Submitted by Alisson Mota (alisson.davidbeckam@gmail.com) on 2015-07-09T19:55:44Z No. of bitstreams: 1 Tese - Diego de Moura Rabelo.pdf: 4209565 bytes, checksum: c31aba4b7094e32cdf712295f847ad9b (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2015-07-09T20:00:48Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese - Diego de Moura Rabelo.pdf: 4209565 bytes, checksum: c31aba4b7094e32cdf712295f847ad9b (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2015-07-09T20:06:52Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese - Diego de Moura Rabelo.pdf: 4209565 bytes, checksum: c31aba4b7094e32cdf712295f847ad9b (MD5) / Made available in DSpace on 2015-07-09T20:06:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese - Diego de Moura Rabelo.pdf: 4209565 bytes, checksum: c31aba4b7094e32cdf712295f847ad9b (MD5) Previous issue date: 2014-02-28 / FAPEAM - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / The rapid growth of resistance of bacteria and malaria parasites against currently available drugs creates an urgent need for new therapeutic approaches. The Annonaceae family, because its history in ethnomedicine and chemical and pharmacological potential, evidenced in the literature, represents a promising natural source of biological active molecules to combat these diseases. In the present study we evaluated, preliminarily, antiplasmodial activities of hydroalcoholic extracts of the leaves of Unonopis guatterioides, Anaxagorea brevipes, Duguetia riparia, Tetrameranthus duckei, Annona exsucca, Xylopia benthamii and Guatteria citriodora species. Among the evaluated species, only Guatteria citriodora showed potential antiplasmodial activity with IC50 equal to 1.0685 and p-value of 0.540. The evaluation of antiplasmodial activity of hexane fractions (FHF and FHG), alkaloidic (FAF and FAG) and neutral (FNF and FNG) derived from the partitioning of the crude hydroalcoholic extracts of leaves (EHBF) and branches (EHBG) of this species, directed the phytochemical studies for promising fractions, so the alkaloid fractions were selected. In addition, the antibacterial activities of EHBF and EHBG, FHF and FHG, FAF and FAG, FNF and FNF and essential oils of the leaves were also evaluated. The evaluation of antiplasmodial activity were performed against Plasmodium falciparum by flow cytometry, and for the antimicrobial activity the technique of agar disk diffusion were used against several gram positive and gram negative pathogenic bacteria. The fractions FHG, FAF and FAG proved to be the most active for antiplasmodial activity with IC50 of 1.035 μg.mL-1 (p-value 0.57), 1.0685 μg.mL-1 (p-value 0.54) e 0.332 μg.mL-1 (p-value 0.26), respectively. Bacillus subtilis proved to be very sensitive front FAF and FAG showing zone of inhibition of 22 mm and 21mm respectively, both fractions with minimum inhibitory concentration (MIC) equal to 62.5 μg.mL-1. Enterococcus faecalis showed moderately sensitive to FAF with xix inhibition zone of 17 mm and MIC equal to 125 μg.mL-1. A significant antibacterial activity was observed for the essential oils from the leaves, against Gram-negative bacteria Escherichia coli and Salmonella typhimurium EPEC which proved moderately sensitive to essential oils since they showed inhibition halos between the average of 11 and 13 mm, respectively, both with CIM equal to 125 μg.mL-1. The alkaloid fractions of leaves and twigs of Guatteria citriodora species selected by phytochemical study were analyzed by ESI-IT-MS and their chromatographic profile revealed the presence of several ion pair mass, which were consistent with the presence of protonated ions of aporphine alkaloids. From the chromatographic fractionation of these fractions seven alkaloids were isoleted, and they were identified by nuclear magnetic resonance of 1H and 13C (1D and 2D), such as the alkaloids: liriodenine, lyisicamine, O-methylmoschatoline and 3-methoxyoxoputerine (oxoaporphine), 3-methoxyguadiscidine (aporphine), palmatine (protoberberine) and guattescidine (7-hydroxy-7-methylaporphine). With the exception of liriodenine and O-methylmoschatoline, isolated