Orientador: Gilberto de Nucci / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-09T23:19:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_LaraCristina_D.pdf: 3120798 bytes, checksum: acd2f9ee25770674d89f8546b794c073 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: O 5-mononitrato de isossorbida (5-MNIS) é um nitrato orgânico comumente usado no tratamento da angina pectoris em razão de suas propriedades vasodilatadoras. No presente estudo, um novo método foi desenvolvido para determinar e quantificar o 5-MNIS no plasma humano por cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massa em série (CLAE-EM-EM), usando ionização fotospray. O 5- MNIS foi extraído de 0,5 mL de plasma humano por extração líquido-lí quido. O método teve um tempo de corrida cromatográfica de 2,0 min usando uma coluna analítica C8 (1 00 mm ×2.1 mm i.d.). Apesar do método ter apresentado uma curva de calibração não linear (20 to 2000 ng mL -1), a metodologia analítica foi completamente validada (r 2 > 0.995). Os resultados do desempenho do método indicam que o método é eficiente, robusto e suficientemente preciso e exato para a determinação de rotina do 5- MNIS em plasma humano. O método desenvolvido aqui foi empregado num estudo de bioequivalência de dois comprimidos de 5-MNIS 40 mg. O estudo de bioequivalência foi aberto, aleat orizado, com dois períodos, cruzado, com um intervalo de uma semana entre os períodos. Am bas as formulações foram bem toleradas. Os parâmetros farmacocinéticos do 5-MNIS fora m semelhantes aos descritos na literatura. Os intervalos de confiança (IC) 90% para as médias geométricas de ASC 0-t e Cmáx foram incluídos no intervalo de bioequivalência. Ba seado nas regras do FDA e Anvisa para os ensaios de bioequivalência em humanos, a bioequivalência pode ser concluída, tanto para a velocidade como para a extensão da absorção entre ambas as formulações, após administração de dose oral simples (5-MNIS 40 mg) / Abstract: Isosorbide 5-mononitrate (5-ISMN) is an organic nitrate widely used for its vasodilating properties in the treatment of angina pectoris. In the present study, a new method was developed for the determination and quantification of 5-ISMN, in human plasma, by liquid chromatography coupled with tandem mass spectrometry (LC¿MS/MS), using photospray ionization. 5-ISMN was extracted from 0.5 mL human plasma by liquid¿liquid extraction (LLE). The method had a chromatographic run of 2.0 min using a C8 analytical column (100 mm ×2.1 mm i.d.). Although the method showed a non linear calibration curve response (20 to 2000 ng mL-1), the analytical methodology was fully validated (r2 > 0.995). The assay performance results indicate that the method is efficient, robust and sufficiently precise and accurate for the routine determination of the 5-ISMN in human plasma. The method herein developed was employed in a bioequivalence study of two tablet formulations of 5-ISMN 40 mg. The bioequivalence study was conducted open, randomized, two-period, crossover, one-week washout period. Both formulations was well tolerated. Pharmacokinetic parameters of 5-ISMN was similar those described in the literature. The 90% confidence interval (CI) for the geometric mean of AUC0-t and Cmax were included into the bioequivalence range. Based on FDA and Anvisa rules for human bioequivalence trial, can be concluded bioequivalence for both, rate and extent of absorption between both formulations after single oral dose administration (5-ISMN 40 mg) / Doutorado / Doutor em Farmacologia

Orientador: Carol Hollingworth Collins / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-08-04T23:28:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ogaya_CristianeLika_M.pdf: 15229404 bytes, checksum: 166906515927a28a383b83dc7d2cea04 (MD5) Previous issue date: 2004 / Mestrado / Quimica Analitica / Mestre em Química

Orientadores: Osvaldir Pereira Taranto, Meuris Gurgel Carlos da Silva / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Quimica / Made available in DSpace on 2018-07-28T21:20:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 LimaJunior_RonaldoMendonca_M.pdf: 5494585 bytes, checksum: 4ae201fd1dfd3ed2b5cfa8859592ec2f (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: No início do desenvolvimento industrial, os subprodutos gerados no processo produtivo eram dispostos sem nenhuma preocupação com as conseqüências do impacto ambiental causado nos rios, terrenos baldios ou na atmosfera. Tais resíduos eram, em sua maioria, perigosos e causariam o aparecimento de graves doenças no ser humano, a proliferação de doenças já existentes e o aumento da taxa de mortalidade nas comunidades circunvizinhas às instalações fabris. Com o advento da cobrança, por parte da sociedade organizada, de uma postura mais responsável da Indústria frente à comunidade onde a mesma está inserida e ao meio ambiente, para evitar a ocorrência de contaminações que viessem a impactar o meio e interferir na saúde das populações circunvizinhas, os grandes grupos econômicos começaram a se preocupar com a segurança e destinação final dos seus resíduos, e os governos estabeleceram normas visando o tratamento adequado destes . Dentre os resíduos existentes, destaca-se os resíduos sólidos industriais. Atualmente, a obtenção de informações destes resíduos, constitui-se num processo lento, gerando muitas dúvidas, pois o mesmo exige a consulta às extensas listagens (8 listagens oficiais e uma não oficial) da norma NBRI0004 - Resíduos Sólidos da ABNT a qual dispõe de um fluxograma de classificação não objetivo, nem sempre conduzindo ao resultado pretendido. Este trabalho envolveu a elaboração de um software, Resíduos, no formato de banco de dados, baseado na legislação vigente no Brasil. O software Resíduos oferece, a partir de uma interface