Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2011. / Submitted by Shayane Marques Zica (marquacizh@uol.com.br) on 2011-10-28T20:13:03Z No. of bitstreams: 1 2011_PriscilaFernandaCremerFrancisco.pdf: 886835 bytes, checksum: 4647699cae064b8d3cc7c115bcfe27a0 (MD5) / Approved for entry into archive by Camila Mendes(camila@bce.unb.br) on 2011-10-31T19:40:11Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_PriscilaFernandaCremerFrancisco.pdf: 886835 bytes, checksum: 4647699cae064b8d3cc7c115bcfe27a0 (MD5) / Made available in DSpace on 2011-10-31T19:40:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_PriscilaFernandaCremerFrancisco.pdf: 886835 bytes, checksum: 4647699cae064b8d3cc7c115bcfe27a0 (MD5) / O Mato Grosso do Sul é reconhecido como estado livre da febre aftosa com vacinação. A manutenção e credibilidade desta condição sanitária dependem da existência de um sistema de vigilância eficiente, no qual se inclui a notificação regular de suspeitas de enfermidades vesiculares. No entanto, o número de notificações é muito baixo no Estado tornando difícil a avaliação da sensibilidade do sistema de vigilância. O presente trabalho teve como objetivo identificar fatores que determinam a qualidade e quantidade de notificações de doenças vesiculares no Mato Grosso do Sul, sobretudo aqueles relacionados à percepção dos atores sociais participantes do processo. Inicialmente, realizaram-se 19 entrevistas exploratórias, com perguntas abertas, dirigidas a funcionários de frigoríficos e do IAGRO, a funcionários de lojas veterinárias, a propriedades rurais, a assentamentos e a veterinários particulares, as quais foram submetidas à análise lexical pelo software Alceste. Os resultados obtidos fundamentaram a elaboração de um questionário que serviu de base a um inquérito por amostragem envolvendo os municípios de Rio Verde de Mato Grosso, Três Lagoas, Dourados, Eldorado e Ponta Porã. A análise lexical revelou que os entrevistados conhecem os sinais clínicos da doença, mas tendem a procurar terceiros antes de notificar algum evento suspeito. A maioria compreende também a rápida difusão e impacto econômico da febre aftosa. Os pecuaristas reconhecem competência ao serviço veterinário oficial, mas julgam que faltam meios de ação à defesa sanitária do Estado. Os resultados do inquérito comprovam que o conhecimento sobre a doença está associado ao grau de escolaridade. A falta de conhecimento sobre diagnósticos diferenciais contribui para que a frequência de notificação de suspeita seja baixa. Ficou evidente o papel chave que o veterinário particular pode ter em uma notificação de suspeita, já que os pecuaristas e seus funcionários tendem a procurá-los antes de chamar o serviço veterinário oficial. Os produtores rurais entendem que a vigilância de febre aftosa é papel das autoridades públicas, não reconhecendo a sua própria importância como sensor do sistema. Em conclusão, o Sistema de Vigilância da Febre Aftosa deve aumentar a frequência de notificações de suspeitas de doenças vesiculares, melhorando a conscientização e participação de produtores, trabalhadores rurais e veterinários quanto à importância de manter níveis altos de alerta, aprimorando a compreensão do processo de notificação e os registros das ações tomadas. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Mato Grosso do Sul state is recognized as free of foot-and-mouth disease (FMD) with vaccination. The maintenance of the health status and credibility depends upon the existence of an efficient surveillance system, which includes the regular reporting of suspected cases of vesicular diseases. However, the number of notifications in the state is very low making it difficult to assess the sensitivity of the surveillance system. This study aimed at identifying factors that influence the quality and quantity of reports of vesicular diseases in Mato Grosso do Sul, especially those related to the perception of social actors participating in the process. Initially, there were 19 interviews with open questions, targeted at employees of slaughterhouses, veterinary administration (IAGRO), staff of veterinary retail shops, farmers, settlements and private veterinarians. The interviews were transcribed and processed through lexical analysis, using the software Alceste. These results guided the development of a questionnaire that was the basis of a sample survey involving the counties of Rio Verde de Mato Grosso, Três Lagoas, Dourados, Ponta Porã and Eldorado. The lexical analysis revealed that the respondents know the clinical signs of the disease, but tend to look for third parties before notifying any suspicious event to the veterinary administration. Most of them understand the rapid spread and economic impact of FMD. Farmers recognize the competence of the veterinary service, but they believe that the veterinary administration has insufficient means of action. The survey results showed that knowledge about the disease increases with education level. The lack of knowledge about differential diagnosis contributes to the low frequency of reporting. These results confirm the key role that the private veterinarian can have in a reporting a suspect case, because the farmers and their employees tend to look for the professionals before notifying the veterinary service. Farmers do not fully recognize their important role as sensors of the surveillance system, as they tend to perceive it has a public task. In conclusion, the surveillance system of FMD should increase the frequency of reports of suspected vesicular diseases by improving the awareness of farmers, farm workers and veterinarians as to the importance of maintaining high levels of alert, improving the understanding of the process of reporting and the recording of actions undertaken.