from the bark of G. citriodora by Rabelo (2008), other structures are reported for the first time in the species. The antiplasmodial activities in vitro of FAF and FAG fractions are promising and may be associated with their alkaloidal constituents, which encourages deeper studies including in vivo investigations to establish its true efficacy and toxicity, providing data to obtaining new antimalarial drugs from vegetable source. / O rápido crescimento da resistência de bactérias e parasitas da malária contra as drogas atualmente disponíveis gera uma necessidade urgente de novas abordagens terapêuticas. A família Annonaceae, pela sua história na etnomedicina e potencial químico e farmacológico, evidenciado na literatura, representa uma fonte natural promissora de moléculas biologicamente ativas para combate a estes patôgenos. No presente trabalho, foram avaliadas, preliminarmente, as atividades antiplasmódicas dos extratos hidroalcoólicos das folhas das espécies Unonopis guatterioides, Anaxagorea brevipes, Duguetia riparia, Tetrameranthus duckei, Annona exsucca, Xylopia benthamii e Guatteria citriodora. Das espécies avaliadas somente a Guatteria citriodora evidenciou potencial atividade antiplasmódica com CI50 igual a 1,0685 e p-valor de 0,540. A avaliação de atividade antiplasmódica das frações hexânicas (FHF e FHG), alcaloídicas (FAF e FAG) e neutras (FNF e FNG), oriundas do particionamento dos extratos hidroalcoólicos brutos das folhas (EHBF) e galhos (EHBG) desta espécie, direcionou o estudo fitoquímico para as frações mais promissoras, sendo selecionadas as frações alcaloídicas. Adicionalmente, foram avaliadas as atividades antibacterianas de EHBF e EHBG, FHF e FHG, FAF e FAG, FNF e FNG e dos óleos essenciais de suas folhas. A avaliação da atividade antiplasmódica foram realizadas frente ao Plasmodium falciparum por citometria de fluxo, e para avaliação da atividade antimicrobiana utilizou-se a técnica de difusão em ágar contra diversas bactérias Gram positivas e Gram negativas. As frações FHG, FAF e FAG mostraram-se as mais ativas para atividade antiplasmódica com CI50 de 1,035 μg.mL-1 (p-valor 0,57), 1,0685 μg.mL-1 (p-valor 0,54) e 0,332 μg.mL-1 (p-valor 0,26), respectivamente. Na avaliação antibacteria Bacillus subtilis apresentou-se muito sensível frente a FAF e FAG com halos de inibição de 22 mm e 21 mm, respectivamente, sendo ambos com concentração inibitória mínima (CIM) igual a xxi 62,5 μg.mL-1. Enterococcus faecalis mostrou-se moderadamente sensível a FAF com halo de inibição de 17 mm e CIM igual a 125 μg.mL-1. Foi observada atividade antibacteriana ainda para os óleos essenciais das folhas, com CIM igual a 125 μg.mL-1, contra as bactérias Gram negativas Escherichia coli EPEC e Salmonella typhimurium que se apresentaram moderadamente sensíveis por evidenciarem halos de inibição em média de 11 e 13 mm, respectivamente. As frações alcaloídicas das folhas e galhos finos da espécie Guatteria citriodora, selecionadas para estudo fitoquímico, foram analisadas por ESI-IT-MS e o seu perfil cromatográfico evidenciou a presença de vários íons de massa par, compatíveis com a presença de íons protonados dos alcaloides aporfínicos. O fracionamento cromatográfico destas frações levou ao isolamento de 7 alcaloides, identificados por RMN de 1H e 13C (1D e 2D), como os alcaloides, liriodenina, lisicamina, O-metilmoschatolina e 3-metoxioxoputerina (oxoaporfínicos), 3-metoxiguadiscidina (aporfínico), palmatina (protoberberinico) e guattescidina (7-hidroxi-7-metilaporfíninicos). Com exceção da liriodenina, lisicamina e O-metilmoschatolina, isoladas anteriormente da casca do caule de G. citriodora por Rabelo (2008), as demais estruturas são relatadas pela primeira vez para esta espécie. As atividades antiplasmódicas das frações FAF e FAG in vitro são promissoras e podem ser associadas aos seus constituintes alcaloídicos encorajando o aprofundamento dos estudos com investigações in vivo, para estabelecer sua verdadeira eficácia e toxicidade, visando fornecer ubsídios para a obtenção de novos fármacos antimaláricos de origem vegetal.

