Submitted by Dominick Jesus (dominickdejesus@hotmail.com) on 2016-02-12T13:57:01Z No. of bitstreams: 2 Dissertação_Gilson Martins de Azevedo Junior.pdf: 1254971 bytes, checksum: 51958f6bacdcafd4834c3897c43f6193 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-12T13:57:01Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação_Gilson Martins de Azevedo Junior.pdf: 1254971 bytes, checksum: 51958f6bacdcafd4834c3897c43f6193 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2011-05-17 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Disease-transmitting insects have been studied to characterize several biological and evolutionary aspects. Whole Genome sequencing has been allowing comparisons between the gene sequences of different species, providing molecular data. The mosquitoes Anopheles gambiae (subfamily Anophelinae), the most important vector of malaria in Africa, whose genome contains 278.253.050 base pairs (bp), Aedes aegypti, transmitter of Dengue, with 1.310.090.344 bp and Culex quinquefasciatus, vector of arbovirus, with 579.042.118 bp, both of (subfamily Culicinae) are cited. In Brazil, the Anopheles darlingi (subfamily Anophelinae) is the most important malaria vector, whose partial EST (Expressed Sequences Tags) libraries of adults and larvae previously obtained were analyzed in this study. Genic sequences of An. gambiae, Ae. aegypti and Cx. quinquefasciatus were analyzed for the presence of orthologous genes, in these mosquitoes in comparison with An. darling. An. darlingi’s ESTs (568 Unigenes) were virtually mapped in An. gambiae’s chromosomes. After that, differential gene expressions were analyzed, which allowed to statistically quantify the levels of differential expression of each gene, in the transcriptome of An. darlingi. The An. darlingi sequences were mapped according to onthologic terms of Gene Ontology (GO) and the sequences differentially expressed, with good statistical value that indicates the orthology were manually analyzed, according to the literature.The studies showed that 61% of An. darlingi are orthologous in An. gambiae and the in silico chromosomal mapping showed that the An. darling’s 568 Unigenes are represented in 793 chromosomal regions of An. gambiae, corroborating with evolutionary studies that say that the two species are evolutionarily close. An. darlingi sequences mapped in GO were associated with 1249 ontholgy levels and sublevels that describe a gene according to its function and cellular location. Differential expression analysis of some gene products was found more intense in larvae than in An. darlingi adults. Phylogenetic analysis of the An. darlingi glutathione-s-transferase (GST) gene was also done, an insecticide resistance gene which is well conserved, evolutionarily speaking, in An. gambiae, Ae. aegypti and Cx. quinquefasciatus. The Phylogenetic tree grouped An. darlingi and An. gambiae as sister species, because they are more evolutionarily related than Ae. aegypti and Cx. quinquefasciatus. In this analyses, the Phlebotomus papatasi was used as an external group, as the root of the tree. The manual annotation of An. darlingi ESTs sequences helped to understand the gene expression and evolutionary aspects of this mosquito related with An. gambiae, Ae. aegypti and Cx. quinquefasciatus, and also provided important data for further studies about individual genes of this malaria-transmitting species in Brazil. / Insetos transmissores de doenças têm sido estudados para caracterização de diversos aspectos biológicos e evolutivos. Sequenciamentos de genomas inteiros têm permitido comparações entre sequências gênicas de espécies diferentes, fornecendo dados moleculares. Citam-se os mosquitos Anopheles gambiae (subfamília Anophelinae), principal vetor da malária na África, cujo genoma contém 278.253.050 pares de bases (pb), o Aedes aegypti, transmissor do Dengue, com 1.310.090.344 pb e Culex quinquefasciatus, vetor de arboviroses, com 579.042.118 pb, ambos da (subfamília Culicinae). No Brasil, o Anopheles darlingi (subfamília Anophelinae) é o principal vetor da malária, cuja bibliotecas de ESTs (Expressed SequenceTags) parcial de adultos e larvas previamente obtidas foram analisadas no presente trabalho. Sequências gênicas de An. gambiae, Ae. aegypti e Cx. quinquefasciatus foram analisadas quanto a presença de genes em comum e genes ortólogos, nesses mosquitos em comparação com An. darlingi. ESTs (568 Unigenes) de An. darlingi foram mapeadas virtualmente em cromossômos de An. gambiae. Em seguida, foram realizadas análises de expressão diferencial gênica, o que permitiu quantificar estatisticamente os níveis de expressão de cada gene, no transcriptoma de An. darlingi. As sequências de An. darlingi foram mapeadas nos termos ontológicos do Gene Ontology (GO) e as sequências diferencialmente expressas, com bons valores estatísticos que indicam ortologia, foram analisadas manualmente, segundo a literatura. Os resultados mostraram que, 61% das sequências de An. darlingi são ortólogas em An. gambiae e o mapeamento cromossômico in silico mostrou que os 568 Unigenes de An. darlingi estão representados em 793 regiões cromossômicas do An. gambiae, corroborando estudos evolutivos de que as duas espécies são próximas evolutivamente. As sequências de An. darlingi analisadas no programa GO foram associadas a 1.249 níveis e subníveis de ontologias que descrevem um gene de acordo com sua função e localização celular. Análises de expressão diferencial de alguns produtos gênicos mostraram-se mais intensas em larvas do que em adultos de An. darlingi. Realizaram-se, ainda, a análise filogenética do gene da Glutationa-S-Transferase (GST) de An. darlingi, um gene de resistência a inseticidas bem conservado em termos evolutivos em An. gambiae, Ae. aegypti e Cx. quinquefasciatus. A árvore filogenética agrupou o gene da GST de An. darlingi com An. gambiae como espécies irmãs, estando estas proximamente relacionadas evolutivamente do que em relação ao Ae. aegypti e Cx. quinquefasciatus. O Phlebotomus papatasi, constou como grupo externo, para enraizamento dessa árvore. A anotação manual de ESTs de An. darlingi auxiliou na compreensão da expressão gênica e aspectos evolutivos desse mosquito em relação ao An. gambiae, Ae. aegypti e Cx. quinquefasciatus, além de fornecer dados importantes para estudos posteriores sobre funções gênicas individuais de An. darlingi transmissor da malária no Brasil.