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario. Tesis para optar al Grado de Magíster en Ciencias Animales y Veterinarias. / La fiebre aftosa (FA) es considerada una de las enfermedades transfronterizas más importantes de los animales de abasto, debido a las grandes pérdidas económicas que genera en los sistemas productivos. El objetivo de este estudio es caracterizar epidemiológica y económicamente el impacto de la reintroducción del virus de la FA en Chile, bajo dos estrategias de control diferentes, con el fin de servir como material de apoyo fundamental en los procesos de toma de decisiones sobre las medidas de control más adecuadas y eficientes para enfrentar una emergencia sanitaria. La metodología de trabajo se divide en dos fases. La primera comprende la evaluación epidemiológica de la reintroducción del virus, mediante la utilización de simulaciones computacionales de brotes de FA y, en la segunda se evaluó el impacto económico que tal hecho tendría sobre la economía del país. Los resultados indicaron que la estrategia de sacrificio sanitario junto con la aplicación de vacunas presentó valores estadísticamente menores de duración en semanas (3,66) y número de brotes reportados (4,32), en comparación con la estrategia de sacrificio sanitario sin vacunación (3,89 y 4,46). La estimación de los costos bajo los dos escenarios, afirmó la idea de que la estrategia de aplicar vacunas antiaftosa resulta menos eficiente, en términos económicos, que la estrategia de sacrificio sanitario sin esta medida. Los costos estimados para el escenario con vacunación ascendieron a $36.355.396.120,73 pesos chilenos, y para el escenario sin vacunación estos fueron de $20.707.858.630,51. En ambos casos, los mayores costos fueron representados por los ingresos no percibidos debido al cierre de los mercados internacionales (95,92 y 96,01% respectivamente) / Foot and Mouth Disease (FMD) is considered to be one of the most important cross-border diseases affecting livestock, due to the large economic losses that it generates in the productive systems. The purpose of this study is to characterize, both epidemiologically and economically, the impact of the reintroduction of FMD virus into Chile, under two different control strategies, with the aim of being useful as basic support material when deciding which control measure is the most efficient and appropriate one when dealing with a sanitary emergency. The methodology is divided in two phases. The first one covers the epidemiologic assessment of the reintroduction of the virus, by using computer FMD outbreak simulations, and the second one covers the economic impact that such situation would cause on the economy of the country. The results indicate that the stamping out with vaccination strategy showed statistically lower values of duration in weeks (3.66) and number of reported outbreaks (4.32), compared to those from the stamping out without vaccionation (3.89 y 4.46). The estimation of the costs under both scenarios, confirmed the idea that the anti-FMD vaccination strategy is less efficient, in economic terms, than the stamping out without the use of vaccines. The estimated costs for the with vaccination scenario rose to $36,355,396,120.73 Chilean pesos, and for the without vaccination the costs were $20,707,858,630.51. In both cases, the greater costs were represented by the unperceived incomes, due to the closing of international markets (95.92 and 96.01% respectively)

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2010. / Submitted by Fernanda Weschenfelder (nandaweschenfelder@gmail.com) on 2010-11-09T16:35:12Z No. of bitstreams: 1 2010_MarinaKarinadeVeigaCDelphino.pdf: 1231919 bytes, checksum: f255a451bb45c656736fc9872f12d26b (MD5) / Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2010-12-01T22:33:35Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_MarinaKarinadeVeigaCDelphino.pdf: 1231919 bytes, checksum: f255a451bb45c656736fc9872f12d26b (MD5) / Made available in DSpace on 2010-12-01T22:33:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_MarinaKarinadeVeigaCDelphino.pdf: 1231919 bytes, checksum: f255a451bb45c656736fc9872f12d26b (MD5) / A cadeia produtiva da carne suína vem registrando avanços significativos nos pa-drões sanitários, com consequente aumento nas exportações. No entanto, a febre aftosa ainda limita o acesso a mercados importantes, apesar do último foco em gran-jas suínas ter ocorrido em 1993, de toda a exportação ter origem em zonas livres da doença e de os suínos não serem vacinados no Brasil. Justifica-se, assim, a realiza-ção de um estudo de avaliação de risco, como forma de contribuir para uma discus-são objetiva, transparente e cientificamente fundamentada. O presente trabalho ava-liou o risco de difusão do vírus da febre aftosa em