Submitted by Karem Dantas (karem.c.dantas@gmail.com) on 2018-10-08T13:14:37Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação - Karen Maciel PPGQ.pdf: 3765862 bytes, checksum: fbbb4a3ff00a9023a5d2df07e3afbb67 (MD5) / Approved for entry into archive by Marcos Roberto Gomes (mrobertosg@gmail.com) on 2018-10-08T14:49:20Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação - Karen Maciel PPGQ.pdf: 3765862 bytes, checksum: fbbb4a3ff00a9023a5d2df07e3afbb67 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2018-10-09T17:19:39Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação - Karen Maciel PPGQ.pdf: 3765862 bytes, checksum: fbbb4a3ff00a9023a5d2df07e3afbb67 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-10-09T17:19:39Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação - Karen Maciel PPGQ.pdf: 3765862 bytes, checksum: fbbb4a3ff00a9023a5d2df07e3afbb67 (MD5) Previous issue date: 2018-04-24 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The amazonian fruit residues are promising sources of chemical and metabolites constituents that are responsible for various biological activities. Many of these substances are able to inhibit the growth of microorganisms that cause infectious diseases. Among these fruits, the piquiá (Caryocar villosum) is a native fruit of the Amazonian Forest, a species belonging to the family Caryocaraceae, much appreciated for its pulpy flesh and excellent quality of its wood. Recent studies describe bioactive substances in ethanolic and hydroalcoholic extracts of bark and seeds that have antioxidant, enzymatic and photoprotective properties. The present work studied the chemical composition of the bioactive extracts of peels and seeds of piquiá. After cleaning, drying and grinding, the peels and pulverized seeds were extracted by maceration and Soxhlet with ethanol and, comparatively, with increasing polarity solvents (hexane, ethyl acetate and methanol). The ethanolic extracts were submitted to the liquid-liquid partition with hexane, dichloromethane, ethyl acetate and methanol. All the extracts and fractions were submitted to tests in Fiocruz to evaluate the antibacterial activity by agar diffusion technique against Gram positive and negative bacteria and for antiplasmodial evaluation by flow cytometry. In biological activity tests, the FASP fraction was moderately active against the bacteria Staphylococcus aureus (12 mm), methicillin resistant Staphylococcus aureus (12 mm) and Shigella flexneri (15 mm), while the FHCP, EMCP, EMSP and EECP samples showed low activity against the bacterium Shigella flexneri with inhibition halos 11 mm, 11 mm, 10 mm and 9 mm, respectively. In the antiplasmodial evaluation only the EACP extract showed significant inhibition of the parasite Plasmodium falciparum, with a percentage of parasite inhibition above 60% in all concentrations tested. The phytochemical study of the bioactive samples was performed by chromatographic techniques and the identification of the substances was performed by spectroscopic and spectroscopic techniques. In the thin layer chromatography (TLC) analyzes of the samples, bands with characteristic coloration of phenolic compounds, flavonoids, saponins and terpenes were observed. The FHCP sample was analyzed by TLC and fractionated by flash column chromatography, one of the fractions was identified as a mixture of the phytosterols β-sitosterol and stigmasterol by the spectrometric analyzes in comparison of the data with the literature. Chromatographic, spectroscopic and spectrometric data of the FASP fraction and the EMCP / EMSP / EACP extracts compared to the literature data allowed to identify the presence of gallic and ellagic acid derivatives and may be the main compounds responsible for the bioactivity of extracts and fractions of the fruit. / Os resíduos de frutos amazônicos são fontes promissoras de constituintes químicos e metabólitos que são responsáveis por diversas atividades biológicas. Muitas dessas substâncias são capazes de inibir o crescimento de microorganismos causadores de doenças infecciosas. Dentre esses frutíferos, o piquiá (Caryocar villosum) é um fruto nativo da Floresta amazônica, uma espécie pertencente à família Caryocaraceae, bastante apreciado por sua polpa carnosa e ótima qualidade de sua madeira. Estudos recentes descrevem substâncias bioativas em extratos etanólicos e hidroalcoólicos de cascas e sementes que possuem atividades antioxidantes, enzimáticas e capacidade fotoprotetora. O presente trabalho estudou a composição química dos extratos bioativos de cascas e sementes de piquiá. Após limpeza, secagem e trituração, as cascas e sementes pulverizadas foram extraídas por maceração e Soxhlet com etanol e, comparativamente, com solventes de polaridade crescente (hexano, acetato de etila e metanol). Os extratos etanólicos foram submetidos à partição líquido-líquido com hexano, diclorometano, acetato de etila e metanol. Todos os extratos e frações foram submetidos a testes na Fiocruz para avaliação da atividade antibacteriana pela técnica de difusão em ágar contra bactérias Gram positivas e negativas e para avaliação antiplasmódica por citometria de fluxo. Em testes de atividade biológica, a fração FASP mostrou-se moderadamente ativa frente às bactérias Staphylococcus aureus (12 mm), Staphylococcus aureus resistente à meticilina (12 mm) e Shigella flexneri (15 mm), enquanto que as amostras FHCP, EMCP, EMSP e EECP apresentaram baixa atividade frente à bactéria Shigella flexneri com halos de inibição 11 mm, 11 mm, 10 mm e 9 mm, respectivamente. Na avaliação antiplasmódica apenas o extrato EACP apresentou inibição significativa do parasita Plasmodium falciparum, com porcentagem de inibição parasitária acima de 60% em todas as concentrações testadas. O estudo fitoquímico das amostras bioativas foi realizado por técnicas cromatográficas e a identificação das substâncias foi realizada por técnicas espectrométricas e espectroscópicas. Nas análises por cromatografia em camada delgada (CCD) das amostras, observou-se bandas com coloração característica de compostos fenólicos, flavonoides, saponinas e terpenos. A amostra FHCP foi analisada por CCD e fracionada por cromatografia em coluna flash, uma das frações foi identificada como mistura dos fitoesteróis β-sitosterol e estigmasterol pelas análises espectrométricas em comparação dos dados com a literatura. Dados cromatográficos, espectroscópicos e espectrométricos da fração FASP e dos extratos EMCP/EMSP/EACP em comparação com os dados literários permitiram identificar a presença de derivados de ácidos gálico e elágico e podem ser os principais compostos responsáveis pela bioatividade dos extratos e frações do fruto.

