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Formação de biofilme e perfil de resistência a antimicrobianos e sanitizantes de Listeria monocytogenes isoladas de leite de tanques de expansãoMOURA, Fernanda Maria Lino de 28 February 2018 (has links)
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Previous issue date: 2018-02-28 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Among foods related to foodborne diseases are dairy products, since the quality of milk produced in several regions of Brazil is still unsatisfactory, leaving it subject to microorganisms that affect milk production and consumer health. Listeria monocytogenes is considered a serious problem in food safety and due to the importance of milk production in the country and the obtaining of safe food, the objective to evaluate the biofilm formation and antimicrobial resistance profile and sanitizers of Listeria monocytogenes isolated from milk from expansion tanks. The analyzes were carried out at the Meat and Milk Inspection Laboratory (LICAL) of UFRPE. After isolation and identification from morpho-tinctorial and biochemical characteristics, L. monocytogenes colonies were submitted to eight antimicrobials: penicillin G (10U), ampicillin (10μg), cephalothin (30μg), chloramphenicol (30μg), ciprofloxacin 5μg), erythromycin (15μg), clindamycin (2μg) and tetracycline (30μg) by the disc diffusion method. Then, the biofilm formation test was performed using a 96-well microdilution plate and the biofilm forming isolates were tested with 2.5% chlorine sanitizers and 2% chlorhexidine. Listeria monocytogenes were detected in 20% of the samples (6/30). It was observed that 83.3% (5/6) and 16.6% (1/6) of the isolates presented resistance and intermediate resistance to clindamycin, respectively, and 16.6% (1/6) resistance to chloramphenicol and erythromycin. 66.6% (4/6) of the isolates were able to form biofilm. It was detected a more effective action of chlorine in relation to the ability to interfere in the free cells, because in 50% (2/4) it completely inhibited the adhesion and in 50% (2/4) its action allowed a poor adherence. Chlorhexidine allowed moderate adherence in 100% of the isolates. In relation to the consolidated biofilm, chlorine was 75% (3/4) more effective in reducing adherence to chlorhexidine. This work was pioneer in the isolation of Listeria monocytogenes in milk from the individual expansion tanks existing in the municipalities of Alagoas State. The occurrence of Listeria monocytogenes in the samples evaluated represents a risk to public health. The biofilm formation and the resistance presented by these strains to sanitizing products predispose to the persistence of this microorganism in the milk production chain. Thus, it is necessary to monitor this microorganism and mastitis in the herd. In addition, the correct pre and post-dipping, the sanitation of the equipment and the tank, the regular evaluation of the efficiency of the sanitizers used and the collection of the milk by the truck refrigerated in the appropriate time have relevance in the guarantee of milk quality, being essential for the provision of safe food to the population. The occurrence of antimicrobial resistant strains may compromise the treatment of human listeriosis. It is evidenced the need to carry out antimicrobial tests and adhesion periodically to monitor the profile of resistance and biofilm formation by this microorganism, in order to promote the control of Listeria monocytogenes in the herd and to prevent contamination of milk by pathogenic microorganisms. / Dentre os alimentos relacionados às doenças transmitidas por alimentos estão os lácteos, pois a qualidade do leite produzido em diversas regiões do Brasil ainda é insatisfatória, deixando-o sujeito a micro-organismos que afetam a produção leiteira e a saúde dos consumidores. Considera-se Listeria monocytogenes um sério problema na segurança de alimentos e diante da relevância da produção de leite no país e da obtenção de alimentos seguros, objetivou-se avaliar a formação de biofilme e o perfil de resistência a antimicrobianos e sanitizantes de Listeria monocytogenes isoladas de leite de tanques de expansão. As análises foram realizadas no Laboratório de Inspeção de Carne e Leite (LICAL) da UFRPE. Após isolamento e identificação a partir de características morfo-tintoriais e bioquímicas, colônias de L. monocytogenes foram submetidas a oito antimicrobianos, sendo estes penicilina G, ampicilina (10μg), cefalotina (30μg), cloranfenicol (30μg), ciprofloxacina (5μg), eritromicina (15μg), clindamicina (2μg) e tetraciclina (30μg), através do método de difusão em disco. Em seguida, realizou-se o teste de formação de biofilme utilizando-se placa de microdiluição de 96 poços e os isolados formadores de biofilme foram submetidos ao teste com os sanitizantes cloro a 2,5% e clorexidine a 2%. Detectou-se Listeria monocytogenes em 20% das amostras (6/30). Observou-se que 83,3% (5/6) e 16,6% (1/6) dos isolados apresentaram resistência e resistência intermediária a clindamicina, respectivamente e 16,6% (1/6) de resistência a cloranfenicol e eritromicina. 66,6% (4/6) dos isolados foram capazes de formar biofilme. Detectou-se ação mais eficaz do cloro em relação à capacidade de interferir nas células livres, pois em 50% (2/4) inibiu completamente a aderência e em 50% (2/4) a sua ação permitiu uma fraca aderência. O clorexidine permitiu aderência moderada em 100% dos isolados. Em relação ao biofilme consolidado o cloro foi 75% (3/4) mais eficaz na redução da aderência em relação ao clorexidine. Este trabalho foi pioneiro no isolamento de Listeria monocytogenes em leite proveniente de tanques de expansão individuais em municípios do estado de Alagoas. A ocorrência de Listeria monocytogenes nas amostras avaliadas representa um risco à saúde pública. A formação de biofilme e a resistência apresentada por estas cepas a produtos sanitizantes predispõem para a persistência deste micro-organismo na cadeia de produção de leite. Desta forma, faz-se necessário o monitoramento deste micro-organismo e da mastite no rebanho. Além disso, a realização de pré e pós-dipping de forma correta, a sanitização dos equipamentos e do tanque, a avaliação regular da eficiência dos sanitizantes utilizados e a coleta do leite pelo caminhão refrigerado no tempo adequado possuem relevância na garantia da qualidade do leite, sendo imprescindíveis para o fornecimento de alimentos seguros à população. A ocorrência de cepas resistentes a antimicrobianos pode comprometer o tratamento da listeriose humana. Evidencia-se a necessidade de realização de testes com antimicrobianos e de aderência periodicamente para monitoramento do perfil de resistência e da formação do biofilme por parte deste micro-organismo, com o intuito de promover o controle da Listeria monocytogenes no rebanho e de prevenir a contaminação do leite por micro-organismos patogênicos.
