A cana-de-açúcar (Saccharum sp.) chegou ao Brasil com a implementação das primeiras capitanias. Hoje ela é cultivada em praticamente todos os estados brasileiros, sendo processada para a produção de açúcar e álcool combustível. Para suprir este mercado crescente com plantas de alta qualidade é necessária a utilização da técnica de cultura de tecidos aplicada à microprogação in vitro para produzir mudas livres de doenças e em larga escala. Porém a contaminação microbiana é um fator determinante no sucesso da produção de plantas micropropagadas, sendo responsável por grandes perdas no processo. Dentro deste contexto, o presente trabalho teve como principal objetivo encontrar antibióticos capazes de reduzir as perdas por contaminação bacteriana no processo produtivo de plantas micropropagadas de cana-deaçúcar sem afetar o desenvolvimento vegetal. Para tanto, foram realizados o isolamento e identificação dos contaminantes bacterianos presentes no material micropropagado, a seleção dos principais antibióticos capazes de inibir o crescimento destes contaminantes e posteriormente um processo de antibioticoterapia foi estabelecido. Os resultados obtidos através da identificação evidenciaram que a maioria dos contaminantes bacterianos é composta por microrganismos endofíticos, sendo o gênero Gluconacetobacter o contaminante encontrado com mais frequência. Os resultados dos testes de suscetibilidade mostraram que nenhum antibiótico é 100% eficaz no controle geral do crescimento bacteriano, porém o antibiótico rifampicina se mostrou mais eficiente quando usado na concentração mínima de 50 g/mL e quando realizada a antibioticoterapia não afetou o crescimento das plantas micropropagadas. / Sugarcane (Saccharum sp.) arrived in Brazil with the first captaincy implementation. Nowadays, it is cultivated in almost all Brazilian states, processed to produce sugar and alcohol as fuel. In order to supply this growing market with high quality plants, it is necessary to use the technique of tissue culture applied to in vitro micropropagation to produce seedlings free of disease in large scale. But the microbial contamination is a determinant factor for the success of micropropagated plants production; it is responsible for great losses in the process. Within this context, the present work aimed to find antibiotics that can reduce losses by bacterial contamination in the production process of sugarcane micropropagated plants without affecting its development. Therefore, we have performed the isolation and identification of bacterial contaminants present in micropropagated material, the selection of the main antibiotics capable of inhibiting the growth of these contaminants and then a process of antibiotic therapy was established. The results obtained through the identification evidenced that most of the bacteria contaminants is composed of endophytic microorganisms, and the genus Gluconacetobacter was the contaminant found more often. The results of susceptibility tests showed that no antibiotic is 100% effective in the general control of bacterial growth, but the antibiotic rifampicin was more efficient when used at the minimum concentration of 50 g/mL and when performed with antibiotic therapy did not affect the growth of micropropagated plants.

Orientador: Marcos Rivail da Silva. / Co-orientador: Adilson Pinheiro. / Dissertação (mestrado) - Universidade Regional de Blumenau, Centro de Ciências Tecnológicas, Programa de Pós-Graduação de Engenharia Ambiental.

Enterobactérias são comumente encontradas em simbiose com plantas, promovendo o crescimento vegetal, através da redução do nitrogênio atmosférico a amônia. Entretanto, são os principais patógenos na medicina humana e veterinária. O objetivo deste estudo foi buscar marcadores genéticos e fisiológicos que caracterizem espécies de enterobactérias isoladas de cana-de-açúcar (n=24) e de origem clínica (n=15). Foram submetidas a testes moleculares e fisiológicos como: capacidade de reduzir N2; perfil de susceptibilidade a antibióticos; atividade hemolítica; produção de substâncias promotoras de crescimento e liberação de enzimas extracelulares. Atividades metabólicas e fisiológicas altamente conservadas, sustentadas pelo ponto vista genético, permitem a distribuição destas espécies em diferentes ecossistemas, e, em condições favoráveis, esta adaptação pode contribuir para o estabelecimento de processos patogênicos ou simbióticos em plantas. Então, enterobacterias ambientais podem se tornar patogênicas, enquanto isolados clínicos podem se adaptar a condições ambientais. / Enterobacteria are commonly found in symbiosis with plants, promoting their growth by reducing atmospheric nitrogen to ammonia. However, they are also major pathogens in human and veterinary medicine. The aim of this study was to characterize physiological and genetic markers that distinguish enterobacteria species isolated from sugarcane (n= 24) and clinical sources (n= 15). The samples were characterized regarding their molecular and physiological assays as: ability to reduce N2, antibiotic susceptibility profile; screen for hemolytic activity; production of plant-growth promoting compounds and release of extracellular enzymes. Finally, highly conserved physiological and metabolic activities are supported on genetic backgrounds that allow a wide distribution along different ecosystems and, in favorable conditions, this adaptation could contribute to the establishment of a pathogenic process or symbiosis in plants. So, environmental enterobacteria isolates can become pathogenic, whereas clinical strains can adapt to environmental conditions.

