Orientador: João Ruggiero Neto / Banca: Margarete Teresa Gottardo de Almeida / Banca: Mara Corrêa Lelles Nogueira / Banca: Fátima Pereira de Souza / Banca: Fernando Alves de Melo / Resumo: Peptídeos antimicrobianos (PAMs) são componentes do sistema imune inato, que estão presentes na maioria dos organismos vivos cujo interesse é crescente devido à sua potente atividade antimicrobiana contra uma vasta gama de microrganismos, juntamente com a sua baixa toxicidade, em geral, para as células de mamíferos. Esse trabalho teve a finalidade de desenvolver um peptídeo antimicrobiano curto com as mesmas características estruturais do peptídeo Polybia-MP1 (IDWKKLLDAALQIL-NH2) extraído da vespa Polybia paulista que conferem ação antimicrobiana e seletividade, tais como: o posicionamento relativo dos resíduos de aminoácidos carregados, um resíduo ácido na posição N-terminal, a hidrofilicidade e a ampla face polar. Foi idealizado e sintetizado um peptídeo denominado L1A (IDGLKAIWKKVADLLKNT-NH2) e dois análogos com modificações na região do Nterminal; um acetilado (Ac-L1A) e outro com o ácido orto-aminobenzóico (Abz), uma sonda fluorescente extrínseca, ligado covalentemente ao N-terminal, esse peptídeo teve o triptofano substituído por um resíduo de valina (Abz-L1A-W8V). Analisou-se a fluorescência estática e dinâmica do triptofano e do Abz, que apresentaram significante deslocamento quando os peptídeos são adsorvidos em vesículas lipídicas; a supressão da fluorescência por acrilamida mostrou que os fluoróforos em vesículas aniônicas estão menos expostos ao solvente do que em vesículas zwitterionicas. A atividade lítica em vesículas a partir das curvas de doseresposta também reforça que os três peptídeos são mais eficientes em vesículas aniônicas, além disso, que os análogos foram mais eficientes. Estas observações foram compatíveis com o maior teor helicoidal (observado em dinâmica molecular e dicroísmo circular) seus fluoróforos se enterram mais profundamente em vesícula aniônica. Dados de MD e CD demonstraram uma relação entre a estabilidade da hélice e a ausência de carga ... / Abstract: Antimicrobial peptides (AMPs) are components of the innate immune system, which are present in the majority of the living organisms and whose interest is growing due to their potent antimicrobial activity against a broad range of microorganisms, coupled with their usually low toxicity to mammalian cells. In an effort to develop short antimicrobial peptides with the same structural characteristics that imparted selectivity to Polybia-MP1 (IDWKKLLDAALQIL-NH2): the relative positioning of acid and basic residues, an acid residue at the N-terminus, hydrophilicity and the broad polar face. MP1 is a potent antimicrobial, antitumoral and non-hemolytic peptide. We generated a peptide named L1A (IDGLKAIWKKVADLLKNT-NH2) and two analogs with N-terminus modifications; one acetylated (Ac-L1A) and other was extrinsic fluorescent labeled with ortho-aminobenzoic acid (Abz) in which the tryptophan was substituted by valine (Abz-L1A-W8V). We analyzed static and time-resolved fluorescence of tryptophan and ortho-aminobenzoic acid were used and showed significant blue shift when peptides are adsorbed in lipid vesicles and the fluorescence quenching by acrylamide showed that fluorophores in anionic vesicles, are less exposed to the solvent than in neutral vesicles. The lytic activity in vesicles showed from dose-response curves that the three peptides were more efficient in anionic vesicles moreover that the analogs were more efficient. These observations were compatible with the higher helical content (observed in Molecular Dynamics and Circular Dichroism) and deeper burying of the fluorophores in anionic vesicle. MD and CD data demonstrated a relationship between the stability of the helix and the absence of load on the N-terminal. L1A and Ac-L1A presented potent antimicrobial selective against Gram negative bacteria without being hemolyitic while Abz -L1A -W8V was mildly hemolytic / Doutor

Orientador: José Paes de Almeida Nogueira / Banca: Vera Lúcia Mores Rall / Banca: Jean Guilherme Fernandes Joaquim / Resumo: O objetivo do presente trabalho foi avaliar a prevalência de Salmonella spp. e seu perfil de resistência a antibióticos em suínos abatidos em frigoríficos sob inspeção federal localizados no interior do estado de São Paulo. Para tanto foram utilizados diferentes tipos de amostras, tais como fezes e linfonodos mediastínicos, mesentéricos e submandibulares, sendo 50 amostras de cada tipo, possibilitando avaliar a relevância do tipo de material analisado em relação ao real status do animal frente à contaminação pelo patógeno. Com base nas amostras positivas foi realizada a sorotipagem das cepas e teste de resistência aos antibióticos. A prevalência do patógeno foi de 10% no total das amostras (20/200), sendo os maiores percentuais de positividade encontrados nos linfonodos submandibulares com 20% de positivos (10/50) e mesentéricos com 18% (9/50) e os menores valores encontrados nas fezes com 2% de positivos (1/50) e linfonodos mediastínicos com nenhuma amostra positiva. Os sorovares predominantes foram S. Typhimurium com 55% das amostras (11/20), seguido de S. enterica subspécie enterica 4,5,12:i:- com 35% (7/20) e os sorovares S. Brandenburg e S. Derby com 5% (1/20) cada. Todas as amostras isoladas apresentarem resistência frente a pelo menos um dos antimicrobianos testados, sendo que 90% (18/20) apresentaram resistência a pelo menos 4 drogas simultaneamente e 15% (3/20) foram enquadradas como multi drogas resistentes. Os maiores índices de resistência foram encontrados para Ciprofloxacina e Tetraciclina com 90% de resistentes (18/20) cada, seguido de Ácido Nalidíxico com 80% (16/20), Sulfonamidas com 75% (15/20), Cloranfenicol e Estreptomicina com 70% (14/20) cada, Sulfametoxazole- Trimetroprim com 65% (13/20), Ampicilina