Made available in DSpace on 2015-12-06T23:45:35Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Introdução: Ha um interesse cientifico crescente na plasticidade e potencial terapeutico das celulas-tronco do tecido adiposo humano (CTTAH), celulas multipotentes e abundantes no tecido adiposo que podem se diferenciar in vitro em multiplas linhagens celulares, incluindo adipocitos, condrocitos, osteoblastos, celulas neurais, endoteliais e cardiomiocitos. O objetivo deste estudo foi verificar o efeito da AII nas CTTAH. Metodos: Celulas precursoras humanas do tecido adiposo foram obtidas de tecido abdominal subcutaneo, separadas por gradiente de centrifugacao por densidade, cultivadas, estimulados com diferentes meios de cultivo e entao analisadas. Resultados: Os resultados de citometria de fluxo evidenciaram a expressao dos marcadores CD73, CD90 e CD105, contrastando com a falta de expressao dos marcadores CD16, CD34 e CD45. A diferenciacao adipogenica, osteogenica e condrogenica tambem foi induzida, confirmando seu potencial de celulas-tronco mesenquimais in vitro As CTTAH foram capazes de se replicar em cultivo mantendo o fenotipo semelhante a fibroblastos in vitro. Quando estimuladas com os diferentes meios de cultivo verificamos que os meios contendo AII aumentaram a atividade celular e mitotica dessas celulas. Conclusao: Com a identificacao da expressao dos receptores AT1 e AT2 e sob acao da AII exogena verificou-se o aumento da atividade celular e mitotica das CTTAH / Introduction: There is a crescent scientific interest about the plasticity and therapeutic potential of adipose-derived stem cells (ASCs), multipotent and abundant cells in adipose tissue, which are able to differentiate in multiple cellular lineages in vitro, including adipocytes, chondrocytes, osteoblasts, neural cells, endothelial and cardiomyocytes. Objective: The aim of this study was verify the effect of AII on ASCs. Methods: Human adipose tissue precursor cells were obtained of subcutaneous abdominal tissue, separated by density centrifugation gradient, cultivated and stimulated with different culture media and, then analysed. Results: The results of flow citometry showed the expression of CD73, CD90 and CD105 markers, constrasting with the lack of expression of CD16, CD34 and CD45 markers. The adipogenic, osteogenic and chondrogenic differentiation were also induced, confirming its mesenchymal stem cell potential in vitro. The human ASCs were able to replicate in culture, keeping phenotype similar to fibroblasts in vitro. When stimulated with different culture media, we verified that the media containing AII increased the cellular and mitotic activity of these cells. Conclusion: With the identification of the expression of the AT1 e AT2 receptors and under AII exogenous action, it was verified the increase of cellular activity and mitotic of human ASCs. / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-12-31 / No presente trabalho foram avaliados os efeitos cardiovasculares de quatro peptídeos potenciadores de bradicinina (BPPs) em ratos espontaneamente hipertensos (SHR). Os peptídeos foram selecionados de uma família de 19 oligopeptídeos encontrados no veneno e no precursor do peptídeo natriurético do tipo C do cérebro da serpente Bothrops jararaca. Estes peptídeos foram escolhidos por suas características distintas; relativos a inibição in vitro da enzima conversora de angiotensina I (ECA) e a potenciação ex vivo da bradicinina (BK). Os experimentos foram realizados em ratos hipertensos (SHR) e normotensos (WT) acordados, com implantação de cateteres de polietileno em artéria femoral para medida da pressão arterial média (PAM) e da freqüência cardíaca (FC) e veia femoral para administração da droga. A PAM e a FC foram monitorados durante 6 horas após a injeção intravenosa dos BPPs. Os quatro BPPs mostraram efeitos cardiovasculares potentes entre as doses de 0,47 nmol/Kg e 710 nmol/Kg. O efeito anti-hipertensivo dos BPPs foi bifásico, apresentando uma redução inicial da PAM nos primeiros 20 minutos após a injeção do peptídeo (período agudo), seguida por outra queda que iniciou em 60- 80 minutos após o BPP e se manteve por até de 6 horas. A alteração da PAM máxima foi observada com o BPP-10c na dose de 71 nmol/Kg (-53 ± 6 mmHg). O BPP-7a é um fraco inibidor in vitro da ECA somática [Ki(app) ≅ 50 μM] e mostrou-se incapaz de potenciar a BK, até mesmo, em concentrações 100 vezes maior que concentrações usadas para os outros peptídeos. Contudo, o BPP-7a na dose de 14,2 nmol/Kg provocou queda máxima da PAM de -45 ± 6 mmHg em SHR. Em contraste, foi mostrado que durante a ação antihipertensiva dos quatro BPPs em SHR não houve alteração das respostas hipotensora da BK e pressora da Ang I, tanto durante o período agudo como durante o período tardio. Esses resultados indicam a participação de mecanismos ainda não esclarecidos nos efeitos cardiovasculares desses peptídeos, não podendo ser descartada a ação mediada por receptor órfão. Essas características abrem novas perspectivas para utilização dos BPPs como anti-hipertensivos. / In the present study, were evaluated the cardiovascular effects of four Bradykinin Potentiating Peptides (BPPs) in spontaneously hypertensive rats (SHR). The peptides were selected from a family of 19 proline-rich oligopeptides found either in the venom of Bothrops jararaca or derived from the C-type natriuretic peptide precursor of the B. jararaca brain. These peptides were chosen for their distinct features concerning the in vitro and in vivo inhibition of the somatic angiotensin converting enzyme (ACE), and the ex-vivo and in vivo potentiation of bradykinin (BK). The experiments were performed in conscious adult male hypertensive rats (SHR) and normotensive rats (WT), with polyethylene catheters implanted into the