Os objetivos desse estudo foram: 1) Padronizar a pesquisa do anti-tTg, comparando-o com o anticorpo antiendomísio (AAE) e 2) Avaliar as interações da tTg com a fibronectina. 49 celíacos e 124 controles com AAE negativo foram avaliados. O AAE foi pesquisado por imunofluorescência indireta e a reatividade contra a tTg e a fibronectina por ELISA in house e com kits comerciais. O antitTg foi positivo em 46,9% e 100% dos celíacos com o ELISA in house e com kits comerciais, respectivamente. A adição de fibronectina não melhorou a sensibilidade do ELISA. Em conclusão: a detecção do antitTg por ELISA apresenta percentual elevado de falso-positivos, não podendo substituir a pesquisa do AAE / The aims of the current study were: to standardize the detection of anti-tTg antibodies, comparing them with antiendomysial antibodies (EMA) and to assess the interaction of tTg with fibronectin. 49 celiac patients and 124 controls were enrolled. EMA was detected by indirect immunofluorescence reaction and tTg and fibronectin reactivity by in house ELISA and with commercially available kits. Seropositivity to anti-tTG was found in 46.9% and 100% of patients by the in house technique and by commercial kits, respectively. Fibronectin addition did not improve the ELISA sensibility. In conclusion, ELISA for anti-tTG detection has a high rate of false positive results and does not replace EMA

Baseado nos algoritmos de hidrofilicidade e flexibilidade obtidos pelo uso do \"software\" ProtScale, acessível no endereço http://au.expasy.org/cgi-bin/protscale.pl, foram selecionados sete peptídeos, potencialmente antigênicos, das proteínas de Schistosoma mansoni, entre elas, catepsina B (Sm 31), \"heat shock protein\" de 70 kDa (HSPSm-70), \"cathodic circulating antigen\" (CCA), e uma seqüência da fase de leitura aberta do clone ET03. Estes peptídeos, produzidos por síntese química, foram denominados P1, P2, P3, P4, P5, P6 e P7. Em seguida, os peptídeos foram testados isoladamente contra \"pool\" de soros humanos positivos e negativos. Após vários testes, os peptídeos P1, P2, P3, P6 e P7, que apresentaram imunorreatividade quando ensaiados por método imunoenzimático, foram usados na padronização de um método imunoenzimático de ELISA, utilizando placas Costar 3590, que passou a ser denominado ELISA-Peptídeo (ELISA-Pp). Este método foi avaliado empregando-se 192 amostras de soro, divididas em quatro grupos: (A) 23 amostras de soro, coletadas de pacientes residentes no Nordeste do Brasil, portadores de esquistossomose aguda, com ovos de S. mansoni nas fezes; (B) 30 amostras de soro, coletadas de pacientes residentes no Norte do Brasil, portadores de esquistossomose crônica, com ovos de S. mansoni nas fezes; (C) 39 amostras de soro, coletadas de indivíduos residentes no Norte do Brasil, portadores de outras parasitoses, mas não esquistossomose; (D) 100 amostras de soro, coletadas de indivíduos residentes em Campinas-SP, negativos pelo exame coproparasitológico. Os resultados obtidos foram analisados comparativamente com os encontrados por outras metodologias imunodiagnósticas: reação de imunofluorescência indireta para detecção de anticorpos IgM contra tubo digestivo de verme (RIF-IgM), método imunoenzimático para detecção de anticorpos IgM contra antígenos polissacarídeos (ELISA-IgM) ou anticorpos IgG contra extrato total de vermes (ELISA-IgG). A sensibilidade do ELISA-Pp foi de 86,6%, quando avaliado frente a soros de pacientes que apresentaram ovos de S. mansoni nas fezes e de 79,3%, considerando como esquistossomótico aqueles pacientes com sorologia positiva pelos métodos de RIFI-IgM e ELISA-IgM. A especificidade do ELISA-Pp foi de 94,2% e 94,7%, respectivamente, considerando como grupo controle, não esquistossomótico, indivíduos com resultado de exame parasitológico de fezes negativo para ovos de S. mansoni ou indivíduos com sorologia negativa pelo ELISA-IgM e RIFI-IgM. O valor preditivo positivo apresentado pelo ELISA-Pp foi de 85,2% enquanto para os outros