produtos suínos exportados pela região Sul do Brasil. Esta região destaca-se pelo seu potencial na suinocultura na-cional, contribuindo com a maioria do volume exportado, e caracteriza-se pela ca-deia integrada e tecnificada, que tende a baixar os riscos de introdução enfermida-des. Foi desenvolvido um modelo quantitativo estocástico, usando a técnica de a-mostragem de Monte-Carlo. Adotaram-se parâmetros muito pessimistas em todas as etapas do modelo, especialmente onde os dados eram escassos. Em média, o risco de exportar carne suína com origem em uma granja infectada seria de 3,25x10-5, considerando o volume de exportação anual, em torno de 600.000 toneladas. Este resultado é consistente com as evidências epidemiológicas de ausência de atividade viral, já que demonstra que o risco é desprezível. A avaliação permitiu também iden-tificar as hipotéticas portas de ingresso do vírus da febre aftosa na cadeia produtiva e as ações de vigilância necessárias, contribuindo para fundamentar decisões de melhoria dos padrões de biossegurança e da sua documentação, de forma a aumen-tar a confiança dos mercados importadores. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The Brazilian swine industry has experienced important developments with regard to animal health standards, with noticeable impact on exports. Nevertheless, foot-and-mouth disease still limits the access to important markets, despite the fact that the last outbreak in swine farms occurred in 1993, all pork is exported from disease-free zones and, in addition, swine are not vaccinated in Brazil. Therefore, there was a case for undertaking a risk assessment with a view to contribute to an objective, transparent and science-based discussion. The present work undertook a release assessment of the risk of exporting pork from an infected swine farm in the South of Brazil. This region is very important in the Brazilian swine industry, representing most of the exports, and is characterized by an integrated and intensive production sys-tems. It was developed a stochastic quantitative model, based on Monte-Carlo sam-pling. The parameters used in the model, notably were data were scarce, were very conservative, in order to build a worst-case scenario approach. On average, the risk of exporting swine meat from an infected farm, given the annual volume of exports of about 600,000 ton, was 3.25x10-5. This result is consistent with the epidemiological evidence of absence of viral activity, as it demonstrates that the risk is negligible. The model also made it possible to identify the most likely routes for the introduction of foot-and-mouth into the swine production chain, as well as the necessary surveil-lance activities, therefore assisting the decisions on biosecurity measures, including its documentation, in order to improve the confidence of export markets.

El presente estudio tuvo como objetivos determinar el nivel de percepción de los productores hacia las principales enfermedades que pueden afectar a su ganado, así como su carácter zoonótico en zonas rurales de la región Tumbes, como una herramienta para posteriores evaluaciones sanitarias en dicha región. Para ello, se realizaron 240 encuestas distribuidas en 32 comunidades rurales pertenecientes a la región Tumbes, durante los meses de Noviembre a Diciembre del 2012. Las encuestas estuvieron a cargo de profesionales veterinarios quienes previamente recibieron entrenamiento para el desarrollo de las mismas. En relación al nivel de conocimiento de Fiebre Aftosa en el área de estudio, los resultados de la encuesta indicaron que más del 90% de los encuestados mencionaron conocer la enfermedad, en comparación a 5% de los encuestados que no conocen la enfermedad (p<0.05). Asimismo, 77.50% de los encuestados mencionaron haber adquirido conocimiento de la enfermedad mediante programas gubernamentales, mientras que 13.75% mencionaron conocer la enfermedad debido a mensajes de radio y televisión (p<0.05). Por el contrario, los resultados para el nivel de conocimiento de Rabia bovina indicaron que 80.42% de los encuestados no conocen la enfermedad; además únicamente 13.75% de los encuestados mencionaron haber adquirido conocimiento mediante los organismos gubernamentales. Para Carbunco, el nivel de conocimiento de los productores sobre esta enfermedad representó 50.42% y 49.17% no ha escuchado de la enfermedad (p>0.05). Los programas gubernamentales han sido mencionados como fuente de información en un 40% mientras que la radio y televisión han sido reconocidos en 5.83%. Tuberculosis fue reconocida por 30% de los encuestas, mientras que 70% no sabe de la enfermedad (p<0.05). Los programas gubernamentales fueron mencionados por los productores en 25%, mientras que la radio y televisión fueron mencionadas en 6.25% de los