com 25% (5/20), Cefotaxime com 10% (2/10) e Ceftriaxona e Gentamicina com 5% (1/20) cada. As amostras resistentes à Ciprofloxacina foram testadas para a presença da enzima ESBL, sendo 100% ... / Abstract: The objective of this study was to evaluate the prevalence of Salmonella spp. and their antibiotic resistance profiles in swine slaughtered in abattoirs under federal inspection located in the state of São Paulo. For both types of samples, such as feces and mediastinal, mesenteric and submandibular lymph nodes, 50 samples of each type being possible to evaluate the relevance of the type of material analyzed in relation to the actual status of the animal against the contamination by the pathogen were used. Based on positive samples, serotyping of the strains and antibiotic resistance test was performed. The prevalence of the pathogen was 10% of total samples (20/200) wich the highest positivity found in the submandibular lymph nodes with 20% positive (10/50) and mesenteric with 18% (9/50) and lower found in the feces with 2% positive (1/50) and mediastinal lymph nodes with no positive sample. The predominant serotypes were S.Typhimurium with 55% of the samples (11/20) followed by S. enterica subspecies enterica 4,5,12: i: -, 35% (7/20) and the serotypes S. Brandenburg and S. derby 5% (1/20) each. All isolates were resistant at least one of the antimicrobials tested, among them 90% (18/20) showed resistance to at least four drugs simultaneously and 15% (3/20) were classified as multi drug resistant. The highest rates were found for Ciprofloxacin and Tetracycline resistance with 90% (18/20) each, followed by Nalidixic Acid with 80% (16/20), Sulfonamides 75% (15/20), Chloramphenicol and Streptomycin with 70% (14/20) each, Trimethoprim-Sulfamethoxazole 65% (13/20), Ampicillin 25% (5/20), Cefotaxime 10% (2/10) and Ceftriaxone and Gentaminicine with 5% (1/20) each. Resistant to Ciprofloxacin samples were tested for the presence of ESBL enzyme, 100% of them considered negative / Doutor

Introdução: A doença periimplantar caracteriza-se pela perda óssea progressiva em implantes dentais osseointegrados. Sua origem é bacteriana, e acomete cerca de 20% da população com reabilitações implantossuportadas. O sucesso do tratamento parece depender da desinfecção da superfície dos implantes para resolução da inflamação, e da configuração dos defeitos ósseos para a regeneração dos tecidos. Até o momento, não há protocolos bem estabelecidos para a desinfecção da superfície de implantes osseointegrados. O objetivo deste estudo foi comparar dois métodos de desinfecção da superfície de implantes, e o efeito do uso da regeneração óssea guiada no tratamento da periimplantite induzida em cães. Materiais e Método: Oito cães beagle receberam 8 implantes cada. Após 8 semanas, ligaduras de seda foram posicionadas, e removidas após mais 8 semanas. O tratamento foi realizado após 10 semanas, por meio de desinfecção com a terapia fotodinâmica antimicrobiana ou aplicação tópica tetraciclina 50mg/ml, com ou sem procedimentos de regeneração óssea guiada associados. Durante o tratamento foram coletadas amostras microbiológicas por meio de um swab com microbrush estéril antes do tratamento, e imediatamente após o tratamento. A eutanásia ocorreu 12 semanas após o tratamento para processamento histológico. Os desfechos de tratamento analisados foram: ganho ósseo linear (mm), ganho ósseo (%), reosseointegração (%), redução bacteriana total e proporcional após o tratamento (%). Resultados: Os resultados gerais não demonstraram diferenças significantes entre os grupos quando comparados os métodos de desinfecção, e o uso ou não de procedimentos regenerativos. O uso da regeneração óssea guiada não resultou em melhoras no ganho ósseo, e sítios vestibulares apresentaram piores resultados regenerativos. A exposição precoce ao meio bucal afetou negativamente os resultados do tratamento, independente do grupo. Conclusão: Ambas terapias antiinfecciosas, associadas ou não a procedimentos regenerativos, obtiveram sucesso na resolução da inflamação e desinfecção da superfície dos implantes, com ganho ósseo parcial, sem o uso de antibioticoterapia sistêmica. / Objectives: This study used a dog model to evaluate two anti-infective treatment protocols for the treatment of periimplantitis with or without the use of guided bone regeneration (GBR). Material and Methods: Eight beagle dogs received eight implants each. After 8 weeks, silk ligatures were installed and then removed after 8 weeks, and after the end of 10 weeks the lesions were treated either with antimicrobial photodynamic therapy (aPDT) or topical tetracycline hydrochloride 50mg/ml with and without guided bone regeneration. Microbiological samples were collected with sterile microbrush before, and immediately after treatment. The animals were euthanized 12 weeks after treatment and submitted to histological processing. The outcomes evaluated included: linear bone gain (mm), bone gain (%), re-osseointegration (%), bacteria total counts before and after each treatment, and proportions of microorganisms. The effects of the implant site, early exposure and type of anti-infective treatment on bone regeneration were evaluated. Results: Both treatment presented success on decontamination of implant surface, with no difference between them. The overall results failed to detect significant differences between the anti-infective treatments and the adjunctive use of guided bone regeneration failed provide better re-osseointegration or bone gain in either of the anti-infective treatments. Buccal sites and implant early exposure negatively affect bone regeneration. Conclusion: Both antiinfective therapies successfully decontaminated implant surface. Stand-alone or combined with guided bone regeneration allowed similar and partial bone gain, without the use of systemic antibiotics.

