CARMO, Luana David do. Proteínas isoladas do látex de Himatanthus drasticus (MART.) Plumel apocynaceae reduzem a resposta inflamatória e nociceptiva na artrite induzida por zymosan em camundongos. 2015. 91 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2015. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2015-04-10T14:14:08Z No. of bitstreams: 1 2015_dis_ldcarmo.pdf: 1347108 bytes, checksum: 71a70f834b3099fffa263f0419790148 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2015-04-10T14:21:06Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_dis_ldcarmo.pdf: 1347108 bytes, checksum: 71a70f834b3099fffa263f0419790148 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-10T14:21:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_dis_ldcarmo.pdf: 1347108 bytes, checksum: 71a70f834b3099fffa263f0419790148 (MD5) Previous issue date: 2015 / Himatanthus drasticus is a laticiferous plant of the family Apocynaceae found in South America and popularly known as janaguba. Your latex is known as "janaguba milk" and has several pharmacological activities. This work aimed to study the effect of isolated proteins from Himatanthus drasticus latex (HdLP) zymosan (Zy) induced arthritis. Arthritis was induced in male Swiss mice (n = 6) by administering 0.1 mg Zy intra-articular. The animals were treated with HdLP (5 and 50 mg/kg i.v.) or Saline i.v. 1 hour after the Zy and HdLP (50 mg/kg v.o.) or Dexamethasone (2 mg/kg s.c.) 1 hour before Zy. After six hours of induction the animals were euthanized, the joint washing carried, and collected for leukocyte count, determination of the myeloperoxidase (MPO) activity and inflammatory mediators (NO, TNF-α, IL-1β, IL-6 and IL-10). The edema was evaluated by measuring the diameter articular and the vascular permeabilitym through extravasation. In addition, we evaluated the effect of HdLP on synovial inflammation as well the mechanical hypernociception. For statistical analysis we used the ANOVA/Bonferroni or Kruskal Wallis/Dunns; p <0.05 considered significant. This study was approved by the Ethics Committee on Animal Research of the UFC - CEPA (38/14). HdLP (50 mg/kg i.v.) a significant decrease on the leukocyte count in MPO activity and levels (NO, IL-1β, and IL-6). It was also observed a decrease in swelling and damage to the synovial membrane. The nociceptive threshold was increased by HdLP 50 mg/kg i.v. and 50 mg/kg v.o. HdLP has antinociceptive and anti-inflammatory activity in the model of arthritis induced by Zy. The effect seems to be related to the decreased migration of neutrophils and the release of inflammatory mediators, reducing damage to the synovial membrane and hypernociception. / Himatanthus drasticus é uma planta laticífera pertencente à família Apocynaceae encontrada na América do Sul e conhecida popularmente como janaguba. Seu látex é conhecido como “leite de janaguba” e apresenta várias atividades farmacológicas. O presente trabalho teve como objetivo estudar o efeito das proteínas isoladas do látex de Himatanthus drasticus (HdLP) em modelo de artrite experimental induzida por zymosan (Zy). A artrite foi induzida em camundongos machos swiss (n=6) através da administração de 0,1 mg Zy i.a. Os animais foram tratados com HdLP (5 e 50 mg/kg i.v.) ou Salina i.v. 1 hora após o Zy e com HdLP (50 mg/kg v.o.) ou Dexametasona (2 mg/kg s.c.) 1 hora antes do Zy. Seis horas após a indução os animais foram eutanasiados, foi realizada a lavagem da articulação e o lavado articular coletado para avaliação do efeito de HdLP sobre a migração de leucócitos, atividade da mieloperoxidase (MPO) e liberação de mediadores inflamatórios (NO, TNF-α, IL-1β, IL-6 e IL-10). O edema foi avaliado pela medição do diâmetro transversal da articulação e pela avaliação da permeabilidade vascular. Além disso, foi avaliado o efeito de HdLP sobre processo inflamatório na membrana sinovial e sobre a hipernocicepção mecânica utilizando uma versão eletrônica (VonFrey). Para as análises estatísticas foi utilizado o teste ANOVA/Bonferroni ou Kruskal Wallis/Dunns; p <0,05 foi considerado significante. Este estudo foi aprovado pela Comissão de ética em Pesquisas com Animais da UFC - CEPA (38/14). HdLP 50 mg/kg i.v. apresentou uma diminuição significativa na contagem de leucócitos, nos níveis de MPO e na liberação de medidores inflamatórios (NO, IL-1β, e IL-6). Também foi observado uma diminuição do edema e no dano à membrana sinovial. Na hipernocicepção mecânica os grupos (HdLP 50 mg/kg i.v. e 50 mg/kg v.o.) apresentaram um aumento no limiar nociceptivo. HdLP apresenta atividade antinociceptiva e anti-inflamatória no modelo de artrite induzida por Zy. O efeito parece estar relacionado com a diminuição da migração de neutrófilos e da liberação de mediadores inflamatórios, reduzindo o dano na membrana sinovial e a hipernocicepção.

