Orientador: Maria de Lourdes Ribeiro de Souza da Cunha / Banca: Carlos Magno Castelo Branco Fortaleza / Banca: Patrícia Yoshida Faccioli Martins / Banca: Amanda Keller Siqueira / Banca: Elizabeth Oliveira da Costa Freitas Guimarães / Resumo: Os estafilococos coagulase negativa são patógenos associados a infecções nosocomiais, principalmente bacteremia e sepse. A oxacilina é uma das alternativas de escolha no tratamento das infecções causadas por Staphylococcus spp., contudo, a resistência a esta droga têm se tornado um grande problema nas últimas décadas. O objetivo deste estudo foi caracterizar a sensibilidade à oxacilina em amostras de ECN isoladas de pacientes do Hospital das Clínicas (HC) da Faculdade de Medicina de Botucatu (FMB) por diferentes métodos, determinar a concentração inibitória mínima a antimicrobianos, a triagem de amostras com sensibilidade intermediária à vancomicina e a caracterização do perfil clonal de amostras de MRCoNS isoladas de hemoculturas. Um total de 160 amostras foram analisadas quanto a resistência à oxacilina por meio da técnica de difusão da droga em ágar com disco de oxacilina e cefoxitina, teste de triagem em Ágar Mueller-Hinton com 4 μg/mL de oxacilina e 4% de NaCl, E-test, detecção do gene mecA, e determinação da sensibilidade intermediária a vancomicina em ágar BHI com 4 μg/mL e com 6 μg/mL de vancomicina, além da caracterização do perfil epidemiológico pela tipagem do cassete cromossômico mec (SCCmec) e análise clonal por PFGE de 59 amostras de S. epidermidis e 07 amostras de S. haemolyticus isoladas no período de 2002 a 2009. Um total de 74,4% das amostras foram positivas para o gene mecA. A sensibilidade do método de difusão com disco de oxacilina e da técnica de E-test foi de 99,1% e com especificidade de 90,1%. O disco de cefoxitina apresentou 100% de sensibilidade e a mesma especificidade descrita para o disco de oxacilina. O método de triagem apresentou 94,2% de sensibilidade e a melhor taxa de especificidade com 93,2%. Houve diferença entre as amostras MRCoNS... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Oxacillin is one of the alternatives of choice in the treatment of infections caused by Staphylococcus spp. However, resistance to this drug has become a major problem in recent decades. The aim of this study was to characterize the sensitivity to oxacillin in CNS samples isolated from patients at the School of Medicine University Hospital (HCFMB) - UNESP by different methods, to determine antimicrobial minimum inhibitory concentration, the screening of samples with intermediate sensitivity to vancomycin and characterization of the clonal profile of MRCoNS samples isolated from blood cultures. A total of 160 samples were analyzed for resistance to oxacillin by the drug diffusion technique in agar with oxacillin and cefoxitin, a screening test on Mueller-Hinton agar with 4 μg/mL of oxacillin and 4% NaCl, E-test, mecA gene detection, and determination of intermediate susceptibility to vancomycin in BHI agar with 4 μg/mL and 6 μg/mL of vancomycin, and characterizing the epidemiological profile by typing the cassette chromosome mec (SCCmec) and clonal analysis by PFGE a total of 59 samples of S. epidermidis and 07 samples of S. haemolyticus isolated in the period 2002 to 2009. A total of 74.4% of the samples were positive for mecA. The sensitivity of the oxacillin disk diffusion and E-test technique was 99.1% and specificity 90.1%. The cefoxitin disk showed 100% sensitivity and specificity reported for the same oxacillin disc. The screening method showed 94.2% sensitivity and specificity with the best rate of 93.2%. There were differences between samples when analyzed MSCoNS MRCoNS and the minimum inhibitory concentration (MIC), with higher levels of MIC in the group MRCoNS, and higher rates of multidrug resistance. None of the samples showed resistance or heteroresistant to vancomycin, however, 10 samples grown... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Resumo: Nas bactérias Gram-positivas Streptomyces davawensis e Streptomyces coelicolor a transcrição dos genes responsáveis pela biossíntese de riboflavina (RF; vitamin B2) ribBMAH é iniciada a partir do promoter da riboflavina (Prib). Nas duas espécies um ribB FMN riboswitch está presente imediatamente à montante em relação a Prib, regulando a expressão gênica ao nível traducional. S. davawensis produz o atibiótico roseoflavina (RoF), um análogo de riboflavina, o qual é convertido a roseoflavina 5'-mononucleotídeo (RoFMN) no citoplasma das células alvo. S. davawensis é resistente a RoF, enquanto que S. coelicolor é sensível a RoF. Através de experimentos de transcrição/tradução in vitro foi demonstrado que o ribB FMN riboswitch de S. coelicolor é desligado na presença de RoFMN. Em contraste, o ribB FMN riboswitch de S. davawensis mostrou-se mais ativo na presença de RoFMN. Compatível com esse resultado, a atividade enzimática correspondente ao produto do primeiro gene (ribB) do cluster ribBMAH foi fortemente reduzida em S. coelicolor, mas não em S. davawensis, quando ambas foram cultivadas em meio acrescido de RoF. Através de mutagênese sítio-dirigida foi identificado um único nucleotideo (A61) na estrutura do ribB FMN riboswitch de S. davawensis como sendo responsável pela resposta diferencial a RoFMN. A introdução do ribB FMN riboswitch de S. davawensis em S. coelicolor gerou uma linhagem resistente a RoF. O presente trabalho apresenta evidências de que o ribB FMN riboswitch de S. coelicolor é controlado termodinamicamente, enquanto que o ribB FMN riboswitch de S. davawensis é controlado cineticamente. Os últimos resultados muito provavelmente explicam as diferentes respostas com relação a RoFMN observada para os dois ribB FMN riboswitches quase idênticos. Em resumo, os... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: In the Gram-positive soil bacterium Streptomyces davawensis and in the closely related Streptomyces coelicolor transcription of the riboflavin (RF; vitamin B2) biosynthetic genes ribBMAH originates from the riboflavin promoter (Prib). In both species a ribB (ribo)flavin mononucleotide (FMN) binding riboswitch is present immediately downstream of Prib regulating gene expression at the translational level. S. davawensis produces the antibiotic roseoflavin (RoF), a RF analog, which is converted to roseoflavin mononucleotide (RoFMN) within the cytoplasm of target cells. S. davawensis is RoF resistant, whereas S. coelicolor is RoF sensitive. In vitro transcription/translation experiments revealed that the S. coelicolor ribB FMN riboswitch was turned off in the presence of RoFMN. In contrast, the S. davawensis ribB FMN riboswitch was found to be more active in the presence of RoFMN. In line with this finding was that the activity of the product of the first gene (ribB) of the ribBMAH cluster was strongly reduced in S. coelicolor, but not in S. davawensis, when cells were grown in the presence of RoF. Sequence alignments and site directed mutagenesis experiments identified a single nucleotide (A61) within the S. davawensis ribB FMN riboswitch which is responsible for its specific response to RoFMN. Introduction of the S. davawensis ribB FMN riboswitch to S. coelicolor produced a RoF resistant S. coelicolor strain. The present work gives evidence that the ribB FMN riboswitch of S. coelicolor is thermodynamically controlled whereas the S. davawensis ribB FMN riboswitch is kinetically controlled. The latter finding most likely explains the different response of the two almost identical ribB FMN riboswitches with respect to RoFMN. Altogether, the present results show that a highly specialized FMN riboswitch confers RoF resistance to... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Eleonora Cano Carmona / Coorientador: Matthias Mack / Banca: Henrique Ferreira / Banca: Maria Celia Bertolini / Banca: Carla Columbano de Oliveira / Banca: Luis Henrique Souza Guimarães / Doutor