A presença de produtos farmacêuticos no meio ambiente é uma questão emergente, devido à crescente resistência bacteriana. As tecnologias utilizadas em instalações de tratamento de água não são eficientes para remover todos os resíduos farmacêuticos e os efeitos dessas substâncias não são bem conhecidos. No presente trabalho, estudou-se a degradação do antibiótico sulfametoxazol (SMX) por fotólise. O SMX é uma sulfonamida, um dos grupos de antibióticos mais utilizados. A fotodegradação de SMX em solução aquosa foi realizada por radiação UVC, sendo o composto transformado por meio de absorção de fótons de comprimento de onda igual a 254 nm. Os experimentos foram conduzidos em um reator fotoquímico anular tubular feito de vidro Pirex (volume irradiado de 3,9 L). A irradiação foi feita por uma lâmpada de mercúrio de baixa pressão de 36 W posicionada ao longo do eixo do reator. Utilizaram-se 5,5 L de solução aquosa do antibiótico (10-50 mg/L). Os efeitos das concentrações iniciais de SMX e do pH (5, 7 ou 9) foram estudados a partir de um projeto experimental Doehlert. Os resultados indicaram remoções de SMX superiores a 99% em até 30 minutos de exposição à radiação UVC. A análise estatística dos resultados em termos do tempo necessário para redução de 50% da concentração inicial de SMX e da taxa inicial de degradação confirmou que para maior quantidade inicial do antibiótico é possível observar que o pH interfere na resposta, indicando que a fotólise do SMX é mais lenta em meio básico. Por outro lado, para concentrações iniciais mais baixas, não é possível afirmar se o pH interfere ou não na velocidade de degradação de SMX, já que esta ocorre muito rapidamente. Os compostos resultantes da degradação do SMX mostraram-se recalcitrantes, obtendo-se remoções de COT menores que 7%. Medidas de toxicidade baseadas na inibição da luminescência da bactéria Vibrio fischeri, segundo o método Microtox 500®, indicaram aumento de toxicidade das soluções aquosas após irradiação. Além disso, bioensaios respirométricos sugeriram que os produtos gerados na degradação são mais favoráveis à oxidação em sistemas biológicos de tratamento. / The presence of pharmaceuticals in the environment is an emerging issue due to the increasing bacterial resistance. The technologies used in sewage and wastewater treatment plants are not efficient to remove all pharmaceutical residues and the effect of these substances is not well known. In this work, the degradation of the antibiotic sulfamethoxazole (SMX) by photolysis has been studied. SMX belongs to the sulfonamides group, one of the first groups of antibiotics used. The photodegradation of SMX in aqueous solution was carried out by UV radiation, in which the target compound is transformed by absorbing photons with wavelength 254 nm. The experiments were carried out in an annular photochemical reactor made of Pyrex glass (irradiated volume of 3.9 L). The irradiation was provided by a 36 W low-pressure mercury vapor lamp set along the reactor axis. A total volume of 5.5 L of aqueous solution (10-50 mg/L) was used. The effects of SMX initial concentration and pH (5, 7 or 9) were studied according to a Doehlert experimental design. The results showed SMX removals greater than 99% after 30 minutes of UVC irradiation. Statistical analysis of the results in terms of the time needed to remove 50% of SMX initial concentration and the initial degradation rate showed that pH affects the response for higher initial amounts of antibiotic, showing that SMX photolysis is slower in basic medium. On the other hand, for lower initial concentrations, it is not possible to confirm wether pH affects the removal rate or not, because the decrease of SMX concentration is very fast. The compounds resulting from SMX degradation were shown to be recalcitrant, with TOC removals not greater than 7%. Bioassays based on the inhibition of Vibrio fischeri luminescence showed an increase of the toxicity of irradiated aqueous solutions. Moreover, respirometric bioassays suggested that the degradation products produced by SMX degradation are more favorable to oxidation in biological treatment systems.