Orientador: Jayme Augusto de Souza Neto / Resumo: A malária é uma doença ocasionada por protozoários do gênero Plasmodium e transmitida ao homem por meio da picada de mosquitos do gênero Anopheles. No Brasil a maior parte dos casos da doença concentra-se na região Amazônica, onde grande parte das infecções é causada por Plasmodium vivax, e o A. darlingi é o principal vetor. Estudos recentes indicam que a microbiota e que o sistema imune dos mosquitos do gênero Anopheles, em particular, componentes do sistema complemento, possuem uma importante função na determinação da competência vetorial, podendo modular o desenvolvimento do parasita no mosquito. Apesar da importância epidemiológica de A. darlingi, pouco se sabe a cerca da composição de sua microbiota intestinal, e sobre as interações moleculares deste vetor com P. vivax. Neste cenário, temos como principais objetivos: 1) Avaliar o papel de LRIM1 (Leucine-rich repeat protein 1), um dos genes do complemento, na interface A. darlingi-P.vivax, e 2) Averiguar determinados aspectos da interação entre microbiota- A.darlingi- P.vivax. Quanto às análises de LRIM1, as topologias das árvores filogenéticas mostram maior relação filogenética entre A. darlingi e A. albimanus, apresentando-os como táxons irmãos. Para a realização dos ensaios funcionais, sintetizamos RNA dupla-fita com base na sequência codificadora de LRIM1 de A. darlingi e microinjetamos no tórax de fêmeas desta espécie, as quais foram posteriormente submetidas a uma infecção por P. vivax. Quanto aos ensaios funcionais... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Malaria is a disease caused by protozoa of the genus Plasmodium and transmitted to humans through the bite of mosquitoes of the genus Anopheles. In Brazil, most cases of the disease are concentrated in the Amazon region, where most of the infections are caused by Plasmodium vivax, and A. darlingi is the main vector. Recent studies indicate that the microbiota and the immune system of Anopheles mosquitoes, in particular components of the complement system, play an important role in the determination of vector competence and can modulate the development of the parasite in the mosquito. Despite the epidemiological importance of A. darlingi, little is known about the composition of its intestinal microbiota, and about the molecular interactions of this vector with P. vivax. In this scenario, we have as main objectives: 1) To evaluate the role of LRIM1 (Leucine-rich repeat protein 1), one of the complement genes, in the interface A. darlingi-P.vivax, And 2) To ascertain some aspects of the interaction between microbiota- A.darlingi- P. vivax. As for the LRIM1 analyzes, the topologies of the phylogenetic trees show a higher phylogenetic relationship between A. darlingi and A. albimanus, presenting them as sister taxa. To perform the functional assays, we synthesized double-stranded RNA based on the coding sequence of A. darlingi LRIM1 and microinjections in the thorax of females of this species, which were subsequently subjected to a P. vivax infection. Regarding the functional tes... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Submitted by MELINA AULINO CAMPOS DE LIMA null (mel_linaa@hotmail.com) on 2016-06-14T11:27:04Z No. of bitstreams: 1 Campos, versão final.pdf: 6619779 bytes, checksum: 1ced7c5593e51838fa6cdc10742bb1f2 (MD5) / Rejected by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo a orientação abaixo: O arquivo submetido está sem a ficha catalográfica. A versão submetida por você é considerada a versão final da dissertação/tese, portanto não poderá ocorrer qualquer alteração em seu conteúdo após a aprovação. Corrija esta informação e realize uma nova submissão contendo o arquivo correto. Agradecemos a compreensão. on 2016-06-15T19:04:14Z (GMT) / Submitted by MELINA AULINO CAMPOS DE LIMA null (mel_linaa@hotmail.com) on 2016-07-28T09:31:04Z No. of bitstreams: 1 Campos, versão final.pdf: 6669108 bytes, checksum: bf58ca3048946ca88e3c4dd8fb99500a (MD5) / Approved for entry into archive by Felipe Augusto Arakaki (arakaki@reitoria.unesp.br) on 2016-07-28T14:10:56Z (GMT) No. of bitstreams: 1 lima_mac_dr_bot.pdf: 6669108 bytes, checksum: bf58ca3048946ca88e3c4dd8fb99500a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-28T14:10:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 lima_mac_dr_bot.pdf: 6669108 bytes, checksum: bf58ca3048946ca88e3c4dd8fb99500a (MD5) Previous issue date: 2016-05-13 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Degradação florestal, alterações ambientais antropogênicas e mudanças climáticas são fatores que podem modificar a dinâmica populacional de anofelinos. Anopheles (Nyssorhynchus) dar- lingi é o principal vetor de malária no Brasil e em outros países na América do Sul. Estudos observaram o aumento da abundância do vetor An. darlingi e número de casos de malária após desflorestação e demais modificações ambientais antropogênicas. Além de ter ampla distribuição geográfica, essa espécie possui plasticidade comportamental e diversidade morfo- lógica, biológica e genética. Tendo em vista essa heterogeneidade, o presente estudo avaliou a diversidade genética populacional em An. darlingi ligada a distribuição geográfica, dinâmica sazonal e comportamento hematofágico, através de marcadores microssatélites e SNPs. Espé- cimes de An. darlingi foram coletados em dois assentamentos rurais próximos e, em uma área urbana à aproximadamente 600 km de distância. Além disso, as coletas foram