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CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / A great number of plant species produce latex, including Apocynacea, Sapotacea, Papaveracea and Euphorbiaceae. Thevetia peruviana (Pers.) Schum is a laticifer shrub belonging to Apocynaceae family popularly known as âchapÃu-de-napoleÃoâ. It is very limited the proteomic information about this specie. Thus, a proteomic analysis of protein fraction (TpLP) from T. peruviana latex was performed using two dimensional gel electrophoresis and mass spectrometry. A total of 33 proteins (86%) were identified, including storage proteins, peptidase inhibitor, cysteine peptidases, peroxidases and osmotins. This protein fraction showed strong proteolytic activity at pH 5.0 which was increased in the presence of low concentrations of the reducing agent DTT. The inhibition this activity in the presence of specific inhibitors E-64 and IAA and the high activity with BANA showed the predominance of cysteine peptidases in latex. A cysteine peptidase, termed peruvianin-I, was purified from the latex by a single chromatographic step involving gel filtration. The enzyme was inhibited by E-64 and iodoacetamide (IAA) and follows the Michaelis-Menten kinetics, showing high affinity for azocasein, with Km value of 17.6 uM, exhibiting an optimal pH and temperature of 5.0-6.0 and 25-37 ÂC, respectively. Two-dimensional gel electrophoresis and mass spectrometry revealed that peruvianin-I (100 kDa) possesses a pI of 4.0 and five subunits (20 kDa). The N-terminal amino acid sequence of peruvianin-I (1ADPGPLQDFCLADLNSPLFINGYPCRNPALAISDDF36) was similar to that of germin or germin-like proteins. High-resolution images from atomic force microscopy indicated the possible hexameric structure of peruvianin-I, which is organized as a trimer of dimers that form a central channel. TpLP and peruvianin-I exhibited no oxalate oxidase and superoxide dismutase activity or antifungal effects on the spore germination of Fusarium solani. This study showed that T. peruviana latex are a rich source of pathogenesis-related proteins, including cysteine peptidases. Interestingly, these peptidases exhibit different structural and biochemical characteristics that may be related to their specific physiological functions. / Um grande nÃmero de espÃcies vegetais produzem lÃtex, incluindo Apocynacea, Sapotacea, Papaveracea e Euphorbiaceae. Thevetia peruviana (Pers.) Schum à um arbusto laticÃfero pertencente à famÃlia Apocynaceae, popularmente conhecido como "chapÃu-de-NapoleÃo". SÃo bastante limitadas as informaÃÃes proteÃmicas sobre esta espÃcie. Por tanto, uma anÃlise proteÃmica da fraÃÃo proteica (TpLP) do lÃtex de T. peruviana foi realizada a partir de eletroforeses bidimensionais e espectrometria de massas. Um total de 33 proteÃnas (86%) foi identificado, incluindo proteÃnas de reserva, inibidor de peptidase, peptidases cisteÃnicas, peroxidases e osmotinas. As proteÃnas desta fraÃÃo apresentaram uma forte atividade proteolÃtica no pH 5,0, a qual foi aumentada na presenÃa de baixas concentraÃÃes do agente redutor DTT. A inibiÃÃo desta atividade na presenÃa dos inibidores especÃficos E-64 e IAA e a alta atividade com o substrato BANA evidenciou a predominÃncia de peptidases cisteÃnicas no lÃtex. Uma peptidase cisteÃnica denominada peruvianina-I, foi purificada a partir do lÃtex atravÃs de um Ãnico passo cromatogrÃfico envolvendo filtraÃÃo em gel. A enzima foi inibida por E-64 e iodoacetamida (IAA) e seguiu a cinÃtica de Michaelis-Menten, apresentando alta afinidade à azocaseÃna, com um valor de Km de 17,6 ÂM, exibindo pH e temperatura Ãtimos de 5,0-6,0 e 25-37 ÂC, respectivamente. A peruvianina-I nÃo foi reconhecida por anticorpos anti-papaÃna. As Eletroforeses