amigável com o usuário, informações sobre a identificação, classificação de resíduos sólidos, propriedades fisico-químicas dos mesmos e caracteristicas como: bioacumulação. O Software Resíduos oferece informações sobre possíveis alternativas de tratamentos, das reações que ocorrem entre várias substâncias diferentes, e sobre a incompatibilidade de dois ou mais resíduos. Todas as informações presentes no software de banco de dados Resíduos podem ser impressas através da geração de relatórios / Abstract: In the beginning of industrial development, process sub products were disposed without any preoccupation with consequences on environmental impacts upon rivers, soils or in the atmosphere. These wastes were dangerous and could cause serious diseases to the humankind, proliferation of existent diseases and increase of mortality rate in neighboring community.With the demanding, from the organized society, for more responsible behavior ofindustry about the community where it is inserted and about the environment; in order to avoid the occurrence of contamination that impacts the environment and the health of neighboring population, the big corporations began to pay attention to safety and final disposal of the their wastes, and the govemment created rules to correct treatment ofwaste. In the present days, to get information about solids wastes is a slow process, generating many doubts once it requires the consultation to the extensive lists (8 official and one non official) of NBRI 0004 norm ­Solid Residues of ABNT Norm which have one non-objective classification algorithm , not always getting at the claimed result. This work deals with the development of software, named Resíduos, which is in a data bank format, established for the Brazilian legislation. The software Resíduos (development in Delphi language) offers, through a friendly interface with the user, information about the identification and classification of solids wastes, their physic-chemical properties and characteristics such as: bioacumulation, and degradation to more hazardous substance. Besides, it supplies alternatives about possible options of treatment, about the reactions between various substances, and incompatibility of two or more residues. AlI information existent in the Resíduos data bank can be printed out as reports / Mestrado / Engenharia de Processos / Mestre em Engenharia Química

Orientadores: Denis José Schiozer, Otto Luiz Alcântara Santos / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Mecânica e Instituto de Geociências / Made available in DSpace on 2018-08-28T00:50:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Correia_CatarinadeBarros_M.pdf: 39709375 bytes, checksum: f340649615835b8ee6394fd81de2034f (MD5) Previous issue date: 2015 / Resumo: Para estimar a pressão de poros, é necessário entender os mecanismos pelos quais ela foi gerada. Dentre aqueles capazes de gerar alta pressão de poros (sobrepressão), um tem sido apontado na literatura como o mais comum, a subcompactação, entretanto, outros mecanismos, como aqueles causadores de descarregamento, podem atuar. A não identificação da sobrepressão ou a desconsideração dos efeitos causados pelos mecanismos atuantes podem resultar em erros significativos ao estimar a pressão de poros antes da perfuração. A consequência (pressão real maior que a pressão de poros estimada) pode revelar, na prática, estreitamento da janela operacional durante a perfuração, deteriorando a segurança por levar a complicadores como instabilidade das paredes do poço, kicks, perdas de circulação, dano aos revestimentos etc. Este trabalho propõe a análise crítica e aplicação de dois métodos de estimativas de pressão de poros, Eaton (1975) e Bowers (1995), discutindo suas principais premissas, vantagens e limitações, levando em conta uma sistemática de trabalho considerada compatível com o estado da arte usado em companhias de petróleo internacionais. O primeiro se baseia na ocorrência de subcompactação de formações argilosas, sua utilização é consagrada pela indústria de petróleo e suas equações são as mais utilizadas em simuladores comerciais. O segundo propõe um método gráfico para investigação da co-atuação de outros mecanismos geradores de sobrepressão. Os dois métodos foram avaliados pela estimativa de pressão de poros usando a velocidade intervalar da sísmica e perfis elétricos de poços de dois campos de petróleo em águas profundas da Bacia de Sergipe ¿ Alagoas, com foco no Cretáceo Superior da Formação Calumbi. Os resultados gerados foram analisados e comparados com os dados de pressão medida, sobretudo no Maastrichtiano e no Campaniano, mostrando, em geral, correlação muito boa ou boa nessas idades geológicas, dentro dos parâmetros de qualidade estabelecidos. Foi demonstrado, entretanto, que o Método de Eaton (aplicado, previamente, para entender o comportamento das pressões nos campos), mesmo face às limitações envolvidas, é mais simples, fácil de aplicar e de calibrar e menos dependente de medidas pontuais de perfis de leitura de porosidade para geração de curvas de pressão de poros que o Método de Bowers. Este último se mostrou instável, com exigências de aplicação e dependente de parâmetros que não tornam seu uso tão amplo, fácil e simples de interpretar quanto o de Eaton, mesmo em áreas não exploratórias / Abstract: An understanding of pressure generating mechanisms is necessary when predicting pore pressure, the mainstay of any well drilling project. Undercompaction of clay rich sediments is the most commonly cited mechanism. However, a number of others, such as those related to fluid expansion, have been proposed as capable of generating overpressures. Failure to identify or ignore the overpressure or the active mechanism may result in significant errors in pore