Introdução - Vibrio metschnikovii é um bacilo gram-negativo, potencialmente patogênico, amplamente distribuído e isolado de ecossistemas aquáticos e raramente de amostras clínicas de humanos. Na triagem laboratorial para espécies do gênero Vibrio, Vibrio metschnikovii é descartado por ser oxidase negativa, característica que o diferencia das demais espécies patogênicas. Em relação à pesquisa do perfil de suscetibilidade a antibióticos, esta é pouco realizada com isolados de origem ambiental. Objetivos - Isolar e identificar genotipicamente Vibrio metschnikovii de amostras ambientais e caracterizar seu perfil de suscetibilidade a antibióticos. Métodos - Um total de dez amostras foram obtidas de Março a Agosto de 2009, sendo uma de molusco (vôngole), três de peixe (pescada, sardinha e tainha) e seis de esgoto (três de esgoto bruto e três de esgoto tratado). O isolamento foi inicialmente realizado em meio seletivo para Vibrio (ágar TCBS) e a confirmação da espécie foi feita com iniciadores específicos através da PCR utilizando o DNA extraído pela técnica de choque térmico. O antibiograma foi realizado com base no documento M45-A CLSI 2006, seguindo a técnica de disco difusão, empregando quinze antibióticos. Foi realizada a pesquisa de genes de resistência a beta-lactâmicos e aminoglicosídeos. Resultados - De 123 isolados com características típicas para a espécie, 70 foram confirmados como Vibrio metschnikovii através da PCR, sendo 43 de amostras de molusco e peixes e 27 de esgoto. Um total de 66 isolados foi resistente a pelo menos um antibiótico, mas nenhum gene de resistência foi detectado. Conclusões - Os resultados indicam que Vibrio metschnikovii pode ser isolado de diferentes amostras de origem ambiental, demonstrando que esses microrganismos podem ter distribuição mais ampla que o descrito na literatura. A PCR foi uma ferramenta fundamental para superar a fragilidade da identificação da espécie segundo o método fenotípico. Além disso, a resistência observada mostra que Vibrio metschnikovii pode atuar como um reservatório de genes de resistência que podem ser facilmente transferidos entre microrganismos em um mesmo ambiente. O perfil de suscetibilidade a antibióticos pode ser utilizado como referência na caracterização clínica deste patógeno em potencial, auxiliando na conduta terapêutica em casos de ocorrência de doentes acometidos pelo microrganismo em questão / Introduction - Vibrio metschnikovii is a gram-negative bacillus, potentially pathogenic, widely distributed and isolated from aquatic ecosystems and rarely from human clinical samples. At laboratorial screening for the species of the Vibrio genus, Vibrio metschnikovii is discarded for being oxidase negative, characteristic that differentiates it from the others pathogenic species. With regard to the research of antibiotic susceptibility profile, this is seldom done with environmental isolates. Objectives - To isolate and genotypically identify Vibrio metschnikovii from environmental samples and characterize the antibiotic susceptibility profile. Method - A total of ten samples were obtained from March to August 2009, with one of them originated from mussel (vongole), tree of fish (whitefish, sardine and mullet) and six from sewage (three from raw sewage and three from treated sewage). The isolation was initially performed in a selective medium for Vibrio (TCBS agar) and the specie confirmation was done with specific primers through PCR using DNA extracted by the thermal shock technique. The antibiogram was performed according to the document M45-A from CLSI 2006, following the technique of disk diffusion, using fifteen antibiotics. The research for beta-lactams and aminoglycosides resistance genes was also performed. Results Seventy out of 123 isolates, with typical characteristics for the specie, were confirmed as Vibrio metschnikovii by PCR, with 43 originated from mussel and fish and 27 from sewage. A total of 66 isolates were resistant to at least one antibiotic, however no resistance gene was detected. Conclusions The results indicate that Vibrio metschnikovii can be isolated from different samples of ambient origin, demonstrating that these microorganisms can have wider distribution than the described in literature. The PCR was a fundamental tool to overcome the fragility of the specie identification according to the phenotypic method. Furthermore, the resistance found shows that Vibrio metschnikovii can act as a reservoir of resistance genes that can easily be transferred between microorganisms in the same environment. The antibiotic susceptibility profile can be used as reference at the clinical characterization of this potential pathogen, assisting therapeutic management in cases of patients affected by this microorganism