Determinar el efecto antibacteriano de la miel de abeja en diferentes concentraciones sobre el Estreptococos mutans. Estudio experimental en 50 placas petri con Estreptococo mutans a las que se les aplicó miel de abeja en concentraciones de 5%, 10%, 20%, 30% y 100%. Se dejó incubar por 24 horas a 37ºC para luego observar el efecto antibacteriano midiendo el halo de inhibición (mm). El análisis estadístico se llevó acabo en el programa SPSS v15.0, incluyó la prueba estadística Anova / To determine the antibacterial effect of honey in different concentrations on Streptococo mutans. Experimental study in 50 petri dishes with Streptococo mutans to wich we applied honey al concentrations of 5%, 10%, 20%, 30% and 100%. Allowed to incubate for 24 hours al 37ºC then observe wether there was an antibacterial effect by measuring the inhibition halo (mm). Statical snalysis was carried out in SPSS v.15.0. Anova test was included.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. / Made available in DSpace on 2012-10-17T20:42:28Z (GMT). No. of bitstreams: 0Bitstream added on 2014-09-25T18:01:23Z : No. of bitstreams: 1 170912.pdf: 7730023 bytes, checksum: b0578005b79e5303e70103f6b8b95dd7 (MD5) / Com o objetivo de verificar a presença de triterpenóides bioativos em G. australe foram coletados e identificados 15 basidiomas, dos quais também foram isoladas culturas dicarióticas. A partir de alguns desses basidiomas foi obtido um extrato metanólico, que foi particionado em hexano, clorofórmio e acetato de etila. Esses extratos foram fracionados através de cromatografia em coluna de gel de sílica. O fracionamento foi biomonitorado através do método de difusão em gel, com o qual se verificou a presença de atividade antibacteriana nas frações testadas. As frações foram ativas principalmente contra as cepas Gram-positivas. Nas frações obtidas foram identificados os esteróis: 5a-ergost-7-en-3b-ol, 5a-ergost-7,22-dien-3b-ol, 5,8-epidioxi-5a,8a-ergost-6,22-dien-3b-ol e os triterpenos designados como: ácidos aplanoxídicos A, C, G e F. Este estudo abre diversas perspectivas de investigações, tais como a pesquisa de novas substâncias com propriedades antibacterianas produzidas por esta espécie de fungo, a possibilidade de determinação de outras atividades biológicas para as substâncias isoladas e estudos com as culturas dicarióticas depositadas na coleção do Laboratório de Antibióticos da UFSC.

Introdução: O emprego de técnicas de interpretação imunológica de agentes infecciosos, de uma maneira geral, confere maior sensibilidade e especificidade ao exame histopatológico; o anticorpo policlonal anti-BCG tem sido testado como uma coloração imunoistoquímica de triagem para espécimes de biópsias cutâneas, com suspeita de origem infecciosa; em casos de infecções fúngicas e bacterianas, os resultados mostraram-se claramente superiores aos conseguidos pelas técnicas histoquímicas convencionais. Objetivos: Verificar a positividade da reação imunoistoquímica com o anti-BCG em granulomas imunológicos cutâneos, que não puderam ter o seu diagnóstico etiológico definido pelos métodos histoquímicos usuais de coloração para agentes infecciosos (Grocott e Ziehl-Neelsen) e também descrever a sensibilidade e especificidade deste anticorpo, através da comparação com os exames culturais para fungos e micobactérias. Metodologia: Procedeu-se à técnica imunoistoquímica com o anti-BCG em 33 biópsias cutâneas com granulomas imunológicos, com colorações de Grocott e Ziehl-Neelsen negativas. Também foram selecionados 13 casos de hanseníase virchowiana e 11 de granulomas por degeneração do colágeno, para que servissem de controles positivos e negativos, respectivamente. A leitura das lâminas foi realizada por dermatopatologista do HCPA que não tinha conhecimento dos dados clínicos dos pacientes. Não foi realizada a quantificação do antígeno nos cortes. Resultados: Dos 33 casos estudados, 13 (39,4%) apresentaram imunoistoquímica positiva com o anti-BCG, os diagnósticos finais foram: 4 casos (12,12%) de tuberculose, 4 casos de esporotricose, 1 caso (3.03%) de cromomicose, 1 caso de hanseníase tuberculóide e 3 casos (9.09%) que não puderam ter o diagnóstico conhecido, pois perderam o acompanhamento médico. A sensibilidade do anti-BCG quando comparado com a cultura para fungos foi de 57,1% e a especificidade de 66,7%; na comparação com a cultura para micobactérias a sensibilidade foi de 100%, porém só haviam 2 exames positivos, e a especificidade foi de 67,7%. Nos casos de hanseníase virchowiana, a sensibilidade e a especificidade foi de 100%. Conclusão: A técnica imunoistoquímica com o anticorpo anti-BCG é relativamente fácil, rápida e de baixo custo e mostrou ser útil na identificação de microorganismos que não foram prontamente visualizados com as colorações de Grocott e Ziehl-Neelsen. Entretanto, o pequeno número de controles pode ter influenciado no desempenho do método.