encuestados. En relación a la peste porcina, 75.83% sabe de la enfermedad, habiendo sido además escuchado por 70.42% de los encuestados, y por radio o televisión en 9.58%. La brucelosis sólo fue reconocida por 11.25% de los encuestados, así como solamente 8.33% de los encuestados mencionaron a los programas gubernamentales como fuente de información. Finalmente los resultados para el nivel de percepción de Hidatidosis, esta enfermedad únicamente ha sido reconocida por 2.08% de los encuestados. Los programas gubernamentales solo fueron mencionados por 2.92% de los encuestados. Estos resultados nos indican que si bien hay buen conocimiento de los productores por enfermedades como Aftosa y Peste porcina, el nivel de percepción de enfermedades zoonóticas es muy bajo, lo cual puede favorecer a la aparición y/o persistencia de dichas enfermedades en áreas endémicas. / This study aimed to determine the level of awareness of livestock producers to major diseases that can affect their livestock and the zoonotic importance of these diseases in rural areas of the Tumbes Region, as a tool for further health assessments in the region. Briefly, during the months of November to December 2012, 240 surveys were conducted in 32 rural communities belonging to the Tumbes region. Veterinarians previously trained conducted surveys. Regarding the level of knowledge of foot and mouthy Disease, the results of the survey indicated that over 90% of respondents indicated to know about the disease, compared to 5% of respondents who do not know about the disease (p <0.05). Also, 77.50% of the respondents mentioned having acquired knowledge of the disease through government programs, while 13.75% reported awareness of the disease due to radio and television messages (p <0.05). By contrast, the results for the level of knowledge of Bovine Rabies indicated that 80.42% of respondents did not know the disease, as well as 13.75% of respondents mentioned having acquired knowledge by government agencies. For Anthrax, the level of knowledge of farmers about the disease represented 50.42% and 49.17% did not hear about the disease (p> 0.05). Government programs have been mentioned as a source of information by 40% while radio and television have been recognized in 5.83%. Tuberculosis was recognized by 30% of respondents during the survey, while 70% did not know of the disease (p <0.05). Government programs were mentioned by the producers at 25%, while the radio and television were mentioned in 6.25% of the respondents. Regarding to Hog Cholera Disease, 75.83% of respondents knew of the disease, having been well heard by 70.42% of respondents, and radio or television in 9.58%. Brucellosis was recognized by only 11.25% of respondents, and only 8.33% of respondents cited government programs as a source of information. Finally the results for hydatidosis indicated that only 2.08% of respondents knew about the disease, and government programs were mentioned by only 2.92% of respondents. These results indicate that while there is good knowledge of the producers for diseases such as Aphtosa Fever and Swine Fever, the level of awareness of zoonotic diseases is very low, which may favor the onset and / or persistence of the disease in endemic areas. Keywords: Aphtosa Fever, Swine Fever, Anthrax, Brucelosis, Hydatidosis, Tuberculosis

El Servicio Nacional de Sanidad Agropecuaria e Inocuidad Alimentaría y el Programa Nacional de Erradicación de la Fiebre Aftosa (SENASAG-PRONEFA Distrital La Paz),en Junio del 2003 pone en marcha el proyecto “Estrategia Regional para la Declaratoria de Zona Libre de Fiebre Aftosa al Altiplano del Departamento de La Paz” a través de la Oficina Internacional de Epizootias (OIE), que es la institución que certifica dicho estatus sanitario a nivel internacional, habilitando de esta manera a; zonas, regiones y países que obtengan tal certificación a ser participes del mercado externo. Uno de los requisitos que solicita la OIE para este tipo de proyectos, es el de estructurar un sistema de vigilancia epidemiológica actualizado en la zona, región o país que se proponga como libre de fiebre aftosa, el cual es objetivo principal del presente trabajo, en la zona norte del Altiplano Paceño. La actual zona propuesta como libre de fiebre aftosa presenta un índice de pobreza del 90-95% según (La Unidad de Políticas Económicas, 2001), y las tierras de esta área son inaptas para la agricultura, debido a su clima y ecología, pero se identifico un gran potencial para la ganadería Camélida y Ovina. Por las características sanitarias de la zona, en la misma no se presento la fiebre aftosa pero la misma es susceptible a la enfermedad por la presencia de animales que son susceptibles a la misma, siendo de esta manera otras las enfermedades prevalentes de esta zona.

