Orientador: Debora Aparecida Pires de Campos Zuccari / Banca: Mirela Tinucci Costa / Banca: Claudia Regina Bonini Domingos / Resumo: O estudo dos tumores mamários em cadelas revela-se um excelente modelo para a investigação clínico-patológica, diagnóstica e prognóstica de neoplasias mamárias. As interleucinas desempenham um papel fundamental no câncer, em especial a interleucina-8 (IL-8), que possui propriedades tumorigênicas e pró-angiogênicas e a interleucina-12 (IL-12), com propriedades anti-metastáticas e anti-angiogênicas. O marcador tumoral antígeno-carboidrato (CA 15-3) tem importante significado clínico no seguimento de pacientes com neoplasia mamária. Além disso, o DNA livre circulante de células tem sido considerado um candidato a biomarcador para tumores. Assim, foram objetivos deste estudo mensurar os níveis séricos das proteínas IL-8, IL-12, CA 15-3, bem como estimar o número de cópias das sequências CAN SINEs relacionando-os aos parâmetros clínico-patológicos e a sobrevida do grupo a fim de inferir o possível valor prognóstico desses marcadores para o câncer de mama. Através do ensaio imunoenzimático e da técnica de PCR em tempo real foram avaliadas 33 cadelas com neoplasia mamária e 50 cadelas controle e suas concentrações foram estatisticamente relacionadas aos parâmetros estabelecidos. Foi encontrada diferença significante entre os níveis séricos de IL-8 nas cadelas com neoplasia mamária quando comparadas ao grupo controle e além disso, verificou-se aumento de IL-8 em relação à evolução tumoral, ao envolvimento linfonodal, recidiva e óbito. Baixos níveis de IL-12 foram observados em cadelas com tumores com maior tempo de evolução, cadelas com idade superior a 10 anos e, além disso, a alta taxa de sobrevida teve correlação com níveis elevados de IL-12. Assim, o aumento da IL-8 e a diminuição da IL-12 podem ser considerados marcadores prognósticos independentes confirmando seu papel como citocina... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract:The study of mammary tumors in dogs appears to be an excellent model to investigate the clinical and pathological diagnosis and prognosis of breast cancer. Interleukins play a key role in cancer, particularly interleukin-8 (IL-8), which have tumorigenic and pro-angiogenic properties and interleukin-12 (IL-12), with anti-metastatic and anti-angiogenic properties. The tumor marker carbohydrate antigen (CA 15-3) also has important clinical significance in monitoring patients with breast cancer. In addition, free circulating DNA has been considered a candidate biomarker for cancer. The objectives of this study were to measure serum levels of protein IL-8, IL-12, CA 15-3 and to estimate the number of copies of CAN SINEs sequences relating them with clinicopathological parameters and survival of the group, in order to infer a likely value as prognostic markers in breast cancer. Through enzyme immunoassay and real-time PCR were evaluated 33 dogs with mammary cancer and 50 control dogs and their concentrations were statistically related with these parameters. Significant difference was found between IL-8 serum levels in bitches with mammary neoplasia in relation to the control group and in relation to disease progression, the lymph node involvement and in relation to death. Low levels of IL-12 were observed in female dogs with tumors with a longer evolution, aged 10 years and in addition, the high survival rate was correlated with high levels of IL-12. Thus, increased IL- 8 and decreased IL-12 can be considered independent prognostic markers which confirm their role as tumorigenic and anti-tumorigenic cytokines, respectively. For the CA 15-3 were found higher levels in dogs with lymph node involvement and poor survival of the group. In estimating the number of copies of CANSINEs, significant difference was found regarding the parameters indicators of poor prognosis and low survival. Our results... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Debora Aparecida Pires de Campos Zuccari / Banca: Eduardo Alves de Almeida / Banca: Dorotéia Rossi Silva Souza / Resumo: Os tumores mamários da espécie canina prestam-se como modelos apropriados, e válidos, ao estudo da biologia do câncer. O estudo de marcadores prognósticos e preditivos no câncer tem se mostrado efetivo na pesquisa e rotina diagnóstica. Dentre esses marcadores, destacam-se os envolvidos no estresse oxidativo e alterações na capacidade antioxidante celular, que desempenham papel fundamental na patogênese do câncer. A glutationa (GSH) é um dos agentes mais importantes do sistema de defesa antioxidante da célula, pois em conjugação com as enzimas glutationa peroxidase (GSH-Px) e glutationa S transferase pi (GSTpi) desempenha um papel central na biotransformação e detoxificação de drogas quimioterápicas. O objetivo deste estudo foi avaliar a expressão da proteína GSH e das enzimas GSTpi e GSH-Px por imunohistoquímica em tumores de mama em cadelas, a fim de inferir o seu valor prognóstico, e validar por análise molecular, verificando a resistência das células neoplásicas ao quimioterápico, bem como o nível de estresse oxidativo avaliado bioquimicamente pelo malondialdeído (MDA), e a avaliação da atividade antioxidante total em equivalência ao Trolox (TEAC) . As proteínas foram detectadas no tecido tumoral de 30 cadelas por imunohistoquímica e quantificadas pela técnica de densitometria óptica. As médias relacionadas à expressão das proteínas foram estatisticamente comparadas com as características clínico-patológicas das cadelas. A expressão dos genes glutamato cisteina ligase (GCLC) e glutationa sintetase (GSS) que sintetizam a GSH e do gene GSH-Px foi verificada por qPCR em células neoplásicas de mama cultivadas e submetidas ao tratamento com doxorrubicina. A dosagem sérica do MDA e TEAC foi realizada em cadelas no momento da cirurgia, um, seis e 18 meses após... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The mammary tumors of canine species lend themselves as models appropriate, and valid, to study of cancer biology. The study of prognostic and predictive markers in cancer have been proven effective in research and diagnostic routine. Among these markers include those involved in oxidative stress and changes in antioxidant capacity, which play a fundamental role in the pathogenesis of cancer. Glutathione (GSH) is one of the most important agents of the antioxidant defense system of the cell because in conjunction with glutathione peroxidase (GSH-Px) and glutathione S transferase pi (GSTpi) plays a central role in the biotransformation and detoxification of drugs chemotherapy. The objective of this study was to evaluate the protein expression of GSH and the enzymes GSH-Px and GSTpi by immunohistochemistry in breast tumors of dogs in order to infer its prognostic value, and prospective study to evaluate them by molecular analysis, verifying the resistance of cancer cells to chemotherapy, as well as the level of oxidative stress assessed biochemically by malondealdehyde (MDA), and the evaluating the total antioxidant activity equivalent to Trolox (TEAC). The proteins were detected in tumor tissue of 30 female dogs by immunohistochemistry and quantified by optical densitometry technique. The mean expression of related proteins were statistically compared with the clinical- pathologic of the bitches. The expression of genes glutamate cysteine ligase (GCLC) and glutathione synthetase (GSS) that synthesize GSH and of GSH-Px gene was verified by qPCR in breast cancer cells grown and subjected to treatment with doxorubicin. The serum dosage of MDA and TEAC was performed in betches at the time of surgery, one, 6 and 18 months after surgery and compared with dogs in the control group. The results showed... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Claudia Regina Bonini-Domingos / Banca: Ana Elizabete Silva / Banca: Dorotéia Rossi Silva Souza / Banca: Joice Matos Biselli Périco / Banca: Octávio Ricci Júnior / Resumo: Os indivíduos com Doença Falciforme (DF) apresentam manifestações clínicas variáveis que podem ser decorrentes de fatores genéticos e ambientais. O presente trabalho teve como objetivo investigar se os marcadores genéticos relacionados à vasoatividade e coagulação modulam a gravidade clínica em pessoas com DF em quatro faixas etárias. Para isso, dois grupos longitudinais foram formados, o prospectivo, que avaliou 59 crianças com DF nascidas no período de maio de 2012 a dezembro de 2013, e o retrospectivo, que avaliou 392 pessoas com DF no ano de 2011. Estes dois grupos foram divididos em quatro subgrupos de estudo, de acordo com a faixa etária, em: Crianças I (de 0 a 4 anos de idade, N=59), Crianças II (de 5 a 10 anos, N=53), Adolescentes (11 a 19 anos, N=127) e Adultos (acima de 20 anos de idade, N=212). Todos os indivíduos foram genotipados para a DF, para os haplótipos da