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Estudo da intera??o entre albuminas s?ricas e mol?culas biologicamente ativas / A Study of the Interaction between Serum Albumins and Biologically Active MoleculesChaves, Ot?vio Augusto 19 July 2016 (has links)
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Previous issue date: 2016-07-19 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico - CNPq / The interactions between human serum albumin (HSA) with 18-PF, BZL, MTZ and
MZ and between bovine serum albumin (BSA) with t-DCTN, PF, LF-B, PIA and ?-lap were
studied by spectroscopic techniques (molecular absorption in the UV-Vis region, circular
dichroism, emission fluorescence in the steady state and temporal resolution) under
physiological conditions. Theoretical calculations by molecular docking were performed to
complement the experimental data and thus offer accurate to the results. The results obtained
for the fluorescence quenching rate constant (kq) is greater than the diffusion rate constant in
water (kdiff ? 5,00x109 L/mol), indicating that there is formation of complex between albumin
and biologically active molecules in the ground state (for the sample PIA we confirmed this
data with time resolved fluorescence experiments). For t-DCTN and LF-B beyond the static
mechanism it was observed the presence of dynamic fluorescence quenching mechanism.
Finally, for PF and PIA F?rster theory shows that the energy transfer between the fluorophore
and the quenchers can occurs with high probability. The thermodynamic values for Gibbs?
free energy are in accordance with the spontaneity of the association, for all the samples.
Thermodynamic parameters ?H? and ?S? provided evidence of the main intermolecular
interactions in the association. The samples 18-FP, t-DCTN, LF-B, PIA, ?-lap, BZL and MTZ
interact with albumin by hydrogen bonding and hydrophobic interactions. On the other hand,
PF and MZ interact by hydrogen bonding and electrostatic forces. The number of binding
sites shows that there is only one main cavity of the protein to the interaction. For 18-PF, PF
and LF-B the binding is weak, for t-DCTN the binding is moderate and for PIA, ?-lap, BZL,
MTZ and MZ the binding is strong. Circular dichroism results show that upon binding of
samples with the albumin there are no significant perturbations on the secondary structure of
the protein. Theoretical calculations by molecular docking are in full agreement with the
spectroscopic results / As intera??es entre albumina s?rica humana (ASH) com 18-FP, BZL, MTZ e MZ e
entre albumina s?rica bovina (ASB) com t-DCTN, PF, LF-B, PIA e ?-lap foram estudadas por
t?cnicas espectrosc?picas (absor??o molecular no UV-Vis, dicro?smo circular, emiss?o de
fluoresc?ncia no estado estacion?rio e com resolu??o temporal) sobre condi??es fisiol?gicas.
C?lculos te?ricos por ancoramento molecular (do ingl?s molecular docking) foram executados
para complementa??o dos dados experimentais e dessa forma obter resultados mais precisos.
Os resultados obtidos para as constantes de velocidade de supress?o de fluoresc?ncia das
albuminas (kq) s?o maiores do que a velocidade de difus?o em ?gua (kdiff ? 5,00x109 L/mols),
indicando que h? forma??o de um complexo no estado fundamental entre as albuminas com
as mol?culas biologicamente ativas (para amostra PIA tal dado foi confirmado com a
fluoresc?ncia resolvida no tempo). Para as amostras t-DCTN e LF-B al?m do mecanismo
est?tico foi observado ? presen?a do mecanismo din?mico e j? para as amostras PF e PIA o
c?lculo de F?rster mostra alta probabilidade de ocorr?ncia de transfer?ncia de energia entre o
fluor?foro e os supressores. Os valores termodin?micos de energia livre de Gibbs, calculados
