Submitted by SAMUEL DOS SANTOS SOUSA null (samuerr@hotmail.com) on 2016-11-25T13:56:01Z No. of bitstreams: 1 DOC. FINAL - DISSERTAÇÃO.pdf: 1281598 bytes, checksum: da30a95bebfc6a71081a5f812835a040 (MD5) / Approved for entry into archive by Felipe Augusto Arakaki (arakaki@reitoria.unesp.br) on 2016-11-29T13:18:47Z (GMT) No. of bitstreams: 1 sousa_ss_me_jabo.pdf: 1281598 bytes, checksum: da30a95bebfc6a71081a5f812835a040 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-11-29T13:18:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 sousa_ss_me_jabo.pdf: 1281598 bytes, checksum: da30a95bebfc6a71081a5f812835a040 (MD5) Previous issue date: 2016-08-18 / Existem poucos protocolos para a contenção e sedação de jumentos . Os agonistas alfa-2 são os fármacos mais amplamente administrados e é sabido que essa classe de fármacos pode produzir alguns efeitos deletérios no sistema cardiorrespiratório do animal. Os fármacos da classe dos opioides vêem ganhando espaço na prática anestésica com asininos, pois esses fármacos são utilizados como uma alternativa para a sedação desses animais. Além de produzirem certo grau de sedação, possuem característica analgésica, sem promover efeitos adversos. Na literatura pesquisada não foi encontrado, nenhum estudo sobre o uso associado de xilazina em infusão contínua com meperidina e seus efeitos hemodinâmicos nos muares. Diante deste exposto, objetivou-se estudar os efeitos da associação da infusão contínua da xilazina com bollus intramuscular de meperidina como protocolo de sedação em jumentos. Para tal, foram utilizados seis jumentos, SRD, sendo um macho e cinco fêmeas, com peso médio de 141±23 kg. Os animais foram submetidos a três protocolos experimentais dividos em três grupos, Grupo A: infusão contínua intravenosa de 1,1 mg/kg/hora de xilazina a solução salina por via intramuscular; Grupo B: infusão contínua intravenosa de 0,8 mg/kg/hora de xilazina e solução salina por via intramuscular e Grupo C: infusão contínua intravenosa de 0,8 mg/kg/hora de xilazina e 4 mg/kg de meperidina por via intramuscular. Foi observado redução na frequência respiratória, pressão arterial sistólica nos animais do grupo A e C, diminuição da pressão arterial diastólica e média em todos os grupos. Foi observada redução na altura da cabeça em todos os grupos. A associação da meperidina com xilazina em infusão contínua não provocou alterações cardiorrespiratórias significativas e produziu grau de sedação satisfatório / To the present, there has been few descriptions of anesthetic protocol for restraint and sedation in donkey (Equus asinus). Alpha-2-agonists are widely administered class of drugs. Known to produce some deleterious effects over the cardiopulmonary system. The use of opioids in donkeys has sained popularity anesthetic practicioners, since these drugs are used as an alternative sedative with analgesic characteristics with minimal side effects. To our knowledge, there has not been study evaluating the effects of the association of continuous rate infusion of xilazine with meperidine given intramuscularly over the cardiovascular parameters of donkeys. Therefore, the objective of our study evaluate was to the capacity of sedation and the cardiorespiratory implications of the anesthetic association in donkeys. In order to performe the study, six mixed breed, one male and five females, were used. The average weight has 141 ± 23 kg. The animals were subjected to three experimental protocols. Group A: Continuous intravenous infusion of 1.1 mg / kg / hour of xylazine and saline solution intramuscularly; Group B: Continuous intravenous infusion of 0.8 mg / kg / hour of xylazine and saline solution intramuscularly and Group C: continuous intravenous infusion of 0.8 mg / kg / hour of xylazine and 4 mg / kg of meperidine intramuscularly. Respiratory rate and systolic blood pressure decreased in animals of group A and C. While diastolic blood pressure and mean arterial pressure decreased in all three groups. Head Height lowered following treatment in all groups. The combination of meperidine with continuous rate infusion of xylazine did not cause significant cardiorespiratory implications and produced satisfactory degree of sedation.