globina beta-S, e para os polimorfismos genéticos nos genes da cistationina beta-sintase (CBS, 844ins68), enzima conversora de angiotensina I (ECA1, I/D 287 pb), enzima conversora de angiotensina II (ECA2, A1075G), inibidor do ativador do plasminogênio tipo I (PAI1, -675pb 4G/5G) e adenosina deaminase (ADA, G22A). A classificação do perfil fenotípico de gravidade do subgrupo Crianças I foi realizado pelo hematologista do HEMORIO (RJ), e dos subgrupos Crianças II, Adolescentes e Adultos pela calculadora online "Sickle Cell Disease Severity Calculator". Com excessão do genótipo SC que foi mais frequente no... / Abstract: Sickle Cell Disease (SCD) is characterized to several clinics manifestations that vary among subjects and this clinical diversified can be caused by genetic and environmental factors. The study aim was to investigate whether genetic markers related to vaso-activity modulate clinical severity in SCD people in four age groups. Then, two longitudinal groups were formed: the prospective groups that evaluated 59 SCD children born in May 2012 to December 2013, and the retrospective group that evaluated 392 people with SCD in 2011. These groups were separated in four study subgroups according to age in: Children I (of 0 at 4 years-old, N=59), Children II (of 5 at 10 years-old, N=53), Adolescents (of 11 at 19 years-old, N=127) and Adults (above of 20 years-old, N=212). All the subjects were genotyped SCD presence, beta-S haplotypes and genetics polymorphisms in cystathionine beta-synthase (CBS, 844ins68), angiotensin converting enzyme I (ACE1, I/D 287 pb), angiotensin converting enzyme II (ACE2, A1075G), plasminogen-activator inhibitor type 1 (PAI1, -675pb 4G/5G) and adenosine deaminase (ADA, G22A) genes. The clinical severity profile classification of Children I subgroup was accomplished by Hematologist of HEMORIO, and to Children II, Adolescents and Adults subgroups was used the software online named "Sickle Cell Disease Severity Calculator". Except for the SC genotype that was more frequent in the Children I subgroup, the genotypic and allelic frequencies for the genetic markers ... / Doutor

Orientador: Marilia de Freitas Calmon / Coorientador: Paula Rahal / Coorientador: Caroline Measso do Bonfim / Banca: Carolina Colombelli Pacca / Banca: Ricardo Barros Mariutti / Resumo: Condiloma acuminado (CA) ou verrugas genitais são lesões proliferativas benignas epidérmicas ou mucosas. O condiloma é causado pela infecção pelo papilomavírus humano (HPV), principalmente os tipos de baixo-risco 6 e 11, mas também pode ocorrer coinfecção com os HPVs de alto-risco. As variantes dos HPVs são definidas como sequências virais que compartilham identidade na sequência nucleotídica do gene L1 maior que 98%. Baseado nesse critério, linhagens de variantes de HPV6 e 11 têm sido estudadas e ainda há uma tentativa de correlacionar essas variações genéticas com os resultados clínicos diferenciais da infecção. Dessa forma, o objetivo do estudo foi detectar as variantes e alterações nucleotídicas presentes em E6 do HPV dos tipos 6 e 11 presentes em amostras de condiloma acuminado, correlacionar a presença de HPV com os dados clínico-patológicos das pacientes e determinar as relações filogenéticas das variantes encontradas com variantes de outras partes do mundo. A região E6 de 32 amostras de condiloma acuminado foi sequenciada, sendo dessas 25 positivas para HPV6 e sete para HPV11. Entre as amostras HPV6, 12 foram identificadas como a variante HPV6a, apresentando a mutação nucleotídica G474A, sendo uma delas também apresentando a mutação T369G no genoma. As 13 pacientes restantes foram positivas para a variante HPV6vc, não apresentando alterações nucleotídicas. Na análise das amostras HPV11, observou-se que todas as pacientes mostraram as mutações T137C e C380T. Além disso... / Abstract: Condyloma acuminatum (CA) or genital warts are benign proliferative lesions that can be epidermal or mucous. Condyloma is caused by infection with human papillomavirus (HPV), mainly the low-risk types 6 and 11, but can also occur coinfection with high-risk HPVs. Human papillomaviruses have the capacity to infect the skin, oral and genital mucosa, and induce benign or malignant proliferative lesions. The variants of HPVs are defined as viral sequences that share identity in the nucleotide sequence of the L1 gene greater than 98%. Based on this criterion, HPV6 and 11 variants lineages have been