para todas as amostras est?o de acordo com a espontaneidade da associa??o. Par?metros
termodin?micos de ?H? e ?S? forneceram ind?cios das principais intera??es intermoleculares
na associa??o. As amostras 18-FP, t-DCTN, LF-B, PIA, ?-lap, BZL e MTZ associam com a
albumina via liga??o de hidrog?nio e intera??es hidrof?bicas e j? PF e MZ por liga??o de
hidrog?nio e intera??es eletrost?ticas. O n?mero de s?tios de liga??o para todas as amostras
indicam que h? apenas uma principal cavidade da prote?na para a associa??o das mol?culas
estudadas, sendo que essa associa??o ? moderada para 18-FP, PF e LF-B, fraca para t-DCTN
e forte para PIA, ?-lap, BZL, MTZ e MZ. Estudos de dicro?smo circular demonstram que n?o
h? perturba??es significativas na estrutura secund?ria da albumina com a associa??o. C?lculos
te?ricos via ancoramento molecular est?o em total acordo com os resultados espectrosc?picos
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Estudo espectrosc?pico da intera??o entre flavon?ides e albumina s?rica bovina (ASB) / Spectroscopic study of the interaction between flavonoids and bovine serum albumin (BSA).Ribeiro, Alessandra Medeiros 19 March 2010 (has links)
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Previous issue date: 2010-03-19 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior, CAPES, Brasil. / Spectroscopic studies for several comercial flavonoids (flavone (FVA), alphanaphthoflavone (?-NAF), beta-naphthoflavone (?-NAF), thioflavone (TFA), S,Sdioxythioflavone (SDF), flavanone (FNA) and quercetin (QUE)), natural flavonoids
(biflavonoids such as agatisflavone (ATF), 7?-O-methylagatisflavone (OMA), amentoflavone
(AMF) and (DOF)) and thiochromanone (TCR) were performed in different solvents
(acetonitrile (ACN), ethanol (ETOH), cyclohexane (CEX), dichloromethane (DCM) and
milli-Q water (AD)). Irradiation of TFA, SDF and TCR in acetonitrile, employing the
nanosecond laser flash photolysis, lead to the formation of their corresponding triplet excited
state. Fluorescence emission spectroscopy studies showed that commercial and natural
flavonoids and thiochromanone are not fluorescent. UV/visible spectroscopy studies for QUE,
ATF, OMA, AMF and DOF, in the same previous solvents, revealed that for these flavonoids
the ground-state absorption spectrum in polar solvents, such as water or PBS (pH=7.4), is
completely different than the obtained in dichloromethane. This difference is more
pronounced for ATF. For DOF the absorption spectrum in water shows remarkable variations
when compared to that in PBS. The interaction between BSA and the flavonoids QUE, ATF,
OMA, AMF and DOF in PBS solution, pH = 7.4, was studied by UV/visible spectroscopy,
fluorescence emission spectroscopy, circular dicroism and molecular modelling. From these
studies it was clearly demonstrated that the interaction observed was directly dependent on the
flavonoid concentration and almost independent on temperature variation. The ground state
absorption spectrum for BSA showed a hypsochromic effect on the absorption band around
208 nm, corresponding to the n?* transition of the BSA ?-helix structure, as a function of
flavonoid concentration. Similar behavior was observed for the absorption at 280 nm,
corresponding to the tryptophan absorption in BSA. The fluorescence emission spectrum for
BSA in the presence of QUE, ATF, OMA, AMF and DOF, in PBS, at T = 22?C, 27?C, 32?C,
37?C and 42?C, shows a blue-shift on the protein emission as a function of flavonoid
concentration. These results suggest that the BSA chromophore is in a more hydrophobic
environment when compared with that sensed by the protein in the absence of the flavonoid.