O fungo Humicola grisea var. thermoidea foi submetido a diferentes condições de cultivo com o intuito de determinarem-se as melhores condições para produção de conídios, crescimento e produção de metabólitos secundários com atividade biológica. Para tal foram desenvolvidos experimentos avaliando dois parâmetros: meio fermentativo e tempo de incubação. Os meios fermentativos líquidos utilizados foram Czapek, Jackson e Vogel em condições de agitação (120 rpm), e os tempos avaliados foram 72, 96, 120, 144, 168 e 192 horas. Também foi desenvolvida cultura por fermentação em substrato sólido, meio de arroz enriquecido, em diferentes tempos de incubação, sendo escolhido o período de 60 e 90 dias como os mais promissores. Todos os cultivos foram realizados em temperatura de 40ºC. Dos cultivos em meio líquido foram obtidos extratos acetoetílicos e butanólicos dos filtrados das culturas e metanólicos dos micélios. Dos cultivos a partir do meio sólido foram obtidos extratos acetoetílicos. Os extratos foram avaliados pela técnica de bioautografia na concentração de 30 mg/mL (10 L), utilizando-se como indicadores biológicos as cepas Kocuria rhizophila (ATCC 9341), Staphylococcus aureus (ATCC 25923), Escherichia coli (ATCC 25922) e Pseudomonas aeruginosa (ATCC 14885). Os extratos acetoetílicos e metanólicos obtidos a partir dos cultivos em Czapek e Vogel, nos tempos 144, 168 e 192 horas se mostraram ativos contra as cepas K. rhizophila e S. aureus. Os extratos obtidos do meio sólido e o extrato acetoetílico (192 horas) obtido do meio de cultivo de Czapek foram avaliados pelo método de microdiluição em microplaca com o objetivo de determinarem-se os valores de CIM, utilizando como microrganismos indicadores K. rhizophila e S. aureus. O extrato mais promissor foi o extrato acetoetílico do cultivo em meio de arroz enriquecido, durante 90 dias, sendo os valores de concentração inibitória mínima de 350 g/mL e de 250 g/mL, contra S. aureus e K. rhizophila, respectivamente. Os extratos foram avaliados por cromatografia líquida de alta eficiência, sendo a princípio considerados promissores os extratos em acetato de etila de Czapek e arroz enriquecido. O fungo foi cultivado em arroz (60 e 90 dias), devido ao maior rendimento, manejo mais simples, menores valores de concentração inibitória mínima quando comparados aos cultivos desenvolvidos nos meios fermentativos líquidos avaliados. Deste modo, foi promovida ampliação da escala de cultivo em meio sólido e os extratos obtidos foram submetidos a processos cromatográficos visando o isolamento de substâncias ativas. Foram isoladas seis substâncias, e elucidadas três: dimetil tereftalato, ácido p-hidroxifenilacético e uma lactama, a qual foi isolada pela primeira vez de fungos e havia sido isolada apenas da esponja marinha (Halichondria melanodocia) infestada por alga. Os resultados dos ensaios de microdiluição em microplaca de tais substâncias se mostraram bastante discretos. Entretanto, outros ensaios biológicos, dentre eles, antitumorais e antiparasitários serão realizados para as substâncias isoladas. / The fungos Humicola grisea var. thermoidea was submmited to different growth conditions, aiming to determine the best condition for the conidia production, mycelia growth and production of secondary metabolites bearing biological activities, as well. For that, it was evaluated both deferent fermentative media (Czapek, Jackson and Vogel) and incubation time (72, 96, 120, 144, 168 e 192 hours), under 120 RPM. The fungus was also cultivated in solid medium using enriched rice in different times of incubation in two batches of 60 and 90 days of fermentation. All fermentations were undertaken at 40ºC. From the fermetation in liquid media it was obtained the extracts in ethyl acetate and n- butanol, from the broth, respectively, and in methanol from the mycelium. From the solid media (rice) it was obtained the ethyl acetate extract. The obtained extracts were submitted to bioautography assay by applying 10 L of a solution containing 30 mg/mL of each extract against the following bacteria strains: Kocuria rhizophila (ATCC 9341), Staphylococcus aureus (ATCC 25923), Escherichia coli (ATCC 25922) and Pseudomonas aeruginosa (ATCC 14885). The extracts em ethyl acetate and methanol obtained from from Czapek and Vogel media at 144, 168 e 192 hours displayed activity against K. rhizophila and S. aureus. The extracts obtained from the solid medium and the