Les molécules chirales représentent environ 60% des médicaments présents sur le marché pharmaceutique et plus de 80% des médicaments en développement avec plus de 150 milliards de dollars de chiffre d’affaire pour l’année 2002. Les intermédiaires chiraux sont fortement demandés dans l’industrie pharmaceutique atteignant 15 milliards de dollars de chiffre d’affaire en 2009. D’autres domaines en sont demandeurs avec une répartition d’environ 15% dans l’agrochimie et 5% pour la parfumerie. L’obtention de composés d’intérêt pharmaceutique de façon asymétrique est un réel défi et une réelle nécessité. Ces molécules possèdent une architecture spatiale qui entraîne des interactions spécifiques et des affinités particulières avec les enzymes ou des récepteurs biologiques chiraux. L’utilisation de catalyseurs pour accéder à des composés organiques chiraux et plus précisément l’oxydation d’alcanes prochiraux ou d’oléfines constitue un domaine en essor ces dernières décennies. Pour parvenir à synthétiser des molécules chirales, l’industrie pharmaceutique s’est tournée vers l’utilisation de biocatalyseurs en partie pour réaliser différentes réactions stéréo-contrôlées avec la nécessité de séparer les mélanges racémiques par résolution enzymatique. Cependant, les biocatalyseurs présentent un inconvénient majeur qui est généralement le faible rendement en composé chiral recherché et nécessite un savoir faire pour la manipulation de ces enzymes. Les métalloporphyrines sont des catalyseurs comportant un macrocycle tétrapyrrolique et différentes fonctionnalisations en positions méso. Ces molécules ont fait l’objet de nombreuses études qui ont conduit à la synthèse de métalloporphyrines chirales très complexes. Malheureusement, leur synthèse est souvent longue avec de faibles rendements et leur application à un nombre limité de substrats ne permet pas leur généralisation. Ce travail de thèse, développé pour la première fois au laboratoire, s’inscrit dans le cadre d'un contrat CIFRE, dans le but de parvenir à la synthèse de porphyrines chirales facilement accessibles, applicables dans des réactions d’oxydation énantiosélectives efficacement (stabilité). Le premier objectif visé est la synthèse de porphyrines chirales dont la structure ciblée comporte des groupements hétérocycliques azotés chiraux en position méso, reliés par une liaison carbone-hétéroatome (C-N). Nous avons pu atteindre 4 séries de porphyrines qui ont été évaluées dans des réactions d’oxydation énantiosélectives (époxydation, hydroxylation). Le deuxième objectif visé est d’exploiter les propriétés électroniques particulières des porphyrines permettant l’application des porphyrines en tant que photosensibilisant après photoactivation en thérapie anticancéreuse. L’étude des paramètres physiques est primordiale pour déterminer la longueur d’onde d’activation et le rendement quantique. Nous avons souhaité utiliser nos porphyrines et leurs précurseurs en tant qu’agents antiparasitaires, sans photoactivation dans un premier temps, conduisant à la découverte d’activités très intéressantes sur certaines espèce de leishmanies. Enfin, leur application sur P. falciparum nous a permis d’isoler une molécule avec une activité très intéressante. Dans les deux cas, des manipulations avec photoactivation sont en cours. / Chiral molecules represent about 60% of drugs in pharmaceutical market and over 80% of drugs in development with more than 150 billion dollars in 2002. Chiral intermediates are in high demand in the pharmaceutical industry producing a turnover of 15 billion dollars in 2009. Other areas are seekers of chiral molecules with a distribution of about 15% in agrochemicals and 5% for the perfume. Asymmetrically production of compounds of pharmaceutical interest is a real challenge. These molecules have a spatial architecture that results in specific interactions and affinity with the enzymes or biological chiral receptors. The use of catalysts to synthesis chiral organic compounds, and more specifically to oxidize alkenes and alkanes having prochiral positions, is a very important area extensively studied in recent decades with few positive results. To achieve the synthesis of chiral molecules, the pharmaceutical industry has turned to the use of biocatalysts, in part, to perform various stereo-controlled reactions with systematically followed by separation of the different isomers by different methodes. However, biocatalysts have a major disadvantage relative to low yields of chiral compound and requires expertise for handling these enzymes. Metalloporphyrins are tetrapyrrolic macrocyle substituted in meso position with various functional groups and incorporating metals (Fe, Mn, Co, Ru). These molecules have been extensively studied and led to the synthesis of many complex chiral metalloporphyrins. Unfortunately, their synthesis is often long with low yields and their application to a limited number of substrates is a major drawback. The first objective of this work is the synthesis of original chiral porphyrins. The targeted structure contains chiral heterocyclic nitrogen groups in two meso positions, connected by a carbon-heteoatom bond (C-N). We were able to reach 4 porphyrins-series that have been evaluated as catalyst in oxidation reactions (epoxidation, hydroxylation). The second objective is to take advantage of specific electronic properties of porphyrins for applications as photosensitizer after photoactivation for cancer by photodynamic therapy. The use of this therapy increased during last decades but poor specificity and solubility of the different porphyrins used in clinic against many cancers prompt us to investigate this area. The study of the physical parameters is essential to determine wavelength activation and quantum yield of a photosensitizer. We wanted to use our porphyrins and their precursors as antiparasitic agents, with and without photoactivation against L. donovani, L. major, T. brucei brucei. Malaria is caused by a protist of the genus of Plasmodium. This parasite has an iron deficiency on one hand and cannot biosynthesize certain amino acids. Strucure analogy of porphyrins with heme led us to evaluate antimalarial activity of several porphyrins against P. falciparum.