bidimensionais e a espectrometria de massas revelaram que a peruvianina-I (100 kDa) possui um pI de 4,0 e cinco subunidades (20 kDa). A sequÃncia de aminoÃcidos N-terminal da peruvianina-I (1ADPGPLQDFCLADLNSPLFINGYPCRNPALAISDDF36) mostrou similaridade à germinas ou âgermin-like proteinsâ. Imagens de alta resoluÃÃo a partir da microscopia de forÃa atÃmica indicaram uma possÃvel estrutura hexamÃrica da peruvianina-I, que està organizada como um trÃmero de dÃmeros, formando um canal central. TpLP e Peruvianina-I nÃo exibiram atividade de oxalato oxidase e superÃxido dismutase ou efeitos antifÃngicos sobre a germinaÃÃo de esporos de Fusarium solani. Este estudo mostrou que o lÃtex de T. peruviana à uma fonte rica em proteÃnas relacionadas à patogÃnese, incluindo peptidases cisteÃnicas. Curiosamente, estas peptidases apresentam caracterÃsticas estruturais e bioquÃmicas diferentes, que podem estar relacionadas com as suas funÃÃes fisiolÃgicas especÃficas.

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2017-05-30T12:41:58Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Dissertação Mestrado-Danielle Feijó de Moura.pdf: 857983 bytes, checksum: 05df2d41fdf68432fc8b4cb27c994bf6 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-30T12:41:58Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Dissertação Mestrado-Danielle Feijó de Moura.pdf: 857983 bytes, checksum: 05df2d41fdf68432fc8b4cb27c994bf6 (MD5) Previous issue date: 2016-02-02 / FACEPE / Himatanthus drasticus (Mart.) Plumel é uma espécie arbórea que pode chegar a sete metros de altura. Mais conhecida como janaguba é encontrada em áreas de cerrado, caatinga, campos rupestres e floresta tropical. Os usuários afirmam que a planta serve para o tratamento de tumores, hemorroidas, infecções do trato respiratório, aparelho digestivo e trato urogenital. Também relatam ação analgésica e antialérgica. Considerando as poucas publicações científicas sobre os efeitos farmacológicos da janaguba, o presente estudo avaliou os efeitos biológicos do látex em vários modelos experimentais. O látex dissolvido em água e liofilizado foi submetido à cromatografia em camada delgada, para a determinação das classes de metabólitos secundários, e empregado diretamente em ensaios de toxicidade aguda por gavagem (diretriz 425 da Organização para a Cooperação e Desenvolvimento Econômico), citotoxicidade (sarcoma 180 e carcinoma de Erlich), tripanocida (frente à cultura de epimastigotas de Trypanosoma cruzi), antibacteriano (microdiluição em caldo), antioxidante (método 2,2-difenil-1-picrilhidrazil), atividade antioxidante total e dosagem de fenóis, atividade genotóxica (ensaio cometa) e mutagênica (teste do micronúcleo). A cromatografia revelou a presença das seguintes classes: esteroides, saponinas, monoterpenos, sesquiterpenos, triterpenos, além de e açúcares redutores. Não houve efeito tóxico e citotóxico nem dano histopatológico (fígado, baço, coração, rim, pulmão). O látex não teve ação tripanocida. O método de microdiluição em caldo revelou um efeito inibitório nas concentrações de 3,13 e 1,56 para Acinetobacter baumannii ATCC 19606 e Escherichia coli ATCC 25922 respectivamente. O látex não teve atividade antioxidante significativa possivelmente devido ao valor reduzido dos compostos fenólicos (24,52 ± 0,21 µg EAG/mg). O teste de micronúcleo mostrou que o látex da janaguba não é mutagênico, mas pelo teste de cometa é considerado genotóxico. Esses resultados sugerem que o látex de H. drasticus possui segurança para uso agudo e potencial farmacológico antibacteriano. / Himatanthus drasticus (Mart.) Plumel is an arboreal species which can reach seven meters tall. More commonly known as janaguba is encountered in areas of cerrado, caatinga, rock fields and rainforest. The users