métodos sorológicos variou de 63,4% a 78,6%. O valor preditivo negativo do ELISA-Pp foi em média 3% inferior aos obtidos pelos outros métodos sorológicos. Comparando-se os resultados obtidos pelo ELISA-Pp com os dos outros métodos sorológicos, melhor concordância foi demonstrada com os resultados do ELISA-IgM (Índice Kappa=0,75). Os índices de reatividade para detecção de anticorpos IgG e IgM foram significantemente maiores (P < 0,05) nos pacientes com esquistossomose aguda (grupo A) do que crônica (grupo B). No presente estudo, ELISA-Pp demonstrou bom desempenho (eficácia diagnóstica = 81,0%), entretanto novos estudos são necessários para avaliação de sua aplicabilidade em inquéritos soroepidemiológicos. / Based on algorithms of hidrophilicity and flexibility, obtained by the use of the ProtScale software, disposable at the site http://au.expasy.org/cgi-bin/protscale.pl, seven potentially antigenic peptides were selected from different Schistosoma mansoni proteins: cathepsin B (Sm31), heat shock protein (SmHSP-70), cathodic circulating antigen (CCA) and the polypeptidic sequence of the open reading frame (ORF) of the ET-03 clone. The peptides were produced by chemical synthesis and denominated as P1, P2, P3, P4, P5, P6 and P7. These were independently tested against two pools of human sera, one positive and one negative for schistosomiasis. The peptides P1, P2, P3, P6 and P7, that presented better reactivity when assayed by an immunoenzymatic method, were chosen to be used as antigen for the standardization of an ELISA method, by utilizing Costar 3590 micro plates, and it was called Peptide-ELISA (Pp-ELISA). This method was evaluated on 192 serum samples, divided in four groups: (A) 23 samples from patients with acute schistosomiasis and positive for S. mansoni eggs in fecal examination, who were living in a Brazilian Northeast state; (B) 30 samples from patients with chronic schistosomiasis and positive for S. mansoni eggs, who were living in a Brazilian North state; (C) 39 samples from individuals with other parasite infection, but no schistosomiasis, living in a Brazilian North state; (D) 100 samples from clinically healthy individuals who presented negative results for coproparasitologic method, living in Campinas, São Paulo State. The serological data obtained by Pp-ELISA were comparatively analyzed with the results obtained by other immunodiagnostic methods: immunofluorescence test for detection of IgM antibodies against gut associated antigens (IgM-IFT); ELISA for detection of IgM antibodies against gut associated polysaccharide antigens (IgM-ELISA) or for detection of IgG antibodies against worm crude antigens (IgG-ELISA). The sensitivity of Pp-ELISA was of 86,6%, considering as schistossomiasis patients only the ones who presented S. mansoni eggs in stool examination, and 79,3%, when a serological criterion was used for definition of schistosomiaisis patients, with positive results for both IgM-IFT and IgM-ELISA. The specificity of the Pp-ELISA was respectively 94,2% or 94,7%, considering as control group, without schistosomiasis, S. mansoni egg negative individuals in stool examination or serologically negative individuals by both tests, IgM-IFT and IgM-ELISA. The positive predictive value for Pp-ELISA was 85,2%, while for the other serologic methods varied from 63,4% to 78,6%. The negative predictive value for Pp-ELISA was as a rule 3% lower than the indices obtained for other serologic methods. When the results of Pp-ELISA were compared with the ones obtained by other serologic methods, better concordance was demonstrated with IgM-ELISA (Kappa indice = 0,75). The reactivity indices for detection of IgG and IgM antibodies were significantly higher (P < 0,05) in acute (group A) than chronic schistosomiasis patients (group B). In this study the Pp-ELISA presented a good performance (Diagnostic efficacy = 81,0%), however further studies must be necessary for evaluation of its applicability on seroepidemiologic surveys.

