Resumo: A mancha marrom de alternaria, causada pela Alternaria alternata f. sp. citri, afeta o tangor murcote causando lesões em folhas, ramos e frutos, acarretando em desfolha e manchas que depreciam o fruto comercialmente. Os objetivos deste trabalho foram verificar o efeito do meio de cultura no isolamento, da temperatura e do fotoperíodo no crescimento micelial do patógeno, avaliar a sensibilidade do patógeno à fungicidas in vitro e estabelecer o melhor produto e dose para o controle da doença no campo. As avaliações laboratoriais constaram de avaliações de crescimento micelial, medição do tamanho de conídios, concentração de conídos/mL e avaliação de meios de culturas para isolamento do patógeno. Os resultados do teste in vitro mostraram que os ingredientes ativos trifloxystrobin, iprodione, azoxystrobin, difenoconazole, pyraclostrobin, trifloxystrobin + propiconazole e trifloxystrobin + tebuconazole inibiram completamente o crescimento micelial do patógeno. No ensaio de campo todos os tratamento foram superiores a testemunha quanto a produtividade. Concluindo que o controle da doença é recomendado independente do produto utilizado. Entre os produtos utilizados o tratamento com trifloxystrobin + propiconazole foi rentável comparando-se custo e produtividade. / Abstract: The brown spot caused by Alternaria alternata f. sp. citri, affects the Murcott tangor causing lesions in leaves, branches and fruits, defoliation and depreciating the fruit commercially. The objectives of this work went to determine the influence of temperature, media culture and sensibility several fungicides and rates in vitro and in the field. The results showed that: In in vitro test the ingredients active trifloxystrobin, iprodione, azoxystrobin, difenoconazole, pyraclostrobin, trifloxystrobin + propiconazole and trifloxystrobin + tebuconazole inhibited the micelial growth of the pathogen completely. In the field all fungicides treatments were effectives with productivity. Among the used products the treatment trifloxystrobin + propiconazole was profitable being compared cost and productivity. / Orientador: Edson Luiz Furtado / Coorientador: Wilson Story Venâncio / Banca: Nilton Luiz de Souza / Banca: Maristella Dalla Pria / Mestre

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The objective of the present work was to evaluate the physiologic quality of carrot seeds, cilantro and parsley, associated with Alternaria alternata and A. dauci under two inoculation methods, conidial suspension and restriction hidric. The isolated of A. dauci and A. alternata were obtained, respectively, of carrot plants with symptom of the disease and of seeds of each one of the species, submitted to an initial test of sanity (Blotter Test). The inoculation treatments for suspension consisted in: testifies (distilled water and sterilized), conidial suspension of A. alternata, conidial suspension of A. dauci and conidial suspension of both species (A. alternata + A. dauci). Para restriction hidric: PDA + manitol (testifies); PDA + manitol + A. alternata; PDA + manitol + A. dauci; PDA + manitol + A.alternata + A.dauci. The physiologic quality of the seeds was evaluated by a group of tests accomplished in controlled conditions of laboratory and green house. The quality of carrot seeds, cilantro and parsley is influence by the association with it would Alternaria alternata and A. dauci. The use of the inoculation of seeds through the conidial suspension is efficient in the contamination of carrot seeds for A. alternata and A. dauci. The use of the manitol, as a restritor hidric, is effective for the obtaining of seeds infected by A. dauci in the culture of the parsley. Already for cilantro seeds, both methods demonstrated satisfactory levels of infection. / O objetivo do presente trabalho foi avaliar a qualidade fisiológica de sementes de cenoura, coentro e salsa, associadas com Alternaria alternata e A. dauci, sob dois métodos de inoculação, suspensão de conídios e restrição hídrica. Os isolados de A. dauci e A. alternata foram obtidos, respectivamente, de plantas de cenoura com sintomas da doença e de sementes de cada uma das espécies, submetidas a um teste inicial de sanidade (Blotter Test). Os tratamentos de inoculação para suspensão consistiram em: tratamento testemunha (água destilada e esterilizada), suspensão de conídios de A. alternata, suspensão de conídios de A. dauci e suspensão de conídios de ambas as espécies (A. alternata + A. dauci). Para restrição hídrica: BDA + manitol (tratamento testemunha); BDA + manitol + A. alternata; BDA + manitol + A. dauci; BDA + manitol + A.alternata + A.dauci. A qualidade fisiológica das sementes foi avaliada por um conjunto de testes realizados em condições controladas de laboratório e em casa de vegetação. A qualidade das sementes de cenoura, coentro e salsa é prejudicada pela associação com Alternaria alternata e A. dauci. A utilização da inoculação de sementes através da suspensão de conídios é eficiente na contaminação de sementes de cenoura por A. alternata e A. dauci. A utilização do manitol, como um restritor hídrico, é eficaz para a obtenção de sementes infectadas por A. dauci na cultura da salsa. Para sementes de coentro, ambos os métodos demonstram níveis satisfatórios de infecção.

