Orientadores : Jose Francisco Hofling, Mary Anny Foglio / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-08T15:40:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mardegan_RitadeCassia_D.pdf: 1623661 bytes, checksum: 6efd1058d06bb35d4bbde2640edda2e8 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: O uso de extratos vegetais com fins medicinais é uma das mais antigas formas de prática medicinal da humanidade. Visto que nos últimos anos, a freqüência das infecções fúngicas sistêmicas, principalmente as oportunistas invasivas, têm crescido drasticamente o objetivo deste estudo foi: 1 - testar a atividade dos extratos (diclorometanico e metanólico) de Rosmarinus officinalis, Mentha piperita, Casearia sylvestris, Arctium lappa, Arrabidaea chica e Tabebuia avellanedae para determinar o potencial antifúngico em cepas padrão de Cândida spp (C. albicans, C. dubliniensis, C. parapsilosis, C. tropicalis e C. krusei) e em amostras clinicas de Candida albicans através da determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM) e; 2 - avaliar a capacidade desses extratos em inibirem a atividade das proteinases produzidas por C. albicans, um dos mais importantes fatores de virulência dessa espécie. Foram incluídos nos testes para analisar a inibição da atividade proteolítica os inibidores de protease (Amprenavir e Ritonavir) e a Pepstatina A. Nossos resultados demonstraram CIMs variadas em relação a sensibilidade de cada cepa. O extrato metanólico de Arrabidaea chica foi o mais efetivo na inibição do crescimente de várias espécies de Candida, inclusive em relação aos isolados clinicos de C. albicans, seguido dos extratos diclorometanicos de Arctium lappa e Mentha piperita. Nos testes de inibição das proteinases de Candida albicans os que se destacaram foram os extratos diclorometanico de Arrabidaea chica, Casearia sylvestris e Mentha piperita. Desta forma concluímos que o extrato metanólico de A. chica e os extratos diclorometanicos de A. lappa, M. piperita e C. sylvestris obtiveram relevante atividade antifúngica in vitro contra uma variedade de espécies de Candida sendo promissores como agente antifúngico. / Abstract: The use of plants as medicinal substances is one of the most old medicine practices of the humanity. In the last years, the frequency of systemic yeast infection, mainly the opportunistic, has been increased. The overall aims of the present study were: 1 - to test the extract activity (dichloromethane and methanolic) from Rosmarinus officinalis, Mentha piperita, Casearia sylvestris, Arctium lappa, Arrabidaea chica and Tabebuia avellanedae to determine the antifungal activity using strains of Candida spp (C. albicans, C. dubliniensis, C. parapsilosis, C. tropicalis e C. krusei) and in clinical isolates of C. albicans by determination of minimum inhibitory concentration (MIC) and 2 - evaluate the capacity of the extracts to inhibit the activity of proteinases produced by C. albicans, one of the most important virulence factor of these specie. It has been included as a control to evaluate the inhibition of proteolitic activity Amprenavir e Ritonavir and Pepstatina A. Our results showed a variety of MIC patterns according to the strain sensibility. The methanolic extract of Arrabidaea chica was the most effective in inhibiting the growth of a variety of Candida species, including the clinical isolates of C. albicans, followed by dichloromethane extract of Arctium lappa and Mentha piperita. In relation of the proteinases inhibitory tests from C. albicans the most effective extracts tested were dichloromethane of Arrabidaea chica, Casearia sylvestris and Mentha piperita. In conclusion the methanolic extract from A. chica and dichloromethane extracts from A. lappa, M. piperita e C. sylvestris have relevant antifungal activity against a range of Candida specie in vitro and are promising antifungal agents. / Doutorado / Microbiologia e Imunologia / Mestre em Biologia Buco-Dental

Foi desenvolvida uma nova metodologia de análise de extratos e partes de plantas medicinais, via espectrometria de massas (MS) com infusão direta de amostra, técnica analítica denominada fingerprinting ou \"impressão digital\" química. Essa abordagem, que envolve mínimo prepraro de amostra, foi aplicada visando detectar as condições e as épocas adequadas para cultivo e/ou coleta de produtos naturais, permitindo a obtenção de uma matéria-prima vegetal com princípios ativos e concentrações padronizadas, assim como auxiliar no reconhecimento e na compreensão das interações ecológicas do vegetal com seu ambiente. A metodologia analítica envolveu MS com fonte de ionização por electrospray (ESI) nos modos positivo e negativo e experimentos de fragmentação de íons de interesse (MS/MS) por inserção direta do extrato diluído e frações ativas de Maytenus ilicifolia, de extratos de Arrabidaea chica de diferentes acessos (origens geográficas), assim como óleos de Pterodon pubescens e as amêndoas e o pedúnculo de diferentes clones de Anacardium occidentale. A caracterização das amêndoas e pedúnculos de A. occidentale, assim como de seus