Submitted by Márcio Ropke (ropke13marcio@gmail.com) on 2017-06-14T12:27:26Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) PRESCRIÇÃO DE ANTIBIÓTICOS DURANTE O TRATAMENTO DE CANAIS.pdf: 1252109 bytes, checksum: 5e51f17a1a04112c3b30d6bea7a6c8bc (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-14T12:27:26Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) PRESCRIÇÃO DE ANTIBIÓTICOS DURANTE O TRATAMENTO DE CANAIS.pdf: 1252109 bytes, checksum: 5e51f17a1a04112c3b30d6bea7a6c8bc (MD5) Previous issue date: 2015-02-27 / Sem bolsa / O objetivo deste trabalho foi investigar os hábitos de prescrição de antibióticos relatados por endodontistas brasileiros em situações clínicas específicas. Um questionário on-line foi enviado para endodontistas brasileiros via e-mail e redes sociais. Um total de 633 questionários foi respondido. Os dados foram analisados de forma descritiva. A maioria dos endodontistas relatou prescrever antibióticos por 7 dias (67,3%). Amoxicilina 500mg foi considerado o antibiótico de primeira escolha por 79% dos respondentes. Amoxicilina + clavulanato de potássio 500 + 125mg foi selecionada por 31% como segunda opção. Para pacientes com alergia a penicilina, 30,53% prescrevem clindamicina e 27,78% prescrevem azitromicina (250mg e 500mg). Metade dos sujeitos da pesquisa não utilizam dose de ataque e 36% utilizam com o dobro da concentração normal, uma hora antes do procedimento. Para Abscesso apical agudo (AAA) com edema intra e extraoral difuso, febre e trismo, 90,36% prescrevem antibióticos. 87,99% prescrevem antibióticos para casos de AAA sem edema extraoral. 60,66% prescrevem antibióticos para casos de AAA com edema intraoral e dor. Nos casos de necrose pulpar, periodontite apical crônica, e fístula, antibióticos são prescritos por 20,54%. Para necrose pulpar, AAA com edema e dor, 53,08% prescrevem antibióticos. Em caso de cirurgia parendodôntica, 45,02% dos respondentes prescrevem antibióticos. Conclusão: Embora parte dos endodontistas tenha relatado uma conduta consciente no uso de antibiótico, pode ser observada a prescrição em situações onde o antibiótico não seria indicado e o tempo de administração, em geral, foi além do necessário. Assim, destaca-se a necessidade da conscientização dos profissionais, pois a prescrição excessiva e incorreta de antibióticos em endodontia pode contribuir para o problema mundial do aumento da resistência microbiana. / The objective of this study was to investigate the antibiotics prescribing habits reported by Brazilian endodontists in specific clinical situations. An on-line questionnaire was sent to Brazilian endodontists via e-mail and social media network. A total of 633 questionnaires were answered. Data were analyzed descriptively. The majority of the respondents reported to prescribe antibiotics for 7 days (67.3%). The first antibiotic of choice was 500mg amoxicillin, chosen by 79% of the respondents. 500 + 125mg Amoxicillin + clavulanate potassium was selected by 31% as a second option. For patients allergic to penicillin, 30.53% prescribe clindamycin, and 27.78% prescribe azithromycin (250mg and 500mg). Half of the professionals do not use loading dose and 36% use with twice the regular concentration, one hour before treatment. For acute apical abscesses (AAA) with intra and extraoral diffuse swelling, fever and trismus, 90.36% reported to prescribe antibiotics. 87.99% prescribe antibiotics for cases without extraoral AAA swelling. 60.66% prescribe antibiotics for cases of AAA with intraoral swelling and pain. In cases of pulp necrosis, chronic apical periodontitis, and sinus tract, antibiotics were prescribed by 20.54%. In pulp necrosis, swelling and pain with AAA, 53.08% prescribed antibiotics. In case of root-end surgery, 45.02% of respondents prescribe antibiotics. Although part of the endodontists reported a conscious conduct in the use of antibiotics, overpresctiption could be observed in situations where the prescription of antibiotic would not be necessary and the duration of prescriptions was beyond necessary. Thus, there is a need of professional awareness, as excessive and incorrect prescription of antibiotics in endodontics might contribute to the global problem of increasing microbial resistance.