femoral artery for the mean arterial pressure (MAP) and heart rate (HR) measurements, and into the femoral vein for drug administration. The MAP and HR were monitored for 6 hours after the intravenous injection of BPPs. All four BPPs showed potent cardiovascular effects in the range between 0.47 nmol/Kg and 710 nmol/Kg. The anti-hypertensive effect of BPPs was biphasic, presenting an initial reduction of MAP in the first 20 minutes after the peptide injection (acute period), folowing by other fall in 60-80 minutes after BPP and maintained for even of 6 hours (late period). The maximal change on MAP was observed using the BPP-10c at a dose of 71 nmol/Kg (-53 ± 6 mmHg). Differently from the other three BPPs, the BPP-7a presented a weak in vitro inhibition of the somatic ACE [Ki(app) ≅ 50 μM], and was unable to potentiate the BK, even at concentrations 100-fold higher than the concentrations used for the other peptides. However, the BPP-7a at a dose of 14.2 nmol/Kg caused the maximum MAP fall of the -45 ± 6 mmHg in SHR. In contrast, was showed that during the BPP antihypertensive effect in SHR there were not alteration of the BK hypotensive and the Ang I pressure responses, during both acute and late periods. These results indicate the participation non elucidated of mechanisms in the cardiovascular effects caused by these peptides. The action mediated by an orphan receptor has not been discarded. These characteristics open new perspectives for the use of BPPs as anti-hypertensive drugs. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:47Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-12-31 / Objetivo: caracterizar farmacológicamente as respostas à bradicinina e outros agonistas no músculo liso não vascular (fundo do estômago) e vascular (aorta abdominal) isolados de animais nocaute B1 e B2 de cininas. Métodos: Foram isolados fundus de estômago e aorta abdominal de animais normais, nocaute B1 e animais nocaute B2; registros de contrações isométricas foram obtidos para determinação da potência e eficácia dos agonistas. Foram aplicadas doses crescentes cumulativas e não-cumulativas dos agonistas peptídicos bradicinina (BK), Des-Arg9 bradicinina, angiotensina II (AII) e endotelina-1 (ET-1). Resultados: O estudo da potência em fundus de estômago isolado de animais nocautes revelou que a afinidade dos agonistas testados, não foi alterada. Quanto ao efeito máximo, verificou-se que a ausência do receptor B1 diminuiu a eficácia da BK, porém não da ET-1 e AII. No tecido vascular, a BK mostrou-se menos eficaz em animais nocaute B1 assim como a ET-1, enquanto a AII teve sua eficácia diminuída, tanto em animais nocaute B1 como B2. As respostas à ET-1 e AII apresentaram o Emax alterado nos animais nocautes o qual foi revertido em nocaute duplo B1 e B2. Conclusão: A verificação de que a afinidade relativa dos agonistas testados, no estômago isolado de camundongos nocautes B1 e B2 não foi alterada significativamente em relação à determinada em animais WT, sugeriu que neste tecido não ocorrem interações entre os receptores que afetariam a ligação dos agonistas ao seu receptor. Entretanto a redução na contração máxima induzida pela BK no animal nocaute B1 poderia estar relacionada com o elevado nível de óxido nítrico (NO) endógeno encontrado no fundus de estômago desse animal. Porém, L-NAME (inibidor da NO sintase) não afetou o Emax da BK, descartando essa hipótese. Considerando-se que heterodimerização entre os receptores B1 e B2 ocorre nas células do estômago, a falta de B1 teria favorecido a homodimerização do B2, que leva à ativação e dessensibilização, induzindo a taquifilaxia mais acentuada para a BK, e a redução do Emax. Para o caso da AII, que mostrou ter a afinidade e a eficácia mantidas nos nocautes, mas a taquifilaxia atenuada no KOB1 e no KOB2 poderia ser atribuída ou a heterodimerização entre os receptores B2 e AT1 no KOB1 ou a homodimerização entre os receptores AT1 no KOB2. Quanto à aorta abdominal, esta se mostrou sensível à BK, mas não a DBK que não induziu resposta no WT e nos nocautes, sugerindo que este receptor não seria expresso. Entretanto aorta isolada de KOB1 teve a sensibilidade drasticamente reduzida à BK que é mediada pelo receptor B2 indicando expressão funcional importante do receptor B1 nesta preparação. Quanto a ET-1, a eficácia diminuída somente no animal KOB1 poderia ser devida à interação cruzada do receptor da ET-1 com o B2, que deixaria de dimerizar com o B1. A AII teve sua eficácia diminuída nos animais KOB1 e KOB2, sugerindo que heterodimerização entre estes receptores e também destes com o AT1 da AII poderia ocorrer, favorecendo a ação da AII. Os resultados obtidos no fundus do estômago e na aorta abdominal sugerem importância na expressão funcional simultânea dos receptores B1 e B2 em ambas as preparações, e interferência nos mecanismos de transdução de sinais, afetando a contração e relaxamento de músculos lisos vascular e não-vascular. / Purpose: to pharmacologically characterize the responses to bradykinin (BK) and other agonists in non-vascular (stomach fundus) and vascular (aorta) smooth muscles isolated from kinin B1 and B2 receptor knockout mice. Methods: stomach fundus and aorta were isolated from normal , B1 knockout and B2 knockout animals; isometric contraction recordings were obtained for potency and efficacy determinations of agonists; cumulatively and non-cumulatively increasing doses of agonists such as BK, desArg9BK (DABK), angiotensin II (AII) and endothelin (ET-1) were applyied. Results: Potency (pD2) values determined in stomach fundus of WT and KO animals revealed that the affinity of agonists was maintained. Concerning the maximal effect induced by agonists, the efficacy of BK, but not AII and ET-1 was reduced in KOB1 animals. In the vascular tissue, BK was shown