In this case, quenching of BSA fluorescence (tryptophan residues) was clearly observed with
the high values obtained for the quenching rate constant kq (? 1013 to 1014 L/mol.s) indicating
a static quenching process. The distance (r) observed for the tryptophan residues and the
flavonoids was smaller than 7 nm, which indicates that there is a reasonable probability for a
non-radiative energy transfer process between tryptophan and the flavonoids, based on the
F?rster theory for energy transfer. Circular dicroism results at T = 25?C, 37?C and 42?C
revealed a significant decrease on the ?-helix percentage for BSA at 208 nm and 222 nm,
corresponding to the n?* transition for the secondary structure of BSA, as a function of
flavonoid concentration. These effects can be attributed to the formation of a complex
BSA/flavonoid which can induce conformational variations on the BSA structure. Molecular
modelling indicates that the main regions for the interaction between flavonoids and ASB are
located in hydrophobic cavities on the sub-domains IB and IIA, which contain tryptophan
residues (Trp-158 and Trp-237). A large hydrophobic cavity containing the Trp-237 is present
in the sub-domain IIA, which is responsible for the formation of the complex flavonoid-BSA
through a strong interaction flavonoid-tryptophan. / Estudos espectrosc?picos para diversos flavon?ides comerciais (flavona (FVA), alfanaftoflavona (?-NAF), beta-naftoflavona (?-NAF), tioflavona (TFA), S,S-di?xidotioflavona
(SDF), flavanona (FNA) e quercetina (QUE)), flavon?ides naturais (biflavon?ides como
agatisflavona (ATF), 7?-O-metilagatisflavona (OMA), amentoflavona (AMF) e
diidroochnaflavona (DOF)) e tiocromanona (TCR), foram realizados em diferentes solventes
(acetonitrila (ACN), etanol (ETOH), cicloexano (CEX), diclorometano (DCM) e ?gua millliQ (AD)). A irradia??o de TFA, SDF e TCR, em acetonitrila, por fot?lise por pulso de laser de
nanossegundo, levou ? forma??o de seus respectivos estados excitados triplete. Por
espectroscopia de fluoresc?ncia, verificou-se que os flavon?ides comerciais e naturais, e a
tiocromanona n?o apresentam emiss?o de fluoresc?ncia. Por espectroscopia de absor??o no
ultravioleta/vis?vel (UV-Vis) para QUE, ATF, OMA, AMF e DOF, nestes solventes,
percebeu-se que os espectros em presen?a de solventes polares, como AD, foram bem
diferentes dos espectros em DCM, principalmente, para ATF, e os espectros em solu??o de
tamp?o PBS (pH = 7,4) foram semelhantes aos em AD, exceto para DOF, apresentando
mudan?as substanciais. A intera??o entre ASB e os flavon?ides (QUE, ATF, OMA, AMF e
DOF) em solu??o tamponada (PBS, pH = 7,4) foi estudada por espectroscopia no
ultravioleta/vis?vel, espectroscopia de emiss?o de fluoresc?ncia, dicro?smo circular e
modelagem molecular sendo diretamente dependente da concentra??o adicionada de
flavon?ides e muito pouco dependente com a varia??o da temperatura. No UV-Vis ocorreu
deslocamento para o azul das bandas de absor??o pr?ximas a 208 nm (correspondente a ASB,
referente ?s transi??es n?* da estrutura ?-h?lice da albumina) e 280 nm (correspondente ao
triptofano da ASB), em fun??o do aumento de concentra??o dos flavon?ides. Na
espectroscopia de fluoresc?ncia (T = 22?C, 27?C, 32?C, 37?C e 42?C) houve deslocamento
para o azul na emiss?o da prote?na com o aumento da concentra??o dos flavon?ides,
sugerindo que o crom?foro da ASB est? em um ambiente mais hidrof?bico em rela??o ?quele
quando para ASB livre. Neste caso, observou-se supress?o da fluoresc?ncia de ASB (res?duos
de triptofano), como consequ?ncia de um processo de supress?o est?tica como demonstrado
pelos altos valores observados para kq (? 1013 a 1014 L/mol.s). A dist?ncia entre os res?duos de
triptofano e os flavon?ides (r) foi menor que 7 nm, um indicativo da grande probabilidade de
ocorrer transfer?ncia de energia entre ASB e flavon?ides, de acordo com a teoria de
transfer?ncia de energia n?o-radiativa de F?rster (Teoria de F?rster). No dicro?smo circular (T
= 25?C, 37?C e 42?C) foi verificada uma diminui??o do % de ?-h?lice da ASB em 208 nm e
222 nm (regi?es de transi??o n?* da estrutura secund?ria ?-h?lice da ASB no espectro de
absor??o UV), devido ao aumento de concentra??o dos flavon?ides. Esses efeitos podem ser
atribu?dos ? forma??o de um complexo flavon?ide-ASB que pode estar induzindo varia??es
conformacionais na ASB. Por modelagem molecular, atrav?s do programa docking, percebeuse que as regi?es principais para a liga??o dos flavon?ides com os s?tios de liga??o da ASB
est?o localizadas em cavidades hidrof?bicas nos subdom?nios IB e IIA (consistentes com os
s?tios I e II) e os res?duos de triptofano (Trp-158 e Trp-237) de ASB est?o nesses
subdom?nios, respectivamente. Existe uma grande cavidade hidrof?bica presente no
subdom?nio IIA, onde os flavon?ides podem se ligar com o res?duo de triptofano Trp-237
(melhor s?tio de liga??o), formando o complexo flavon?ide-ASB.
