Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2017-02-20T21:12:47Z No. of bitstreams: 1 MonicaDeOliveiraRochaAmorim_DISSERT.pdf: 1554706 bytes, checksum: 76ac024cb167786309761c3cbfd2fe87 (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2017-02-22T23:59:38Z (GMT) No. of bitstreams: 1 MonicaDeOliveiraRochaAmorim_DISSERT.pdf: 1554706 bytes, checksum: 76ac024cb167786309761c3cbfd2fe87 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-22T23:59:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MonicaDeOliveiraRochaAmorim_DISSERT.pdf: 1554706 bytes, checksum: 76ac024cb167786309761c3cbfd2fe87 (MD5) Previous issue date: 2016-09-30 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico (CNPq) / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior (CAPES) / O estado do Rio Grande do Norte possui uma grande diversidade de esp?cies de macroalgas marinhas fornecedores de compostos com grande potencial farmacol?gico e biotecnol?gico. Dentre eles destacam-se os polissacar?deos sulfatados. Polissacar?deos que cont?mL-fucose sulfatada s?o muitas vezes denominados de fucanas. A alga marrom Spatoglossumschr?ederi sintetiza tr?s fucanas e aquela que ? obtida em maior quantidadefoi denominada de fucana A. A produ??o de nanopart?culas de prata contendo biopol?meros naturais tem sido apontada como uma excelente alternativa para potencializar ou fornecer novas aplicabilidades aos mesmos, pois estes apresentam propriedades farmacol?gicas que podem ser potencializadas se aliadas ? nanotecnologia. A fucana A n?o se mostroucitot?xica para diferentes linhagens de c?lulas normais, nem tampouco ? t?xico para ratos quando administrado em altas doses. Ademais, apresentou baixa toxicidade para c?lulas tumorais. Com intuito de potencializar a toxicidade da fucana Afrente ?s linhagens tumorais, nanopart?culas de prata contendo este polissacar?deo foram sintetizadas por um m?todo verde (pouco agressivo ao meio ambiente). Estas nanopart?culas apresentaram um tamanho m?dio de 210 nm e formato arredondado, bem como,uma carga superficial negativa e foram est?veis por quatorze meses. Quando incubadas com c?lulas, estas nanopart?culas n?o apresentaram citotoxicidade para diferentes linhagens de c?lulas normais, mas diminu?ram a viabilidade de v?rias linhagens de c?lulas tumorais (786-0, HepG2, Siha), principalmente c?lulas de adenocarcinoma de renal 786-0. An?lises por fluoresc?ncia e de citometria de fluxo sugerem que as nanopart?culas induzem necrose nas c?lulas 786-0. Por outro lado, as nanoparticulas n?o foram toxicas para c?lulas renais normais (HEK, VERO, MDCK). Os dados aqui mostrados levam a conclus?o de que as nanopart?culas com fucana A s?o promissores agentes para combate de adenocarcinoma renal.

O câncer de pulmão é a neoplasia maligna mais insidiosa da oncologia, sendo responsável pelo maior número de mortes relacionadas ao câncer no mundo. Oitenta e cinco por cento dos casos de câncer de pulmão são de não-pequenas células (CPNPC), onde sua maioria é adenocarcinoma. Apesar dos progressos nas pesquisas em câncer, o prognóstico de pacientes em estágios avançados permanece ruim, portanto faz-se necessária o desenvolvimento de novas abordagens terapêuticas. Nesse trabalho, focamos no metabolismo energético tumoral, o qual apresenta alto consumo de glicose e liberação de lactato mesmo na presença de oxigênio, o chamado Efeito Warburg. Outras vias metabólicas também encontram-se alteradas, processo conhecido como reprogramação metabólica. Dessa forma, o objetivo desse trabalho é buscar possíveis marcadores tumorais e alvos terapêuticos envolvidos no metabolismo energético, através de uma abordagem que começa na bioinformática, de forma a prospectar candidatos a partir de uma vasta gama de genes envolvidos com o metabolismo. Foram selecionados os genes IDH1, LDHA e PYGB a partir de uma análise de enriquecimento gênico, os quais foram submetidos a análises de sobrevida em bancos de dados de microarranjo. Em seguida, o nível de expressão das proteínas IDH1 e LDHA foi avaliado por imunohistoquímica em uma coorte clínica, onde pudemos observar um aumento na expressão de IDH1 em tumores em relação a tecidos pulmonares sadios. Ainda, em modelo celular, observamos que ambas as proteínas estavam aumentadas em células tumorais de adenocarcinoma pulmonar em relação a células sadias de pulmão. Ao combinar o inibidor de LDHA, oxamato, com cisplatina na linhagem de adenocarcinoma pulmonar A549, foi observado uma interação de sinergismo e, na linhagem pulmonar sadia NHBE, foi observado um antagonismo, de forma que essa abordagem se mostra promissora na terapêutica. Já ao combinar o inibidor de IDH1, oxalomalato, com cisplatina na linhagem A549, foi observado um antagonismo. Assim, esse estudo demonstrou um possível papel de biomarcador para adenocarcinoma pulmonar para a enzima IDH1 e um possível papel terapêutico para a enzima LDHA.