Call number: LD2668 .T4 1978 A43 / Master of Science

Allergic inflammatory disorders of the airway like asthma and atopic asthma are complex, often long-term diseases that generate large public health and socioeconomic footprints especially in developed countries like US, UK and Australia. In 2009, approximately 8.2%, 24.6 million people in United States were affected by asthma. Currently 235 million people are affected by asthma worldwide and about 90% of those have allergic (atopic) asthma. An important factor in patients with allergic respiratory tract diseases is sensitization to fungi. Other risk factors for asthma include inhaled allergens that irritate the airways. Up to 70% of mold allergic patients have skin test reactivity to Alternaria. Alta1, an allergen produced by A. alternata also produces a prolonged and intense IgE mediated reaction in sensitized patients. Therefore A. alternata is not only a risk factor in development of asthma but also can lead to exacerbation of severe and potentially lethal asthma than any other fungus. Despite the well-documented clinical importance of Alternaria in allergic airway diseases, little knowledge exists about the role of individual fungal genes and gene products in theses pathological states besides a small repertoire of allergens and proteolytic enzymes. Moreover, the importance of small, secreted molecules of fungal origin has not been explored whatsoever in regards to immune responses triggered by Alternaria. This study addresses the hypothesis that Alternaria derived small molecule's have immune modulatory properties. A major thrust of this project was to assess the role of Alternaria secondary metabolites that are synthesized by genes called polyketide synthases (PKS) in immune responses of lung epithelial cells. / Master of Science

[EN] ABSTRACT Alternaria brown spot (ABS), caused by the 'tangerine' pathotype of Alternaria alternata, (Fr.) Keissl. is a serious disease in several mandarin cultivars such as 'Fortune', 'Nova' and other hybrids. Although the disease is widespread in the Mediterranean Basin, the epidemiology of the disease in semi-arid conditions is unknown. Epidemiological studies were conducted during two consecutive years in Spain. The presence of inoculum was studies on leaves, twigs and fruit on affected trees, as well as weeds and leaf litter was determined. The dynamics of airborne conidia of Alternaria were studied with a spore trap and by exposing plates of the semi-selective medium ARSA. The effect of environmental factors in the incidence of ABS was studied through exposure of trap plants. Conidia of Alternaria were continuously detected throughout the period of study and pathogenic isolates were obtained in all sampling dates. Affected leaves and shoots were considered the main source of inoculum, with 15-76% of pathogenic isolates. Pathogenic isolates were also found in leaf litter and weeds of the genus Sonchus. The pathogen survived in fallen immature leaves for up to 76 days. In contrast to humid areas, infections occurred mainly in spring and autumn, on weeks with rainfall >2.5 mm and average temperature >12.5°C. The infection efficiency of the pathogen was studied by inoculating plants of 'Fortune' and 'Nova' under different combinations of temperature (8-35°C) and wetness durations (8-48 hours). Disease incidence significantly increased with leaf wetness duration over 16 hours, decreased with temperatures below 12°C or above 27°C. No infections were observed at 35ºC. The incidence did not increase after a dry period of one hour in 'Fortune' and two hours in 'Nova'. Post-infection temperature had a significant effect in the incubation period of the pathogen. The two infection models obtained, the Alter-Rater model and a simple rule system (SRS) based on temperature and rainfall were evaluated using independent infection data obtained from trap plants exposed weekly in three orchards during 2011 to 2013. Model evaluation was performed using ROC curve analysis. None of the models evaluated was appropriate to predict infections in 'Fortune', in the case of 'Nova', the SRS model had a sensitivity of 0.93 and a specificity of 0.84. This model is currently implemented in the online