claim that the plant serves for the treatment of tumors, hemorrhoids, respiratory tract infection, digestive and urogenital tract. They also report analgesic and antiallergic action. Considering the few scientific publications on the pharmacological effects of janaguba, the present study evaluated the biological effects of latex in various experimental models. The latex dissolved in water and lyophilized was subjected to thin layer chromatography, for the determination of classes of secondary metabolites, and directly employed in acute toxicity tests by gavage (guideline 425 of the Organization for Economic Cooperation and Development), cytotoxicity (sarcoma 180 and Ehrlich carcinoma), trypanocidal (front culture Trypanosoma cruzi), antibacterial (microdilution), antioxidant (using 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl), total antioxidant activity and dosing phenols, genotoxic activity (comet assay) and mutagenic (micronucleus test). The chromatography revealed the presence of the following classes: steroids, saponins, monoterpenes, sesquiterpenes, triterpenes, and addition of reducing sugars. There was no toxic or cytotoxic effect and histopathologic injury (liver, spleen, heart, kidney, and lung). The latex had no trypanocidal action. The microdilution broth method has revealed an inhibitory effect at concentrations of 3.13 and 1.56 for Acinetobacter baumannii ATCC 19606 and Escherichia coli ATCC 25922 respectively. The latex had no significant antioxidant activity possibly due to the reduced amount of phenolic compounds (24.52 ± 0.21 ug EAG / mg). The micronucleus test showed that the latex janaguba is not mutagenic, but the comet test is considered genotoxic. These results suggest that the latex H. drasticus has security for acute use and antibacterial pharmacological potential.

SOUZA, Tamiris de Fátima Goebel de. Modulação da resposta inflamatória e aceleração da cicatrização de feridas cutâneas experimentais pelas proteínas isoladas do látex de Himatanthus drasticus Mart. (PLUMEL). 2015. 107 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2015. / Submitted by Maria Carvalho (lolitaprado@ufc.br) on 2015-04-16T14:35:27Z No. of bitstreams: 1 2015_dis_tfgsouza.pdf: 3226851 bytes, checksum: 9e8ae1d683c4f025a28a474e33f884c8 (MD5) / Approved for entry into archive by Maria Carvalho(lolitaprado@ufc.br) on 2015-04-16T14:36:08Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_dis_tfgsouza.pdf: 3226851 bytes, checksum: 9e8ae1d683c4f025a28a474e33f884c8 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-16T14:36:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_dis_tfgsouza.pdf: 3226851 bytes, checksum: 9e8ae1d683c4f025a28a474e33f884c8 (MD5) Previous issue date: 2015 / The treatment of chronic skin wounds results in high costs and risks of complications that could delay the resolution of the healing process. In this study, a pharmaceutical formulation (ointment) was developed containing an isolated protein fraction from Himatanthus drasticus latex (HdLP) in order to investigate its effect on the excisional wound healing in swiss mice (25±3,0 g). Inicially, the dermal irritation test in mice demonstrated that topical treatment with the ointment containing HdLP was not able to cause reactions of irritation in intact skin and the damaged skinreactions. The macroscopic analysis showed that HdLP 0,5%, 1,0% and 2,0% did not affect the inflammatory signs of edema and hyperemia in excisional wounds but treatment with 2,0% HdLP accelerated contraction of ulcers from 9th day after surgical induction of injury, anticipated the appearance of scar tissue and favored a complete re-epithelialization of wounds.After macroscopic analysis, the concentration of HdLP 2,0% was chosen for the histopathological