Submitted by Raphaela Sanches de Oliveira null (raphasol84@hotmail.com) on 2017-02-13T11:57:31Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Pronta.pdf: 4209987 bytes, checksum: 54ceb01d6a0e30fcb6560f6689be5b46 (MD5) / Approved for entry into archive by Juliano Benedito Ferreira (julianoferreira@reitoria.unesp.br) on 2017-02-16T15:59:08Z (GMT) No. of bitstreams: 1 oliveira_rs_me_sv.pdf: 4209987 bytes, checksum: 54ceb01d6a0e30fcb6560f6689be5b46 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-16T15:59:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 oliveira_rs_me_sv.pdf: 4209987 bytes, checksum: 54ceb01d6a0e30fcb6560f6689be5b46 (MD5) Previous issue date: 2017-01-18 / O desenvolvimento urbano em áreas costeiras tem ocorrido intensamente e o aumento das descargas de esgotos domésticos é uma das consequências desta expansão e motivo de preocupação para a saúde pública. Assim a qualidade microbiológica das águas, sedimentos e alimentos de origem marinha devem ser monitoradas, principalmente os organismos filtradores como os mexilhões, Perna perna. moluscos bivalves, por filtrarem a água para obtenção de alimento e oxigênio, concentram material em suspensão nos seus tecidos, inclusive bactérias patogênicas resistentes a substâncias antimicrobianas, o que os torna uma fonte potencial de contaminação humana por patógenos. O objetivo do presente estudo foi avaliar a densidade e resistência a antimicrobianos de Enterococcus sp, Escherichia coli e Aeromonas sp isolados dos tecidos de mexilhão Perna perna, água e sedimento coletados em Santos e Itanhaém, Estado de São Paulo. Como resultado observa-se que as densidade de Enterococcus sp e Escherichia coli encontradas na água dos dois pontos de coleta estão dentro das normas da Resolução Conama 274/2000, já as densidades encontradas nos sedimentos e em tecidos moles dos mexilhões foram elevadas. Para Aeromonas sp não existe padrão, pois as mesma não estão presentes na legislação. Observou-se também altas frequências de resistência bacteriana aos antimicrobianos. Os resultados obtidos sugerem que pode haver uma questão importante para a saúde pública, pois foram encontrados microrganismos apresentando múltipla resistência aos antibióticos analisados, sendo que apenas a ciprofloxacina se mostrou mais eficiente para os três microrganismos analisados. Tendo em vista os resultados obtidos foi possível concluir a existência de situação preocupante, pois os microrganismos testados se mostram altamente resistentes a múltiplos antimicrobianos, gerando um grande problema de saúde pública.

Orientador: Alexandrina Sartori / Coorientador: Gustavo Pompermaier Garlet / Banca: Maria Terezinha Serão Peraçoli / Banca: Carlos Eduardo Palanch Repeke / Resumo: Staphylococcus aureus é considerado o agente etiológico mais importante da artrite séptica. Neste contexto, o objetivo geral deste trabalho foi investigar o potencial artritogênico de cepas padrão de S. aureus produtoras de superantígenos (SAgs) e testar a eficácia terapêutica da associação entre antibiótico e imunomodulador neste modelo. Camundongos C57BL/6 machos foram inicialmente infectados pelo plexo retro-orbital com as diferentes cepas. O desenvolvimento de artrite e sua gravidade foram acompanhados por 14 dias, através das seguintes determinações: peso corporal, escore clínico e incidência de artrite, alterações histopatológicas, número de unidades formadoras de colônias, expressão local de citocinas e subpopulação células por PCR em tempo real e produção de citocinas por células esplênicas. Os resultados foram organizados em 3 manuscritos. No primeiro, comparamos a capacidade artritogênica de 5 cepas produtoras de SAgs. Constatamos que as cepas ATCC 19095 SEC+, N315 ST5 TSST-1+ e S-70 TSST-1+ determinaram artrite grave, intermediária e discreta, respectivamente. No segundo trabalho caracterizamos a artrite causada pela cepa ATCC 19095 SEC+. Este tipo de artrite se caracterizou por elevado escore clínico associado à proliferação sinovial, inflamação intensa, formação de "pannus", destruição da cartilagem e erosão óssea. A análise da expressão local de fatores de transcrição indicou expansão acentuada de células Th1 e Th17 nas lesões. No último manuscrito, avaliamos o efeito terapêutico da combinação do antibiótico bactericida cloxacilina com o imunomodulador tacrolimus. A administração destas duas drogas foi nemos eficaz no controle da doença do que o antibiótico administrado isoladamente / Abstract: Staphylococcus aureus is considered the more important etiological agent of septic arthritis. In this context, the main objective of this work was to investigate the arthritogenic capacity of standard S. aureus strains, producer of superantigens (SAgs). We also tested the therapeutic effectiveness of an association antibiotic and an immunomodulatory drug in this model. C57BL/6 male mice were initially infected by retro-orbital plexus with different strains. Development and severity of arthritis were followed during 14 days, through determination of body weight, clinical score and incidence of arthritis, histopathological changes, determination of colony forming units, evaluation of local infiltration of Th subsets by real time PCR and cytokine production by spleen cells. The results were organized in three manuscripts. In the first one we compared the arthritogenic ability of 5 S. aureus strains. We found that the strains ATCC 19095 SEC+, N315 ST5 TSST-1+ and S-70 TSST-1+ determined severe, intermediate and discrete arthritis, respectively. In the second study we characterized the arthritis caused by the ATCC 19095 SEC+ strain. This type of arthritis was characterized by high clinical scores associated with synovial proliferation, intense inflammation, "pannus" formation, cartilage destruction and bone erosion. In the final manuscript we evaluated the therapeutic potential of the combination bewteen cloxacilin (bactericidal antibiotic) with tacrolimus (immunomodulator). The administration of these two drugs was less effective in controlling the disease than the antibiotic alone / Mestre