ethyl acetate extract from the Czapek nediun at 192 hours were evaluated using the Minimum Inhibitory Concentration (MIC) in microplates, aiming to determine the MIC values for these extracts against both K. rhizophila and S. aureus. The most active extract (ethyl acetate) was the one obtained from solid media cultivated for 90 days, furnishing the MIC values of 350 g/mL and 250 g/mL against S. aureus and K. rhizophila, respectively. All the obtained extracts were submitted to HPLC chromatography and the best chromatographic profiles were displayed by both ethyl acetate extracts from Czapek and enriched rice media. The cultivation in rice media was simple and produced the highest yield of extract, as well as displayed the lowest CIM in comparison with the extracts obtained from the broth of liquid media. Therefore, the fungus was cultivated in a larger scale in rice aiming to obtain enough amount of ethyl acetate extract to allow the isolation of the major active compounds by chromatographic means. Thus, six compounds were isolated, from which three were identified so far: dimethyl tereftalate, p-hidroxyphenylacetic acid and the one lactam. The lactam was isolated for the firs time from a soil fungus, and it was previous isolated only from a marine sponge (Halichondria melanodocia) infested by algae. However, the obtained MIC values for these compounds were very high. Even though, other biological assays, such as: anticancer and antiparasitic, among other will be undertaken to evaluate the potential of the isolated compounds.

Os antibióticos aminoglicosídeos adquiriram uma posição relevante no cenário terapêutico devido ao interesse na regulação da síntese protéica bacteriana em nível de RNA, uma vez que são ligantes inespecíficos para diversos tipos de RNA bacterianos, como RNA mensageiro, RNA transportador e RNA ribossômico. Esta classe de antibióticos apresenta amplo espectro de ação, particularmente contra bactérias Gram-negativas. Recente abordagem estende o uso dos antibióticos aminoglicosídeos como agentes antivirais devido a sua afinidade de ligação ao RRE-, Rev Responsive Element, e TAR-, Trans-Acting Responsive sequence HIV RNA. Por conseguinte, há uma inibição competitiva envolvendo seus correspondentes ligantes naturais, as proteínas Rev e Tat, interrompendo a replicação, do vírus HIV-tipo 1. Em virtude da importância de derivados simplificados dos antibióticos aminoglicosídeos na busca por derivados vestíbulo-tóxico seletivos ou RNA-ligantes, o presente trabalho propõe a síntese do amino- e carba-açúcar 2-desoxiestreptamina, 16, a qual apresenta um desafio sintético interessante devido à presença de cinco centros estereogênicos contínuos com substituintes em relação trans no anel e pode ser utilizada na construção de moléculas mais complexas A estratégia sintética proposta para preparação do composto meso 2-desoxiestreptamina (16), envolve metodologia inédita e foi desenvolvida em duas rotas sintéticas: (i) preparação do carba-açúcar precursor 46 e (ii) preparação de 16 propriamente dito. / Aminoglycoside antibiotics received a relevant position in the therapeutic scenario due to the interest in the regulation of bacterial protein synthesis at the RNA-level, since they are a unspecific ligands to several bacterials RNA types, such as mRNA, tRNA and rRNA. These types of antibiotics show a broad spectrum of activity, particulary against gram negative bacteria. New approach extends the use of aminoglycosides as antiviral agents owing to their binding affinity to RRE- Rev Responsive Element and TAR- Trans-Acting Responsive sequence of HIV RNA. Thus, there is a competitive inhibition involving their corresponding natural ligands Rev and Tat proteins, disrupting the HIV-1 virus replication. Regarding the importance of simplified aminoglycoside antibiotics in the search for selective vestibule-toxic derivatives or RNA-ligands, this work focuses on the synthesis of the amino- and carba-sugar 2-deoxyestreptamine, 16, which has an interesting synthetic challenge related to the presence of five continuous stereogenic centre with substituents in trans disposition in the ring, and may be employed in the construction of more complex molecules. The synthetic strategy proposed to prepare meso 2-deoxyestreptamine (16) involves a new methodology and was performed in two synthetic routes: (i) the synthesis of precursory carba-sugar (46) and (ii) the synthesis of (16) properly.