respectivos clones por meio do perfil de seus constituintes químicos foi realizada com sucesso. Na extração da amêndoa empregando-se éter, foi possível caracterizar o perfil de triacilgliceróis (TAG) por ESI(+) e ácidos graxos livres por ESI(-). Na extração do suco do pedúnculo empregando-se isopropanol, foram detectados íons referentes aos ácidos anacárdicos por ESI(-). Foram avaliados os principais parâmetros que possibilitam a ionização por ESI, tais como voltagens do capilar, cone e do cone extrator, e a influência de cada um destes parâmetros no perfil obtido nos espectros de ESI(-) do suco. Para A. chica a metodologia mostrou-se eficiente na bioprospecção de antocianidinas e dentre os nove acessos analisados, foi possível indicar aquele que produziu maior quantidade de material corante em relação a biomassa. Também foram avaliadas metodologias de extração por tratamento enzimático, o qual ocasionou aumento da intensidade de agliconas, provavelmente devido à hidrólise das antocianinas. A ocorrência de hidrólise também foi observada na em diferentes metodologias de secagem das folhas, principalmente na secagem realizada ao sol com borrifação de água. Houve variação sazonal na produção de metabólitos secundários, como pudemos observar nos experimentos realizados com amostras coletadas de 2007 a 2009. Para M. ilicifolia, foi possível caracterizar uma série de compostos relacionados à atividade antiúlcera já conhecidos da literatura, como dulcitol, catequina e derivados e flavonóides glicosilados. A metodologia proposta foi aplicada ainda na avaliação do melhoramento agrícola de M. ilicifolia por comparação dos perfis dos compostos identificados. A metodologia desenvolvida para análise direta de P. pubescens mostrou-se eficiente na detecção e identificação de compostos bioativos, possibilitando a caracterização rápida e sem preparo de amostra do óleo da semente. Em conclusão, a técnica de fingerprinting MS permite de maneira rápida, informativa e com mínimo preparo que amostras, que produtos naturais sejam caracterizados e tenham sua qualidade monitorada. / A new analytical methodology for the analysis of medicinal plant parts and extracts via direct infusion mass spectrometry (MS) has been developed. This analytical approach, named chemical fingerprinting, involves minimal sample preparation and was applied in this work with the aim to detect optimal culture conditions, culture periods and harvest times for obtaining raw natural products with highest active principle and concentrations, as well as to understand and recognizing ecological interactions between plant and its surrounding environment. The analytical methodology included MS with electrospray ionization (ESI) in the positive (+) and negative (-) modes, as well as fragmentation of ions of interest (MS/MS) experiments. The diluted extract and active fractions of Maytenus ilicifolia, extracts of Arrabidaea chica from diverse geographic origins (accesses), as well as the oil from Pterodon pubescens and nuts of various clones of Anacardium occidentale were introduced by direct injection. Characterization of nuts and stems from A. occidentale, as well as of its respective clones by their chemical constituents has been successfully performed. After ether extraction of nuts, it was possible to characterize the triacylglycerols (TAG) by ESI(+) and free fatty acids by ESI (-). After extraction of stem juice with isopropanol, diverse ions were identified as anacardic acids by ESI(-). Also, parameters influencing to the ionization process, such as capillary voltage, cone voltage and cone extraction voltage, have been evaluated for the stem juice at ESI(-). For A. chica, the proposed methodology has been proven to efficiently bioprospect the anthocyanins, and among the nine accesses evaluated, it has been possible to identify the one producing higher amounts of dying material proportionally to the biomass. We also evaluated the enzymatic treatment extraction methodology, which resulted in the increase of aglycones content, probably due to anthocyanins hydrolysis. The occurrence of hydrolysis has been also observed when leaves have been water-sprayed while drying in the sun. Seasonal influence on the production of secondary metabolite has been observed in the samples collected on the experiments performed from 2007 to 2009. For M. ilicifolia, it has been possible to characterize a series of compounds related to the anti ulcer activity and already reported in the literature, such as dulcitol, catechin and derivatives and flavonoid glycosides. The proposed methodology has been applied in the evaluation of genetic improvement of M. ilicifolia by comparing the identified compounds profiles. The developed methodology aimed at direct analyzing P. pubescens has successfully detected and identified bioactive compounds of the seed oil, allowing the fast characterization. In conclusion, the proposed MS fingerprinting methodology allows in an informative, straightforward and with minimal sample preparation the chemical characterization and quality control of natural products.