No indivíduo adulto, a angiogênese ocorre particularmente em situações patológicas como nos tumores em crescimento, no desenvolvimento de metástases e no processo de cicatrização, sendo o fator de crescimento do endotélio vascular (VEGF) o principal fator envolvido na angiogênese tumoral. Por essa razão, o presente estudo teve como objetivo avaliar os níveis circulantes de VEGF no soro de cães com sarcoma de tecidos moles e sua relação com as células sanguineas, comparados com um grupo de animais sem câncer (controle), a expressão do VEGF e a densidade de microvasos nos espécimes tumorais dos cães com sarcoma de tecidos moles. O grupo controle foi composto de 30 cães machos e o grupo de animais com sarcoma de tecidos moles foi de 25 cães (18 machos e 7 fêmeas castradas) os quais foram avaliados prospectivamente. A coleta sangüínea foi realizada apenas uma vez no grupo controle e em três tempos nos animais com sarcoma (pré-operatório, duas semanas e três meses de pós-operatório) da mesma maneira. Após a colheita o sangue foi processado, para extração do soro e determinação dos níveis de VEGF a partir de um método quantitativo ELISA (enzime-linked immunosorbent assay). A expressão do VEGF e a densidade de microvasos foi investigada por meio da prova de imunoistoquiímica utilizando-se anticorpos anti-VEGF e anti-fator VIII respectivemente. Não houve diferença entre o nível sérico de VEGF dos animais controles e portadores de sarcoma de tecidos moles no tempo pré-operatório. O nível de VEGF sérico no pré-operatório mostrou-se discretamente aumentado em relação a duas semanas e três meses de pós-operatório. Houve correlação positiva entre VEGF sérico e contagem neutrófilos e correlação negativa entre o VEGF e quantidade de hemoglobina nos animais com sarcoma. Houve uma tendência dos animais com hemangiopericitoma apresentarem níveis maiores de VEGF sérico em relação aos portadores de tumor maligno da bainha neural periférica. Houve expressão do VEGF em 65% dos casos, sendo o hemangiopericitoma aquele que expressou maior quantidade de VEGF intratumoral. Não houve diferença na densidade de microvasos entre os tumores negativos e positivos ao VEGF. Os resultados encontrados sugerem contribuição das células do sangue circulante para os níveis de VEGF do soro de cães portadores de sarcomas de tecidos moles, células tumorais e outros tipos celulares parecem ser responsáveis pela angiogênese tumoral, mas não contribuem para elevação da concentração sérica desse fator. / In adult individual, angiogenesis occurs particularly in pathological situations as tumors growth, development of metastasis and in the wound healing process. The vascular endothelial growth factor (VEGF) is the main agent involved in tumor angiogenesis. Therefore, the aim of the present study was to evaluate the circulating levels of VEGF in the serum of dogs suffering from soft tissue sarcoma and its relation with the blood cells, and also the expression of VEGF and the micro vascular density in tumors specimens. A group of health animals was used as control. The control group and treatment group were composed of 30 male dogs 25 dogs (18 males and 7 castrated females) respectively. The blood collection was carried once in the control group and three times in the animals with sarcoma (timely, pre-surgery, two weeks and three months post-surgery) following the same protocol. The blood was processed and a quantitative method ELISA (enzime-linked immunosorbent assay) was used to determinate of the levels of VEGF. The expression of the VEGF and the microvascular density were investigated by means of the immunohistochemical test using anti-VEGF and anti-factor VIII antibodies respectively. There was no difference between serum level of VEGF of the controls animals and serum level of VEGF in the animal with soft tissue sarcoma in pre-surgical time. Serum level of VEGF in pre-surgical time revealed discrete increased in relation the two weeks and three months of post-surgery. There was a positive correlation between serum VEGF and neutrophils counting and negative correlation between the VEGF and amount of haemoglobin in the animals with sarcoma. The animals with hemangiopericytoma showed a trend to higher levels of VEGF in relation to the malignant peripheral nerve sheath tumor. The expression of the VEGF was detected in 65% of the cases; the hemangiopericytoma is the one that expressed greater intratumoral amount of VEGF. There was no difference in the microvascular density between the negative and positive tumors to the VEGF. The results suggest contribution of the circulating blood cells for the levels of serum VEGF of the of the dogs with of soft tissue sarcomas, tumors cells and other cells types seem to be responsible for tumor angiogenesis, but they don\'t contribute for rise serum level of VEGF.

As fraturas dos ossos longos são geralmente provocadas por esforços dinâmicos de impacto (choque). O esclarecimento do comportamento de ossos submetidos a testes controlados de impacto pode representar um aprofundamento no conhecimento geral sobre as questões que envolvem a ocorrência das fraturas. Os testes de impacto são, de modo geral, realizados por meio de uma máquina especificamente desenvolvida, provida de um martelo pendular que incide sobre corpos de prova do material testado. Porém, as máquinas de impacto disponíveis no mercado são projetadas para ensaiar materiais com dimensões definidas de acordo com a norma relativa ao tipo de material, que não são adaptadas para materiais biológicos. Os materiais biológicos são em geral anisotrópicos, o que impede a confecção de corpos de prova com formas e dimensões rigorosamente padronizadas, como acontece com os materiais não biológicos. Desta forma, uma máquina de ensaio de impacto para materiais biológicos deve ser, necessariamente, especificamente desenvolvida para essa finalidade, com a principal característica de que os apoios dos corpos de prova possam ser mudados de forma e posição conforme as necessidades de cada material em teste. Foi o objetivo deste trabalho, projetar, construir e testar, comparativamente a outra máquina comercialmente disponível, uma máquina de ensaio de impacto especificamente destinada a materiais biológicos, com possibilidade de variação dos vãos entre os apoios dos corpos de prova, o que flexibiliza o ensaio de acordo com as características de cada material. / Fractures of long bones are generally caused by dynamic impact loads (shock). Studying clearing the behaviour of bones submitted to controlled impact tests may contribute to deepen the general knowledge on the phenomena involving the event of fractures. The impact tests are usually carried out with a specially designed machine, provided with a pendulum hammer which strikes on specimens of the tested material. However, the commercially available impact testing machines are designed for isotropic materials, of definite shape and dimensions according to standards specific for each material, which are not adapted for biologic materials. The biologic materials are in general anisotropic by nature, what prevents the construction of test pieces with rigorously standardised shape and dimensions, as it happens with non-biological materials. Therefore, especially designed impact testing machine should be developed for this purpose. lts a main characteristic would be that the test pieces supports can be changed and moved, to adapt to their shapes and dimensions. The design, development and test of as impact testing machine specifically designed for bone, comparing it to another conmercially available machine, was the aim of this work machine developed enables the variation of the distance between the test piece supports, which allows to carry out tests according to the physical characteristics of any test piece.

