Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:03Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-02-27Bitstream added on 2014-06-13T20:14:33Z : No. of bitstreams: 1 theodoro_rc_me_botib.pdf: 1627532 bytes, checksum: 84aa1424194b14fdd0953c57c4c5c2a6 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O fungo termo dimórfico, Paracoccidioides brasiliensis é o agente etiológico da Paracoccidioidomicose (PCM), a micose sistêmica mais prevalente da América Latina. Este fungo vem sendo frequentemente isolado de amostras clínicas, tecidos de tatu (Dasypus novemcinctus) e recentemente foi também isolado de cão. Este trabalho avaliou a transição de micélio para levedura (M-L), a termo tolerância e o perfil de virulência em nove isolados de P. brasiliensis (quatro de pacientes humanos, quatro de tatus e um de cão), bem como a sua relação com a seqüência parcial e expressão do gene hsp70 (Heat Shock Protein 70) através de Real Time RT-PCR. Tanto os dados morfológicos como moleculares se mostraram variáveis dentre os diferentes isolados. Alguns destes dados, como sequenciamento e morfologia leveduriforme corroboram com a divisão de nossos isolados nas duas espécies crípticas simpátricas previamente propostas por Matute et al (2006). Nossos resultados confirmam que a HSP70 pode ser um importante fator de virulência por estar associado à termo tolerância, mas sua expressão parece não ser diretamente associada a altos padrões de virulência. / The thermo dimorphic fungus Paracoccidioides brasiliensis is the etiological agent of Paracoccidioidomycosis (PCM), the most prevalent systemic mycosis in Latin America. The previous phylogenetic species recognition proved the existence of, at least, three cryptic species in this pathogen. In this work we evaluated the mycelia to yeast (M-Y) transition, thermo tolerance and virulence profiles of nine isolates of P. brasiliensis, (including members of two of the three species) as well as its relation to the partial sequence and expression of hsp70 gene. It was observed a large phenotypic variability concerning the M-Y transition. The isolates Bt84 and T10 took more time to convert to the yeast form. These same isolates presented stretched yeast cells at 36°C, instead of the typical round cells. It was also observed arthroconidia production during the M-Y transition for some of the nine isolates studied. The hsp70 expression showed to be variable among our isolates. The partial sequencing of hsp70 gene resulted in a Neighbour Joining tree that divided our isolates in two main groups. Our data confirm that hsp70 gene might be an important virulence factor, associated with the thermo tolerance, but its expression does not seem to be directly related to high virulence profiles. We also presented some preliminary results about mycological characters that could be important candidates for morphologic markers for species recognition, as well as the partial sequencing of one member of the hsp70 gene family that allowed the separation of our isolates in two clusters, that correspond to the two sympatric cryptic species that occur in our PCM hyper endemic area (Botucatu, SP, Brazil).