realizadas no primeiro e segundo semestre e, dentro e fora das casas, durante o período de atividade hema- tofágica do vetor, ou seja, das 18-6 horas. Os resultados apresentaram subpopulações de An. darlingi em aspecto geográfico, em escalas macro e microgeográficas, acessadas com mais pro- fundidade com os dados dos SNPs. Além disso, o estudo corroborou o prévio achado de duas subpopulações de An. darlingi relacionadas ao regime de chuvas. Por fim, pela primeira vez, a heterogeneidade genética em populações simpátricas desse vetor foi encontrada e relacionada com o fenótipo de comportamento hematofágico, endo e exofagia. Esses achados demonstram a importância do entendimento e vigilância entomológica, pois possuem potencial impacto na transmissão de malária. Dado que cada localidade possui características ambientais peculia- res e portanto, diferentes composições populacionais dos vetores, intervenções específicas em menor escala passam a ser abordagens interessantes no controle da malária. / Forest degradation, human environmental alteration and climate changes are all influence anopheline populations. Anopheles darlingi is the main vector of malaria parasite in Brazil and other countries of South America. Deforestation and others anthropogenic activities have been accompanied by sharp increases in both abundance of the primary malaria vector Anopheles darlingi and numbers of malaria cases. Besides it is widely distributed, this species display great behavioral plasticity and morphological, biological and genetic diversity. The aim of this study was to analyze population genetic diversity of An. darlingi related to geographical distribution, seasonal dynamics and hematophagic behavior, using microsatellites and SNPs markers. An. darlingi specimens were collected in two close rural settlements and in an urban area about 600 km away. In addition, collections were performed in both semesters of the year and, indoor and outdoor during the biting activity period of the vector, i.e., 6pm-6am. The results showed subpopulations of An. darlingi related to geographical aspect, in a macro and micro geographic scales, better accessed with SNPs dataset. Moreover, this study corroborated with a previous finding showing two subpopulations of An. darlingi related to rainfall. Finally, for the first time, genetic heterogeneity was found in sympatric populations of this vector, and it was associated with a phenotype of hematophagic behavior, endo and exophagy. These outcomes demonstrate that genetic heterogeneity may represent an important vector phenotypic variation with potentially highly significant consequences for malaria transmission. Since each site has unique environmental characteristics and therefore, different population compositions of vectors, specific interventions on a smaller scale become interesting approaches for optimal targeted malaria transmission interventions. / CAPES: BEX 9230/12-2 / FAPESP: 2014/09461-3 / FAPESP: 2012/04881-9

Orientador: Paulo Eduardo Martins Ribolla / Resumo: Degradação florestal, alterações ambientais antropogênicas e mudanças climáticas são fatores que podem modificar a dinâmica populacional de anofelinos. Anopheles (Nyssorhynchus) dar- lingi é o principal vetor de malária no Brasil e em outros países na América do Sul. Estudos observaram o aumento da abundância do vetor An. darlingi e número de casos de malária após desflorestação e demais modificações ambientais antropogênicas. Além de ter ampla distribuição geográfica, essa espécie possui plasticidade comportamental e diversidade morfo- lógica, biológica e genética. Tendo em vista essa heterogeneidade, o presente estudo avaliou a diversidade genética populacional em An. darlingi ligada a distribuição geográfica, dinâmica sazonal e comportamento hematofágico, através de marcadores microssatélites e SNPs. Espé- cimes de An. darlingi foram coletados em dois assentamentos rurais próximos e, em uma área urbana à aproximadamente 600 km de distância. Além disso, as coletas foram realizadas no primeiro e segundo semestre e, dentro e fora das casas, durante o período de atividade hema- tofágica do vetor, ou seja, das 18-6 horas. Os resultados apresentaram subpopulações de An. darlingi em aspecto geográfico, em escalas macro e microgeográficas, acessadas com mais pro- fundidade com os dados dos SNPs. Além disso, o estudo corroborou o prévio achado de duas subpopulações de An. darlingi relacionadas ao regime de chuvas. Por fim, pela primeira vez, a heterogeneidade genética em populações... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Forest degradation, human environmental alteration and climate changes are all influence anopheline populations. Anopheles darlingi is the main vector of malaria parasite in Brazil and other countries of South America. Deforestation and others anthropogenic activities have been accompanied by sharp increases in both abundance of the primary malaria vector Anopheles darlingi and numbers of malaria cases. Besides it is widely distributed, this species display great behavioral plasticity and morphological, biological and genetic diversity. The aim of this study was to analyze population genetic diversity of An. darlingi related to geographical distribution, seasonal dynamics and hematophagic behavior, using microsatellites and SNPs markers. An. darlingi specimens were collected in two close rural settlements and in an urban area about 600 km away. In addition, collections were performed in both semesters of the year and, indoor and outdoor during the biting activity period of the vector, i.e., 6pm-6am. The results showed subpopulations of An. darlingi related to geographical aspect, in a macro and micro geographic scales, better accessed with SNPs dataset. Moreover, this study corroborated with a previous finding showing two subpopulations of An. darlingi related to rainfall. Finally, for the first time, genetic heterogeneity was found in sympatric populations of this vector, and it was associated with a phenotype of hematophagic behavior, endo and exophagy. These outcomes demon... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Problemas de saúde pública advindos da proliferação de vetores de agentes patogênicos são frequentemente relatados após a construção de grandes barragens nas regiões tropicais. Porto Primavera é um dos últimos grandes projetos hidrelétricos implementados no Brasil, abrangendo uma faixa de cerca 200 km do Rio Paraná, entre os Estados de São Paulo e Mato Grosso do Sul. Resultados preliminares de projetos de pesquisa desenvolvidos na região desde 1997 apontam para um aumento na densidade de Anopheles darlingi, coincidindo com uma intensificação dos fluxos e atividades humanas na área, como turismo, pesca e transporte. Diante disso, a preocupação com a ocorrência de surtos de malária nas localidades à margem do lago motivou a busca de um maior conhecimento sobre as populações destes vetores. O objetivo desta pesquisa foi investigar a associação entre a abundância das formas imaturas e adultas de An. darlingi com variáveis do microhabitat e da ecologia da paisagem (respectivamente), após a formação do reservatório. Em relação ao microhabitat, foram selecionados o pH, condutividade, o sombreamento, a presença de cianofíceas filamentosas, detritos flutuantes, matéria orgânica galhos ou raízes e a composição das assembléias de macrófitas aquáticas. Quanto à ecologia da paisagem, foram analisados o comprimento da borda abrigo-criadouro e o tamanho das áreas dos habitats através das técnicas de sensoriamento remoto e SIG. Para a verificação de associações entre variáveis do microhabitat e imaturos de An. darlingi foi empregada a análise de correspondência canônica e para as métricas da paisagem e formas adultas, a regressão linear simples. As formas imaturas de An. darlingi apresentaram associação positiva com todas as variáveis do microhabitat, exceto com a abundância de cianofíceas filamentosas. As associações mais fortes se deram na seguinte ordem: abundância de Wolffia sp. e profundidade no primeiro eixo canônico e presença de material flutuante tipo II, pH e grupo de macrófitas e componentes da superfície no segundo eixo. Foi encontrada associação positiva entre abundância de espécimes adultos de An. darlingi e o comprimento da borda fragmento florestal-coleção hídrica, mas não em relação às áreas dos fragmentos florestais. De acordo com estes resultados, novos referenciais teóricos podem ser aplicados no mapeamento do risco da transmissão da malária em escala regional e na vigilância e controle entomológicos em nível local. / Public Health problems raised up from vector-borne diseases proliferation are frequently related after the construction of big dams in tropical regions. Porto Primavera is one of these greats hydroeletric projects stabilished recently in Brazil, occuping aproximately 200 km of Paraná river between São Paulo and Mato Grosso do Sul States. Preliminary results on developping investigations up to 1997 showed an Anopheles darlingi increase simultaneously the intensification of human moviment and activities in region, such as turism, fishing and transport. In face to the worry about the possibility of occurrence of malaria outbreaks in localities around the Lake raised the motivation to investigate a better knowledge about the populations of this vectors. In general, the objective was to investigate the association between the abundances of immatures and adult forms of Anopheles darlingi with microhabitat variables and landscape ecology respectively, after filling the reservoir. In relation to microhabitat variables was selected: pH, condutivity, shadow, deep, presence of filamentous cianoficeas, floating debris, and composition of aquatic macrophytes. In relation to landscape ecology it was analysed the perimeter of the florested shelters and breeding sites-edge and the area of florestal fragments, based on remote sensing and GIS technologies. Cannonical Correspondance analysis was the method to verify the association between microhabitat variables and immatures abundance. A large distribution of An. darlingi was noted because was find in all surveyed locations. Immature forms it was be positively associated with all microhabitat variables except filamentous cianoficea. The strongly association were in order: Wolffia sp. and deep to the first cannonical axis and floating debris of Type II, pH and macrophytes groups and surface components for the second. The Simple Linear Regression was the method to verify associations between landscape ecology variables and adult forms was find positive association between the abundance of An. darlingi and the perimeter of the florested shelters and breeding sites-edge, but not to the area of florestal fragments. According to this results, new theoretical knowledges are able to apply in the risk maps elaboration for malaria transmission in regional scale and to enthomological vigilance and control in local scale.