study (leukocyte infiltration, mast cell degranulation, fibroplasia and collagenesis) and inflammatory mediators (myeloperoxidase (MPO), levels of nitrite and pro- and anti-inflammatory cytokines (TNF-α, IL-1β, IL-6 and IL-10). The treatment with HdLP 2,0% was able to decrease the polymorphonuclear infiltrate and increase the mononuclear on the 2nd day but had no effect on mast cell degranulation process in any period observed 2, 7 and 9 days. In the inflammatory phase, HdLP 2,0% decreased the MPO activity, confirming the reduction of migration of polymorphonuclear cells, and stimulated release of IL-1 β and IL-10 on day 2, moreover, the nitrite levels were reduced at 2 and 4 days and exalted on the 9th day. During the proliferative phase, HdLP 2,0% stimulated fibroplasia at 7 and 9 days after surgery, which probably contributed to increased collagen deposition observed in the 9th and 14th day. As the macroscopic analysis previously described, HdLP 2,0% favored the re-epithelialization process of excisional wounds but did not affect the thickness of newly formed epithelium. Therefore, all the results presented show that topical treatment with HdLP 2,0% modulates the inflammatory response of wound healing, influencing the subsequent phases and speeding up the tissue repair of experimental wounds excised. / O tratamento de feridas cutâneas crônicas resulta em altos custos e riscos de complicações que podem atrasar a resolução do processo de cicatrização. Neste estudo, uma formulação farmacêutica (pomada) foi desenvolvida contendo uma fração proteica isolada do látex de Himatanthus drasticus (HdLP) com o objetivo de investigar o seu efeito no processo de cicatrização de feridas excisionais em camundongos swiss machos (25±3,0 g). Primeiramente, o teste de irritabilidade dermal em camundongos demonstrou que o tratamento tópico com a pomada contendo HdLP não foi capaz de provocar reações de irritação na pele íntegra e na pele escarificada. A análise macroscópica de feridas excisionais constatou que HdLP 0,5%, 1,0 % e 2,0% não interferiu nos sinais flogísticos de edema e hiperemia, mas o tratamento com HdLP 2,0% acelerou a contração das úlceras a partir do 9º dia após a indução cirúrgica da lesão, antecipou o surgimento do tecido cicatricial e favoreceu a reepitelização completa das feridas. Após a análise macroscópica, a concentração de HdLP 2,0% foi escolhida para o estudo histopatológico (infiltrado leucocitário, degranulação de mastócitos, fibroplasia e colagênese) e de mediadores inflamatórios (mieloperoxidase (MPO), níveis de nitrito e citocinas pró- e anti-inflamatórias (TNF-α, IL-1β, IL-6 e IL-10). O tratamento com HdLP 2,0% foi capaz de diminuir o infiltrado polimorfonuclear e aumentar o mononuclear no 2º dia mas não interferiu no processo de degranulação de mastócitos em nenhum período observado 2º, 7º e 9º dias. Na fase inflamatória, HdLP 2,0% diminuiu a atividade de MPO, corroborando com a redução da migração de polimorfonucleares, e estimulou a liberação de IL-1β e IL-10 no 2º dia, além disso, os níveis de nitrito foram reduzidos no 2º e 4º dias e elevados no 9º dia. Durante a fase proliferativa, HdLP 2,0% estimulou a fibroplasia no 7º e 9º dias após a cirurgia, o que possivelmente contribuiu para uma maior deposição de colágeno observada no 9º e 14º dia. Conforme a análise macroscópica previamente descrita, HdLP 2,0% favoreceu o processo de reepitelização das feridas excisionais mas não interferiu na espessura do novo epitélio formado. Dessa forma, o conjunto dos resultados apresentados demonstram que o tratamento tópico com HdLP 2,0% modula a resposta inflamatória da cicatrização, influenciando nas etapas posteriores e acelerando a reparação tecidual de feridas cutâneas excisionais experimentais.