Submitted by Jean Medeiros (jeanletras@uepb.edu.br) on 2016-03-02T17:35:38Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) PDF - Jaismary Gonzaga Batista de Oliveira.pdf: 2430187 bytes, checksum: b0687d99670e59b523221996e6a78fad (MD5) / Approved for entry into archive by Secta BC (secta.csu.bc@uepb.edu.br) on 2016-06-13T20:33:25Z (GMT) No. of bitstreams: 2 PDF - Jaismary Gonzaga Batista de Oliveira.pdf: 2430187 bytes, checksum: b0687d99670e59b523221996e6a78fad (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-13T20:35:31Z (GMT). No. of bitstreams: 2 PDF - Jaismary Gonzaga Batista de Oliveira.pdf: 2430187 bytes, checksum: b0687d99670e59b523221996e6a78fad (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2013-12-27 / The increased morbidity and mortality caused by bacterial infection is a public health issue and has lead a debate about the worldwide emergence of multiresistant microorganisms. Part of this phenomenon is due to the indiscriminate use of antibiotics, which allowed the microorganisms to develop resistance mechanisms. Therefore, it is necessary to constantly seeking to develop new drug candidates to antimicrobial agents. One of medicinal chemistry strategies for the antibiotics development is the molecular hybridization, which allows the combination of different pharmacophores in a single molecule, increasing them therapeutic potential. In this context this study aimed to evaluate the in vitro antibacterial activity of novel synthetic hybrid compounds containing the sulfonamide and 2-amino-thiophene pharmacophores. Thus, seven new derivatives have been synthesized in two reaction steps, starting with the Gewald reaction (obtaining 2-amino- thiophenes), followed by condensation of these with 4- acetamido -benzene sulfonyl chloride using 40 kHz ultrasound irradiation. The compounds were purified, characterized and have their structures confirmed by H NMR. Finally we determine the minimum inhibitory concentrations (MIC) and its activities as modifiers of antibiotic activity (putative efflux pump inhibitors) by microdilution, in Staphylococcus aureus strains overexpressing the NorA , MrsA and TetK genes. The hybrid compounds were obtained until 80 minutes in satisfactory yields (40-99%), demonstrating that ultrasound irradiation is a viable and appropriate option. Although none of the compounds showed significant in vitro antibacterial activity (≥ 256µg/mL), some compounds such as Sulfa 01, 02 and 04 acted as modifiers activity antibiotic, presumably by inhibiting the efflux pump, in particular the strain SA - 1199B (which overexpresses the norA gene) reducing the Norfloxacin CIM up to 16 times (128 to 8 mg / mL). How sulfonamides have no inhibitory action of efflux pumps, our results lead us to believe that thiophene moiety is responsible for this activity, suggesting that the new hybridized compounds when in vivo (they refer to prodrugs) may act by two distinct mechanisms of action, potentiating their actions. The results indicate that the new hybrid derivatives are potential candidates for antibiotics prototypes, with great potential to act by a synergistic action mechanism. / O aumento dos índices de morbidade e mortalidade ocasionados por infecções bacterianas é um problema de saúde pública, e tem provocado uma reflexão a nível mundial acerca do surgimento de micro-organismos multirresistentes. Parte desse fenômeno deve-se ao uso indiscriminado de antibióticos, que permitiu aos micro-organismos o desenvolvimento de mecanismos de resistência. Por isso, faz-se necessário a constante busca do desenvolvimento de novos fármacos candidatos a agentes antimicrobianos. Uma das estratégias da química medicinal empregadas no desenvolvimento de antimicrobianos é a hibridização molecular, que permite a conjugação de diferentes farmacóforos numa mesma molécula, ampliando o potencial terapêutico das mesmas. Nesse contexto esse trabalho objetivou a avaliação da atividade antibacteriana in vitro de novos compostos híbridos sintéticos contendo os farmacóforos sulfonamida e 2-amino-tiofeno. Para tanto, sete novos derivados foram sintetizados em duas etapas reacionais, iniciando pela reação de Gewald (obtenção de 2amino-tiofenos), seguido pela condensação desses com cloreto de 4-acetamido-benzenosulfonila utilizando irradiação de ultrassom 40 kHz. Os compostos foram purificados, caracterizados e tiveram suas estruturas confirmadas através de análise de RMN H. Por último foram determinadas as concentrações inibitórias mínimas (CIM) e suas atividades como modificadores da atividade antibiótica (inibidores putativos da bomba de efluxo), através da técnica de microdiluição, em linhagens de Staphylococcus aureus que superexpressam os genes NorA, MrsA e TetK. Os compostos híbridos foram obtidos em até 80 minutos, em rendimentos satisfatórios (40-99%), demonstrando que a irradiação de ultrassom é uma opção viável e adequada. Apesar de nenhum dos compostos apresentarem atividade antibacteriana relevante in vitro (≥256µg/mL), alguns compostos, como Sulfa 01, Sulfa 02 e Sulfa 04, atuaram como modificadores da atividade antibiótica, provavelmente por inibição de bomba de efluxo, em especial na linhagem SA-1199B (que superexpressa o gene norA) ao reduzir a CIM da Norfloxacina em até 16 vezes (128 para 8 µg/mL). Como as sulfonamidas não têm ação inibitória de bombas de efluxo, nossos resultados nos levam a crer que a porção tiofênica é a responsável por essa atividade, sugerindo assim, que os novos compostos hibridizados, quando in vivo (visto se tratarem de pró-drogas) poderão agir por dois mecanismos de ação distintos, potencializando suas ações. Os resultados indicam que os novos derivados híbridos são possíveis candidatos a protótipos de antibióticos, com grande potencial de agir por um mecanismo de ação sinérgico.