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Desenvolvimento de hidroxiapatita contendo prata via precipitação e imersão: avaliação do efeito antimicrobiano / Development of hydroxyapatite with silver by precipitation and immersion: evaluation of antimicrobial effectMilena Felix Bossu 08 October 2015 (has links)
A utilização de substitutos ósseos para recuperação da função perdida é uma constante busca dentro da área médica. Por isso os biomateriais têm recebido uma atenção muito grande por parte da comunidade científica, dentre eles os materiais a base de fosfato de cálcio. A hidroxiapatita, Ca10 (PO4)6 (OH) 2, tem sido muito estudada, pois além de representar a constituição da massa dos ossos naturais e dentes em 30 a 70%, possui propriedades de bioatividade e osteocondutividade, favorecendo e auxiliando o crescimento do tecido ósseo. Em contrapartida, infecções bacterianas podem surgir após o implante ocasionando a perda da funcionalidade a curto e médio prazo. Várias alternativas estão sendo testadas, geralmente associadas ao uso de antibióticos convencionais incorporados aos biomateriais. Uma alternativa a tais antibióticos seria a utilização de metais que possuem propriedades antibacterianas. A prata (Ag) é conhecida como um metal bactericida e por isso ganhou lugar de destaque dentre os estudos como um aliado importante no controle das infecções pós-cirúrgicas. Este trabalho teve como objetivo sintetizar, caracterizar e avaliar o efeito antimicrobiano da adição de íons de prata em hidroxiapatita. Foram obtidos pós de hidroxiapatita contendo prata (HAAg), nas concentrações de 0,1M; 0,01M e 0,001M pelo método de precipitação em temperatura ambiente e por imersão do pó de hidroxiapatita em soluções aquosas. As fases cristalinas e os grupamentos iônicos foram analisados para cada condição por técnicas de difração de raios X (DRX) e espectroscopia no infravermelho (IV) respectivamente. As informações sobre a morfologia e identificação de elementos químicos foi realizado pela técnica de microscopia eletrônica de varredura com espectroscopia de energia dispersiva (MEV EDS). As avaliações antimicrobianas foram realizadas por ensaios qualitativos e quantitativos, o ensaio qualitativo utilizou o teste de halo de difusão em disco para Staphylococcus aureus e Escherichia coli e o ensaio quantitativo utilizou contagem de bactérias para as cepas de Staphylococcus aureus. Os resultados de DRX e IV indicaram que independentemente do método de obtenção da HAAg foi possível observar a presença de prata metálica caracterizada pelos picos em 2θ=38,1º e 44,3º nas amostras HAAg0,1Im, HAAg0,1Pr e HAAg0,01Pr. Observou-se também a presença de AgO, correspondente ao pico em 2θ=37,5º nas amostras de HAAg0,01Pr e HAAg0,001Pr. Nos espectros de IV estão presentes as bandas que caracterizam a fase HA, referentes aos grupamentos PO43-, OH- e CO32-. Analisados em conjunto os ensaios qualitativos e quantitativos, as amostras HAAg0,01Im e HAAg0,001Im sintetizadas por imersão indicaram os melhores resultados para o ensaio de disco difusão, por apresentarem formação de halo inibição do crescimento bacteriano para a bactéria S. aureus. Para os ensaios quantitativos as amostras obtidas por precipitação com concentrações 0,1M e 0,01M de prata apresentaram melhor resultado por inibirem o crescimento bacteriano para as cepas S. aureus. / The use of bone substitutes for recovery of lost function is a constant search within the medical field. So biomaterials have received a very large attention from the scientific community, including the materials the basis of calcium phosphate. Hydroxyapatite, Ca10(PO4)6(OH)2, has been studied as apart from representing the natural constitution of the mass of bones and teeth in 30 to 70 % , has properties of bioactivity and osteoconductivity, encouraging and assisting the growth of bone tissue. In contrast, bacterial infections can arise after implantation causing the loss of functionality in the short and medium term. Several alternatives are being tested, usually associated with the use of conventional antibiotics incorporated into biomaterials. An alternative would be to use antibiotics such metals that possess antibacterial properties. Silver (Ag) is known as a bactericidal metal and so gained a prominent place among the studies as an important ally in the control of post- surgical infections. This study aimed to synthesize, characterize and evaluate the antimicrobial effect of adding silver ions into hydroxyapatite. Were obtained hydroxyapatite powders containing silver (Haag) at concentrations 0,1M; 0,01M and 0,001M by the precipitation method at room temperature and by immersion the hydroxyapatite powder in aqueous solutions of AgNO3. The crystalline phases and the ionic groups were analyzed for each condition by techniques of X-ray diffraction (XRD) and infrared spectroscopy (IR) respectively. The information on the morphology and identification of chemical elements was performed by the technique of scanning electron microscopy with energy dispersive spectroscopy (SEM EDS). The antimicrobial evaluations were carried out by qualitative and quantitative assays, the assay used a qualitative diffusion halo disk test for Staphylococcus aureus, Escherichia coli and quantitative assay employed bacteria count for Staphylococcus aureus strains. The results of XRD and IR indicated that regardless of the method of obtaining Haag was possible to observe the presence of metallic silver characterized by peaks in 2θ=38,1º and 44,3º in HAAg0,1Im samples, HAAg0,1Pr and HAAg0,01Pr. It also observed the presence of AgO, corresponding to the peak in 2θ=37,5º in samples HAAg0,01Pr and HAAg0,001Pr. In the IR spectra are present bands that characterize the HA phase, referring to groups PO43-, OH- and CO32-. Taken together qualitative and quantitative assays, and HAAg0,01Im HAAg0,001Im synthesized by soaking samples showed the best results for the disk diffusion test by presenting halo formation bacterial growth inhibition for S. aureus. For quantitative assays, the samples obtained by precipitation with concentrations 0,1M and 0,01M silver showed better results by inhibiting bacterial growth for Staphylococcus aureus strains.
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Estudo de marcadores em espécies de Aniba (Lauraceae) bioativas da AmazôniaSilva, Yasmin Cunha da, 92992382637 23 April 2018 (has links)
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Previous issue date: 2018-04-23 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The Amazon region stands out for its immense biodiversity, which is considered as a source for the discovery of new molecules of pharmacological interest. In this field of research, the genus Aniba (Lauraceae) has wide variability and abundance. Aniba species are chemically described with the presence of alkaloids, flavonoids, terpenoids, pyrans and lignans. In this context, it is proposed the isolation and identification of the biomarkers of extracts of the species A. panurensis, A. parviflora, A. ferrea and A. roseadora, aiming to develop a method for the rapid characterization of the extracts of species of Aniba (Lauraceae), besides describing its biological activities. To achieve these objectives, ethanolic extracts (branches and leaves) were prepared by maceration, and these were partitioned. By means of classical chromatographic methods (TLC) and by spectrometric techniques (MS), the chemical characterization of hexane and methanolic fractions was carried out. Thus, the major ions of m/z 300, 328 and 330 were detected, which, by comparing the fragmentation data with the literature, correspond to the alkaloids: N-methylcoclaurine, isoboldine, laurotetanine and reticuline; in addition to these ions, the ions of m/z 283, 311 and 863, which may be associated with flavonoids: izalpinine, 3, 5, 7-tri-O-methylgalangine and procyanidin trimer were detected in the negative mode by ESI ionization. The fractionation to obtain the major components was developed by the use of classical chromatographic techniques, such as CC and TLCP, thus resulting in the obtaining of 6 substances, which were elucidated by the union of spectroscopic and spectrometric techniques such as: MS and NMR (1H and 13C uni and bidimensional). Thus, styrylpyrones were identified: 5,6-dehydrokawaine, 4-methoxy-11,12-methylenedioxy-6-trans-styryl-pyran-2-one and rel- (6R, 7S, 8S, 5'S) -4'- methoxy-8- (11,12-dimethoxyphenyl)-7- [6- (4-methoxy-2-pyranyl) -6- (E) -styryl-1'-oxabicyclo [4,2,0] octa-4'-en -2'-one (A. panurensis), the pyridine alkaloid: anibine (A. roseadora) and the kawalactones: tetrahydroyangonine and dihydrometisticina (A. parviflora). Aiming to analyze the antimicrobial potential of extracts, fractions and isolated substances, the antibacterial and antiparasitic tests were carried out. Good results for extracts and fractions of A. panurensis with MICs of 7.8 and 15.62 μg/mL were compared to three grampositive bacteria (Staphylococcus simulans, S. aureus and methicillin-resistant S. aureus (MRSA)). In the antiplasmódico test against Plasmodium