O objetivo desta pesquisa foi avaliar os efeitos do período de administração de cloridrato de zilpaterol (CZ) e do tempo de confinamento no desempenho, características de carcaça, rendimento de cortes cárneos comerciais e na qualidade de carne de bovinos Nelore. Foram utilizados 96 bovinos machos não castrados da raça Nelore, com peso vivo inicial de 377 ± 25,1 kg. O delineamento utilizado foi o de blocos completos casualizados em esquema fatorial 4 × 2, sendo quatro períodos de administração com CZ (0, 20, 30 ou 40 dias) e dois tempos de confinamento (90 ou 117 dias). O período de suplementação com CZ (8,33 mg/kg de matéria seca total) iniciou-se 23, 33 e 43 dias antes do abate. Nos últimos três dias que antecederam o abate todos os animais foram alimentados com a dieta sem CZ, respeitando o período de carência do produto. O contrafilé (músculo Longissimus thoracis et lumborum) de todas as meias-carcaças esquerdas foi amostrado para as análises de qualidade de carne. Com exceção da área do olho de lombo obtida por ultrassom (P = 0,02) e área do olho de lombo medida na carcaça resfriada (P = 0,05), não houve interação entre período de administração de CZ e tempo de confinamento (P > 0,10). O aumento do período de suplementação com CZ proporcionou aumento linear da eficiência alimentar (P < 0,01), peso de carcaça quente (P < 0,01), rendimento de carcaça quente (P < 0,01) e rendimento de carne desossada (P < 0,01). Os bifes de contrafilé de animais suplementados com CZ apresentaram maior conteúdo percentual de proteína (P < 0,01), enquanto que a espessura de gordura subcutânea (P = 0,04) e o conteúdo percentual de lipídios intramusculares (P < 0,01) diminuíram com administração de CZ. O valor percentual de ácidos graxos poliinsaturados totais aumentou (P = 0,01) com a administração de CZ, sendo atribuído principalmente ao aumento percentual do ácido linoleico (18:2 cis-9, cis-12; P = 0,01) e ácido araquidônico (20:4 n-6; P < 0,01). A força de cisalhamento das amostras de contrafilé aumentou (P < 0,01) com a inclusão de CZ na dieta, sendo esse resultado independente do tempo de maturação (7, 14, 21 ou 28 dias post-mortem). Observou-se interação entre período de administração de CZ e tempo de maturação (14 ou 28 dias post-mortem) para escore de maciez inicial (P = 0,03) e escore de tecido conjuntivo (P < 0,01), onde o processo de maturação melhorou mais a carne de animais controle do que a carne de animais suplementados com CZ. Mesmo com a diminuição da maciez, os bifes de animais suplementados com CZ foram considerados macios pelos provadores do painel sensorial. O CZ melhora a eficiência de produção de carne de bovinos Nelore, proporcionando aumento na massa muscular dos animais tratados sem alterar o consumo de matéria seca. Por outro lado, o tratamento dos animais com CZ reduz a maciez e a velocidade do processo de amaciamento do contrafilé. / The objective of this research was to evaluate the effects of zilpaterol hydrochloride (ZH) feeding time and feedlot days on performance, carcass characteristics, yield commercial cuts and meat quality of Nellore bulls. Ninety six Nellore bulls with initial body weight of 377 ± 25.1 kg were used in a randomized complete block in 4 × 2 factorial design, with four periods of ZH feeding (0, 20, 30 or 40 d) and 90 or 117 d in the feedlot. The supplementation period with ZH (8.33 mg/kg of dietary dry matter basis) started 23, 33 or 43 d before slaughter. In the last three days prior to slaughter all the animals were fed the diet without ZH, respecting the product grace period. Strip loin (m. Longissimus thoracis et lumborum) of all left-carcases were sampled for meat quality analysis. With the exception of LM area obtained both by ultrasound (P = 0.02) and by refrigerated carcasses (P = 0.05), there was no interaction between periods ZH feeding and days in the feedlot (P > 0.10). The increase of the supplementation period with ZH linearly increased feed efficiency (P < 0.01), hot carcass weight (P < 0.01), hot carcass yield (P < 0.01) and boning yield (P < 0.01). Beef strip loin steaks from animals supplemented with ZH presented a higher percentage of protein content (P < 0.01), while the 12th-rib fat (P = 0.04) and the percentage content of intramuscular fat (P < 0.01) decreased with ZH feeding. The percentage of polyunsaturated fatty acids increased (P = 0.01) with the ZH feeding and was mainly attributed to the increase of linoleic acid (18:2 cis-9, cis-12; P = 0.01) and arachidonic acid (20:4 n-6, P < 0.01). The Warner-Bratzler shear force (P < 0.01) from the strip loin samples increased with the inclusion of dietary ZH and this result was independent of the aging time (7, 14, 21 or 28 d postmortem). There was interaction between ZH feeding period and maturation time (14 or 28 d postmortem) to initial tenderness score (P = 0.03) and connective tissue score (P < 0.01), showing that the maturation process improved meat tenderness of control animals rather than ZH animals. Despite the initial meat tenderness decrease, strip loin steaks of animals supplemented with ZH were still considered tender by trained evaluators. ZH improves Nellore bulls meat production efficiency, providing an increase in muscle mass of the treated animals with no change in dry matter intake. However, treatment of animals with ZH reduces the tenderness and the speed of the strip loin maturation process.

Os inibidores do receptor de angiotensina II do tipo 1 (AT1R), fármacos da classe das sartanas, são muito utilizados na terapêutica da insuficiência cardíaca. Apesar de serem eficientes por baixarem a pressão arterial, esses inibidores diminuem a contratilidade do músculo cardíaco, acentuando a patologia. Nesse sentido, os agonistas enviesados para &#946;-arrestina do AT1R surgem como uma solução para esse problema. Estudos com o mais promissor peptídeo com ação agonista enviesada (TRV120027) mostram que ele é capaz de diminuir a pressão arterial sem causar o efeito inotrópico negativo no coração. Tendo em vista esse novo e promissor mecanismo de ação e a característica peptídica do novo agonista enviesado que restringe sua utilização, o presente trabalho visou à busca de ligantes não peptídicos com potencial ação enviesada. Foram realizados estudos de ancoramento seguidos de dinâmica molecular, no AT1R, de sete peptídeos agonistas e agonistas enviesados descritos na literatura, empregando-se os programas Surflex-Dock 2.0 e o GROMACS 4.5, além de análises de campos de interação molecular no programa GRID. Os dados das interações intermoleculares retirados da dinâmica e dos campos de interação guiaram a construção de um farmacóforo que foi utilizado posteriormente em uma busca virtual na base de dados ZINC, com o módulo UNITY 3D do pacote Sybyl-X Suite 2.0. Após ancoramento e análise visual das moléculas selecionadas na busca, foram identificadas 15 moléculas promissoras, sendo cinco delas consideradas de maior interesse. As moléculas selecionadas na busca poderão ser futuramente testadas quanto ao perfil de ação enviesada em receptores AT1R. Os resultados obtidos nesse estudo podem levar à descoberta de um novo protótipo mais eficiente e seguro para o tratamento de doenças cardiovasculares, como a insuficiência cardíaca. / Angiotensin II type 1 receptor (AT1R) inhibitors, the sartans, are widely used in the treatment of heart failure. Although they are effective for lowering blood pressure, these inhibitors decrease the contractility of the heart muscle, accentuating the pathology. Accordingly, &#946;-arrestin biased agonists for AT1R emerge as a solution to this problem. Studies with the most promising biased agonist peptide (TRV120027) show that it is able to lower blood pressure without causing negative inotropic effect on the heart. Given this promising new mechanism of action and the peptide feature of the new agonist that restricts its use, this work aims the search for non-peptide ligands with a potential biased action. Docking studies, followed by molecular dynamics simultions, were performed for seven full and biased agonists in the AT1R, using the Surflex-Dock 2.0 and 4.5 GROMACS programs, besides molecular interaction fields analysis with GRID software. The data of intermolecular interactions from the molecular dynamic\'s analysis and the molecular interaction fields guided to the construction of a pharmacophore model which was subsequently used in a virtual screening from ZINC database, employing the 3D UNITY module from Sybyl-X Suite 2.0 package. After a docking study and visual analysis of the primary selected molecules, 15 promising molecules have been identified, five of them considered of most interest. The molecules selected in the search can be further tested for biased action on AT1R. The results of this study may lead to the discovery of a more efficient and secure lead for the treatment of cardiovascular diseases, such as heart failure.