to be less efficient in KOB1 and KOB2 than in WT. The responses to AII and to ET-1 were reduced in KOB1 animals but it was reverted in KOB2 animals. In addition, stomach from KOB1 was found to be impaired to relax to sodium nitroprusside whereas the relaxant response was inaltered in KOB2, indicating that the deletion of B1 receptor led to important changes in the Ca regulation mechanism. Conclusions: The finding that the relative affinity of the agonists was not affected in stomach from knockout animals suggested that in this tissue there is no cross talking between kinin receptors and other agonist receptors. However the reduction in the maximal response to BK1 receptor might favoured the homodimerization of B2, which lead to activation and dessensitization, inducing an accentuated tachyphylaxis to BK and also the reduced maximal effect. In the case of AII, which showed a high affinity and efficacy, but the tachyphylaxis was attenuated in knockout animals, it can be suggested that there was formation of homodimers of B2 receptors rather than heterodimers between kinin B2 and AII AT1 receptors due to the absence of B1 receptors. Concerning BK- but not DABK induced effect in abdominal aorta in normal and knockout animals, indicated that B1 receptors would not express in this tissue. But the drastic reduction in change in sensitivity of the aorta towards BK-induced contraction suggested that B1 receptor should be mediating kinin mediated effect. The finding that the efficacy of ET-1 was reduced in KOB1 whereas that of AII was affected in aorta of the two knockout animals suggest that there must be cross talk between kinin receptors and of ET-1 and AII or between signal transduction activateed by these agonists. It is concluded that B1 and B2 receptors in stomach fundus and in abdominal aorta both receptors play important role for functional expression of kinins and that they are involved in the mechanisms of cell signaling, affecting the vascular and non-vascular smooth muscle contraction and relaxation. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2014-12-05T18:41:17Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) silvia_freitas_ioc_dout_2006.pdf: 3551773 bytes, checksum: 52ef4c6e19aa2a11b6ec96ba18acbc3f (MD5) Previous issue date: 2014-11-18 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A hipertensão arterial (HA) é uma doença multifatorial cuja presença de fatores genéticos e ambientais contribuem para a sua expressão. Estudos epidemiológicos sugerem que variantes genéticas, principalmente as descritas nos genes do angiotensinogênio (AGT), enzima conversora de angiotensina (ECA), receptor tipo 1 de angiotensina II (AGTR1), aldosterona sintetase (CYP11B2) e do receptor de mineralocorticóide (RM), podem contribuir para o desenvolvimento da HA. Entretanto, estudos de associação de polimorfismos genéticos e a HA têm apresentado resultados conflitantes em diferentes populações. Este cenário pode se um reflexo da modulação variável do fenótipo, causado pela interação entre o perfil genético do indivíduo e fatores ambientais. Neste trabalho, estabelecemos como objetivos avaliar a associação entre os polimorfismos AGT*M235T, ECA*AluI/D, AGTR1*A1166C, CYP11B2*C344T, RM*G3514C e RM*A4582C; e fatores clínicos/antropométricos (gênero, idade, etnia, índice de massa corporal [IMC], fumo e consumo de bebidas alcoólicas), para o desenvolvimento do quadro hipertensivo em duas populações brasileiras Para este estudo foram avaliados 205 indivíduos (90 hipertensos e 115 normotensos) provenientes do município do Rio de Janeiro/RJ e 160 indivíduos (82 hipertensos e 78 normotensos) do município de Santa Isabel do Rio Negro/AM. A caracterização genotípica foi conduzida com auxílio da técnica de reação em cadeia da polimerase, enquanto que a caracterização clínica foi realizada através de entrevista e exame clínico. A contribuição dos polimorfismos genéticos e dos fatores clínico-antropométricos na variação da pressão arterial foi avaliada pelo cálculo de ODDS Ratio e por regressão linear \2013 stepwise. Os resultados obtidos no Rio de Janeiro indicaram que os genótipos AGT*235T/235T, AGTR1*1166A/1166A, AGTR1*1166A/1166A, CYP11B2*344T/344T e RM*4582C/4582C apresentam maior suscetibilidade para a hipertensão (p < 0,05). Além disso, combinações haplotípicas entre estes polimorfismos contribuem para um aumento gradual no risco de desenvolver HA (p < 0,05). Nesta população, os fatores idade, IMC e etnia também foram relacionados com elevados níveis pressóricos (p < 0,05) As análises clínicas e genéticas realizadas na amostra de Santa Isabel do Rio Negro/Amazonas mostraram que a elevação da pressão arterial foi favorecida pelos genótipos ECA*AluD/AluD, RM*4582C/4582C, e pela idade e o consumo de bebidas alcoólicas (p < 0,05). Com base nestes resultados concluímos que o perfil genético associado a fatores antropométricos contribui para o desenvolvimento da HA, entretanto o peso individual destes fatores varia entre diferentes populações / Essential hypertension (EH) is a m u ltifactorial disease triggered by several genetic and m u ltiple environm ental factors. Epidem iological studies have suggested that genetic variants, including those of the genes for a ngiotensinogen (AGT), angiotensin-converting enzym e (ACE), angiotensin II receptor type 1 (AGTR 1 ), aldosterone synthase (CYP11B2) and m i neralocorticoid receptor (MR), can incr ease the risk for EH. However, associative studies am ong polym orphic form s of these gene s and EH have showed conflicting results in different populations. This scenario m a y be reflecting the variable im pact of the genetic background of populations and the interaction of environm ental factors, which can be m odulating this m o lecular background. In this work, we aim e d to investigate