Introdução - Vibrio metschnikovii é um bacilo gram-negativo, potencialmente patogênico, amplamente distribuído e isolado de ecossistemas aquáticos e raramente de amostras clínicas de humanos. Na triagem laboratorial para espécies do gênero Vibrio, Vibrio metschnikovii é descartado por ser oxidase negativa, característica que o diferencia das demais espécies patogênicas. Em relação à pesquisa do perfil de suscetibilidade a antibióticos, esta é pouco realizada com isolados de origem ambiental. Objetivos - Isolar e identificar genotipicamente Vibrio metschnikovii de amostras ambientais e caracterizar seu perfil de suscetibilidade a antibióticos. Métodos - Um total de dez amostras foram obtidas de Março a Agosto de 2009, sendo uma de molusco (vôngole), três de peixe (pescada, sardinha e tainha) e seis de esgoto (três de esgoto bruto e três de esgoto tratado). O isolamento foi inicialmente realizado em meio seletivo para Vibrio (ágar TCBS) e a confirmação da espécie foi feita com iniciadores específicos através da PCR utilizando o DNA extraído pela técnica de choque térmico. O antibiograma foi realizado com base no documento M45-A CLSI 2006, seguindo a técnica de disco difusão, empregando quinze antibióticos. Foi realizada a pesquisa de genes de resistência a beta-lactâmicos e aminoglicosídeos. Resultados - De 123 isolados com características típicas para a espécie, 70 foram confirmados como Vibrio metschnikovii através da PCR, sendo 43 de amostras de molusco e peixes e 27 de esgoto. Um total de 66 isolados foi resistente a pelo menos um antibiótico, mas nenhum gene de resistência foi detectado. Conclusões - Os resultados indicam que Vibrio metschnikovii pode ser isolado de diferentes amostras de origem ambiental, demonstrando que esses microrganismos podem ter distribuição mais ampla que o descrito na literatura. A PCR foi uma ferramenta fundamental para superar a fragilidade da identificação da espécie segundo o método fenotípico. Além disso, a resistência observada mostra que Vibrio metschnikovii pode atuar como um reservatório de genes de resistência que podem ser facilmente transferidos entre microrganismos em um mesmo ambiente. O perfil de suscetibilidade a antibióticos pode ser utilizado como referência na caracterização clínica deste patógeno em potencial, auxiliando na conduta terapêutica em casos de ocorrência de doentes acometidos pelo microrganismo em questão / Introduction - Vibrio metschnikovii is a gram-negative bacillus, potentially pathogenic, widely distributed and isolated from aquatic ecosystems and rarely from human clinical samples. At laboratorial screening for the species of the Vibrio genus, Vibrio metschnikovii is discarded for being oxidase negative, characteristic that differentiates it from the others pathogenic species. With regard to the research of antibiotic susceptibility profile, this is seldom done with environmental isolates. Objectives - To isolate and genotypically identify Vibrio metschnikovii from environmental samples and characterize the antibiotic susceptibility profile. Method - A total of ten samples were obtained from March to August 2009, with one of them originated from mussel (vongole), tree of fish (whitefish, sardine and mullet) and six from sewage (three from raw sewage and three from treated sewage). The isolation was initially performed in a selective medium for Vibrio (TCBS agar) and the specie confirmation was done with specific primers through PCR using DNA extracted by the thermal shock technique. The antibiogram was performed according to the document M45-A from CLSI 2006, following the technique of disk diffusion, using fifteen antibiotics. The research for beta-lactams and aminoglycosides resistance genes was also performed. Results Seventy out of 123 isolates, with typical characteristics for the specie, were confirmed as Vibrio metschnikovii by PCR, with 43 originated from mussel and fish and 27 from sewage. A total of 66 isolates were resistant to at least one antibiotic, however no resistance gene was detected. Conclusions The results indicate that Vibrio metschnikovii can be isolated from different samples of ambient origin, demonstrating that these microorganisms can have wider distribution than the described in literature. The PCR was a fundamental tool to overcome the fragility of the specie identification according to the phenotypic method. Furthermore, the resistance found shows that Vibrio metschnikovii can act as a reservoir of resistance genes that can easily be transferred between microorganisms in the same environment. The antibiotic susceptibility profile can be used as reference at the clinical characterization of this potential pathogen, assisting therapeutic management in cases of patients affected by this microorganism