A infecção relacionada à assistência à saúde (IRAS) é um problema relevante de saúde pública, associado ao aumento na permanência hospitalar e à elevação dos custos referentes, tanto à agressão ao paciente, como ao consumo de insumos. Não obstante, à existência de normatizações e legislações sobre o tema, a IRAS ainda é a complicação mais frequente entre pacientes hospitalizados. Com o objetivo de estabelecer ações para redução de IRAS as instituições de saúde valem-se de indicadores de resultado que determinam valores numéricos de sua incidência e prevalência. Considerando que a IRAS é multicausal, o método de avaliação é restrito, mensurando apenas o volume de desfechos sem considerar as etapas do processo assistencial. Este estudo teve a finalidade de contribuir com a melhoria da qualidade das práticas de prevenção e controle das IRAS, por meio da aplicação de indicadores processuais na avaliação da conformidade das práticas de antibioticoprofilaxia cirúrgica por especialidade e tipo de procedimento cirúrgico, verificando sua associação às características individuais da população. Tratou-se de um estudo de avaliação para gestão, com desenho transversal descritivo. O cenário foi um hospital de 200 leitos localizado na cidade de São Paulo. A casuística correspondeu a procedimentos limpos das especialidades de cirurgia cardíaca, neurológica e ortopédica, realizados em pacientes adultos. O uso de antibioticoprofilaxia, droga, duração, via de administração, momento de início e dose, foram avaliados, conforme recomendação da instituição. As variáveis de associação foram idade, sexo, IRIC e local de internação no pós-operatório imediato. A amostra foi calculada com base na conformidade esperada de 50%, correspondendo à avaliação de 748 prontuários; 423 (56,6%) com indicação de antibioticoprofilaxia e 325 (43,4%) sem indicação. A conformidade geral foi de 4,9%; para procedimentos sem indicação de uso, foi de 8,7% e com indicação, 1,9%. A conformidade em cirurgias ortopédicas foi de 5,8%; neurológicas (3,1%) e cardíacas (3,0%). Para procedimentos com indicação de uso a conformidade geral em cirurgia cardíaca foi 3,0%; neurocirurgia, 2,4% e cirurgia ortopédica, 1,0%. Nas cirurgias cardíacas, estavam conforme três procedimentos (comissurotomia mitral, ressecção de tumor cardíaco e troca valvar com revascularização do miocárdio); na neurocirurgia, quatro (artrodese, craniotomia, laminectomia e radiculotomia) e na cirurgia ortopédica 36,4% das retiradas de material de síntese. Estavam conforme com, pelo menos, três parâmetros 94,9% das cirurgias ortopédicas, 93,1% das cardíacas e 87,9% das ortopédicas. A via de administração estava conforme em 100,0% das observações, o uso e a dose em 97,6%, a droga em 80,9%, o momento em 62,5% e a duração em 4,8%. A associação entre as características individuais dos pacientes e a conformidade geral, ao uso e à duração da antibioticoprofilaxia não apresentaram diferenças significativas. Houve diferenças significativas quanto a conformidade em relação ao momento da primeira dose e IRIC 1; à droga escolhida e IRIC 0. Concluiu-se que, embora a conformidade geral tenha sido baixa, a maior parte dos parâmetros de uso de antibioticoprofilaxia cirúrgica estava conforme em todas as especialidades avaliadas, logo o que impactou na não conformidade, de fato, foi a duração da antibioticoprofilaxia cirúrgica. / Healthcare associated infection (HAI) is a significant public health problem that affects patients length of stay, and hospital costs due to both greater supplies consumption and greater health aggravation. Despite the existence of guidelines and legislations on the issue, HAI is the most frequent source of problems for hospital inpatients. Aiming to establishing actions to curb HAI, healthcare settings apply outcome indicators that quantify its occurrence and prevalence. Considering that HAI has several sources, such evaluation method is limited because it only measures the outcomes without considering the full healthcare process. This study intended to contribute to the improvement of HAI control and prevention practices through the employment of process indicators. The proposed indicators evaluated the compliance of prophylactic antibiotics use in surgeries, according to its specialty and procedure type, and related outcomes with population characteristics. The analysis consisted of a cross-cutting descriptive study. Data were