PEREIRA, Francisco Gilberto Fernandes. Erros de medicação antibacteriana e a interface com a segurança do paciente. 2015. 119 f. Dissertação (Mestrado em Enfermagem) - Faculdade de Farmácia, Odontologia e Enfermagem, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2015. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2015-10-23T16:07:01Z No. of bitstreams: 1 2015_dis_fgfpereira.pdf: 1377165 bytes, checksum: 15e0b038558bf760c337d361547c79f2 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2015-10-26T10:47:52Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_dis_fgfpereira.pdf: 1377165 bytes, checksum: 15e0b038558bf760c337d361547c79f2 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-26T10:47:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_dis_fgfpereira.pdf: 1377165 bytes, checksum: 15e0b038558bf760c337d361547c79f2 (MD5) Previous issue date: 2015 / The security related to the medication system has been recent research objec t, mainly in relation to antibacterial that have high pharmacological specificity and may have impaired its action to the detriment of errors associated with the phases of preparation and administration. Thus, the study aimed to analyz e the behavioral and environmental factors involved in the occurrence of errors during the stages of antibacterial administration preparation. This is an observational, exploratory and cross - sectional study, quantitative, conducted from August to December 2014 in the Sentinel Network Hospital in Fortaleza. The sample comprised 44% of the antibiotic dose of medical clinics A and B, 108 and 157, respectively. Data collection took place in two phases: the first to characterize the occupational profile member o f the nursing staff; and the second to identify the adaptations and behavioral and environmental inadequacies in the phases of preparation and administration. Data were organized in tables and analyzed using descriptive and analytical statistics. All bioet hical principles were respected, as approved by the Research Ethics Committee of the Federal University of Ceará, protocol number 660 897. The results allowed to perform the following inferences: the completion of the preparation and administration of anti bacterial was performed by nursing technicians (100%), predominantly female, aged 31 - 40 years who have completed training between the last ten to 20 years and working in the area for a similar period, however, there are less than ten years in the instituti on where the research took place. On the influence of environmental factors we found that during the preparation was inadequate at 136 observations on cleanliness and variable 187 within the organization. The size for the preparation was inadequate in the Medical Clinic A (3,8m2), and the items lighting, temperature and noise were extremely oscillating in three shifts and two clinics, with average generally higher than recommended. As regards the behavioral variables observed: producing sources of interrupt s in 145 doses during preparation, and however, were not statistically significant to increase the time of preparation of antibiotics (p = 0.776). There was a higher frequency of non - compliances respectively in clinics A and B on the items: Prescription us e behavior 86 (79.6%) and 157 (100%); confirmation of the patient's name 68 (62.9%) and 142 (90.4%); and monitoring 84 (77.7%) and 82 (52.2%). Already Medical Clinic B had higher compliance rates in infusion time control of 84 (53.5%) and immediate check 9 3 (59.2%). Contributing factor to increase the chances of drug interaction was the absence of guidelines with information about the drug (p = 0.003). The main error category was the dose found error (157). Since the most commonly used antibiotic piperacill in + tazobactam was 51 doses / A segurança relacionada ao sistema de medicação tem sido objeto de pesquisas recentes, principalmente, em relação aos antibacterianos que possuem alta especificidade farmacológica e podem ter sua ação prejudicada em detrimento de erros associados às fases de preparo e administração. Assim, o estudo teve como objetivo geral: Analisar os fatores comportamentais e ambientais envolvidos na ocorrência de erros durante as etapas de preparo de administração