IIntrodução A utilização excessiva de antimicrobianos na medicina humana, veterinária e agricultura resultou no aparecimento da resistência bacteriana. Este fenômeno gera problemas de saúde pública que podem resultar na reemergência de doenças infecciosas. O uso de antibióticos, principalmente de forma profilática, tornou-se prática na aquicultura, como ocorre no Brasil, onde a regulamentação para o uso de medicamentos veterinários é ineficiente. Além disso, há evidências da transferência de organismos resistentes para humanos por meio do consumo de produtos de origem animal, quando, durante a fase de criação e produção destes foram administrados antibióticos. Objetivo Pesquisar a ocorrência de genes de resistência a antibióticos em filés de tilápia comercializados em supermercados do município de São Paulo SP. Material e Métodos Foram coletadas 10 amostras de filé de tilápia e realizada a pesquisa de coliformes termotolerantes como indicadores das condições higiênico-sanitárias do alimento. Em seguida, as amostras foram inoculadas em Caldo Lúria 0,5 por cento e o DNA total das bactérias cultivadas nesse meio foi extraído por meio de choque térmico para pesquisa de genes de resistência aos antibióticos -lactâmicos e tetraciclinas pela PCR. Os genes identificados pela PCR foram confirmados pelo sequenciamento. Resultados Em 100 por cento das amostras analisadas o resultado para coliformes termotolerantes foi < 3 NMP.g-1. Na pesquisa de genes de resistência a -lactâmicos, o gene blaOXY-5 foi detectado em 90 por cento das amostras, blaTEM-1b em 20 por cento , blaLEN-16 em 10 por cento , blaSHV-28 em 10 por cento , blaKPC-2 em 20 por cento , blaMOX-6 em 10 por cento e blaCphA em 60 por cento . Os genes de resistência a tetraciclinas identificados foram tetB em 10 por cento das amostras, tetC em 20 por cento , tetD em 80 por cento , tetE em 50 por cento , tetG em 60 por cento , tetO e tetS em 10 por cento cada e tetW em 20 por cento . Conclusões Em 90 por cento das amostras foi identificada a presença de genes de resistência aos antibióticos -lactâmicos e tetraciclinas, demonstrando uma grande circulação de resistência bacteriana na aquicultura e verificando a necessidade de legislação e fiscalização mais atuantes no controle do uso de antibióticos na aquicultura / IIntroduction The excessive use of antimicrobials in human medicine, veterinary medicine and agriculture has resulted in the emergence of bacterial resistance. This phenomenon creates public health problems that may result in the re-emergence of infectious diseases. The use of antibiotics, mainly prophylactically, has become a practice in aquaculture, including Brazil, where the legislation for the use of veterinary drugs is inefficient. Furthermore, there is evidence of transmission of resistant organisms to humans through consumption of animal products, especially when the antibiotics have been administered during the raising and production of these animals. Objective To search for the occurrence of antibiotics resistance genes in tilapia fillets commercialized in supermarkets in São Paulo city - SP. Material and Methods 10 tilapia fillet samples were collected and submitted to fecal coliform search as an indicator of the sanitary conditions of the food. Then, the samples were inoculated into Luria broth 0,5 per cent and the total DNA was extracted from growing bacteria by thermal shock for the search of resistance genes to -lactam and tetracyclines antibiotics by PCR. The genes identified by PCR were confirmed by sequencing. Results In 100 per cent of samples the result was < 3 NMP.g-1 for fecal coliform organisms. In the study of -lactam resistance genes, blaOXY-5 gene was detected in 90 per cent of samples, blaTEM-1b in 20 per cent , blaLEN-16 in 10 per cent , blaSHV-28 in 10 per cent , blaKPC-2 in 20 per cent , blaMOX-6 in 10 per cent and blaCphA in 60 per cent . The tetracyclines resistance genes identified were tetB in 10 per cent of samples, tetC in 20 per cent , tetD in 80 per cent , tetE in 50 per cent , tetG in 60 per cent , tetO and tetS in 10 per cent each and tetW in 20 per cent . Conclusions 90 per cent of the samples showed the presence of -lactam and tetracyclines resistance genes, demonstrating a high circulation of bacterial resistance in aquaculture and verifying the need for more active law and surveillance in controlling the use of antibiotics in aquaculture.