falciparum, good results were obtained for the ethanolic extracts of A. parviflora and A. panurensis, with a better result of IC50 = 29.03 µg/mL for the leaves extract of A. parviflora; and positive results for two isolated substances, with IC 50 = 36.16 μg/mL for 4-methoxy-11,12-methylenedioxy-6-trans-styryrilpyran-2-one and IC50 = 24.10 μg/mL for rel-(6R, 7S, 8S, 5'S)-4'-methoxy-8-(11,12dimethoxyphenyl)-7-[6-(4-methoxy-2-pyranyl]-6- (E) - styryl-1'-oxabicyclo[4,2,0]octa-4'-en2'-one. The results confirm the presence of alkaloids, flavonoids and pyrans in the species of Aniba, in addition to describing a HPTLC method for rapid detection of these isolated standards and reporting the antimicrobial potential of extracts, fractions and isolated substances. / A região Amazônica destaca-se por sua imensa biodiversidade, que é considerada como fonte para descoberta de novas moléculas de interesse farmacológico. Nesse campo de pesquisa, o gênero Aniba (Lauraceae) possui ampla variabilidade e abundância. As espécies de Aniba são descritas quimicamente com a presença de alcaloides, flavonoides, terpenoides, pironas e lignanas. Nesse contexto, propõe-se o isolamento e identificação dos biomarcadores dos extratos das espécies A. panurensis, A. parviflora, A. ferrea e A. roseadora, visando desenvolver um método para rápida caracterização dos extratos de espécies de Aniba (Lauraceae), além de descrever suas atividades biológicas. Para atingir tais objetivos, foram preparados os extratos etanólicos (galhos e folhas) por maceração, e esses foram particionados. Por meio de métodos cromatográficos clássicos (CCD) e por técnicas espectrométricas (EM), realizou-se a caracterização química das frações hexânicas e metanólicas. Dessa forma, foram detectados como principais íons de m/z 300, 328 e 330, que por comparação dos dados de fragmentação com a literatura, são características dos alcaloides: N-metilcoclaurina, isoboldina, laurotetanina e reticulina; além desses íons, foram detectadas no modo negativo por ionização ESI, os íons de m/z 283, 311 e 863, que foram associados aos flavonoides: izalpinina, 3, 5, 7 – tri-O-metilgalangina e a procianidina trimer. O fracionamento para obtenção dos componentes majoritários foi desenvolvido pelo uso de técnicas cromatográficas clássicas, como a CC e a CCDP, assim resultando na obtenção de 6 substâncias, que foram elucidadas pela união de técnicas espectrométricas e espectroscópicas, tais como: EM e RMN (1H e 13C uni e bidimensional). Assim, foram identificadas as estirilpironas: 5,6-dehidrokawaína, 4-metoxi11,12-metilenodioxi-6-trans-estiril-piran-2-ona e rel-(6R, 7S, 8S, 5’S)-4’-metoxi-8-(11, 12dimetoxifenil)-7-[6-(4 metoxi-2-piranil)]-6-(E)-estiril- 1’-oxabiciclo [4,2,0] octa-4’-en-2’-ona (A. panurensis); o alcaloide piridínicos: anibina (A. roseadora) e as kawalactonas: tetrahidroyangonina e dihidrometisticina (A. parviflora). Visando a análise do potencial antimicrobiano dos extratos, frações e das substâncias isoladas, realizou-se os ensaios antibacterianos e antiparasitário. Obtendo bons resultados para os extratos e frações de A. panurensis com CIM de 7,8 e 15,62 µg/mL frente a três bactérias gram-positivas (Staphylococcus simulans, S. aureus e S. aureus resistente à meticilina (MRSA)). No teste antiplasmódico frente Plasmodium falciparum, obtiveram-se bons resultados para as extratos etanólicos de A. parviflora e A. panurensis, com melhor resultado de CI50 = 29,03 µg/mL para o extrato das folhas de A. parviflora; e resultados positivos para duas substâncias isoladas, com CI50 = 36,16 µg/mL para 4-metoxi-11,12-metilenodioxi-6-trans-estiril-piran-2-ona e CI50 = 24,10 µg/mL para rel-(6R, 7S, 8S, 5’S)-4’-metoxi-8-(11, 12-dimetoxifenil)-7-[6-(4 metoxi-2piranil)]-6-(E)-estiril- 1’-oxabiciclo [4,2,0] octa-4’-en-2’-ona. Os resultados confirmam a presença de alcaloides, flavonoides e pironas nas espécies de Aniba, além de descrever um método por CCDAE para rapida detecção desses padrões isolados e relatar o potencial antimicrobiano dos extratos, frações e substâncias isoladas.
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Caracterização físico-química de amostras de óleo de pinho e estudo da ação de sistemas tensoativos na atividade antimicrobiana de ativos fenólicos / Physical-chemical characterization of pine oil samples and study on surfactants systems action in antimicrobial activity of active phenolicFloripes Ferreira de Oliveira 16 June 2008 (has links)
Este trabalho tem como objetivo a caracterização de amostras comerciais de óleo de pinho com o intuito de identificar outros componentes que apresentem ação antimicrobiana, além do α-terpineol. Também, visa avaliar a influência de três tensoativos distintos na ação antimicrobiana do o-fenil fenol, do o-benzil p-clorofenol e do p-cloro m-cresol. Os tensoativos selecionados foram o linear alquilbenzeno sulfonato de sódio (NaLAS), uma mistura de laurato de trietanolamina e de sódio (laurato de Na/Tea) e alfa olefina sulfonada (AOS). Amostras comerciais de óleo de pinho e 61 frações, isoladas por destilação a pressão reduzida de uma amostra de óleo de pinho bruto, foram avaliadas a partir de medidas de índice de refração, curvas TG/DTG, espectroscopia no infravermelho, CG-DIC e CG-EM, características organolépticas e atividade antimicrobiana com a determinação do halo de inibição (contra Staphylococcus aureus ATCC 6538 e Salmonella choleraesuis ATCC 10708). Observou-se que as amostras comerciais apresentaram composições distintas, conforme procedência. O perfil das curvas TG/DTG permitiu uma avaliação comparativa do comportamento térmico das frações isoladas na destilação. A composição do óleo de pinho apresenta diversidade de componentes com atividade antimicrobiana inibitória. Todas as amostras de óleo de pinho apresentaram atividade bacteriostática para ambos os microrganismos e as frações, na composição em que foram separadas, apresentaram melhor atividade bacteriostática para S. aureus. Foram preparadas 42 formulações considerando teores de biocida de 0, 0,7 e 1,0% (p/p) e de tensoativo a 1,5 e 5% (p/p). As amostras foram acondicionadas em frascos de PET de 30 mL e avaliadas quanto ao pH, cor, odor, aparência nas 2ª, 4ª, 8ª e 12ª semanas do teste de estabilidade, conduzido a 4, 25 o e 45o C. O sistema tensoativo empregando o laurato de Na/TEA apresentou melhor estabilidade. Os tensoativos estudados (AOS, NaLAS e laurato de Na/TEA), apresentaram ação antimicrobiana e influenciaram positivamente na atividade dos ativos fenólicos. Pôde- se identificar a influência do teor de tensoativo na estabilização do derivado fenólico em um o sistema exposto a alta temperatura (45o C) armazenado em embalagem de PET. Os teores de ativos fenólicos foram determinados por CLAE empregando detector UV. / This work aims at characterizing commercial samples of pine oil with a view at identifying other components that present antimicrobial action besides its o -terpineol. It also aims at evaluating how three different surfactants influence the antimicrobial action of the o-phenyl-phenol, of the o-benzyl-p-chlorophenol and p-chloro-m-cresol. The selected surfactants were the sodium linear alkylbenzene sulphonate (NaLAS), a mixture of triethanolamine and sodium laurate, in addition to sodium alpha-olefins sulfonate (AOS). Pine oil commercial samples and 61 fractions, which were isolated by reduced pressure distillation of a raw pine oil sample, were analyzed based on measures of index of refraction, TG/DTG curves, infrared spectroscopy, GC-FID and GC-MS, odour characterization and antimicrobial activity with the determination of the inhibition disc (against Staphylococcus aureus ATCC 6538 and Salmonella choleraesuis ATCC 10708). It was observed that commercial samples presented marked different compositions according to their origin. TG/DTG curves profile allowed a comparative evaluation of the thermal behavior of those fractions isolated during distillation. Pine oil composition presents a diversity of components with antimicrobial activity. All pine oil samples presented bacteriostatic activity when tested against the two microorganisms mentioned above, and fractions in the composition in which they were inserted presented better bacteriostatic activity against S. aureus. Forty two formulations were prepared taking into consideration the content of biocide of 0, 0.7 and 1.0% (w/w) levels and surfactant of 1.5 e 5% (w/w) levels. Samples were stored into PET nd th th bottles of 30 mL and evaluated as per the pH, color, odour, appearance during 2nd , 4th , 8th and 12th weeks of the stability test, which was carried out at 4, 25 e 45o C. When using Na/TEA laurate, the surfactant system presented better stability. Studied surfactants - AOS, NaLAS and Na/TEA laurate - presented antimicrobial action and positively influenced in active phenolics activity. It was possible to identify the influence of content of surfactant in o stabilizing the phenolic derivative while under a system exposed to high temperature (45 C) inside a PET packaging. Active phenolics content was determined by HPLC using UV detection.