de antibacterianos. Trata-se de um estudo observacional, exploratório e transversal, de natureza quantitativa, realizado entre agosto a dezembro de 2014 em Hospital da Rede Sentinela em Fortaleza. A amostra compreendeu 44% das doses de antibióticos das clínicas médicas A e B, 108 e 157, respectivamente. A coleta de dados se deu em duas fases: a primeira para caracterizar o perfil sócio ocupacional dos profissionais de enfermagem; e a segunda para identificar as adequações e inadequações comportamentais e ambientais nas fases de preparo e administração. Os dados foram organizados em tabelas e analisados por meio da estatística descritiva e analítica. Todos os princípios bioéticos foram respeitados, conforme aprovação da pesquisa pelo Comitê de Ética da Universidade Federal do Ceará, protocolo número 660.897. Os resultados permitiram realizar as seguintes inferências: a concretização do preparo e administração dos antibacterianos foi realizada por técnicos de enfermagem (100%), predominantemente do sexo feminino, na faixa etária de 31 a 40 anos, que concluíram a formação entre os últimos dez a 20 anos e atuam na área por um período semelhante, no entanto, há menos de dez anos na instituição onde a pesquisa foi realizada. Sobre a influência de fatores ambientais verificou-se que durante o preparo houve inadequação em 136 observações na variável limpeza e em 187 na organização. A dimensão para o preparo foi inadequada na Clínica Médica A (3,8m2), e os itens iluminação, temperatura e ruído foram extremamente oscilantes nos três turnos e nas duas clínicas, com médias geralmente acima do recomendado. Quanto às variáveis comportamentais observou-se: fontes produtoras de interrupções em 145 doses durante o preparo, e, no entanto, não foram estatisticamente significativas para aumentar o tempo de preparo dos antibióticos (p=0,776). Houve maior frequência de não-conformidades respectivamente nas clínicas A e B quanto ao itens: comportamento de utilização da prescrição 86 (79,6%) e 157 (100%); confirmação do nome do paciente 68 (62,9%) e 142 (90,4%); e, monitoramento 84 (77,7%) e 82 (52,2%). Já a Clínica Médica B apresentou maiores índices de conformidade no controle do tempo de infusão 84 (53,5%) e checagem imediata 93 (59,2%). Fator que contribuiu para aumentar as chances de interação medicamentosa foi a ausência de diretrizes com informações sobre o medicamento (p=0,003). A principal categoria de erro encontrada foi o erro de dose (157). Já o antibiótico mais comumente utilizado foi a Piperaciclina + Tazobactan com 51 doses. Conclui-se que o ambiente de trabalho e o comportamento adotado pelos profissionais de enfermagem são condições que podem favorecer a ocorrência de erros com antibióticos.

Submitted by Morgana Andrade (morgana.andrade@ufes.br) on 2016-04-13T21:32:23Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) DISSERTAÇÃO_ANALISE IN SILICO_PEPTIDEO ANTIMICROBIANOS.pdf: 5274880 bytes, checksum: d59f6bb66ce0d7814f525e182679a031 (MD5) / Approved for entry into archive by Patricia Barros (patricia.barros@ufes.br) on 2016-05-17T13:57:59Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) DISSERTAÇÃO_ANALISE IN SILICO_PEPTIDEO ANTIMICROBIANOS.pdf: 5274880 bytes, checksum: d59f6bb66ce0d7814f525e182679a031 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-17T13:57:59Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) DISSERTAÇÃO_ANALISE IN SILICO_PEPTIDEO ANTIMICROBIANOS.pdf: 5274880 bytes, checksum: d59f6bb66ce0d7814f525e182679a031 (MD5) / A relação estabelecida entre os micro-organismos causadores de doenças e a humanidade vem de longa data, sendo as bactérias um dos principais agentes causadores de doenças na espécie humana, cujo controle pode ser por meio do uso de antibióticos, entretanto, com o passar do tempo, o surgimento e o aumento da resistência bacteriana ao uso de tais medicamentos tem se tornado uma preocupação crescente. Diante de perspectivas negativas ocasionadas pela multirresistência, o investimento em pesquisas que permitam a obtenção de novos medicamentos tem se tornado uma necessidade, porém, por mais dinâmicas que sejam as empresas farmacêuticas, a busca por novos antibacterianos não tem acompanhado o desenvolvimento da multirresistência. Desta