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-12-17Bitstream added on 2014-06-13T19:44:11Z : No. of bitstreams: 1 lima_roa_dr_botfm.pdf: 255087 bytes, checksum: c2d39375e8f56b5ab6be1fcfe749b94a (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Propolis é uma mistura complexa composta de resina, extratos vegetais, cera, óleos essências (10%), pólen (5%) e outras substâncias (5%). Alguns estudos têm mostrado, no entanto, que a composição da própolis pode variar de acordo com a flora e região onde é coletada e permitido a identificação de sua origem vegetal por análise comparativa química e taxonômica testes. Esses compostos foram identificados no exsudado das folhas da Baccharis dracunculifolia e são específicos da própolis brasileira, sendo encontrado em concentrações semelhantes, demonstrando que a Baccharis ssp é a principal fonte para composição da própolis. Assim, por possuir uma complexa e altamente variável composição química (cerca de 300 compostos já foram identificados), a qual está intimamente relacionada com a ecologia da flora de cada região visitada pelas abelhas, a própolis tem sido utilizada como medicamento natural desde os tempos antigos. Estudos têm comprovado sua ação benéfica à saúde devido a sua atividade antiinflamatória, hepatoprotetora, antimicrobiana, além de propriedades antioxidantes. Além disso, o própolis é utilizada em cosméticos bem como na alimentação. Assim, o efeito terapêutico da própolis sobre algumas doenças, devido ao seu uso popular como medicamento, tem suscitado o interesse na compreensão das propriedades biológicas desta substância relacionadando-as com sua composição química. Em vista desse potencial terapêutico proeminente da própolis e o pequeno número de estudos sobre os seus mecanismos de ação, o objetivo do presente estudo foi avaliar o possível potencial antigenotóxico e antimutagênico das frações de própolis em células de ovário de hamster chinês (CHO) e células de hepatobastoma humano (HepG2) pelo ensaio cometa e teste do micronúcleo com boqueio da citocinese (CBMN). Tratamentos com a própolis... / Propolis is a complex mixture of plant resins, bee wax, essential oils and pollen. The specific chemical compounds of Brazilian propolis have allowed the identification of its plant source by comparative chemical analysis (infrared measurements) and taxonomic tests. These compounds have been identified in the exudate of Baccharis dracunculifolia leaves and are specific of Brazilian propolis, being even found at similar concentrations, demonstrating that Baccharis is the main plant source of propolis. Thus, by possessing highly complex and variable chemical composition of propolis (more than 300 components have been identified), which is intimately related to the ecology of the flora of each region visited by the bees, propolis is a natural remedy that has been used since ancient times. It is widely recommended by phytotherapists due to its anti-inflammatory, hepatoprotective, antimicrobial, and antioxidant properties. Also, propolis is used in cosmetic products and as a food constituent. Thus, the therapeutic effect of propolis on some human diseases claimed by folk medicine has raised the interest in the understanding of the biological properties of this substance related to its chemical composition. In view of the prominent therapeutic potential of propolis and the small number of studies regarding its mechanisms of action, the aim of the present investigation was to evaluate the possible antigenotoxic and antimutagenic effects of a propolis fractions on Chinese hamster ovary (CHO) cells and células de hapatobastoma humano (HepG2) by comet assay and cytokinesis-block micronucleus assay (CBMN). Treatments with propolis, at concentrations 25, 50, and 100 μg/ml, were done prior to, simultaneously and post-treatment with mutagens (direct- and indirect-acting) with different mode of action. Under these conditions, by comet assay our data clearly showed the capability of propolis compounds... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2002Bitstream added on 2014-06-13T19:23:19Z : No. of bitstreams: 1 alcantara_tm_dr_botfm.pdf: 920701 bytes, checksum: 3964c80e93a3f0ffd43c1b9743c630cc (MD5) / A paracoccidioidomicose (Pbmicose) é micose sistêmica na qual complexos eventos inflamatórios e imunológicos são desencadeados pela interação fungo-hospedeiro, resultando em duas características importantes da doença: freqüente instalação de distúrbios imunorregulatórios e reação inflamatória granulomatosa. Este trabalho teve por objetivo estudar em pacientes portadores da forma crônica multifocal da Pbmicose, na fase pré-tratamento, as características da resposta granulomatosa em lesões de pele e mucosa, considerando suas populações celulares e a presença in situ de citocinas de padrão Th1 e Th2. Estes achados foram correlacionados com a gravidade clínica, níveis de competência imunológica humoral e celular e níveis séricos dessas mesmas citocinas. Foram estudados 27 pacientes com gravidade clínica moderada (13 pacientes), moderada/grave (8 pacientes), grave (5 pacientes) e não avaliada (1 paciente). As biópsias foram realizadas por punch de lesões de pele ou mucosa. Os soros foram separados de sangue obtido por punção venosa, e o teste cutâneo realizado pela paracoccidioidina. Nas biópsias foram analisados o número e padrão de distribuição de neutrófilos, eosinófilos, células gigantes, plasmócitos, linfócitos T CD3+ e CD8+, linfócitos B e células NK (estes três últimos caracterizados pela imuno-histoquímica), contagem de fungos e a detecção imuno-histoquímica de IL-4, IFN- , IL-10, TNF- e TGF- . No soro dos pacientes foram realizadas dosagens de IL-2, IL-4, IL-10 e TGF- e de anticorpos específicos anti-Pb por ensaio imunoenzimático (ELISA)... / Paracoccidioidomycosis (Pbmycosis) is a systemic mycosis in which a complex inflammatory and immunological events are unchained by the interaction of the fungus (Pb) with the host tissues, resulting in two important characteristics of the disease: frequent immunoregulatory disturbances and a granulomatous inflammation. The aim of this work was to study in patients with the chronic multifocal form of Pbmycosis, before treatment, the characteristics of the granulomatous response in skin and mucosal lesions, considering the cellular populations and the presence in situ of Th1 and Th2 cytokines patterns. These results were correlated with the clinical severity, the levels of humoral and cellular immune competence and serum levels of those cytokines. Twenty seven patients were studied, distributed accordingly to clinical severity: moderate (13 patients), moderate/severe (8 patients), severe (5 patients), and not evaluated (1 patient). Punch biopsies were collected from skin or mucosal lesions, the serum obtained from venous blood samples to measured antibodies levels, and the skin test accomplished by the paracoccidioidin. In biopsies the following parameters were evaluated: the number and distribution pattern of neutrophils, eosinophils, giant cells, plasma cells, T CD3+ and CD8+ cells, B cells and NK cells (the last three characterized by immunohistochemistry), number of fungi, and detection of IL-4, IFN- , IL-10, TNF- and TGF- by immunohistochemistry. It was also measured the serum levels of IL-2, IL-4, IL-10 and TGF- and the level of specific antibodies anti-Pb by ELISA test. Specific granulomatous lesions, composed with epithelioid, well organized granuloma together with epithelioid loose, ill organized granuloma were observed in the same lesion of the dermis and submucosa. Neutrophils... (Complete abstract, click electronic address below)

Made available in DSpace on 2015-05-14T16:53:01Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-02-11Bitstream added on 2015-05-14T16:59:32Z : No. of bitstreams: 1 000821816.pdf: 616383 bytes, checksum: b2a61e662593481649b30d2ef50a567f (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Gagueira é um distúrbio da fluência caracterizado pelas rupturas atípicas excessivas na formulação linguística, prejudicando a suavidade da fala. Fatores genéticos podem estar envolvidos na transmissão da gagueira. O objetivo deste estudo foi caracterizar o perfil da fluência de indivíduos com gagueira do desenvolvimento persistente familial e determinar a frequência familial e sexual do distúrbio nos familiares. Participaram 100 indivíduos com gagueira do desenvolvimento persistente familial, de ambos os sexos, na faixa etária de 5 a 59 anos, com os seguintes critérios de inclusão: queixa de gagueira, o inicio do distúrbio deve ter ocorrido durante a infância, duração mínima de 36 meses das DTG (disfluências típicas da gagueira), apresentar mínimo de 3% de DTG, pontuação mínima de 11 pontos (crianças) ou de 18 pontos (adolescentes acima de 17 anos) no Instrumento de Gravidade da Gagueira (Stuttering Severity Instrument - SSI- 3. Os procedimentos utilizados foram: história clínica e familial, avaliação da fluência e Instrumento de Gravidade da Gagueira. A análise estatística foi realizada por meio de testes específicos para comparação da variáveis nas diferentes classes etárias, bem como para comparação em