O ensaio turbidimétrico tem como princípio a redução da densidade óptica em suspensões microbianas, decorrente o incremento na concentração do antibiótico. No ensaio convencional trabalha-se com tubos de ensaio que demandam longo tempo para visualização da resposta. Assim, o método empregando microplacas com leitura cinética para a dosagem de antibióticos é de interesse considerável, uma vez que possibilita reduzir quantidade de material e tempo de análise necessários e permite o ensaio de grande número de amostras simultaneamente, com leitura e cálculo automatizado. O objetivo deste trabalho é desenvolver o método de doseamento microbiológico de vancomicina empregando microplacas e modo de leitura cinético, assim como validar o método desenvolvido, através da avaliação dos parâmetros de especificidade e seletividade, linearidade, faixa ou intervalo linear, exatidão e precisão. Adicionalmente foi contemplado desenvolvimento paralelo entre o método convencional e o cinético, de forma a permitir respaldo positivo quanto à validação. Sendo assim, através do estudo dos parâmetros de validação do método cinético, trabalhou-se em condições estabelecidas abrangendo curva-padrão de vancomicina com concentrações entre 0,6 e 1,0 &#181;g/mL, e emprego de meio de cultura caldo de caseína-soja inoculado com Bacillus subtilis (ATCC 6633) na proporção de 5%. Foram obtidos resultados satisfatórios em 5 horas de incubação. Conclui-se que o ensaio em microplacas permite avaliar, com vantagens, a atividade do antibiótico frente ao microrganismo-teste, permitindo facilidade operacional e maior rapidez na obtenção dos resultados. / The principle of the turbidimetric assay is to reduce the optical density of microbial suspensions, due to the increase in the concentration of antibiotic. In the conventional test works with tubes that require long time to display the answer. Thus, the method using microplates with kinetic reading for the dosage of antibiotics is of considerable interest, since it allows possible to reduce the amount of material and analysis time required and allows for testing of large numbers of samples simultaneously, with automated reading and calculating. The aim of this work is to develop the method of microbiological assay of vancomycin using microplates and kinetic reading mode, and to validate the method developed by evaluating the parameters of specificity and selectivity, linearity, linear range, accuracy and precision. Also included was the parallel development between the conventional method and the kinetic, to enable positive support for the validation. Thus, by studying the validation parameters of the kinetic method, worked under conditions laid down covering vancomycin standard curve with concentrations between 0.6 and 1.0 mg / mL, and soybean-casein broth inoculated with 5% of Bacillus subtilis (ATCC 6633). Satisfactory results were obtained with 5 hours incubation. In conclusion, the microplate assay allows to evaluate, with advantages, the activity of the antibiotic against the microorganism, allowing greater operational ease and rapidity of obtaining results.