the association am ong AGT*M235T, ACE*A lu I/D, AGTR 1 *A1166C, CYP11B2*C344T, MR*G3514C and MR*A4582C genetic m a rkers and clinical/anthropom etrical factors (gender, age, ethnical profile, body m a ss inde x [BMI], sm oking and alcohol consum ption), with essential hypertension in two Brazilian population. In this study, 221 individuals from Rio de Janeiro/RJ (106 hypertensives and 115 norm o tensives), and 160 from Santa Isabel do Rio Negro/AM (82 hyperten sives and 78 norm o tensives) were evaluated. Genetic determ ination was conduced by polym erase chai n reaction, while clinical/anthropom etrical characterization was realized through clini cal exam ination. The influence of genetic polym orphism s on blood pressure variation wa s assessed by analysis of ODDS Ratio and stepwise linear regression. Results from Rio de Janeiro sam p le indicated an increase in risk for hypertension associated with AGT*235T/235T, AGTR 1 *1166A/1166A, AGTR 1 *1166A/1166C, CYP11B2*344T/344T, MR*4582C /4582C genotypes (p < 0.05). Moreover, genotype com b inations contribute to an increased EH risk (p < 0.05). In RJ sam p le, clinical/anthropom etrical factors as ag e, BMI and ethnical profile were associated to raise blood pressure (p < 0.05). The clinical -genetics analysis in Santa Isabel do Rio Negro/Am azon sam p le indicates that in crease of blood pressure was favoured by ACE* Alu D/ Alu D and MR*4582C/4582C genotypes, a nd advanced age and alcohol v consum ption (p < 0.05). Our findings suggest that unfavorable genetic patterns com b ined with clinical/anthropom etrical factors contri bute to EH developm ent, however, the single influence im pact of each factor vary am ong populations.

O exercício físico modula o sistema renina angiotensina (SRA), que tem um importante papel na fisiologia cardíaca, especialmente na promoção da hipertrofia cardíaca. O SRA pode ser dividido em dois eixos principais: o eixo clássico – representado pelo receptor AT1 (AT1R) ativado pela angiotensina II (ANG II) – e o eixo alternativo – que é ativado pela interação da angiotensina 1- 7 (ANG 1-7) com o receptor MAS (MASR). O balanço entre os eixos do SRA pode determinar um remodelamento cardíaco fisiológico ou patológico. Estudos têm demonstrado que altos volumes de exercício físico podem desencadear possíveis efeitos deletérios ao sistema cardiovascular. Neste contexto, nosso objetivo foi avaliar a hipertrofia cardíaca, o eixo clássico e o eixo alternativo do SRA no miocárdio de camundongos submetidos a variados volumes e intensidades de treinamento em natação. Para tal, camundongos balb/c foram divididos em três grupos: (I) sedentário (SED), (II) treinados 2x ao dia (T2) sem sobrecarga e (III) treinado 3x ao dia com sobrecarga de 2% do peso corporal (T3), totalizando 6 semanas de treinamento efetivo. Ambos os grupos treinados desenvolveram hipertrofia cardíaca, sem diferença nos níveis de fibrose. Bioquimicamente, observamos um aumento nos níveis do receptor MASR somente no grupo T2, enquanto que os níveis de AT1R aumentaram somente no grupo T3. Contudo, não foi observada alteração na concentração dos peptídeos ANGI, ANGII e ANG 1-7 no tecido cardíaco entre os grupos. Além do mais, o grupo T3 demonstrou um aumento na expressão de miosina de cadeia pesada- β em comparação ao grupo SED e redução da expressão da isoforma- @ em relação ao grupo T2. Em conclusão, nossos resultados sugerem que ambos os protocolos de exercício promoveram uma hipertrofia cardíaca semelhante, mas o protocolo com maior volume e intensidade promoveu uma ativação diferencial dos receptores do SRA e reativação de genes fetais. Estudos que avaliem protocolos com maior duração são necessários para esclarecer se estas mudanças representam uma ativação precoce dos mecanismos relatados para o desenvolvimento de um fenótipo com características patológicas. / Exercise promotes physiological cardiac hypertrophy and induces the activation of the renin angiotensin system (RAS), which plays an important role in cardiac physiology, both through the classical axis – represented by the angiotensin II receptor type 1 (AT1) activated by angiotensin II (ANG II) – and the alternative axis – which is activated by the angiotensin 1-7 interaction with the MAS receptor. However, very intense exercise protocols could have deleterious effects on the cardiovascular system. In this context, we aimed to analyze the cardiac hypertrophy phenotype, as well as the classical (ANGII/AT1) and alternative (ANG1-7/MAS) RAS axes, in the myocardium of mice submitted to varying volume and intensity swimming exercises for the development of cardiac hypertrophy. To this end, male balb/c mice were divided into three groups: (I) sedentary (SED), (II) swimming twice a day (T2) without overload, and (III) swimming three times a day with a 2% body weight overload (T3), totaling six weeks of training. Both training groups developed cardiac hypertrophy. Interestingly, we observed an increase in MAS receptor levels only in group T2, while AT1 levels increased only in group T3. However, no change was observed regarding the levels of angiotensin peptides ANG-I, ANG-II, and ANG1-7, in either group. In addition, group T3 displayed a higher expression of myosin heavy chain-β (MHC-β) and lower expression levels of the alpha isoform (MHC-@). Fibrosis was not observed in any of the groups. In conclusion, our results suggest that both exercise protocols promoted a similar cardiac hypertrophy phenotype, but the protocol applying increased volume and intensity resulted in differential activation of RAS receptors and fetal gene reactivation. Studies applying longer duration protocols could elucidate if these changes represent early activation of mechanisms related to hypertrophy development with phenotypic pathological characteristics.