Made available in DSpace on 2016-08-10T10:54:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 FABIANA ANGELICA SANTOS RODRIGUES FERREIRA.pdf: 11901316 bytes, checksum: 6d7d6074465de974860aa8fde54abd66 (MD5) Previous issue date: 2013-11-25 / Os empreendimentos hidrelétricos podem causar impactos ambientais os quais trazem como consequência a alteração da dinâmica populacional de vários insetos, dentre eles mosquitos do gênero Anopheles, amplamente conhecidos por serem vetores de malária. O estudo teve por objetivo realizar um diagnóstico sobre o comportamento da incidência de malária no município de Aripuanã, Mato Grosso, onde está localizada a Usina Hidrelétrica Dardanelos, e verificar a relação entre os casos de notificação compulsória frente aos dados primários obtidos nas etapas de campo. As coletas dos Anopheles ocorreram trimestralmente, ao longo do ano de 2012, através de metodologias como as Armadilhas Luminosas do Tipo CDC e Tubo de Sucção com Isca Humana. Além das coletas de dados primários, foram consultados casos de notificação compulsória de malária na Secretaria Municipal de Saúde de Aripuanã, Mato Grosso, Setor de Vigilância em Epidemiologia. As análises dos resultados foram feitas por meio de testes estatísticos, a saber: Teste T de Student, Qui-Quadrado e Análise de Variância (ANOVA). O Teste T foi utilizado para comparar a diferença no número de casos de malária antes e depois da construção da usina como também para comparar a abundância de anofelinos coletados nas diferentes técnicas empregadas. O Qui-Quadrado foi empregado para verificar se houve diferença entre a abundância de indivíduos coletados nas diferentes estações climáticas. Já a ANOVA foi utilizada para saber se houve alteração nas coletas dos anofelinos nos ambientes apresentados nas áreas de influência da UHE Dardanelos. Para todas as análises foi adotado um nível de significância de 0,05. Os resultados mostraram que Aripuanã possui casos de malária que foram reduzidos nos anos referentes à construção da usina. O ano de 2012 apresentou 113 casos, sendo o mês de janeiro referente às chuvas, com maior representatividade. No referido mês não foi catalogado nenhum anofelino nas áreas da usina, uma vez que as chuvas dificultaram o trabalho da amostragem das armadilhas. Todos os resultados abordados mostraram que não houve diferença significativa para os testes realizados. Portanto, foi possível verificar que ocorre transmissão de malária em Aripuanã e que na região da usina possui o vetor Anopheles darlingi que está relacionado a transmissão da enfermidade.

Problemas de saúde pública advindos da proliferação de vetores de agentes patogênicos são frequentemente relatados após a construção de grandes barragens nas regiões tropicais. Porto Primavera é um dos últimos grandes projetos hidrelétricos implementados no Brasil, abrangendo uma faixa de cerca 200 km do Rio Paraná, entre os Estados de São Paulo e Mato Grosso do Sul. Resultados preliminares de projetos de pesquisa desenvolvidos na região desde 1997 apontam para um aumento na densidade de Anopheles darlingi, coincidindo com uma intensificação dos fluxos e atividades humanas na área, como turismo, pesca e transporte. Diante disso, a preocupação com a ocorrência de surtos de malária nas localidades à margem do lago motivou a busca de um maior conhecimento sobre as populações destes vetores. O objetivo desta pesquisa foi investigar a associação entre a abundância das formas imaturas e adultas de An. darlingi com variáveis do microhabitat e da ecologia da paisagem (respectivamente), após a formação do reservatório. Em relação ao microhabitat, foram selecionados o pH, condutividade, o sombreamento, a presença de cianofíceas filamentosas, detritos flutuantes, matéria orgânica galhos ou raízes e a composição das assembléias de macrófitas aquáticas. Quanto à ecologia da paisagem, foram analisados o comprimento da borda abrigo-criadouro e o tamanho das áreas dos habitats através das técnicas de sensoriamento remoto e SIG. Para a verificação de associações entre variáveis do microhabitat e imaturos de An. darlingi foi empregada a análise de correspondência canônica e para as métricas da paisagem e formas adultas, a regressão linear simples. As formas imaturas de An. darlingi apresentaram associação positiva com todas as variáveis do microhabitat, exceto com a abundância de cianofíceas filamentosas. As associações mais fortes se deram na seguinte ordem: abundância de Wolffia sp. e profundidade no primeiro eixo canônico e presença de material flutuante tipo II, pH e grupo de macrófitas e componentes da superfície no segundo eixo. Foi encontrada associação positiva entre abundância de espécimes adultos de An. darlingi e o comprimento da borda fragmento florestal-coleção hídrica, mas não em relação às áreas dos fragmentos florestais. De acordo com estes resultados, novos referenciais teóricos podem ser aplicados no mapeamento do risco da transmissão da malária em escala regional e na vigilância e controle entomológicos em nível local. / Public Health problems raised up from vector-borne diseases proliferation are frequently related after the construction of big dams in tropical regions. Porto Primavera is one of these greats hydroeletric projects stabilished recently in Brazil, occuping aproximately 200 km of Paraná river between São Paulo and Mato Grosso do Sul States. Preliminary results on developping investigations up to 1997 showed an Anopheles darlingi increase simultaneously the intensification of human moviment and activities in region, such as turism, fishing and transport. In face to the worry about the possibility of occurrence of malaria outbreaks in localities around the Lake raised the motivation to investigate a better knowledge about the populations of this vectors. In general, the objective was to investigate the association between the abundances of immatures and adult forms of Anopheles darlingi with microhabitat variables and landscape ecology respectively, after filling the reservoir. In relation to microhabitat variables was selected: pH, condutivity, shadow, deep, presence of filamentous cianoficeas, floating debris, and composition of aquatic macrophytes. In relation to landscape ecology it was analysed the perimeter of the florested shelters and breeding sites-edge and the area of florestal fragments, based on remote sensing and GIS technologies. Cannonical Correspondance analysis was the method to verify the association between microhabitat variables and immatures abundance. A large distribution of An. darlingi was noted because was find in all surveyed locations. Immature forms it was be positively associated with all microhabitat variables except filamentous cianoficea. The strongly association were in order: Wolffia sp. and deep to the first cannonical axis and floating debris of Type II, pH and macrophytes groups and surface components for the second. The Simple Linear Regression was the method to verify associations between landscape ecology variables and adult forms was find positive association between the abundance of An. darlingi and the perimeter of the florested shelters and breeding sites-edge, but not to the area of florestal fragments. According to this results, new theoretical knowledges are able to apply in the risk maps elaboration for malaria transmission in regional scale and to enthomological vigilance and control in local scale.