CoordenaÃÃo de AperfeÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Himatanthus drasticus à uma planta laticÃfera pertencente à famÃlia Apocynaceae encontrada na AmÃrica do Sul e conhecida popularmente como janaguba. Seu lÃtex à conhecido como âleite de janagubaâ e apresenta vÃrias atividades farmacolÃgicas. O presente trabalho teve como objetivo estudar o efeito das proteÃnas isoladas do lÃtex de Himatanthus drasticus (HdLP) em modelo de artrite experimental induzida por zymosan (Zy). A artrite foi induzida em camundongos machos swiss (n=6) atravÃs da administraÃÃo de 0,1 mg Zy i.a. Os animais foram tratados com HdLP (5 e 50 mg/kg i.v.) ou Salina i.v. 1 hora apÃs o Zy e com HdLP (50 mg/kg v.o.) ou Dexametasona (2 mg/kg s.c.) 1 hora antes do Zy. Seis horas apÃs a induÃÃo os animais foram eutanasiados, foi realizada a lavagem da articulaÃÃo e o lavado articular coletado para avaliaÃÃo do efeito de HdLP sobre a migraÃÃo de leucÃcitos, atividade da mieloperoxidase (MPO) e liberaÃÃo de mediadores inflamatÃrios (NO, TNF-&#945;, IL-1&#946;, IL-6 e IL-10). O edema foi avaliado pela mediÃÃo do diÃmetro transversal da articulaÃÃo e pela avaliaÃÃo da permeabilidade vascular. AlÃm disso, foi avaliado o efeito de HdLP sobre processo inflamatÃrio na membrana sinovial e sobre a hipernocicepÃÃo mecÃnica utilizando uma versÃo eletrÃnica (VonFrey). Para as anÃlises estatÃsticas foi utilizado o teste ANOVA/Bonferroni ou Kruskal Wallis/Dunns; p <0,05 foi considerado significante. Este estudo foi aprovado pela ComissÃo de Ãtica em Pesquisas com Animais da UFC - CEPA (38/14). HdLP 50 mg/kg i.v. apresentou uma diminuiÃÃo significativa na contagem de leucÃcitos, nos nÃveis de MPO e na liberaÃÃo de medidores inflamatÃrios (NO, IL-1&#946;, e IL-6). TambÃm foi observado uma diminuiÃÃo do edema e no dano à membrana sinovial. Na hipernocicepÃÃo mecÃnica os grupos (HdLP 50 mg/kg i.v. e 50 mg/kg v.o.) apresentaram um aumento no limiar nociceptivo. HdLP apresenta atividade antinociceptiva e anti-inflamatÃria no modelo de artrite induzida por Zy. O efeito parece estar relacionado com a diminuiÃÃo da migraÃÃo de neutrÃfilos e da liberaÃÃo de mediadores inflamatÃrios, reduzindo o dano na membrana sinovial e a hipernocicepÃÃo. / Himatanthus drasticus is a laticiferous plant of the family Apocynaceae found in South America and popularly known as janaguba. Your latex is known as "janaguba milk" and has several pharmacological activities. This work aimed to study the effect of isolated proteins from Himatanthus drasticus latex (HdLP) zymosan (Zy) induced arthritis. Arthritis was induced in male Swiss mice (n = 6) by administering 0.1 mg Zy intra-articular. The animals were treated with HdLP (5 and 50 mg/kg i.v.) or Saline i.v. 1 hour after the Zy and HdLP (50 mg/kg v.o.) or Dexamethasone (2 mg/kg s.c.) 1 hour before Zy. After six hours of induction the animals were euthanized, the joint washing carried, and collected for leukocyte count, determination of the myeloperoxidase (MPO) activity and inflammatory mediators (NO, TNF-&#945;, IL-1&#946;, IL-6 and IL-10). The edema was evaluated by measuring the diameter articular and the vascular permeabilitym through extravasation. In addition, we evaluated the effect of HdLP on synovial inflammation as well the mechanical hypernociception. For statistical analysis we used the ANOVA/Bonferroni or Kruskal Wallis/Dunns; p <0.05 considered significant. This study was approved by the Ethics Committee on Animal Research of the UFC - CEPA (38/14). HdLP (50 mg/kg i.v.) a significant decrease on the leukocyte count in MPO activity and levels (NO, IL-1&#946;, and IL-6). It was also observed a decrease in swelling and damage to the synovial membrane. The nociceptive threshold was increased by HdLP 50 mg/kg i.v. and 50 mg/kg v.o. HdLP has antinociceptive and anti-inflammatory activity in the model of arthritis induced by Zy. The effect seems to be related to the decreased migration of neutrophils and the release of inflammatory mediators, reducing damage to the synovial membrane and hypernociception.