Submitted by Heitor Rapela Medeiros (heitor.rapela@ufpe.br) on 2015-03-05T12:46:10Z No. of bitstreams: 2 TESE FERNANDA MOSSUMEZ FERNANDES TEIXEIRA.pdf: 1317193 bytes, checksum: 791eb599336a9d4f7fa0e42e623b7fca (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-05T12:46:10Z (GMT). No. of bitstreams: 2 TESE FERNANDA MOSSUMEZ FERNANDES TEIXEIRA.pdf: 1317193 bytes, checksum: 791eb599336a9d4f7fa0e42e623b7fca (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2012-03-29 / A estomatite aftóide recorrente (EAR) é uma afecção crônica, a qual se caracteriza por episódios recorrentes de lesões ulcerativas em qualquer região da mucosa oral não queratinizada, como língua, assoalho de boca, mucosa labial, jugal, palato mole e orofaringe. As úlceras podem variar em número, dimensão e localização. O tratamento é controverso, devido à incerteza da etiopatogenia da doença. Com o objetivo de analisar a resposta cicatricial de úlceras jugais à barreira mecânica com um curativo de filme esponjoso de exopolissacarídeo de melaço de cana de açúcar (FEEMCA) foi elaborado um estudo experimental, analítico, comparativo e prospectivo, induzindo-se úlceras na mucosa jugal de 20 coelhos adultos, sadios, entre 2,5kg e 3,9kg, divididos em grupo experimental, coelhos que receberam tratamento com o FEEMCA e grupo controle, coelhos que não receberam tratamento. As úlceras foram induzidas por excisão cirúrgica e avaliadas no 3º, 7º e 11º dias após o tratamento, D3, D7 e D11. A avaliação foi feita por meio da curva ponderal, evolução temporal da área de cicatrização, estudo histológico e análise bacteriológica das úlceras. A curva ponderal e o tempo de cicatrização das úlceras não apresentaram diferença estatística significativa entre os dois grupos. No estudo bacteriológico do leito das ulceras, como na cicatrização das úlceras, não houve diferença estatística significante entre as médias dos grupos. No estudo histopatológico do grupo experimental, observou-se hiperplasia epitelial desde o D3 do tratamento, por outro lado, no grupo controle, houve uma maior desorganização celular desde o D3 até o último dia do acompanhamento do tratamento (D11). Observou-se assim que o filme esponjoso de exopolissacarídeo de melaço de cana de açúcar permanece no leito da úlcera funcionando como uma barreira mecânica e pode ser utilizado como auxiliar na cicatrização no tratamento sintomático das lesões ulceradas de mucosa oral, associando-se sua biocompatibilidade ao baixo custo e simplicidade de aplicação.

Orientadora : Profa. Dra. Vanete Thomaz Soccol / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Tecnologia, Programa de Pós-Graduação em Engenharia de Bioprocessos e Biotecnologia. Defesa: Curitiba, 27/02/2015 / Inclui referências : f.98-108 / Resumo: A febre aftosa é uma doença altamente contagiosa que acomete animais biungulados. Tem distribuição cosmopolita, mas é endêmica na Ásia, África e em alguns países da América do Sul, sendo que o Brasil é considerado zona livre com vacinação. No Brasil o controle epidemiológico da doença é realizado mediante a vacinação e vigilância sanitária sendo necessário diagnóstico diferencial entre animais vacinados de portadores do vírus, para provar a ausência da doença. Desta forma é fundamental o desenvolvimento de testes para diferenciar animais vacinados de doentes e para o controle do processo de produção da vacina. A resposta a anticorpos, contra proteínas não estruturais do vírus, tem sido amplamente utilizada para este propósito, como é o caso do ensaio imuno-enzimático-ELISA/EITB. A proteína 3ABC é uma proteína não estrutural do vírus da febre aftosa e está presente em altos níveis no soro de animais infectados. Visando a diferenciação entre animais doentes e vacinados a proteína ABC deve ser removida durante o processo de produção da vacina, para que o animal imunizado não apresente anticorpos detectáveis contra ela. O objetivo deste estudo foi produzir e caracterizar anticorpos policlonal e monoclonal contra a proteína 3ABC do vírus da febre aftosa, para serem utilizados no desenvolvimento de um teste imunoenzimático que permita monitorar os processos de purificação da vacina, para remover as proteínas não estruturais e controle de qualidade das partidas produzidas visando sua aprovação pelos órgãos fiscalizadores como o Ministério da Agricultura Pecuária e Abastecimento (MAPA). Para a produção dos anticorpos policlonal e monoclonal primeiramente foi produzida a proteína 3ABC recombinante a partir do plasmídeo contendo gene que codifica a proteína 3ABC, já com a mutegênese do gene 3ABC no sítio ativo da protease 3Cpro para sua inativação, produzido por Gonzales, 2013. A produção da proteína foi realizada por fermentação da Escherichia coli recombinante em erlenmeyer de um litro e realizada as etapas de semi purificação (anticorpo policlonal) e ou purificação (anticorpo monoclonal). O anticorpo policlonal, produzido em coelhos, apresentou altos títulos a partir de 75 dias pós-imunização. A puriticação foi realizada por cromatografia de afinidade com proteína G, o que resultou em uma imunoglobulina altamente pura, tornando-a mais específica para a proteína de interesse. Para a produção do anticorpo monoclonal foram imunizados camundongos BALB/c por via