studied and there is still an attempt to correlate these genetic variants with different clinical findings of infection. In this way, the aim of this study was to detect variants and nucleotide alterations presents in E6 region of HPV types 6 and 11 detected in condyloma acuminatum samples, to correlate the HPV presence with the clinical-pathological data of the patients and to determine phylogenetic relations of variants found with variants of others places of the world. The E6 region of 32 samples of condyloma were sequenced, being 25 positive to HPV6 and seven diagnosed HPV11. Twelve samples were identified as the HPV6a variant, and presented the mutation G474A, and one of these also showed the mutation T369G. The others 13 patients were positive to HPV6vc without nucleotide alterations. In the analysis of the seven HPV11 samples, it was observed that all patients showed the mutations ... / Mestre

Orientador: Marcelo Agenor Pavan / Banca: Rumy Goto / Banca: Rômulo Fujito Kobori / Resumo: A melancia (Citrullus lanatus (Thunb.) Mansf.) é uma das hortaliças mais produzidas no mundo. Uma das principais doenças que ocorrem na cultura é o crestamento gomoso do caule, causado pelo fungo Didymella bryoniae. O controle da doença tem sido realizado por meio de pulverizações com fungicidas, no entanto, o uso de cultivares resistentes deve ser pensado como uma alternativa viável e de efetivo controle no manejo da doença. O trabalho teve como objetivo estudar a herança da resistência ao crestamento gomoso do caule no acesso de melancia Ojakkyo. Para o estudo da herança, as gerações F1, F2 e retrocruzamentos de Ojakkyo com um parental resistente(AU - Pruducer) e um suscetível (Crimson Sweet) foram avaliados em ambiente protegido. Foi considerado também nesse estudo a combinação com a população de AU-Producer. Para comparar as razões de segregação obtidas no estudo da herança da resistência, adotou-se o teste do Quiquadrado (X²). Com base nas segregações obtidas no estudo da herança e nas análises de agressividade realizadas, concluiu-se que a resistência de Ojakkyo ao crestamento gomoso do caule é devida a mais de um gene / Abstract: The watermelon (Citrullus lanatus (Thunb.) Mansf.) is the most produced oleraceous in the world. One of the main diseases that occur in the culture is the gummy stem blight, caused for Didymella bryoniae. The control of the disease has been carried through by means of sprayings with fungicides, however, the use to cultivars resistants must be one of the viable alternative and of effective control about the handling of the disease. The work objectified to elucidate the inheritance of the resistance to gummy stem blight in access of watermelon Ojakkyo. For the study of the inheritance, the F1, F2, generations and backcrosses generations of Ojakkyo with two susceptible populations had been evaluated in protected environment and artificial inoculation. To compare the gotten reasons of segregation in the study of the inheritance of the resistance, the test of Quisquare (X²) was adopted. On the basis of the segregations gotten in the study of the inheritance, were concluded that the resistance of Ojakkyo to the gummy stem blight is due to more than one gene / Mestre

Orientador: Regiane Cristina Oliveira de Freitas Bueno / Banca: Thiago Assis Rodrigues Nogueira / Banca: Marcelo de Almeida Silva / Banca: Simone de Souza Prado / Resumo: As mudanças climáticas previstas para os próximos anos indicam incremento na temperatura em 1,4°C a 5,8°C em decorrência, principalmente, do aumento da concentração dos gases de efeito estufa, além de alterações na umidade relativa e taxas de CO2 da atmosfera terrestre. Essa mudança influenciará diretamente nos regimes de chuvas, promovendo veranicos e/ou excessos em determinadas regiões. Dessa forma, o objetivo da dissertação foi avaliar os efeitos do estresse hídrico em plantas de milho Bt sob situações de estresse frente ao ataque de S. frugiperda. O delineamento experimental utilizado foi em esquema fatorial triplo em blocos casualizados com quatro lâminas de irrigação (estimadas a partir da tensão do solo): L1- 50% da capacidade de campo (CC) considerada estresse severo, L2- 75% CC estresse moderado, L3- 100% CC controle e L4-125% CC excesso de água; três eventos de milho: PowerCore® (Cry1A.105 Cry2Ab2 Cry1F PAT CP4-ESPS), Herculex ® (Cry1F PAT) e Optimum® Intrasect® (Cry1Ab Cry1F PAT CP4-EPSPS) e três