Foi desenvolvida uma nova metodologia de análise de extratos e partes de plantas medicinais, via espectrometria de massas (MS) com infusão direta de amostra, técnica analítica denominada fingerprinting ou \"impressão digital\" química. Essa abordagem, que envolve mínimo prepraro de amostra, foi aplicada visando detectar as condições e as épocas adequadas para cultivo e/ou coleta de produtos naturais, permitindo a obtenção de uma matéria-prima vegetal com princípios ativos e concentrações padronizadas, assim como auxiliar no reconhecimento e na compreensão das interações ecológicas do vegetal com seu ambiente. A metodologia analítica envolveu MS com fonte de ionização por electrospray (ESI) nos modos positivo e negativo e experimentos de fragmentação de íons de interesse (MS/MS) por inserção direta do extrato diluído e frações ativas de Maytenus ilicifolia, de extratos de Arrabidaea chica de diferentes acessos (origens geográficas), assim como óleos de Pterodon pubescens e as amêndoas e o pedúnculo de diferentes clones de Anacardium occidentale. A caracterização das amêndoas e pedúnculos de A. occidentale, assim como de seus respectivos clones por meio do perfil de seus constituintes químicos foi realizada com sucesso. Na extração da amêndoa empregando-se éter, foi possível caracterizar o perfil de triacilgliceróis (TAG) por ESI(+) e ácidos graxos livres por ESI(-). Na extração do suco do pedúnculo empregando-se isopropanol, foram detectados íons referentes aos ácidos anacárdicos por ESI(-). Foram avaliados os principais parâmetros que possibilitam a ionização por ESI, tais como voltagens do capilar, cone e do cone extrator, e a influência de cada um destes parâmetros no perfil obtido nos espectros de ESI(-) do suco. Para A. chica a metodologia mostrou-se eficiente na bioprospecção de antocianidinas e dentre os nove acessos analisados, foi possível indicar aquele que produziu maior quantidade de material corante em relação a biomassa. Também foram avaliadas metodologias de extração por tratamento enzimático, o qual ocasionou aumento da intensidade de agliconas, provavelmente devido à hidrólise das antocianinas. A ocorrência de hidrólise também foi observada na em diferentes metodologias de secagem das folhas, principalmente na secagem realizada ao sol com borrifação de água. Houve variação sazonal na produção de metabólitos secundários, como pudemos observar nos experimentos realizados com amostras coletadas de 2007 a 2009. Para M. ilicifolia, foi possível caracterizar uma série de compostos relacionados à atividade antiúlcera já conhecidos da literatura, como dulcitol, catequina e derivados e flavonóides glicosilados. A metodologia proposta foi aplicada ainda na avaliação do melhoramento agrícola de M. ilicifolia por comparação dos perfis dos compostos identificados. A metodologia desenvolvida para análise direta de P. pubescens mostrou-se eficiente na detecção e identificação de compostos bioativos, possibilitando a caracterização rápida e sem preparo de amostra do óleo da semente. Em conclusão, a técnica de fingerprinting MS permite de maneira rápida, informativa e com mínimo preparo que amostras, que produtos naturais sejam caracterizados e tenham sua qualidade monitorada. / A new analytical methodology for the analysis of medicinal plant parts and extracts via direct infusion mass spectrometry (MS) has been developed. This analytical approach, named chemical fingerprinting, involves minimal sample preparation and was applied in this work with the aim to detect optimal culture conditions, culture periods and harvest times for obtaining raw natural products with highest active principle and concentrations, as well as to understand and recognizing ecological interactions between plant and its surrounding environment. The analytical methodology included MS with electrospray ionization (ESI) in the positive (+) and negative (-) modes, as well as fragmentation of ions of interest (MS/MS) experiments. The diluted extract and active fractions of Maytenus ilicifolia, extracts of Arrabidaea chica from diverse geographic origins (accesses), as well as the oil from Pterodon pubescens and nuts of various clones of Anacardium occidentale were introduced by direct injection. Characterization of nuts and stems from A. occidentale, as well as of its respective clones by their chemical constituents has been successfully performed. After ether extraction of