intramuscular. A fusão realizada originou 217 colônias de hibridomas, sendo 10 deles positivos no tese ELISA indireto. Após clonagem e expansão dos clones positivos, foi realizado o teste de estabilidade permitindo a seleção de dois clones estáveis. Os anticorpos foram caracterizados pelas metodologias de ELISA e Western Blotting e mostraram alta reatividade contra a proteína 3ABC e podem ser utilizados no desenvolvimento do teste ELISA para o monitoramento dos processos de purificação da vacina contra a febre aftosa. Todos os experimentos foram realizados na empresa Ourofino Saúde Animal. Palavras chave: febre aftosa; proteína 3ABC; anticorpo policlonal anti-3ABC; anticorpo monoclonal anti-3ABC. / Abstract: FMD is a highly contagious disease that affects cloven-hoofed animals and is endemic in Asia, Africa and some countries in South America. In Brazil the epidemiological disease control is achieved by vaccination and health surveillance. For this control is necessary differential diagnosis between vaccinated animals and those carrying the virus, to prove the absence of the disease. Thus it is important to develop tests to differentiate vaccinated animals from sick animals. The antibody response against nonstructural proteins of the virus, have been widely used for this purpose, such as the enzyme-immunoassay ELISA / EITB. The 3ABC is a nonstructural protein of FMD virus and it is present in high levels in infected animals serum. It is necessary to be removed during vaccine production, so the immunized animal does not produce detectable antibodies against them. The aim of this study was to produce and characterize polyclonal and monoclonal antibodies against the 3ABC protein of FMD virus, for their use to develop an enzymatic immunoassay experiments. Such experiments will allows the monitoring of the vaccine purification processes, which removes non-structural proteins and also the quality control process of the produced batches for approval by regulatory agencies such as the Ministry of Agriculture Livestock and Supply (MAPA). In this study, the plasmid to heterologous protein 3ABC production was produced by GONZALEZ, 2013. The expression has been optimized for subsequent production of polyclonal and monoclonal antibodies. For animal's immunization, either rabbit or mouse, the protein used was the semi purified protein. And for the monoclonal antibody screening tests, the protein used was the purified protein. The purification in this stage was due to the need of a specific test to select the monoclonal antibody which is also highly specific. The polyclonal antibody produced in rabbits, showed high titers from 75 days post-immunization. The large amount of polyclonal antibody obtained enabled the using of affinity chromatography using protein G, as a purification method, which resulted in a highly pure immunoglobulin, making it more specific to the protein of interest. For the production of monoclonal antibody (Mabs) BALB/c Mice were immunized intramuscularly. The fusion carried out originated 217 hybridomas colonies, 10 of them were positives for antibody production by ELISA test. After cloning and expansion of positive clones, stability tests were performed wich allowed the selection of two stable clones. The antibodies were characterized by ELISA and Western Blotting approaches. The mabs obteined showed high reactivity against 3ABC protein and as a result they can be used in the development of an ELISA assay to monitor the purification processes of the vaccine against FMD. All experiments were performed in Ourofino Animal Health Company. Key-words: FMD; 3ABC protein; polyclonal anti-3ABC; monoclonal anti-3ABC.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2016-11-03T13:53:07Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 664018 bytes, checksum: e3743e1d181dd4da20fc02f450f2313d (MD5) / Made available in DSpace on 2016-11-03T13:53:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 664018 bytes, checksum: e3743e1d181dd4da20fc02f450f2313d (MD5) Previous issue date: 2004-12-03 / O Programa Nacional de Erradicação da Febre Aftosa foi implantado em 1992, com vistas em erradicar essa doença do Brasil. Os benefícios diretos foram evitar perdas produtivas, registrada principalmente na bovinocultura, e retirar barreiras sanitárias que impactavam, diretamente, as exportações de produtos de origem pecuária, em especial, a carne bovina in natura. Com o propósito de identificar a viabilidade do Programa, medir riscos inerentes a esse processo e identificar o rumo desta política pública, foi realizada a análise custo-benefício econômica, utilizando o software @risk, versão 3.5. Observou-se, no caso brasileiro, que os benefícios de perdas produtivas evitadas na bovinocultura de corte e leiteira e na suinocultura não pagam a erradicação da febre aftosa, o que faz com que as exportações de carne bovina in natura sejam variáveis que determinam a viabilidade do Programa. Portanto, verificou-se que a erradicação da febre aftosa foi viável em quatro dos cinco cenários-erradicação propostos neste trabalho. A análise de sensibilidade ratifica a importância das variáveis de exportação para o resultado final do Programa. No entanto, à medida que o cenário se tornava