Submitted by Dominick Jesus (dominickdejesus@hotmail.com) on 2016-02-04T19:28:16Z No. of bitstreams: 2 Tese_Caroline Dantas de Oliveira.pdf: 3375525 bytes, checksum: 445c62c608ddf4ddcea75b2dbfd50231 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-04T19:28:16Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese_Caroline Dantas de Oliveira.pdf: 3375525 bytes, checksum: 445c62c608ddf4ddcea75b2dbfd50231 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2011-02-23 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / The mosquito Anopheles darlingi is the main vector of human malaria in Brazil. Nevertheless, little information exists on the gonotrophic cycle of this important vector, whose knowledge is important for an effecient control strategy. Therefore, this work studied the oogenesis in this mosquito species. Molecular, biologic and morphological aspects of oogenesis, before and after the blood meal (BM), were investigated in female A. darlingi collected at the suburb of Manaus and Coari city to study the. Before the BM, ovaries of female A. darlingi are small and contain few lipid vesicles. At this stage the expression of vitellogenin (Vg) gene is absent. After the BM, there were marked internal and external changes in the ovaries due to storage of yolk in the oocytes. Small granules of yolk are already observed at 3h post BM, although the expression of Vg gene was only detected at 6h post BM. The expression of Vg and their storage in the ovaries are more evident after 24 hours of BM, remaining constant between 36 to 48 hours post BM. The final dimensions of the egg are reached at 72 hours post BM when Vg gene expression decreased. Oviposition occurred at 96 hours post BM when the expression of Vg is absent. In the analyses of the frequence of blood meals taken by female A. darlingi, 80% ingested two blood meals within 24h and 75% fed three times in a period of three days, showing the ability of this species to feed more than once during a single gonotrophic cycle. An apparent increase in Vg gene expression was noticed in females taking multiple BMs. / O mosquito Anopheles darlingi é o principal vetor da malária humana no Brasil. Apesar disso, existem poucas informações sobre o ciclo gonotrófico desse importante vetor, cujo conhecimento é importante para uma efeciente estratégia de controle. Por esse motivo, neste trabalho essa espécie é alvo do estudo da ovogênese. Para tanto, fêmeas de A. darlingi foram coletadas na periferia da cidade de Manaus e Coari para estudar os aspectos biológicos, morfológicos e moleculares do processo da ovogênese antes e após o repasto sanguíneo (RS). Antes do repasto sanguíneo os ovários das fêmeas de A. darlingi são pequenos e contêm algumas vesículas de lipídios. Nesta fase o mRNA do gene da vitelogenina (Vg) é ausente. Após o RS, ocorrem acentuadas mudanças internas e externas nos ovários devido à estocagem das vitelinas nos ovócitos. Pequenos grânulos de vitelinas são observados a partir de 3h após o RS, embora a expressão do gene Vg só é detectável a partir de 6h. A expressão e a estocagem da Vg é mais evidente após 24h do RS, mantendo-se constante entre 36h e 48h após o RS. As dimensões definitivas do ovo são alcançadas após 72h do RS quando a expressão do gene Vg diminui. A oviposição ocorreu após 96h do RS quando a expressão de Vg é ausente. Nas análises de múltiplos repastos sanguíneos, 80% das fêmeas de A. darlingi tiveram dois repastos sanguíneos dentro de 24h e 75% delas alimentaram três vezes num período de três dias, mostrando a capacidade dessa espécie de se alimentar por mais de uma vez durante um único ciclo gonotrófico. Nestas fêmeas foi verificado um aumento aparente na expressão do gene Vg de acordo com um número maior de alimentações sanguíneas.

Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-10-19T12:54:16Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese - Sirley P. Almeida.pdf: 2582224 bytes, checksum: 619daa8290bd853bcd6681edd48defdf (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-10-19T12:54:30Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese - Sirley P. Almeida.pdf: 2582224 bytes, checksum: 619daa8290bd853bcd6681edd48defdf (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-19T12:54:30Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese - Sirley P. Almeida.pdf: 2582224 bytes, checksum: 619daa8290bd853bcd6681edd48defdf (MD5) Previous issue date: 2017-07-28 / FAPEAM - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / The species of the family Lamiaceae are known in Brazil for being very aromatic and for presenting bioactive properties as antioxidant, bactericide, fungicide and insecticide. In this work was analyzed Hyptis dilatata Benth, found in areas of cerrado in Brazil. The chemical components, the biological activity of the essential oil and extracts of leaves and flowers, considering dry and rainy periods, of specimens of the Serra do Tepequém, in Roraima-Brazil, were studied. The essential oils were extracted from the leaves collected at different times (morning, afternoon and night) and from the flowers in the dry and rainy periods. In relation to the hexane and ethanolic extracts from leaves and flowers, these were extracted from specimens collected during the dry and rainy season. The results of the phytochemical profile, derived from the analysis of the hexane and ethanolic extracts of leaves and flowers, presented different secondary metabolites, being identified coumarin, flavonoids, phenols, saponins, alkaloids, among others. The chemical characterization of the essential oils of leaves and flowers showed as main substances α-pinene, β-pinene, limonene, 3-carene, β-caryophyllene, fenchone and camphor. The essential oil extracted from the flowers in the rainy and dry period inhibited the enzyme acetylcholinesterase, respectively, 93.4% and 92.4%, whereas the essential oil extracted from the leaves, in the dry period and in the morning, showed greater inhibition (96.4%). In the analysis of the cytotoxicity activity performed with larvae of Artemia salina, the essential oil extracted from the leaf collected in the rainy period in the morning, and the essential oil extracted from the flower, collected in the rainy season, presented higher toxicity. The ethanolic extracts of the leaf and the hexane extracts of the flower, both collected during the rainy season, were also more toxic. In the antimicrobial assays, flower oils collected in the rainy and dry period demonstrated greater inhibition against the bacteria Staphylococcus aureus and Bacillus cereus. The Candida albicans yeast only showed inhibition with the essential oils of the flower collected in the dry period. In the rainy season only the essential oil extracted from the leaf collected in the morning and afternoon, showed inhibition against the bacteria S. aureus and B. cereus. Regarding the dry period, the essential oil that showed the highest inhibition in B. cereus bacteria was collected in the afternoon. The hexane extracts of the flower collected in the rainy season showed greater inhibition of S. aureus and in the leaves collected in the rainy season. This extract showed greater toxicity with the bacterium Salmonella typhymurium. In the test against yeast C. albicans, the most toxic hexanic extract was that of the leaf collected in the dry period. In this work the essential oils and extracts of H. dilatata were also tested in larvicidal activities of Aedes aegypti, Anopheles darlingi and adulticides with Ae. aegypti. The essential oil with higher toxicity in the larvicidal activities of Ae. aegypti were extracted from the leaf collected in the rainy season, at night time and from the flower in the rainy season. Only the hexane extracts extracted from the flowers showed toxic activity on the larvae of Ae. aegypti. In larvae of An. darlingi, toxicity predominated with the essential oils of the flowers extracted in the dry period and in the essential oil of the leaf extracted in the same period, in the morning. In the adulticidal assays of Ae. aegypti, leaf oil collected in the rainy season at night showed a mortality of 54.4% to 91.9%, at concentrations of 62.5 μg/mL -1 and 1000 μg/mL-1 respectively in the range of 90 minutes of exposure. The knockdown effect (mosquito immobility) was observed in the test for the development of the product prototype with leaf essential oil, collected in the rainy season and in the morning. For that, the insecticidal activity against the mosquito Ae. aegypti, in 20 minutes at the start of the test, with more than 50% of mosquitoes in knockdown state. / As espécies da família Lamiaceae são conhecidas no Brasil por serem bastante aromáticas e por apresentarem propriedades bioativas como antioxidante, bactericida, fungicida e inseticida. Neste trabalho foi analisada a espécie Hyptis dilatata Benth, encontrada em áreas de cerrado no Brasil. Estudou-se os componentes químicos, a atividade biológica do óleo essencial e dos extratos de folhas e flores, considerando os períodos seco e chuvoso, de espécimes da Serra do Tepequém, em Roraima-Brasil. Os óleos essenciais foram extraídos das folhas coletadas em diferentes horários (manhã, tarde e noite) e das flores nos períodos seco e chuvoso. Em relação aos extratos hexânicos e etanólicos, oriundos das folhas e flores, estes foram extraídos de exemplares coletados nos períodos seco e chuvoso. Os resultados do perfil fitoquímico, originados a partir da análise dos extratos hexânicos e etanólicos das folhas e flores, apresentaram diferentes metabólitos secundários, sendo identificados cumarina, flavonóides, fenóis, saponinas, alcalóides, entre outros. A caracterização química dos óleos essenciais das folhas e flores mostrou como substâncias majoritárias α-pineno, β-pineno, limoneno, 3-careno, β-cariofileno, fenchona e cânfora. O óleo essencial extraído das flores, no período chuvoso e seco, inibiu a enzima acetilcolinesterase, respectivamente, 93,4% e 92,4%, enquanto que o óleo essencial extraído das folhas, no período seco e pela manhã, apresentou maior inibição (96,4%). Na análise da atividade de citotoxidade, realizadas com larvas de Artemia salina, o óleo essencial extraído da folha coletada no período chuvoso, pela manhã, e