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Hidrogéis poliméricos com nanopartículas de prata para aplicações médicas / Polymeric hydrogels with silver nanoparticles for medical applicationsMara Tania Silva Alcantara 03 April 2013 (has links)
O desenvolvimento de novos procedimentos e tecnologias tem proporcionado um grande avanço no tratamento de feridas e queimaduras, melhorando a qualidade de vida das vítimas e reduzindo as taxas de mortalidade de pessoas com queimaduras graves. Entretanto as complicações infecciosas continuam sendo um desafio e uma das principais causas de óbito de queimados. Por outro lado, em todo o mundo tem-se observado um crescente interesse no uso de hidrogéis para aplicação como curativos para queimaduras, ferimentos e úlceras de pele, tendo em vista que são capazes de absorver exsudatos, ajudam na cicatrização e proporcionam conforto ao paciente, uma vez que favorecem o alívio da dor. Além disso, os hidrogéis também podem ser aplicados como matrizes para sistemas de liberação controlada de princípios ativos e agentes antimicrobianos. O objetivo deste trabalho foi estudar as propriedades mecânicas e físico-químicas de hidrogéis compostos por blendas formadas por Poli(N-vinil-2-pirrolidona)/ Polietilenoglicol/ ágar (PVP/PEG/ágar), Poli(N-vinil-2-pirrolidona)/ glicerol/ ágar (PVP/glicerol/ágar); Poli(álcool vinílico)/ kappa-carragena/ ágar (PVA/KC/ágar), reticuladas por radiação ionizante. Para a preparação das blendas, utilizou-se planejamento de misturas como ferramenta, oferecendo assim subsídios a futuros desenvolvimentos de novos hidrogéis, que possam ser usados como curativos e como matrizes poliméricas para liberação de ativos hidrofílicos e lipofílicos. Foram otimizadas três formulações e sintetizadas seis, três das quais hidrogéis nanocompósitos de prata. As nanopartículas de prata (NPAg) foram sintetizadas, in situ, por radiação gama, sem uso de catalisadores ou outro reagente para obtenção de curativo mais puro e com ação antimicrobiana. A caracterização físico-química dos hidrogéis foi obtida por análises de fração gel, intumescimento, ensaios de tração e perfuração, microscopia eletrônica de varredura (MEV), espectroscopia na região do ultravioleta-visível (UV-vis). Também foi avaliada a atividade antimicrobiana dos hidrogéis e realizado estudo de citotoxicidade in vitro. O planejamento de misturas apresentou modelos confiáveis para os resultados de fração gel e intumescimento, porém, para as propriedades mecânicas, os resultados devem ser vistos com cautela. O uso da radiação se mostrou eficaz para a síntese de NPAg in situ nas blendas estudadas. Os resultados sugerem que os hidrogéis sintetizados não liberaram NPAg, porém os hidrogéis de PVP apresentaram atividade bactericida para S. aureus e P. Aeruginosa, enquanto que o hidrogel de PVA apresentou atividade bactericida para P. aeruginosa e atividade bacteriostática para S. aureus, sendo essa atividade pelo contato direto. / The development of new procedures and technologies have provided a major advance in the treatment of wounds and burns improving the quality of life of victims and reducing mortality rates of people with severe burns. However, infectious complications remain a challenge and a major cause death to burn. Furthermore, in the whole world, an increasing interest in the use of hydrogels as dressings for burns, wounds and skin ulcers has been observed, considering that they are capable of absorbing exudates, aid in healing and provide confort to the patient, since they favor the pain relief. In addition, hydrogels can also be applied as matrices for controlled release systems of active and antimicrobial agents. The aim of this study was to investigate the mechanical and physicochemical properties of hydrogels composed of blends formed by poly(N-vinyl-2-pyrrolidone)/ Polyethylene glycol/ agar (PVP/PEG/agar), poly(N-vinyl-2-pyrrolidone)/ glycerol/agar (PVP/ glycerol/agar) and poly(vinyl alcohol)/ kappa-carrageenan/ agar (PVA/KC/agar), crosslinked by ionizing radiation. In blends preparation, design of mixtures was utilized as a tool, thus offering information for future developments of new hydrogels, which can be used as dressings and as polymer matrices for the release of lipophilic and hydrophilic actives. Three formulations were optimized, and six synthesized, being three of these silver nanocomposite hydrogels. The silver nanoparticles (AgNPs) were synthesized, in situ, by gamma irradiation without using a catalyst or other reagent in order to obtain wound dressing with higher purity and antimicrobial activity. The physicochemical characterization of the hydrogels was obtained using assays of gel fraction, swelling, tensile and perforation, scanning electron microscopy (SEM), spectroscopy in the ultraviolet-visible (UV-vis) region. Antimicrobial activity of the hydrogels was evaluated, and cytotoxicity study in vitro also was performed. The mixture design offered reliable models for gel fraction and swelling, but for the mechanical properties the results must be seen with caution. The use of radiation has proven to be effective for synthesis of AgNPs in situ in the blends studied. The results suggest that hydrogels synthesized did not release AgNPs, but the PVP hydrogels showed bactericidal activity for S. aureus and P. aeruginosa, whereas the PVA hydrogel had bactericidal activity for P. Aeruginosa and bacteriostatic activity for S. aureus, being this activity by direct contact.