platform 'gipcitricos' for the integrated management of ABS in Spain. Some studies indicate that flood irrigation could increase leaf wetness duration and the subsequent risk of infection, but there are no specific studies in citrus. Values of soil moisture content, leaf wetness duration, relative humidity, temperature and rainfall were recorded in three mandarin plots with flood irrigation and three plots with drip irrigation during 2012 and 2013. The average daily leaf wetness duration was 4-8 hours with a maximum of 20-23 hours. The dynamics of leaf wetness duration was analyzed by time series ARIMA model (1,1,1). The MAE of the models was 3.17 to 3.91 hours. The increase of leaf wetness duration was not associated with flood irrigations neither in graphical analysis of the residuals and tests or interventions. The increase in leaf wetness duration was associated only with some rain events. / [ES] RESUMEN La mancha marrón causada por un patotipo del hongo Alternaria alternata (Fr.) Keissl. es un factor limitante para algunas variedades de mandarina como 'Fortune', 'Nova' y otros híbridos. La información existente sobre la epidemiologia de la enfermedad procede de las regiones húmedas de Florida, y no puede extrapolarse a las zonas semi-áridas. Por ello se inició un estudio para caracterizar la epidemiología de la mancha marrón en las condiciones de España durante dos años consecutivos. Se determinó la presencia de inóculo en las hojas, brotes y frutos de los árboles afectados, en la hojarasca del suelo y las malas hierbas. Para ello se siguió la dinámica de las conidias de Alternaria en el aire con un capturador y se realizaron exposiciones de placas con medio semi-selectivo ARSA. Se estudió también el efecto de diversos factores ambientales en la incidencia de la enfermedad a través de exposición de plantas trampa. Las hojas y brotes afectados constituyeron la principal fuente de inoculo, con 15-76% de aislados patógenos. Se detectaron también aislados patógenos en la hojarasca y en malas hierbas del género Sonchus. El patógeno sobrevivió en hojas inmaduras caídas al suelo hasta los 76 días. Se detectaron conidias de Alternaria en el aíre de forma continua. Se identificaron colonias patógenas en todas las exposiciones de medio semi-selectivo. Las infecciones de las plantas trampa se observaron principalmente en primavera y otoño, en semanas con precipitaciones >2.5 mm y temperatura media >12.5°C. Se estudió la eficiencia infectiva del patógeno mediante la inoculación de plantas de 'Fortune' y 'Nova' bajo diferentes combinaciones de temperatura (8-35°C) y duraciones de humectación foliar (8-48 horas). Se estudió el efecto de los períodos interrumpidos de humectación foliar sobre la infección y también la influencia de la temperatura en la duración del período de incubación. La incidencia de la enfermedad se incrementó con humectaciones foliares superiores a 16 horas, descendió de con temperaturas inferiores a 12ºC y 27ºC, apenas se detectaron infecciones a 35ºC. La incidencia se detuvo con un período seco de una hora en 'Fortune' y dos horas en 'Nova'. La temperatura tuvo un efecto significativo en la duración del periodo de incubación. Se evaluaron los modelos Alter-Rater y un modelo empírico simple (SRS) basado en temperatura y pluviometría con datos obtenidos en exposiciones de plantas trampa durante los años 2011 a 2013. La evaluación de los modelos se realizó mediante análisis de curvas ROC. Ninguno de los modelos evaluados se consideró adecuado para predecir las infecciones en 'Fortune'. En 'Nova', el modelo SRS permitió predecir los periodos semanales de infección con una sensibilidad de 0,93 y una especificidad de 0,84. Este modelo se ha implementado en la web 'gipcitricos' del IVIA para la gestión integrada de la mancha marrón en cítricos. Algunos estudios indican que el riego por inundación podría incrementar la duración de la humectación foliar y el riesgo de infección, pero no existe ninguna referencia específica en cítricos. Se realizó un estudio durante los años 2012 y 2013 en tres parcelas de mandarina con riego por inundación y otras tres con riego localizado. En cada parcela se registraron los valores del contenido de humedad del suelo, duración