relação ao sexo feminino e masculino. Os resultados mostraram uma média de 13,25% do total das disfluências e 6,92% de disfluências típicas da gagueira. A gravidade leve foi a mais frequente (45%). Houve diferença significativa na frequência da gagueira em familiares do sexo masculino em relação ao feminino (p= 0,042). Pode-se concluir que o perfil da fluência apresentou características diferentes do perfil da fluência de fluentes. Indivíduos com gagueira manifestaram maior quantidade de disfluências típicas da gagueira e do total de disfluências quando comparados com fluentes. No entanto, os achados sobre a taxa de elocução foram diversos e não conclusivos com relação aos ... / Stuttering is a fluency disorder characterized by excessive atypical ruptures in the linguistic formulation, in which a person has difficulty in producing smooth speech. Genetic factors may be involved in the stuttering transmission. In this sense, objective assessments and family history plays a key role in both the initial diagnosis and in controlling disease progression. Accordingly, the purpose of this study was to characterize the fluency profile of individuals with familial persistent developmental stuttering and determine the familial and sexual frequency of the disorder in the family. Participants were 100 individuals with familial persistent developmental stuttering of both gender, aged 5-59 years, with the following inclusion criteria: stuttering complaining, onset of stuttering must have occurred during childhood, minimum duration of 36 months typical of stuttering-like disfluencies, present minimum of 3% of stuttering-like disfluencies, minimum score of 11 points (children) or 18 points (teenagers aged 17 and over) in the Stuttering Severity Instrument - SSI-3. The following procedures were used: clinical and familial history, fluency assessment and Stuttering Severity Instrument. Statistical analysis was performed using specific tests to compare the variables in the different age groups, as well as a comparison of their female and male. Our results showed about 13.25% of all disfluencies and 6.92% of stuttering-like disfluencies. The mild severity was the most common (45%). There was a significant difference in the frequency of stuttering in male relatives over female (p = 0.042). We conclude that the fluency profile showed different characteristics when compared to the fluency profile of fluency. However, findings on the speech rate were dispersed and not conclusive with respect fluents. Stuttering individuals showed greater prevalence of stuttering-like disfluencies in respect to other disfluencies. Regarding the stuttering...

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, Pós-Graduação em Agronomia, 2017. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2017-06-20T14:18:49Z No. of bitstreams: 1 2017_ClotildesNevesdaSilva.pdf: 2075349 bytes, checksum: 9be9f45442385dc96ced72bfa03eb745 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2017-08-03T19:44:34Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_ClotildesNevesdaSilva.pdf: 2075349 bytes, checksum: 9be9f45442385dc96ced72bfa03eb745 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-03T19:44:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_ClotildesNevesdaSilva.pdf: 2075349 bytes, checksum: 9be9f45442385dc96ced72bfa03eb745 (MD5) Previous issue date: 2017-08-03 / O gênero Passiflora tem como principal centro de diversidade genética a América Tropical, e o território brasileiro é privilegiado com uma variedade imensa de espécies silvestres nativas. O conhecimento das características fenológicas e morfoagronômicas destas espécies é importante para o desenvolvimentodo seu potencial comercial. Neste trabalho, objetivou-se analisar aspectos fenológico s de três espécies silvestres de maracujá e as características morfoagronômicas e moleculares de progênies de meio- irmãos de Passiflora maliformis L.. Os aspectos fenológicos foram avaliados em três espécies de maracujá silvestre no período de setembro de 2015 a agosto de 2016. Foram analisados os períodos de floração e frutificação e m condições naturais para uma progênie selecionada de Maracujá-maçã Passiflora( maliformis L.) e as cultivares BRS Pérola do Cerrado (P. setacea DC.) e BRS Sertão Forte ( P. cincinnata Mast.) para verificar o início, a duração e o término dessas fe nofases. Foi observado que o período de floração em condições naturais para essas três e spécies em estudo é do tipo contínuo, no qual há a produção de flores ao longo de todo o ano, ao contrário do que se observa para a espécie comercial