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Óleo essencial de Moringa oleifera Lam. na microbiota fitopatogênica e potencial fisiológico de sementes de Phaseolus vulgaris L. / Essential oil of Moringa oleifera Lam. on the phytopathogenic microbiota and physiological potential of Phaseolus vulgaris L. seedsAgustini, Márcia Antonia Bartolomeu 10 August 2015 (has links)
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Previous issue date: 2015-08-10 / The use of essential oils configures itself as a promising alternative for the treatment of seeds. In this context, this work aimed to evaluate the effect of the essential oil of Moringa oleifera (EOM) on the phytopathogenic microflora and the physiological potential of bean seeds. For this, three experiments were conducted in order to extract and characterize the EOM, to evaluate its effect on viability, vigor, isoenzyme activity in bean seeds, and on plant pathogens. The extraction and characterization of EOM occurred by hydrodistillation of the leaves in Clevenger and gas chromatography-mass spectrometry. In assessing the EOM antimicrobial activity, were used six treatments, five doses of essential oil (0,0%, 0,1%, 0,2%, 0,4% and 0,8%) and a fungicide, in evaluating the germination of spores and fungi incidence percentage (blotter test). The same doses of EOM and a bactericidal were used against Xap. In turn, used seven treatments (five doses EOM, a fungicide and bactericide) with eight repetitions of fifty seeds distributed in CRD for evaluation of the percentage of germination, GSI and first count. The esterase, alcohol dehydrogenase, isocitrate lyase, and superoxide dismutase were investigated by polyacrylamide gel electrophoresis. The effects of the oil levels on germination of fungal spores, bacterial growth and physiological potential of seeds were evaluated by regression equations and the mean quantitative treatment (dose) were compared to synthetic treatment by the Dunnet test (P> 0,05). In the essential oil composition, eleven compounds were identified, of which 12.92% was terpenes (linalool, thymol and β-eudesmol) with antimicrobial properties above mentioned in the literature. The synthetic fungicide may be substituted by dose containing 0.4% EOM for the incidence of A. flavus, Fusarium sp. and Alternaria sp. in bean seeds. On germination of fungal spores, none of the OEM doses used were statistically equal to fungicidal, however, increasing doses obtained linear effect on the germination of spores of Rhizopus sp. and Fusarium sp. Despite the reduction in the number of CFUs, the EOM doses were inferior to synthetic bacterial elimination Xap. For the physiological potential, the dose with 0,8% EOM reduced the viability and vigor of the seeds of the cultivar Colibri and stood below the bactericide and fungicide for GSI and first count. For Campos Gerais, the dose with 0,8% EOM promoted germination and was superior to the bactericidal for the germination percentage and first count. The point of maximum emergence and GSI were obtained with doses of 0.6% and 0.28% (Campos Gerais), and 0,38% to 0,2% (Colibri). Low bands of expression values for EST and ADH, related to the higher germination of seeds and the greatest expression of SOD, was associated with reduction in germination / Os óleos essenciais configuram como uma alternativa promissora para o tratamento de sementes. Neste contexto, este trabalho objetivou extrair e caracterizar o óleo essencial de Moringa oleifera (OEM), e avaliar seu efeito sobre a microbiota fitopatogênica e o potencial fisiológico de sementes de feijão. Para tanto, três experimentos foram conduzidos com o intuito de extrair e caracterizar o OEM, avaliar seu efeito sobre a viabilidade, o vigor a atividade de isoenzimas em sementes de feijão, e sobre fitopatógenos. A extração e caracterização do OEM ocorreu mediante hidrodestilação das folhas em Clevenger e da cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massas. Na avaliação da atividade antimicrobiana do OEM, utilizou-se seis tratamentos, sendo cinco doses de óleo essencial (0,0%; 0,1%; 0,2%; 0,4% e 0,8%) e um fungicida, na avaliação da germinação de esporos e da porcentagem de incidência de fungos (blotter test). As mesmas doses de OEM e um bactericida foram utilizados contra Xanthomonas axonopodis pv. phaseoli. Por sua vez, utilizou-se sete tratamentos (cinco doses de OEM, um fungicida e um bactericida) com oito repetições de cinquenta sementes distribuídos em DIC para avaliação do percentual de germinação, IVG e primeira contagem de germinação. Para os experimentos à campo, utilizou-se o DBC com 4 repetições de cinquenta sementes e avaliou-se a porcentagem de emergência e IVE. As enzimas esterase, álcool desidrogenase, superóxido dismutase e isocitrato liase foram investigadas por meio de eletroforese em gel de poliacrilamida. Os efeitos das doses do óleo sobre a germinação de esporos fúngicos, o crescimento bacteriano e o potencial fisiológico das sementes foram avaliados por meio de equações de regressão e as médias dos tratamentos quantitativos (doses) foram comparadas aos tratamentos sintéticos por meio do teste de Dunnet (P>0,05). Na composição química do óleo essencial foram identificados onze compostos, dentre os quais 12,92% são terpenos (linalol, timol e β-eudesmol) com propriedades antimicrobianas já referidas na literatura. O fungicida sintético pode ser substituído pela dose contendo 0,4% de OEM para a incidência de A. flavus, Fusarium sp. e Alternaria sp em sementes de feijão. Sobre a germinação de esporos fúngicos, nenhuma das doses de OEM utilizadas foram estatisticamente iguais ao fungicida, no entanto, as doses crescentes reduziram a germinação de esporos de Rhizopus sp. e Fusarium sp. Apesar da redução no número de UFCs, as doses de OEM foram inferiores em eficiência se comparadas ao bactericida sintético na eliminação de Xanthomonas axonopodis pv. phaseoli. Para o potencial fisiológico, a dose com 0,8% de OEM reduziu a viabilidade e o vigor das sementes da cultivar Colibri e apresentou-se inferior ao bactericida e ao fungicida para o IVG e primeira contagem. Para Campos Gerais, a dose com 0,8% de OEM promoveu maiores médias para a germinação e mostrou-se superior ao bactericida para o percentual de germinação e primeira contagem. O ponto de máxima emergência e IVE foram obtidos com as doses 0,6% e 0,28% (Campos Gerais) e, 0,38% e 0,2% (Colibri). Os baixos valores de expressão de bandas para EST e ADH, relacionaram-se à maior germinabilidade das sementes e a maior expressão de SOD, associou-se à redução na germinação
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Atividade antimicrobiana de Trichoderma viride e Trichoderma stromaticum / Antimicrobial activity of Trichoderma viride and Trichoderma stromaticumHurmann, Eliéte Moura de Souza 08 January 2016 (has links)
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Previous issue date: 2016-01-08 / Fundação Araucária / Trichoderma spp. is a promising antagonist, the development and use of products based on this organism gives us the opportunity not only to reduce health risks, but also costs and environmental damage. This work aimed to analyze the efficiency of Trichoderma viride extracts and Trichoderma stromaticum against some microorganisms of interest in clinical medicine, agriculture and fish farming. Among them Colletotrichum musae, banana anthracnose causes, Saprolegnia, which affects fish eggs and some bacteria that cause harm to human health. The dichlorometane extracts were tested at various concentrations, and as positive control a commercial antimicrobial. Inhibition of the pathogen was verified directly by paired cultivation technique. The antimicrobial activity of the extracts was evaluated by disk diffusion and the determination of minimum inhibitory concentration (MIC) by microdilution test broth. In situ tests were done in the fruit inoculating the pathogenic fungus and treated with the extracts and the sensory analysis where it was determined the acceptance of the product. In cultivation paired the Trichoderma spp. inhibited the growth of pathogens being 0.05% significance level. In the disk diffusion test results were positive, and for E. coli and Aeromonas hydrophila gave the best results. MIC against microorganisms of the extracts ranged from 50% to 3,125%. Given the results presented, it is concluded that the extracts were effective in in vitro inhibition of the microorganisms as well as their application in the fruits did not alter the organoleptic characteristics. / O Trichoderma spp. é um antagonista promissor, o desenvolvimento e uso de produtos à base deste microrganismo nos oferece a oportunidade, não apenas de reduzir os riscos da saúde, mas também custos e danos ambientais. Assim, este trabalho teve por objetivo analisar a eficiência dos extratos de Trichoderma viride e Trichoderma stromaticum contra alguns microrganismos de interesse na clínica médica, agricultura e piscicultura. Dentre eles o Colletotrichum musae, causador da antracnose da banana, Saprolegnia, que acomete ovas de peixes e algumas bactérias que causam danos à saúde humana. Os extratos diclorometânicos foram testados em várias concentrações, tendo como controle positivo um antimicrobiano comercial. A inibição do patógeno foi verificada, de forma direta pela técnica de cultivo pareado. A atividade antimicrobiana dos extratos foi avaliada por disco-difusão e pela determinação da concentração inibitória mínima (MIC) por teste de microdiluição em caldo. Foram feitos testes in situ no fruto inoculando o fungo patogênico e tratados com os extratos e a análise sensorial onde foi determinada a aceitação do produto. No cultivo pareado os Trichoderma spp. inibiram o crescimento dos patógenos sendo 0,05% de significância. No teste de disco-difusão os resultados foram positivos, sendo que para Aeromonas hydrophila e E. coli obteve-se os melhores resultados. O MIC (concentração inibitória mínima)dos extratos contra os microrganismos variou de 50% a 3,125 %. Diante dos resultados apresentados, evidenciou-se que, os extratos foram eficientes na inibição in vitrodos microrganismos testados, bem como sua aplicação nos frutos não alterou as características organolépticas dos mesmos.