collected in a 200 bed hospital located in Sao Paulo city. The sample enclosed clean procedures applied to adult patients of cardiac, neurologic, and orthopedic surgeries. The adoption of prophylactic antibiotics was evaluated in addition to drug applied, employment period, vial, dose, and employment time, all according to the guidelines of the institution. The association variables were: age, sex, IRIC, and post surgery room type. The sample was sized according to the expected compliance (50,0%) taking into account 748 records. About 423 (56,6%) of them had prophylactic antibiotic use recommendation and 325 (43,4%) did not have any recommendation. The general compliance was 4,9%; and for procedures with and without recommendation it was respectively 1,9% and 8,7%. The compliance in orthopedic, neurologic, and cardiac surgeries was respectively 5,8%, 3,1%, and 3,0%. For procedures with prophylaxis recommendation, the general compliance of cardiac procedures, neurologic, and orthopedic was respectively 3,0%, 2,4%, and 1,0%. Among cardiac surgeries three procedures were in compliance: mitral commissurotomy, cardiac tumor ressection and valve replacement with coronary bypass. Among neurologic surgery, four procedures were in compliance: spinal fusion, craniotomy, laminectomy e radiculotomy. Among orthopedic surgery 36,4% of the synthesis material extraction was in compliance. About 94,9% of the orthopedic surgeries, 93,1% of the cardiac, and 87,9% of the orthopedic complied to at least three parameters. Vial compliance was observed in 100% of the assessed records. Employment and drug dose, drug choice, timing, and antibiotic prophylaxis course were in compliance with respectively 97,6%, 80,9%, 62,5%, and 4,8%. An assessment of inpatients individual characteristics versus general compliance did not present any statistic difference. Significant differences were related to compliance to first dose timing versus risk index 1, and chosen drug versus risk index 0. In conclusion, despite a low general compliance, most of the antibiotic prophylaxis parameters of the assessed specialties were in compliance. Therefore, the greatest non compliance impact was the antibiotic prophylaxis course.

Introdução e objetivos: A produção de beta-lactamases de espectro ampliado (ESBLs) tem sido restrita a espécies do gênero Klebsiella spp. e E. coli, sendo associada a altos índices de resistência, morbidade e mortalidade. Uma vez que os determinantes genéticos para ESBLs (genes blaESBL) são mediados por plasmídios, a sua disseminação para outras espécies de importância médica é considerada uma urgência epidemiológica. Os genes que codificam para ESBLs são mais comumente encontrados em membros da família Enterobacteriaceae, porém, plasmídeos, integrons, e sequências de inserção têm contribuído para o aumento da incidência de genes blaESBL entre outras bactérias Gramnegativas, incluindo Pseudomonas aeruginosa. Infelizmente, uma das maiores dificuldades associada à identificação precoce da produção de ESBL em agentes de infecção hospitalar como Pseudomonas aeruginosa tem sido a padronização de métodos fenotípicos, os quais são afetados por resultados falso-negativos, decorrentes de mecanismos intrínsecos que mascaram a presença destas enzimas (i.e., produção de beta-lactamase AmpC de origem cromossômica). O presente estudo teve como objetivo caracterizar feno e genotipicamente a produção de ESBLs em isolados clínicos de P. aeruginosa recuperados de diferentes hospitais do Estado de São Paulo durante o período de 2004-2008. Materiais e métodos: 35 amostras de P. aeruginosa provenientes de 4 diferentes centros médicos de São Paulo, com perfil de resitência às cefalosporinas de terceira geração, foram submetidas à triagem fenotípica para a produção de ESBL na presença e ausência de inibidores específicos (ácido clavulânico e cloxacilina). A confirmação genotípica foi realizada por PCR e sequenciamento, usando iniciadores para pesquisa dos genes blaCTX-M, blaTEM, blaSHV, blaOXA, blaPER e blaGES, e para o mapeamento de integron Classe 1. A diversidade genética das amostras foi realizada com auxílio do método de ERIC PCR e o índice de similaridade calculado empregando-se o coeficiente de Dice. Resultados e conclusão: Os métodos fenotípicos identificaram 3 cepas produtoras de ESBL, porém, a presença dos genes blaCTX-M e blaOXA-10 foi confirmada em 9 (33%) e 2 (7%) cepas de