nuts, it was possible to characterize the triacylglycerols (TAG) by ESI(+) and free fatty acids by ESI (-). After extraction of stem juice with isopropanol, diverse ions were identified as anacardic acids by ESI(-). Also, parameters influencing to the ionization process, such as capillary voltage, cone voltage and cone extraction voltage, have been evaluated for the stem juice at ESI(-). For A. chica, the proposed methodology has been proven to efficiently bioprospect the anthocyanins, and among the nine accesses evaluated, it has been possible to identify the one producing higher amounts of dying material proportionally to the biomass. We also evaluated the enzymatic treatment extraction methodology, which resulted in the increase of aglycones content, probably due to anthocyanins hydrolysis. The occurrence of hydrolysis has been also observed when leaves have been water-sprayed while drying in the sun. Seasonal influence on the production of secondary metabolite has been observed in the samples collected on the experiments performed from 2007 to 2009. For M. ilicifolia, it has been possible to characterize a series of compounds related to the anti ulcer activity and already reported in the literature, such as dulcitol, catechin and derivatives and flavonoid glycosides. The proposed methodology has been applied in the evaluation of genetic improvement of M. ilicifolia by comparing the identified compounds profiles. The developed methodology aimed at direct analyzing P. pubescens has successfully detected and identified bioactive compounds of the seed oil, allowing the fast characterization. In conclusion, the proposed MS fingerprinting methodology allows in an informative, straightforward and with minimal sample preparation the chemical characterization and quality control of natural products.

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No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_DesenvolvimentoCaracterizacaoTecnologica.pdf: 2723623 bytes, checksum: 3e840dbe1764d87fc2b9f7df3fa203eb (MD5) Previous issue date: 2012-08 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O presente trabalho teve como objetivo o desenvolvimento tecnológico de formas farmacêuticas particuladas obtidas a partir de solução extrativa (tintura) de partes aéreas de Arrabidea chica (pariri), empregando-se a secagem por spray drying. Investigou-se a influencia de adjuvantes tecnológicos (maltodextrina e goma arábica, isoladas e em associação) no desempenho da secagem e nas propriedades dos produtos secos. A tintura de A. chica foi concentrada em evaporador rotativo obtendo-se o extrato concentrado (EC) o qual foi adicionado dos adjuvantes tecnológicos e submetidos a secagem em spray drying. O processo de secagem foi avaliado através da determinação da recuperação de produto e eficiência térmica. As micropartículas (ES) foram avaliadas quanto a umidade residual; atividade de água; diâmetro médio das partículas; densidade bruta, densidade de compactação e índices de fluidez, perfil térmico e espectroscópico por IV. O monitoramento químico foi realizado por espectrofotometria UV-vis, utilizando como marcador químico os flavonoides (Ft), polifenois (Pt) e taninos totais (Tt) presentes na A. chica. A atividade antioxidante do produto foi avaliada pelo método DPPH e quimioluminescência. O teor de umidade nas ES teve seus valores na faixa de 2,77 a 4,69% estando dentro do especificado. Os valores de atividade de água ficaram abaixo de 0.2, que e favorável a estabilidade físico-química e microbiológica. O percentual de degradação dos marcadores químicos nas ES em relação ao EC ficou na faixa de 24 a 46% para Ft, de 48 a 56% para Pt, e de 53 a 72% para Tt, que pode estar associada a degradação térmica e oxidação dos compostos. Na analise por CCD, a tintura, o EC e os ES apresentaram os padrões luteolina e canferol mostrando que o processo de secagem não causou a perda destes compostos. A distribuição granulométrica mostra que os ES apresentaram diâmetro médio em torno de 10 μm sendo que as partículas apresentaram morfologia esférica e algumas com superfície rugosa. Através da determinação dos índices de fluidez e de acomodação dos pós obteve-se resultados característicos de pós com baixa fluidez e características de compressibilidade. A atividade antioxidante dos ES apresentou valores entre 32,17 a 44,53 μg/mL. Na analise colorimétrica, os parâmetros