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Associa??o entre s?ndrome metab?lica, albumina modificada pela isquemia (ima) e biomarcadores aterotromb?ticosGottlieb, Maria Gabriela Valle 27 October 2009 (has links)
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Previous issue date: 2009-10-27 / Introdu??o: s?ndrome metab?lica (SM) ? definida como um conjunto de anormalidades aterotromb?ticas e inflamat?rias. Seus portadores apresentam predisposi??o aumentada a morbi-mortalidade por doen?as cardiovasculares (DCV) e diabetes mellitus tipo 2 (DM2). Diversos biomarcadores inflamat?rios, do metabolismo lip?dico, oxidativo e isqu?mico, ligados a fisiopatologia da SM t?m sido investigados. Recentes estudos sugerem que a albumina modificada pela isquemia (IMA) ? um biomarcador de isqu?mia e que seus n?veis elevados representam uma poss?vel indica??o de disfun??o microvascular em pacientes com SM. Objetivo: investigar a associa??o de marcadores lipidicos, oxidativos e inflamat?rios potencialmente associados a processos isqu?micos em pacientes com s?ndrome metab?lica. Material e m?todos: estudo prospectivo, do tipo caso-controle, onde foram inclu?dos 32 (30,2%) indiv?duos saud?veis (grupo controle C) e 74 (69,8%) indiv?duos com SM (grupo caso SM). Os indiv?duos com SM foram recrutados no ambulat?rio de risco cardiometab?lico do Servi?o de Cardiologia do Hospital S?o Lucas da Pontif?cia Universidade Cat?lica do Rio Grande do Sul e os saud?veis foram recrutados na Universidade Federal de Santa Maria (UFSM - alunos, funcion?rios e professores). O crit?rio diagn?stico de SM utilizado foi o NCEP-ATPIII. Glicose, colesterol total (CT), HDL e triglicer?deos (TG) foram determinados por m?todo enzim?tico colorim?trico (Ortho-clinical Diagnostics); LDL foi determinada pela equa??o de Friedwald; Prote?na C ultra Sens?vel (PCR-us) foi determinada por nefelometria, autoanticorpo anti-LDL-oxidada (anti-OxLDL) e LDL oxidada (OxLDL) foram determinadas por ensaio imunoenzimatico (ELISA); IMA foi mensurada por ensaio colorim?trico com cobalto. Resultados: a amostra incluiu 34 homens e 72 mulheres. A m?dia de idade do grupo C foi 55,2?8,8 anos e do grupo SM 57,6?8,3 anos (p=0,142). O grupo SM apresentou maior IMC (32,6?6,1 kg/m2, p=0,0001), press?o arterial sist?lica (147?26,8 mmHg, p=0,001), press?o arterial diast?lica (85,9?15,9 mmHg, p=0,01), glicose (133,7?68,7 mg/dL, p=0,001), CT (204?58,1 mg/dL, p=0,001), LDL (114,4?49,5 mg/dL, p=0,001), TG (214,9?/34,8 mg/dL, p=0,001) em compara??o com o grupo C. N?veis de IMA, PCR-us, IL-6, OxLDL e anti-OxLDL foram significativamente mais elevados (0,618?0,1355, p=0,0001; 1,72?0,964, p=0,0001; 53,20?14,52, p=0,0001; 0,662?0,461, p=0,001; 27,822?17,010, p=0,001) respectivamente no grupo SM, em rela??o ao grupo C. A an?lise multivariada mostrou associa??o entre n?veis elevados de IMA e SM e esta foi independente de sexo, idade DM2 e hipercolesterolemia (p=0,0405). Conclus?o: no presente estudo, observou-se associa??o entre IMA, biomarcadores inflamat?rios, do metabolismo lip?dico e oxidativo com SM, indicando que esses indiv?duos portadores de SM est?o mais propensos a desencadearem processos aterotromb?ticos. Estudos adicionais envolvendo intera??es gen?ticas e ambientais em pacientes com SM podem contribuir para elucidarmos o potencial papel cl?nico da IMA, para que se torne um preditor de eventos aterotromb?ticos, com vistas ? diminui??o da morbi-mortalidade cardiovascular.