de humectación foliar, humedad relativa, temperatura y pluviometría. El promedio de la duración de la humectación foliar diaria fue de 4-8 horas y la máxima de 20-23 horas. La dinámica de la duración de la humectación foliar se analizó mediante un modelo de series temporales ARIMA (1,1,1). En los análisis gráficos de los residuos no se detectó ninguna asociación entre los riegos por inundación y la duración de humectación foliar. / [CA] RESUM La taca marró causada per un patotip del fong Alternaria alternata (Fr.) Keissl. es un factor limitant per a algunes varietats de mandarina com 'Fortune', 'Nova' i altres híbrids. La informació existent sobre l'epidemiologia de la malaltia procedix de les regions humides de Florida, i no pot extrapolar-se a les zones semi-áridas. Per això es va iniciar un estudi per a caracteritzar l'epidemiologia de la taca marró en les condicions d'Espanya durant dos anys consecutius. Es va determinar la presència d'inòcul en les fulles, brots i fruits dels arbres afectats, en la fullaraca del sòl i les males herbes. Es va seguir la dinàmica de les conidies d'Alternaria en l'aire amb un capturador i es van realitzar exposicions de plaques amb medi semi-selectiu ARSA. Es va estudiar també l'efecte de diversos factors ambientals en la incidència de la malaltia mitjançant l'exposició de plantes trampa. Les fulles i brots afectats van constituir la principal font d'inòcul, amb el 15-76% d'aïllats patògens. Es van detectar també aïllats patògens en la fullaraca i en males herbes del gènere Sonchus. El patogen va sobreviure en fulles immadures caigudes a terra fins als 76 dies. Es van detectar conidies d'Alternaria en l'aire de forma contínua. Es van identificar colònies patògenes en totes les exposicions de medi semi-selectiu. Les infeccions de les plantes trampa es van observar principalment a la primavera i tardor, coincidint en setmanes amb precipitacions >2.5 mm i temperatura mitjana >12.5°C. Es va estudiar l'eficiència infectiva del patogen mitjançant la inoculació de plantes de 'Fortune' i 'Nova' amb diferents combinacions de temperatura (8-35°C) i duracions d'humectació foliar (8-48 hores). Es va estudiar l'efecte dels períodes interromputs d'humectació foliar sobre la infecció i també la influència de la temperatura en la duració del període d'incubació. La incidència de la malaltia es va incrementar amb humectacions foliars superiors a 16 hores, va descendir de amb temperatures inferiors a 12ºC y 27ºC, a penes es van detectar infeccions a 35ºC. La incidència es va detindre amb un període sec d'una hora en 'Fortune' i dos hores en 'Nova'. La temperatura va tindre un efecte significatiu en la duració del període d'incubació. Es van avaluar les models Alter-Rater i un model empíric simple (SRS) basat en temperatura i pluviometria amb dades obtinguts en exposicions de plantes trampa realitzades en tres parcel·les durant els anys 2011 al 2013. L'avaluació dels models es va realitzar amb anàlisi de corbes ROC. Cap dels models avaluats es va considerar adequat per a predir les infeccions en 'Fortune', en 'Nova', el model SRS va permetre predir els períodes setmanals d'infecció amb una sensibilitat de 0,93 i una especificitat de 0,84. Este model s'ha implementat en la web 'gipcitricos' de l'IVIA per a la gestió integrada de la taca marró en cítrics. Alguns estudis indiquen que el reg per inundació podria incrementar la duració de la humectació foliar i el risc d'infecció, però no hi ha cap referència específica en cítrics. Es va realitzar un estudi durant els anys 2012 i 2013 en tres parcel.les de mandarina amb reg per inundació i altres tres amb reg localitzat. En cada parcel.la es van registrar els valors del contingut d'humitat del sòl, duració d'humectació foliar, humitat relativa, temperatura i pluviometria. La mitjana de la duració de la humectació foliar diària va ser de 4-8 hores i la màxima de 20-23 hores. La dinàmica de la duració de la humectació foliar es va analitzar per mitjà d'un model de sèries temporals ARIMA (1,1,1). El MAE dels models va ser de 3,17-3,91 hores. En les anàlisis gràfics dels residus no es va detectar cap associació entre els regs per inundació i la duració d'humectació foliar. Els augments en la duració de la humectació foliar es van relacionar únicament amb alguns esdeveniments de pluja. / Bassimba, DDM. (2015). Epidemiología de la mancha marrón de las mandarinas causada por Alternaria alternata. Desarrollo de estrategias de control eficientes [Tesis doctoral]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/54111