comprovaram a coloração vermelha-amarelada. A recuperação de produto ficou na faixa de 60 a 65% e os valores de eficiência térmica ficaram entre 36 % e 39%. As analises de espectroscopia na região do infravermelho e analises térmicas se mostraram ferramentas importantes na caracterização físico-química e controle de qualidade dos sistemas micropartículados obtidos. / This work aimed the technological development of particulate dosage forms obtained from extraction solution (tincture) from aerial parts of Arrabidea chica (Pariri), using the spray drying. We investigated the influence of processing aids (maltodextrin and arabic gum, alone and in a mixer) in drying performance and product properties. A. chica tincture was concentrated on a rotary evaporator to obtain the concentrated extract (CE) which was added to the processing aids and subjected to spray drying. The drying process was assessed through determination of product recovery and thermal efficiency. Microparticles (ES) were evaluated for residual moisture, water activity, average particle diameter, bulk density, packing density and flow properties, thermal profile and IR spectroscopy. The chemical monitoring was performed by UV-vis spectrophotometer, using chemical marker flavonoids (Ft), polyphenols (Pt) and total tannins (Tt) in the A. chica. The antioxidant activity of the product was evaluated by DPPH and chemiluminescence. The moisture content of the ES had their values in the range 2.77 to 4.69% being within the specified. The water activity values were below 0.2, which supports the physical and chemical stability and microbiological of dried products. The percentage of degradation of chemical markers in ES regard to CE was in the range 24-46% for Ft, 48-56% for Pt and 53-72% to Tt, which may be associated with thermal degradation and oxidation of the same compounds. In TLC analysis, tincture, CE and ES showing the luteolin and kaempferol patterns indicate that the drying process does not cause the loss of these compounds. The particle size distribution shows that the ES showed an average diameter of about 10 μm and the particles had a spherical morphology and with some rough surface. The flowability indices and accommodation of the powders obtained results are typical of powders with low flowability and compressibility characteristics. The antioxidant activity of ES presented values between 32.17 to 44.53 mg / mL. In the colorimetric analysis, the parameters proved the yellowish-red color. The recovery of product was in the range 60-65% and the thermal efficiency values were between 36% and 39%. Analyses of infrared spectroscopy and thermal analysis proved important tools in the physico-chemical characterization and quality control systems microparticulate obtained.

Orientadores: João Ernesto de Carvalho, Mary Ann Foglio, Lucia Tasca Gois Ruiz / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-11T14:23:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Jorge_MichellePedroza_M.pdf: 2723510 bytes, checksum: d0521f341cbca8308beb772206b9dd69 (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: As folhas de Arrabidaea chica (Humb. & Bonpl.) Verlot (Bignoniaceae), popularmente conhecida como Crajiru, são utilizadas na medicina popular como cicatrizante, antiinflamatória e no tratamento de cólicas intestinais. O presente trabalho descreve os efeitos cicatrizante, antiinflamatório, antiulcerogênico e antioxidante do extrato bruto metanólico das folhas de Arrabidaea chica. O extrato estimulou o crescimento de fibroblastos, in vitro, de forma proporcional à concentração utilizada com atividade similar à alantoina. Também estimulou a produção in vitro de colágeno de maneira semelhante ao ácido ascórbico. Nos ensaios de DPPH e Folin-Ciocalteau, o extrato bruto apresentou moderada ação antioxidante. A aplicação tópica do extrato bruto em modelos experimentais do processo cicatrizante in vivo reduziu em 96% a área cutânea ulcerada após dez dias de tratamento, enquanto o grupo salina apresentou redução de somente 36%. Em modelos de úlcera gástrica em ratos induzida por etanol, o extrato bruto de A. chica reduziu o índice de lesões em 90%. Apesar do uso popular em processos inflamatórios, esse extrato não reduziu o edema de pata induzido por carragenina nem o edema de orelha induzido por óleo de cróton em ratos. Esses resultados permitem concluir que o extrato bruto metanólico das folhas