infestações (sem infestação, população S. frugiperda suscetível ao milho Bt e população S. frugiperda resistente ao Bt). Quando as plantas atingiram o estádio fenológico de V8 (fase considerada mais suscetível ao ataque de S. frugiperda e de maior atuação dos mecanismos de ativação de sistema enzimático) foram infestadas artificialmente, por 24h e após este período folhas do terço médio da planta foram coletas para análise enzimática. Os híbridos que ficaram sob estresses... / Abstract: The climate changes foreseen for the next years show an increase in temperature of 1.4°C to 5.8°C, mainly due to the increase in the concentration of greenhouse gases, besides relative humidity alterations and CO2 rates changes of the Earth's atmosphere. This change will directly influence rainfall regimes, promoting summer and / or excess in certain regions. Thus, the objective of the dissertation was to evaluate the effects of water stress in Bt maize plants under stress situations facing the attack of S. frugiperda. The experimental design used was a randomized triple block design with four irrigation slides (estimated from soil tension): L1- 50% of field capacity (CC) severe stress, L2-75% CC moderate stress, L3 -100% CC control and L4-125% CC water excess; (Cry1A.10 Cry1A PAT C4-EPSPS), Herculex® (Cry1F PAT) and Optimum® Intrasect® (Cry1Ab Cry1F PAT CP4-EPSPS) and three infestations (non-infestation, susceptible S. frugiperda population to Bt maize and Bt resistant S. frugiperda population). When plants reached the phenological stage of V8 (phase considered more susceptible to S. frugiperda attack and of greater performance of the mechanisms of activation of enzymatic system), they were infested artificially for 24 hours. After this period, leaves of the middle third of the plant were collected for enzymatic analysis. The development of the hybrids that were under water stresse was slower than other hybrid studied. On the other hand, the analyzes and determinations of e ... / Mestre

Orientador: Danilo Moretti-Ferreira / Banca: Henrique Krieguer / Banca: Claudia Regina Furquim de Andrade / Resumo: A gagueira é um distúrbio da comunicação, mais especificamente da fluência, onde há interrupções e alterações na velocidade do fluxo da fala. Acomete de 3 a 4% dos indivíduos do sexo masculino e de 1 a 2% do sexo feminino, em algum momento de suas vidas. A frequencia pode variar de acordo com a idade: entre crianças em idade pré-escolar de 2,4% a 5% e em idade escolar 1%. Em adultos, estima-se que de 1 a 2% sofram com este distúrbio. Em todas as idades, a gagueira parece ser mais comum no sexo masculino do que no feminino, sendo de 4 a 5 M : 1 F em adultos. Em estudos de subgrupos de gagueira persistente familial, a proporção entre os indivíduos foi de apenas 1,5 M : 1 F. A triagem genômica em famílias de gagos provenientes da América do Norte e da Europa demonstrou a existência de um locus de predisposição a gagueira familial no cromossomo 18 envolvendo a região 18p e um segundo locus na região 18q proximal, sugerindo que exista um locus de predisposição a gagueira familial no cromossomo 18 e que genes adicionais possam existir, além dos fatores ambientais. O objetivo deste trabalho foi a análise de associação nas regiões cromossômicas 18p e 18q proximal através de marcadores microssatélites (2 cM) em 31 famílias brasileiras com gagueira persistente, com mais de um indivíduo gago em idade acima de 6 anos. Utilizou-se para a classificação da gagueira, o SSI aplicado por profissionais especializados nesta disfluência. Foram incluídos todos os indivíduos disponíveis do núcleo familial, independente do sexo, etnia, escolaridade e nível social.Todos os participantes tiveram amostras de seu DNA coletados a partir de amostras de sangue periférico. Foram selecionados 14 marcadores microssatélites do cromossomo 18, genotipados após PCR em seqüenciador automático. Na análise dos dados foram utilizados programas SIMWALK 2, FBAT e POINTER... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Stuttering is a communication disorder, or more precisely, a fluency disorder that causes speech interruptions and changes in speech flow rate. It affects 3- 4% of males and 1-2% of females at some point in their lives. Its frequency may vary with age - it has been reported to be 2.4-5% among children of pre-school age and 1% at school age. In adults, it ranges from 1 to 2%. At all ages, stuttering seems to be more frequent in males than in females, being 4-5M:1F among adults. Studies in subsets of familial persistent stuttering showed a sex ratio of only 1.5M:1F. A genome scan in stuttering families from North America and Europe demonstrated the presence of a predisposing locus for family stuttering on chromosome 18 involving the 18p region and a second locus on proximal 18q (Shugart et al.,2004), suggesting that chromosome 18 may harbor a predisposing locus for this disorder, and that additional genes may exist besides environmental factors. The purpose of this study was to perform the association analysis of chromosomal regions 18p and proximal 18q using microsatellite markers (2 cM) in 31 Brazilian families with at least two stuttering members aged more than 6 years. Stuttering was classified by specialized professionals using SSI. All family members available, regardless of gender, ethnicity, educational or social level were assessed provided that they were older than 6 years. DNA samples from peripheral blood of all participants were collected. Fourteen chromosome 18 microsatellites were genotyped after PCR by automated sequencing. Data were analyzed with software SIMWALK 2, FBAT and POINTER. Association analysis revealed no association of stuttering with 13 microsatellites (one was excluded for being noninformative) demonstrating no association between this phenotype and chromosome 18 in the study population / Mestre

Orientador: Ana Elizabete Silva / Coorientador: Érika Cristina Pavarino / Banca: Claudia Aparecida Rainho / Banca: Claudia Regina Bonini Domingos / Resumo: O câncer colorretal (CCR) é um dos modelos da associação inflamação-câncer. Assim, polimorfismos em genes que desempenham um papel importante na suscetibilidade a doenças inflamatórias, como os receptores Toll-like (TLR2 e TLR4), podem ser alvos interessantes para estudos de possíveis marcadores moleculares para CCR. Objetivos: Avaliar a associação dos polimorfismos TLR2 -196 a -174del, TLR4 -1607 T/C (rs10759932) e TLR4 +896 A/G (rs4986790), e de fatores de risco (gênero, idade, tabagismo e etilismo) com o desenvolvimento de CCR; assim como determinar os níveis de expressão relativa desses genes no tecido tumoral e a influência dos polimorfismos funcionais sobre os níveis de expressão do RNAm. Materiais e Métodos: Foram genotipadas 434 amostras (194 de pacientes com CCR e 240 de indivíduos saudáveis) de DNA de leucócitos de sangue periférico ou de células de tecido tumoral (DNA e RNA), por meio das técnicas de PCR alelo-específico e PCR-RFLP. A análise de regressão logística múltipla foi utilizada para avaliar a associação dos polimorfismos com risco de CCR, aplicando os modelos log-aditivo, dominante e recessivo, ajustados para os fatores de risco. Para a quantificação relativa (RQ) do RNAm foi utilizada a técnica de PCR quantitativa em tempo real (qPCR) em 40 amostras de tecido tumoral. Resultados: A variante polimórfica TLR2 -196 a -174del foi associada com risco aumentado de desenvolvimento de CCR de acordo com os modelos dominante (OR=1,72, IC95%=1,03-2,89; p=0,038) e log-aditivo (OR=1,59, IC95%=1,02-2,48; p=0,039), porém para os polimorfismos TLR4 -1607 T/C e TLR4 +896 A/G não foi encontrada associação. Idade acima de 60 anos (OR=1,83, IC95%=1,26-2,90; p=0,003) e hábito etilista (OR=2,78, IC95%=1,68-4,60; p=0,000) também estão associados com risco... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Colorectal cancer (CRC) is one of the models of inflammation-cancer association. Thus, polymorphisms in genes that play a role in susceptibility to inflammatory diseases, such as Toll-like receptors (TLR2 and TLR4) may be interesting targets for studies of potential molecular markers for CRC. Objectives: To evaluate the association of polymorphisms TLR2 -196 to -174del, TLR4 -1607 T/C (rs10759932) and TLR4 +896 A/G (rs4986790) and risk factors (gender, age, smoking and drinking habits) with CRC development, as well as to determine the relative expression levels of these genes in tumor tissue and influence of functional polymorphisms on the levels of mRNA expression. Materials and Methods: We genotyped 434 samples (194 patients with CRC and 240 from healthy individuals) of DNA from peripheral blood leukocytes or tumor tissue cells (DNA and RNA), by PCR allele-specific or PCR -RFLP. The multiple logistic regression analysis was performed to evaluate the association between the polymorphisms