INTRODUÇÃO: Apesar de ser a droga de primeira escolha na prevenção da hemorragia pós-parto, o uso da ocitocina em cesarianas permanece empírico. O objetivo deste estudo foi dosar a ocitocina sérica após a administração profilática de diferentes regimes de ocitocina em pacientes submetidas à cesariana eletiva. MÉTODOS: 30 pacientes que se apresentaram para cesariana eletiva foram randomizadas para receber ocitocina intravenosa, após o clampeamento do cordão umbilical, nos seguintes grupos: G1 (n=9): 10 UI de ocitocina infundidas em 30 minutos (0,33 UI/min), G2 (n=11): 10 UI de ocitocina infundidas em 3 minutos e 45 segundos (2,67 UI/min) e G3 (n=10): 80 UI de ocitocina infundidas em 30 minutos (2,67 UI/min). Este estudo foi encoberto para as pacientes e para os cirurgiões. A avaliação do tono uterino foi realizada pela equipe cirúrgica e a dosagem da concentração sérica de ocitocina foi feita pela técnica de enzimoimunoensaio (ELISA), antes da anestesia (T0) e nos tempos 5 (T5), 30 (T30) e 60 (T60) minutos após o início da infusão da ocitocina. RESULTADOS: Os níveis de ocitocina sérica (média ± erro padrão, ng/mL) foram semelhantes entre os grupos em T0 (0,062 ± 0,021; 0,039 ± 0,019 e 0,067 ± 0,041; respectivamente, p = 0,76) e em T60 (0,648 ± 0,257; 0,356 ± 0,257 e 0,683 ± 0,257; respectivamente, p = 0,58). G3 apresentou níveis maiores de ocitocina que G1 em T5 (3,651 ± 0,741 versus 0,709 ± 0,268; p = 0,01). Em T30, G3 apresentou níveis de ocitocina sérica maiores que G1 (6,190 ± 1,195 versus 1,174 ± 0,375; p < 0,01) e, também, que G2 (6,190 ± 1,195 versus 0,411 ± 0,206; p < 0,01). Os parâmetros hemodinâmicos foram semelhantes entre os grupos. O tono uterino foi considerado satisfatório em todos os intervalos estudados e não houve a necessidade de utilização de uterotônico complementar. CONCLUSÃO: Foram demonstradas dosagens séricas de ocitocina por ELISA em gestantes submetidas à cesariana eletiva. A administração de 80 UI de ocitocina em 30 minutos resulta em níveis séricos de ocitocina maiores que os outros dois métodos de administração aos 5 e 30 minutos, porém, estas concentrações não diferem aos 60 minutos / BACKGROUND: The use of oxytocin to prevent postpartum hemorrhage after elective cesarean delivery still remains empirical. The purpose of this study was to determine oxytocin serum levels following differents regimens of prophylactic oxytocin administration in pregnant women undergoing elective cesarean delivery. METHODS: 30 healthy pregnant patients were randomized to receive intravenous oxytocin, after clamping of the umbilical cord, into the following groups: G1 (n=9), 10 IU of oxytocin infused over 30 minutes (0.33 IU/min); G2 (n=11), 10 IU of oxytocin infused over 3 minutes and 45 seconds (2.67 IU/min) and G3 (n=10), 80 IU of oxytocin infused over 30 minutes (2.67 IU/min). Both patient and surgeon were blinded to the study group allocation. Uterine tone was assessed by palpation by the surgeon. Serum oxytocin concentration was determined by enzyme immunoassay (EIA) before anesthesia (T0) and at 5 (T5), 30 (T30) and 60 (T60) minutes following the start of oxytocin infusion. RESULTS: Serum oxytocin levels (mean ± standard error, ng/mL) were similar in the groups at T0 (0.062 ± 0.021, 0.039 ± 0.019 and 0.067 ± 0.041, respectively, P = 0.76), and T60 (0.648 ± 0.257, 0.356 ± 0.257 and 0.683 ± 0.257, respectively, P = 0.58). G3 presented higher serum oxytocin than G1 at T5 (3.651 ± 0.741 versus 0.709 ± 0.268, P = 0.01). At T30, serum oxytocin levels of G3 were higher than G1 (6.190 ± 1.195 versus 1.174 ± 0.375, P < 0.01) and also than G2 (6.190 ± 1.195 versus 0.411 ± 0.206, P < 0.01). Hemodynamic data were similar in all groups. Uterine tone was considered satisfactory in all intervals studied and no additional uterotonic agent was needed. CONCLUSION: We demonstrate serum oxytocin determinations by EIA in healthy pregnant women presented for elective cesarean delivery. Administering 80 IU in 30 min results in higher serum oxytocin levels at 5 and 30 min than the other two methods of oxytocin administration, but the concentrations did not differ at 60 min

O presente estudo teve por objetivo avaliar o desempenho do Teste do Cometa em confronto com métodos convencionais de avaliação de frescor e qualidade higiênica e sanitária de filés de Tilápia (Oreochromis niloticus - LINNAEUS, 1758) refrigerados, durante a vida útil comercial, correlacionando os seus resultados com aqueles obtidos nas análises físico-químicas, microbiológicas e sensorial. As análises foram realizadas nos dias zero - cinco - nove - 12 - 14 pós-processamento dos filés. Em cada dia de estudo foram processados três filés diferentes, pertencentes ao mesmo lote de produto. O protocolo foi repetido em três momentos diferentes, completando 45 amostras. Nos resultados encontrou-se no dia zero e no quinto dia útil do produto, condições impróprias para consumo com relação aos microrganismos psicrotróficos e mesófilos, respectivamente, e o tipo de cometa predominante foi o tipo 