forma, a elaboração de novas estratégias para o combate crescente a essa resistência tem recebida maior atenção, e os peptídeos antibacterianos (PAMs) surgem como uma perspectiva. Muitos PAMs já foram isolados de animais e plantas apresentando eficácia comprovada. Além de isolados diretamente de organismo diversos, outra possibilidade de obtenção de PAMs é a síntese artificial de peptídeos projetados ou ainda a utilização de peptídeos obtidos da fragmentação de moléculas orgânicas existentes na composição biológica normal dos seres vivos. Modelações computacionais permitem escolhas de peptídeos com maior eficácia e que possam exercer um combate efetivo contra micro-organismos multirresistentes, assim, o desenvolvimento e a validação de técnicas que usem a bioinformática para facilitar a descoberta desses PAMs e minimizar custos de pesquisa estão se destacando no campo da biotecnologia. Neste trabalho, foi selecionada a proteína eritropoetina humana (EPO) para a obtenção de PAMs por meio de simulações in silico. Os peptídeos obtidos foram avaliados e testados em diferentes modelos computacionais visando a predição de possíveis efeitos antibacterianos, pensando em uma eventual síntese para testes futuros, com a perspectiva de que esses agentes atuem como novas armas contra a constante evolução da resistência bacteriana, desde que não gerem respostas imunológica de rejeição, alergenicidade ou citotoxicida ao serem usados em terapias. / The relationship established between the micro-organisms disease causing and humanity has a long history, the bacteria being one of the main causative agents of disease in humans, some easily controlled others less, usually through the use of antibiotics, however, with the passage of time, the emergence and spread of bacterial resistance to the use of such medications has become a growing concern. In the face of negative perspectives caused by multi-resistance, investment in research that allows the obtaining of new drugs has become a necessity, however, even the pharmaceutical companies had been dynamic, the search for new anti-bacterials has not accompanied the development of multidrug resistance. Therefore, the development of new strategies to combat this growing resistance have received more attention, and antibacterial peptides (PAMs) arise as a perspective. Many PAMs have been isolated from animals and plants showing proven effectiveness. Beyond directly isolated from various organisms, another possibility of obtaining PAMs is design artificial synthesis of peptides or the use of peptides obtained from the fragmentation of organic molecules in the biological composition existing in the standard of living beings. Computational modeling allow choices of peptides more effectively and that may have an effective combat against multidrug-resistant micro-organisms, thus, the development and validation of techniques that use bioinformatics to facilitate the discovery of these PAMs and minimize search costs are excelling in the biotechnology field. In this work, we selected the human erythropoietin protein (EPO) to obtain PAMs through simulations in silico. The peptides were evaluated and tested in different computational models aimed at predicting possible antibacterial effects, considering a possible synthesis for future testing, with the prospect that these agents act as new weapons against the constant evolution of bacterial resistance, since there do not generate immune responses of rejection, allergenicity and cytotoxicity when used in therapies.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Farmácia / Made available in DSpace on 2012-10-19T21:01:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 199264.pdf: 457318 bytes, checksum: b1e11d638ed8a5feaab245536b039c67 (MD5) / Os produtos de origem natural são utilizados como fonte de medicamentos para tratar enfermidades que acometem o ser humano desde tempos imemoriais. A terapêutica moderna provavelmente não teria se desenvolvido tanto sem o suporte desses produtos. Porém, o aparecimento de novas doenças infecciosas, o ressurgimento de algumas infecções que pareciam estar controladas e o aumento da resistência bacteriana, criaram a necessidade de pesquisas direcionadas ao desenvolvimento de