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Identificação dos constituintes químicos e atividade biológica do óleo essencial de Trattinickia burserifolia Mart. (Burseraceae) da Serra do Tepequém, Amajarí - RoraimaGisele Guimarães de Oliveira 05 August 2014 (has links)
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A Amazônia apresenta cerca de 99,6% de sua flora quimicamente desconhecida e estima-se que apenas 10% do total das plantas do globo terrestre foram pesquisadas em seus constituintes químicos. A família Burseraceae pertence a ordem Sapindales, é constituída de 21 gêneros e mais de 600 espécies. A pesquisa objetivou investigar a composição química e a atividade antimicrobiana do óleo essencial da casca do caule de Trattinnickia burserifolia no período seco e chuvoso em um garimpo extinto de Roraima chamado de Tepequém. As exsicatas foram identificadas e depositadas no Herbário da Universidade Federal de Roraima sob o número de tombamento. O óleo essencial foi obtido através da hidrodestilação em aparelho clevenger. Foi calculado o rendimento do óleo essencial (p/v). Foi utilizado um sistema CG/EM com o hélio (He) como gás de arraste. Utilizou-se o padrão de hidrocarbonetos C9-C22, sendo calculado o índice Kovats e percentagens dos constituintes. Foram identificados 23 constituintes no período seco e 47 no período chuvoso. Entre os constituintes identificados, destacaram-se o α-pineno, o δ-3-careno e o limoneno para ambos períodos com percentuais distintos. Foi realizada também a verificação do potencial antioxidante através da captura do radical livre DPPH (2,2-diphenyl-1-picrilhydrazyl). O resultado obtido tanto no período seco quanto no chuvoso foi inferior a 14% de atividade antioxidante, caracterizando o óleo essencial de T. burserifolia sem atividade antioxidante. Realizou-se o teste de toxicidade utilizando o microcrustáceo Artemia salina, os resultados de ambos os períodos foram considerados altamente tóxicos: período seco (DL50 = 86,072 μg/mL); chuvoso (DL50 = 45,286 μg/mL). Nos testes antimicrobianos, foram utilizadas cepas padrões (ATCC; INCQS) e um fungo do gênero Penicillium sp. proveniente de contaminação. O óleo essencial de T. burserifolia apresentou atividade antimicrobiana no período seco somente para dois micro-organismos (Penicillium sp., Proteus miriabilis) enquanto que no período chuvoso todos os micro-organismos testados tiveram seu crescimento inibido (Staphylococcus aureus, Streptococcus pneumoniae, Escherichia coli, Proteus miriabilis, Candida albicans e Penicillium sp.). O óleo essencial de T. burserifolia possui atividade antimicrobiana eficaz para aplicação do óleo essencial nos micro-organismos testados. Os valores médios dos halos de inibição foram analisados estatisticamente pelo teste de Tukey (p< 0,05) apresentando diferenças significativas. Para cada micro-organismo foi determinada a Concentração Inibitória Mínima (MIC). / The Amazon holds about 99.6% of its flora chemically unknown and it is estimated that only 10% of plants of the globe were surveyed on their chemical constituents. The Burseraceae family owned Sapindales order consists of 21 genera and over 600 species. The research aimed to investigate the chemical composition and antimicrobial activity of essential oil from the stem bark of Trattinnickia burserifolia the dry and rainy season in a dormant mining Roraima called Tepequém. The herbarium specimens were identified and deposited in the Herbarium of the Federal University of Roraima under number of damping. The essential oil was obtained by hydrodistillation in Clevenger apparatus. The yield of essential oil (W / V) was calculated. One GC / MS system was used with helium (He) as carrier gas. We used the standard hydrocarbons C9-C22 Kovats index and the percentages of the constituents being calculated. 23 constituents were identified in the dry period and 47 in the rainy season. Among the identified constituents, stood the α-pinene, the δ-3-carene and limonene for both periods with different percentages. Antioxidant potential scanning was also carried out by capturing the free radical DPPH (2,2-diphenyl-1-picrilhydrazyl). The results obtained both in the dry and in the rainy period was less than 14% antioxidant activity, featuring the essential oil of T. burserifolia no antioxidant activity. Held the toxicity test using microcrustacean Artemia salina, the results of both periods were considered highly toxic: dry period (LD50 = 86.072 g / mL); rainy (LD50 = 45,286 / mL). And a fungus Penicillium sp, the antimicrobial tests, standard strains (ATCC INCQS) were used. from contamination. The essential oil of T. burserifolia showed antibacterial activity in the dry season only two micro-organisms (Penicillium sp., Proteus miriabilis) while in the rainy season all micro-organisms tested were inhibited its growth (Staphylococcus aureus, Streptococcus pneumoniae, Escherichia coli, Proteus miriabilis, Candida albicans and Penicillium sp.). The essential oil of T. burserifolia has effective antimicrobial activity of essential oil for application in micro-organisms tested. Mean values of inhibition zones were statistically analyzed by Tukey (p <0.05) with significant differences. For each micro-organism Minimum Inhibitory Concentration (MIC) was determined.