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Utiliza??o intraco?gulo de espuma fibrinol?tica - prepara??o, caracteriza??o e atividade in vitro de uma espuma de estreptoquinase e proposta de uma nova abordagem terap?uticaFarret Neto, Abdo 31 March 2014 (has links)
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Previous issue date: 2014-03-31 / Foam was developed as a novel vehicle for streptokinase with the purpose of increasing the contact time and area between the fibrinolytic and the target thrombus, which would lead to a greater therapeutic efficacy at lower doses, decreasing the drug s potential to cause bleeding. Fibrinolytic foams were prepared using CO2 and human albumin (at different v:v ratios), as the gas and liquid phases, respectively, and streptokinase at a low total dose (100,000 IU) was used as fibrinolytic agent conveyed in 1 mL of foam and in isotonic saline solution. The foams were characterized as foam stability and apparent viscosity. The thrombolytic effect of the streptokinase foam was determined in vitro as thrombus lysis and the results were compared to those of a fibrinolytic solution (prepared using the same dose of streptokinase) and foam without the fibrinolytic. In vitro tests were conducted using fresh clots were weighed and placed in test tubes kept at 37 ? C. All the samples were injected intrathrombus using a multiperforated catheter. The results showed that both foam stability and apparent viscosity increased with the increase in the CO2:albumin solution ratio and therefore, the ratio of 3:1 was used for the incorporation of streptokinase. The results of thrombus lysis showed that the streptokinase foam presented the highest thrombolytic activity (44.78 ? 9.97%) when compared to those of the streptokinase solution (32.07 ? 3.41%) and the foam without the drug (19.2 ? 7.19%). We conclude that fibrinolytic foam showed statistically significant results regarding the enhancement of the lytic activity of streptokinase compared to the effect of the prepared saline solution, thus it can be a promising alternative in the treatment of thrombosis. However, in vivo studies are needed in order to corroborate the results obtained in vitro / Uma espuma foi desenvolvida como novo ve?culo para a estreptoquinase com vistas a aumentar a ?rea de contato e o tempo de perman?ncia junto ao trombo, de modo a se obter maior efici?ncia terap?utica em doses menores, diminuindo suas potenciais complica??es hemorr?gicas. A espuma fibrinol?tica foi preparada com CO2, albumina humana e estreptoquinase, em dispositivo desenvolvido para tal fim, com diferentes raz?es de fases g?s/l?quido. Ensaios de estabilidade e viscosidade aparente foram realizados para caracteriza??o das espumas e a escolha da mais est?vel. A estreptoquinase em dose total reduzida (100.000 UI) foi utilizada como fibrinol?tico veiculado em 1 mL de espuma e em solu??o salina isot?nica (0,9%). A espuma sem fibrinol?tico tamb?m foi utilizada como comparativo. Testes in vitro foram realizados utilizando-se co?gulos frescos, que foram pesados e colocados em tubos de ensaio mantidos a 37?C. As espumas com e sem fibrinol?tico e a solu??o fibrinol?tica foram testadas por aplica??o intraco?gulo em doses id?nticas atrav?s de cateter multiperfurado e pistola de inje??o. Os resultados in vitro evidenciaram atrav?s da diminui??o dos pesos dos co?gulos, que a espuma trombol?tica apresentou atividade l?tica de 44,78 ? 9,97%, enquanto as mesmas doses da estreptoquinase em solu??o salina isot?nica promoveram 32,07 ?3,41% de lise dos co?gulos. Na espuma sem fibrinol?tico a redu??o do trombo foi de 19,2 ? 7,19%. Conclui-se que a espuma fibrinol?tica apresentou resultados estatisticamente significativos no tocante ? potencializa??o da atividade l?tica da estreptoquinase, quando comparado ao efeito da solu??o preparada com solu??o salina, podendo ser uma alternativa promissora nos tratamentos das tromboses. Os dados obtidos sinalizam para necessidade de estudos in vivo para comprova??o dos obtidos nos in vitro
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