Este trabalho teve como objetivo avaliar os efeitos de diferentes doses de radiação gama no crescimento de Alternaria alternata e na produção das toxinas Alternariol (AOH) e Alternariol Monometil Éter (AME), em amostras de cereais. Como resultado, nos grãos de arroz e nas sementes girassol observou-se diminuição do número de UFC/g, proporcionalmente à dose de radiação utilizada. Nos grãos de trigo e milho, o aumento da dose, resultou-lhes aumento das UFC/g. A análise micotoxicológica revelou, nos grãos de trigo e sementes de girassol, menor produção de AOH. Já nos grãos de arroz e milho, o grupo irradiado com 5 kGy, foi o que mais produziu AOH. Resultado semelhante foi constatado em relação à produção de AME. A microscopia eletrônica de varredura possibilitou a visualização de alterações estruturais provocadas pelas diferentes doses de radiação gama. A análise dos padrões das toxinas AOH e AME irradiados, não sofreu alterações. / The present study aimed to evaluate the effects of different gamma irradiation doses on the growth of Alternaria alternata and on production of mycotoxins Alternariol (AOH) and Alternariol Monomethyl Ether (AME) in cereal samples. The results showed a significant reduction in the number of CFU/g in rice grains and sunflower seeds, which were proportional to radiation dose used. However, in corn and wheat grains was observed an increase in the number of CFU/g with the increase of gamma irradiation. The radiation doses used resulted in a reduction of AOH levels. In rice and corn grains, the production of AOH was highest in the group irradiated with 5 kGy. Similar result was obtained with relation to AME. Scanning electron microscopy made it possible to visualize structural alterations on A. alternata induced by the different g-radiation doses used. Analysis of irradiated AOH and AME toxins standards didn´t show any alteration comparing to the control group.

Este trabalho teve como objetivo avaliar os efeitos de diferentes doses de radiação gama no crescimento de Alternaria alternata e na produção das toxinas Alternariol (AOH) e Alternariol Monometil Éter (AME), em amostras de cereais. Como resultado, nos grãos de arroz e nas sementes girassol observou-se diminuição do número de UFC/g, proporcionalmente à dose de radiação utilizada. Nos grãos de trigo e milho, o aumento da dose, resultou-lhes aumento das UFC/g. A análise micotoxicológica revelou, nos grãos de trigo e sementes de girassol, menor produção de AOH. Já nos grãos de arroz e milho, o grupo irradiado com 5 kGy, foi o que mais produziu AOH. Resultado semelhante foi constatado em relação à produção de AME. A microscopia eletrônica de varredura possibilitou a visualização de alterações estruturais provocadas pelas diferentes doses de radiação gama. A análise dos padrões das toxinas AOH e AME irradiados, não sofreu alterações. / The present study aimed to evaluate the effects of different gamma irradiation doses on the growth of Alternaria alternata and on production of mycotoxins Alternariol (AOH) and Alternariol Monomethyl Ether (AME) in cereal samples. The results showed a significant reduction in the number of CFU/g in rice grains and sunflower seeds, which were proportional to radiation dose used. However, in corn and wheat grains was observed an increase in the number of CFU/g with the increase of gamma irradiation. The radiation doses used resulted in a reduction of AOH levels. In rice and corn grains, the production of AOH was highest in the group irradiated with 5 kGy. Similar result was obtained with relation to AME. Scanning electron microscopy made it possible to visualize structural alterations on A. alternata induced by the different g-radiation doses used. Analysis of irradiated AOH and AME toxins standards didn´t show any alteration comparing to the control group.