Made available in DSpace on 2016-12-23T13:50:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 1 Capa Resumo.pdf: 251988 bytes, checksum: d44ec2a18c4d2d0ca8e66df9332e658c (MD5) Previous issue date: 2005-05-31 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / ApoE-/- knockout mouse is a model for studies of hypercholesterolemia, which is characterized by developing atherosclerotic lesions mainly in great arterial vessels such as the aortic arch, which is a site of baroreceptor nerve endings. In addition, it is known that angiotensin affects the atherosclerotic process and baroreflex sensitivity. Thus, the aim of this study was to evaluate morphological changes in the aortic arch in ApoE-/- mice with renovascular hypertension. Male (12-14 weeks old) C57 and ApoE-/- mice received a clip (0.12mm) on the renal artery to induce renovascular hypertension (C57-HT, N=11; ApoE-HT, N=11) and were compared with age-matched sham mice (C57-Sham, N=11; ApoE-Sham, N=11). After 28 days, mean arterial pressure (MAP) measured in conscious animals was higher in C57-HT and ApoE-HT (128±3 and 126±3 mmHg) than in their respective controls (103±2 and 104±2 mmHg, p<0.05). The animals were euthanized and perfused with a fixative solution at pressure equal to the MAP observed in each animal. The cross section area of the aortic arch was greater in C57-HT and ApoE-HT (0.76±0.05 and 0.73±0.03 mm2) than in their respective controls (0.64±0.02 and 0.63±0.03 mm2, p<0.05). The wall vessel area was also greater in these hypertensive groups (0.18±0.01 and 0.19±0.01 mm2) than in the normotensive groups (0.15±0.01 and 0.17±0.01 mm2, p<0.05). Consequently, the lumen vessel area followed the same results. In conclusion, our data indicate that at least at the early stage of atherosclerosis the remodeling process is not yet observed in the ApoE-/- mouse. Renovascular hypertension by itself leads to a positive remodeling of the aortic arch, which is aggravated by the association with atherosclerosis when compared with the C57 control. / O camundongo knockout para apolipoproteína E (apoE-/-) é um modelo para hipercolesterolemia e aterosclerose, cujas lesões se localizam principalmente nas grandes artérias. Sabe-se também que este processo é afetado pela angiotensina II. Por isto, o objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos da aterosclerose e da hipertensão renovascular sobre a morfologia do arco aórtico, um dos sítios das terminações barorreceptoras. Camundongos, machos, 12-14 semanas de idade, C57 e apoE-/- foram submetidos a estenose da artéria renal, para produção da hipertensão 2-rins e 1-clipe (2R1C; n=11 por grupo) e comparados com os respectivos controles (Sham, n=11 por grupo). Após 28 dias, a pressão arterial media (PAM), no animal acordado, foi maior nos grupos C57-2R1C e apoE-2R1C (128±3 e 126±3 mmHg) do que nos seus controles (103±2 e 104±2 mmHg, p<0,01, ANOVA). Em seguida, os animais foram sacrificados e perfundidos, sob pressão equivalente à PAM de cada animal. A área de secção transversa do arco aórtico foi maior no grupo C57-2R1C (0,75±0,05 mm2) do que no grupo C57-Sham (0,65±0,02 mm2, p<0,01, ANOVA), enquanto que no grupo apoE-2R1C verificou-se uma tendência a maiores valores do que nos apoE-Sham (0,73±0,03 vs. 0,68±0,04 mm2) e um aumento significante quando comparado com os C57-Sham (p<0,05, ANOVA). A área de parede vascular também foi maior nos grupos hipertensos (C57: 0,18±0,01 e apoE: 0,19±0,01 mm2) do que nos grupos controles (C57: 0,15±0,01 e apoE: 0,17±0,01 mm2, p<0,05, ANOVA). A área do lúmen apresentou valores que seguiram o mesmo padrão da área de secção transversa. Os dados indicam que a hipertensão 2R1C, por si só, causa um remodelamento positivo (alargamento compensatório) no arco aórtico de camundongos C57. Além de que no estágio inicial da aterosclerose, a associação desta hipertensão agrava o processo de remodelamento de maneira significativa quando comparado com o controle C57.