de maracujazeiro azedo Passiflora edulis Sims que apresenta uma entressafra devido à redução do comprimento do dia e redução da temperatura e da umidade relativa do ar. Progênies de meio-irmãos daespécie (Passiflora maliformis L.) foram obtidas a partir de matrizes selecionadas no programa de melhoramento genético por seleção recorrente realizado na Embrapa Cerrado s. O experimento foi conduzido no período de março de 2015 a dezembro de 2016. Para a valiação da produtividade, foram contabilizados os frutos produzidos durante o pico de produção no mês maio de 2016 e durante o período que corresponde à entressafra do maracujazeiro azedo no mês de setembro do mesmo ano. Foram também avaliadas as características físicas dos frutos. Não houve efeito significativo das progênies para produtividade em ambas as avaliações, mas houve para algumas características de frutos como diâmetro longitudinal, massa, porcentagens de suco e sementes. O pequeno efeito das progênies sobre as características avaliadas, tanto na safra como na entressafra, possivelmente ocorreu devido à variabilidade genética das plantas dentro das progênies, evidenciando a necessidade de seleção entre e dentro de progênies para obter ganhos genéticos para produtividade e características físicas de frutos. Os parâmetros genéticos, obtidos com a caracterização morfoagronômica, evidenciaram ganhos genéticos baixos obtidos por meio de seleção de progênies, e altos por meio da seleção de plantas individuais, sinalizando que a seleção entre e dentro de progênies é a melhor estratégia de seleção para maximizar os ganhos genéticos nos ciclos de seleção e recombinação dessa população de melhoramento. Plantas individuais sele cionadas foram caracterizadas com base em marcadores moleculares RAPD e ISSR. Além dacaracterização molecular, a variabilidade genética de 22 plantas selecionadas foi realizada. Para este estudo, foram obtidos 100 marcadores RAPD e 81 marcadores ISSR a partir dos quais foram estimadas as dissimilaridades genéticas entre as plantas selecionadas que variaram entre 0,15 e 0,78. Análises de agrupamento foram realizadas a partir da matriz de dissimilaridade e evidenciaram uma tendência de agrupamento das plantas oriundas da mesma progênie. Os marcadores RAPD e ISSR foram eficientes na caracterização das plantas selecionadas de P. maliformis e na quantificação da variabilidade genética entre elas. / The Passiflora genus has its main genetic diversity center in the Tropical America. Brazilian territory is privileged with an immense variety of Passiflora native wild species. Knowledge of the phenological and morphoagronomic characteristics of these species is important for the development of their commercial potential. The objective of this work was to analyze the phenological aspects of three Passiflora wild species and the morphoagronomic and molecular characteristics of half-sib progenies of Passiflora maliformis L. Phenological aspects were evaluated in three cultivars of wild passion fruit from September 2015 to August 2016. Flowering and fruiting periods under natural conditions were analyzed for a selected progeny of Maracujá-maçã (Passiflora maliformis L.), and the cultivars BRS Pérola do Cerrado (P. setacea DC.) and BRS Sertão Forte ( P. cincinnata Mast.). The beginning, duration and the end of the different phenophases were analyzed. It was observed that the flowering period of these three Passiflora species is of the continuous type. Flowers and fruits production occurs throughout the year, unlike what is observed for the commercial species of sour passion fruit (Passiflora edulis Sims).This species present an out-of-season yield with reduced day length, temperature and relative air humidity. Half-sib progenies of the Passiflora maliformis L. were obtained from matrices selected in the genetic breeding program by recurrent selection performed at Embrapa Cerrados. The experiment was conducted from March 2015 to December 2016. For the productivity evaluation, the fruits were counted during the production peak (May 2016) and during the period corresponding to the out-of-season yield of passion fruit in the month of September of the same year. The physical fruit characteristics were also evaluated. There was no significant effect of the progenies on the fruit productivity in both evaluations, but there were for some fruit characteristics such as longitudinal diameter, mass, juice and seeds percentages. The small progenies effect on the evaluated characteristics, probability occurred due to the genetic variability of the plants within the