secas de Arrabidaea chica possui princípios ativos que ativam o processo cicatricial, através da proliferação de fibroblastos e síntese de colágeno, confirmando o uso popular cicatrizante desta espécie / Abstract: Arrabidaea chica (Humb. & Bonpl.) Verlot (Bignoniaceae) leaves, popularly known as Crajiru, are employed in folk medicine for wound healing, anti-inflammatory, and intestinal colic. Herein we report the in vitro and in vivo healing, antulcerogenic, antiinflamatory and antioxidant activities of Arrabidaea chica crude methanolic extracts. A. chica crude methanolic extract stimulated cell growth in a concentration dependent way and demonstrated similar effect as allantoin and vitamin C increasing in vitro collagen production. Also, A. chica crude extract demonstrated moderate scavenger effect (DPPH assay) and moderate reducing effect (Folin-Ciocalteau reagent). Wound healing experimental models in rats reduced in 96% the wounds size after ten days treatment, whereas saline group showed only 36% wound healing. Antiulcerogenic experimental models in rats showed gastroprotective activity, redution of 90%, by measuring ulceration lesion index (ULI). The Arrabidaea chica crude extract showed no antiinflamatory activity. The crude extract¿s efficiency seems to involve fibroblast growing stimulus and collagen synthesis both in vitro and in vivo, beyond the moderate scavenging activity and antiulcerogenic activity, corroborating with the folk use of this plant species / Mestrado / Ciencias Basicas / Mestre em Clinica Medica

Orientador: Edson Rosa Pimentel / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-21T05:39:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Aro_AndreaAparecidade_D.pdf: 5514361 bytes, checksum: 938312e7fcf5c6bdd9bba11064c61b15 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: A utilização de extratos vegetais com atividades farmacológicas pode ser promissora no tratamento de lesões tendíneas, considerando a presença de princípios ativos que estimulam a síntese de componentes da matriz extracelular (MEC). Portanto, o presente estudo teve como objetivo investigar após 7, 14 e 21 dias da lesão, os efeitos da aplicação tópica dos extratos de A. vera e A. chica sobre tendões parcialmente transeccionados de ratos. Os grupos tratados com o extrato da A. chica foram denominados A7, A14 e A21 (controles S7, S14 e S21), e após tratamento com a A. vera foram denominados Av7, Av14 e Av21 (controles B7, B14 e B21). Foram realizadas análises bioquímicas tais como Western blotting, zimografia e dosagens de hidroxiprolina, de proteínas não colagênicas (PNCs) e de glicosaminoglicanos (GAGs); assim como análises estruturais, ultraestruturais e funcionais. Após aplicação do extrato da A. chica, a concentração de PNCs foi menor em A7 e a de hidroxiprolina foi maior em A7 e A21, em relação aos controles. Considerando a MMP-9, menor quantidade foi detectada no grupo A14 comparado ao grupo S14. As isoformas latente, intermediária e ativa da MMP-2 foram observadas em todos os grupos, porém maiores quantidades das isoformas latente e intermediária foram encontradas em A21. Os resultados de Western blotting mostraram menor quantidade de colágenos tipos I e III em A7 comparado ao controle. Maior quantidade de dermatan sulfato (DS) foi detectada em A14, e quantidade inferior de DS e condroitin sulfato (CS) foi observada em A21 comparada ao S21. As medidas de birrefringência detectaram maior organização das fibras de colágeno no grupo A21 em relação ao controle, e as análises ultraestruturais mostraram muitos fragmentos de colágeno na região transeccionada nos grupos S7 e A7. A análise do CatWalk mostrou que os animais tratados com A. chica, exibiram maior pressão de contato das patas durante a marcha no 7° dia. Considerando a aplicação de A. vera, foi observada em SDS-PAGE banda menos intensa referente ao colágeno em Av14, confirmado por Western blotting. O grupo Av21 apresentou maior concentração de PNCs comparado ao seu controle. Na dosagem de hidroxiprolina, os grupos Av7 e Av14 apresentaram maiores concentrações, ao passo que Av21 apresentou valor inferior ao controle. O grupo Av14 apresentou maior concentração de GAGs sulfatados e menor quantidade de DS em relação ao controle. Menor quantidade de MMP-9 foi encontrada em Av14, e menores quantidades das isoformas latente e intermediária da MMP-2 foram observadas em Av7 e Av14 em relação