pressure estimation. The consequence (real pressure higher than the estimated pressure) deteriorates the drilling safety, narrowing the drilling window and leading to well instability, kicks, mud losses, casing damages etc. This study proposes a critical analysis and the application of two methods for estimating pore pressure, that of Eaton (1975) and Bowers (1995), pointing the main assumptions, advantages and limitations, taking into account a systematic work considered compatible with the state of art used by international oil companies. The first one is based on the occurrence of only undercompaction, its use is established in the oil industry and its equations are the most used in commercial simulators. On the other hand, Bowers Method proposes a graphical analysis to account for other overpressure mechanisms besides undercompaction. In this study, the two methods were evaluated by pore pressure estimative using seismic velocity data and wells electric profiles from two deepwater oil fields in the Sergipe ¿ Alagoas Basin (Brazil) within the Upper Cretaceous Calumbi Formation. The results of both methods were analyzed and compared with pressure data measurements in reservoirs of Campanian and Maastrichtian ages, shown in general, very good or good correlation within the quality parameters set. Eaton¿s Method was used previously to understand the fields¿ pressure behavior of the two fields. It was demonstrated that, despite Eaton¿s apparent limitation, it is simpler, easier to apply and calibrate and less dependent on specific porosity logging measurements than Bowers¿ Method. The latter one was considered unstable, with its application dependent on parameters that do not make it as widely or simple to use and interpret as Eaton¿s method, even in oil fields in their development phases / Mestrado / Explotação / Mestra em Ciências e Engenharia de Petróleo

Orientador: Marcelo Cristianini / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-22T00:17:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Porto_BrunaCastro_M.pdf: 1622072 bytes, checksum: 6514e53552e6ebb0dd11ed91b7443580 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: A goma do cajueiro (GC) é um produto isolado do exsudado bruto do cajueiro e tem sido mencionada como uma possível alternativa a substituir a goma arábica na indústria de alimentos. A alta pressão dinâmica (APD) é apresentada como uma opção a modificação física dos polissacarídeos a fim de melhorar suas propriedades tecnológicas. Dessa forma, o trabalho teve como objetivo avaliar o efeito da APD nas características tecnológicas da GC. O exsudado bruto foi purificado e a goma caracterizada quanto à composição centesimal, potencial zeta e reologia. Em seguida GC nativa (sem processamento-controle) e processada a APD foram investigadas quanto suas características tecnológicas (solubilidade e capacidade de absorção de água (CAA) nas temperaturas 30, 60 e 90ºC, capacidade de absorção de óleo (CAO), reologia e propriedades emulsificantes) comparando-as com os resultados obtidos para goma arábica (GA). A GC apresentou 10,5% de umidade, 0,8% de cinzas, 0,9% de proteínas, 0,01% de lipídios e 87,7% de carboidratos. O ponto isoelétrico encontrado foi de 3,2. A CAA para a GC controle foi no mínimo 50% maior que a da GA em todas as temperaturas avaliadas. Entretanto, apresentou CAO 35% menor, solubilidade 4% menor e consistência inferior. A APD aumentou a solubilidade da GC em 5% a 30°C, 4% a 60°C e 12% a 90°C, e reduziu a CAA em 66% a 30°C, 44% a 60°C e 25% a 90ºC. A APD também reduziu a CAO da GC em 63%. Quanto as características reológicas, o processamento da GC por APD a 30 MPa quando comparada com a GC controle resultou em diminuição do índice de consistência (k) em 69% e elevação do índice de fluxo (n) em 16%, aproximando o comportamento ao fluxo da goma ao de um fluido Newtoniano. O efeito da APD nas emulsões produzidas com GC promoveu redução de 14% no diâmetro médio volumétrico (D4,3) e 17% no diâmetro médio de área superficial (D3,2). O potencial zeta permaneceu constante quando a GC foi processada a 20 MPa, mas reduziu quando processada a 40 MPa. A reologia das emulsões permaneceu constante, já o processamento com APD melhorou a estabilidade da emulsão (menor índice de cremeação e maior turbidez). A turbidez das emulsões aumentou em 25%. Por fim, conclui-se que a GC apresenta boa capacidade de absorção de água, alta solubilidade em água (acima de 80%), baixa capacidade de absorção de óleo e baixa viscosidade aparente mesmo em soluções mais concentradas (20% m/v) quando comparada com a goma arábica. A APD é capaz de modificar as características tecnológicas da GC (solubilidade, CAA, CAO e reologia) e melhorar suas propriedades emulsificantes (menor tamanho médio de partículas, maior turbidez e redução no índice de cremeação) / Abstract: The cashew tree gum (CG) is a product isolated by exudate of cashew tree and has been mentioned as possible replacer to arabic gum in food industry. The dynamic high pressure (DHP) is presented as option to physical modification on polysaccharides to improve their technological properties. Thus, this work aimed to evaluate the effect of DHP on technological properties of CG. The exudate was purified and centesimal composition, zeta potential and rheology of the gum were determined. After that, native CG (without processing-control) and processed at DHP were evaluated in terms of its technological properties (solubility and water absorption capacity (WAC) at 30, 60 and 90ºC, oil absorption capacity (OAC), rheology and emulsifying properties) comparing it with the results obtained from arabic gum (AG). CG presented 10,5% of moisture, 0,8% of ash, 0,9% of proteins, 0,01% of fat and 87,7% of carbohydrates. The isoeletric point