progenies. This result highlights s the need of selection among and within progenies to obtain genetic gains for productivity and physical fruit characteristics. The genetic parameters obtained with a morphoagronomic characterization evidenced lower genetic gains obtained through progenies selection than through individual plant selection , signaling that a selection among and within progenies is a better selection strategy to maximize the genetic gains in the cycles of selection and recombination of this breeding population. Individual plants selected were characterized based on RAPD and ISSR molecular markers. The genetic variability of the 22 selected plants was carried out. For this study, 100 RAPD and 81 ISSR markers were obtained. The genetic dissimilarity among the selected plants varies between 0,15 and 0,78. Grouping analyzes were conducted from the dissimilarity matrix and evidenced a tendency of grouping of the plants from the same progeny. The RAPD and ISSR markers were efficient in the characterization of the selected plants of P. maliformis and in the genetic variability quantification.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2017. / Submitted by Raquel Almeida (raquel.df13@gmail.com) on 2017-06-19T16:20:52Z No. of bitstreams: 1 2017_FabríciodaSilvaMorgado.pdf: 7664868 bytes, checksum: 4767942a70994bbd3c3882749c32c0a1 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2017-08-18T16:45:30Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_FabríciodaSilvaMorgado.pdf: 7664868 bytes, checksum: 4767942a70994bbd3c3882749c32c0a1 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-18T16:45:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_FabríciodaSilvaMorgado.pdf: 7664868 bytes, checksum: 4767942a70994bbd3c3882749c32c0a1 (MD5) Previous issue date: 2017-08-18 / Os baculovírus são vírus que infectam larvas de mariposas e borboletas. São vírus capazes de formar dois fenótipos virais ao longo da infecção celular separados temporalmente. O primeiro fenótipo, os budded vírus, são vírus que brotam da célula e retêm um envelope a partir da membrana celular. Estes servem como agentes da proliferação sistêmica dentro do corpo do hospedeiro. O segundo fenótipo, os occlusion derived virus, são partículas virais envelopadas no núcleo e oclusas dentro da matriz cristalina formada pela proteína poliedrina, abundantemente expressa em momentos muito tardios da infecção. O progresso da infecção e os padrões de expressão gênica são controlados principalmente a nível transcricional, com base na sequência de DNA contida nos promotores dos genes. Para avaliar o programa transcricional e os elementos controladores das infecções baculovirais, desenvolvemos uma nova metodologia de detecção de luminescência em tempo real, derivada da infecção de células de inseto por baculovírus recombinantes contendo promotores de genes expressos em diferentes fases da infecção que controlam a expressão da proteína quimioluminescente Luciferase de vaga-lume. Isto permitiu, de forma inédita, a caracterização detalhada da expressão gênica a partir de promotores dos baculovírus Anticarsia gemmatalis MNPV e Autographa californica MNPV. O que revelou perfis de expressão diferenciais em linhagens permissivas, semipermissivas e não-permissivas à infecção por estes baculovírus. Também foram avaliados promotores do Bracovírus endosimbiótico encontrado em Microplitis demolitor, uma vespa parasita de larvas de Lepidoptera, através da metodologia de medição de luminescência em tempo real. Estes promotores derivados do Bracovírus apresentaram perfis de expressão similares aos de promotores tardios dos baculovírus. A capacidade de transdução e entrega gênica na linhagem celular derivada da vespa M. demolitor por baculovírus recombinantes também foi avaliada / The baculoviruses are infectious to the larvae of moths and butterflies. These are viruses capable of forming two distinct phenotypes throughout the cellular infection that are temporally separated. The first phenotype, the budded virus, are virions the budded thru the cell membrane, carrying an envelope. These are the agents of the systemic infection within the host’s body. The second phenotype, the occlusion derived virus, are enveloped viral particles that are occluded within the crystalline matrix that forms the occlusion bodies, that protect the virus in the environment in the absence of the host. The progress of the cell infection and the patterns of gene expression are controlled at the transcriptional level, mainly based on the DNA sequence of the gene promoters. To evaluate the