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Influência das condições de cultivo de duas linhagens Streptomyces no perfil químico e atividade citotóxica / The Influence of different culture mediums conditions in chemical profile and cytotoxic activity of two Streptomyces strainsNoemi Jacques Vieira 10 June 2011 (has links)
Micro-organismos são profícuos produtores de produtos naturais bioativos. Diversos fármacos inovativos e de extrema importância clínica são de origem microbiana, como antibióticos, antitumorais, imunossupressores e agentes hipolipêmicos. A maioria dos fármacos de origem microbiana é produzida por actinobactérias. A estreita associação de micro-organismos com plantas, insetos, crustáceos e organismos marinhos, pode induzir a produção de substâncias bioativas, que eventualmente conferem vantagens adaptativas e ecológicas ao macro-organismo hospedeiro. Ambientes marinhos e áreas de transição como os manguezais são ainda pouco explorados para estudos químicos e farmacológicos dos micro-organismos presentes nos solos e em simbiose com outros hospedeiros. Neste sentido, o presente trabalho visou o estudo químico monitorado por ensaios de citotoxicidade em células cancerígenas de dois micro-organismos, Streptomyces sp. Act1 e Streptomyces sp. Act2, isolados da casca do caranguejo do maguezal, Ucides cordatus, coletado em Cananéia, SP. Estes micro-organismos apresentaram atividade antagônica frente ao fungo patogênico Aspergillus niger, confirmando o potencial para produção de substâncias bioativas. Os micro-organismos foram cultivados em diferentes meios de cultura para avaliar o potencial de crescimento, perfil químico dos extratos obtidos e atividade citotóxica dos extratos e subfrações. Os meios de cultura escolhidos foram meio líquido ISP-2 e meio sólido (arroz), e ainda, nestas mesmas condições foi avaliado o efeito do uso de água do mar de forma comparativa. Os micro-organismos desenvolveram-se adequadamente nos diferentes meios de cultivo. Os fracionamentos dos extratos obtidos nos experimentos evidenciaram características polares das subfrações obtidas, e neste sentido foram necessárias adaptações das técnicas de separação, incluindo fases estácionárias como sephadex LH-20 e fase reversa. Os ensaios de citotoxicidade frente às linhagens de células tumorais com os extratos obtidos mostraram o grande potencial das linhagens em estudo, em especial a linhagem Streptomyces sp. Act-2 cultivada na presença de água do mar. / Abstract Microorganisms are prolific producers of bioactive natural products. Most of innovative pharmaceuticals that have useful clinical importance have been isolated from from microorganisms, such as antibiotics, anticancer drugs, immunosuppressive drugs and lipid-lowering agents. Most of the drugs of microbial origin are produced by actinomycetes. The close association of micro-organisms with plants, insects, crustaceans or marine organisms may induce the production of bioactive substances. These natural products may confer adaptive advantages to the environment and to the host organism. Marine and transitional areas such as mangroves are still under explored for chemical and pharmacological studies of both soil microorganisms and symbiotic microorganisms. In this sense, this work aimed a chemical study of two actinobacteria strains, Streptomyces sp. Act1 and Streptomyces sp. Act2, guided by cancer cells cytotoxicity assays. Both microorganisms were isolated from the shell of the mangrove crab Ucides cordatus, collected in Cananéia, SP. These microorganisms showed antagonistic activity against the pathogenic fungus Aspergillus niger, confirming the potential for production of bioactive substances. Microorganisms were cultured in different culture media to assess the potential for growth, chemical profile of extracts and cytotoxic activity of extracts and subfractions. The culture media were chosen using liquid (ISP-2) and solid medium (rice). The effect of addition of saline water in the culture media has also been evaluated. The microorganisms developed adequately in different culture media. The fractions of extracts obtained from the experiments showed characteristics of polar subfractions obtained, requiring the use of sephadex LH-20 and reverse phase as chromatographic stationary phases. Cytotoxic assays of the extracts against cancer cell lines showed the great potential of the strains under study, mainly Streptomyces sp. Act2. grown in the presence of seawater.
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Avaliação das atividades antimicrobiana, antisséptica e esterilizante de extratos e metabólitos de Baccharis dracunculifolia D. C. e Pinus elliottii Engelm / Evaluation of the antimicrobial, antiseptic and sterilant activities of extracts and metabolites from Baccharis dracunculifolia DC and Pinus elliottii EngelmCristiane Teixeira Vilhena Bernardes 19 September 2014 (has links)
Baccharis dracunculifolia, conhecida popularmente como \"alecrim do campo\" é um arbusto lenhoso, nativo das regiões sul, sudeste e centro-oeste do Brasil, muito utilizada na medicina popular como agente anti-inflamatório e no tratamento de doenças gastrointestinais e úlceras, sendo relatadas ainda atividades antibacteriana, antifúngica e antiparasitária. Pinus elliottii é uma espécie exótica, que foi introduzida no sudeste brasileiro como espécie de reflorestamento e se espalhou rapidamente. As plantas desse gênero são ricas em componentes fenólicos e terpenos, dos quais alguns diterpenos apresentam atividade antimicrobiana. Com a ressurgência de micro-organismos resistentes à ação dos antimicrobianos, há interesse em se investigar novas substâncias para o tratamento de infecções tópicas e sistêmicas, bem como o desenvolvimento de produtos antissépticos ou esterilizantes, para serem empregados em ambientes domésticos, industriais e hospitalares. No presente estudo foram obtidos os extrato das partes aéreas e raízes de B. dracunculifolia (Extrato BD e BD-R) por meio de processo de maceração em solução hidroalcoólica 96:4 e o extrato do lavado glandular das folhas de B. dracunculifolia (BD-L). Os extratos foram submetidos a diferentes modalidades cromatográficas e avaliações antimicrobianas. O Extrato BD foi submetido a fracionamento em HSCCC (cromatografia de contracorrente em alta velocidade) associado a CLAE-PREP, fornecendo a flavona hispidulina, o flavononol aromadendrina 4\'-O-metil éter e o fenilpropanoide ácido p-cumárico. A Fração BD-RH foi submetida a fracionamento por coluna clássica e duas das frações resultantes foram submetidas a processo de recristalização fornecendo os triterpenos óxido de baccharis e o friedelanol. Frações do extrato BD-L foram submetidas a fracionamento por cromatografia líquida a vácuo (CLV) e coluna clássica, resultando em 30 frações que foram submetidas a CLAE-PREP, fornecendo a flavanona isosakuranetina e o flavonol 3- O - metil - kaempferol. Obteve-se também o extrato da resina de P. elliottii que foi submetido à hidrodestilação em Clevenger para a retirada de sua fração volátil e o decocto restante foi particionado com AcOEt o que possibilitou a obtenção do extrato da resina de P. elliottii (extrato PE). O extrato foi submetido a CLAE-PREP fornecendo o ácido deidroabiético. Para os extratos BD e PE foram determinadas as atividades frente as micobactérias M. avium, M. kansasii, M. smegmatis, M. tuberculosis e M. bovis, utilizando-se a metodologia para determinação da concentração inibitória mínima (CIM). Ambos os extratos apresentaram-se ativos frente as micobactérias testadas, exceto o extrato de B. dracunculifolia frente a M. smegmatis. Avaliaram-se também as atividades antibacteriana e antifúngica do extrato das folhas de B. dracunculifolia, suas frações e substâncias isoladas, bem como de padrões comerciais de B. dracunculifolia. Foram também avaliados o extrato BD-L e o extrato BD-R, bem como o extrato PE e a substância majoritária isolada do mesmo. As atividades foram avaliadas para determinação da CIM frente às bactérias