanças eritropoiéticas em pacientes usando HU e, permitem uma melhor compreensão de como essa terapia induz o aumento da produção de HbF e celsF nos pacientes com síndromes falciformes / Abstract: Haemoglobin F (HbF) is an effective inhibitor of HbS polymerisation. Hydroxyurea (HU) is used to increase HbF synthesis and to improve the clinical course of the sickle cell disease (SCD) patients. We studied a series of laboratorial parameters concerning to HbF production and reticulocyte response and compared the data between 2 groups: 13 SCD patients treated with HU and 33 SCD patients without treatment. Higher Hb concentration, mean cell volume (MCV), mean cell hemoglobin (MCH), mean reticulocyte volume (MRV), HbF concentration, percentage of Fce11 and proportion of HbF/Fcell were observed in the treated group ofpatients. There was no correlation between Hb and HbF increase. Reticulocyte count, immature reticulocyte count, mean fluorescence index (MFI) and neutrophil count were significantly lower in treated patients. These fmdings taken together suggest that a milder hemolytic process occurred in patients under HU treatment. There was significant correlation between MCV and HbF, MRV and HbF, and between MRV and Fce11 in patients taking HU. These data suggest that macroreticulocytes correspond to Freticulocytes, and that the increased MRV in SCD patients using HU may be an indirect evidence of F cell production. Concentration of HbF/Fcell was higher in patients treated with HU, but it is apparently independent Fcell production. RTC parameters provided by hematological analysers may be use fuI to follow erythropoietic changes in patients using HU and can, indirectly, indicate HbF and Fce11 production induced by HU therapy / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestre em Ciências Médicas

Orientadores : Satie Hatsushika Ogo, Marcio Alberto Torsoni / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-31T21:36:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cesquini_Maristela_M.pdf: 4737338 bytes, checksum: 2952df03fdaba0efee2200574902da5b (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: Espécies reativas de oxigênio (EROs) são constantemente formadas em células aeróbicas, particularmente nas mitocôndrias de células aeróbicas e nos eritrócitos. Estas EROs, em condições normais, são removidas por um eficiente sistema de detoxificação celular composto principalmente pelas enzimas antioxidantes, glutationa, vitaminas e microelementos. Entretanto, quando a produção de EROs sobrepõem a capacidade do sistema antioxidante, reações deletérias podem ocorrer caracterizando a condição conhecida como estresse oxidativo. Em algumas patologias, tais como anemia falciforme, talassemia e deficiência em glicose-6 fostato desidrogenase, o estresse oxidativo é ainda maior. A anemia falciforme é uma hemoglobinopatia genética caracterizada pelo aumento da geração de ERO, liberação anormal de ferro da Hb e atividade diminuída do sistema antioxidante gerando elevado estresse oxidativo. Diversas terapias têm sido utilizadas no intuito de minimizar os danos oxidativos sofridos por estes indivíduos portadores desta patologia, como a administração de ácido ascórbico e vitamina E. Neste trabalho o efeito de flavonóides, nos processos oxidativos do sangue de indivíduos portadores de anemia falciforme foi investigado. Os flavonóides são compostos amplamente distribuídos na natureza e por estarem presentes em grande quantidade na dieta humana podem ser ingeridos naturalmente; sua atividade antioxidante, antiosteoporótica, anticancerígena, antiinflamatória e antiviral têm sido bem descrita. O efeito dos flavonóides (quercetina e rutina) foi estudado nos processos de oxidação de Hb, ligação de Hb à membrana celular, peroxidação lipídica da membrana eritrocitária e formação de grupos carbonil de proteínas no sangue de indivíduos normais e portadores de anemia falciforme. Em geral, o nível de danos oxidativos encontrados no sangue de indivíduos falcêmicos foi maior do que no sangue de indivíduos normais, diferindo apenas nos experimentos de oxidação de Hb, nos quais os resultados foram semelhantes para ambas as Hb, este fato talvez se deva a presença de grande quantidade de Hb A, proveniente da transfusão, no sangue deStes pacientes. A quercetina mostrou maior efeito antioxidante em todos os experimentos. A rutina comportou-se como pró-oxidante na oxidação da Hb quando utilizada em concentrações inferiores a 150 _M, mostrando um efeito protetor acima desta concentração. Com base nos resultados obtidos, pode-se especificar que os flavonóides, principalmente a quercetina, apresentam um efeito benéfico na proteção contra os danos oxidativos do sangue de indivíduos portadores de anemia falciforme / Abstract: Oxygen reactive species (ROS) are constantly formed in aerobic cells, particularly in the mithocondria and erythrocytes. These ROS, under normal conditions, are removed by an efficient antioxidant system composed by antioxidant enzymes, glutathione, vitamines and microelements. However, when the ROS production is higher than the antioxidant system capacity, pathological reactions can occur characterizing the oxidative stress condition. In some pathologies, such as sickle cell anaemia, thalassemia and glucose-6-phosphate desidrogenase deficience, the oxidative stress is increased. The sickle cell anaemia is a genetic disease characterized by an increase of ROS generation, abnormal iron release and lower antioxidant activity. Several therapies have been