3. Aos nove dias de vida útil dos filés, a média dos parâmetros Trimetilamina, Odor e Intenção de Compra indicavam produto impróprio e no teste do cometa predomina o tipo 5. Aos 12 dias de vida útil dos filés de Tilápia, refrigerados, bases voláteis nitrogenadas totais e textura obtiveram resultados impróprios, enquanto que a aparência se revelou imprópria a partir do 14º dia. Concluiu-se que o teste do cometa se presta para o estudo de vida útil de filés de Tilápia refrigerados e apresentou correlação com os métodos convencionais de avaliação de frescor e qualidade higiênica e sanitária do pescado. A partir do 9º dia de estudo predominavam cometas do tipo 5, indicativos do grau máximo de dano celular e fragmentação de DNA das células, pelo teste do cometa, o que coincidiu com a rejeição da Intenção de Compra na análise sensorial. / The present study aimed to evaluate the performance of the Comet assay in comparison with conventional methods of assessing freshness and hygienic and sanitary quality of chilled Tilapia (Oreochromis niloticus - Linnaeus, 1758) fillets, over the shelf-life, correlating their results with those obtained in the physical-chemical, microbiological and sensory. The analyzes were performed on days zero - 5 - 9 - 12 - 14 post-processing of the fillets. In each study day were processed three different fillets, belonging to the same batch of product. The protocol was repeated at three different times, completing 45 samples. The results showed that at the zero and fifth day of the product, improper conditions for consumption, with respect to psychrotrophic and mesophilic microorganisms, respectively, and the predominant type of comet was the type 3. At nine days of the fillets shelf-life, the average of the parameters trimethylamine, odor and purchase intent indicate improper product, and at the comet assay predominate type 5. At 12 days of the shelf-life of chilled tilapia fillets, total volatile basic nitrogen and texture results obtained improper conditions, while appearance showed improper at the 14th day. It was concluded that the comet assay lends itself to the study of shelf-life of chilled tilapia fillets and correlated with conventional methods of assessing freshness and hygienic and sanitary qualities of fishery. From the 9th day of study, predominated comets type 5, indicative of maximum degree of cell damage and DNA fragmentation of the cells by the comet assay, which coincided with the rejection of Purchase Intent at sensory analysis.

O presente estudo teve como objetivo o estabelecimento de um método citogenotoxico, o ensaio cometa, adaptado às células meristemáticas provenientes de raízes de propágulos de mangue da espécie Rhizophora mangle para utilização em estudos sobre genotoxicidade em ambientes marinhos. Foram testados dois tipos de germinação de raízes, quatro diferentes soluções de extração de núcleos, duas soluções de lise e o não uso da lise, dois períodos de exposição à lise, dois períodos de relaxamento, dois períodos de eletroforese e a interação de duas condições de lise com dois diferentes tempos de relaxamento. A validação de método foi realizada através da exposição de núcleos a quatro diferentes concentrações de peróxido de hidrogênio. Os resultados mostraram que é possível a obtenção de cometas com núcleos extraídos de propágulos de Rhizophora mangle e que a validação de método apresenta uma relação concentração dependente entre o índice de dano de núcleos e a concentração do agente genotoxico testado. Os melhores parâmetros utilizados para obtenção de cometas através do método por nós adaptado são: PBS ou solução salina 12&#8240; como solução de extração, exposição à lise alcalina iônica por 60 minutos, 5 minutos de relaxamento e eletroforese em tampão pH>13, 0,8V/cm, 230mA por 20 minutos a 4&#186;C. / This study aimed to establish a citogenotoxic method, the comet assay, adapted to the meristematic cells from propagule roots of red mangrove, Rhizophora mangle, for use in studies of genotoxicity in marine environments. Experiments were carried out to test two ways of root germination, four different nuclei extraction solutions, two lysis solutions and without lysis, two periods of exposure to lysis, two periods of unwinding, two periods of electrophoresis and the interaction of two lysis conditions with two different times of unwinding. Experiments on validation of the method were performed by exposing the nuclei to four different concentrations of hydrogen peroxide. The results showed that it is possible to obtain comets with nuclei extracted from the root of propagules of Rhizophora mangle and the validation data showed a dose-dependent relationship between the damage index and the concentration of the genotoxic agent tested. The best parameters to obtain comets using the method adapted by us are: PBS or saline 12&#8240; as extraction solution, exposure to alkaline lysis for 60 minutes, 5 minutes of unwinding and electrophoresis in buffer pH> 13, 0,8V/cm, 230mA for 20 min at 4&#186;C.