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:36Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-02-13Bitstream added on 2014-06-13T18:34:58Z : No. of bitstreams: 1 colturato_ab_me_botfca.pdf: 564408 bytes, checksum: 3f2cf7349d1ab5666c1d31ddf84e982f (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A mancha marrom de alternaria, causada pela Alternaria alternata f. sp. citri, afeta o tangor murcote causando lesões em folhas, ramos e frutos, acarretando em desfolha e manchas que depreciam o fruto comercialmente. Os objetivos deste trabalho foram verificar o efeito do meio de cultura no isolamento, da temperatura e do fotoperíodo no crescimento micelial do patógeno, avaliar a sensibilidade do patógeno à fungicidas in vitro e estabelecer o melhor produto e dose para o controle da doença no campo. As avaliações laboratoriais constaram de avaliações de crescimento micelial, medição do tamanho de conídios, concentração de conídos/mL e avaliação de meios de culturas para isolamento do patógeno. Os resultados do teste in vitro mostraram que os ingredientes ativos trifloxystrobin, iprodione, azoxystrobin, difenoconazole, pyraclostrobin, trifloxystrobin + propiconazole e trifloxystrobin + tebuconazole inibiram completamente o crescimento micelial do patógeno. No ensaio de campo todos os tratamento foram superiores a testemunha quanto a produtividade. Concluindo que o controle da doença é recomendado independente do produto utilizado. Entre os produtos utilizados o tratamento com trifloxystrobin + propiconazole foi rentável comparando-se custo e produtividade. / The brown spot caused by Alternaria alternata f. sp. citri, affects the Murcott tangor causing lesions in leaves, branches and fruits, defoliation and depreciating the fruit commercially. The objectives of this work went to determine the influence of temperature, media culture and sensibility several fungicides and rates in vitro and in the field. The results showed that: In in vitro test the ingredients active trifloxystrobin, iprodione, azoxystrobin, difenoconazole, pyraclostrobin, trifloxystrobin + propiconazole and trifloxystrobin + tebuconazole inhibited the micelial growth of the pathogen completely. In the field all fungicides treatments were effectives with productivity. Among the used products the treatment trifloxystrobin + propiconazole was profitable being compared cost and productivity.

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No. of bitstreams: 1 DissFCP.pdf: 4494134 bytes, checksum: 579efc0cd432aa20fa0626c57daa20b5 (MD5) Previous issue date: 2015-03-27 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / During its evolutionary process, plants have developed biosynthetic pathways by which they produce and accumulate a wide variety of secondary compounds that receive this name because they are not directly involved in the primary processes of plant growth and development. Many of these secondary compounds are responsible for chemical protection of plants against pathogens, herbivores, competing plants, ultraviolet radiation and other environmental stresses. The production of secondary metabolites can vary quantitatively and qualitatively between individuals of the same species, between plants of different species, between organs, between stages of plant development and are under influences of environmental factors. Studies of the biological effects of these compounds represent an important tool for the development of more specific and natural pesticides that are less harmful to the environment, as well as drugs and natural preservatives for food. Myrcia splendens (Sw.) DC. is a tree species found in the Brazilian cerrado and there are few published papers dealing with this species and its secondary metabolites to act as potential natural pesticides, antioxidant and antifungal. The methodology for the extraction of secondary metabolites can determine the composition of extracts and influence the activity of them. In this sense, in the first chapter of this work investigations were carried out on the phytotoxic potential of extracts of M. splendens young leaves from two different extraction methodologies. The 2C extract had the highest overall phytotoxic activity, showing promise in the search phytotoxic substances. In the second chapter, we investigate the phytotoxic potential of extracts and fractions of mature leaves of M. splendens from the two extraction methods carried out and was identified one of the secondary metabolites possibly associated with the phytotoxicity of the most active fractions. 