used in order to decrease the oxidative damages of these pacients, such as the acid ascorbic and vitamine E administration. Thus, it was interesting to investigate the effect of natural antioxidant compounds, the flavonoids, in oxidative processes in the blood of sickle cell anaemia individuais and to compare the results with of normal individuais. The flavonoids are compounds widely distributed in the nature and normaly consumed by humans since they are present in great amount in the human diet; their antioxidant, antiosteoporotic, antitumor, antinflamatory and antiviral activities have been described. The effect offlavonoids (quercetin and rutin) was studied in the process of Hb oxidation, binding of Hb to celular membrane, lipid peroxidation of erythrocyte membrane and protein carbonyl groups formation in the blood of sickle anaemia and normal individuais. In general, the oxidative damage levels found in the blood of sickle individuais were higher than that found in the blood of normal individuais, differing only in the experiments of Hb oxidation. In this case, the results were similar to both Hb, perhaps because of great amount of Hb A in the blood of sickle patients. The quercetin showed higher antioxidant effect in ali experiments. The rutin behaved as pro-oxidant in the Hb oxidation, when rutin is used in concentration lower than 150 11M, however it showed protective effect in higher concentrations. Supported by these results, we can suggest beneficial effects of flavonoids, mainly of quercetin, in the protection against oxidative damage of sickle anaemia individuais blood / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Orientadores : Antonio Sergio Ramalho, Roosevelt Moises Smek Cassorla / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-07-15T22:13:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PaivaeSilva_RobertoBeneditode_M.pdf: 1788178 bytes, checksum: a2deb6b3e5a98c6478c7a68d50a71ca1 (MD5) Previous issue date: 1992 / Resumo: Apesar de a anemia falciforme constituir um problema de Saúde Pública no Brasil, a Iiteratura nacional carece de Investigações a respeito dos aspectos psicossociais da doença. No Presente trabalho investigou-se a real idade vivida por 80 pacientes adultos (31 homens e 49 mulheres) seguidos regularmente no Ambulat6rio de Hemoglobinopatias do Hemocentro da UNICAMP. Investigou-se também a percepção que 52 doentes, 59 geneticistas, 55 hematologistas brasileiros têm da doença, com ênfase no aspecto do seu diagnóstico pré-natal. Observou-se que a problemática maior do paciente adulto portador da anemia falciforme que recebe atendimento médico adequado está centrada nos aspectos profissionais e econômicos e que a opinião dos hematologistas e geneticistas difere significativamente da dos pacientes quanto ao grau de sofrimento imposto pela doença. Para a maioria dos pacientes, o diagn6stico pré-natal é percebido como um meio de se iniciar precocemente o tratamento da criança afetada, atribuindo-lhe o mesmo valor do diagnóstico neonatal.Frente ao risco hipotético de gerar uma criança com a anemia falciforme apenas 21% dos pacientes optariam pelo abortamento terapêutico. O diagnóstico pré-natal foi considerado um recurso técnico importante na prevenção da anemia falciforme por 51% dos hematologistas e 59% dos geneticistas; 27% dos hematologistas e 19% dos geneticistas julgaram esse procedimento questionável; 9% dos hematologistas e 7% dos geneticistas julgaram-no dispensável e 13% dos hematologistas e 15% dos geneticistas não tinham opinião formada sobre o assunto. Esses dados revelam que tanto os geneticistas quanto os hematologistas brasileiros ainda tem a sua opinião dividida sobre o assunto e que, em ambas as classes profissionais, o diagnóstico pré-natal da anemia falciforme só é aceito a priori, sem questionamentos, por cerca de 50% dos indivíduos entrevistados / Abstract: Sickle cell anemia is a public health problem in Brazil. The current national literature dealing with psychosocial aspects of this disease needs more research and improvements. This present work raised some psychosocial aspects in a group of 80 adults patients (31 males, 49 females) regularly followed at the University Hospital of UNICAMP, Campinas, São Paulo State, Brazil. It also investigated how medica1 doctors (59 geneticists, 55 hematologists) and 52 adults patients percieve the disease and, mainly what they think about its prenatal diagnosis. The lack of professional opportunities and economic factors are the main problems encoutered by these sickle cell anemia patients. Morsover, doctors and patients opinions differ quite substantially on the degree of suffering brought by the disease. The majority of patients understand prenatal diagnosis as a mean of early care that could be given to the affected child. Only 21% of them accept the therapeutic abortation as an important aid to prevent the disease. 51% of the hematologists and 59% of the geneticists consider prenatal diagnosis as an important technical aid to prevent sickle cell disease; 27% of the hematologists and 19% of the geneticists understand it a questionable aid; for 9% of the hematologists and 7% of the geneticists it is dispensable. Finally, 13% of the hematologists and 15% of the geneticists had no final opinion about the subject. These data Feveal how controversial are the opinions of the Brazilian geneticists and hematologists on this matter, and only 50% of them accept prenatal diagnosis a priori, with no restriction / Mestrado / Mestre em Saude Mental