Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia de Fungos, Algas e Plantas, Florianópolis, 2017. / Made available in DSpace on 2017-12-05T03:15:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 348347.pdf: 10142061 bytes, checksum: 99e104989d902adf873de038d62a247f (MD5) Previous issue date: 2017 / O gênero Agaricus é monofilético e possui ampla distribuição com mais de 400 espécies descritas. Os cogumelos desse gênero são caracterizados pelas lamelas livres, inicialmente de coloração branca, depois rosada e finalmente marrom com a maturação dos esporos, presença de anel e crescimento no solo. Embora o gênero seja facilmente reconhecido em campo, a identificação de espécies é difícil devido à falta de caracteres morfológicos e às variações intraespecíficas. Foram analisadas sequências de DNA das regiões ITS, LSU e tef-1a de 73 espécimes coletados no domínio Mata Atlântica, nos estados de Paraíba, Espírito Santo, Rio de Janeiro, São Paulo, Paraná, Santa Catarina e Rio Grande do Sul. As análises moleculares e taxonômicas demonstraram a existência de dois novos clados e cinco espécies novas. Mais de 70% das sequências analisadas foram agrupadas em Agaricus subg. Minores nas seções Minores e Laeticolores, e Agaricus subg. Flavoagaricus na seção Arvenses. O restante das sequências foram agrupadas em outras quatro seções: Agaricus; Rarolentes e Subrutilescentes; e Xanthodermatei, representantes dos outros três subgêneros: Agaricus, Spissicaules e Pseudochitonia, respectivamente. A inclusão de novas sequências de espécimes subtropicais, as diferentes relações filogenéticas encontradas entre as seções e os subgêneros, além da descrição de novas espécies reforçam a potencialidade de estudo do gênero Agaricus no Brasil. / Abstract : The genus Agaricus is monophyletic and has a worldwide distribution with more than 400 described species. Mushrooms of the genus are characterized by free lamellae, initially white, then pinkish and finally brown with spore maturation, presence of annulus and growth in the soil. Although the genus is easily recognized in the field, species identification is difficult because the lack of characters and intraspecific variability. ITS, LSU and tef-1a DNA sequences from 73 specimens collected in the Atlantic Rain Forest, in the states of Paraíba, Espírito Santo, Rio de Janeiro, São Paulo, Paraná, Santa Catarina and Rio Grande do Sul were analyzed. Molecular and taxonomic analyzes demonstrated the existence of two new clades and five new species. More than 70% of the analyzed sequences clustered in Agaricus subg. Minores into sections Minores and Laeticolores, and Agaricus subg. Flavoagaricus into section Arvenses. The other specimens clustered into four other sections: Agaricus; Rarolentes and Subrutilescentes; Xanthodermatei, representatives of the other three subgenera: Agaricus, Spissicaules and Pseudochitonia, respectively. The inclusion of new sequences of subtropical specimens, the different phylogenetic relationships found between the sections and the subgenera, and the description of new species reinforce the potentiality of study of the genus Agaricus in Brazil.

Submitted by Fernanda Rodrigues de Lima (fernanda.rlima@ufpe.br) on 2018-07-26T19:43:46Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Valeria Ferreira da Silva Costa Santana.pdf: 752817 bytes, checksum: 775e0249c699e222cc8e47f7e2873e1e (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-07-30T21:55:02Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Valeria Ferreira da Silva Costa Santana.pdf: 752817 bytes, checksum: 775e0249c699e222cc8e47f7e2873e1e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-30T21:55:02Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Valeria Ferreira da Silva Costa Santana.pdf: 752817 bytes, checksum: 775e0249c699e222cc8e47f7e2873e1e (MD5) Previous issue date: 2015-02-26 / FACEPE / Agaricomycetes coletados em várias partes do mundo apresentam substâncias bioativas com atividade antialérgica, antitumoral, antiviral, antioxidante, imunomoduladora, antiteratogênica, hipoglicêmica, antiparasitária, antimicrobiana e imunoprotetora. Além disso, essas substâncias também ajudam o organismo a prevenir o diabetes e a fortalecer o sistema imunológico. Entretanto, poucos são os trabalhos com material coletado no Brasil. Assim, o presente estudo tem por objetivo incrementar o conhecimento sobre o potencial