Philosophiae Doctor - PhD / The Apocynaceae family is well known for its potential anticancer activity. Pleiocarpamine isolated from the Apocynaceae family and a constituent of Pleiocarpa pycnantha has been reported for anti-cancer activity. Prompted by a general growing interest in the pharmacology of Apocynaceae species, most importantly their anticancer potential together with the fact that there is scanty literature on the pharmacology of P. pycnantha, we explored the anticancer potential of the ethanolic extract of P. pycnantha leaves and constituents. Three known triterpenoids, ursolic acid C1, 27-E and 27-Z p-coumaric esters of ursolic acid C2, C3 together with a new triterpene 2,3-seco-taraxer-14-en-2,3-lactone (pycanocarpine C5) were isolated from an ethanolic extract of P. pycnantha leaves. The structure of C5 was unambiguously assigned using NMR, HREIMS and X-ray crystallography. The cytotoxic activities of the compounds were evaluated against HeLa, MCF-7, KMST-6 and HT-29 cells using the WST-1 assay. Ursolic acid C1 displayed potent cytotoxic activity against HeLa, HT-29 and MCF-7 cells with IC50 values of 5.06, 5.12 and 9.51 μg/ml respectively. The new compound C5 and its hydrolysed open-chain derivative C6 were selectively cytotoxic to the breast cancer cell line, MCF-7 with IC50 values 10.99 and 5.46 μg/ml respectively. We further investigated the mechanism of action of the isolated compounds using specific markers of apoptosis. Exposure of C1-C6 (12.5 μg/ml) to HeLa cells showed a significant increase in reactive oxygen species (ROS) production with the exception of C5. On HT-29, C1, C4, C5 and C6 at 25 μg/ml increased ROS production while on MCF-7 using the same dose, only C5 and C6 caused a significant increase in ROS production compared with a control at P< 0.05. The result on caspase 3/7 activation showed that C1 and C2 (50 μg/ml) caused a marked increase in caspase 3/7 activity between 6-24 h on HeLa cells while only C1 (50 μg/ml) showed a significant increased caspase 3/7 activity on both HT-29 and MCF-7 cell lines when compared with the control, P< 0.05. Some selected compounds were further investigated for their dose-response on caspase 3/7 activity on HeLa and MCF-7 cells. Compounds C2 and C3 activated caspase 3/7 at 12.5 and 25 μg/ml respectively, while on MCF-7only C6 significantly increased caspase 3/7 activity within 24 h of treatment when compared with an untreated control. The result of time -dependent caspase 9 activity showed that C1, C2 and C3 caused an increased activity on HeLa cells between 6-12 h, while only C1 activated caspase 9 on HT-29 cells (3-24 h) and MCF-7 (6-24 h). The dose-response caspase 9 activity showed a significant increase in activation for C6 (12 and 25 μg/ml) on HeLa and C5 (25 μg/ml) on HT-29 cells. All isolated compounds inhibited Topoisomerase I when compared with Camptothecin. Compounds C1-C6 could induce apoptosis on cancer cell lines through an intrinsic pathway and topoisomerase 1 inhibition. This is the first report on the isolation of a 2,3-seco-taraxerene derivative from Apocynaceae family and the anticancer activity of Pleiocarpa pycnantha constituents.