P. aeruginosa, respectivamente, recuperadas em 3 centros. O mapeamento e seqüenciamento do integron classe 1 encontrado revelou que duas cepas carregam 2 diferentes integrons classe 1 com genes blaCTX-M-2, aac6, e aadA6 de resistência para as cefalosporinas de terceira geração e para aminoglicosídeos. A transferência horizontal dos genes blaESBL não foi confirmada por transformação. Este estudo descreve que o aparecimento e disseminação de genes blaCTX-M em isolados clínicos de P. aeruginosa no Brasil teve sua origem a partir de 2005. Uma vez que ESBLs do tipo CTX-M têm sido amplamente descritas em Enterobactérias, a identificação destes genes em isolados de P. aeruginosa é alarmante e mostra que a mobilização horizontal do gene blaCTX-M entre diferentes gêneros e espécies é uma realidade no Brasil. Os genes que conferem resistência às metilases 16s RNAr não estavam relacionados a cepa de Pseudomonas aeruginosa produtores da enzima ESBL isoladas nas amostras de São Paulo. As cepas de Pseudomonas aeruginosa do presente estudo mostraram vários elementos de mobilização genéticos, como integrons e sequências de inserção, que podem estar participando na disseminação de resistência aos antibióticos beta- lactâmicos de amplo espectro. / Introduction and aim: The production of extended-spectrum beta-lactamases (ESBLs) has been restricted to Klebsiella spp. and Escherichia coli, being associated with high rates of resistance, morbidity and mortality. Since genetic determinants for ESBLs (blaESBL genes) are mediated by plasmids, the spread to other medical important species is considered an epidemiological urgency. These genes encoding ESBLs are commonly found in members of the Enterobacteriaceae however, plasmids, integrons, and insertion sequences have contributed to the increase in the incidence of blaESBL genes among other gram-negative bacteria, including Pseudomonas aeruginosa. Unfortunately, one of the biggest difficulties associated with the early identification of the production of ESBL in nosocomial agents as Pseudomonas aeruginosa has been the standardization of phenotypic methods, which are affected by false-negative results stemming from intrinsic mechanisms which can mask the presence of these enzymes (i.e., production of chromosomal beta-lactamase AmpC). The aim of this study is to characterize phenotypical and genotypical ESBL production in clinical isolates of P. aeruginosa recovered in different hospitals in São Paulo during the period of 2004 to 2008. Materials and methods: 35 P .aeruginosa isolates intermediately resistant or resistant to third generation cephalosporin were phenotypically analyzed for the presence of ESBL with and without inhibitors (clavulanic acid and cloxacilin).Genotipic confirmation with specific primers for blaCTX-M, blaTEM, blaSHV, blaOXA, blaPER and blaGES and the characterization of the genetic environment of blaCTX-M was performed by PCR and DNA sequencing.The random amplified polymorphism DNA technique with primer ERIC-2 was carried out for the isolates genotyping and the similarity index calculated with coefficient of Dice. Results and conclusion: the phenotypic methods identified 3 ESBL producing strains, however, the presence of genes blaCTX-M and blaOXA-10 has been confirmed in 9 (33%) and 2 (7%) strains of P. aeruginosa, respectively, from 3 medical centers. The mapping and sequencing of integron class 1 revealed that two strains harbored two different class 1 integrons with aadA6-like , aac6 gene and blaCTX-M-2-like genes conferring resistance to aminoglicosydes and third generation cephalosporins. The blaESBL horizontal transferation has not been confirmed by transformation. This study describes that the emergence and spread of genes blaCTX-M in clinical isolates of P. aeruginosa in Brazil had its origin from 2005. Since CTX-M type ESBLs have been widely described in Enterobacteriaceae, the identification of these genes in P. aeruginosa is alarming and shows that the blaCTX-M horizontal mobilization among different genus and species is a reality in Brazil. The genes that confer resistance to 16s RNAr methylases are not related to ESBL positive Pseudomonas aeruginosa strains in samples of São Paulo. The Pseudomonas aeruginosa strains of this study showed several genetic mobilization elements, such as integrons and insertion sequences, which may be participating in the spread of resistance to broad spectrum betalactams.