novos antimicrobianos. Considerando o fracasso na obtenção de novas moléculas com propriedades antimicrobianas a partir de microrganismos é de extrema importância uma adequação dos métodos de triagem para descoberta de antimicrobianos de outras fontes naturais. O objetivo deste trabalho foi avaliar métodos usados para triagem de produtos naturais com atividade antibacteriana, na tentativa de estabelecer critérios para o uso dos mesmos, considerando suas características particulares, uma vez que nos trabalhos publicados, os autores utilizam métodos aleatórios para esta finalidade. Sendo assim, 29 extratos, 17 frações e 9 substâncias puras foram testadas contra duas espécies bacterianas: Staphylococcus aureus ATCC 25923 e Escherichia coli ATCC 25922, por duas variantes do método de difusão em ágar (poço e disco) e por duas variantes do método bioautográfico (direta e indireta). Os resultados mostraram que o método de difusão variante poço foi mais sensível que o método de difusão variante disco e que o método de bioautografia variante direta apresentou sensibilidade maior que o método de bioautografia variante indireta (p<0.05). Entre os dois métodos, o bioautográfico mostrou ser o mais sensível, uma vez que o mesmo detectou atividade antibacteriana com o uso da concentração dos extratos 10 vezes menor que aquela usada no método de difusão. Sugere-se ainda que, no método de difusão, as quantidades de extratos, frações e substâncias puras para a realização dos testes sejam de 4 mg, 3 mg e 0,5 mg, respectivamente. No método bioautográfico, o volume de 400 mg de extrato corresponde à quantidade apropriada para ser usada na realização dos testes. Em síntese, a opção por um dos métodos dependerá das condições de cada laboratório. Sugerimos que laboratórios com melhor infra-estrutura para métodos microbiológicos usem o método de difusão e aqueles mais voltados para química de produtos naturais usem o método bioautográfico.

Made available in DSpace on 2014-12-02T11:16:36Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-03-26Bitstream added on 2014-12-02T11:21:10Z : No. of bitstreams: 1 000796429.pdf: 3598133 bytes, checksum: 33ed808e42b93c105bcf8466893881c3 (MD5) / Tem sido demonstrado que a carbodiimida (EDC) apresenta notável potencial inibidor de proteases (MMPs) e de melhorar as propriedades mecânicas do colágeno quando aplicada sobre a dentina desmineralizada. Entretanto, não existem informações a respeito de sua ação antimicrobiana sobre microrganismos comumente encontrados em lesões de cárie ou mesmo após a sua remoção. Objetivo: Investigar a atividade antimicrobiana do EDC em diferentes concentrações sobre microrganismos presentes em cavidades cariosas. Métodos: Soluções de EDC foram preparadas e testadas contra S. mutans e sobrinus, L. acidophilus e Candida albicans. Inicialmente, foi utilizado o teste de difusão em ágar, no qual discos de papel filtro foram impregnados com EDC 2, 1, 0,5, 0,3 ou 0,1 mol/L, clorexidina 0,12%, nistatina 1% ou tampão Sorensen pH 6,2 (n=6). Em seguida, foi determinada a concentração inibitória mínima (CIM) e bactericida mínima (CBM) do EDC sobre L. acidophilus em suspensão planctônica (n=9), por meio de turvamento. Por fim, a atividade do EDC (de 0,01 à 2 mol/L) sobre L. acidophilus em biofilme monoespécie foi definida por meio do ensaio de XTT (n=6). Os dados foram submetidos aos testes estatísticos de ANOVA e Tukey ou Mann-Whitney (p<0,05). Resultados: No teste de difusão em ágar, nenhuma atividade antimicrobiana foi observada para EDC nas concentrações de 0,1 e 0,3 mol/L, assim como para o grupo controle. EDC 0,5, 1 e 2 mol/L exerceu efeito antimicrobiano apenas sobre L. acidophilus. A CIM do EDC foi de 0,01 mol/L e a CBM foi de 0,03 mol/L. Todas as concentrações de EDC igual ou superiores a 0,05 mol/L foram capazes de reduzir significantemente o metabolismo do biofilme formado por L. acidophilus. Essa redução variou de 84,2 para 0,05 mol/L até 93,4% para 2 mol/L. Conclusão: O EDC apresentou atividade antimicrobiana apenas contra L. acidophilus reduzindo significantemente o crescimento deste microrganismo quando em suspensão... / It has been demonstrated that carbodiimide (EDC) is a potent protease inhibitor (MMPs) and is able to improve the