INTRODUÇÃO: Aventa-se a hipótese de quepacientes com endometriose poderiam apresentar risco elevado para doenças cardiovasculares. Existe, porém, controvérsia quanto ao perfil lipídico observado nessas pacientes. OBJETIVOS: avaliar os marcadores de risco cardiovascular associados à endometriose, comparando-se o efeito sobre eles de dois diferentes tratamentos para esta doença: Sistema Intra-uterino liberador de levonorgestrel (SIU-LNG) e o análogo do GnRH na forma de depósito (aGnRH). Marcadores inflamatórios, parâmetros clínicos e avaliação lipídica foram utilizados como marcadores de risco cardiovascular. MATERIAL E MÉTODOS: Quarenta pacientes entre 18 e 40 anos, com diagnóstico laparoscópico de endometriose, foram randomizadas para receber tratamento com SIU-LNG (n=22) e com o aGnRH (n=18), durante 6 meses. Foram avaliados o índice de massa corporal, a freqüência cardíaca, as pressões arteriais sistólica e diastólica, além dos seguintes parâmetros laboratoriais: lipidograma (colesterol total (CT), HDL-colesterol (HDL-C), LDL-colesterol (LDL-C), triglicérides (TGL)), interleucina-6 (IL-6), proteína C reativa (PCR), homocisteína, molécula de adesão decélula vascular (VCAM), fator de necrose tumoral ?(TNF-?) e contagem de leucócitos (LCT), sendo realizados no início e após seis meses de tratamento. RESULTADOS: no grupo do SIU-LNG, houve redução dos níveis do VCAM (92,8 ± 4,2ng/mL para 91,2 ± 2,7ng/mL, p=0,04), PCR (0,38 ± 0,30mg/dL para 0,28 ± 0,21mg/dL, p=0,03), CT (247,0 ± 85,0 mg/dL para 180,0 ± 31,0 mg/dL, p=0,0002), TGL (118,0 ± 76,0 mg/dL para 86,5 ± 41,5 mg/dL,p=0,003), LDL-C (160,5 + 66,0mg/dL para 114,5 + 25,5mg/dL, p=0,0005) e HDL-C (63,0 + 20,5mg/dL para 48,5 + 10,5mg/Dl, p=0,002). No grupo do aGnRH, houve aumento da homocisteína (11,5 + 2,9 µmol/L para 13,0 + 2,7µmol/L, p=0,04) e diminuição dos níveis de IL-6 (4,3 + 3,9pg/mL para 2,3 + 0,8pg/mL, p=0,005), VCAM (94,0 + 3,8ng/mL para 92,0 + 1,6ng/mL, p=0,03) e LCT (7330 + 2554 para 6350 + 1778, p=0,01). Esse estudo mostra que alguns marcadores de risco cardiovascular são influenciados por ambos aGnRH e SIU-LNG, mas esse último reduz mais os níveis lipídicos e pode ter efeitos mais favoráveis em longo prazo. / The aim of this prospective and controlled study was to evaluate the cardiovascular risk markers associated with endometriosis and the influence of the levonorgestrel intra-uterine system (LNG-IUS) compared with the GnRH analogue (GnRHa) leuprolide acetate on these risks after six monthsof treatment. Methods: This was a randomized, prospective, open clinical study, with44 patients with laparoscopically and histologically confirmed endometriosis. Patients were randomized into two groups: LNG-IUS group, 22 patients submittedto LNG-IUS insertion, and GnRHa group, 22 patients who received a monthly GnRHa injection for six months. Body mass index, systolic and diastolic arterial blood pressure, heart rate and laboratory cardiovascular risk markers such as interleukin-6 (IL-6), tumor necrosis factor-alpha (TNF-alpha), C-reactive protein (CRP), homocysteine (HMC), lipid profile, total leucocytes, and vascular cell adhesion molecule (VCAM) were measured before and six months after treatment. Results: in the LNG-IUS group, there was reduction of the levels of VCAM(92.8 +4.2 to 91.2+2.7 ng/mL, p = 0.04), CRP (0.38+0.30 to 0.28+0.21 mg/dL, p = 0.03), total cholesterol (247.0+85.0 to 180.0+31.0 mg/dL, p = 0.0002), triglycerides (118.0+ 76.0 to 86.5+41.5 mg/dL, p = 0.003), LDL (160.5+66.0 to 114.5+25.5 mg/dL, p = 0.0005) and HDL (63.0+20.5 to 48.5+10.5 mg/dL, p = 0.002). The GnRHa group showed an increase of HMC levels (11.5+2.9 to 13.0+2.7 µmol/L, p = 0.04) and a reduction of IL-6 levels (4.3+3.9 to 2.3+0.8 pg/mL, p = 0.005), VCAM (94.0+3.8 to 92.0+1.6 ng/mL, p = 0.03) and total leucocytes (7330+2554 to 6350+1778, p = 0.01). Conclusions: This study shows that some cardiovascular risk markers are influenced by both GnRHa and LNG-IUS,but the latter had a greater positive impact on the lipid profile, which could lead to a favorable effect during long-term treatment.