Introdução: A doença periimplantar caracteriza-se pela perda óssea progressiva em implantes dentais osseointegrados. Sua origem é bacteriana, e acomete cerca de 20% da população com reabilitações implantossuportadas. O sucesso do tratamento parece depender da desinfecção da superfície dos implantes para resolução da inflamação, e da configuração dos defeitos ósseos para a regeneração dos tecidos. Até o momento, não há protocolos bem estabelecidos para a desinfecção da superfície de implantes osseointegrados. O objetivo deste estudo foi comparar dois métodos de desinfecção da superfície de implantes, e o efeito do uso da regeneração óssea guiada no tratamento da periimplantite induzida em cães. Materiais e Método: Oito cães beagle receberam 8 implantes cada. Após 8 semanas, ligaduras de seda foram posicionadas, e removidas após mais 8 semanas. O tratamento foi realizado após 10 semanas, por meio de desinfecção com a terapia fotodinâmica antimicrobiana ou aplicação tópica tetraciclina 50mg/ml, com ou sem procedimentos de regeneração óssea guiada associados. Durante o tratamento foram coletadas amostras microbiológicas por meio de um swab com microbrush estéril antes do tratamento, e imediatamente após o tratamento. A eutanásia ocorreu 12 semanas após o tratamento para processamento histológico. Os desfechos de tratamento analisados foram: ganho ósseo linear (mm), ganho ósseo (%), reosseointegração (%), redução bacteriana total e proporcional após o tratamento (%). Resultados: Os resultados gerais não demonstraram diferenças significantes entre os grupos quando comparados os métodos de desinfecção, e o uso ou não de procedimentos regenerativos. O uso da regeneração óssea guiada não resultou em melhoras no ganho ósseo, e sítios vestibulares apresentaram piores resultados regenerativos. A exposição precoce ao meio bucal afetou negativamente os resultados do tratamento, independente do grupo. Conclusão: Ambas terapias antiinfecciosas, associadas ou não a procedimentos regenerativos, obtiveram sucesso na resolução da inflamação e desinfecção da superfície dos implantes, com ganho ósseo parcial, sem o uso de antibioticoterapia sistêmica. / Objectives: This study used a dog model to evaluate two anti-infective treatment protocols for the treatment of periimplantitis with or without the use of guided bone regeneration (GBR). Material and Methods: Eight beagle dogs received eight implants each. After 8 weeks, silk ligatures were installed and then removed after 8 weeks, and after the end of 10 weeks the lesions were treated either with antimicrobial photodynamic therapy (aPDT) or topical tetracycline hydrochloride 50mg/ml with and without guided bone regeneration. Microbiological samples were collected with sterile microbrush before, and immediately after treatment. The animals were euthanized 12 weeks after treatment and submitted to histological processing. The outcomes evaluated included: linear bone gain (mm), bone gain (%), re-osseointegration (%), bacteria total counts before and after each treatment, and proportions of microorganisms. The effects of the implant site, early exposure and type of anti-infective treatment on bone regeneration were evaluated. Results: Both treatment presented success on decontamination of implant surface, with no difference between them. The overall results failed to detect significant differences between the anti-infective treatments and the adjunctive use of guided bone regeneration failed provide better re-osseointegration or bone gain in either of the anti-infective treatments. Buccal sites and implant early exposure negatively affect bone regeneration. Conclusion: Both antiinfective therapies successfully decontaminated implant surface. Stand-alone or combined with guided bone regeneration allowed similar and partial bone gain, without the use of systemic antibiotics.

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