O adenocarcinoma ductal pancreático (ADP) é uma doença altamente letal e agressiva. Alteração no perfil de acetilação das histonas envolvendo desacetilases de histonas (HDAC), assim como modificações da expressão de miRNAs podem levar ao desenvolvimento tumoral. Neste estudo, foi avaliada a expressão das HDAC1, HDAC2, HDAC3 e HDAC7 em ADP e amostras de tecido pancreático não tumoral (TN) usando análises experimentais e de banco de dados. Os níveis de expressão foram correlacionados com características clínico-patológicas dos pacientes e foi realizada uma investigação in silico de miRNAs reguladores de efeito das HDACs. Os níveis de expressão das HDACs foram avaliadas por qRT-PCR a partir de 25 amostras de ADP e 23 amostras de TN e a análise da expressão diferencial (ED) e correlação entre HDACs e miRNAs em ADP foi realizada utilizando perfis de expressão de seis microarranjos do Gene Expression Omnibus. Potenciais relações miRNA-HDACs foram coletadas em bases de dados de interação de miRNAs. Um valor de P<0,05 foi considerado estatisticamente significativo. Encontramos expressão reduzida em ADP comparado com TN para todas as HDACs analisadas, com P<0,05 para HDAC1, 2 e 3. Entretanto, os fold-changes foram muito baixos e provavelmente sem relevância biológica, e a expressão da HDAC2 e HDAC7 foi correlacionada com a idade ao diagnóstico. Nenhuma outra correlação entre a expressão das HDACs e características clínico-patológicas foi identificada. Análises de ED sugeriram significativa superexpressão das HDAC1, 2 e 7 e subexpressão da HDAC3, contudo todas apresentaram fold-changes pequenos. As análises dos bancos de dados identificaram 728 miRNAs como reguladores das HDACs. Interseções entre os conjuntos de miRNAs (GSE41369 e GSE43796) e aqueles recuperados da análise de expressão diferencial indicaram cinco miRNAs que influenciam a HDAC1 (miR-188-5p, miR-539, miR-708, miR -4269 e miR-3616-3p) e três que influenciam a HDAC2 (miR-4307, miR-944 e miR-195). A expressão das HDACs provavelmente não é um biomarcador de prognóstico robusto para o ADP, uma vez que a expressão diferencial entre os grupos é sutil. Ainda, este e estudos anteriores indicam nenhuma ou pouca associação entre a expressão HDACs e características clínico-patológicas relacionadas com o prognóstico. Finalmente, miRNAs provavelmente não estão exercendo um papel central na regulação da HDACs no ADP. / Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) is a highly lethal and aggressive disease. The disruption of histone acetylation through histones deacetylases (HDACs) and expression regulation by miRNAs can lead to tumor development. In this study we assessed HDAC1, HDAC2, HDAC3 and HDAC7 expression in PDAC and non-tumoral tissue (NT) samples using experimental and databases analysis, correlated their expression levels with clinical and pathological features in patients and performed in silico investigation of HDACs regulation by miRNAs. Expression levels of HDACs were measured by qRT-PCR from 25 PDAC and 23 NT. An analysis of differential expression (DE) and correlation of HDACs and miRNAs in PDAC was performed using six Gene Expression Omnibus microarray datasets. Potential miRNA-HDACs relationships were collected from miRNA interaction databases. A P<0.05 was considered statistically significant. We found reduced expression in PDAC compared with NT for HDAC1, HDAC2 and HDAC3, with P<0.05. Expression levels of HDAC7 did not significantly differ between groups. However, fold-changes were very small and probably not biologically relevant. Only HDAC2 and HDAC7 were associated with age at diagnosis and no other associations between HDAC expression and clinical features were identified. DE analysis suggested significant up-regulation of HDAC1, HDAC2 and HDAC7, and down-regulation of HDAC3, albeit all of them associated with small fold changes. Databases analysis identified 728 miRNAs that could be HDACs regulators. Intersections among the set of miRNAs found in differential expression analysis of GSE41369 and GSE43796 and those retrieved from target prediction identified five miRNAs targeting HDAC1 (miR-188-5p, miR-539, miR-708, miR-4269 and miR-3616-3p) and three targeting HDAC2 (miR-4307, miR-944 and miR-195). HDACs expression is likely not a robust prognostic biomarker in PDAC since differential expression between groups is subtle. Also, this and previous studies indicate no or only very few associations between HDACs expression and clinicopathological features related to prognosis. Finally, miRNAs are probably not exerting a central role in HDAC regulation in PDAC.