Os equinos são animais que, quando adultos, apresentam elevado peso corpóreo e ossos bastante resistentes para sustentar esse peso. Dessa forma, para que ocorra fratura nos ossos do cavalo é necessário um trauma de elevada energia resultando em fraturas cominutivas, que podem formar falhas ósseas impedindo o contato entre os fragmentos ósseos, o que compromete a estabilidade e resistência da osteossíntese. Devido à complexidade desse tipo de fraturas e aos implantes disponíveis apresentarem baixa resistência para o uso nessa espécie e devido a seu comportamento, o tratamento de fraturas em equinos apresenta baixos índices de sucesso. Dessa maneira, o uso de um material osteocondutor com resistência mecânica para o preenchimento dessas falhas poderia elevar a resistência da osteossíntese, levando a melhores índices de sucesso na correção dessas fraturas. O presente estudo teve como objetivo a avaliação biomecânica em laboratório de dois biomateriais substitutos ósseos no preenchimento de falha óssea. Para isso foram utilizados 30 ossos terceiro metacarpiano de equinos que foram submetidos a osteossíntese com placa LCP em sua face dorsal e criada uma falha óssea transversal completa de um centímetro na diáfise média. Dez dessas peças foram submetidas a ensaios biomecânicos não destrutivos até a carga de 1000N, onde foram avaliadas a rigidez, as deformações da peça inteira, da placa e do osso individualmente em diferentes regiões. As outras 20 dessas peças foram submetidas a ensaios destrutivos, onde foram avaliadas a carga e deformação suportada no limite elástico e no ponto de ruptura. Dessa forma, pôde-se observar que houve aumento na rigidez de 699,39N/mm para 2905,38N/mm e 4274,93N/mm devido ao preenchimento da falha com poliuretana de mamona e quitosana, respectivamente. A peça inteira teve sua deformação diminuída de 1,73mm para 0,5mm e 0,35 com carga de 1000N, devido ao preenchimento da falha com poliuretana de mamona e quitosana, respectivamente. A placa teve sua deformação diminuída de 2260,64&micro;d para 320,25&micro;d pelo preenchimento da falha com poliuretana de mamona e para 89,88&micro;d com o preenchimento com quitosana durante a aplicação de 1000N. O osso próximo à falha sofreu maiores deformações tanto com poliuretana de mamona quanto com quitosana, contudo não apresentou maiores deformações em região distante da falha. A peça inteira teve aumento da carga suportada em seu limite elástico de 1008N para 8804N apenas com o preenchimento da falha com quitosana. A peça inteira teve sua deformação diminuída de 1,64mm para 1,26 no limite elástico apenas devido ao preenchimento da falha poliuretana de mamona. A peça inteira teve aumento da força suportada no momento de ruptura de 1660N para 15187N e 11012N com o preenchimento da falha com poliuretana de mamona e quitosana, respectivamente. A peça inteira teve sua deformação máxima no ponto de ruptura diminuída de 5,4mm para 2,16mm apenas com o preenchimento da falha com quitosana. / Adult horses are heavy animals equipped with bones strong enough to support their body weight. High energy trauma is required to produce comminuted fractures, where bone loss may prevent proper fracture reduction and compromise osteosynthesis resistance and stability. In horses, aside from behavioural issues, low success rates associated with comminuted fracture resolution may be due to the complexity of such fractures or the low resistance of bone implants. Therefore, osteoconductive biomaterials with good mechanical resistance would potentially benefit treatment outcomes. This ex vivo study evaluated the biomechanical behaviour of two bone surrogate biomaterials in experimental third metacarpal fractures in horses. Thirty equine third metacarpal bone specimens were submitted to dorsal LCP (locking compression plate) osteosynthesis following creation of a transverse 1 cm wide middiaphiseal defect. Defects were filled either with Ricinus communis polyurethane or calcium phosphate cement-chitosan composite. Ten specimens were submitted to non-destructive biomechanical testing under 1000N maximum load; construct stiffness, construct deformation and isolated deformation of LCP and third metacarpal bone in different regions were evaluated. The remaining 20 specimens were submitted to destructive biomechanical testing; maximum load and deformation within the elastic limit, and to failure were documented. Bone defect repair with RCP or CPC-chitosan composite increased construct stiffness from 699,39N/mm to 2905.38N/mm and 4274.93N/mm and decreased construct deformation under 1000N from 1.73mm to 0,5mm and 0.35 respectively. LCP deformation under 1000N decreased from 2260.64d to 320.25&micro;d and from 2260.64&micro;d to 89.88d following filling of the bone defect with RCP or CPC-chitosan composite respectively. Bone deformation around the defect increased following treatment with RCP or CPC-chitosan composite. However bone deformation away from the defect remained unchanged. Maximum load within the elastic limit increased from 1008N to 8804N when the experimental defect was filled with chitosan composite. Conversely, construct deformation within the elastic limit decreased from 1.64mm to 1.26mm following treatment with RCP. Maximum load to construct failure increased from 1660N to 15187N and 11012N following bone defect repair with RCP or calcium phosphate cement-chitosan composite respectively. However, construct maximum deformation decreased from 5.4mm to 2.16mm when calcium phosphate cement-chitosan composite was used.