Ce document présente l’isolement et l’identification de 74 molécules, dont 13 décrites pour la première fois, à partir de deux plantes de la pharmacopée ivoirienne, Mallotus oppositifolius et Isolona cooperi. L’évaluation biologique de ces composés, menée notamment sur Leishmania et Trypanosoma valide l’usage traditionnel de ces plantes. À partir de différents organes de M. oppositifolius, 52 molécules de type phénols, stéroïdes et terpénoïdes ont été isolées. Les composés phénoliques, particulièrement les phloroglucinols, se sont avérés les plus actifs. À partir de différents organes d’I. cooperi, 22 molécules de type alcaloïdes, xanthines, lactones, indanes, amides, amines, stéroïde, esters gras et acides gras ont été isolées. L’évaluation biologique de certaines de ces molécules sur les mêmes parasites a montré des activités généralement modestes. Enfin, des modifications hémi-synthétiques réalisées sur l’apoprunellelactone isolée d’I. cooperi ont permis d’obtenir de nouveaux dérivés réduits, acétylés ou oxydés. Leur évaluation biologique montre une augmentation de l’activité antiparasitaire, en particulier pour le composé acétylé. / This document describes the isolation and the identification of 74 molecules, among them 13 newly described, from two medicinal plants of Ivory Coast: Mallotus oppositifolius and Isolona cooperi. The biological evaluation of these compounds, mainly on Leishmania and Trypanosoma validate the traditional use of these plants. From different organs of I. cooperi, 22 compounds were isolated and identified as phenols, steroids and terpenoids. Phenolic compounds and especially phloroglucinols were the most active. From different organs of M. oppositifolius, 52 compounds were isolated and identified as alkaloids, xanthines, lactones, indanes, amides, amines, steroids, fatty acids and esters. The biological assessment of some of these compounds show moderate activities. Hemi-synthetic modifications made on apoprunellelactone isolated from I. cooperi led to reduced, acetylated or oxydated analogs characterized by an significant increase of their antiparasitic activity, especially the acetylated derivative.

O benzoato de emamectina, um antiparasitário da classe das avermectinas, é amplamente utilizado em diversos países para o tratamento de infecções causadas por helmintos intestinais e ectoparasitas, os quais estão relacionados a grandes prejuízos na produção aquícola. Apesar de sua eficácia ser conhecida na aquicultura, seu uso não está regulamentado no Brasil. Diante da demanda nacional por uma maior variedade de medicamentos veterinários regulamentados para uso em espécies aquícolas, o presente projeto visou estimar um período de carência para o antiparasitário benzoato de emamectina, a partir de um estudo experimental de depleção residual desse fármaco em tilápia (filé com pele em proporção natural), a espécie de maior importância comercial para a produção aquícola no Brasil. Para tanto, fez-se necessárias as seguintes etapas: (i) incorporar o benzoato de emamectina na ração através da técnica de revestimento polimérico em equipamento de leito fluidizado; (ii) desenvolver e validar métodos analíticos para a determinação do benzoato de emamectina na ração e em filé de tilápia empregando cromatografia líquida de alta eficiência acoplada à espectrometria de massas (LC- MS/MS); e (iii) realizar um ensaio com tilápias para avaliar a depleção residual de emamectina B1a no filé. O revestimento da ração com 1,5% de etilcelulose permitiu incorporar o benzoato de emaectina na ração sem alterar a estrutura física da mesma, o que torna o processo vantajoso, visto que a ração mantém suas características nutricionais e de flutuabilidade. Além disso, o processo foi homogêneo (CV de 2,1%) e não apresentou taxa de lixiviação quantificável do fármaco para a água, contribuindo para uma maior segurança em relação à dose de tratamento a ser administrada e em relação ao risco potencial ao meio ambiente. A emamectina B1a foi extraída da ração por processo sólido-líquido e do filé de tilápia pelo método QuEChERS modificado. Os métodos foram avaliados mediante os seguintes parâmetros: seletividade, curva analítica, linearidade, precisão, exatidão, limite de detecção (LD) e de quantificação (LQ). Todos os parâmetros avaliados se encontraram conformes às recomendações dos guias de validação tomados como referências, qualificando os métodos como adequados para os objetivos propostos no presente trabalho. Para avaliar a depleção de emamectina B1a no filé de tilápia, os peixes receberam o fármaco via ração em dose de 50 ?g/kgPV/dia durante sete dias consecutivos. As curvas de depleção residual de emamectina B1a se ajustaram ao modelo exponencial de primeira ordem. Tomando como referência o limite máximo de resíduo de 100 ?g/kg recomendado pelo Codex Alimentarius, não houve a necessidade de se propor um