S. aureus, P. aeruginosa, S. choleraesuis, E. coli, B. subtilis, H. pylori e aos fungos T. mentagrophytes e C. albicans. Nenhum extrato, ou fração de B. dracunculifolia foi ativo frente às bactérias Gram negativas e somente a substância isosakuranetina foi ativa frente a S. choleraesuis, mas sem capacidade bactericida. O extrato PE foi ativo frente a todos os micro-organismos avaliados, exceto E. coli. O ácido deidroabiético, isolado do mesmo, foi ativo frente a todos os micro-organismos, exceto as bactérias Gram negativas. Avaliou-se também a associação dos extratos de B. dracunculifolia, suas frações, bem como o extrato de P. elliottii, em concentrações sub-inibitórias em associação aos antimicrobianos de uso comercial, frente aos mesmos micro-organismos avaliados para a determinação da CIM. Observou-se uma interação negativa dos extratos e frações de B. dracunculifolia com o antifúngico cetoconazol ii que apresentou valores de CIM mais elevados quando associado aos extratos e frações em comparação ao observado sem a associação. Apenas o extrato da resina de PE reduziu os valores de CIM quando associado ao cetoconazol. Já quando associados ao antifúngico fluconazol observou-se uma interação benéfica entre todos os extratos e frações avaliados, observando-se como melhor resultado a redução dos valores de CIM de 512 ?g/mL para 2 ?g/mL quando o fluconazol foi associado à fração F. AcOEt BD (50 ?g/mL), reduzindo também os valores de CFM de 512 ?g/mL para 64 ?g/mL, o que indica a possibilidade de associação entre o antifúngico comercial e os extratos BD e PE como uma nova abordagem frente a crescente resistência aos antimicrobianos disponíveis no mercado. Avaliou-se também o potencial desinfetante bactericida da solução hidroalcoólica de B. dracunculifolia a 0,2% em álcool 40º GL, a qual foi efetiva frente às bactérias S. aureus, P. aeruginosa, S. choleraesuis e E. coli. Avaliou-se também a atividade desinfetante fungicida frente a T. mentagrophytes, das soluções hidroalcoólicas a 0,2% à 40ºGL de B. dracunculifolia e de P. elliotti, bem como da solução hidroalcoólica 40ºGL, como controle. Ambas apresentaram-se ativas e o controle não foi ativo contra os micro-organismos avaliados. Os extratos a 0,2% em álcool 40ºGL foram melhores do que os observados na determinação da CIM. Portanto, sugere-se que o álcool 40ºGL esteja agindo como um adjuvante possibilitando melhor atividade ao extrato. As soluções de B. dracunculifolia e de P. elliotti separadas e em associação foram avaliadas para determinar a atividade desinfetante esporocida frente aos micro-organismos B. subtilis e C. sporogenes, mas não foram ativas. Conclui-se que as duas plantas avaliadas apresentam potencial para o desenvolvimento de produtos antimicrobianos, destacando-se o efeito sinérgico dos extratos em associação com o fluconazol. / Baccharis dracunculifolia (Asteraceae) popularly known as \"alecrim do campo\" is a woody shrub, native from the southeast of Brazil, widely used in folk medicine for the treatment of inflammatory and gastrointestinal diseases. Antibacterial, antifungal and anti-parasitic activities were also reported. Pinus elliottii is an exotic species that was introduced in southeast of Brazil as a reforestation specie and spread rapidly. Pinus plants are rich in phenolic components and terpenes, and some diterpenes display antimicrobial activity. With the resurgence of antimicrobial resistant microorganisms, there is a growing interest in investigating new substances for the treatment of topical and systemic infections, as well as the development of sterilizing or antiseptic products to be used in domestic, industrial and hospital. In the present study we have obtained the extracts of aerial parts (BD) and roots (BD-R) of B. dracunculifolia, by maceration process using aqueous ethanol 96:4, along with its leaves rinsed extract (BD- L). The extracts were submitted to different chromatographic techniques and the obtained fractions and isolated compounds were submitted to antimicrobial evaluation. The BD extract was partitioned using an apparatus for high-speed countercurrent chromatography, followed by preparative HPLC, furnishing the flavone hispidulin, flavononol aromadendrin-4-O-metyl-ether and the phenylpropanoid p-coumaric acid. The BD-RH fraction was subjected to fractionation by classical column and two of the resulting fractions were subjected to recrystallization process furnishing the triterpenes baccharis oxide and friedelinol. Fractions from BD-L extract were submitted to fractionation by vacuum liquid chromatography (CLV), classical column and preparative HPLC furnishing the flavanone isosakuranetin and flavonol 3 - O - methyl - kaempferol. The P. elliottii the resin was subjected to hydrodistillation in Clevenger for the separation of its volatile fraction, and decoction water was partitioned with EtOAc to furnish the fixed components fraction of P. elliottii resin (PE extract), which was submitted to preparative HPLC to furnish dehydroabietic acid. The activity of BD and PE extracts were determined against Mycobacterium avium, M. kansasii, M. smegmatis, M. tuberculosis and M. bovis, using the methodology for determining the minimum inhibitory concentration (MIC). Both extracts showed activity against all mycobacteria tested, except for the BD extract against M. smegmatis. It was also evaluated the antibacterial and antifungal activities of the B. dracunculifolia extract, fractions, isolated and commercial available compounds along with BD-R, BD-L and dehydroabietic acid. The antimicrobial activities were evaluated by MIC determination against the bacterias S. aureus, P. aeruginosa, S. choleraesuis, E. coli, B. subtilis, H. pylori and fungi T. mentagrophytes and C. albicans. Neither extract nor B. dracunculifolia fraction were active against Gram negative microorganisms, except isosakuranetin that was active against S. choleraesuis, but not with bactericidal activity. PE extract was active against all microorganisms assessed, except for E. coli. The dehydroabietic acid was active against all microorganisms except for Gram negative bacteria. B. dracunculifolia extract were combined with P. elliottii extract, as well as in sub-inhibitory concentrations, in combination with antimicrobial drugs, against the same tested microorganisms. It was observed a negative interaction of all extracts and fractions of B. dracunculifolia with the antifungal ketoconazole, which displayed higher MIC values when combined. Only PE extract lead to a reduction in MIC values in combination with ketoconazole. However, for antifungal fluconazole all samples diminished the MIC values. The best result iv was observed when fluconazole was associated with BD EtOAc fraction (50 ?g/mL) leading to a reduction of MIC values from 512 ?g/mL to 2 ?g/mL, which should be consider for further development to face antimicrobial resistance. It was assessed the potential bactericidal disinfectant potential of B. dracunculifolia extract 0.2% in 40 ºGL alcohol, which was effective against S. aureus, P. aeruginosa, S. choleraesuis and E. coli. I was also evaluated the disinfectant fungicidal activity of the hydroalcoholic solutions of 0.2% B. dracunculifolia and. P. elliottii, extracts in 40º GL, as well as the 40 ºGL alcohol solution as control. Both extracts solutions were active against T. mentagrophytes, and the control was not active. The activities of 0.2% extracts in alcohol 40 º GL were better than those observed in the MIC determination without ethanol. Therefore, it is suggest that ethanol 40º GL is acting as an adjuvant allowing better activity of the extract. Solutions of B. dracunculifolia and P. elliottii extracts, alone and in combination were inactive in the sporicidal disinfectant assay against B. subtilis and C. sporogenes. Overall, the two plants have the potential for the development of antimicrobial products, especially with regards to the synergistic effect of the extracts in combination with fluconazole.
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