2B fraction had the highest total inhibitory activity and so was fractionated, resulting in 14 fractions, which were also tested in wheat coleoptile. The FM8 and FM9 fractions, which had inhibitory activity and sufficient income, were subjected to HPLC for isolation of major compound. Identification by NMR spectra revealed that the major compound is miricitrin (myricetin-3-O-rhamnoside). In the last chapter, the extracts of mature leaves of M. splendens were tested for their antioxidant potential based on their ability to react with the free radical DPPH (2,2-diphenyl-1-picrylhidrazila) and antifungal potential using the plant pathogenic fungus Alternaria alternata as the target species. Most of the extracts showed a strong antioxidant activity, especially those iv! ! extracted with more polar solvents. On the other hand, only one of the extracts (2B) showed inhibitory activity on mycelial growth of the phytopathogenic fungus tested. / Ao longo do seu processo evolutivo, as plantas desenvolveram rotas biossintéticas pelas quais produzem e acumulam uma imensa variedade de compostos secundários, que recebem este nome por não estarem diretamente envolvidos nos processos primários de crescimento e desenvolvimento vegetal. Muitos desses compostos secundários são responsáveis pela defesa química das plantas contra patógenos, herbívoros, plantas competidoras, radiação ultravioleta e outros estresses ambientais. A produção de metabólitos secundários pode variar quantitativa e qualitativamente entre indivíduos de uma mesma espécie, entre plantas de espécies diferentes, entre órgãos, entre estágios do desenvolvimento vegetal e sobre influências de fatores ambientais. Os estudos realizados sobre os efeitos biológicos destes compostos representam uma importante ferramenta para o desenvolvimento de agroquímicos naturais mais específicos e menos prejudiciais ao ambiente, bem como de medicamentos e conservantes naturais para a indústria alimentícia. Myrcia splendens (Sw.) DC. é uma especie arbórea encontrada no cerrado brasileiro e existem poucos os trabalhos publicados que tratam de investigações do potencial desta espécie e de seus metabólitos secundários para atuarem como pesticidas naturais, antioxidantes e antifúngicos. A metodologia empregada para a extração de metabólitos secundários pode determinar a constituição e rendimento dos extratos e influenciar a atividade dos mesmos. Nesse sentido, no primeiro capítulo deste trabalho foram realizadas investigações sobre o potencial fitotóxico de extratos de folhas jovens de M. splendens oriundos de duas metodologias de extração diferentes. O extrato 2C teve a maior atividade fitotóxica geral, se mostrando promissor na busca de substâncias fitotóxicas. No segundo capítulo, foi investigado o potencial fitotóxico de extratos e frações de folhas maduras de M. splendens das duas metodologias de extração realizadas e foi identificado um dos metabólitos secundários possivelmente associado à fitotoxicidade das frações mais ativas. A fração 2B apresentou a maior atividade inibitória total e por isso foi fracionada, resultando em 14 frações, que também foram testadas em coleóptilos de trigo. As frações FM8 e FM9, que possuíam atividade inibitória e rendimento suficiente, foram submetidas a CLAE para isolamento do composto majoritário. A identificação foi feita por espectros de RMN e revelou que o composto majoritário é a miricitrina (miricetina-3-O-ramnosídeo). No último capítulo, os extratos de folhas maduras de M. splendens foram testadas quanto ao seu potencial antioxidante baseado habilidade de reagir com o radical livre DPPH (2,2-difenil-1-picrilhidrazila) e antifúngico usando como espécie-alvo o fungo fitopatogênico Alternaria ii! ! alternata. A maior parte dos extratos apresentaram atividade antioxidante muito forte, especialmente aqueles extraídos com solventes mais polares. Por outro lado, apenas um dos extratos (2B) apresentou atividade inibitória no crescimento micelial do fitopatógeno testado.