período de carência mínimo para o abate dos peixes, considerando as condições experimentais empregadas. / Emamectin benzoate, an antiparasitic of the class of avermectins, it is widely used in several countries for the treatment of infections caused by intestinal helminths and ectoparasites, which are related to great losses in aquaculture production. Although its known effectiveness for aquaculture, its use is not regulated in Brazil. The national demand for a greater variety of regulated veterinary drugs for use in aquaculture species,the current project that aimed to evaluate a withdrawal period for the antiparasitic emamectin benzoate, based on an experimental study of residual depletion of this drug in tilapia ( fillet with skin in natural proportion) the species of major commercial importance for aquaculture production in Brazil. To do so, it was necessary to: (i) incorporate emamectin benzoate into the feed through the polymer coating technique in fluidized bed equipment; (ii) to develop and validate the analytical methods for the determination of emamectin benzoate in the feed and in tilapia fillet using high-performance liquid chromatography coupled to mass spectrometry (LC-MS / MS) and (iii) perform a tilapia test to evaluate the depletion of emamectin B1a in fillet. The feed coating with 1.5% ethylcellulose allowed to incorporate the emaectin benzoate into the feed without altering the physical structure, which makes the process advantageous, since the feed retains its nutritional and buoyancy characteristics. In addition, the process was homogeneous (CV 2,1%) and did not present quantifiable leaching rate of the drug into the water, contributing to a greater safety in relation to the dose of treatment to be administered and in relation to potential risk to the environment. Emamectin B1a was extracted from the feed by solid-liquid process and from tilapia fillet by the modified QuEChERS method. The methods were evaluated using the following parameters: selectivity, analytical curve, linearity, precision, accuracy, limit of detection (LD) and quantification (LQ). All the evaluated parameters were in accordance with the recommendations of the validation guides taken as references, qualifying the methods as adequate for the objectives proposed in the present work. To evaluate the depletion of emamectin B1a tilapia fillet, the fish received the drug via feed at a dose of 50 ?g / kgPV / day for seven consecutive days. The residual depletion curves of emamectin B1a were fitted to the first order exponential model. Taking into account the maximum residue limit of 100 ?g / kg recommended by the Codex Alimentarius, there was no need to propose a minimum withdrawal period for the slaughtering of fish, considering the experimental conditions used.

O albendazol (ABZ) é um antiparasitário amplamente utilizado na medicina veterinária para tratar infecções causadas por parasitas helmínticos, devido ao seu baixo custo de aquisição, alta eficácia e facilidade de administração. Apesar, de sua eficácia ser mundialmente conhecida, seu uso não é regulamentado em espécies aquícolas. Diante da demanda nacional por uma maior variedade de medicamentos veterinários regulamentados para uso na aquicultura, o presente projeto visou estimar o período de carência para o ABZ. Para tanto, foi necessário: (i) incorporar o ABZ na ração através da técnica de revestimento polimérico em equipamento de leito fluidizado; (ii) desenvolver e avaliar os métodos analíticos para a determinação do ABZ na ração e do ABZ e seus metabólitos em filé de pacu empregando cromatografia líquida de alta eficiência acoplada à espectrometria de massas (LC-MS/MS) e (iii) realizar um ensaio com pacu para avaliar a depleção do ABZ e seus metabólitos no filé desses peixes. O revestimento da ração com 1,5% de etilcelulose permitiu incorporar o ABZ na ração sem alterar a estrutura física da mesma, o que torna o processo vantajoso, visto que, a ração mantém suas características de flutuabilidade. Além disso, o processo foi homogêneo e diminuiu a lixiviação do fármaco para a água, garantindo a segurança da dose administrada e do meio ambiente. O ABZ foi isolado da ração por extração líquido-líquido. O ABZ e seus metabólitos foram extraídos do filé de pacu pelo método de QuEChERS modificado. Para os dois métodos desenvolvidos, a separação cromatográfica foi realizada em coluna de fase reversa octadecil híbrida. Os métodos foram avaliados mediante os seguintes parâmetros: seletividade, curva analítica, linearidade, precisão e exatidão. Para o método do filé de peixe avaliou-se também o CC? e o CC?. Todos os parâmetros avaliados se encontram de acordo com os guias de validação, o que torna os métodos adequados para os objetivos propostos no presente trabalho. Para avaliar a depleção do ABZ e seus metabólitos no filé de pacu, os peixes receberam o fármaco via ração em dose única de 10 mg de ABZ (kg peso vivo)-1. As curvas de depleção residual do ABZ e seus metabólitos se ajustaram ao modelo exponencial de primeira ordem. Tomando como referência as recomendações da EMA, o período de carência foi estimado em sete dias. / Albendazole (ABZ) is an antiparasitic widely used in veterinary medicine to treat infections caused by parasites anthelmintic, due to its low cost, high efficiency and ease of administration. Regardless of its world widely known effectiveness, its use is not regulated in aquaculture species. Faced with national demand for a greater variety of regulated veterinary drugs for use in aquaculture, this project aimed to estimate the withdrawal time for the ABZ. Therefore, it was necessary to (i) incorporate ABZ the feed through the polymeric coating by spouted bed technique; (Ii) develop and evaluate analytical methods for determining the ABZ in feed and ABZ and its metabolites in pacu fillet using high-performance liquid chromatography coupled to mass spectrometry (LC-MS / MS) and (iii) conduct a test with pacu to evaluate the depletion of ABZ and its metabolites in the fillet of these fish. The ration with 1.5% coating of ethylcellulose allowed incorporate ABZ the feed without altering the physical structure of the same, which makes the process advantageous, since the feed maintains its buoyancy characteristics. Furthermore, the process was homogeneous and reduced leaching of the drug into the water, ensuring the safety of the administered dose and the environment. The ABZ ration was isolated by liquid-liquid extraction. The ABZ and its metabolites were extracted from pacu fillet the modified QuEChERS method. For both developed methods, chromatographic separation was performed in a hybrid octadecyl reverse phase column. The methods were evaluated by the following parameters: selectivity, analytical curve, linearity, precision and accuracy. For fish fillet method also assessed whether it CC? and CC?. All parameters are according to the validation guides, which makes the appropriate methods for the objectives proposed in this paper. To evaluate the depletion of ABZ and its metabolites in pacu fillet, the fish were dosed via single dose in feed 10 mg ABZ (kg body weight)-1. The curves of residual depletion ABZ and its metabolites adjusted to the exponential model of the first order. With reference to the recommendations of the EMA, the withdrawal time was estimated at seven days

Petroleum ether, dichloromethane, and 80% ethanol extracts of 15 plant species collected in Nigeria were screened for in vitro antibacterial, anti-inflammatory and antimalarial activities. Antibacterial activity was tested using the agar diffusion method, while the minimum inhibitory concentrations (MIC) of the active extracts were determined using the microtitre serial dilution method. Most antibacterial activity detected was against Gram-positive bacteria with Staphylococcus aureus being the most susceptible. The highest activity was found in petroleum ether and dichloromethane leaf extracts of Mallotus oppositifolius; petroleum ether, dichloromethane and ethanolic root extracts of Newbouldia laevis; and ethanolic root extracts of Morinda lucida and Canthium subcordatum. Against the Gram-negative bacterium Escherichia coli, the highest activity was found in dichloromethane leaf extracts of Newbouldia laevis, ethanolic root extracts of Phyllanthus amarus, Mallotus oppositifolius, and Canthium subcordatum. A total of 60 plant extracts were screened for antiplasmodial activity. A chloroquine sensitive strain of Plasmodium falciparum (D10) was used. In the assay, the parasite lactate dehydrogenase (pLDH) activity was used to measure parasite viability. About 11 extracts showed promising activity with an IC₅₀ ranging from 2.5 to 13.4 µg/ml. The petroleum ether leaf extract of Hyptis suaveolens had the highest activity (IC₅₀ = 2.5 µg/ml). The cyclooxygenase (COX-1 and COX-2) assays were used to test for anti-inflammatory activity. All the plant species, with the exception of Hedranthera barteri and Picralima nitida showed anti-inflammatory activity. Apart for a few ethanolic extracts, all the activities were recorded with petroleum ether and dichloromethane extracts. Employing bioassay-guided activity fractionation, an antibacterial anthraquinone identified as emodin was isolated from ethanolic root extract of Senna occidentalis. Although this compound had been isolated from other sources, this was the first report of isolation from Senna occidentalis. Using a similar approach a novel antimalarial diterpenoid was isolated from the petroleum ether leaves extract of Hyptis suaveolens. It had IC₅₀ of 0.1 µg/ml. This new compound is worthy of further investigation and may act as an important lead compound for future antimalarial drugs. / Thesis (Ph.D.)-University of KwaZulu-Natal, 2005.

O controle de resíduos químicos em produtos de origem animal no Brasil é regulamentado por órgãos fiscalizadores através de programas como o Plano Nacional de Controle de Resíduos (PNCR) e o Programa de Análise de Resíduos de Medicamentos Veterinários (PAMVet), visando a garantia de segurança alimentar ao consumidor. As práticas adotadas na produção agropecuária, entretanto, envolvem o uso de fármacos para o controle de doenças infecciosas e parasitárias nos animais. As lactonas macrocíclicas (LMs) são drogas veterinárias eficazes no controle de endo e ectoparasitas, sendo amplamente utilizadas na bovinocultura leiteira. Assim, o objetivo do presente estudo foi determinar a presença de resíduos de LMs no leite de rebanhos bovinos e identificar possíveis fatores de risco associados em propriedades leiteiras das regiões Noroeste e Sul do Estado do Rio Grande do Sul – Brasil. Foram coletados 72 amostras de leite de tanques resfriadores de propriedades de agricultura familiar das regiões Noroeste (55) e Sul (17) do Estado do Rio Grande do Sul. Foram adquiridas 60 amostras de leite ultra-high temperature (UHT) em estabelecimentos comerciais para análise de resíduos de LMs. Os resíduos das LMs foram extraídos do leite bovino pela adição de acetonitrila e foram purificados pelo congelamento dos co-extratos da matriz com temperatura de aproximadamente -20 ºC. O extrato purificado foi analisado por LC-MS/MS. Entre as 72 amostras, 18 (25 %) apresentaram resíduos de LMs, cujos ingredientes ativos identificados foram: ivermectina (n=15), ivermectina e moxidectina (n=1), moxidectina (n=1) e abamectina (n=1). A região Sul do Estado apresentou 35,3 % (6/17) das amostras com resíduos de LMs enquanto que a região Noroeste 21,8 % (12/55), as maiores concentrações encontradas foram de 2,48 μg.mL-1 para ivermectina, 2,73 μg.mL-1 e 1,69 μg.mL-1 para moxidectina. Os resíduos encontrados nas amostras de leite estavam abaixo do limite estabelecido pelo Codex Alimentarius (<10 μg.mL-1), porém esses medicamentos não devem ser utilizados em animais lactantes cujo leite seja destinado ao consumo humano. Os resultados indicam a utilização inadequada de antiparasitários nos rebanhos leiteiros estudados. Conclui-se que o leite das propriedades leiteiras das regiões Noroeste e Sul do Estado do Rio Grande do Sul estudadas apresentam resíduos de LMs. Nas amostras de leite UHT não foram detectados resíduos de LMs. / The control of chemical residues in animal products in Brazil is regulated by regulatory agencies through programs such as the National Residue Control (PNCR) and the Program for Residue Analysis of Veterinary Drugs (PAMVet), aimed at ensuring food security to consumer. The practices adopted in agricultural production, however, involve the use of drugs to control infectious and parasitic diseases in farm animals. The macrocyclic lactones (ML) are effective in controlling endo and ectoparasites, being widely used in dairy cattle. The objective of this study was to determine the presence of ML residues in milk from cattle and identify possible risk factors associated of Northwest and South regions of Rio Grande do Sul state,Brazil. Were acquired 60 samples of milk in shops for residue analysis LMs. We collected 72 samples of milk cooling tanks from smallholder properties located in Northwest (55) and South (17) regions of Rio Grande do Sul state. Samples were processed to investigate residues of ML, and they were extracted from bovine milk by addition of acetonitrile and purified by freezing of the matrix co-extracts at -20 ° C. The purified extract was analyzed by LC-MS/MS. Among the 72 samples, 18 (25 %) had ML residues whose active ingredients identified were: ivermectin (n = 15), moxidectin and ivermectin (n = 1), moxidectin (n = 1) and abamectin (n = 1).The Southern part of state presented (35,3 %; 6/17) and Northwest region presented (21,8 %; 12/55) occurrence of ML residues in milk. the highest concentrations found were 2.48 μg.mL-1 for ivermectin 2.73 μg.mL-1 and 1.69 μg.mL-1 for moxidectin. The residue found in milk samples were below the limit established by Codex Alimentarius (<10 microg.mL-1). However, these drugs cannot be used in lactating animals which milk will be destined to human consumption. The results indicate a improper use of antiparasitic drugs in dairy herds studied. We can concluded that milk from dairy farms from Northwest and South regions of Rio Grande do Sul state have ML residues. In the samples of milk UHT were not detected residues LMs.

Milk is one of the most consumed fresh food, considered a nutritionally complete product. Veterinary drugs are used in order to increase productivity. However, improper use of these products may result in the presence of residues in milk. This study aims to develop a method for determination of antiparasitic residues in bovine milk using fast liquid-liquid low temperature partitioning (LLE-LTP) method and liquid chromatographic coupled to tandem mass spectrometry (LC-MS/MS). Different classes were studied for antiparasitic, such as macrocyclic lactones, pyrethroids, benzimidazoles, organophosphates, carbamates, among others. The spikes were held comprising the Maximum Residue Limits (MRLs) of each compound at levels 1- 200 ug L-1. For validation step was adopted the following parameters: selectivity, linear range, matrix effect, limits of detection (LOD) and quantitation (LOQ), decision limit (CCα) and detection capability (CCβ), precision, accuracy. The method was considered valid to 55 antiparasitic and presented LOD from 0.03 to 6.0 μg L-1 and LOQ from 1 to 20 ug L-1. Recoveries were between 70 and 120% with RSD ≤ 20%, that were considered acceptable. The proposed method was applied to 15 real samples where all samples presented residues of at least one antiparasitic. Of these, two samples contained cyhalothrin and nicarbazin residues above the MRL. However, the method was efficient in determining antiparasitic residues in bovine milk using LLE-LTP and LCMS/ MS, showing good sensitivity and selectivity. / O leite é um dos alimentos in natura mais consumidos, por ser considerado um produto completo nutricionalmente. A fim de tratar e assegurar a sanidade do rebanho, faz-se uso de medicamentos veterinários. No entanto, a utilização inadequada destes produtos pode acarretar na presença de resíduos destes no leite. Este estudo tem como objetivo desenvolver um método para determinação de resíduos de antiparasitários em leite bovino, empregando método extração líquido-líquido com rápida partição a baixa temperatura (LLELTP) e cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas em série (LC–MS/MS). Avaliou-se diferentes classes de antiparasitários, como lactonas macrocíclicas, piretróides, benzimidazóis, organofosforados, carbamatos, entre outros. As fortificações foram realizadas abrangendo os Limites Máximos de Resíduos (LMRs) de cada composto, em níveis de 1 a 200 μg L-1. Para a etapa de validação do método avaliou-se os seguintes parâmetros: seletividade, faixa linear, efeito matriz, limites de detecção (LOD) e quantificação (LOQ), limite de decisão (CCα), capacidade de detecção (CCβ), precisão e exatidão. O método foi considerado validado para 55 antiparasitários e apresentou valores de LOD de 0,03 a 6,0 μg L-1 e de LOQ de 1 a 20 μg L-1. As recuperações ficaram entre 70 e 120%, e RSD ≤ 20%, sendo considerados aceitáveis. O método proposto foi aplicado em 14 amostras reais, onde todas apresentaram resíduos de pelo menos um antiparasitário. Destas, duas amostras continham resíduos de cialotrina e nicarbazin acima do LMR. O método mostrou-se eficiente na determinação de resíduos de antiparasitários em leite bovino empregando LLELTP e LC–MS/MS, demonstrando boa sensibilidade e seletividade.

O controle de resíduos químicos em produtos de origem animal no Brasil é regulamentado por órgãos fiscalizadores através de programas como o Plano Nacional de Controle de Resíduos (PNCR) e o Programa de Análise de Resíduos de Medicamentos Veterinários (PAMVet), visando a garantia de segurança alimentar ao consumidor. As práticas adotadas na produção agropecuária, entretanto, envolvem o uso de fármacos para o controle de doenças infecciosas e parasitárias nos animais. As lactonas macrocíclicas (LMs) são drogas veterinárias eficazes no controle de endo e ectoparasitas, sendo amplamente utilizadas na bovinocultura leiteira. Assim, o objetivo do presente estudo foi determinar a presença de resíduos de LMs no leite de rebanhos bovinos e identificar possíveis fatores de risco associados em propriedades leiteiras das regiões Noroeste e Sul do Estado do Rio Grande do Sul – Brasil. Foram coletados 72 amostras de leite de tanques resfriadores de propriedades de agricultura familiar das regiões Noroeste (55) e Sul (17) do Estado do Rio Grande do Sul. Foram adquiridas 60 amostras de leite ultra-high temperature (UHT) em estabelecimentos comerciais para análise de resíduos de LMs. Os resíduos das LMs foram extraídos do leite bovino pela adição de acetonitrila e foram purificados pelo congelamento dos co-extratos da matriz com temperatura de aproximadamente -20 ºC. O extrato purificado foi analisado por LC-MS/MS. Entre as 72 amostras, 18 (25 %) apresentaram resíduos de LMs, cujos ingredientes ativos identificados foram: ivermectina (n=15), ivermectina e moxidectina (n=1), moxidectina (n=1) e abamectina (n=1). A região Sul do Estado apresentou 35,3 % (6/17) das amostras com resíduos de LMs enquanto que a região Noroeste 21,8 % (12/55), as maiores concentrações encontradas foram de 2,48 μg.mL-1 para ivermectina, 2,73 μg.mL-1 e 1,69 μg.mL-1 para moxidectina. Os resíduos encontrados nas amostras de leite estavam abaixo do limite estabelecido pelo Codex Alimentarius (<10 μg.mL-1), porém esses medicamentos não devem ser utilizados em animais lactantes cujo leite seja destinado ao consumo humano. Os resultados indicam a utilização inadequada de antiparasitários nos rebanhos leiteiros estudados. Conclui-se que o leite das propriedades leiteiras das regiões Noroeste e Sul do Estado do Rio Grande do Sul estudadas apresentam resíduos de LMs. Nas amostras de leite UHT não foram detectados resíduos de LMs. / The control of chemical residues in animal products in Brazil is regulated by regulatory agencies through programs such as the National Residue Control (PNCR) and the Program for Residue Analysis of Veterinary Drugs (PAMVet), aimed at ensuring food security to consumer. The practices adopted in agricultural production, however, involve the use of drugs to control infectious and parasitic diseases in farm animals. The macrocyclic lactones (ML) are effective in controlling endo and ectoparasites, being widely used in dairy cattle. The objective of this study was to determine the presence of ML residues in milk from cattle and identify possible risk factors associated of Northwest and South regions of Rio Grande do Sul state,Brazil. Were acquired 60 samples of milk in shops for residue analysis LMs. We collected 72 samples of milk cooling tanks from smallholder properties located in Northwest (55) and South (17) regions of Rio Grande do Sul state. Samples were processed to investigate residues of ML, and they were extracted from bovine milk by addition of acetonitrile and purified by freezing of the matrix co-extracts at -20 ° C. The purified extract was analyzed by LC-MS/MS. Among the 72 samples, 18 (25 %) had ML residues whose active ingredients identified were: ivermectin (n = 15), moxidectin and ivermectin (n = 1), moxidectin (n = 1) and abamectin (n = 1).The Southern part of state presented (35,3 %; 6/17) and Northwest region presented (21,8 %; 12/55) occurrence of ML residues in milk. the highest concentrations found were 2.48 μg.mL-1 for ivermectin 2.73 μg.mL-1 and 1.69 μg.mL-1 for moxidectin. The residue found in milk samples were below the limit established by Codex Alimentarius (<10 microg.mL-1). However, these drugs cannot be used in lactating animals which milk will be destined to human consumption. The results indicate a improper use of antiparasitic drugs in dairy herds studied. We can concluded that milk from dairy farms from Northwest and South regions of Rio Grande do Sul state have ML residues. In the samples of milk UHT were not detected residues LMs.

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This study evaluates in vitro the anti-toxoplasmic potential of the ethanolic extract, ethyl acetate and aquatic fractions, essential oil and bisabolol isolated from Siparuna guianensis. Cell viability tests using NIH/3T3 murine fibroblasts were performed by the MTT colorimetric method. Anti-toxoplasmatics were evaluated using the β-galactosidase assay in two experimental conditions using T. gondii strain RH-2F1. Samples were tested in different variables of 15 to 500 μg/mL, while the testosterone assayed in the test ranged from 15 to 500 μg/mL. It was verified that ethanolic extract and a fraction of euphyl acetate of cytometic activity against the fibroblasts in the highest concentrations analyzed (250 and 500 μg/mL) and the essential oil in the concentration of 500 μg/mL. For the other calories, some have a significant cytotoxic effect, suggesting that the plant is well tolerated by the body. In the intracellular proliferation of the parasite when the treatment was carried out after the cellular activation, the control of the progesterone control and the parasitism was observed, being that only a fraction of standard of acetate demonstrated capacity of relevant toxoplasmosis, presenting IC 50 value of 77,21 μg/ml. In contrast, the aqueous fraction and theessential effect, the thermal effect against the parasite, are not a therapeutic alternative. It was verified that the inhibitory effect of the parasitism was more significant in the pre-treatment of the parasites before the cellular infection, evidencing a direct effect on the parasite. According to protocol specifications, in order to allow the use of data, according to their implications, in vivo parasitic infection models and identification of the major plant components are required. / A toxoplasmose, causada pelo protozoário intracelular obrigatório Toxoplasma gondii, é uma doença cosmopolita que atinge um terço da população mundial. Tipicamente a infecção pelo T. gondii é assintomática em indivíduos imunocompetentes, no entanto, várias manifestações clínicas podem acometer, sobretudo indivíduos imunocomprometidos e infectados congenitamente, levando a consequências fatais, o que torna essa doença um importante problema de saúde pública. Embora existam medicamentos para o tratamento da toxoplasmose, estes apresentam eficácia limitada e graves efeitos colaterais, tornando essencial a busca de novas terapias, com melhor perfil de segurança. Neste contexto, o objetivo do estudo foi avaliar in vitro o potencial anti-toxoplásmico do extrato etanólico, frações acetato de etila e aquosa, óleo essencial e do α-bisabolol isolado de Siparuna guianensis. Foi realizado teste de viabilidade celular utilizando fibroblastos murinos NIH/3T3, pelo método colorimétrico de MTT. A atividade anti-toxoplásmica foi avaliada por meio do ensaio da β-galactosidase em duas condições experimentais diferentes, utilizando parasitos da cepa RH-2F1 de T. gondii. As amostras foram testadas em diferentes concentrações variando de 15 a 500 μg/mL, sendo utilizado como controle negativo meio RPMI e como controle positivo a enrofloxacina. Verificou-se que o extrato etanólico e a fração acetato de etila apresentaram atividade citotóxica frente aos fibroblastos nas maiores concentrações analisadas (250 e 500 μg/mL) e o óleo essencial na concentração de 500 μg/mL. Para as demais concentrações, nenhuma apresentou efeito citotóxico significativo, sugerindo que a planta seja bem tolerada pelo organismo. Na avaliação da proliferação intracelular do parasito quando o tratamento foi realizado após a infecção celular, observou-se que os compostos da S. guianensis controlaram parcialmente o parasitismo, sendo que apenas a fração acetato de etila demonstrou capacidade toxoplasmicida relevante, apresentando valor de IC 50 de 77,21 μg/mL. Em contraste, a fração aquosa e o óleo essencial, apresentaram nenhum efeito tóxico contra o parasito, indicando que estes não são uma boa alternativa terapêutica. Verificou-se que o efeito inibitório do parasitismo foi mais significativo no pré- tratamento dos parasitos antes da infecção celular, evidenciando um efeito direto sobre o parasito. Em conclusão, os resultados indicam utilização favorável da S. guianensis, especialmente da fração acetato de etila como terapia alternativa da toxoplasmose, devido a sua baixa citotoxidade, sua ação direta contra o parasito, além do seu efeito concentração-dependente, porém estudos futuros utilizando modelos de infecção parasitária in vivo e identificação dos princípios ativos da planta são necessários.