o óleo essencial extraído da flor, coletada no período chuvoso, apresentaram maior toxicidade. Apresentaram também maior toxicidade os extratos etanólicos da folha e os extratos hexânicos da flor, ambas coletadas no período chuvoso. Nos ensaios antimicrobianos, os óleos das flores coletadas no período chuvoso e seco demonstraram maior inibição contra as bactérias Staphylococcus aureus e Bacillus cereus. A levedura Candida albicans só apresentou inibição com os óleos essênciais da flor coletada no período seco. No período chuvoso, somente o óleo essencial extraído das folhas coletadas no horário da manhã e tarde, mostraram inibição contra as bactérias S. aureus e B. cereus. Em relação ao período seco, o óleo essencial que apresentou maior inibição contra bactérias B. cereus foi coletado no horário da tarde. Os extratos hexânicos da flor coletada no período chuvoso mostraram maior inibição contra S. aureus e nas folhas coletadas no período chuvoso. Este extrato demonstrou maior toxicidade com a bactéria Salmonella typhymurium. No teste contra a levedura C. albicans, o extrato mais tóxico foi o hexânico da folha coletada no período seco. Neste trabalho também foram testados os óleos essenciais e extratos de H. dilatata em atividades larvicidas de Aedes aegypti, Anopheles darlingi e teste adulticidas com Ae. aegypti. O óleo essencial com maior toxicidade nas atividades larvicidas de Ae. aegypti foram extraídos da folha coletada no período chuvoso, no horário da noite e da flor no período chuvoso. Somente os extratos hexânicos extraídos das flores apresentaram atividade tóxica sobre as larvas de Ae. aegypti. Nas larvas de An. darlingi, a toxicidade predominou com os óleos essenciais das flores extraídas no período seco e no óleo essencial da folha extraído no mesmo período, no horário da manhã. Nos ensaios adulticida de Ae. aegypti, o óleo das folhas coletadas no período chuvoso, no horário da noite, apresentou mortalidade entre 54,4% a 91,9%, nas concentrações de 62,5 μg mL-1 e 1000 μg mL-1, respectivamente, no intervalo de 90 minutos de exposição. No teste para o desenvolvimento do protótipo do produto com o óleo essencial da folha, coletada no período chuvoso e no horário da manhã, foi observada a ação do efeito knockdown (imobilidade do mosquito). Para tanto, considerou-se a atividade inseticida contra o mosquito Ae. aegypti, em 20 minutos no início do teste, com mais de 50% dos mosquitos em estado de knockdown.

Les modèles de distribution d’espèces ont été identifiées comme pertinents pour cartographier et caractériser la qualitéd’habitat des moustiques vecteurs du paludisme, Anopheles, afin de participer à l’estimation du risque de transmission decette maladie et à la définition de stratégies de lutte anti-vectorielle ciblées. La transmission du paludisme dépend de laprésence et de la distribution des vecteurs, qui dépendent elles-mêmes des conditions environnementales définissant laqualité des habitats écologiques des Anopheles. Cependant, dans certaines régions, les données de captures d’Anophelessont rares, et rend difficile la cartographie de leurs habitats. De plus, le recueil de ces données est très souvent soumis à desbiais d’échantillonnage.Cette thèse fournit une solution à la cartographie des vecteurs du paludisme, en considérant deux aspects très peu étudiésdans la modélisation : le faible nombre de sites de présence disponibles et l’existence d’un biais d’échantillonnage. Uneméthode originale de correction de l’effet du biais d’échantillonnage est proposée puis appliquée à des données de présencedu principal vecteur du paludisme en Guyane, Anopheles darlingi. Un modèle de distribution d’An. darlingi a ensuite étéconstruit, permettant d’obtenir une carte de qualité d’habitat en cohérence avec la connaissance des entomologistes etfournissant des performances de prédiction élevées. La méthode de correction proposée a ensuite été comparée auxméthodes existantes dans un contexte applicatif caractérisé par la rareté des données d’occurrence de l’espèce et laprésence d’un biais d’échantillonnage. Les résultats montrent que la méthode développée est adaptée aux cas où le nombrede sites de présence est faible. Cette thèse contribue, d’une part, à combler les lacunes théoriques et d’applicabilité desméthodes actuelles visant à corriger l’effet des biais d’échantillonnage et, d’autre part, à compléter la connaissance sur ladistribution spatiale et la bioécologie du principal vecteur du paludisme en Guyane française. / Species distribution models are identified as relevant to map and characterize the habitat quality of Anopheles genusmosquitoes, transmitting malaria, and thus to both participate in the estimation of the transmission risk of this disease and inthe definition of targeted vector control actions. The malaria transmission depends on the presence and distribution of thevectors, which are themselves dependent on the environmental conditions that define the quality of the ecological habitats of the Anopheles. However, in some areas, Anopheles collection data remain scarce, making it difficult to model these habitats. In addition, the collection of these data is very often subjected to significant sampling biases, due, in particular, to unequal accessibility to the entire study area. This thesis provides a solution to the mapping of malaria vectors, considering two very few studied aspects in modeling: the low number of available presence sites and the existence of a sampling bias. An original method for correcting the effect of the sampling bias is proposed and then applied to presence data of Anopheles darlingi species - the main vector of malaria in South America - in French Guiana. Then, a distribution model of An. darlingi was built to obtain a map of habitat quality consistent with entomologists’ knowledge and providing high prediction performances. The proposed correction method was then compared to existing methods in an application context characterized by the scarcity of the species occurence data and the presence of a sampling bias. The results show that the developed method is adapted to cases where the number of sites of presence is low. This thesis contributes, on the one hand, to fill theoretical and applicability lacuna of current methods intended to correct the effect of the sampling bias and, on the other hand, to supplement the knowledge on both the spatial distribution and the bio-ecology of the main malaria vector in French Guiana.