Submitted by Cleide Dantas (cleidedantas@ufpa.br) on 2014-12-10T00:12:58Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) Dissertacao_EstudoFitoquimicoAtividade.pdf: 2445711 bytes, checksum: 3a6673c71aabe192cc664cb74e214829 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva (arosa@ufpa.br) on 2014-12-12T14:47:26Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) Dissertacao_EstudoFitoquimicoAtividade.pdf: 2445711 bytes, checksum: 3a6673c71aabe192cc664cb74e214829 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-12-12T14:47:26Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) Dissertacao_EstudoFitoquimicoAtividade.pdf: 2445711 bytes, checksum: 3a6673c71aabe192cc664cb74e214829 (MD5) Previous issue date: 2014 / O presente trabalho descreve a análise fitoquímica e avaliação da atividade antiplasmódica em Plasmodium falciparum (W2) de Himatanthus articulatus (Vahl) Woodson. O extrato etanólico (EEHS) obtido por percolação do pó das cascas, após concentração, forneceu um precipitado (EEHSP) e um resíduo pastoso que foi submetido a liofilização (EEHS). Fracionou-se este por: re-extração sob refluxo, partição ácido-base e coluna cromatográfica de sílica gel. Além disso, submeteu-se o pó das cascas a extração com ácido clorídrico 1 N para separação de alcalóides. A prospecção fitoquímica, em CCD, foi realizada com EEHS e EEHSP, enquanto que EEHS, frações (FrDCM EEHS, FrAcOET EEHS e FrMeOH EEHS) e FAHS2 DCM foram analisadas por cromatografia líquida de alta eficiência acoplada a DAD (arranjo de diiodo-CLAE-DAD). FrAcOET EEHS foi fracioanda por coluna cromatográfica fornecendo uma substância isolada (S1). Analisou-se o EEHS, a fração majoritária obtida na coluna cromatográfica (F71), FAHS2 DCM e S1 por cromatografia liquida acoplada a espectrometria de massas (CL-EM). O espectro no infravermelho foi obtido para F71 e S1. A estrutura química de S1 foi definida como sendo o plumierídeo por ressonância magnética nuclear. A avaliação de atividade antiplasmódica foi realizada com EEHS, EEHSP, FrDCM EEHS, FrAcOET EEHS, FrMeOH EEHS, FAHS1 DCM, FAHS2 DCM, FAEEHS, FNEEHS, FNHS DCM e S1 pelo método da lactato desidrogenase parasitária (pLDH). Na prospecção fitoquímica, EEHS e EEHSP apresentaram resultados positivos para polifenóis e taninos, saponinas, triterpenos e esteroides, alcaloides e geninas flavônicas. EEHS e frações analisadas por CLAE-DAD mostraram os picos mais intensos sugestivos de iridoides, comprovados por CL-EM de EEHS que mostrou como substância majoritária o iridóide plumierídeo, coerente com o espectro no IV de F71 e S1 que revelou absorções de grupos funcionais presentes em iridóides. Nas análises destas por CL-EM, observou-se um pico a m/z 471 (M+H), atribuído ao íon pseudomolecular do plumierídeo e/ou isoplumierídeo. S1 foi identificada como plumierídeo. Até o presente momento não foi relatada a presença de alcaloides para a espécie, porém nas frações alcaloídicas (FAHS1 DCM, FAHS2 DCM, FAEEHS) e de neutros (FNEEHS e FNHS DCM) em análise por CCD revelada com reagente Dragendorff observaram-se manchas sugestivas de alcalóides, coerente com análise por CLAE-DAD de FAHS2 DCM, a qual mostrou pico majoritário com cromóforo sugestivo de alcaloide β-carbolínico. Em análises por CL-EM de FAHS2 DCM observou-se pico majoritário sugestivo do alcalóide 10-hidroxi-antirina-N-óxido com massa molecular 328 u. Os ensaios de atividade antiplasmódica foram negativos para EEHS, EEHSP, FrDCM EEHS, FrAcOET EEHS, FrMeOH EEHS, S1, FAEEHS, FAHS1 DCM, FNEEHS, FNHS DCM e moderadamente ativo (CI50 22,89 μg/mL) para FAHS2 DCM. Estes resultados indicam que a atividade antiplasmódica da planta pode se atribuída aos alcaloides, cuja presença em H. articulatus é descrita pela primeira vez. / The present master thesis describes the phytochemical study and the antiplasmodial activity against Plasmodium falciparum (W2) of Himatanthus articulatus (Vahl) Woodson. The ethanol extract (EEHS) obtained by percolation of the bark powder, gave, after concentration, a precipitate (EEHSP) and a pasty residue that was submitted to lyophilization (EEHS). Fractionation of EEHS was carried out by successively re-extraction with DCM, AcOEt and MeOH under reflux, by acid-base partitioning for separation of alkaloids and by chromatography over silica gel column. Furthermore, the bark powder was extracted with 1 N HCl for the separation of alkaloids. TLC prospection of EEHS and EEHSP was carried out while EEHS, FrDCM EEHS, FrAcOET EEHS, FrMeOH EEHS and FAHS2 DCM were also analyzed by HPLC - DAD. Column chromatography of FrAcOET EEHS afforded a substance (S1). EEHS, the major fraction obtained in its chromatographic column (F71), DCM FAHS2 and S1 were analysed by UPLC-PDA-MS/ESI. Spectroscopic analyses of S1 (IR, UV, MS/ESI, 1H and 13CNMR) allowed its identification as plumieride. Antiplasmodial activity against P. falciparum (W2) was evaluated for EEHS, EEHSP, FrDCM EEHS, FrAcOET EEHS, FrMeOH EEHS, FAHS1 DCM, DCM FAHS2, FAEEHS, FNEEHS, FNHS DCM and S1 by the parasite lactate dehydrogenase (pLDH) method. In the TLC prospection, EEHS and EEHSP showed positive results for polyphenols and tannins, saponins, triterpenes and steroids, alkaloids and flavonoids. EEHS fractions were analyzed by HPLC-DAD showing suggestive peaks of iridoids. Analyses by UPLC-PDA-MS/ESI showed that EEHS contains plumieride as the major substance whose psedomolecular peak was observed at m/z 471 (M + H). S1 was identified as plumeride. Until now it was not reported the presence of alkaloids for the species but spots suggestive of alkaloids were observed on TLC with Dragendorff reagent of FAHS1 DCM, DCM FAHS2, FAEEHS, FNEEHS and FNHS DCM were observed. UV spectra registered online by HPLC-DAD for FAHS2 showed that the major peak is suggestive of a β-carboline alkaloid. UPLC-PDA-MS/ESI analysis of FAHS2 DCM showed an intense peak corresondng to a pseudomolecular ion 329 u that could be possibly attributed to the alkaloid 10-hydroxy-antirine-N-oxide (MM 328 u). The antiplasmodial assays were negative for EEHS, EEHSP, FrDCM EEHS, FrAcOET EEHS, FrMeOH EEHS, S1, FAEEHS, FAHS1 DCM, FNEEHS, FNHS DCM and moderately active (CI50 22,89 μg/mL) for FAHS2 DCM. These results indicate that the antiplasmodial activity might be attributed to the plant alkaloids whose presence in H. articulatus is reported here by the firist time.

Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2018-02-07T15:24:31Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação_Edizon V. Lopes.pdf: 4850594 bytes, checksum: f3439ff70178fccde2f5d8fc7e63746f (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2018-02-07T15:24:46Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação_Edizon V. Lopes.pdf: 4850594 bytes, checksum: f3439ff70178fccde2f5d8fc7e63746f (MD5) / Made available in DSpace on 2018-02-07T15:24:46Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação_Edizon V. Lopes.pdf: 4850594 bytes, checksum: f3439ff70178fccde2f5d8fc7e63746f (MD5) Previous issue date: 2015-04-30 / FAPEAM - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / Bonamia ferruginea (Choisy) Hallier f., popularly known as cipó-tuíra is a small liana that has velvety, brown-colored leaves and stems. It is used by the Amazonian people in the treatment of malaria. In vitro antiplasmodial activity against Plasmodium falciparum was evaluated for extracts that were prepared by infusion and decoction of stem and leaf, and soxhlet extraction using chloroform, methanol and water as solvents. The methanol and aqueous leaf extracts were tested against Plasmodium berghei in vivo in mice. All extracts were inactive in vitro and in vivo. This work was performed to study the chemical composition of B. ferruginea. We opted for the chromatographic fractionation of the chloroform extract, although it was not considered active (40.6%) inhibition at 50 μg mL-1) against P. falciparum in the in vitro test. From the hexane extract of the stem of B. ferruginea the triterpenes lupeol, friedelin and glutinol were isolated. The chloroform extract of the stem provided the coumarins scopoletin and isofraxidin. A hemiterpene, 2-methyl-1,2,3,4-butanetetrol, was isolated from the ethyl acetate extract of the stem of B. ferriginea. The characterization of the isolated compounds was performed by spectroscopic techniques such as MS and one and two dimensional NMR, and comparison with literature data. / Bonamia ferruginea (Choisy) Hallier f., popularmente conhecida como cipó-tuíra, é uma liana de pequeno porte com caule e folhas aveludadas de cor marrom, utilizada pela população amazônica no tratamento de malária. No presente trabalho, foi avaliada a atividade antiplasmódica in vitro contra o Plasmodium falciparum dos extratos preparados por infusão e decocção de caule e folha, e extratos feitos das mesmas partes da planta, em aparelho de soxhlet com clorofórmio, metanol e água. Os extratos metanólico e aquoso da folha foram testados contra o Plasmodium berghei in vivo em camundongos. Os extratos não apresentaram atividade antimalárica in vitro ou in vivo. Também foi realizado um estudo da composição química de B. ferruginea. Optou-se pelo fracionamento cromatográfico do extrato clorofórmico do caule, mesmo não sendo considerado ativo (40,6% de inibição a 50 μg/mL-1) frente ao P. falciparum no teste in vitro. Do extrato hexânico proveniente do caule de B. ferruginea, foram isolados os triterpenos lupeol, friedelina e glutinol. Do extrato clorofórmico do caule, obtiveram-se as cumarinas escopoletina e isofraxidina e o hemiterpeno 2-metil-1, 2, 3, 4-butanotetrol, isolado do extrato acetato de etila do caule de B. ferriginea. A caracterização das substâncias isoladas foram realizada por técnicas espectroscópicas como EMAR e RMN uni e bidimensional, além de comparação com dados da literatura.

Submitted by Rosana Moreira (rosanapsm@outlook.com) on 2018-11-19T14:08:11Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_EstudoFarmacognosticoFitoquimico.pdf: 2190954 bytes, checksum: dca601e9da6113171e21bbe7ec56c3c5 (MD5) / Approved for entry into archive by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2019-01-31T11:40:31Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_EstudoFarmacognosticoFitoquimico.pdf: 2190954 bytes, checksum: dca601e9da6113171e21bbe7ec56c3c5 (MD5) / Made available in DSpace on 2019-01-31T11:40:31Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_EstudoFarmacognosticoFitoquimico.pdf: 2190954 bytes, checksum: dca601e9da6113171e21bbe7ec56c3c5 (MD5) Previous issue date: 2018-06-21 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O objetivo deste trabalho foi realizar estudos farmacognósticos, fitoquímicos e de atividade antiplasmódica de Aspidosperma eteanum Markgr. Para realização dos estudos farmacognósticos, utilizou-se os métodos de granulometria, determinação do pH, índice de espuma, teor de cinzas e perda por dessecação descritos na Farmacopéia Brasileira, V ed. O extrato etanólico (EEAE) foi obtido por maceração exaustiva com etanol (96° GL) e concentrado em rotaevaporador. Em seguida, foi submetido a fracionamento ácido-base, obtendo-se as frações FNAE e FAAE, extração sob refluxo (FrHex, FrDcm, FrAcOEt e FrMeOH), partição para a retirada de açúcar (FrLADcm e FrLMeOH) e cromatografia de sílica em coluna (Fr38, FR3 e FR6). O EEAE e frações foram submetidos à prospecção fitoquímica. O extrato e as frações FrHex, FrDcm, FrACoEt, FrMeOH e Fr38 foram submetidas a CLAE-DAD e o EEAE, FrMeOH, FAAE, FrLADcm e Fr38 foram analisadas por RMN 1H. O EEAE e as frações FrHex, FrDcm, FrACoEt, FrMeOH, FAAE, FNAE, FLADcm e FLAMeOH foram selecionadas para avaliação antiplasmodica em clones W2 de Plasmodium falciparum por microteste. Os resultados farmacognósticos encontrados estão de acordo com os padrões da Farmacopéia Brasileira V ed. (2010). O extrato etanólico obteve um rendimento de 5,92%. Dentre as frações obtidas sob-refluxo, a FrMeOH obteve maior rendimento (93,59%) e as frações FNAE e FAAE de 3,0% e 1,3% respectivamente. A prospecção fitoquimica revelou que apenas a FAAE foi positiva para alcaloides, mas a análise por ressonância sugeriu tratar-se de ácidos graxos. Os resultados obtidos no CLAE-DAD revelaram uma substancia de alta polaridade no EEAE, FrHex, FrDcm, FrAcOET e FrMeOH e a presença de alcaloides em pequenas concentrações na fração FR3. O RMN 1H do EEAE e FrMeoH apresentaram sinais sugestivos de açúcares. A fração FrLAPDc apresentou sinal sugestivo de substâncias derivadas de ácidos carboxílicos. A fração Fr38-40 (rendimento = 8%), que apresentou formação de cristais, apresentou sinais sugestivos de um éster metílico. Na avaliação antiplasmódica o EEAE foi inativo com CI50 superior a 50 μg/mL. Dentre os métodos de fracionamento, as frações FrHex, FrDcm, FrAcoEt, FrMeOH e FNAE com média e baixa polaridade foram moderadamente ativas. Apenas as frações FAAE e FADcm foram ativas com CI50 =7,6 μg/mL e CI50 =1,91 μg/mL respectivamente. Portanto, o estudo da atividade biológica de Aspidosperma eteanum demonstrou que o fracionamento aumentou a atividade antiplasmódica sendo as frações de baixa e média polaridade as mais ativas. Os estudos fitoquímicos demonstraram que os alcaloides podem estar presentes na planta, mas em baixa concentração e que os açúcares e compostos graxos são provavelmente os constituintes majoritários do extrato. Quando se correlaciona os resultados obtidos nos estudos fitoquímicos e de atividade biológica é possível perceber que a(s) substancia(s) responsável(is) pela atividade antiplasmódica, por estar diretamente relacionada a frações de menor polaridade, podem ser compostos graxos tais como o éster metílico detectado neste estudo. / The aim of this study was to perform pharmacognostic, phytochemical and antiplasmodial studies on Aspidosperma eteanum Markgr. The pharmacognostic study to assess granulometry data, pH, foam index, ash and moisture content were peformed according to the Brazilian Pharmacopoeia, V ed. The ethanolic extract (EEAE) was obtained by exhaustive maceration with ethanol (96°GL) and concentrated by rotavaporator. Then, it was subjected to acid-base extraction that resulted in FNAE and FAAE fractions, reflow extraction (FrHex, FrDcm, FrAcOET and FrMeOH), sugar removal partition (FrLADcm and FrLMeOH) and silica column chromatography (Fr38, FR3 and FR6). The EEAE and fractions were submitted to phytochemical prospection. The EEAE, FrHex, FrDcm, FrACoEt, FrMeOH and Fr38 also underwent to HPLC-DAD and the EEAE, FrMeOH, FAAE, FrLADcm and Fr38 were analyzed by 1H NMR. The EEAE, FrHex, FrDoC, FrACoEt, FrMeOH, FAAE, FNAE, FLADcm and FLAMeOH fractions were selected for antiplasmodial evaluation in W2 clones of Plasmodium falciparum by microtest. The pharmacognostic results are in accordance with the Brazilian Pharmacopoeia V ed. (2010) standards. The ethanolic extract yielded 5.92%. Among the fractions obtained under reflux, FrMeOH had the highest yield (93.59%) and FNAE and FAAE fractions of 3.0% and 1.3% respectively. In the phytochemical prospection, only FAAE was positive for alkaloids, but resonance analysis suggested it had fatty acids. The results obtained in CLAE-DAD revealed a high polarity substance in EEAE, FrHex, FrDcm, FrAcOET and FrMeOH and the presence of alkaloids in low concentrations in the FR3 fraction. The 1H NMR of the EEAE and FrMeOH showed suggestive signs of sugars. The FrLAPDc presented a suggestive signal of substances derived from carboxylic acids. The Fr38 fraction (yield = 8%), which presented crystals, showed signs suggestive of a methyl ester. In the antiplasmodial evaluation, the EEAE was inactive with IC50 higher than 50 μg/mL. Among the fractionation methods, the FrHex, FrDcm, FrACoEt, FrMeOH and FNAE fractions with medium and low polarity were moderately active. Only the FAAE and FLADcm fractions were active with IC50 = 7.6 μg/mL and IC50 = 1.91 μg/mL respectively. Therefore, the antiplasmodial evaluation of Aspidosperma eteanum demonstrated that the fractionation increased the biological activity being the fractions of low and medium polarity the most active. Phytochemical studies showed that alkaloids may be present in the plant but at low concentrations, and that sugars and fatty compounds are probably the extract major constituents. When correlating the phytochemical and biological studies it is possible to perceive that the substance(s) responsible for the antiplasmodial activity is directly related to fractions of lower polarity and can be fatty compounds such as the methyl ester detected in this study.

Submitted by Cleide Dantas (cleidedantas@ufpa.br) on 2014-07-21T13:11:39Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_AbordagemFitoquimicaDeterminacao.pdf: 2599690 bytes, checksum: 0968a3faa969681e73e4bfc3c74a9337 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva (arosa@ufpa.br) on 2014-09-08T13:10:10Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_AbordagemFitoquimicaDeterminacao.pdf: 2599690 bytes, checksum: 0968a3faa969681e73e4bfc3c74a9337 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-09-08T13:10:10Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_AbordagemFitoquimicaDeterminacao.pdf: 2599690 bytes, checksum: 0968a3faa969681e73e4bfc3c74a9337 (MD5) Previous issue date: 2011 / A malária é uma doença causada por protozoários do gênero Plasmodium. O tratamento da malária está se tornando cada vez mais difícil com a expansão dos casos de parasitas resistentes aos fármacos utilizados na terapêutica. Neste contexto, produtos isolados a partir de plantas têm dado importante contribuição, representando importante fonte para a obtenção de novos fármacos antimaláricos. A atividade antiplasmódica de alcalóides de origem vegetal tem sido amplamente relatada na literatura. Plantas da família Apocynaceae, ricas em alcalóides indólicos, apresentam amplas propriedades medicinais e algumas espécies do gênero Aspidosperma já demonstraram potencial antimalárico. Assim, este trabalho teve como objetivo realizar uma abordagem fitoquímica, avaliar a atividade antiplasmódica in vitro e a toxicidade preliminar do extrato hidroetanólico concentrado das cascas de A. excelsum, nativa da Região Amazônica, onde é usada tradicionalmente para tratar várias enfermidades, inclusive malária. A atividade antiplasmódica in vitro de diferentes concentrações do extrato e frações alcaloídica e metanólica foi avaliada em culturas de P. falciparum W2 pela percentagem de inibição da parasitemia e determinação da concentração inibitória média (CI50) em intervalos de 24, 48 e 72 h. O ensaio de citotoxicidade do extrato e fração alcaloídica foi realizado em fibroblastos L929 de camundongo pelo método do MTT e o teste de toxicidade aguda oral do extrato foi realizado de acordo com o Procedimento de Dose Fixa adotado pela OECD com pequenas adaptações. A prospecção fitoquímica revelou a presença de saponinas, açúcares redutores, fenóis e taninos e alcalóides e estes foram confirmados em quantidades significativas na fração alcaloídica extraída com clorofórmio (C2). Através de cromatografia em camada delgada e cromatografia líquida de alta eficiência do extrato, foi caracterizada a presença do alcalóide indólico ioimbina. O extrato e as frações apresentaram atividade antiplasmódica in vitro. O extrato apresentou a melhor atividade em 24 h (CI50= 5,2 ± 4,1 μg/mL), indicando uma boa atividade esquizonticida. Apenas a fração alcaloídica C2 apresentou uma pequena, porém significativa citotoxicidade (concentrações superiores a800 μg/mL). O extrato não só não apresentou citotoxicidade como também nenhum sinal evidente de toxicidade aguda oral na dose de 5000 mg/mL. Os resultados obtidos indicam que o extrato de Aspidosperma excelsum Benth apresenta promissor potencial antimalárico, merecendo estudos mais detalhados sobre sua atividade antiplasmódica, com vistas no isolamento de compostos ativos e elucidação de seu(s) mecanismo(s) de ação. / Malaria is a disease caused by protozoa of the genus Plasmodium. The treatment of malaria is becoming increasingly difficult with the expansion of the cases of parasites resistant to drugs used in therapy. In this context, products isolated from plants have give an important contribution, representing an important source for obtaining new antimalarial drugs. Antiplasmodial activity of alkaloids of plant origin has been widely reported in the literature. Plants of the Apocynaceae family, rich in indole alkaloids have medicinal properties and some large species of the genus Aspidosperma have demonstrated antimalarial potential. Thus, this study aimed to perform a phytochemical approach, evaluate the antiplasmodial activity and toxicity in vitro preliminary of the hydroethanolic extract from the bark of A. excelsum, native of the Amazon region, where it is traditionally used to treat various diseases, including malaria. Antiplasmodial activity in vitro of different concentrations of the extract and alkaloidal and methanolic fractions was evaluated in cultures of P. falciparum W2 by the percentage of inhibition of parasitaemia and the mean inhibitory concentration (IC50) was determined at intervals of 24, 48 and 72 h. The cytotoxicity assay of the extract and alkaloidal fraction was carried out on L929 mouse fibroblasts by MTT method and the testing of acute oral toxicity of the extract was carried out according to the Fixed Dose Procedure adopted by the OECD with small modifications. The phytochemical approach revealed the presence of saponins, reducing sugars, phenols and tannins and alkaloids, and these were confirmed in significant amounts in the alkaloidal fraction with chloroform fraction (C2). Through thin layer chromatography and high performance liquid chromatography of the extract characterized the presence of the indole alkaloid yohimbine. The extract and fractions showed antiplasmodial activity in vitro. The extract showed the best activity in 24 h (IC50 = 5.2 ± 4.1 μg / mL), indicating a good activity schizonticide. Only C2 alkaloidal fraction showed a small but significant cytotoxicity (concentrations higher than 800 μg/mL). The extract not only cytotoxicity but also did not showed any obvious sign of toxicity in acute oral dose of 5000 mg/mL. The results indicate that the extract of Aspidosperma excelsum Benth presents promising potential antimalarial and deserves more detailed studies on antiplasmodial activity, aiming the isolation of active compounds and elucidation of their mechanisms of action.