antibacteriano dos Agaricomycetes no país por meio de pesquisa com material coletado no Nordeste do Brasil. Para isso, foi realizado um inventário das espécies depositadas na Micoteca URM da UFPE. Às 32 culturas encontradas, foram acrescidos ao estudo uma cultura ainda a ser depositada e extratos de 11 basidiomas frescos. Dez culturas depositadas na Micoteca URM não puderam ser reativadas. As 23 culturas foram repicadas em meio sólido de extrato de Malte. Das culturas e dos basidiomas, foram obtidos extratos com acetato de etila, etanol e metanol, os quais foram solubilizados na concentração de (1:10 v/v). Os testes preliminares com os 34 materiais (23 culturas e 11 basidiomas frescos) foram realizados contra 11 linhagens de Staphyllococcus aureus, das quais sete resistentes a oxacilina (ORSA), a partir da metodologia de bloco de gelose. Quinze apresentaram atividade antibacteriana, com inibição entre 9–24 mm e concentração mínima inibitória (CMI) de 0,18–147 μg/mL, dentre os quais Fomitopsis cupreorosea (URM 6830), Ganoderma multiplicatum (URM 6975), G. parvulum (URM 2948), Ganoderma sp. (extrato de basidioma fresco), Grammothele lineata (URM 6827), Rigidoporus lineatus (URM 6828), R. microporus (URM 6878), Stereum ostrea (URM 6973) e Stereum ostrea (extrato de basidioma fresco) apresentaram forte inibição contra todas as linhagens de S. aureus testadas. / Agaricomycetes collected in several parts of the world have bioactives substances with anti-allergic, antifungal, anti-inflammatory, antiparasitic, antiviral, antioxidant, cytotoxic, immunomodulatory, antiatherogenic, hepatoprotective, hypoglycemic, antibacterial e imunoprotective. Besides, these substances help the organism to prevent diabetes and to strength the immune system. However, few are the studies with material collected in Brazil. Thus, the current study aimed to improve the knowledge about the antibacterial potential of Agaricomycetes in the country by researching material collected in Northeast Brazil. For this, the inventory of the species deposited in Micoteca URM of UFPE was done and 32 cultures were found. To these, one culture to be deposited and 11 extracts from fresh basidiomata were added to the study. Ten cultures could not be reactivated. The 23 cultures were transferred to solid medium of malt extract. Extracts of the basidiomata and the cultures were obtained with ethyl acetate, ethanol e methanol, which were solubilized at a concentration (1:10 v/v). The preliminary tests with the 34 materials (23 cultures and 11 extracts of fresh basidiomata) were performed against 11 strains of Staphyllococcus aureus, seven of which resistant to oxacilin (ORSA), using block agar. Fifteen showed antibacterial activity, with inhibition between 9–24mm and minimum inhibitory concentration (MIC) from 0.18–147 μg/mL, among which Fomitopsis cupreorosea (URM 6830), Ganoderma multiplicatum (URM 6975), G. parvulum (URM 2948), Gandoerma sp. (extract of fresh basidiomata), Grammothele lineata (URM 6827), Rigidoporus lineatus (URM 6828), R. microporus (URM 6878), Stereum ostrea (URM 6973) and Stereum ostrea (extracs of fresh basidiomata) showed strong inhibition against all strains of S. aureus.

Submitted by Fernanda Rodrigues de Lima (fernanda.rlima@ufpe.br) on 2018-08-06T22:37:04Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSEERTAÇÃO Ana Rafaela Pontes Gomes.pdf: 2889915 bytes, checksum: 70175473bc59d47488124aecef733a79 (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-08-15T19:08:33Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSEERTAÇÃO Ana Rafaela Pontes Gomes.pdf: 2889915 bytes, checksum: 70175473bc59d47488124aecef733a79 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-15T19:08:33Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSEERTAÇÃO Ana Rafaela Pontes Gomes.pdf: 2889915 bytes, checksum: 70175473bc59d47488124aecef733a79 (MD5) Previous issue date: 2017-02-20 / CNPq / Os fungos coprinoides são caracterizados principalmente pelos basidiomas frágeis, píleo de superfície plicada, lamelas deliquescentes a semi-deliquescentes ou colapsadas, basidiósporos com pigmento que varia entre castanho a quase negro, presença de braquibasídios e cistídios nas lamelas, na superfície da pileipelis e também da estipitipelis. O grupo é cosmopolita, e seus representantes podem ser encontrados diretamente no solo, em detritos vegetais e esterco de herbívoros. Todas