aos controles. Maior quantidade da isoforma ativa da MMP-2 foi observada em Av21 comparado a B21. As medidas de birrefringência detectaram maior organização das fibras de colágeno em Av14 em relação ao controle. Ao passo que as medidas de dicroísmo linear realizadas nos cortes corados com azul de toluidina, mostraram menor organização dos GAGs em Av14 comparado ao controle. Nossa conclusão é que a aplicação tópica dos extratos da A. chica e da A. vera é efetiva na síntese e organização de componentes da MEC durante o processo de reparo / Abstract: The use of plant extracts bearing pharmacological activities may be promising in the treatment of tendon injuries, considering the presence of active principles that stimulate the synthesis of extracellular matrix components (ECM). Therefore, this study aimed to investigate after 7, 14 and 21 days of injury, the effects of topical application of extracts of A. vera and A. chica on the healing of partially transected tendons of rats. The groups treated with the extract of A. chica were called A7, A14 and A21 (controls S7, S14 and S21), and after treatment with A. vera were called Av7, Av14 and Av21 (controls B7, B14 and B21). Biochemical analysis were performed such as Western blotting, zymography and quantification of hydroxyproline, non-collagenous proteins (NCPs) and glycosaminoglycans (GAGs); as well as structural, ultrastructural and functional analysis. After application of the extract of A. chica, the concentration of non-collagenous proteins (NCPs) was lower in A7 and hydroxyproline was higher in A7 and A21, compared to controls. Considering the MMP-9, lower amount was found in A14 compared to S14. The latent, intermediate and active isoforms of MMP-2 were observed in all groups, but larger quantities of latent and intermediate isoforms were found in A21. The results of Western blotting showed a lower amount of collagen types I and III compared to the control A7. Higher amount of dermatan sulphate (DS) was detected in A14 and lower amounts of DS and chondroitin sulfate (CS) were observed in A21 compared to S21. The birefringence measurements showed a higher organization of collagen fibers in the A21 group compared to control, and ultrastructural analysis showed many fragments of collagen in the transected region of groups S7 and A7. Analysis of the Catwalk showed that animals treated with A. chica exhibited a higher contact pressure of the legs during walking on the 7th day. Considering the application of A. vera, less intense band related to collagen was observed on SDS-PAGE in Av14, confirmed by Western blotting. The group Av21had a higher concentration of NCPs compared to the control. In the dosage of hydroxyproline, Av7 and Av14 groups had higher concentrations in relation to their controls, while Av21 showed lower value than control group. The group Av14 had a higher concentration of glycosaminoglycans and lower amount of DS compared to control. Lower amount of MMP-9 was found in Av14, and lower amounts of intermediate and latent isoforms of MMP-2 were observed in Av7 and Av14 compared to controls. A higher amount of the active isoform of MMP-2 was observed in Av21 compared to B21. The birefringence measurements showed a higher organization of collagen fibers in Av14 compared to control. While linear dichroism measurements performed on sections stained with toluidine blue, showed lower organization of glycosaminoglycans in Av14 compared to control. Our conclusion is that the topical application of extracts of A. chica and A. vera is effective in the synthesis and organization of ECM components during the repair process / Doutorado / Biologia Celular / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Made available in DSpace on 2015-04-11T13:54:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 vitor renato.pdf: 768606 bytes, checksum: adbc3adac1d4f5dee180dddd0e941803 (MD5) Previous issue date: 2011-02-28 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Crajiru is a shrub of the family Bignoniaceae found throughout the Amazon. Its scientific name is Arrabidaea chica B. Verl. and is popularly known as carajuru, pariri, cipó cruz, calajouru, karajurana, krawiru. It has anti-inflammatory, healing, anti-anemic, and anti-hemorrhagic properties. The variety used was the AC1, for being the most commonly found and used by the population. Was made an extractive solution 7.5 % from