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O câncer gástrico é ainda hoje um dos tumores sólidos mais comuns , sendo a segunda causa mais freqüente de morte por doença maligna no mundo. Apesar do aprimoramento da técnica cirúrgica e da utilização de tratamentos multimodais, o câncer gástrico, em geral, ainda permanece com um mau prognóstico. Na maioria dos países a doença é freqüentemente diagnosticada após ter invadido a camada muscular própria do órgão, estágio no qual a sobrevida média em cinco anos é inferior a 20%. Como a maioria dos tumores humanos, o câncer gástrico é uma doença multifatorial, que se desenvolve em indivíduos geneticamente suscetíveis expostos a agentes carcinogênicos externos. Ultimamente, diversos oncogenes e genes supressores tumorais vêm sendo estudados na tentativa de esclarecer detalhadamente a carcinogênese gástrica. Her-2/Neu ou CerbB-2 e EGFR são oncogenes da família Her ou erb de receptores de fatores de crescimento. Ambos têm se mostrado com expressão aumentada em diversas neoplasias e possuem anticorpos monoclonais específicos como potencial forma de tratamento adjuvante. Em relação ao câncer gástrico, as prevalências destes oncogenes são bastante variáveis na literatura. O objetivo deste estudo foi determinar as prevalências de Her-2/Neu e EGFR na mucosa gástrica de pacientes com adenocarcinoma de estômago. Foram estudados 37 casos com avaliação de expressão imunohistoquímica de Her-2/neu e EGFR em amostras teciduais fixadas em formalina e armazenadas em parafina. Dois casos demonstraram expressão aumentada de Her-2/Neu, correspondendo a 5,4%. Nenhum caso demonstrou aumento da expressão de EGFR. Os autores concluem que a ausência da expressão do EGFR na amostra estaria mais relacionada a uma dificuldade encontrada de trabalhar com o anticorpo do que a real ausência de expressão do oncogene no câncer gástrico. Também sugerem que, apesar da baixa prevalência do Her-2/Neu na amostra, e devido à pouca resposta dos tumores gástricos às terapias hoje disponíveis, os anticorpos monoclonais específicos anti-Her deveriam ser futuramente testados nos indivíduos Her positivos, em ensaios clínicos randomizados.