with risk of CRC, applying the log-additive, dominant and recessive models, adjusted for risk factors. The relative quantification (RQ) of the mRNA was performed by the real time quantitative PCR (qPCR) technique in 40 tumor tissue samples. Results: The polymorphic variant TLR2 -196 to -174del was associated with increased risk of developing CRC according to both dominant (OR=1.72, 95%CI=1.03 to 2.89, p=0.038) and log-additive models (OR=1.59, 95%CI=1.02 to 2.48, p=0.039), but for the TLR4 -1607 T/C and TLR4 +896 A/G polymorphisms no association was found. Age above 60 years old (OR=1.83, 95%CI=1.26 to 2.90, p=0.003) and alcohol consumption (OR=2.78, 95%CI=1.68 to 4.60, p=0.000) are also associated with increased risk for developing of this cancer. Analysis of relative quantification of the mRNA showed a... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Danilo Moretti-Ferreira / Coorientador: Dennis Drayna / Banca: Ana Maria Schiefer / Banca: Maria Isabel de Souza Aranha Melaragno / Banca: Robson Francisco Carvalho / Banca: Ester Silveira Ramos / Resumo: A gagueira é uma doença comum que afeta a fluência da fala, caracterizada por repetições ou prolongamentos frequentes de sons, sílaba, palavras, ou por hesitações, ou interrupções no fluxo normal da fala. Trata-se de uma doença que tipicamente surge na infância em crianças com idade entre dois e quatro anos, com taxa de incidência estimada em torno de 5% da população. No entanto devido à elevada taxa de recuperação espontânea, estima-se uma prevalência de 1% na população em geral. Apesar do envolvimento de fatores ambientais, o fator genético é determinante para o desenvolvimento da doença. Algumas evidências que sustentam essa relação são: agregação familial, estudos com gêmeos e envolvendo adoções e, relações de consanguinidade em famílias com diversos afetados. Entretanto, trata-se de uma doença complexa na qual a identificação exata do tipo de herança é difícil de ser determinada uma vez que não seguem as leis de Mendel. Este estudo teve como principal finalidade realizar análises de ligação em 43 famílias brasileiras do Estado de São Paulo, não relacionadas, portadoras de gagueira desenvolvimental persistente a fim de identificar regiões cromossômicas com possíveis genes candidatos; Para as análises de ligação, inicialmente foi realizada a genotipagem de todas as famílias através de chips específicos para essa finalidade contendo 6056 marcadores SNP. Posteriormente, para o refinamento do mapa de ligação foram utilizados marcadores microssatélites polimórficos marcados com fluoróforos e analisados em sequenciador automático capilar. Para as estimativas das frequências alélicas destes marcadores na população brasileira foram utilizados amostras do grupo controle, não relacionadas, previamente selecionadas. Apenas duas famílias (BRPD_47 e BRPD_50) sob o padrão de herança dominante... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Stuttering is a common disease that affects the fluency of speech, and is characterized by frequent repetitions or prolongations of sounds, syllables, or words, or by interruptions in the normal flow of speech. The disorder typically begins in children aged two to four years, and has an estimated incidence rate of around 5% of the population. Due to the high rate of spontaneous recovery, the estimated prevalence of the disorder is 1% in the general population. Despite the involvement of environmental factors, genetic factors have been shown to be critical to the development of the disease. Evidence supporting genetic factors include twin studies, adoption studies, family clusters of stuttering, and consanguineous relations in families with many cases of the disorder. However stuttering is a complex disorder in which the identification of the exact type of inheritance is difficult to determine because it does not follow Mendelian laws. The main goal of this study was to perform a genome-wide linkage analysis in 43 unrelated families from the Brazilian state of São Paulo, which had multiple cases of persistent developmental stuttering, in an effort to identify chromosomal regions containing possible causal genes, Linkage analysis was initially performed by genotyping of all families with chip-based methods that assayed 6056 sNP markers. Subsequent refinement of linkage locations used polymorphic microsatellite markers analyzed by capillary electrophoresis unsing an automated DNA sequencer. Unrelated normal Brazilian samples were used as a control group to estimate the allele frequencies of these markers in this population. Two families (BRPD_47 and BRPD_50) showed significant evidence for linkage in the region of chromosome 10q21 under a dominant inheritance model. Combining these two families produced... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Ricardo Luiz Dantas Machado / Banca: Gerhard Wunderlich / Banca: Joseli de Oliveira Ferreira / Banca: Carlos Eugênio Cavasini / Banca: Dorotéia Rossi Silva Souza / Resumo: A malária é uma das principais causas de morbidade e mortalidade nas áreas tropicais e subtropicais do mundo. O desenvolvimento de uma resposta imune eficaz é capaz de reduzir a mortalidade e os sintomas clínicos da doença. No entanto, este é um processo complexo, e um dos objetivos dos imunologistas é entender as razões pelas quais os indivíduos diferem em suas respostas imunes contra o parasito. O objetivo do presente estudo foi avaliar a influência de polimorfismos em genes coestimulatórios do sistema imune na resposta imune humoral contra proteínas de estágio sanguíneo do Plasmodium vivax, principal espécie causadora de malária no Brasil. Para tanto, nós genotipamos, pelo método de PCR-RFLP, nove SNPs em sete genes (CD28, CTLA4, ICOS, CD86, CD40, CD40L e BLYS). A amostra foi constituída por 227 indivíduos infectados com P. vivax no município de Goianésia do Pará, no Estado do Pará. As respostas de anticorpos IgG específicos contra as proteínas N- (ICB2-5) e C-terminal (MSP-119) da MSP-1, da DBP e da AMA-1 do P. vivax foram determinadas por ELISA. IgM e as subclasses de IgG contra a ICB2-5 também foram avaliadas. Para estudar os polimorfismos dos genes coestimulatórios, nós primeiramente investigamos o impacto da estratificação da população na distribuição dos polimorfismos com o auxilio de marcadores informativos de ancestralidade e demonstramos que a frequência dos SNPs ICOS +1564T>C, CD40L -726T>C e CD86 +1057G>A varia de acordo com a ancestralidade. Polimorfismos em genes coestimulatórios foram associados com a resposta de anticorpos contra proteínas do estágio sanguíneo do P. vivax, mais especificamente contra a DBP, e as porções N- e C-terminal da MSP-1. Além disso, haplótipos formados pelos genes CD28, CTLA4 e ICOS foram associados com a resposta de anticorpos IgG4 contra a região N-terminal da MSP-1. Este é o primeiro estudo de associação genética envolvendo polimorfismos em genes ... / Abstract: Malaria is one of the main causes of morbidity and mortality in the tropics and subtropics areas of the world. Although the immunity is only partial, it is important in reducing the amount of illness and death caused by malaria. However, the immunity against malaria is complex, and one of the main goals of vaccine developers is to understand why people differ in their immune response to the parasite. The present research aims to investigate the genetic mechanisms related to humoral immune response against P. vivax blood stages antigens, predominant malaria species in Brazil. Nine single nucleotide polymorphisms (SNPs) in 7 genes (CD28, CTLA4, ICOS, CD86, CD40, CD40L e BLYS) were determined by PCR-RFLP. A total of unrelated 227 individuals infected with P. vivax from the Goianésia do Pará, Pará state, participated in this study. Level and prevalence of IgG antibodies against N-terminal (ICB2-5) and C-terminal (MSP-119) regions of MSP-1, DBP and AMA-1 of P. vivax were measured by ELISA. First, we evaluate the influence of genomic ancestry on distributions of co-stimulatory genes polymorphisms in an admixed Brazilian population using ancestry informative markers. ICOS, CD40L and CD86 polymorphisms were associated with genomic ancestry. There were significant association between CD28 -372G>A, ICOS +1564T>C, and CD40L -726T>C SNPs with antibodies anti-DBP prevalence. Moreover, CD40 -1C>T and CD86 +1057G>A SNPs were associated with antibody levels anti-PvMSP-119. The CD28 -372G>A and CD40 -1C>T SNPs were associated with IgM prevalence against ICB2-5. Haplotypes formed by polymorphisms in CD28, CTLA4, and ICOS genes were associated with IgG4 antibodies against ICB2-5. This is the first study to associate polymorphisms in costimulatory genes with humoral immune response against P. vivax. These data may add important information for understanding the immunological aspects involved in vivax malaria / Doutor