Os fungos endofíticos têm sido cada vez mais pesquisados como fonte de moléculas bioativas. Neste trabalho, foram isolados fungos endofíticos de uma árvore produtora de compostos medicinais, Handroanthus impetiginosus, com o objetivo de verificar se produziam metabólitos com atividade biológica e de identificar as espécies fornecedoras de princípios bioativos. Todas as 148 cepas isoladas foram triadas segundo a atividade antimicrobiana contra Staphylococcus aureus ATCC 6538, Candida albicans ATCC 10231 e Escherichia coli ATCC 25922 pelo método do ágar em bloco. Dentre essas, cinco fungos foram submetidos a fermentação em pequena escala, em caldo Czapek, durante 15 dias, a 28°C, tanto sob agitação quanto em modo estático. Ao final desse período, as culturas foram filtradas e submetidas a extração líquido-líquido. Os extratos obtidos foram avaliados quanto à capacidade de inibir o crescimento dos micro-organismos patogênicos citados anteriormente, por teste de difusão em ágar e determinação da concentração inibitória mínima (CIM). As menores faixas de CIM observadas foram 125-250 μg.mL-¹, de Alternaria alternata, e 250-500 μg.mL-¹, de Lasiodiplodia sp. Também avaliou-se o efeito sobre a viabilidade de linhagens celulares derivadas de câncer humano de mama (MCF-7), fígado (HepG2) e pulmão (A549). Os extratos de A. alternata e de Lasiodiplodia sp. reduziram a menos que 10% a viabilidade das células tumorais MCF-7 e HepG2. O primeiro também reduziu a menos que 5% a viabilidade de células A549. Por isso, tais fungos endofíticos foram submetidos a fermentação submersa em maior escala. O extrato de Alternaria alternata e algumas de suas frações reduziram expressivamente a viabilidade das três linhagens celulares testadas. Dentre tais frações, a F3 se destacou por apresentar menores valores de IC50 para MCF-7 e HepG2 (10,28±5,22 e 9,75±1,31 μg.mL-¹, respectivamente) do que o fármaco cisplatina (21,12±1,56 e 27,15±1,73 μg.ml-¹, respectivamente). O fracionamento dos extratos por cromatografia em coluna e cromatografia líquida de alta eficiência permitiram o isolamento de dois compostos, provenientes de A. alternata, e de um produzido por Lasiodiplodia sp. Tais amostras foram analisadas por ressonância magnética nuclear, e foi identificado o composto 4-hidróxi-benzaldeído no extrato de A. alternata. Ficou comprovado que os extratos de fermentação de fungos endofíticos isolados de H. impetiginosus exerceram importante atividade biológica, reduzindo a viabilidade de células derivadas de câncer de mama, fígado e pulmão. / Endophytic fungi have been prospected as source of active metabolites. In this work, endophytic fungi had been isolated from a tree that produces medicinal compounds, Handroanthus impetiginosus, in order to check if they produce biological active metabolites and to identify the biologically active species. All the 148 strains isolated were screened by agar piece method to investigate their antibiotic activity against Staphylococcus aureus ATCC 6538, Candida albicans ATCC 10231 e Escherichia coli ATCC 25922 . Among them, five endophytic fungi were fermented on small scale. The fermentation was performed in a Czapek broth, for 15 days, 28oC, under either stirring or static conditions. After this period, the cultures were filtered and subjected to liquid-liquid extraction. The obtained extracts were tested against the microorganisms mentioned above and the cancer cells MCF-7, HepG2 and A549. The lowest minimum inhibitory concentrations (MIC) exhibited were 125-250 μg.mL-¹ (from Alternaria alternata) and 250-500 μg.mL-¹ (from Lasiodiplodia sp.) both against S. aureus . Two extracts appreciably reduced tumor cells viability and, therefore, these endophytic fungi were fermented on large scale. The extract from A. alternata significantly reduced the viability of all three cell lines tested to less than 10% and its chemical study was biomonitored. One of its fractions, F3, exhibited lower IC50 against MCF-7 and HepG2 (10.28±5.22 and 9.75±1.31 μg.mL-¹, respectively) than cisplatin, a pharmaceutical compound commercially available (21.12±1.56 and 27.15±1.73 μg.mL-¹, respectively). The extract from Lasiodiplodia sp. diminished the viability of MCF-7 and HepG2 cells to less than 10%. The partitioning of the extracts by column chromatography and high performance liquid chromatography provided two isolated compounds from A. alternata and one from Lasiodiplodia sp. The samples were analyzed by nuclear magnetic resonance technique and the compound 4-hydroxybenzaldehyde was identified for A. alternata extract. The fermentation extracts of endophytic fungi from H. impetiginosus exhibited relevant biologic activity reducing the viability of cells derived from breast, liver and lung cancer. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES