Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A doença de Chagas é endêmica na América Latina sendo considerada uma doença negligenciada com grande impacto socioeconômico. A infecção é causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi que é transmitido pela forma vetorial, entre outros mecanismos. O tratamento consiste basicamente no uso de dois fármacos, o benznidazol e o Nifurtimox que apresentam uma série de efeitos colaterais e atuam muito pouco nas formas amastigotas intracelulares o que faz com que o tratamento atual seja restrito e insatisfatório.Várias atividades farmacológicas foram atribuídas ao lapachol e a pterocarpanos, tais como atividade antitumoral e antiparasitária. Devido a esse potencial foi sintetizado uma molécula híbrida, a pterocarpanoquinona LQB-118, e algumas moléculas derivadas. A LQB-118 mostrou anteriormente atividade antitumoral e anti-Leishmania. O objetivo do presente trabalho foi investigar a atividade in vitro da LQB-118 e suas moléculas derivadas sobre o Trypanosoma cruzi clone Dm28c. Para avaliação inicial do efeito anti-parasitário das moléculas, amastigotas intracelulares, tripomastigotas metacíclicos e epimastigotas foram incubados com 20 M das LQBs 118, 168, 187, 182 e 236. A LQB-118 demonstrou atividade antiparasitária nas três formas evolutivas (90% na forma amastigota, 44% na forma tripomastigota e 70% na forma epimastigota) do parasito, enquanto as moléculas derivadas não mostraram atividade significativa. Sendo assim os estudos foram continuados com a molécula LQB-118. A ação da LQB-118 sobre as amastigotas intracelulares foi dose dependente, com redução do índice de infecção em 81% e 88% nas concentrações de 20 e 30 M respectivamente. Já sobre tripomastigotas, a LQB-118 foi menos ativa reduzindo a mobilidade dessas formas em até 45% a 30 M. Sobre a forma epimastigota a ação foi dose-dependente chegando a inibir 96% o crescimento dos parasitos a 20 M, com alterações da morfologia tais como arrendondamento do corpo celular e perda do flagelo. A dose capaz de inibir 50% foi de 4,2 M para amastigota intracelular e 38,1 M para tripomastigotas. Para macrófagos, a LC50 ficou em 40 M, uma concentração quase dez vezes maior que a IC50 para amastigotas. A capacidade das formas amastigotas intracelulares se diferenciarem em tripomatigotas e lisar os macrófagos foi avaliada após o tratamento com a LQB-118 por 72h. Observou-se um atraso do ciclo intracelular do parasito de modo dose-dependente, onde na concentração de 30 M o surgimento de tripomastigota foi no 9 dia enquanto nos controles foi no 5 dia de cultura. Para delinear o mecanismo de ação, foi avaliado o efeito direto sobre o parasito como a indução da fragmentação de DNA. A análise de indução da fragmentação do DNA feita pela marcação pelo TUNEL mostrou que o tratamento com a LQB-118 induziu seletivamente a fragmentação do núcleo das amastigotas enquanto o núcleo dos macrófagos se mantiveram íntegros. Macrófagos peritoneais pré-tratados com LQB-118 por 24 horas foram capazes de reduzir o número de amastigotas após 72h de cultivo na ausência da molécula, mas sem alteração na produção de óxido nítrico. Esses resultados mostram que a LQB-118 é ativa contra o T. cruzi, principalmente sobre a forma amastigota intracelular, que é a forma presente na fase crônica da infecção. O mecanismo de ação sugere que a LQB-118 é capaz de ser seletivamente tóxica para o parasito e também ativar os mecanismos microbicidas dos macrófagos de modo independente da produção de óxido nítrico. / Chagas disease is endemic in Latin America being considered a neglected disease with high socioeconomic impact. The infection is caused by the protozoan Trypanosoma cruzi, which is transmitted by the vector form, among other mechanisms. The treatment basically consists of using two drugs, benznidazole and nifurtimox which presenting several side effects and acts very little on intracellular amastigotes what makes the current treatment is restricted and unsatisfactory. Several pharmacological activities have been attributed to lapachol and pterocarpans, such as antitumor and antiparasitic activity. Because of this therapeutic potential an hybrid molecule was synthesized, a pterocarpanquinone LQB-118, and some derived molecules. The LQB-118 previously showed antitumor and anti-Leishmania activity. The objective of this study was to investigate the in vitro activity of LQB-118 and its derived molecules on Trypanosoma cruzi Dm28c clone. For initial evaluation of the antiparasitic effect of the molecules, intracellular amastigotes, epimastigotes and metacyclic trypomastigotes were incubated with 20 M of LQBs 118, 168, 187, 182 and 236. The LQB-118 showed antiparasitic activity on the three evolutionary forms (90% on amastigote form, 44% on trypomastigote form and 70% on epimastigote form) of the parasite, while derived molecules showed no significant activity. Thus, studies were continued with the molecule LQB-118. The action of LQB-118 on intracellular amastigotes was dose dependent, with reduction of infection index into 81 and 88% at concentrations of 20 and 30 M respectively. In trypomastigotes, LQB-118 was less active reducing the mobility of these forms up to 45% at 30 M. In epimastigote form, the action was dose dependent reaching 96% to inhibit the growth of parasites at 20 M, with morphological changes such as rounding of the cell body and loss of the flagellum. The dose able to inhibit 50% was 4,2 M to intracellular amastigote and 38,1 M to trypomastigote. To macrophages, LC50 was 40 M, a concentration about ten times higher than the IC50 to amastigotes.The ability of intracellular amastigotes differentiate on trypomastigotes and break macrophages was evaluated after the treatment with LQB-118 for 72 hours. There was a delay on intracellular cycle of the parasite in a dose dependent way, where in the concentration of 30 M the trypomastigote emergence was on the 9th day while in controls was on the 5th day of culture. To delineate the mechanism of action, it was evaluated the direct effect on the parasite such as the induction of DNA fragmentation. Analysis of the induction of DNA fragmentation by TUNEL labeling showed that the treatment with LQB-118 induced selectively fragmentation of amastigotess nuclei while macrophagess nuclei remained without fragmentation. Peritoneal macrophages pretreated with LQB-118 for 24 hours were able to reduce the number of amastigotes after 72 hours of culture in absence of the molecule, but without alteration in nitric oxide production. These results show that LQB-118 is active against T. cruzi, mainly on intracellular amastigote form, which is present in the chronic phase of infection. The mechanism of action suggests that LQB-118 can be selectively toxic to parasite and also activate the microbicidal mechanisms of macrophages independently of nitric oxide production.

O protozoário flagelado, Trichomonas vaginalis, causa a tricomonose, a doença sexualmente transmissível (DST) não viral mais comum no mundo. Metronidazol e tinidazol são os dois fármacos de escolha recomendados pelo Food and Drug Administration (FDA, USA) para o tratamento da tricomonose humana. Entretanto, isolados de T. vaginalis clínicos ou laboratoriais resistentes e reações adversas comuns têm sido reportados. Sabe-se que fungos produzem moléculas bioativas podendo ser uma fonte em potencial de novas moléculas antiparasitárias, sendo assim, a busca por compostos naturais bioativos em basidiomicetos pode ser uma abordagem interessante para descoberta de fármacos alternativos. O objetivo desse estudo foi investigar a presença, purificar e identificar substâncias com atividade anti-Trichomonas no meio de cultivo de micélios de basidiomicetos. Para a obtenção dos compostos bioativos, os basidiomicetos Amauroderma camerarium, família Ganodermataceae, e Gymnopilus pampeanus, família Cortinariceae, foram cultivados em meio caldo extrato de malte (CEM) com variação da fonte de nitrogênio e tempo de cultivo. O extrato bruto com maior atividade anti-T. vaginalis para A. camerarium (CEM + KNO3 28 dias de cultivo) foi escolhido para ensaios de purificação e caracterização, que indicaram que o composto bioativo é de natureza protéica. Uma proteína sem alta identidade com outra proteína foi purificada e foi denominada amaurocina. Amaurocina apresenta atividade contra isolados clínicos de T. vaginalis – TV LACH1 e TV LACM2 – (CIM= 62,4 μg/mL), sendo um isolado resistente ao metronidazol (TV LACM2), e contra o isolado ATCC 30236 (CIM= 31,2 μg/mL). A Amaurocina também apresenta atividade próinflamatória por induzir aumento da liberação de óxido nítrico de neutrófilos, o qual é um importamente mecanismo de defesa do hospedeiro durante a infecção parasitária. Para G. pampeanus, os extratos mais ativos foram produzidos em meio CEM + KNO3 por 28 dias de cultivo e CEM + KNO3 por 21 dias de cultivo, porém a purificação desses extratos é necessária. Esses resultados estão em concordância com o alto potencial de produção de biocompostos dos basidiomicetos, o qual tem sido reportado na literatura por décadas. / The flagellated protozoan, Trichomonas vaginalis, causes trichomonosis, the most common non-viral sexual transmitted disease (STD) in the world. Metronidazole and tinidazole are two drugs of choice recommended by Food and Drug Administration (FDA, USA) for treatment of human trichomonosis. However, clinical or laboratory-generated drug-resistant isolates of T. vaginalis and common adverse reactions have been reported. It is known that fungi produce bioactive molecules and they can be a potential source of new antiparasitic molecules. Thus, in order to improve the current chemotherapy of T. vaginalis infection, the search for natural bioactive compounds in basidiomycetes can be an interesting approach to discover alternative drugs. The aim of this study was to investigate the presence, to purify and to identify substances in cultivation of basidiomycetes’ mycelia, which have anti-Trichomonas activity. Mycelia of basidiomycete Amauroderma camerarium, family Ganodermataceae, and Gymnopilus pampeanus, family Cortinariceae, were transferred to flasks containing malt extract broth (MEB) medium with variation of the nitrogen source and time of growth. The preparation with higher anti-T. vaginalis activity (MEB + KNO3 28 days of growth) for A. camerarium basidiomycete was chosen for purification and characterization assays, that indicated that the bioactive compound is a protein-like molecule. A protein without high homology with any other protein was found and was named amaurocine. Amaurocine presents activity against clinical isolates of T. vaginalis – TV LACH1 and TV LACM2 – (MIC=62.4 μg/mL), one of these a metronidazole-resistant isolate, and it presents activity against the T. vaginalis ATCC 30236 isolate (MIC=31.2 μg/mL). Amaurocine also presents proinflamatory activity. Since it was able to enhance nitric oxide release from neutrophils, which is an important host defense mechanism during the parasitic infection. For G. pampeanus, the most active extracts were produced in MEB + KNO3 28 days of growth and MEB + KNO3 21 days of growth, but further steps of purification are necessary. These results are in agreement with the high potential of biocompounds production of basidiomycetes that has been reported in the literature for decades.

A doença de Chagas, parasitose endêmica causada pelo Trypanosoma cruzi, se apresenta como grande causa de morbimortalidade, afetando cerca de 18 milhões de pessoas no continente americano e causando 21.000 mortes, a cada ano. Atualmente, estima-se que 100 milhões de pessoas estejam sob risco de contaminação nos 18 países da área endêmica da doença. A quimioterapia contra a tripanossomíase americana é constituída por apenas dois fármacos, nifurtimox e benznidazol, que não apresentam ação adequada na fase crônica da doença. Por estas razões, é premente a necessidade de novas e mais eficazes alternativas terapêuticas. A cruzaína, mais abundante cisteíno-protease do parasita, é enzima essencial em todos os estágios de modificação celular do parasita e está, também, presente no processo de invasão e modificação do sistema imune do hospedeiro. Além disso, apresenta diferenças em relação a enzimas dessa categoria no hospedeiro. Trata-se, pois, de excelente alvo bioquímico para a pesquisa de novos agentes contra o T. cruzi. Face ao exposto e tendo-se em vista a especificidade da cruzaína, considera-se de grande interesse a compreensão do mecanismo de interação de compostos com essa enzima com o intuito de planejar derivados com atividade antichagásica potencial. O presente trabalho teve o objetivo de elucidar a afinidade de diferentes classes de compostos pela enzima, na busca racional de novos tripanomicidas. Assim, pró-fármacos peptídicos recíprocos, derivados de primaquina(PQ) e de nitrofural(NF), anteriormente sintetizados, e pró-fármacos peptídicos duplos do hidroximetilnitrofural (NFOH) planejados, e cuja síntese foi estudada, foram submetidos a estudos de modelagem molecular e de docking. Os peptídios foram escolhidos com base na cisão específica pelacruzaína. Avaliou-se a interação com a enzima e elucidar o mecanismo de liberação dos fármacos e composto ativo a partir desses derivados. Os estudos indicaram que o melhor transportador a ser utilizado no planejamento de novos pró-fármacos é o dipeptídio LysArg, corroborando o que havia sido observado nos ensaios em cultura de células infectadas . com o T. cruzi. Ante a possibilidade de um segundo mecanismo de ação pela interação entre a Cys25 da cruzaína e o grupo semicarbazona, presente no NF e no NFOH, planejaram-se e sintetizaram-se análogos destes compostos, utilizando bioisosterismo clássico entre enxofre e oxigênio. Estudos de modelagem molecular e docking indicaram a participação também deste mecanismo de ação na atividade dos referidos derivados nitro-heterocíclicos. Todos os bioisósteros apresentaram ação inibitória na cruzaína IC50 entre 2,71 µM e 22,83 µM - evidenciando, também, este mecanismo de ação. Com o objetivo de se estudar a influência do grupamento (tio)semicarbazona presente nos derivados bioisostéricos sintetizados, realizaram-se estudos de QSAR 20 e 3D em série de compostos descritos na literatura, obtendo-se modelos robustos e com grau elevado de predição, comprovando a ação na cruzaína. Tais grupos podem ser utilizados no planejamento de novos tripanomicidas. Complementando a busca racional de novos antichagásicos potenciais, efetuou-se triagem virtual de novos ligantes utilizando o planejamento racional com base na estrutura do receptor (SBDD) a partir de modelo farmacofórico específico obtido para a cruzaína. Esse estudo proporcionou a sugestão de vinte moléculas a partir do banco de dados CHEMDIV, com possível ação inibitória da enzima. Com base nos resultados obtidos, conclui-se que os estudos realizados com pró-fármacos e análogos por meio de processos racionais de planejamento forneceram dados importantes para a pesquisa de candidatos a novos fármacos antichagásicos. / Chagas \' disease, a parasitosis caused by Trypanosoma cruzi, is an endemic disease that affects most part of Latin America. About 18 million people are infected by the parasite and around 21 thousand deaths are related to Chagas\' disease each year. Nowadays, 100 millions of people are estimated to be under the risk of infection in the 18 countries of the endemic areas. The therapeutic armamentarium available against Chagas\' disease is comprehended by only two drugs, nifurtmox and benznidazol, which are not effective in the chronic phase of the disease. Cruza in, the most abundant cysteine protease of the parasite, is essential in all stages of the cellular development of the parasite and responsible for invasion and modification of the immunologic system of the human host. Besides, it has differences relatively to those enzymes in the humans. So, it is an excellent biochemical target for searching new agents against T. cruzi. This said and in the view of cruzain specificity, understanding the mechanism of interaction of compounds with this enzyme is considered very interesting in order to design derivatives with potential anti-Chagas\'disease. The present work had the objective of elucidating the affinity of different classes \'of compounds to the enzyme, in the rational search for new trypanomicides. So, mutual peptide prodrugs, derived from primaquine (PQ) and nitrofurazone (NF), previously synthesized, and designed double peptide prodrugs of hydroxymethylnitrofurazone (NFOH), which synthesis has been studied, were submitted to molecular modeling and docking studies. The peptides were chosen based on specific cleavage by cruzain. The interaction with the enzyme and the drug as well as the active compound release mechanism from those derivatives were evaluated. The studies have indicated the dipeptide LysArg as the best carrier to be used in the design of new prodrugs, corroborating what had been earlier observed in the tests of T. cruzi infected cell culture. Based on the possibility of a second mechanism of action through the interaction between cruzain Cys 25 and the semicarbazone group, found in NF and NFOH, analogs of this c/ass of compounds were designed, and synthesized, using classic bioisosterism between sultur and oxygen. Molecular modeling and docking studies have indicated also the participation of this mechanism in the activity of the nitro-heterocyclic compounds referred. All bioisosters showed to inhibit cruzain IC50 between 2.71 µM and 22.83 µM -- also evidencing this mechanism of action. With the purpose of studying the influence of (thio)semicarbazone group present in the synthesized bioisoster derivatives, 20 and 3D QSAR have been developed for a series of compounds reported in the literature, leading to robust and high- preditive leveI models, confirming their action in cruzaine. Those groups might be used in the design of new trypanomicides. Complementing the rational search for new antichagasic compounds, a virtual screening of new ligands, using the structure-based drug design (SBDD) was developed based on a specific pharmacophore model obtained for cruzain. This study have provided the suggestion of twenty compounds from the CHEMDIV data bank with possible inhibitory activity in cruzain. Based on the results obtained, the conclusion is that the studies herein developed with prodrugs and analogs through rational drug design lead to important data towards the research of new candidates as new antichagasic drugs.

O protozoário flagelado, Trichomonas vaginalis, causa a tricomonose, a doença sexualmente transmissível (DST) não viral mais comum no mundo. Metronidazol e tinidazol são os dois fármacos de escolha recomendados pelo Food and Drug Administration (FDA, USA) para o tratamento da tricomonose humana. Entretanto, isolados de T. vaginalis clínicos ou laboratoriais resistentes e reações adversas comuns têm sido reportados. Sabe-se que fungos produzem moléculas bioativas podendo ser uma fonte em potencial de novas moléculas antiparasitárias, sendo assim, a busca por compostos naturais bioativos em basidiomicetos pode ser uma abordagem interessante para descoberta de fármacos alternativos. O objetivo desse estudo foi investigar a presença, purificar e identificar substâncias com atividade anti-Trichomonas no meio de cultivo de micélios de basidiomicetos. Para a obtenção dos compostos bioativos, os basidiomicetos Amauroderma camerarium, família Ganodermataceae, e Gymnopilus pampeanus, família Cortinariceae, foram cultivados em meio caldo extrato de malte (CEM) com variação da fonte de nitrogênio e tempo de cultivo. O extrato bruto com maior atividade anti-T. vaginalis para A. camerarium (CEM + KNO3 28 dias de cultivo) foi escolhido para ensaios de purificação e caracterização, que indicaram que o composto bioativo é de natureza protéica. Uma proteína sem alta identidade com outra proteína foi purificada e foi denominada amaurocina. Amaurocina apresenta atividade contra isolados clínicos de T. vaginalis – TV LACH1 e TV LACM2 – (CIM= 62,4 μg/mL), sendo um isolado resistente ao metronidazol (TV LACM2), e contra o isolado ATCC 30236 (CIM= 31,2 μg/mL). A Amaurocina também apresenta atividade próinflamatória por induzir aumento da liberação de óxido nítrico de neutrófilos, o qual é um importamente mecanismo de defesa do hospedeiro durante a infecção parasitária. Para G. pampeanus, os extratos mais ativos foram produzidos em meio CEM + KNO3 por 28 dias de cultivo e CEM + KNO3 por 21 dias de cultivo, porém a purificação desses extratos é necessária. Esses resultados estão em concordância com o alto potencial de produção de biocompostos dos basidiomicetos, o qual tem sido reportado na literatura por décadas. / The flagellated protozoan, Trichomonas vaginalis, causes trichomonosis, the most common non-viral sexual transmitted disease (STD) in the world. Metronidazole and tinidazole are two drugs of choice recommended by Food and Drug Administration (FDA, USA) for treatment of human trichomonosis. However, clinical or laboratory-generated drug-resistant isolates of T. vaginalis and common adverse reactions have been reported. It is known that fungi produce bioactive molecules and they can be a potential source of new antiparasitic molecules. Thus, in order to improve the current chemotherapy of T. vaginalis infection, the search for natural bioactive compounds in basidiomycetes can be an interesting approach to discover alternative drugs. The aim of this study was to investigate the presence, to purify and to identify substances in cultivation of basidiomycetes’ mycelia, which have anti-Trichomonas activity. Mycelia of basidiomycete Amauroderma camerarium, family Ganodermataceae, and Gymnopilus pampeanus, family Cortinariceae, were transferred to flasks containing malt extract broth (MEB) medium with variation of the nitrogen source and time of growth. The preparation with higher anti-T. vaginalis activity (MEB + KNO3 28 days of growth) for A. camerarium basidiomycete was chosen for purification and characterization assays, that indicated that the bioactive compound is a protein-like molecule. A protein without high homology with any other protein was found and was named amaurocine. Amaurocine presents activity against clinical isolates of T. vaginalis – TV LACH1 and TV LACM2 – (MIC=62.4 μg/mL), one of these a metronidazole-resistant isolate, and it presents activity against the T. vaginalis ATCC 30236 isolate (MIC=31.2 μg/mL). Amaurocine also presents proinflamatory activity. Since it was able to enhance nitric oxide release from neutrophils, which is an important host defense mechanism during the parasitic infection. For G. pampeanus, the most active extracts were produced in MEB + KNO3 28 days of growth and MEB + KNO3 21 days of growth, but further steps of purification are necessary. These results are in agreement with the high potential of biocompounds production of basidiomycetes that has been reported in the literature for decades.

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A quimioterapia convencional baseia-se em múltiplas injeções parenterais com antimoniais pentavalentes que são consideravelmente tóxicos e propensos a induzir resistência. Medicamentos de segunda linha, como Anfotericina B e suas formulações lipídicas, ou são demasiadamente caros para uso rotineiro nos países em desenvolvimento ou são tóxicos. Considerando que a busca de drogas mais eficazes contra Leishmania tornou-se extremamente necessária, este trabalho teve como objetivo avaliar o efeito in vitro de novos derivados da purina. Essas substâncias foram testadas contra promastigotas de L. amazonensis e L. chagasi e amastigotas de L. amazonensis, através do método colorimétrico do MTT e contagem dos parasitos. Foi também analisada a produção de NO pelas formas promastigotas e amastigotas de Leishmania e pelos macrófagos, medido espectrofotometricamente. Dentre os 13 derivados de purina testados, quatro, 6-(3-cloropropiltio)-9H-purina, ácido 2-(9H-purin-6-tioil)acético, sal de flúor de 7,8-diidro-(1,4)tiazepino(3,2,4-hi)purina e 6-(3'-(tioetilamina)propiltio)purina, inibiram o crescimento das formas promastigotas de L. amazonensis (IC50 de 50, 39, 28 e 50 μM, respectivamente). Somente o sal de 8,9-diidro-7H-(1,4) tiazepino(3,2,4-hi) purinil flúor inibiu o crescimento das formas promastigotas de L. chagasi (IC50 de 28 μM). O ácido 2-(9H-purin-6-tioil)acético apresentou a melhor atividade anti-amastigota e reduziu cerca de 50% do número de amastigotas intracelulares após 48h de tratamento. Os derivados purínicos, em geral, reduziram a produção de NO em promastigotas de Leishmania e em macrófagos, mas no processo de interação parasito/célula hospedeira não houveram alterações significativas na produção de NO. Também foi testada a citotoxicidade contra células mamíferas para todos os compostos que apresentaram efeito leishmanicida, mas nenhuma substância apresentou efeito significativo. Os resultados contribuiram para o avanço na investigação de novas drogas anti-leishmania, e sugerem que ácido 2-(9H-purin-6-tioil)acético tem um potencial leishmanicida promissor. / Leishmaniasis are a group of diseases caused by different species of the protozoan parasite Leishmania, which affect more than 12 million people worldwide. The clinical manifestations may range from single cutaneous lesions to fatal visceral leishmaniasis. Conventional chemotherapy relies on multiple parenteral injections with pentavalent antimonials that are considerably toxic and prone to induce resistance. Second-line drugs, such as amphotericin B and its lipid formulations, are either too toxic or expensive for routine use in developing countries. Considering it, the search for more effective drugs against Leishmania became extremely necessary. In order to find new drugs against leishmaniasis this work checked the in vitro effect of purine derivatives. These substances were assayed against L. amazonensis and L. chagasi promastigotes and amastigotes of L. amazonensis through the colorimetric method of MTT and counting of parasites. It also examined the production of NO the promastigote forms and amastigote forms of Leishmania sp and the macrophages measured spectrophotometrically. Among the 13 derivatives of purine assayed four substances: 6-(3-chloropropylthio)-9H-purine, 2-(9H-purin-6-ylthio)acetic acid, salt of fluor of 7,8-dihydro-[1,4]thiazepino[3,2,4-hi]purine and 6-(3'-(thioethylamine) propylthio)purine, inhibited the growth of promastigote forms of L. amazonensis (IC50 values of 50, 39, 28 and 50 μM, respectively). Only the salt of fluor of the 8,9-dihydro-7H-[1,4]thiazepino[3,2,4-hi]purine, inhibited the growth of promastigotes of L. chagasi (IC50 value of 28μM). The 2-(9H-purin-6-ylthio)acetic acid presented the best anti-amastigotes activity and this substance reduced approximately 50% of the number of intracellular amastigotes after 48h of treatment. In general the derivatives of purine reduced the production of NO in promastigotes of Leishmania and macrophages but in the process of interaction parasite/host cell there were no significant changes in the production of NO. We also had tested citotoxicity against mammalian cells for all the compounds that present leishmanicidal effect but none of the substances were found to have significant toxicity effect. The results contributed for advance in the research for new anti-leishmania drugs and suggest that 2-(9H-purin-6-ylthio)acetic acid has promising antileishmanial potencial.

Neste trabalho descrevemos o isolamento e a caracterização bioquímica, estrutural e funcional de uma L-aminoácido oxidase isolada do veneno da serpente Bothrops jararacussu, proteína esta denominada BjussuLAAO. O isolamento foi realizado pela combinação de três etapas cromatográficas, utilizando filtração molecular em Sephadex G-75, seguida de cromatografia de afinidade em Benzamidina-Sepharose, seguida pela última etapa cromatográfica, realizada com interação hidrofóbica em Fenil-Sepharose. A BjussuLAAO é uma proteína com massa molecular de 61 kDa e pI 5,8, e apresentou alta similaridade sequencial com as LAAOs já isoladas dos venenos de serpentes. A enzima BjussuLAAO induziu edema apenas na maior dose (100 ?g/animal), não apresentou atividade miotóxica, também não apresentou atividade hemorrágica, mesmo nas doses mais elevadas. A BjussuLAAO, demonstrou ter efeito coagulante e ação fibrinogenolítica e, mesmo utilizando inibidores de metaloproteases e serino proteases, continuou apresentando tal atividade, demonstrando assim não existir contaminantes destas classes de proteínas na amostra. As atividades mais interessantes do ponto de vista farmacológico, onde podemos visualizar a BjussuLAAO como um futuro fármaco, foram as atividades antitumoral, bactericida e antiparasitária. Esta apresentou, em baixas concentrações, citotoxicidade sobre células tumorais, ação leishmanicida e tripanocida, demonstrando assim ser uma substância candidata a fármaco multifuncional. / In this research we described the isolation and biochemical, structural and functional characterization of an L-amino acid oxidase from Bothrops jararacussu venom, named BjussuLAAO. The purification was carried out through three chromatography steps, using a molecular filtration on Sephadex G-75, followed by an affinity chromatography on Benzamidine-Sepharose, and finally a hydrophobic chromatography on Phenyl-Sepharose. BjussuLAAO is a protein with a molecular mass of 61 kDa and pI 5.8. This protein showed high sequencial similarity with other LAAOs from snake venoms. BjussuLAAO induced edema only in the highest dose (100 ?g/animal), did not show any myotoxic or hemorrhagic activity. BjussuLAAO, showed clotting and fibrinogenolitic activity, even in the presence of metalloproteases and serino-proteases inhibitors. The more interesting pharmacological activities, where from we can look a future application, were the anti-tumoral, bactericide, leishmanicidal and tripanocidal actions. The enzyme displayed a bactericide effect too, showing to be a multifunctional drug.

Orientador: Rodnei Bertazzoli / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia mecanica / Made available in DSpace on 2018-08-04T08:59:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pellegrino_RosangelaRodriguesLeme_D.pdf: 3578101 bytes, checksum: e26cca52f1def178a516a716cc961293 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: o I vermectin é um agente antiparasitário muito utilizado no combate a endo e ecto parasitas em animais e em humanos. O Ivermectin é encontrado comercialmente em soluções 1% em glicerol, conhecidas como Ivomec@, Eqva1an@, Cardomec@, Mectizan@, Zimectrin@, Heartgard@, Eqvalan@. Ivermectin é uma mistura de dois homólogos contendo mais de 80% Avermectin B1a [C4sH74014], e menos 20% Avermectin Blb[C47Hn014], com massa molecular de 871,10 e 861,10 g moI, respectivamente. Como estes compostos apresentam alto peso molecular, o tratamento biológico não é eficiente para sua degradação. Este efluente pode ser tratado por incineração ou hidrólise alcalina em alta temperatura. Neste estudo utilizou-se uma amostra real de um efluente proveniente de uma industria veterinária produtora do IVOMEC@, com a finalidade de desenvolver um processo alternativo para o tratamento deste efluente. Para isso foi necessário desenvolver e otimizar um reator fotoeletroquímico em escala piloto para o estudo da degradação do I vermectin contido neste efluente. A degradação do Ivermectin foi conduzida através da eletrólise a corrente constante de um volume de 20 litros do efluente contendo aproximadamente 4 rng.L-1 de Ivermectin, por um tempo / Abstract: Ivermectin is widely used as an antiparasitic agent against endo and ectoparasites of animaIs and humans; it has a broad spectrum of activity at low dosage levels. Commercial products (Ivomec@, Eqvalan@, Cardomec@~ Mectizan~ usually contain 1% of Ivermectin in glycerol formulation. Ivermectin is a rnixture oftwo homologs containing more than 80% Avermectin B1a [C48H74014]~ and less than 20% Avermectin B1b[C47H72014], with 871.10 and 861.10 molecular weights respectively. As the compounds present high molecular weight, the conventional biological treatment is not efficient for their degradation. The current methods of Ivermectin degradation are incineration or alkaline hidrolysis at high temperatures. In this study, industrial samples of wastewater ftom a veterinary industry, containing Ivermectin, ftom the region ofCampinas were collected. The main goal ofthe present study w~ to develop and to optimize a photoelectrochemical reactor , in a pilot scale, for the treatment oj eftluent containing Ivermectin. The photoelectrochemical treatment was carried out in a flow cefi reactor, and commercia DSA@ type electrodes with nominal composition of 70Ti02/ 30Ru02~ were used as anodes, and ~ Ti screen as cathode / Doutorado / Engenharia de Materiais e Processos de Fabricação / Doutor em Engenharia Mecânica

Made available in DSpace on 2016-01-26T18:55:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 LIVIA MAGOSSO RAMIRES.pdf: 444845 bytes, checksum: cec97741510efe0b6f3650e654cc5843 (MD5) Previous issue date: 2014-02-28 / The geohelminthoses are important diseases that infect human beings. These diseases are caused by parasites that harbor the man as definitive host. In addition, dogs and cat may be responsible by environmental contamination by agents with zoonotic potential, particularly Toxocara spp. and Ancylostoma spp. These parasites may cause the visceral/ocular and cutaneous larva migrans syndromes, respectively. The drastic increase of people who raise dogs and cats with no parasitic control and the free access of these animals to sidewalks/recreative public areas are important factors for soil contamination by larva migrans agents. The aim of the study was to evaluate the impact of deworming in dogs on the environmental contamination of sidewalks/streets and public parks caused by larva migrans (LM) agents (Toxocara spp. and/or Ancylostoma spp.). The study was carried out in a disadvantaged social area of Presidente Prudente, São Paulo, Brazil. A survey was applied to 138 dog owners, who received a plastic bag (Cata-Caca MSD) to collect a stool sample of their animals (n=200). Further, stool samples of dogs observed in sidewalks/streets (440) and two parks (n=63) were also collected. The samples were analyzed by the Gordon and Whitlock technique, to evaluate the egg count of LM agents. The positive dogs (at least one egg per gram (epg)= 100) were submitted to an anthelminthic treatment (Fembendazole, Panacur® 10%). The egg count was verified in 32.5% (65/200) of the dogs, in 45.25% (62/137) of the stool samples found on the sidewalks/streets and in 3.7% (14/37) of the samples collected in the parks. Following 30 days after deworming, the effectiveness of treatment for Ancylostoma spp. and for Toxocara spp. was 95.8% and 96.6%, respectively. In addition, it was observed a highly significantly reduction in the contamination of environment by LM agents (sidewalks/streets and parks) after treatment of the dogs (p<0.0001). This findings were also observed in the sidewalks/streets, in which there was a significant reduction (p<0.0128) in the count mean of Ancylostoma spp. epg. However, the same phenomenon was not observed taking into account the contamination of the parks. The high infection of dogs with Ancylostoma spp. and/or Toxocara spp. observed in this study indicates that LM agents represent a risk for both the health of dogs and their owners. The deworming of domiciliated dogs should be considered an important and significant impact for the reduction of environmental contamination of public places by LM agents. / As geohelmintoses são importantes doenças que acometem seres humanos. Além de serem ocasionadas por parasitos que têm o homem como hospedeiro definitivo, cães e gatos podem ser responsáveis pela contaminação ambiental por agentes com potencial zoonótico. Entres esses agentes, destacam-se Toxocara spp. e Ancylostoma spp., que podem ocasionar as síndromes de Larva migrans visceral/ocular e cutânea, respectivamente. O número crescente de pessoas que criam cães e gatos sem controle parasitário e o acesso desses animais às vias e áreas de lazer públicas representam um importante fator para a contaminação de solos por agentes de Larva migrans. O objetivo do estudo foi avaliar o impacto da desverminação de cães sobre a contaminação de vias e parques públicos ocasionada por agentes de larva migrans (LM), Toxocara spp. e/ou Ancylostoma spp. O estudo foi realizado em uma área de baixa renda de Presidente Prudente, São Paulo, com entrevista de 138 moradores, que receberam um coletor de fezes (Cata-caca MSD) para armazenamento das amostras de fezes de seus cães (n=200). Além disso, foram coletadas fezes de cães depositadas em vias públicas (n=440) e em dois parques (n=63). As amostras foram analisadas pelo método de Gordon e Whitlock, modificado, para avaliação a contagem de ovos (opg) dos agentes de LM. Os cães cujas amostras foram positivas (pelo menos um ovo por grama (opg)= 100) foram submetidos ao tratamento antihelmíntico (Fembendazole, Panacur® 10%). A presença de ovos nas fezes (opg&#8805;100) foi verificada em 32,5% (65/200) das amostras dos cães domiciliados, em 45,25% (62/137) das vias públicas e em 3,7% (14/37) das praças. Após 30 dias do tratamento, a média de eficácia do produto para Ancylostoma spp. e para Toxocara spp. foi de 95,8% e 96,6%, respectivamente. Houve uma redução significativa da contaminação das fezes presentes no meio ambiente (Vias e Praças) após o tratamento (p<0,0001). Esse achado foi observado em vias públicas, onde houve também uma redução significativa (p<0,0128) na média de opg de Ancylostoma spp. Contudo, esse fenômeno não se repetiu nas praças. A alta infecção dos cães por Ancylostoma spp. e /ou Toxocara spp. indica que agentes de LM são um risco para a saúde dos cães, dos seus proprietários e da contaminação ambiental. A desverminação de cães domiciliados mostrou um impacto significativo na contaminação ambiental por agentes de LM em locais públicos.

Made available in DSpace on 2016-07-18T17:53:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 LIVIA MAGOSSO RAMIRES.pdf: 444845 bytes, checksum: cec97741510efe0b6f3650e654cc5843 (MD5) Previous issue date: 2014-02-28 / The geohelminthoses are important diseases that infect human beings. These diseases are caused by parasites that harbor the man as definitive host. In addition, dogs and cat may be responsible by environmental contamination by agents with zoonotic potential, particularly Toxocara spp. and Ancylostoma spp. These parasites may cause the visceral/ocular and cutaneous larva migrans syndromes, respectively. The drastic increase of people who raise dogs and cats with no parasitic control and the free access of these animals to sidewalks/recreative public areas are important factors for soil contamination by larva migrans agents. The aim of the study was to evaluate the impact of deworming in dogs on the environmental contamination of sidewalks/streets and public parks caused by larva migrans (LM) agents (Toxocara spp. and/or Ancylostoma spp.). The study was carried out in a disadvantaged social area of Presidente Prudente, São Paulo, Brazil. A survey was applied to 138 dog owners, who received a plastic bag (Cata-Caca MSD) to collect a stool sample of their animals (n=200). Further, stool samples of dogs observed in sidewalks/streets (440) and two parks (n=63) were also collected. The samples were analyzed by the Gordon and Whitlock technique, to evaluate the egg count of LM agents. The positive dogs (at least one egg per gram (epg)= 100) were submitted to an anthelminthic treatment (Fembendazole, Panacur® 10%). The egg count was verified in 32.5% (65/200) of the dogs, in 45.25% (62/137) of the stool samples found on the sidewalks/streets and in 3.7% (14/37) of the samples collected in the parks. Following 30 days after deworming, the effectiveness of treatment for Ancylostoma spp. and for Toxocara spp. was 95.8% and 96.6%, respectively. In addition, it was observed a highly significantly reduction in the contamination of environment by LM agents (sidewalks/streets and parks) after treatment of the dogs (p<0.0001). This findings were also observed in the sidewalks/streets, in which there was a significant reduction (p<0.0128) in the count mean of Ancylostoma spp. epg. However, the same phenomenon was not observed taking into account the contamination of the parks. The high infection of dogs with Ancylostoma spp. and/or Toxocara spp. observed in this study indicates that LM agents represent a risk for both the health of dogs and their owners. The deworming of domiciliated dogs should be considered an important and significant impact for the reduction of environmental contamination of public places by LM agents. / As geohelmintoses são importantes doenças que acometem seres humanos. Além de serem ocasionadas por parasitos que têm o homem como hospedeiro definitivo, cães e gatos podem ser responsáveis pela contaminação ambiental por agentes com potencial zoonótico. Entres esses agentes, destacam-se Toxocara spp. e Ancylostoma spp., que podem ocasionar as síndromes de Larva migrans visceral/ocular e cutânea, respectivamente. O número crescente de pessoas que criam cães e gatos sem controle parasitário e o acesso desses animais às vias e áreas de lazer públicas representam um importante fator para a contaminação de solos por agentes de Larva migrans. O objetivo do estudo foi avaliar o impacto da desverminação de cães sobre a contaminação de vias e parques públicos ocasionada por agentes de larva migrans (LM), Toxocara spp. e/ou Ancylostoma spp. O estudo foi realizado em uma área de baixa renda de Presidente Prudente, São Paulo, com entrevista de 138 moradores, que receberam um coletor de fezes (Cata-caca MSD) para armazenamento das amostras de fezes de seus cães (n=200). Além disso, foram coletadas fezes de cães depositadas em vias públicas (n=440) e em dois parques (n=63). As amostras foram analisadas pelo método de Gordon e Whitlock, modificado, para avaliação a contagem de ovos (opg) dos agentes de LM. Os cães cujas amostras foram positivas (pelo menos um ovo por grama (opg)= 100) foram submetidos ao tratamento antihelmíntico (Fembendazole, Panacur® 10%). A presença de ovos nas fezes (opg&#8805;100) foi verificada em 32,5% (65/200) das amostras dos cães domiciliados, em 45,25% (62/137) das vias públicas e em 3,7% (14/37) das praças. Após 30 dias do tratamento, a média de eficácia do produto para Ancylostoma spp. e para Toxocara spp. foi de 95,8% e 96,6%, respectivamente. Houve uma redução significativa da contaminação das fezes presentes no meio ambiente (Vias e Praças) após o tratamento (p<0,0001). Esse achado foi observado em vias públicas, onde houve também uma redução significativa (p<0,0128) na média de opg de Ancylostoma spp. Contudo, esse fenômeno não se repetiu nas praças. A alta infecção dos cães por Ancylostoma spp. e /ou Toxocara spp. indica que agentes de LM são um risco para a saúde dos cães, dos seus proprietários e da contaminação ambiental. A desverminação de cães domiciliados mostrou um impacto significativo na contaminação ambiental por agentes de LM em locais públicos.

Peptídeos antimicrobianos são importantes componentes do sistema imune de vertebrados e invertebrados. Neste trabalho purificamos e caracterizamos quatro moléculas presentes na hemolinfa da aranha Acanthoscurria gomesiana: 1) theraphosinina, peptídeo de 4052,5 Da purificado do plasma, apresenta atividade anti-Micrococcus luteus e não apresenta similaridade com outros peptídeos. A partir dos hemócitos foram purificados: 2) mygalomorphina, um peptídeo de 415,9 Da com atividade anti-Escherichia coli. Sua atividade está relacionada à produção de H2O2 pois é inibida por catalase; 3) gomesina, um peptídeo de 2270,4 Da que apresenta alta similaridade com taquiplesinas e protegrinas. Apresenta amplo espectro de atividade contra bactérias, leveduras, fungos e Leishmania; 4) acanthoscurrina, um peptídeo rico em glicina, que apresenta duas isoformas com 10132,4 e 10249,1Da. Este peptídeo tem atividade contra E. coli e Candida albicans e apresenta grande similaridade com proteinas antifúngicas de insetos e também com proteínas relacionadas com a defesa em plantas. / Antimicrobial peptides are important components of the vertebrates and invertebrates immune system. In this work we purified and characterized four molecules from Acanthoscurria gomesiana spider hemolimph: 1) theraphosinin, a 4,052.5 Da peptide purified from plasma with anti-Micrococcus luteus activity. It does not show similarity with any other invertebrate immune peptides. From the hemocytes three peptides have been purified: 2) mygalomorphin, a peptide with 415.9 Da, which shows anti-Escherichia coli activity. This activity is inhibited by catalase, therefore it may be, related to the H2O2 production; 3) gomesin, a peptide with 2,270.4 Da, that shows high similarity with tachyplesins and protegrins. It have large activity spectrum against bacteria, yeast, fungi and Leishmania; 4) acanthoscurrin, a glycine-rich peptide that shows two isoforms of 10,132.4 and 10,249.1 Da. This peptide has activity against E. coli and Candida albicans and shows high similarity with antifungal proteins of insects and plants defense proteins.