A moderna suinocultura vem nos últimos anos avançando no desenvolvimento e no emprego de tecnologias que visam o aumento da performance produtiva e econômica do segmento. As inovações associadas aos métodos de castração e modificadores metabólicos têm sido avaliadas, em particular o uso da imunocastração e dos repartidores de energia (ractopamina). Embora os ganhos zootécnicos e industriais destas tecnologias já estejam bem discutidos, o real impacto do emprego juntas ou isoladas sobre a qualidade tecnológica da carne pelo seu efeito na matriz bioquímica, necessita de estudos mais aprofundados. Desta forma, esta pesquisa científica foi direcionada para avaliar os efeitos, focando nas alterações dos perfis eletroforéticos da carne, advinda de animais produzidos comercialmente, utilizando concomitantemente ractopamina e imunocastração. Foram utilizados 48 suínos, criados comercialmente, sendo 8 suínos por tratamento (machos castrados cirurgicamente - CC, machos imunocastrados - IM, e fêmeas - F) recebendo dietas suplementadas com (CR) ou sem (SR) ractopamina na fase final da terminação. Avaliaram-se as características qualitativas da carne, tais como o pH, a cor objetiva, a capacidade de retenção de água (perda de água por gotejamento - drip loss, perda por cocção - PCOC, e perda por descongelamento - PDESC), maciez objetiva (força de cisalhamento) e perfil eletroforético. A utilização conjunta da imunocastração com a ractopamina influenciou o pH 24 horas do lombo suíno, a luminosidade (L*) e a força de cisalhamento, sendo que o pH e a força de cisalhamento foram maiores e a luminosidade menor em IC-CR na dieta. Porém, essa influência não foi verificada na análise eletroforética unidimensional. O perfil proteico foi significativamente influenciado pelo fornecimento do &beta;-agonista adrenérgico. Diferenças na abundância de peptídeos foram verificadas para as variáveis qualitativas da carne maciez, capacidade de retenção de água (drip loss e descongelamento) e luminosidade. Aumento nos volumes normalizados dos peptídeos reduziu a PDESC e melhorou a maciez objetiva, enquanto que o drip loss aumentou quando não houve a suplementação com ractopamina na dieta. Os resultados demonstraram que somente o &beta;-agonista adrenérgico foi o responsável pelas diferenças verificadas no perfil proteico. O efeito simultâneo imunocastração com a inclusão da ractopamina na dieta não propociou impactos na qualidade tecnológica da carne. / The modern swine industry has in recent years to advance the development and use of technologies aimed at increasing production and economic performance of the segment. Innovations associated methods of castration and metabolic modifiers have been evaluated, in special the use of immunocastration and feed additive (ractopamine). Although the production growth and industrial gains of these technologies are already well discussed, the real impact of employment together or isolated on the technological quality of meat by its effect on the biochemical matrix, requires further study. Therefore, this scientific research was directed to evaluate the effects, concentrating on changes in electrophoretic profiles of meat, resulting animals commercially produced concurrently using ractopamine and immunocastration. 48 animals were used commercially created, 8 per treatment (castrates - CC, immunocastrated - IM, and female - F) fed diets supplemented with (CR) or without (SR) ractopamine at the final stage of finishing. We evaluated the qualitative characteristics of meat, such as pH, color, water-holding capacity (drip loss, cooking loss - PCOC, and loss defrosting - PDESC) objective tenderness (shear force) and electrophoretic profile. The combined use of immunocastration with ractopamine influence pH 24h swine loin, the lightness (L*) and shear force, and pH, and shear force were higher and lower luminosity in IC-CR in the diet. However, this effect wasn\'t seen in the one-dimensional electrophoretic analysis. The protein profile was significantly influenced by the supply of &beta;-adrenergic agonist. Differences in the abundance of peptides were checked for qualitative variables of meat tenderness, water retention capacity (drip loss and defrosting) and luminosity. The increase in the volume of standard peptides pDesc reduced and improved objective tenderness, while the drip loss increased when no supplementation with dietary ractopamine. The results demonstrate that only the &beta;-adrenergic agonist was responsible for the observed differences in the protein profile. The effect simultaneously immunocastration with the addition of ractopamine in the diet not influence impacts on technological meat quality.