encountered was 3,2. The WAC for the control CG was at least 50% higher than AG in all temperatures evaluated. However, it presented lower values regarding to OAC (35%), solubility (4%) and consistency. The DHP increased the solubility of CG in 5% at 30ºC, 4% at 60ºC and 12% at 90ºC, decreased the WAC in 66% at 30ºC, 44% at 60ºC and 25% at 90ºC. The DHP decreased the OAC of CG in 63% as well. In terms of rheological characteristics, the processing of CG by DHP at 30 MPa when compared with control CG resulted in decrease of consistency index (k) with a increment of pressure in 69% and elevation of flow index (n) in 16%, making the behavior to the gum flow closer to the Newtonian fluid. The effect of DHP on CG emulsions resulted in a reduction of 14% on average volumetric diameter (D4,3) and 17% on average superficial area diameter (D3,2). The zeta potential remained constant when the GC was processed at 20 MPa, but decreased when processed at 40 MPa. The rheology of the emulsions remained constant, but the processing with APD improved emulsion stability (lower creaming index and higher turbidity). The turbidity of emulsions increased in 25%. Finally, CG presented good WAC, high solubility (up 80%), low OAC and low apparent viscosity even in more concentrated solutions (20% w/v) when compared with arabic gum. The DHP is capable to modify the technological properties of CG (solubility, WAC, OAC and rheology) and improve their emulsifying properties (lower average particle size and creaming index and higher cloudiness) / Mestrado / Tecnologia de Alimentos / Mestra em Tecnologia de Alimentos

A azatioprina (AZA) é um imunossupressor utilizado no tratamento de doenças autoimunes como lúpus eritematoso sistêmico, doença de Crohn, doença inflamatória intestinal e contra a rejeição em transplantes de órgãos sólidos. Após mais de 40 anos de uso a AZA continua exercendo um papel central nos regimes imunomoduladores, devido ao fato de combinar eficácia, segurança e baixo custo. Sabe-se que a atividade da tiopurina metiltransferase pode determinar, pelo menos em parte, a eficácia clínica da AZA. Esta enzima apresenta polimorfismo genético co-dominante e a distribuição dos alelos variantes é significativamente diferente entre as populações. A grande variabilidade farmacocinética no metabolismo AZA justifica a sua monitorização terapêutica. Neste trabalho otimizou-se uma metodologia para a quantificação dos metabólitos da AZA, 6-TGN e 6-MMP, por cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC/UV-Vis), utilizando-se um detector de ultravioleta-visível em um único comprimento de onda, após a amostra passar por uma desproteinização ácida simples e ser aquecida para a conversão dos metabólitos em suas respectivas bases livres. Os valores destes metabólitos foram determinados em uma população de 124 pacientes transplantados renais. Para adequarmos o processo às legislações locais e internacionais, foram seguidas orientações da Anvisa, FDA e CLSI. A separação foi realizada em coluna de fase reversa, sendo a fase móvel A fosfato de potássio e a fase móvel B metanol. A detecção da 6-TGN e da 6-MMP foi realizada em 342 m (UV-Vis). O estudo da linearidade da 6-TGN variou entre 0,30 e 89,71 mol/L e da 6-MMP entre 0,30 e 93,86 mol/L. As recuperações, de 95,08 a 100,80% para 6-TGN e 95,38 a 105,06% para 6-MMP. Os CV da repetibilidade, de 0,04 a 5,06%, enquanto os CV da reprodutibilidade de 4,88 a 12,73% para 6-TGN e 6-MMP. Para ambos os metabólitos o LD e o LQ foram de 0,30 mol/L e 0,13 mol/L. Os eritrócitos lavados e as amostras tratadas, prontas para a injeção no HPLC, foram armazenadas abaixo de -5°C até a análise. Nesta temperatura estiveram estáveis durante 8 semanas e 1 dia, respectivamente. Os valores das concentrações de 6-TGN e 6-MMP encontrados nas amostras dos pacientes variaram entre não detectável a 1569 mol/8 x 108 RBC (mediana de 200,50) e não detectável a 113057 mol/8 x 108 RBC (mediana de 5166), respectivamente. As correlações entre os níveis de 6-TGN ou 6-MMP e as variáveis sexo, tempo pós-transplante, número de transplantes e dosagem de AZA (mg/kg) foram examinadas em diferentes grupos. O método proposto apresenta boa relação custo-benefício, é simples, preciso e rápido na determinação das concentrações intraeritrocitárias de 6-TGN e 6-MMP em pacientes sob terapia com AZA. O método validado permite que o laboratório forneça dados farmacocinéticos úteis e precisos para o ajuste do tratamento do paciente e pode ser facilmente adaptado para a análise rotineira destes metabólitos. Os resultados das amostras dos pacientes estão de acordo com os encontrados em outros estudos, atestando a utilidade dessa ferramenta analítica no acompanhamento dos pacientes / Azathioprine (AZA) is an immunosuppressant used in autoimmune pathologies like lupus erythematosus, Chrons disease, inflammatory bowel disease and against rejection in solid organs transplant. After more than 40 years of use, AZA continues exerting a central role in immunomodulatory regimens, due to the fact that it combines effectiveness, safety and low cost. It is well known that thiopurine methyltransferase activity may determine, at least in part, the clinical efficacy of AZA therapy. This enzyme exhibits codominant genetic polymorphism and the distribution of these variant alleles differs significantly among populations. The considerable pharmacokinetic variability in AZA metabolism justify the therapeutic drug monitoring of this drug. In this work a methodology was improved to quantify the metabolites of AZA, 6-TGN and 6-MMP, by high performance liquid chromatography (HPLC/UV-Vis) with an ultraviolet-visible detector, using a single wavelength reading, following a simple acid deproteinization and heating to convert the metabolites into their