as espécies com esporada negra e lamelas deliquescentes eram identificadas como Coprinus. No entanto, na década de 90, estudos filogenéticos mostraram que o gênero é polifilético e que a maioria das espécies era similar a Psathyrella. Consequentemente, foram propostos os gêneros Coprinellus, Coprinopsis e Parasola para reclassificar essas espécies. O objetivo desse trabalho é ampliar o conhecimento a respeito do grupo para o Nordeste do Brasil e conhecer a diversidade e riqueza de espécies nas áreas de coleta, localizadas nos estados do Ceará, Paraíba, Pernambuco e Rio Grande do Norte. O estudo contém descrições, ilustrações e discussões de dez espécies: Coprinus xerophilus, Coprinellus disseminatus e Parasola leiocephala, exsicatas revisadas do Herbário Lauro Pires Xavier (JPB) da Universidade Federal da Paraíba; quatro espécies novas do gênero Coprinellus; dois Coprinopsis, um espécime identificado como C. aff. cordispora, novo registro para o Nordeste e uma espécie nova; uma espécie nova de Parasola. Coprinellus phaexanthus é o primeiro registro de fungo coprinoide para o estado do Ceará, coletada no semiárido em solo arenoso, caracterizada principalmente pelo hábito solitário, basidiósporos cordiformes, presença de pleurocistídios e elementos do véu pouco alongados e sem grampos de conexão. A partir de artigos e livros publicados no Brasil foi elaborado um checklist com as espécies de fungos coprinoides registradas para o país, o qual é apresentado em uma tabela com dados das respectivas espécies. No total, são relatadas 54 espécies, sendo 11 de Coprinus, 14 de Coprinellus, 25 de Coprinopsis e quatro de Parasola. / Coprinoid fungi are characterized by fragile basidiomata, pileus of plicate surface, deliquescent lamellae to semi-deliquescent or collapsed, pigmented basidiospores ranging brown to almost black, presence of brachybasidia, lamellae cistydia and also in surface of pileipellis and stipitipellis. The group is cosmopolitan, and your representatives are found directly on soil, on plant debris and on herbivorous dung. All the species with black spore and deliquescent lamellae was identified as Coprinus, however in the 90’s filogenetics studies proved that polyphyly at the genus, and that majority of species it was similar to Psathyrella. Hence, were proposed the genera Coprinellus, Coprinopsis e Parasola to reclassify this species. The objective this study is to increase knowledge about the group in Northeast Brazilian, and to know the species diversity and richness in study areas, located in the States of Ceará, Paraíba, Pernambuco and Rio Grande do Norte. The study contains descriptions, illustrations and discussions of ten species: Coprinus xerophilus, Coprinellus disseminatus and Parasola leiocephala, revised exsiccatae from Herbário Lauro Pires Xavier (JPB) of University Federal of Paraíba; four new species of genus Coprinellus; two Coprinopsis, one specimen identified as Coprinopsis aff. cordispora, new register to Northeast Brazilian and other new specie; and Parasola new species. Coprinellus phaexanthus, is the first register of coprinoid fungi to State Ceará, collected in semiarid on sandy soil, characterized mainly by solitary habit, cordiform basidiospores, presence of pleurocystidia and velar elements some elongated and lacking clamp connections. From articles and books published in Brazil was made a checklist with the coprinoid fungi species registered from the country, which is presented in a table with data of the respective species. In total are reported 54 species, 11 Coprinus, 14 Coprinellus, 25 Coprinopsis and four Parasola.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-graduação em Biotecnologia, Florianópolis, 2010 / Made available in DSpace on 2012-10-25T08:42:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 286377.pdf: 3812439 bytes, checksum: 6fcfa72b2a13e20109075fe00c344e6a (MD5) / Agaricus subrufescens (=A. brasiliensis) é um fungo comestível amplamente comercializado no Brasil e em outros países, devido as suas propriedades nutricionais e medicinais relacionadas principalmente aos polissacarídeos presentes em sua parede celular, tais como glucanas e glucomananas. Certos processos biotecnológicos têm sido utilizados para aumentar a escala produtiva do micélio e, consequentemente, aumentar a obtenção dos polissacarídeos. Previamente ao desenvolvimento desses processos de produção é importante estabelecer métodos de preservação do fungo in vitro e a recuperação do micélio após estocagem. Para a produção de biomassa foi utilizada a fermentação no estado sólido (FES) em grãos de trigo pré-tratados e a fermentação submersa (FSm) em hidrolisados de resíduos agroindustriais, como farelo de trigo (FT) e resíduo de cervejaria (RC). Polissacarídeos extraídos da frutificação (controle), do micélio em FES e do micélio isolado da FSm foram separados de acordo com suas massas molares por meio de diferentes membranas. Essas frações de polissacarídeos foram testadas na ativação de macrófagos in vitro. Entre os métodos de preservação, melhores resultados foram obtidos quando o meio de cultura foi suplementado com carvão ativo, tanto para a preservação quanto para a recuperação de A. subrufescens, sem alterações significativas na morfologia e genética do fungo durante um período de até 12 meses de estocagem. Para a FES, 21 min de cozimento dos grãos de trigo seguido de 24 min de molho após o cozimento demonstrou ser mais adequado para a produção de polissacarídeos (glucomananas) pelo fungo, inclusive quando o substrato não foi suplementado com cálcio, ou com adição máxima de 0,25 % CaCO3 (pH 6,6). A quantidade inicial de inoculante para a melhor produção de glucomananas (6,89 mg.mL-1) foi aproximadamente 10,3 %, numa temperatura ótima de incubação de 27,2 °C. As maiores biomassas de A. subrufescens para a FSm em hidrolisados de RC e FT foram obtidas na concentração de HCl 0,45 % e 20 min de hidrólise, apresentando 9,65 g.L-1 e 22,1 g.L-1, respectivamente. Porém, melhores resultados de bioconversão foram obtidos em hidrolisados utilizando até 0,3 % de HCl e 30 min de hidrólise, com adição de 2 g.L-1 de carvão ativo durante a hidrólise. Também foram obtidas altas taxas de biomassa de A. subrufescens no cultivo em hidrolisado com pH 5,3 e temperatura de incubação de 30,2 ºC. Na separação com membranas houve aumento da retenção dos polissacarídeos de todos os extratos à medida que o tamanho dos poros da membrana diminuiu. Os polissacarídeos separados pelas membranas de microfiltração (MF) e ultrafiltração (UF1) favoreceram a retenção de polissacarídeos de maior massa molar da frutificação (627 g.mol-1) e do micélio (310 g.mol-1), obtido tanto em FES quanto em FSm. Todos os polissacarídeos extraídos e retentados pelas membranas ativaram macrófagos através da expressão do Fator de Necrose Tumoral-a (TNF-a). Porém, somente os extratos brutos da frutificação e do micélio isolado da FSm, e seus polissacarídeos de maior massa molar retidos pela membrana MF ativaram macrófagos através da expressão de Óxido Nítrico Sintase Induzível (iNOS). Resultados importantes também foram obtidos para os polissacarídeos das frutificações de A. subrufescens, apresentando efeito antigenotóxico e atividade antiherpética quando esses foram sulfatados. Baseado nesses resultados, pesquisas complementares estão sendo desenvolvidas para a obtenção de produtos biotecnológicos com finalidade nutricêutica e/ou farmacêutica. / Agaricus subrufescens (=A. brasiliensis) is an edible fungus widely commercialized in Brazil and other countries, mainly due to its nutritional and medicinal properties related principally to the polysaccharides present in the fungus cell wall, such as glucans and glucomannans. Biotechnological processes may in turn be used to scale up the production of mycelium and consequently the polysaccharides. Previous to the development of the production process it is important to establish techniques for the in vitro preservation and recovery of the mycelium after storage. Solid state fermentation (SSF) on pre-treated wheat grains and submerse fermentation (SmF) on hydrolyzed residues from the agro industries, such as wheat bran (FT) and brewery residues (RC) were used for biomass production. Polysaccharides extracted from fruiting bodies (control), mycelium on SSF and isolated mycelium from SmF were separated by molecular weight through different membranes. These polysaccharide fractions were tested on macrophage activity in vitro. Among the preservation techniques, better results were obtained when the media was supplemented with activated charcoal both for preservation and further recovery of A. subrufescens, without significant morphological and genetic changes within the 12 month storage period. For SSF, 21 min of wheat grain cooking followed by a 24 min resting time has shown to be the optimal condition for the production of polysaccharides (glucomannans) by the fungus, either with no supplement added, or when up to 0.25 % CaCO3 (pH 6.6) has been added to the substrate. The initial inoculum amount for the best polysaccharide production levels (6.89 %) was around 10.3 % with an optimal temperature of 27.2 °C. The highest biomass of A. subrufescens for the SmF in hydrolyzed RC and FT using HCL 0.45% and 20 min hydrolysis was 9.65 g.L-1 and 22.1 g.L-1, respectively. On the other hand, better results of bioconversion were obtained in hydrolyzed residues using up to 0.30 % HCl and 30 min hydrolysis, with the addition of 2 g.L-1 of activated charcoal throughout the process. High biomass levels were also obtained when the cultivation was carried out at a pH of 5.3 and with incubation temperature of 30.2 ºC. The results showed an increase in retention of all polysaccharide extracts as the membro ane porosity decreased. Microfiltration (MF) and ultrafiltration (UF1) membranes retained the highest polysaccharides from fruiting body (627 g.mol-1) and mycelium (310 g.mol-1) obtained on both SSF and SFm. All polysaccharide extracts and fractions separated by the membranes showed biological activity for TNF-a cytokines. On the other hand, only extracts obtained from fruiting bodies and isolated mycelium of FSm, and its high molecular weight polysaccharides retained by the MF membrane activated the iNOS. Important results were also obtained for the polysaccharides extracted from the fruiting bodies, showing antigenotoxic and antiherpetic activities after sulphatation. Based on these findings, additional research is currently in progress to purpose biotechnological products that can be used in both the nutraceutical and/or pharmaceutical areas.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia, Florianópolis, 2008 / Made available in DSpace on 2012-10-24T04:14:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Agaricus blazei, conhecido popularmente no Brasil como cogumelo-do-sol e himematsutake no Japão, é um cogumelo nativo no sudeste brasileiro e amplamente consumido devido às suas propriedades nutricionais e medicinais. Neste estudo, foi avaliada a citotoxicidade, a genotoxicidade e a atividade anti-herpética das suas frações de beta-glucanas (E-SI, E-SII e E-SIII) e do seu extrato polissacarídico (ERP). A citotoxicidade e a genotoxicidade foram avaliadas através dos ensaios do MTT e do cometa, respectivamente. A ação antiviral in vitro frente ao Herpes Simplex Vírus tipo 1 (HSV-1, cepa KOS) e Herpes Simplex Vírus tipo 2 (HSV-2, cepa 333) foi testada pelo ensaio de redução de placas de lise. Nenhuma amostra apresentou genotoxicidade, nas condições experimentais testadas, e os valores de CC50 foram maiores do que 320 µg/ml para as frações de beta-glucanas e maior do que 2.370 µg/ml para o extrato ERP. Somente o ERP mostrou atividade antiviral entre as amostras testadas, para ambos os vírus. Os valores de CI50 foram de 6,74 µg/ml para o HSV-1 e 4,62 µg/ml para o HSV-2, com índices de seletividade de 393 e 545, respectivamente. A fim de determinar o possível mecanismo da ação anti-herpética detectada para o ERP, outras análises foram realizadas: ação virucida, influência na adsorção e penetração dos vírus nas células, e na propagação intercelular viral. O ERP não teve efeito direto na inativação dos vírions, mas inibiu significativamente a adsorção, a penetração do vírus nas células hospedeiras e a difusão intercelular viral. Estes resultados sugerem que o mecanismo de ação do ERP é particularmente interessante e difere daquele do aciclovir, que é o fármaco de escolha para o tratamento de infecções herpéticas.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro Tecnológico. Programa de Pós-Graduação em Engenharia de Alimentos. / Made available in DSpace on 2013-03-04T19:06:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 305250.pdf: 1279611 bytes, checksum: 85fa4d588f03cf34811d1f02b10b6bf1 (MD5) / O Agaricus brasiliensis, conhecido popularmente no Brasil como cogumelo do sol, é amplamente utilizado nos países orientais como um cogumelo comestível. Além disso, o cogumelo do sol tem sido extensivamente estudado devido a suas propriedades medicinais, havendo uma abundante literatura sobre o tema. O presente trabalho avaliou a composição química e atividade antioxidante e antimicrobiana dos extratos de A. brasiliensis obtidos por extração supercrítica (ESC) com CO2 puro e com a adição de etanol como cossolvente. Para avaliar o método a alta pressão quanto a rendimento, composição e atividade antioxidante e antimicrobiana dos extratos, métodos a baixa pressão, como hidrodestilação, maceração etanólica e soxhlet com diferentes solventes foram aplicados. As condições testadas na ESC foram: 40 oC, 50 oC e 60 oC e pressões entre 10 MPa e 30 MPa. A cinética de extração e o emprego de cossolvente no processo de extração supercrítica também foram avaliados. Os extratos obtidos por soxhlet utilizando água (56,8 %) e etanol (36,7 %) como solventes apresentaram os maiores rendimentos, enquanto que o menor rendimento foi observado na hidrodestilação (0 %). A extração supercrítica de cogumelo do sol apresentou rendimentos inferiores àqueles alcançados nas extrações à baixa pressão, em soxhlet e maceração. O melhor rendimento no processo de extração supercrítica utilizando CO2 puro foi na condição de 50 oC e 30 MPa (1,2 %). O emprego de 10 % de etanol como cossolvente no processo de extração supercrítica aumentou 3,8 vezes o rendimento de extração. O teor de compostos fenólicos totais foi avaliado pelo método de Folin-Ciocalteau e a atividade antioxidante pelo método DPPH, sendo verificado que os melhores resultados foram obtidos no extrato proveniente da maceração etanólica. A adição de cossolvente ao processo de extração supercrítica promoveu um incremento do teor de compostos fenólicos totais e atividade antioxidante dos extratos de cogumelo do sol. A atividade antimicrobiana foi avaliada pela concentração mínima inibitória e pelo método de difusão em gel. Os extratos de cogumelos do sol obtidos por técnicas a baixa pressão como por extração supercrítica apresentaram atividade antibacteriana, sendo maior para bactérias Gram-positivas. Apenas os extratos de cogumelos do sol obtidos por ESC (20 MPa/50 °C e 20 MPa/60 °C) apresentaram uma fraca atividade antifúngica frente a espécie Candida albicans. A quantificação e a identificação da composição dos extratos foram realizadas por cromatografia. Os principais compostos identificados nos extratos foram o ácido linoléico e ácido palmítico. Apesar dos baixos rendimentos observados na ESC, esta técnica torna-se bem interessante na obtenção de compostos de alto valor agregado, devido à seletividade do processo. A busca por condições operacionais que favoreçam positivamente o rendimento das extrações é uma alternativa a esta situação. / Agaricus brasiliensis, popularly known in Brazil as Sun mushroom, is widely used in oriental countries as an edible mushroom. Furthermore, Sun mushroom is a mushroom extensively studied for its medicinal properties for several years and literature abounds on the topic. The objective of this study was to obtain extracts from the mushroom A.brasiliensis using supercritical fluid extraction (SFE) with pure CO2 and with CO2 and co-solvent. In order to evaluate the high pressure method in terms of process yield, extract composition and biological activity, low pressure methods were also applied to obtain extracts, such as maceration with ethanol (Mac), Soxhlet (Sox) with different organic solvents, and hydrodistillation (HD). The SFE conditions were temperatures of 40 oC, 50 oC and 60 oC and pressures from 10 to 30 MPa. The SFE kinetic the overall extraction curve (OEC) was investigated. Soxhlet presented the highest yields when using water (56.8 %) and ethanol (36.7 %) as solvent. Hydrodistillation technique showed the lowest extraction yields (0 %). Supercritical extraction of Sun mushroom showed lower yields than the low pressure extraction in Soxhlet and maceration. The best conditions in the studied range to obtain high yields resulted to be 30.0 MPa and 50 oC (1.2 %). When 10 % of ethanol was added as co-solvent, the yield of extraction increased 3.8 times. Total phenol content was evaluated by the Folin-Ciocalteu and antioxidant activity by DPPH method, being verified the best results for the maceration extract. The use of ethanol as a co-solvent in the SFE improves antioxidant activity by DPPH assays and the total phenolic content. Antimicrobial activity was evaluated by minimum inhibitory concentration and gel diffusion assay. The antimicrobial activity presented by SFE and low pressure methods indicated great potential of the extracts as inhibitors of the microorganism growth, especially for Gran-positive bacteria. Only extracts of sun mushroom obtained by SFE (20 MPa/50 °C and 20 MPa/60 °C) showed a weak antifungal activity against Candida albicans. The identification and quantification of the composition of the extracts was performed by chromatography. The major compounds identified in extracts were linoleic acid and palmitic acid. Despite the low yields observed in the SFE, this technique is very interesting in obtaining the compounds of high aggregated value due to the selectivity of the process. The optimization of operating conditions that favor a positive yield of extraction is an alternative to this situation.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia / Made available in DSpace on 2013-06-25T18:52:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 311573.pdf: 7982077 bytes, checksum: 243e7ae4350af569490079c4e00e4810 (MD5) / Agaricus brasiliensis (syn A. subrufescens) é um fungo basidiomiceto nativo no Brasil, que apresenta paredes celulares ricas em polissacarídeos, tais como ?-(1?6)-(1?3)-glicanas nos corpos de frutificação e ?-(1?2)-glico-?-(1?3)-mananas no micélio. Neste trabalho, estes polissacarídeos foram isolados e modificados quimicamente gerando seus respectivos derivados sulfatados. Os polissacarídeos nativos (FR e MI) e sulfatados (FR-S e-MI-S) foram caracterizados quimicamente e avaliados quanto as suas atividades citotóxica e anti-herpética in vitro. Uma vez que FR-S e MI-S apresentaram uma promissora ação anti-HSV-1 (cepas KOS e 29-R) e anti-HSV-2 (cepa 333), seu mecanismo de ação foi determinado. A atividade anti-herpética in vivo do MI-S também foi testada utilizando-se modelos murinos de infecção ocular, cutânea e genital. FR-S e MI-S apresentaram duas novas bandas de absorção no espectro de infravermelho em 1253 e 810 cm-1, relacionados aos grupamentos C-S-O e S=O, respectivamente. A massa molecular do FR e MI foram estimados em 609 e 310 kDa, respectivamente. FR-S (127 kDa) e MI-S (86 kDa) apresentaram massas reduzidas provavelmente devido a hidrólise ocorrida durante a reação de sulfatação. FR-S e MI-S apresentaram ~14% de enxofre na análise elementar. Análise de RMN de 1H e 13C confirmaram as estruturas mencionadas anteriormente para FR e MI, sendo o FR-S totalmente sulfatado em C-4 e C-6, enquanto o MI-S parcialmente sulfatado em C-2, C-3, C-4 e C-6. Embora FR e MI não terem apresentado atividade, FR-S e MI-S exibiram promissora ação anti-HSV, com índices de seletividade (SI=CC50/EC50) superiores a 208. FR-S e MI-S não tiveram efeito virucida, mas significativamente inibiram a adsorção e penetração, provavelmente por interagir com glicoproteínas virais. Estudos de combinação revelaram que FR-S e MI-S atuam de forma sinérgica com o aciclovir. Além disso, MI-S inibiu a expressão das proteínas virais ICP27, UL42, gB e gD. Não foi observada toxicidade nos grupos de animais não infectados e tratados com MI-S. O tratamento tópico e oral com MI-S não foi efetivo na redução da doença ocular. A aplicação tópica de MI-S nas lesões cutâneas também não foi efetiva, mas os animais infectados cutaneamente e tratados oralmente com MI-S mostraram redução significativa dos escores da doença e cura acelerada das lesões pelo HSV-1 após o nono dia. A administração vaginal de MI-S (500 µg), 20 min antes do desafio viral, significantemente reduziu os escores da doença (dias 5 a 9), títulos virais (dias 1 e 3) e mortalidade em comparação aos grupos controles. A sulfatação aumentou em 5X o efeito citotóxico do FR contra células tumorais A549, enquanto foi essencial para a atividade do MI. A combinação de fatores como o alto grau de substituição e a massa molecular relativamente menor teve impacto positivo sobre a atividade citotóxica do FR-S e MI-S. Os resultados mostram que o MI-S tem potencial a ser utilizado na redução da severidade das lesões cutâneas pelo HSV-1 e principalmente como um microbicida evitando a transmissão sexual das infecções genitais pelo HSV-2. Ainda, os resultados promissores obtidos na triagem preliminar estimulam novos estudos para avaliação do mecanismo da atividade citotóxica do MI-S e FR-S.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia, Florianópolis, 2010 / Made available in DSpace on 2012-10-25T09:16:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 286647.pdf: 2822556 bytes, checksum: efcdfec4981831ef957fb764c96e7d5d (MD5) / Neste estudo foi padronizada a reação de RT-PCR para a detecção da expressão do mRNA dos marcadores TNF-?, IL-10 e iNOS, importantes no contexto de ativação de macrófagos, para seleção in vitro de substâncias naturais ou sintéticas com potencial atividade imunomodulatória sobre macrófagos, visto que estes constituem uma das principais populações de células do sistema imune. Para isso foi selecionada a linhagem murina RAW 264.7, cultivada in vitro e que responde a estímulos como o LPS. Para a realização da RT-PCR, o RNA foi extraído das células utilizando o reagente Trizol e posteriormente feito reação de transcrição reversa com 1 µg de RNA total, em condições padronizadas. Na etapa de amplificação do cDNA, foram testadas a melhor temperatura de anelamento para cada marcador, concentração dos iniciadores específicos e diluição do cDNA. Determinou-se que o melhor tempo necessário para visualizar os produtos de amplificação era de 6 horas para os ensaios de ativação e foram estabelecidas as concentrações de LPS capazes de estimular as células em cultura, quando avaliadas pela RT-PCR e dosagem de óxido nítrico. Verificou-se que a adição prévia de polimixina B (50 µg/ml) nas amostras é eficiente na inativação de endotoxinas contaminantes. Estabeleceu-se um protocolo para testar a potencial atividade antiinflamatória de compostos químicos, pela adição da substância a ser testada 6 horas após a ativação prévia com LPS, incubação por 18 horas e observação da inibição da expressão dos marcadores. Determinou-se em seguida, a atividade de 15 formulações de polissacarídeos de Agaricus blazei, sendo que todos os extratos mostraram atividade, pela RT-PCR, para a concentração de 10 µg/ml para a citocina TNF-? e nas frações 2, 3, 11 e 12 para a enzima iNOS; enquanto que a dosagem de óxido nítrico realizada em paralelo mostrou-se menos sensível. Também avaliou-se a atividade de 9 galatos sintéticos, e concluiu-se que nenhuma das amostras testadas demonstrava atividade ativadora de macrófagos. Ficou evidenciado neste estudo, portanto, a utilidade de uma técnica in vitro para a triagem de substâncias com potencial atividade imunomodulatória sobre macrófagos, que permite vislumbrar a análise de grande número destas substâncias, sem a utilização de animais de laboratório. / In this study an RT-PCR to detect mRNA expression of the markers TNF-?, IL-10 and iNOS, relevant in the macrophage activation context, was standardized in order to in vitro screening of natural or synthetic compounds with potential immunomodulatory activity in macrophages, whereas they constitute a major population of immune systems cells. For this, was selected the murine strain RAW 264.7 cultured in vitro, and that responds to stimuli such as LPS. To perform RT-PCR, RNA was extracted from cells using Trizol reagent and subsequently made a reverse transcription reaction with 1 µg of total RNA under standard conditions. In amplification of cDNA step, were tested the best annealing temperature for each marker, the concentration of specific primers and dilution of cDNA. It was determined that the best time to view the amplification products was 6 hours for the testing of activation, and states the concentrations of LPS the cells were responsive to our model of RT-PCR and measurement of nitric oxide. It was found that the previous addition of polymyxin B (50 µg / ml) in samples is efficient in the inactivation of endotoxin contaminants. Was established a protocol to test the potential anti-inflammatory activity of chemical compounds, by adding the substance to be tested after 6 hours prior to activation with LPS, incubated for 18 hours and observing the inhibition of expression of markers. Was determined activity of 15 polysaccharides of Agaricus blazei where all the extracts showed activity in the RT-PCR for the concentration of 10 µg / ml for TNF-? cytokine and for the fractions 2, 3, 11 and 12 for the iNOS enzyme; but not in the dosage of nitric oxide. We also determined the activity of 9 gallates synthetic, and concluded that none of gallates tested showed activity in activating macrophages. Was evidenced in this study, therefore, the usefulness of an in vitro technique for screening of substances with potential immunomodulatory activity on macrophages, which paves the analysis of many of these substances without the use of laboratory animals.