AC1, and its extract was prepared in a Spray Drier. With dry extract we realized the biological tests. The Comparative Thin Layer Chromatography (CTLC) and total tannins test was realized with the extractive solution and dry extract to verify the presence of quercetin and gallic acid, and tannins, respectively. To analyze the cytotoxicity we made the hemolisys test, using mice blood, the Alamar Blue and Trypan Blue assays using NIH-3T3, in different extract concentrations to determinate the IC50. The antioxidant activity tests (DPPH scavenging assay and NIH-3T3 cellular antioxidant activity) was made. We choose the NIH-3T3 Comet assay to analyze the genotoxicity. We detected the chromosome and mitotic apparatus damages induced by A. chica extract using the Micronucleus assay. The TLC showed probable presence of quercetin in lows concentrations in both extractive solution and dry extract, however, we could not detect gallic acid. Was detected 1.5 g% and 1.3 g% of tannins in extractive solution and dry extract, respectively. The dry extract was not significantly cytotoxic nor hemolytic on the realized tests and induced proliferation on NIH-3T3. We didn t find any antioxidant activity and there was not significant damage on fibroblasts DNA on Comet assay. We performed the micronucleus test to analyze the presence of Micronucleated Polyichromatic Erythrocytes (PCEMN s) which ranged from 14 to 18 in 24 h and 48h of exposition, while the positive control showed 322 and 288 PCEMN s in the same treatment period. The analysis on TLC and total tannins tests showed equivalents results from extractive solution and dry extract, indicating that dry extract used in in vitro and in vivo tests didn t change its composition during the spray drying process. / O crajiru é um arbusto da família Bignoniaceae encontrado em toda a Amazônia. Seu nome científico é Arrabidaea chica B. Verl. e também é conhecido popularmente como carajuru, pariri, cipó cruz, calajouru, karajurana, krawiru, dentre outros. Possui propriedades antiinflamatórias, cicatrizantes, antianêmicas e anti-hemorrágicas. A variedade utilizada neste trabalho foi a AC1, por ser a mais encontrada e utilizada pela população. Foi elaborada uma solução extrativa 7,5% da AC1 e obtido seu extrato seco por aspersão ( Spray Drier ). A partir do extrato seco foram realizados os testes biológicos. As análises em Cromatografia em Camada Delgada Comparativa e Teor de Taninos Totais foram realizados com a solução extrativa e com o extrato seco para averiguar a presença de quercetina e ácido gálico, e taninos, respectivamente. Para avaliar a citotoxicidade do extrato, foi realizado o teste de hemólise em eritrócitos de camundongos, o ensaio do Alamar Blue e o teste de exclusão por Azul de Tripan em NIH-3T3, em diferentes concentrações do extrato para a determinação da CI50. Testes de atividade antioxidante (DPPH e atividade antioxidante celular em NIH-3T3) foram realizados. O teste genotóxico de escolha foi o teste do cometa em NIH-3T3. O teste do micronúcleo foi usado para detectar danos induzidos pelo extrato aos cromossomos ou ao aparato mitótico de eritroblastos por análise sangue da medula óssea do fêmur de camundongos. A análise por CCDC detectou provável presença de quercetina em concentrações mínimas tanto na solução extrativa quanto no extrato seco, porém não foi possível a detecção de ácido gálico. Taninos foram encontrados na concentração de 1,5 g% na solução extrativa e 1,3 g% no extrato seco. O extrato seco não apresentou significativa atividade hemolítica nem citotóxica em nenhum dos testes realizados, sendo observado um aumento da proliferação dos fibroblastos murinos. A avaliação antioxidante do extrato aquoso também não demonstrou atividade. Não foi observado dano significante ao DNA de fibroblastos pelo teste do cometa e a presença de eritrócitos policromáticos micronucleados (PCEMNs) no extrato seco avaliado através do teste do micronúcleo variou de 14 a 18 PCEMNs em 24 h e 48 h de exposição, enquanto que o controle positivo apresentou 322 e 288 PCEMN s nos respectivos horários. Os resultados das análises por CCDC e Taninos totais realizados na solução extrativa e no extrato foram semelhantes, indicando que, provavelmente, o extrato seco utilizado nos testes in vitro e in vivo não perdeu seus componentes durante o processo de secagem por aspersão.

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