published_or_final_version / abstract / Biological Sciences / Doctoral / Doctor of Philosophy

This research consists on the taxonomic treatment of the Apocynaceae s.l. from the restingas of Pará. Results presented consist on the elaboration of descriptions, illustrations and dycotomic keys of the species occurring within the study area, aiming to make their identification easier. In addition to that, there are information about geographic distribution, taxonomic commentary, flowering and fructification period, and species habitat. Apocynaceae s.l. from the restingas of Pará are represented by twelve species distributed among three subfamilies, eleven genera and seven tribes, presented here: Allamanda cathartica L., Blepharodon pictum (Vahl) W.D. Stevens, Calotropis procera (Aiton) W.T. Aiton, Ditassa hispida (Vell.) Fontella, Funastrum clausum (Jacq.) Schltr., Himatanthus articulatus (Vahl.) Woodson, Mandevilla hirsuta (Rich.) K. Schum, Mandevilla scabra (Hoffmanns, ex Roem. & Schult.) K. Schum., Marsdenia macrophylla (Humb. & Bonpl. ex Schult) E. Fourn., Odontadenia nitida (Vahl) Müll. Arg., Rhabdadenia biflora (Jacq.) Müll. Arg., and Tabernaemontana angulata Mart. ex Müll. Arg. The most representative subfamily with five species was Asclepideae R. Br. Ex Burnett, followed by Apocynoideae Burnett with four species and Rauvolfioideae Kostel, with three species. The most representative genus was Mandevilla Lindl, with two species. Himatanthus articulatus shows the highest number of samples and Calotropis procera and Allamanda cathartica are invasive species, the former being exotic and the latter being a new register for the restingas of Pará. The highest number of species was harvested within formation campo de dunas, followed by formation aberta de moitas. / Este trabalho consiste no tratamento taxômico das Apocynaceae s.l. das restingas paraenses. Os resultados apresentados consistem na elaboração de descrições, ilustrações e chaves dicotômicas das espécies ocorrentes na área de estudo, com a finalidade de facilitar a identificação das mesmas. Além disso, são fornecidas informações adicionais sobre distribuição geográfica, comentários taxonômicos, período de floração e frutificação e hábitat das espécies. As Apocynaceae s.l., nas restingas do estado do Pará estão representadas por 12 espécies distribuídas em 11 gêneros, sete tribos e três subfamílias, apresentadas a seguir: Allamanda cathartica L., Blepharodon pictum (Vahl) W.D. Stevens, Calotropis procera (Aiton) W.T. Aiton, Ditassa hispida (Vell.) Fontella, Funastrum clausum (Jacq.) Schltr., Himatanthus articulatus (Vahl) Woodson, Mandevilla hirsuta (Rich.) K. Schum., Mandevilla scabra (Hoffmanns. ex Roem. & Schult.) K. Schum., Marsdenia macrophylla (Humb. & Bonpl. ex Schult.) E. Fourn., Odontadenia nitida (Vahl) Müll. Arg., Rhabdadenia biflora (Jacq.) Müll. Arg., e Tabernaemontana angulata Mart. ex Müll. Arg. A subfamília mais representativa com cinco espécies foi a Asclepiadoideae R. Br. ex Burnett, seguida da Apocynoideae Burnett, com quatro e Rauvolfioideae Kostel, com três. O gênero mais representativo foi Mandevilla Findl., com duas espécies. Himatanthus articulatus é a espécie que mais se destaca em número de amostras e Calotropis procera e Allamanda cathartica são espécies invasoras, sendo a primeira exótica e a segunda, novo registro para as restingas do estado do Pará. Na formação vegetal Campo de Dunas foi coletado o maior número de espécies, seguida da Formação aberta de moitas.

Thesis (Ph. D.)--University of Hong Kong, 2008. / Also available in print.