O controle de resíduos químicos em produtos de origem animal no Brasil é regulamentado por órgãos fiscalizadores através de programas como o Plano Nacional de Controle de Resíduos (PNCR) e o Programa de Análise de Resíduos de Medicamentos Veterinários (PAMVet), visando a garantia de segurança alimentar ao consumidor. As práticas adotadas na produção agropecuária, entretanto, envolvem o uso de fármacos para o controle de doenças infecciosas e parasitárias nos animais. As lactonas macrocíclicas (LMs) são drogas veterinárias eficazes no controle de endo e ectoparasitas, sendo amplamente utilizadas na bovinocultura leiteira. Assim, o objetivo do presente estudo foi determinar a presença de resíduos de LMs no leite de rebanhos bovinos e identificar possíveis fatores de risco associados em propriedades leiteiras das regiões Noroeste e Sul do Estado do Rio Grande do Sul – Brasil. Foram coletados 72 amostras de leite de tanques resfriadores de propriedades de agricultura familiar das regiões Noroeste (55) e Sul (17) do Estado do Rio Grande do Sul. Foram adquiridas 60 amostras de leite ultra-high temperature (UHT) em estabelecimentos comerciais para análise de resíduos de LMs. Os resíduos das LMs foram extraídos do leite bovino pela adição de acetonitrila e foram purificados pelo congelamento dos co-extratos da matriz com temperatura de aproximadamente -20 ºC. O extrato purificado foi analisado por LC-MS/MS. Entre as 72 amostras, 18 (25 %) apresentaram resíduos de LMs, cujos ingredientes ativos identificados foram: ivermectina (n=15), ivermectina e moxidectina (n=1), moxidectina (n=1) e abamectina (n=1). A região Sul do Estado apresentou 35,3 % (6/17) das amostras com resíduos de LMs enquanto que a região Noroeste 21,8 % (12/55), as maiores concentrações encontradas foram de 2,48 μg.mL-1 para ivermectina, 2,73 μg.mL-1 e 1,69 μg.mL-1 para moxidectina. Os resíduos encontrados nas amostras de leite estavam abaixo do limite estabelecido pelo Codex Alimentarius (<10 μg.mL-1), porém esses medicamentos não devem ser utilizados em animais lactantes cujo leite seja destinado ao consumo humano. Os resultados indicam a utilização inadequada de antiparasitários nos rebanhos leiteiros estudados. Conclui-se que o leite das propriedades leiteiras das regiões Noroeste e Sul do Estado do Rio Grande do Sul estudadas apresentam resíduos de LMs. Nas amostras de leite UHT não foram detectados resíduos de LMs. / The control of chemical residues in animal products in Brazil is regulated by regulatory agencies through programs such as the National Residue Control (PNCR) and the Program for Residue Analysis of Veterinary Drugs (PAMVet), aimed at ensuring food security to consumer. The practices adopted in agricultural production, however, involve the use of drugs to control infectious and parasitic diseases in farm animals. The macrocyclic lactones (ML) are effective in controlling endo and ectoparasites, being widely used in dairy cattle. The objective of this study was to determine the presence of ML residues in milk from cattle and identify possible risk factors associated of Northwest and South regions of Rio Grande do Sul state,Brazil. Were acquired 60 samples of milk in shops for residue analysis LMs. We collected 72 samples of milk cooling tanks from smallholder properties located in Northwest (55) and South (17) regions of Rio Grande do Sul state. Samples were processed to investigate residues of ML, and they were extracted from bovine milk by addition of acetonitrile and purified by freezing of the matrix co-extracts at -20 ° C. The purified extract was analyzed by LC-MS/MS. Among the 72 samples, 18 (25 %) had ML residues whose active ingredients identified were: ivermectin (n = 15), moxidectin and ivermectin (n = 1), moxidectin (n = 1) and abamectin (n = 1).The Southern part of state presented (35,3 %; 6/17) and Northwest region presented (21,8 %; 12/55) occurrence of ML residues in milk. the highest concentrations found were 2.48 μg.mL-1 for ivermectin 2.73 μg.mL-1 and 1.69 μg.mL-1 for moxidectin. The residue found in milk samples were below the limit established by Codex Alimentarius (<10 microg.mL-1). However, these drugs cannot be used in lactating animals which milk will be destined to human consumption. The results indicate a improper use of antiparasitic drugs in dairy herds studied. We can concluded that milk from dairy farms from Northwest and South regions of Rio Grande do Sul state have ML residues. In the samples of milk UHT were not detected residues LMs.