Pré-eclâmpsia (PE), uma síndrome sistêmica da gestação caracterizada por proteinúria e hipertensão, está associada a uma significativa mortalidade tanto materna quanto fetal. Eentretanto, sua fisiopatologia ainda não é totalmente compreendida. Apesar de um expressivo aumento da atividade do sistema renina-angiotensina (SRA) na gestação normal, a pressão arterial não aumenta. Além disso, a redução da pressão de perfusão intra-uterina promove um aumento na liberação de espécies reativas de oxigênio que podem contribuir para a hipertensão na gestação. Dessa forma, o objetivo deste trabalho foi estudar o papel do SRA vascular, assim como, do estresse oxidativo plasmático, cardiorenal e placentário para a regulação cardiovascular materna em ratas normotensas e em modelo de PE induzida por L-NAME. Foi observado um aumento da pessão arterial em animais que receberal L-NAME. As ratas grávidas + L-NAME apresentaram um menor ganho de massa corporal durante a gestação, menor múmero de filhotes vivos, maior número de abortos, menor massa placentária total e fetos com menor massa corporal. Foi observada uma redução na resposta vasodilatadora induzida por acetilcolina (ACh) e angiotensina (Ang) II, aumento na resposta vasodilatadora induzida por nitroglicerina (NG) e aumento na resposta vasoconstritora induzida por fenilefrina (Phe) e Ang II em LAM de ratas grávida e não grávidas que receberam L-NAME. Não foi observada diferença na expressão dos receptores AT1 e AT2 e das enzimas ECA, ECA2 e eNOS. Foi observado um aumento na concentração plasmática de renina e bradicinina (BK) em ratas grávidas + L-NAME e uma redução na concentração de Ang 1-7. As ratas grávidas e grávidas + L-NAME apresentaram um aumento nos níveis séricos de estradiol. Os níveis de malondialdeído e carbonilação de proteínas estava aumentados e a atividade das enzimas antioxidantes SOD e GPx estavam reduzidas em ratas grávidas e não grávidas que receberam L-NAME. A atividade da CAT não apresentou diferença entre os grupos. Em conclusão, uma redução na vasodilatação induzida pela Ang II associada a um aumento da vasoconstrição promovida por este peptídeo, sugerem uma contribuição do SRA no desenvolvimento das complicações características da PE observadas no modelo experimental de PE induzido por L-NAME. Do mesmo modo, a peroxidação lipídica e oxidação de proteínas aumentadas, assim como, as atividades enzimáticas antioxidantes reduzidas sugerem a contribuição de uma defesa antioxidante comprometida e um dano oxidativo aumentado para o desenvolvimento da hipertensão e disfunção endotelial, aumento da mortalidade fetal e retardo do crescimento intra-uterino observados no modelo de PE estudado. / Preeclampsia (PE), a systemic syndrome of pregnancy characterized by proteinuria and hypertension, is associated with significant morbidity and mortality to both mothers and fetuses, however its causes have not been completely clarified. Despite an expressive increase in renin-angiotensin system (RAS) activity in the normal pregnancy, blood pressure does not increase. Nevertheless, the role of RAS in PE is not well known. In PE, the reduction in intrauterine perfusion pressure promotes an increased release of reactive oxygen species, which may contribute to hypertension in pregnancy. In the present study, we investigated the role of the vascular RAS and the plasmatic, cardiorenal and placental oxidative stress to maternal cardiovascular regulation on normal pregnancy and in a animal model of preeclampsia which was induced by L-NAME. The bood pressure was increased in animals which received L-NAME. Pregnant + L-NAME rats had fat loss during pregnancy, increased number of death fetus, decreased number of fetus alive, lower total placental mass and lower pups weight. The vasodilator effect of acetylcholine (Ach) and angiotensin (Ang) II was reduced in pregnant + L-NAME and non-pregnant + L-NAME, otherwise, the vasodilator effect of nitroglycerine (NG) and the vasoconstrictor effect of phenilephrine (Phe) and Ang II were increased. The expression of AT1, AT2, ACE, ACE2 and eNOS were no significantly different among the four groups. The plasma levels of renin and bradykinin (BK) were increased in pregnant + L-NAME rats, while Ang 1-7 was reduced. The serum estradiol was increased in pregnant and pregnant + L-NAME rats. The levels of malondialdehyde and protein carbonyls were increased and activities of antioxidant enzymes SOD and GPx were lower in pregnant + L-NAME and non-pregnant + L-NAME animals, but CAT did now show significant difference among the four groups. In conclusion, the reduced vasodilator responde of Ang II associated to increased vasoconstrictor response of this peptide, suggest that RAS contribute to development of preeclampsia-like characteristics in this model of PE. Similarly, the increase of lipid peroxidation and protein oxidation, as the reduction of antioxidant activity suggest the involvement of a deficient mechanism of antioxidant defense and an increased oxidative damage contributing to development of hypertension, endothelial dysfunction, high fetus mortality and intrauterine growth restriction observed in this model of PE.

Orientador: Prof. Dr. Vani Xavier de Oliveira Junior / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do ABC, Programa de Pós-Graduação em Ciência & Tecnologia - Química, 2015. / A malária é uma doença infecciosa aguda, causada por protozoários do gênero Plasmodium. Devido à resistência a fármacos antimaláricos adquirida pelo plasmódio, torna-se importante o desenvolvimento de alternativas para o tratamento, uma dessas é o uso de peptídeos. A ação antiplasmódica da angiotensina II e de seus análogos foi relatada, demonstrando a capacidade desses em inibir o desenvolvimento do Plasmodium gallinaceum em mosquitos Aedes aegypti. Para proteger os peptídeos da ação de proteases e promover uma liberação prolongada no organismo, podem ser utilizados co-polímeros sintéticos termorreversíveis. O presente trabalho tem como objetivo o encapsulamento dos análogos antiplasmódicos da angiotensina II, com a preparação de formulações para liberação prolongada de peptídeos, visando a administração intramuscular. Os peptídeos foram sintetizados em fase sólida, pela estratégia Fmoc, purificados por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência e caracterizados por Espectrometria de Massas. A administração intramuscular de peptídeos livres em pintainhos, para avaliar a atividade antimalárica, não foi satisfatória, uma vez que infectados a partir da picada do mosquito, todos os animais apresentaram malária. Para encapsulamento dos peptídeos, os sistemas poloxamer-peptídeos foram preparados por dispersão direta (na concentração de 2 mg/g de gel) nas soluções de poloxamer 407 isoladamente ou em sistemas binários com poloxamer 403 ou poloxamer 188. A caracterização dos sistemas foi realizada por espectroscopia de correlação de fótons. A 25°C, as formulações com os peptídeos encapsulados apresentaram diâmetro médio que variou entre 33 ¿ 197 nm e, a 37°C, o diâmetro variou entre 21 ¿ 40 nm. Os resultados obtidos nos ensaios de liberação mostraram que o fluxo de liberação para as formulações de poloxamer foram menores que o valor obtido para o peptídeo livre indicando que os sistemas podem ser modelos eficientes de liberação para essa classe de compostos. / Malaria is an acute infectious disease caused by protozoa of the genus Plasmodium. Due to resistance to antimalarial drugs acquired by Plasmodium protozoa, it is important to develop alternatives for the treatment, one of them is the use of peptides. The antiplasmodial action of angiotensin II and its analogs has been reported, it demonstrates their capacity to inhibit the development of Plasmodium gallinaceum in Aedes aegypti mosquitoes. In order to protect the peptides from protease action and promote slow release in the organism, thermoreversible synthetic copolymers can be used. This study aims the encapsulation of the antiplasmodial analogs of angiotensin II by the preparation of formulations for slow release of peptides aiming intramuscular administration. The peptides were synthesized by solid phase method by Fmoc strategy, purified by High Performance Liquid Chromatography and characterized by mass spectrometry. Intramuscular administration of peptides in chickens aiming the evaluation of the antimalarial activity was not satisfactory and all animals had malaria. For the encapsulation of peptides, the peptide-poloxamer systems were prepared by direct dispersion (at 2 mg/g of gel) in solutions of poloxamer 407 or in binary systems with poloxamer 403 or poloxamer 188. The systems characterization was performed by photon correlation spectroscopy. At 25°C, the formulation showed an average diameter ranging 33 - 197 nm and at 37°C, the diameter ranged 21- 40 nm. The results of the release tests showed that the flow of release for poloxamer formulations were lower than the value obtained for free peptide indicating that these systems are an effective model for this class of compounds.

Orientador: Prof. Dr. Vani Xavier de Oliveira Junior / Tese (doutorado) - Universidade Federal do ABC. Programa de Pós-Graduação em Ciência e Tecnologia/Química, 2015. / Plasmodium gallinaceum, por Maciel e colaboradores, iniciaram-se estudos para viabilizar a sua possivel utilizacao como farmaco. Nosso grupo de pesquisa sintetizou e testou alguns peptideos derivados da angiotensina II, dos quais foram obtidos trabalhos com resultados promissores. Com base nos resultados publicados e no intuito de encontrar um antimalarico eficaz foi proposto, no presente trabalho, um estudo com novos peptideos derivados da angiotensina II visando a atividade antiplasmodica em esporozoitas de Plasmodim gallinaceum e em esquizontes (forma de anel), na fase eritrocitica de Plasmodium falciparum. Os peptideos utilizados nesse trabalho foram sintetizados pelo metodo da fase solida, nas estrategias Fmoc e t-Boc, purificados por HPLC e caracterizados por LC/ESI-MS, sendo sua conformacao estudada por CD. Os estudos da atividade litica foram realizados utilizando esporozoitas maduros extraidos de glandulas salivares de mosquitos Aedes aegypti infectados. Os esporozoitas foram incubados com os peptideos por 1 hora a 37 oC e a integridade da membrana foi monitorada por microscopia de fluorescencia. Os ensaios no ciclo eritrocitico de Plasmodium falciparum foram realizados (in vitro) utilizando uma concentracao de 10-8 mol L-1 dos peptideos, em uma cultura na forma de esquizonte sincronizada da cepa W2 de Plasmodium falciparum, mantendo 5% de hematocritos e 2% de parasitemia num periodo de 24 horas a 37 oC sob atmosfera gasosa controlada. Desses resultados foi observado que os peptideos ciclicos apresentaram conformacao do tipo dobra-¿ÀII e foram mais ativos em esporozoitas de Plasmodium gallinaceum, com atividades acima de 90%. Os estudos na invasao de eritrocitos infectados dos peptideos lineares apresentaram atividade equipotente a Ang II, com 49% de celulas nao infectadas e tambem apresentaram atividade acima de 90% em Plasmodium gallinaceum. Os peptideos mais ativos nao apresentaram resposta contractil, nem favorecem a hemolise. Esse tipo de abordagem auxilia no entendimento da participacao de cada residuo de aminoacido na atividade biologica, abrindo novas perspectivas para o desenho de novos quimioterapicos, que possam contribuir com avancos para drogas eficazes. / Angiotensin II antiplasmodial property against Plasmodium gallinaceum sporozoites was related by Maciel et. al. Studies were made to enable its possible use as a drug due to vasopressor activity. Our research group synthesized and tested some peptides related to angiotensin II, and we obtained promising results. Based on published results and in order to report an effective antimalarial we propose here a study of new peptides related to angiotensin II to evaluate the antiplasmodial activity in Plasmodim gallinaceum sporozoites and in erythrocytic phase schizonts of Plasmodium falciparum (ring-forms). The peptides used in this work were synthesized by Solid Phase, Fmoc and t-Boc strategy, purified by HPLC, characterized by LC/ESI-MS, and the conformational studies were performed by Circular Dichroism. Studies of lytic activity were performed using mature sporozoites recovered from salivary glands of infected Aedes aegypti mosquitoes. The sporozoites were incubated with the peptides for 1 hour at 37 oC and membrane integrity was monitored by fluorescence microscopy. The red blood cells schizont invasion in vitro assay were performed in a synchronous schizont medium culture of Plasmodium falciparum W2 strain maintaining 5% hematocrit and 2% parasitemia in a period of 24 hours at 37 oC under controlled gaseous atmosphere. From these results we observed that cyclic analogs that tend to a â-turn conformation were equipontent to angiotensin II, with 49% of no infected cells and also presented activity above 90% in Plasmodium gallinaceum. The most active short peptide presented neither contractile response nor hemolysis. These kinf of approach lead us to understanding the role of each amino acid residue in biological activity. It opens new perspectives to new drugs design that can contribute to advances for effective drugs.

Orientador: Prof. Dr. Vani Xavier de Oliveira Jr. / Tese (doutorado) - Universidade Federal do ABC. Programa de Pós-Graduação em Ciência e Tecnologia/Química, 2016. / A malária é uma doença infecciosa e potencialmente grave, causada pelo parasita do gênero Plasmodium, segundo a Organização Mundial de Saúde, atingiu cerca de 214 milhões de pessoas em todo mundo em 2015. Neste contexto, diversos compostos antimaláricos estão sendo estudados, dentre esses a angiotensina II (AII). Análogos desse composto estão sendo sintetizados pelo grupo de pesquisa, para a obtenção de peptídeos com atividade antimalárica e míninos efeitos colaterais, visando à obtenção de uma possível vacina. Nesse trabalho, os análogos da AII sintetizados foram divididos em dois grupos, no primeiro foram efetuadas substituições pontuais em cada um dos resíduos de aminoácidos, alterando a sua polaridade; no segundo foram realizadas substituições dos resíduos pelos seus isômeros D. Os peptídeos foram sintetizados pelo método da fase sólida, na estratégia Fmoc, purificados por HPLC e caracterizados por LC/ESI-MS e dicroísmo circular (CD). Os ensaios biológicos foram realizados em esporozoítas P. gallinaceum, sendo a ação analisada por microscopia de fluorescência. Os resultados demonstraram uma redução na atividade antimalárica e alterações na conformação da molécula dos análogos. Dentre os estudos realizados, a substituição do resíduo de isoleucina por arginina apresentou o maior resultado - 70% de atividade antiplasmódica e a conformação da AII nativa foi mantida, enquanto que a substituição por ácido aspártico apresentou o resultado mais baixo, apenas 29% de atividade. O estudo da mudança na quiralidade da molécula demonstrou que houve uma redução drástica na atividade biológica (abaixo de 50%). Com exceção do análogo com a substituição da valina que apresentou uma atividade biológica de aproximadamente de 60%. Palavras-chave: Malária, peptídeos e angiotensina. / Malaria is an infectious and potentially serious disease caused by parasites of the genus Plasmodium, according to the World Health Organization, reached about 214 million people worldwide in 2015. In this context, several antimalarial compounds are being studied, among others, the angiotensin II (AII). Analogs of this compound are being synthesized by the research group, to obtain peptides with antimalarial activity and Brazilian minimum side effects, in order to obtain a vaccine. In this work, the synthesized AII analogues were divided into two groups, the first point substitutions were made at each of amino acid residues by changing its polarity; the second substitutions were performed by the waste isomers D. The peptides were synthesized by the solid phase method, the Fmoc strategy, purified by HPLC and characterized by LC / ESI-MS and circular dichroism (CD). The biological tests were carried out in sporozoites P. gallinaceum, the action being analyzed by fluorescence microscopy. The results demonstrated a reduction in the antimalarial activity and changes in the conformation of the molecule analogs. Among the studies, the replacement of the isoleucine residue for arginine showed the highest result - 70% of antiplasmodial activity and conformation of the native IIA was maintained, while substitution of aspartic acid showed the lowest result, only 29% activity. The study of the change in chirality of the molecule showed that there was a drastic reduction in biological activity (below 50%). With the exception of the analogue with the substitution of valine which had a biological activity of approximately 60%.