respective free bases. The values of these metabolites were determined in a population of 124 renal transplant recipients. To adequate the process to international and local legislation, Anvisa, FDA and CLSI guidelines were followed. Separation was achieved on a reversed-phase column; mobile phase A potassium phosphate and mobile phase B methanol. Detection of 6-TGN and 6-MMP was performed at 342 m (UV-Vis). Assay linearity for 6-TGN ranged from 0.30 to 89.71 mol/L and from 0.30 to 93.86 mol/L for 6-MMP. The recoveries were 95.08, 97.76 and 100.80% for 6-TGN and 104.79, 95.38 and 105.06% for 6-MMP. Repeatability CV were 3.50, 5.06, 1.09 and 0.04, 0.35, 1.58%, while reproducibility CV were 8.65, 7.18, 8.44 and 12.73, 6.40, 4.88% for 6-TGN and 6-MMP, respectively. LOQ and LOD of 6-TNG and 6-MMP were respectively 0.30 mol/L and 0.13 mol/L for both metabolites. The washed erythrocytes and the samples treated and ready for injection into the HPLC system were stored below -5 °C until analysis, at this temperature the samples were stable for 8 weeks and for 1 day, respectively. 6-TGN and 6-MMP patient analysis values ranged from non detectable to 1569 mol/8 x 108 RBC (median of 200.50) and non detectable to 113057 mol/8 x 108 RBC (median of 5166), respectively. The correlations between 6-TGN or 6-MMP levels and variables sex, time post-transplant, number of transplants and AZA dosage (mg/kg) were examined in different groups. The proposed HPLC method has a good cost-benefit ratio, is straightforward, precise, accurate and fast at the determining 6-TGN and 6-MMP concentrations in red blood cells of patients under AZA therapy. The validated method is good enough to enable the laboratory to routinely provide useful and accurate pharmacokinetic data in time to adjust patient regimens. It can be easily adopted for routine analysis of these drug metabolites. The results of patient samples are in agreement with others studies, thus certifying the usefulness of this analytical tool in monitoring of patients

Medicamentos veterinários são utilizados para promover a saúde animal, propiciar ganhos econômicos e aumentar aprodutividade da indústria de alimentos. Porém, a ausência de um programa eficiente para fiscalização e o uso de forma inadequada ou excessiva, desses medicamentos, representam uma ameaça ao consumidor, por contribuírem com a presença de resíduos em tecidos animais destinados à produção de alimentos. Esses resíduos, à longo prazo, contribuem para o aparecimento de resistência por parte dos microorganismos a antimicrobianos utilizados na prática clínica humana, além de possibilitar o desenvolvimento de reações alérgicas em indivíduos hipersensíveis. Sendo a segurança alimentar um tema cada vez mais relevante, devido à crescente busca por uma melhor qualidade de vida, e à conscientização dos consumidores quanto ao direito de adquirir produtos seguros à saúde,o objetivo desse estudo foi desenvolver método para a análise simultânea de medicamentos veterinários, que contenham em sua formulação os antimicrobianos sulfametoxazol (SMX) e trimetoprima (TMP), visando seu emprego no controle de qualidade. Além disso, constituiu escopo desse trabalho desenvolver método para determinação das sulfonamidas: sulfadiazina (SDZ), sulfametoxipiridazina (SPZ) e SMX em carne de frango, para ser empregado no controle e fiscalização de alimentos de origem animal, pelos órgãos competentes. Para o método de controle de qualidade não houve a necessidade do desenvolvimento de um preparo de amostras, sendo suficiente a realização de diluições para a quantificação dos analitos por cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC), com coluna Thermo BDS Hypersil®C18(150 mm x 4,6 mm x 5 µm) e detecção em ultravioleta (UV) a 213 nm. O método apresentou linearidade no intervalo de 5 a 70 µg mL-1para SMX e de 1 a 30 µg mL-1para TMP (r2= 0,99, para ambos compostos). O desvio padrão relativo foi = 5%, e o teste de adição de padrão indicou exatidão. Assim, o método proposto apresentou grande potencial para análise simultânea dos fármacos avaliados e representa uma simples e rápida alternativa para o controle de qualidade de medicamentos veterinários. Já para a análise de sulfonamidas em carne de frango, foi desenvolvido método, constituído pela técnica QuEChERS modificado e posterior detecção/ quantificação dosanalitos por cromatografia líquida de alta eficiência acoplada ao detector de arranjode diodos (HPLC-DAD), empregando coluna Lichrospher 60 RP-Select B (250 mmx 4,6 mm x 5 µm) a 40°C,fase móvel constituída por tampão fosfato: acetonitrila (75:25, v/v), na vazão inicial de 0,5 mL min-1, aumentando para 1,2 mL min-1. Os analitos foram detectados a 265 nm. O método apresentou seletividade, assim como linearidade na faixa de 30 a 200 µg kg-1para a SDZ e de 25 a 200 µg kg-1para o SMX e SPZ. A precisão, avaliada pela repetibilidade e pela precisão intermediária, apresentou desvio padrão relativo entre 1,4 a 14%, para os níveis baixo, médio e alto, do intervalo linear. A detectabilidade do método foi satisfatória, uma vez que os limites de detecção e de quantificação obtidos foram 10 e 25 µg kg-1, respectivamente, e o limite máximo de resíduo, preconizado pelo Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento do Brasil (MAPA) é igual a 100 µg kg-1. O procedimento de preparo de amostra QuEChERS é simples, rápido e foi empregado com sucesso na matriz estudada. Os resultados obtidos sugerem queo método desenvolvido é útil para o monitoramento de resíduos de SMX, SPZ e SDZ em amostras de peito de frango, uma vez que seu desempenho atende a todos os requisitos e critérios aceitáveis, de acordo com órgãos regulatórios como a Comunidade Européia e o MAPA, para a avaliação de resíduos em alimentos, visando à segurança do consumidor. / Veterinary drugs were used in the worldwide to promote animal health, provide economic gains and increased productivity of the foodstuffs industry of animal origin. However, the absence of an effective monitoring programand the use of excessive or inappropriate these drugs present a threat to consumers, because they contribute with the presence of residues in animal tissues destined for food production. These residues, in long term, contribute to the appearance of microbial resistance by antimicrobials used in human clinicalpractice, beyond to enable the development of allergic reactions in hypersensitive individuals. Being the food safety an issue increasingly relevant due to the increasing search for a better quality of life, and the awareness consumers about the right to purchase insurance products to health, the aim of this study was to develop a technique for quality control simultaneous analysis of veterinary drugs containing the antimicrobial agents sulfamethoxazole (SMX) and trimethoprim (TMP) in their formulations, beyond development of a method for sulfonamides analysis, sulphadiazine(SDZ), sulphamethoxypyridazine (SPZ) e sulphamethoxazole(SMX), in chicken breast, which could be used in a routine laboratory. For the method of quality control there was no need to develop a sample preparation, being sufficient the achievement of dilutions for quantification of analytes by high performance liquid chromatography, with Thermo BDS Hypersil®C18column (150 mm x 4,6 mm x 5 µm) and ultraviolet detection (UV). The quality control method demonstrated linearity in the range of 5 to 70 µg mL-1for SMX and 1 to 30 µg mL-1for TMP (r2=0.99 for both compounds). The relative standard deviation was =5%, and and test of standard addition indicated that the methodwas accurate. The proposed method shows great potential for simultaneous analysis of the drugs evaluated and represents a new alternative approach to quality control of veterinary medicines. For the analysis of sulfonamides in chicken breast, a method was developed, based on the technique QuEChERS modified using high performance liquid chromatography coupled toa diode array detector and LiChrospher 60 RP -Select B®C18 (250mm x 4.6 mm x 5 µm) columnat 40°C,mobile phase constituted by phosphate buffer:acetonitrile (75:25, v/v) at a initial flow rate of 0.5 mL min-1, increased by 1.2 mL min-1(total run time of 20 min) and detection at 265 nm. The QuEChERS method is inexpensive, fast and easy, and the extraction of the analytes of the matrix was successfully employed. In addition, the method presented linearity, in the range of 30 to 200 µg kg-1, for SDZ, and 25 to 200 µg kg-1,for SMX and SPZ. The precision, evaluated by repeatability and intermediate precision, presented relative standard deviation of1.4 to 14% forlow, medium and high levels of the linear range. The detectability of the method was satisfactory, since the limits of detection and quantitation obtained were 10 and 25 mg kg-1, respectively, and the maximum residue limit recommended by the Ministry of Agriculture, Livestock and Supply of Brazil is equal to100 mg kg-1. The procedure of sample preparation QuEChERS is simple, fast and has been successfully used in the matrix studied. The results suggest that the method developed is useful for monitoring residues of SMX, SDZ and SPZ in samples of chicken breast, since its performance meets all the requirements and criteria acceptable in accordance with regulatory guides, including the Community European and Ministry of Agriculture, Livestock and Supply of Brazil, for the evaluation of residues in foods, aiming to consumer safety. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

Este trabalho versa sobre o desenvolvimento de um polímero de impressão molecular restrito à ligação com macromoléculas por meio de revestimento com albumina (RAMIP-BSA) para a extração direta de antidepressivos inibidores da receptação de serotonina (ISRS) em plasma humano em sistema cromatográfico multidimensional. A síntese do material foi realizada em três etapas. Primeiramente os sítios seletivos foram formados empregando síntese por precipitação e os seguintes reagentes: fluoxetina, ácido metacrílico, etileno glicol dimetacrilato, 2,2 – azo-isso-butironitrila, e metanol como, molécula modelo (MM), monômero funcional (MF), etileno glicol dimetacrilato como agente de ligação cruzada (ALC), iniciador radicalar (IR) e solvente, respectivamente. A segunda etapa consitiu na formação de uma camada hidrofílica pelo recobrimento químico da superfície do material com os monômeros hidrofílicos hidróxi etil metacrilato e glicidil metacrilato. Na terceira etapa o polímero foi revestido com albumina bovina utilizando glutaraldeído como agente de ligação cruzada, formando assim uma cápsula protéica ao redor das partículas. O RAMIP-BSA obtido foi capaz de excluir cerca de 99% das proteinas por ele percoladas, além de apresentar capacidade máxima adsortiva para fluoxetina de cerca de 69 mg g-1, e comprovada seletividade à fluoxetina frente os outros fármacos ISRS. Uma coluna com o RAMIP-BSA foi empregada como fase extratora em um sistema de cromatografia líquida multidimensional para análise direta de ISRS em plasma humano. Foram construídas curvas de calibração para os fármacos venlafaxina (VEN), citalopram (CIT), fluvoxamina (FLUV), duloxetina (DUL), fluoxetina (FLUO) e sertralina (SER) utilizando um pool de plasma humano (n=6) de indivíduos que não utilizam nenhum dos fármacos. Todas as curvas apresentaram r > 0,99 na faixa linear de 20 a 500 μg L-1. A precisão e exatidão foram avaliadas com base no desvio relativo do padrão e no erro relativo respectivamente. Os limites de detecção e quantificação foram de 10 e 20 μg L-1. A recuperação absoluta foi de 85% à 93%. Todos os resultados estão de acordo com as normas do FDA mostraram-se aceitáveis de acordo com as normas do FDA. / In this work, we developed a new restricted access molecularly imprinted polymer coated with albumin (RAMIP-BSA) for the direct extraction of antidepressants receiving serotonin inhibitors (SSRIs) in human plasma in a multidimensional chromatographic system. The synthesis of the material was performed in three steps. Firstly, the selective binding sites were formed by using fluoxetine, methacrylic acid, ethylene glycol dimethacrylate, 2-2'-azoisobutyronitrile, and methanol as template, functional monomer, cross linking agent, radical initiator and solvent, respectively. In the second step, the polymer was chemically covered with a hydrophilic layer by using the monomers hydroxyethyl methacrylate and glycidyl methacrylate. In the third step, the polymer particles were coated with an albumin capsule by using glutaraldehyde as cross linker. The obtained RAMIP -BSA was able to exclude about 99% of the proteins percolated through it, with a maximum adsorption capacity of 69 mg g-1 for the fluoxetine, and good selectivity for the fluoxetine in comparison with other SSRIs. A RAMIP-BSA column was employed as extraction phase in a multidimensional liquid chromatography system for the analyses of SSRIs in human plasma samples. Validation calibration curves were constructed for venlafaxine (VEN) , citalopram (CIT), fluvoxamine (FLUV) , duloxetine (DUL) , fluoxetine (FLUO) and sertraline (SER) using pooled human plasma (n=) individuals who do not use any of drugs. The analytical curves ranged from 20 to 500 mg L-1, with correlation coefficients larger than 0.99 for all the analytes. The precisions and accuracies (intra and inter-day) were evaluated as relative standard deviation and relative error, respectively. The limits of detection and quantification were 10 and 20 mg L-1 for all the analytes. All the validation parameters are in accordance with the FDA recommendation.

Um polímero de impressão molecular restrito à ligação de macromoléculas por meio de revestimento com albumina (do inglês “restrict access moleculary imprinted polymer coated with albumine” – RAM-MIP-BSA) foi sintetizado para a análise de clorpromazina em plasma humano por injeção direta em cromatografia líquida bidimensional. Primeiramente foram colocados no meio reacional o ácido metacrílico como monômero funcional, o etileno glicol dimetacrilato como agente de ligação cruzada, a 2,2 – azo isobutironitrila como iniciador radicalar, a clorpromazina como molécula modelo e o clorofórmio como solvente. O sistema foi mantido sob agitação por 60 minutos a 60°C. Depois, adicionou-se ao meio reacional hidróxi etil metacrilato e glicidil metacrilato como monômeros hidrofílicos. Após 24 h o polímero foi recolhido, lavado, tamisado e recoberto com albumina utilizando-se glutaraldeído como agente reticulante bifuncional. O RAM-MIP-BSA foi empacotado em uma pré-coluna de HPLC (high performance liquid chromatography) de 1 cm e sua capacidade de eliminação de macromolécula foi testada obtendo-se eliminação superior a 99%. Para os demais testes a pré-coluna foi utilizada em sistema de cromatografia líquida bidimensional. A amostra é injetada e as macromoléculas são eliminadas enquanto o analito é retido. Num segundo estágio o analito é eluído e conduzido para coluna analítica. Água ultrapura e uma solução de acetonitrila:tampão acetato de sódio 0,2 mol L-1 pH 4,1 45:55 (v/v) foram empregadas como fase de extração e fase móvel respectivamente. As análises foram executadas utilizando-se um detector UV/Vis a 313 nm. Para validação analítica da clorpromazina foi utilizando um pool de amostra de plasma humano de diferentes indivíduos voluntários, fortificadas em oito níveis de concentração, contemplando assim o intervalo terapêutico de 50-300 μg L-1 segundo a FDA. O método foi linear na faixa de 30-350 μg L-1, com r > 0,99 e limite de quantificação de 30,0 μg L-1. A precisão e exatidão intra-dias e inter-dias foram avaliadas com base no desvio padrão relativo (DPR) e no erro relativo (E) respectivamente e todos os resultados foram inferiores a 15% de acordo com a FDA. A recuperação foi de 80%. / A restrict access moleculary imprinted polymer coated with albumin (RAM-MIPBSA) has been synthesized and used for direct analysis of chlorpromazine from human plasma by using bidimensional liquid chromatography. The synthesis was carried out in three steps. First, methacrylic acid (functional monomer), ethylene glycol dimethacrylate (cross-linker), 2,2 azoisobutironitrile (initiator) and chlorpromazine were dissolved in chloroform and the mixture was maintained at 60°C during 60 min. In the second step, 2-hydroxy ethyl acrylate and glycidil (both hydrophilic co-monomers) were added into the flask and the synthesis was processed during 24h at 60°C. The obtained polymer was washed several times and coated with bovine serum albumin by using glutaraldehide as cross-linker. The material presented a macromolecules elimination ability larger than 99%. It was packed in a column (4.4 x 10 mm) and used in a column switching system. Deionized water and 45:55 (v/v) acetonitrile:sodium acetate buffer (pH=4.1) were employed as extraction solvent and mobile phase, respectively. The analytical curve was built using a human plasma pool of different volunteers, added with the drug in 8 different concentrations. The method has shown to be linear in the range from 30 to 350 mg L-1, with r >0.99 and quantification limit of 30 mg L-1. Precision and accuracy were evaluated by using relative standard deviation and relative error, respectively, and all the results are in accordance with FDA recommendations. Additionally, good recoveries and selectivity were also obtained.