Estudos anteriores de nosso laboratório demonstraram que a estimulação aguda dos receptores 2-adrenérgicos (2-AR) atenua a perda de massa muscular induzida pela desnervação motora (DEN) por meio de uma via dependente de AMPc/PKA. No entanto os mecanismos moleculares envolvidos na ativação crônica destes receptores ainda são pouco conhecidos. Por outro lado, a ativação desta via de sinalização também está envolvida no controle da estabilidade dos receptores nicotínicos (AChR) na junção neuromuscular (JNM), sugerindo que a densidade dos AChR possa estar sob controle neuro-humoral. Desta forma, aventou-se a possibilidade de que além dos efeitos protetores na massa muscular, a ativação dos receptores 2-AR pudesse mediar a estabilização dos AChR na placa motora. Para testar essa hipótese, camundongos foram submetidos à DEN através da secção do nervo ciático, um protocolo clássico de indução de atrofia muscular e desestabilização dos AChR, e tratados com salina ou clembuterol (CB), um 2-agonista seletivo, por até 14 dias. Após 3 dias de DEN, observou-se redução da massa muscular e aumento do conteúdo proteico e expressão do RNAm de genes relacionados à ativação do sistema Ubiquitina-Proteassoma (atrogina-1 e MuRF1) e do sistema autofágico/lisossomal (catepsina L e LC3). A DEN também promoveu aumento no turnover dos AChR, no número de vesículas endocíticas e na expressão do RNAm para a subunidade 1 dos AChR. Após 7 dias, a DEN reduziu a expressão dos genes relacionados à atrofia e aumentou a atividade da via do AMPc/PKA independentemente do tratamento com CB. Na tentativa de elucidar os sinais extracelulares que produziam esta resposta adaptativa, foi demonstrado que neurônios catecolaminérgicos trafegam ao longo do nervo ciático e sua ablação pela DEN reduziu o conteúdo de noradrenalina muscular. Baseados nestes resultados, foi postulado a existência de uma hipersenbilidade às catecolaminas em músculos desnervados cronicamente. O tratamento com CB por 3 dias aboliu o aumento da expressão dos atrogenes induzido pela DEN e este efeito foi associado ao maior conteúdo de AMPc e de substratos fosforilados pela PKA. Além disso, o CB diminuiu a hiperexpressão do RNAm para catepsina L e LC3 induzida pela DEN de 7 dias. Embora o CB não tenha alterado a meia-vida dos AChR em músculos inervados e desnervados, houve um total bloqueio do aumento do número de vesículas endocíticas contendo o AChR em músculos desnervados e tratados com CB. Corroborando estes dados, o CB aumentou a incorporação de AChR novos nas JNM e este efeito foi também associado à maior expressão do RNAm para a subunidade 1-AChR em músculos desnervados. Esta ação do CB no turnover dos AChR parece ser direta uma vez que neuroniôs catecolaminérgicos presentes no nervo ciático ativam receptores 2-ARe a produção de AMPc especificamente na JNM. Em estudos in vitro, foi demonstrado que a estimulação colinérgica produzida pelo carbacol (10-4M) diminuiu a velocidade de síntese de proteínas, aumentou a proteólise total e a atividade do sistema proteolítico Ca2+-dependente em músculos soleus de ratos por meio da ativação dos receptores nicotínicos. Este efeito catabólico do carbacol foi completamente bloqueado pela adição de CB (10-4M) ao meio de incubação. Os dados obtidos no presente estudo permitem sugerir que a estimulação crônica dos 2-AR no músculo esquelético induz um efeito anti-catabólico pela supressão dos sistemas proteolíticos proteassomal e lisossomal, provavelmente através da via de sinalização do AMPc/PKA. A inibição destes sistemas pode estar relacionada ao aumento do turnover dos AChR, uma vez que a velocidade de incorporação destes receptores na JNM foi aumentada pelo CB. Além disso, os achados que mostram a associação entre neurônios noradrenérgicos e colinérgicos no nervo ciático, que conjuntamente inervam as JNM, e a co-localização de receptores 2-AR e AChR na sinapse permitem sugerir a existência de uma interação funcional entre o sistema colinérgico e adrenérgico na manutenção da massa muscular e da placa motora. / Previous studies from our laboratory have shown that the acute stimulation of 2-adrenergic receptor (2-AR) attenuates the muscle loss induced by motor denervation (DEN) through a cAMP/PKA dependent pathway. However, the molecular mechanisms involved in the chronic activation of these receptors are poorly understood. Furthermore, the activation of this signaling pathway is also involved in controlling the stability of nicotinic receptors (AChR) at the neuromuscular junction (NMJ), suggesting that the density of AChR may be under neurohumoral control. Thus, we postulated that besides the protective effects on muscle mass the activation of 2-AR receptors could mediate the stabilization of AChR in the motor plate. To test this hypothesis, mice were submitted to DEN through of the sciatic nerve section, a classical protocol of induction muscle atrophy and destabilization of AChR, and were treated with saline or clenbuterol (CB), a selective 2-agonist for 14 days. DEN decreased the muscle mass and increased the protein content and mRNA expression of genes related to the activation of the ubiquitin-proteasome system (atrogin-1 and MuRF1) and autophagic/lysosomal system (cathepsin L and LC3). DEN also promoted an increase in the turnover of AChR, number of endocytic vesicles and the expression of mRNA for the 1 subunit of AChR. Interestingly, chronic DEN induced down-regulation of atrophy related-genes, and increased the activity of cAMP/PKA pathway independently of CB treatment. In an attempt to elucidate the extracellular signals that produced this adaptive response, it was demonstrated that catecholaminergic neurons travels along the sciatic nerve and its ablation by DEN reduces muscle norepinephrine content. Based on these results, it was postulated the existence of a muscle adrenergic hypersensitivity to circulating catecholamines induced by chronic DEN. CB treatment for 3 days completely abolished the higher expression of atrogenes and this effect was associated with increased Camp content and PKA phosphorylated substrates. Furthermore, CB decreased the DEN-induced hyperexpression of cathepsin L and LC3 mRNA at 7 days. Although CB has not altered the half-life of AChR in innervated and denervated muscles, it produced a total blockage of the increased number of endocytic vesicles containing the AChR in denervated muscles. Consistently, CB increased the incorporation of new AChR and this effect was associated with an increased expression of the 1-subunit AChR mRNA in denervated muscles. This action of CB on AChR turnover appears to be direct, since catecholaminergic neurons are present in the sciatic nerve stimulating 2-AR and cAMP production specifically in the NMJ. Furthermore, in vitro studies demonstrated that cholinergic stimulation produced by carbachol (10-4M) decreased the rate of protein synthesis and increased the proteolytic activity of Ca2+-dependent system in rat soleus muscle through activation of nicotinic receptors. This catabolic effect of carbachol was completely blocked by the addition of CB (10-4M) to the incubation medium. These data suggest that chronic stimulation of 2-AR in skeletal muscle induces an anti-catabolic effect by suppressing proteasomal and lysosomal proteolytic systems, probably through the cAMP/PKA signaling. The inhibition of these systems seems to be related to the increased AChR incorporation into NMJ induced by CB treatment. Moreover, the association between noradrenergic and cholinergic neurons in the sciatic nerve, both of which innervate the motor endplates, and the co-localization of AChR and 2-ARat the synapse suggest the existence of a functional interaction between cholinergic and adrenergic systems in the maintenance of muscle mass and motor endplate.