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O carcinoma colorretal, dentre os tumores malignos, é a terceira causa de morte no mundo ocidental. A localização retal da doença gira em torno de 25 a 30% dos casos. No Brasil, ocupa a quarta posição em número de casos incidentes. Os melhores fatores prognósticos dependem da avaliação histopatológica (TNM ou Dukes e modificações) reforçando a necessidade de se investigar fatores prognósticos efetivos ainda na fase pré-operatória. Estudos anteriores demonstraram que a assinatura digital obtida a partir de peças cirúrgicas claramente caracterizava o adenocarcinoma de reto e que esta assinatura guardava valor prognóstico independente para desfechos clínicos. O presente estudo avaliou a hipótese de a assinatura digital e a assinatura nuclear média de biópsias de lesões histologicamente caracterizadas como adenocarcinoma de reto serem representativas das peças cirúrgicas dos tumores correspondentes permitindo sua utilização já na fase pré-operatória. Foram analisados 7113 núcleos obtidos das peças cirúrgicas de 51 casos de adenocarcinoma primário de reto, de biópsias colonoscópicas correspondentes e de 22 controles (tecido de reto normal) pertencentes ao banco de dados atualizado do grupo de pesquisa de Cirurgia Oncológica Gastrointestinal (Southern Surgical Oncology Group; COG/SSOG) do Programa de Pós-Graduação em Medicina: Ciências Cirúrgicas da Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Porto Alegre. A partir deste banco, os dados foram analisados nos seguintes grupos: biópsias colonoscópicas (biópsias), peças cirúrgicas correspondentes a estas biópsias (peças cirúrgicas das biópsias), todas as peças cirúrgicas do banco original (peças cirúrgicas do banco) e controles normais (controles). Na análise das principais características da assinatura digital do adenocarcinoma de reto, o grupo biópsias foi estatisticamente diferente do grupo controle, área (p= 0,012), DOT (p= 0,000) e granularidade (p= 0,03); assim como para a assinatura nuclear média (10,09 vs 0,864; p= 0,000). Quando a assinatura digital do grupo biópsias foi comparada com a do grupo peças cirúrgicas das biópsias, não houve diferença estatística nas características DOT (p= 0,11) e granularidade (p= 0,47) enquanto a avaliação pelo TEP (tamanho do efeito padronizado) não mostrou nenhuma diferença estatística nas três características estudadas. Na comparação do grupo biópsias com o grupo peças cirúrgicas do banco, as características área e DOT diferiram estatisticamente (área p= 0,00 e DOT p= 0,01). No entanto, nenhuma diferença estatisticamente significativa foi observada na comparação das assinaturas nucleares médias. O estudo demonstrou que biópsias colonoscópicas de adenocarcinoma de reto são diferentes, pela análise da assinatura digital e seus componentes, de tecido de reto normal. Ao mesmo tempo, pelas mesmas variáveis, guardam relação com as peças cirúrgicas de onde foram extraídas bem como com aquelas constituintes do banco de dados original podendo ser utilizadas na fase pré-operatória como fator prognóstico adicional para melhor determinar conduta no tratamento do câncer primário de reto. / The colorectal carcinoma is one of the most common malignant tumors in the western world, being the third cause of death in these continents and showing the rectal site in approximately 25% to 30% of the cases. The best prognostic factors for rectal tumors depend on the histopathologic evaluation (TNM or Dukes and its modifications) reinforcing the need for searching effective prognostic factors in the preoperative stage yet. Our previous studies have demonstrated that digital signature, obtained from surgical specimens, has shown independent prognostic value for clinical outcomes and depicted nuclear area, total optic density (OD) and clumpness as the main characteristics of this signature. In this study we attempted to demonstrate that the digital signature of preoperative colonoscopic tumor biopsies would resemble the digital signature of surgical specimen counterparts, i. e., from resected tumors where those biopsies were taken from. High-resolution imagery of 7113 nuclei was digitally recorded from 22 biopsy samples of normal rectal tissues and from 51 surgical specimens of rectal cancer (including 12 biopsy samples counterparts). The three main characteristics (area, optical density and clumpness) descriptive of the spatial and statistical distribution of nuclear texture for rectal cancer were computed for each nucleus according to TICAS system for cell identification. From this database tumor biopsies (biopsy), biopsy surgical specimen counterparts (biopsy specimen), surgical specimens of the whole database bank (surgical specimen) and normal rectal biopsies (controls) were compared. Digital signature and average nuclear signature (P= 0.000) of the tumor biopsy group were significantly different from controls. When nuclear characteristics and digital signatures were compared between the biopsy and the biopsy specimen groups, the OD and clumpness characteristics (P= 0.11; P= 0.47) as well as the standardized difference (effect-size) have not shown any statistical difference. Also, when comparing the average nuclear signatures of the surgical specimen group with the tumor biopsy group no statistical difference was observed. Considering these results it can be assumed that nuclear characteristics of the digital signatures and the average nuclear signatures of biopsies, histologically characterized as rectal cancer, can consistently represent the surgical specimen counterparts and can be used as an additional preoperative prognostic factor aiming to better define treatment approach on rectal cancer.