menos otimista, a busca pela eficiência dos custos do Programa tornava-se essencial, quando comparada às variáveis de exportação. De acordo com o registro do modelo, o atraso na suspensão da vacinação reduzia, significativamente, o resultado final do Programa, e o atraso no acesso ao Pacific Rim ou a variação da cota cedida por esse mercado pouco o impactavam. Na simulação Latin Hypercube verificou-se que, nos três cenários mais otimistas, não havia riscos inerentes ao processo de erradicação; no Cenário 4, no qual se previu elevada queda na demanda mundial de carne bovina in natura, esse risco era baixo; por fim, no cenário menos otimista, o risco era alto. Concluiu-se que a implementação do Programa apresentou benefícios expressivos e de baixo risco, razão de ser aconselhável a manutenção deste. Contudo, problemas relativos à efetivação do Programa nos Circuitos Pecuários Norte e Nordeste devem ser equacionados, para que os benefícios econômicos sejam apropriados de forma sustentável, no longo prazo. / The National Program of Foot and Mouth Disease's Eradication was implanted in 1992 with the purpose of eliminate that disease from Brazil. The direct benefits intended went to avoid the productive losses, mainly, for the bovine livestock and to remove sanitary barriers that impact directly the products' exportation from cattle origin, especially, the in natura bovine meat. With the purpose of identifying the viability of the Program, measuring risks inherent to that process, as well as identifying the direction in which such a public politics is taking, the economical cost-benefit analysis was accomplished with the use of the software @risk, version 3.5. It was observed, in the brazilian case, that the benefits for productive losses avoided in the bovine meat, pig meat and dairy systems don't pay the foot and mouth disease eradication, turning the in natura bovine meat exportation as the variable that determine the viability of the Program. Therefore, it was identified that the foot and mouth disease eradication is viable in four of five scenery-eradication proposed by that work. The sensibility analysis ratifies the importance of the export variables for the result of the Program. However, as the scenery becomes less optimistic, the search for the cost-efficiency is turning more important when compared to the export variables. In agreement with the model, the delay in the suspension of the vaccination reduces the result of the Program significantly, as well as the delay in the access to Pacific Rim or the variation of the quota in that market has a little impact in the same. In the Latin Hypercube simulation, it was verified that in the three more optimistic sceneries, the risks doesn't exist in eradication process. In the Scenery 4, where high fall was foreseen in in natura bovine meat world demand, the risk is low and, finally, in the less optimistic scenery, the risk is high. The conclusion is that the benefits of the implementation of the Program are high, and de risk is low, being advisable the maintenance of this. However, problems of the Program in the North Cattle Circuits and Northeast should be resolved if the maintainable economic benefits are appropriate in a long term. / Dissertação importada do Alexandria

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:23Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-05-27. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:25:27Z : No. of bitstreams: 1 Publico-00268a.pdf: 1567152 bytes, checksum: edde41fc5183eb2ec3800911222b1493 (MD5). Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:25:27Z : No. of bitstreams: 2 Publico-00268a.pdf: 1567152 bytes, checksum: edde41fc5183eb2ec3800911222b1493 (MD5) Publico-00268b.pdf: 2029279 bytes, checksum: 0ce31c253ab625a6b402e5c0b4abffe0 (MD5) / O vírus da febre aftosa (FMDV), um patógeno que afeta animais no mundo todo, possui um RNA genômico de fita simples que, após infectar a célula, é imediatamente traduzido numa única poliproteína. Esta poliproteína produzida é processada durante a síntese em várias proteínas maduras através de peptidases codificadas pelo próprio vírus. A primeira clivagem da poliproteína viral é realizada pela Lbpro entre sua própria região C-terminal e a região N-terminal da proteína VP4. Lbpro também cliva especificamente dois homólogos dos fatores eucarióticos de iniciação (eIF) 4G, resultando na supressão da translação proteica do hospedeiro realizadas através dos mRNAs cap-dependentes. Consequentemente, o RNA do FMDV, que inicia a tradução via IRES, e não requer o eIF4G intacto, pode usar livremente a maquinaria de síntese protéica do hospedeiro para tradução viral. Nós usamos uma série de peptídeos fluorogênicos desenhados especificamente para examinar a especificidade por substratos, efeitos do pH e força iônica sobre a atividade catalítica da Lbpro e sua mutante sLbpro. Comparadas com outras cisteínos peptidases, como a papaína e catepsinas, Lbpro e sLbpro possuem muitas caracteríticas únicas como alta sensibilidade à sais e um sítio de ligação ao substrato muito específico, extendendo-se até a posição P7. Análises de dados estruturais mostraram que Lbpro liga os resíduos P1-P3 do substrato em uma conformação extendida, enquanto