mechanical properties of collagen when applied on the demineralized dentin. However, there is no information about its antimicrobial effect on microorganisms commonly found in caries lesions or even after its removal. Objective: To investigate the antimicrobial activity of different concentrations of EDC against microorganisms present in caries lesions. Methods: EDC solutions were prepared and tested against S. mutans and sobrinus, L. acidophilus and Candida albicans. Initially, the agar diffusion test was used, where paper discs were impregnated with 2, 1, 0.5, 0.3 or 0.1 mol/L EDC, 0.12% chlorhexidine, nistatin 1% or Sorensen’s buffer pH 6.2 (control) (n=6). Then, the minimum inhibitory (MIC) and bactericide concentrations (MBC) of EDC were determined against L. acidophilus using turbidity. Finally, the growth inhibitory activity of EDC (from 0.01 to 2 mol/L) against L. acidophilus in monoespecies biofilm was defined using the XTT assay (n=6). Data were submitted to ANOVA and Tukey tests or Mann-Whitney (p<0.05). Results: For the agar diffusion test, lack of antimicrobial activity was seen for EDC at 0.1 and 0.3 mol/L, as well as for the control group. 0.5, 1 and 2 mol/L EDC exerted a growth inhibitory effect only against L. acidophilus. The MIC for EDC was set as 0.01 mol/L and the MBC as 0.03 mol/L. Concentrations equal to or greater than 0.05 mol/L were capable of significantly reducing the metabolism of L. acidophilus when in monospecies biofilm. This reduction ranged from 84.2% for 0.05 mol/L to 93.4% for 2 mol/L. Conclusion: EDC exerted antibacterial activity only against L. acidophilus significantly reducing its growth in planktonic suspension and its metabolism in biofilms in the concentration of 0.05 mol/L or higher.

Introdução: O emprego de técnicas de interpretação imunológica de agentes infecciosos, de uma maneira geral, confere maior sensibilidade e especificidade ao exame histopatológico; o anticorpo policlonal anti-BCG tem sido testado como uma coloração imunoistoquímica de triagem para espécimes de biópsias cutâneas, com suspeita de origem infecciosa; em casos de infecções fúngicas e bacterianas, os resultados mostraram-se claramente superiores aos conseguidos pelas técnicas histoquímicas convencionais. Objetivos: Verificar a positividade da reação imunoistoquímica com o anti-BCG em granulomas imunológicos cutâneos, que não puderam ter o seu diagnóstico etiológico definido pelos métodos histoquímicos usuais de coloração para agentes infecciosos (Grocott e Ziehl-Neelsen) e também descrever a sensibilidade e especificidade deste anticorpo, através da comparação com os exames culturais para fungos e micobactérias. Metodologia: Procedeu-se à técnica imunoistoquímica com o anti-BCG em 33 biópsias cutâneas com granulomas imunológicos, com colorações de Grocott e Ziehl-Neelsen negativas. Também foram selecionados 13 casos de hanseníase virchowiana e 11 de granulomas por degeneração do colágeno, para que servissem de controles positivos e negativos, respectivamente. A leitura das lâminas foi realizada por dermatopatologista do HCPA que não tinha conhecimento dos dados clínicos dos pacientes. Não foi realizada a quantificação do antígeno nos cortes. Resultados: Dos 33 casos estudados, 13 (39,4%) apresentaram imunoistoquímica positiva com o anti-BCG, os diagnósticos finais foram: 4 casos (12,12%) de tuberculose, 4 casos de esporotricose, 1 caso (3.03%) de cromomicose, 1 caso de hanseníase tuberculóide e 3 casos (9.09%) que não puderam ter o diagnóstico conhecido, pois perderam o acompanhamento médico. A sensibilidade do anti-BCG quando comparado com a cultura para fungos foi de 57,1% e a especificidade de 66,7%; na comparação com a cultura para micobactérias a sensibilidade foi de 100%, porém só haviam 2 exames positivos, e a especificidade foi de 67,7%. Nos casos de hanseníase virchowiana, a sensibilidade e a especificidade foi de 100%. Conclusão: A técnica imunoistoquímica com o anticorpo anti-BCG é relativamente fácil, rápida e de baixo custo e mostrou ser útil na identificação de microorganismos que não foram prontamente visualizados com as colorações de Grocott e Ziehl-Neelsen. Entretanto, o pequeno número de controles pode ter influenciado no desempenho do método.