Os inibidores do receptor de angiotensina II do tipo 1 (AT1R), fármacos da classe das sartanas, são muito utilizados na terapêutica da insuficiência cardíaca. Apesar de serem eficientes por baixarem a pressão arterial, esses inibidores diminuem a contratilidade do músculo cardíaco, acentuando a patologia. Nesse sentido, os agonistas enviesados para &#946;-arrestina do AT1R surgem como uma solução para esse problema. Estudos com o mais promissor peptídeo com ação agonista enviesada (TRV120027) mostram que ele é capaz de diminuir a pressão arterial sem causar o efeito inotrópico negativo no coração. Tendo em vista esse novo e promissor mecanismo de ação e a característica peptídica do novo agonista enviesado que restringe sua utilização, o presente trabalho visou à busca de ligantes não peptídicos com potencial ação enviesada. Foram realizados estudos de ancoramento seguidos de dinâmica molecular, no AT1R, de sete peptídeos agonistas e agonistas enviesados descritos na literatura, empregando-se os programas Surflex-Dock 2.0 e o GROMACS 4.5, além de análises de campos de interação molecular no programa GRID. Os dados das interações intermoleculares retirados da dinâmica e dos campos de interação guiaram a construção de um farmacóforo que foi utilizado posteriormente em uma busca virtual na base de dados ZINC, com o módulo UNITY 3D do pacote Sybyl-X Suite 2.0. Após ancoramento e análise visual das moléculas selecionadas na busca, foram identificadas 15 moléculas promissoras, sendo cinco delas consideradas de maior interesse. As moléculas selecionadas na busca poderão ser futuramente testadas quanto ao perfil de ação enviesada em receptores AT1R. Os resultados obtidos nesse estudo podem levar à descoberta de um novo protótipo mais eficiente e seguro para o tratamento de doenças cardiovasculares, como a insuficiência cardíaca. / Angiotensin II type 1 receptor (AT1R) inhibitors, the sartans, are widely used in the treatment of heart failure. Although they are effective for lowering blood pressure, these inhibitors decrease the contractility of the heart muscle, accentuating the pathology. Accordingly, &#946;-arrestin biased agonists for AT1R emerge as a solution to this problem. Studies with the most promising biased agonist peptide (TRV120027) show that it is able to lower blood pressure without causing negative inotropic effect on the heart. Given this promising new mechanism of action and the peptide feature of the new agonist that restricts its use, this work aims the search for non-peptide ligands with a potential biased action. Docking studies, followed by molecular dynamics simultions, were performed for seven full and biased agonists in the AT1R, using the Surflex-Dock 2.0 and 4.5 GROMACS programs, besides molecular interaction fields analysis with GRID software. The data of intermolecular interactions from the molecular dynamic\'s analysis and the molecular interaction fields guided to the construction of a pharmacophore model which was subsequently used in a virtual screening from ZINC database, employing the 3D UNITY module from Sybyl-X Suite 2.0 package. After a docking study and visual analysis of the primary selected molecules, 15 promising molecules have been identified, five of them considered of most interest. The molecules selected in the search can be further tested for biased action on AT1R. The results of this study may lead to the discovery of a more efficient and secure lead for the treatment of cardiovascular diseases, such as heart failure.