O aproveitamento de dejetos industriais como fonte de insumos, apresenta além da vantagem econômica pelo uso de materiais de baixo valor comercial, um forte apelo ambiental. A presença de grande produção de resíduos orgânicos em abatedouros, como as penas de frango, leva à necessidade do desenvolvimento de tecnologias que possibilitem a sua reciclagem. As penas se constituem como os materiais queratinosos mais abundantes na natureza, e por isso, podem ser usados como material de partida para diferentes aplicações biotecnológicas, químicas e farmacêuticas. Existem na literatura vários métodos de extração de queratina das penas de frango, como as extrações por hidrólises ácidas e alcalinas, que além da desvantagem da hidrólise total da proteína, rompem também os sítios principais de reação de crosslinkings da proteína. Outros procedimentos envolvem o uso de grandes concentrações de reagentes onerosos, como o 2-mercaptoetanol e as enzimas proteolíticas. Estudo realizado por planejamento fatorial visou à extração e fragmentação da queratina, através da combinação de diferentes concentrações de sulfito de sódio, uréia e papaína. Ensaios preliminares de modificação da queratina foram conduzidos após esta extração. Temperaturas acima de 80°C, e concentrações intermediárias de uréia (3,75M) combinadas a baixas concentrações de sulfito de sódio (0,1M - 0,18M) foram os melhores parâmetros de extração. A hidrólise enzimática apresentou-se adequada somente quando combinada ao prévio tratamento químico. A combinação dos dois processos extrativos resultou em redução do tempo de reação da hidrólise enzimática. A queratina obtida apresentava tamanho de fragmentos homogêneos, ao redor de 650nm, e um grau de pureza de 72%-89% em massa seca de proteína purificada. A caracterização físico-química dos derivados da queratina demonstra a amplitude desta proteína como insumo para aplicações diversas. O estudo da inserção de grupamentos polares na molécula de queratina é feita por análise da solubilidade em diferentes solventes e por espectroscopia vibracional Raman. / The use of industrial wastes as a source of raw materials presents, besides the cost-effective advantages, an eco-friendly approach. Great amount of feather waste discharged from slaughterhouses demands the development of biotechnological alternatives for its recycling. Feather is the most keratinous material in nature and may be used for different applications in biotechnology, pharmaceutical and chemical industry. Several authors have written methods for feather keratin extraction, as acid and alkaline hydrolysis. Those methods presented disadvantages like damage to the backbone protein chain and loss of its main function as well as loss of cross linking groups. Other chemical treatments require large amounts of expensive reagents such as 2-mercaptoethanol and proteolytic enzymes. The present work comprises a factorial planning for extraction and fragmentation of feather keratin by combining sodium sulfide (0,1M 0,26M), urea (2M- 6M) and papain (0,13mg/ml). Feather keratin modification assay was conducted after protein extraction. The experiment presented satisfactory results when temperature extraction is maintained around 80° C, urea is used in an intermediate concentration (3,75M) and sodium sulfide in a low concentration(0,1M- 0,18M). Enzymatic hydrolysis is viable only after previous chemistry extraction. The combination of both treatment types resulted in a decrease of enzymatic time reaction and therefore an optimized keratin production. Extracted feather keratin presented homogenous size fragments with most particle diameters around 650nm. The percentage of proteins found was around 72%-89% compared to the total dry weight. The physicochemical characterization of feather keratin derivatives bring this protein of interest as a potencial component to renewable raw materials synthesis. Modification analysis of feather keratin was carried by qualitative solubility evaluation and vibrational spectrometry Raman.