A produção de proteínas recombinantes é uma ferramenta essencial para a indústria biotecnológica e suporta a expansão da pesquisa biológica moderna. Uma variedade de hospedeiros pode ser utilizada para produzir estas proteínas e dentre eles, as bactérias E. coli são as hospedeiras mais utilizadas. No entanto, a expressão heteróloga de genes em E. coli frequentemente resulta em um processo de enovelamento incompleto que leva ao acúmulo de agregados insolúveis, conhecidos como corpos de inclusão (CI). Altas pressões hidrostáticas são capazes de desfavorecer interações intermoleculares hidrofóbicas e eletrostáticas, levando à dissociação dos agregados e por isso são úteis para solubilizar e renaturar proteínas agregadas em CI. O presente trabalho teve como objetivo o estudo do processo de desagregação dos CI e de renaturação das proteínas oligoméricas subunidade B da toxina colérica (CTB) e região globular da fibra adenoviral (RGFA) utilizando altas pressões hidrostáticas. A toxina colérica (CT) é composta por uma subunidade A e cinco subunidades B combinadas em uma holotoxina AB5. A CTB é a porção pentamérica não tóxica da CT, responsável pela ligação da holotoxina ao receptor gangliosídeo GM1. A fibra do adenovírus é uma proteína homotrimérica que forma parte do capsídeo viral, organizada em três regiões: a cauda N-terminal, a haste central e a região C-terminal (região globular). A RGFA se liga à proteína de membrana CAR nas células hospedeiras e promove a internalização do vírus. Os estudos apresentados neste trabalho demonstraram que a alta pressão hidrostática foi eficaz na desagregação dos CI da CTB e da RGFA. As condições de renaturação foram otimizadas utilizando-se diferentes proporções do par redox glutationa oxidada e reduzida, concentrações de agentes caotrópicos, presença de aditivos e esquemas diferenciados de compressão/descompressão daqueles previamente descritos na literatura. CTB solúvel e pentamérica foi obtida pela compressão da suspensão de CI a 2,4 kbar por 16 horas em tampão TrisHCl 50 mM pH 8,5, 1 mM de tween 20 e descompressão direta seguida de incubação em pressão atmosférica. O rendimento de renaturação da CTB solúvel e pentamérica foi de até 45 % e 288 mg de CTB/litro de cultura bacteriana. Esta proteína apresentou estrutura regular e atividade biológica. RGFA trimérica foi obtida pela compressão da suspensão de CI em tampão TrisHCl 50 mM pH 8,0 e 0,5 M de L-arginina a 2,4 kbar por 1,5 horas e 0,4 kbar por 16 horas antes da completa descompressão. O rendimento de proteína solúvel trimérica da RGFA foi de 4 %, porém não foi possível obter a atividade biológica desta proteína. / The production of recombinant proteins is an essential tool for the biotechnology industry and supports the expansion of modern biological research. Recombinant proteins can be produced by a variety of hosts and among them the bacteria E. coli is the most commonly used. However, the expression of heterologous genes in E. coli often results in an incomplete folding process that leads to the accumulation of insoluble aggregates known as inclusion bodies (IB). The application of high hydrostatic pressure impairs intermolecular hydrophobic and electrostatic interactions of proteins in solution, leading to dissociation of aggregates and is therefore useful tool to solubilize and refold aggregated proteins in IB. This work aimed to study the process of disaggregation of IB and refolding of oligomeric proteins the B subunit of cholera toxin (CTB) and the globular region of the adenoviral fiber (RGFA) using high hydrostatic pressure. The cholera toxin (CT) comprises one A subunit and five B subunits, combined in the AB5 holotoxin. The pentameric CTB is non-toxic moiety of CT which is responsible for binding to the receptor ganglioside GM1 holotoxin. The adenovirus fiber is a homotrimeric protein wich forms part of the viral capsid and it is organized into three regions: the N-terminal tail, the central rod and the C-terminal region (globular region). The RGFA binds to membrane protein CAR in host cells and promotes the internalization of virus. The studies presented here demonstrate that high hydrostatic pressure was effective in the disaggregation of the CTB and RGFA IB. The refolding conditions were optimized using different proportions of the redox couple oxidated and reduced glutathione, concentrations of chaotropic agents, presence of additives and pressure/decompression schemes distinguished from the previously described in the literature. Soluble pentameric CTB was obtained when the suspension of IB were compressed at 2.4 kbar for 16 hours in 50 mM of Tris-HCl buffer pH 8.5, 1 mM of tween 20, followed by direct decompression and incubation at atmospheric pressure. The yield of refolded soluble pentameric CTB was up to 45 % and 288 mg of CTB/ liter of bacterial culture. This protein was shown to presented regular structure and biological activity. Trimeric RGFA was obtained by compression of the suspension of IB in 50 mM of Tris-HCl buffer pH 8.0, 0.5M L-arginine at 2.4 kbar for 1.5 hours and at 0.4 kbar for 16 hours prior to the complete decompression. The yield of soluble trimeric RGFA was 4 %, however this protein did not present biological activity.