os resíduos P4-P7 são ligados numa curta hélice 310. A especificidade da Lbpro, revelada através dos peptídios substituídos pode ser explicada para todas as posições, exceto para P5. / Foot-and-mouth disease virus (FMDV), a global animal pathogen, possesses a single-stranded RNA genome that, on release into the infected cell, is immediately translated into a single polyprotein. This polyprotein product is cleaved during synthesis by proteinases contained within it into the mature viral proteins. The first cleavage is performed by the leader protease (Lbpro) between its own C-terminus and the N-terminus of VP4. Lbpro also specifically cleaves the two homologues of the cellular eukaryotic initiation factor (eIF) 4G, resulting in shut-off of host capdependent mRNA translation. Consequently, FMDV RNA, which initiates translation via IRES, and does not require intact eIF4G, can freely use the host protein synthesis machinery for viral protein synthesis. We used a panel of specifically designed fluorogenic peptides to examine the substrate specificity, effects of pH and ionic strength on Lbpro activity and of its shorter mutant sLbpro. Compared with other cysteine peptidases, how papain and the cathepsins, Lbpro and sLbpro possesses several unusual characteristics, including a high sensitivity to salt and a very specific substrate binding site extending up to P7. Indeed, almost all substitutions investigated were detrimental to Lbpro and sLbpro activity. Analysis of structural data showed that Lbpro binds residues P1 to P3 in an extended conformation whereas residues P4 to P7 are bound in a short 310 helix. The specificity of Lbpro as revealed by the substituted peptides could be explained for all positions except P5. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Orientador: Clarice Weis Arns, Marvin J. Grubman / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-04T00:20:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Caron_Luizinho_D.pdf: 1219328 bytes, checksum: a478f21f170a75258c560038bbb4da1e (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: A febre aftosa é uma das doenças mais temidas nos rebanhos em todo o mundo. A vacinação tem sido uma arma eficiente no controle da doença, no entanto há preocupações com as vacinas atualmente utilizadas incluindo a necessidade de instalações de alta segurança para a produção dessas vacinas e a falta de um teste de diagnóstico aprovado que faça distinção precisa entre animais vacinados. Varias vacinas têm sido testadas contra a febre aftosa e uma dessas utiliza como vetor um vírus defectivo para replicação, derivado do adenovírus humano tipo 5 (Ad5), o qual contém as proteínas que compõe capsídeo do vírus da febre aftosa (P1-2A) e a protease 3C que protegeu suínos completamente contra o desafio de uma cepa homóloga (A12 e A24). Uma vacina com o Ad5-P1-2A+3C proveniente da cepa O1 Campos (Ad5-O1C), induziu um baixo título de anticorpos neutralizantes específicos em testes de potência vacinal em suínos. O fator estimulante de colônia de granulócitos e macrófagos (GM-CSF) tem sido utilizado com sucesso na formulação de vacinas para estimular a resposta imune contra inúmeras doenças, incluindo HIV, Hepatite C e B entre outros. Na tentativa de melhorar a resposta imune específica contra a febre aftosa induzida pelo Ad5-O1C, suínos foram vacinados com Ad5-O1C juntamente com Ad5-pGM-CSF. Entretanto, nas condições utilizadas nesse teste, o uso do Ad5 expressando o gene do pGM-CSF (fator estimulante de colônia de granulócitos e macrófagos de suíno) não melhorou a resposta imune do Ad5-O1C e adversamente afetou o nível de proteção de suínos desafiados com o vírus homólogo da febre aftosa / Abstract: Foot-and-mouth disease (FMD) is one of the most feared diseases of livestock worldwide. Vaccination has been a very effective weapon in controlling the disease, however a number of concerns with the current vaccine including the inability of approved diagnostic tests to reliably distinguish vaccinated from infected animals and the need for high containment facilities for vaccine production, have limited its use during outbreaks in countries previously free of the disease. A number of FMD vaccine candidates have been tested and a replication-defective human adenovirus type 5 (Ad5) vector containing the FMDV capsid (P1-2A) and 3C protease coding regions has been shown to completely protect pigs against challenge with the homologous virus (FMDV A12 and A24). An Ad5-P1-2A+3C vaccine for FMDV O1 Campos (Ad5-O1C), however, only induced a low FMDV-specific neutralizing antibody response in swine potency tests. Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF) has been successfully used to stimulate the immune response in vaccine formulations against a number of diseases, including HIV, hepatitis C and B etc. To attempt to improve the FMDV-specific immune response induced by Ad5-O1C, we inoculated swine with Ad5-O1C and an Ad5 vector containing the gene for porcine GM-CSF. However, in the conditions used in this trial, pGM-CSF did not improve the immune response to Ad5-O1C and adversely affected the level of protection of swine challenged with homologous FMDV / Doutorado / Microbiologia / Doutor em Genetica e Biologia Molecular