Os receptores ativadores da proliferação de peroxissomos (PPARs) são fatores de transcrição dependentes da ligação de ligantes e possuem um papel chave no controle do metabolismo dos lipídios e da glicose. Existem três isotipos desse receptor: PPAR&alpha;, PPAR&beta; e PPAR&gamma;. O PPAR&gamma; é alvo molecular para os compostos TZDs, os quais são fármacos usados clinicamente no controle da diabetes do tipo 2, aumentando a sensibilidade à insulina. Enquanto que os fibratos são os fármacos que atuam no PPAR&alpha; e são utilizados para diminuir os níveis de triglicerídeos. A maioria dos pacientes que sofrem com a diabetes do tipo 2 apresentam desordens no metabolismo de lipídios. Mesmo com a existência de fármacos capazes de controlar estas desordens metabólicas, a busca de um agonista dual para os PPAR&alpha; e PPAR&gamma; é um grande desafio no controle da síndrome metabólica, uma vez que este composto pode combinar os dois efeitos terapêuticos em uma única molécula. O GL479 é um agonista dual que foi sintetizado com dois grupos farmacóforos, ligando-se tanto ao PPAR&alpha; quanto ao PPAR&gamma;. Dentro desse contexto, este estudo apresenta as bases estruturais de interação do agonista dual GL479 aos PPARs por meio da determinação estrutural dos complexos PPAR&alpha;-LBD:GL479 e PPAR&gamma;-LBD:GL479. A análise detalhada desses complexos revelou diferentes modos de interação do ligante em cada receptor, porém em ambos os casos o GL479 interage com a Tyr da H12. Na estrutura do PPAR&alpha;-LBD, o ligante adquiriu a característica de um agonista total e no caso do PPAR&gamma;-LBD, o GL479 adotou características de um agonista parcial dependente da interação com a H12. Além das analises do agonista dual, 16 compostos foram identificados por docking como ligantes do PPAR&gamma;. Três desses ligantes (8, 10 e 15) foram caracterizados por ThermoFluor e fluorescência de polarização com valores de IC50 menor que 10 &micro;M. Adicionalmente, um dos compostos identificados no docking (16) foi cocristalizado com PPAR&gamma;-LBD. A conformação adotada pelo ligante não permitiu que ele interagisse diretamente com a H12, sugerindo que este composto possa atuar como um agonista parcial independente da H12. Todas estas descobertas podem ser exploradas no desenho de novos moduladores dos PPARs com menores efeitos adversos ou até mesmo na busca de agonistas duais PPAR&alpha; &frasl;&gamma;, que combine os efeitos terapêuticos no tratamento da diabetes do tipo 2 e da dislipidemia. / Peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs) are ligand-dependent transcription factors that control various functions in human organism and they play key roles in the control of glucose and lipid metabolism. There are three different PPAR isotypes: PPAR&alpha;, PPAR&beta; e PPAR&gamma;. PPAR&gamma; is a molecular target of TZD agonists, which are clinically used drugs in the control of type 2 diabetes by increasing insulin sensitivity. Whereas fibrates are drugs that act on PPAR&alpha; and are used to lower serum triglyceride levels. The most patients who have type 2 diabetes also display lipid metabolism disorders. Even with the existence of drugs that can control these metabolic disorders, the search of dual agonist for PPAR&alpha; and PPAR &gamma; is a major challenge in the control of metabolic syndrome, because this compound could combine both therapeutic effects in a single molecule. GL479 is a dual agonist that was synthesized based on a combination of two key pharmacophores, with the ability to bind in the both PPARs, &alpha;, and &gamma;. Thus, this study reveals the structural basis for this dual agonist GL479 by structural determination of the complexes PPAR&alpha;-LBD:GL479 and PPAR&gamma;-LBD:GL479. The detailed analysis of these complexes showed different ligand binding modes for each receptor, however, in the both cases the GL479 interacted with the Tyr of H12. In the PPAR&alpha;-LBD structure the ligand acquired the features of full agonist and in the case of PPAR&gamma;-LBD, GL479 adopted features of a partial agonist dependent of H12 interaction. In addition to the dual agonist analysis, sixteen compounds were identified as PPAR&gamma; ligand by docking. Three of these ligands were characterized by ThermoFluor and fluorescence polarization, which resulted in IC50 values smaller than 10 &micro;M. Additionally, one of the compounds, identified by docking, was co-crystallized with PPAR&gamma;. The ligand conformation adopted would not allow it a direct interaction with the H12. These contacts were mediated by one water molecule, suggesting this compound might also act as a partial agonist, independent of H12 interaction. All these findings may be explored for the design of PPARs novel modulators with lower side effects, as well, in the exploration of dual agonists PPAR&alpha; &frasl; &gamma; that combines the therapeutic effects in the treatment of type 2 diabetes and dyslipidemia.

Submitted by Tiago José Caparica Módolo (tiago.vet10@gmail.com) on 2018-06-12T17:22:24Z No. of bitstreams: 1 TiagoModoloTESE.pdf: 1069308 bytes, checksum: ec33fab464148f69f2639d9206f39612 (MD5) / Approved for entry into archive by Alexandra Maria Donadon Lusser Segali null (alexmar@fcav.unesp.br) on 2018-06-12T17:52:27Z (GMT) No. of bitstreams: 1 modolo_tjc_dr_jabo.pdf: 1069308 bytes, checksum: ec33fab464148f69f2639d9206f39612 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-12T17:52:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 modolo_tjc_dr_jabo.pdf: 1069308 bytes, checksum: ec33fab464148f69f2639d9206f39612 (MD5) Previous issue date: 2018-05-18 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / A detomidina é um dos fármacos mais utilizados para a sedação de muares, porém não há dose estabelecida para esta espécie sendo indicado utilizar uma dose 50% maior que a indicada para equinos. Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar a eficácia e os efeitos cardiovasculares da detomidina em muares comparando duas doses diferentes, a utilizada em equinos ( G1 - 0,02 mg/kg) e a dose 50% maior (G2 – 0,03 mg/kg). Para isso, foram utiizados 6 muares (2 machos e 4 fêmeas), adultos (339±27 kg), os animais receberam as duas doses com espaçamento mínimo de 7 dias, formando assim dois grupos experimentais com 6 animais cada. Antes da aplicação (M0) da detomidina pela via intravenosa e 5, 15, 30, 45 e 60 minutos após a aplicação (M5; M15; M30; M45; M60, respectivamente) foram avaliados frequência cardíaca, frequência respiratória, motilidade intestinal, altura da cabeça, além dos parâmetros ecocardiográficos: diâmetro interno do ventrículo esquerdo ao final da sístole e da diástole, fração de encurtamento, fração de ejeção, volume do ventrículo esquerdo ao final da sístole e da diástole, volume sistólico e débito cardíaco. A altura da cabeça do G2 permaneceu significativamente menor até o M60 quando comparado ao M0 do mesmo grupo, já do G1 ficou significativamente menor até o M45 quando comparado ao basal. O débito cardíaco do G1 foi significativamente menor nos M5, M15, M30 quando comparado ao M0 doG1, já do G2 permaneceu significativamente menor, quando compardo ao M0 do G2, do M5 ao M45. Concluiu-se que os muares que receberam dose 50% maior de detomidina permaneceram sedados por um período maior, porém os efeitos cardiovasculares também foram mais prolongados. / Detomidine is the drugs most used for sedation of mules, but there is no established dose for this species being indicated to use a dose 50% greater than indicated for horses. Thus, the objective of this study was to evaluate the efficacy and cardiovascular effects of detomidine in mules comparing two different doses, the used in horses (G1 - 0.02 mg / kg) and the 50% higher dose (G2 - 0.03 mg / kg). For this, 6 muares (2 males and 4 females), adults (339 ± 27 kg) were used, the animals received the two doses with a minimum spacing of 7 days, thus forming two experimental groups with 6 animals each. Before the application (M0) of detomidine intravenously and 5, 15, 30, 45 and 60 minutes after the application (M5, M15, M30, M45, M60, M60, respectively) were evaluated heart rate, respiratory rate, intestinal motility, height of the head, in addition to the echocardiographic parameters: internal left ventricular diameter at the end of systole and diastole, fraction of shortening, ejection fraction, left ventricular volume at the end of systole and diastole, systolic volume and cardiac output. The head height of G2 remained significantly lower until M60, whereas G1 was significantly lower up to M45, cardiac output of G1 was significantly lower in M5, M15, M30, whereas G2 remained smaller than M5 at M45. Concluding that mules receiving a 50% higher dose of detomidine remained sedated for a longer period, but the cardiovascular effects were also longer. / 140230/2014-9

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:32Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-10-09Bitstream added on 2014-06-13T19:04:35Z : No. of bitstreams: 1 watanabe_ph_dr_jabo.pdf: 1270273 bytes, checksum: f355eac74c8081b78de6f867b0504d27 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Objetivou-se avaliar os efeitos de concentrações crescentes de ractopamina em dietas para fêmeas suínas, abatidas com 110 kg de peso, quanto ao desempenho, características de carcaça, rendimento de cortes comerciais, composição e cortes cárneos do pernil, qualidades física, química, sensorial e perfil de ácidos graxos da carne, potencial para impacto ambiental e avaliação econômica. Foram utilizadas 468 fêmeas suínas, distribuídas entre quatro dietas: DC – dieta controle, composta principalmente por milho e farelo de soja; DC5 – dieta controle contendo 5 mg de ractopamina/kg; DC10 – dieta controle contendo 10 mg de ractopamina/kg e DC15 – dieta controle contendo 15 mg de ractopamina/kg. O peso inicial foi de 84,77±7,20 kg e final de 110,59±7,70 kg. O período experimental foi de 28 dias, quando então os animais foram destinados ao abate. Utilizou-se o delineamento em blocos ao acaso, para controlar diferenças de peso entre os animais. Encontrou-se reduções lineares para o consumo diário de ração e conversão alimentar, e aumentos lineares para área de olho de lombo, pesos de cortes inteiros do pernil e paleta, assim como para os pesos do coxão mole (Semitendinosus) e da alcatra (Gluteus medius), havendo efeito inverso para a quantidade de gordura no pernil, conforme o aumento das concentrações de ractopamina nas dietas. Não foi observado efeito sobre a qualidade e o perfil de ácidos graxos da carne. Houve diminuição da produção de fezes+urina por animal nas duas primeiras semanas de fornecimento, e alteração na composição das fezes. Notou-se aumentos nos custos da alimentação, e redução linear na receita líquida parcial sem bonificação. Para a receita líquida parcial com bonificação, observou-se efeito quadrático, sendo a concentração estimada de 4,05 mg de ractopamina/kg de dieta, a que determinou a melhor receita... / The aim of this study was to evaluate the effects of increasing ractopamine concentration in diets for gilts, slaughtered at 110 kg of body weight, on performance, carcass characteristics, whosale cuts, composition and retail cuts of ham, physical, chemical and sensorial quality and fat acids profile of meat, potential environmental impact and economical evaluation of using this additive. It was used 468 gilts, allotted into four diets: DC – control diet, based on corn and soybean meal; DC5 – control diet containing 5 mg of ractopamine/kg; DC10 – control diet containing 10 mg of ractopamine/kg; DC15 – control diet containing 15 mg of ractopamine/kg. The initial weight of animals was 84.77±7.20 kg and the final 110.59±7.70 kg. The assay was carried out by 28 days and the animals were conducted to slaughter. It was used a randomized block design, to control the differences of body weight. Linear reductions were observed for daily feed intake and feed:gain ratio, and linear increases in loin eye area, wholesale cuts of ham and shoulder and retail cuts of Semimembranosus and Gluteus medius and an inverse effect for fat of ham, by increasing the ractopamine concentration in diets. There was no effect on meat quality and fat acids profile of meat. A reduction on feces+urine production by animal was observed in the two weeks of ractopamine administration and a change on feces composition was noted. An increasing trend on feeding cost and a linear reduction in the net income without bonification was noted. For net income with bonification, there was a quadratic trend and better results were obtained with the estimated concentration of 4.05 mg of ractopamine/kg of diet. These results indicate that ractopamine inclusion in diets for gilts slaughtered at 110 kg of body weight is justified with bonification for lean carcass, and in this scenario, it was recomended to use 4 mg of ractopamine/kg of diet