transcriptional program and the controlling elements of the baculovírus, we developed a new methodology of real time detection of luminescence derived from the infection of insect cells by recombinante baculovírus containing gene promoters of different phases of the infection controlling the chemilluminescent firefly Luciferase protein. This allowed for the detailed characterization of the gene expression from selected Anticarsia gemmatalis and Autographa californica MNPV genes promoters. This revelaed differential patterns of expression in permissive, semipermissive and non-permissive cell lines. We also evaluated gene promoters of the endosymbiont Bracovirus found in Microplitis demolitor, a parasitic wasp of Lepidopteran larvae, using the real-time luminescence detection technique. These promoters revealed patterns similar to late gene promoters from the baculoviruses. The ability of recombinant baculovirus to transduce and deliver genes to a M. demolitor wasp derived cell line was also assessed.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2016. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2016-09-15T21:04:04Z No. of bitstreams: 1 2016_AnaCarolinaArcanjoSilva.pdf: 5455901 bytes, checksum: fe4633e3d83f5d329ef96a0881076c7a (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2016-11-08T12:16:49Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_AnaCarolinaArcanjoSilva.pdf: 5455901 bytes, checksum: fe4633e3d83f5d329ef96a0881076c7a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-11-08T12:16:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_AnaCarolinaArcanjoSilva.pdf: 5455901 bytes, checksum: fe4633e3d83f5d329ef96a0881076c7a (MD5) / O estado da arte do conhecimento sobre as relações entre variabilidade genética e a dinâmica das populações humanas é reflexo de anos de descrições de frequências alélicas e genotípicas. Os padrões de variação de marcadores genéticos em regiões codificadoras e nãocodificadoras não são necessariamente os mesmos, uma vez que mutações em regiões codificadoras podem ter impactos significativos na sobrevivência de um indivíduo. Esse trabalho tem por principal objetivo explorar a variabilidade genética humana sob duas perspectivas. Na saúde refere-se à variabilidade genética acessada por marcadores genéticos neutros, que caracterizam as relações de variabilidade entre os grupos populacionais de uma forma não-enviesada. Para isso, utilizou-se um painel de 100 inserções Alu em um conjunto de 1125 amostras de populações mundiais. O painel evidenciou grande desequilíbrio de ligação nas populações brasileiras e na população de Utah, fruto da miscigenação recente (250 anos) durante a formação dessas populações. A miscigenação detectada pelo painel distorce as relações entre os grupos populacionais, uma vez que Kalunga forma um grupo à parte dentro do grupo africano (devido à miscigenação europeia) e Brasília se assemelha mais ao grupo do Oriente Médio do que ao europeu (devido à miscigenação africana). Além disso, o painel evidenciou que os grupos populacionais não podem ser considerados homogêneos, apesar de pelo menos uma população de cada grupo não apresentar diferenciação populacional às outras populações do seu grupo. Na doença, a variabilidade genética de genes e regiões gênicas foram avaliadas usando como exemplo a susceptibilidade de indivíduos a formas severas da infecção pelo vírus da influenza H1N1, a partir de uma busca da variabilidade genética global acessada por meio do 1000 Genomes Project. A variabilidade genética para marcadores associados à susceptibilidade a formas severas da infecção pelo vírus da influenza é pequena, ocorrendo principalmente em regiões intergênicas e que, a priori, não afetam a expressão dos genes. No entanto, mutações que já haviam apresentado associação a quadros severos da infecção alcançaram maiores frequências nas populações que tiveram maiores taxas de mortalidade durante a pandemia de H1N1/2009, que estão também relacionadas à ancestralidade compartilhada dessas populações. Portanto, os marcadores genéticos neutros foram suficientes para a diferenciação de grupos de amostras quanto à ancestralidade geográfica, onde as populações miscigenadas tenderam a se agrupar a populações que representassem o grupo com maior contribuição genética daquela população. Já os marcadores genéticos associados à susceptibilidade à infecção pelo vírus da influenza, permitiram identificar poucos grupos, normalmente também congruentes com a ancestralidade genética das amostras. Dessa forma, entender a ancestralidade genética de um grupo populacional facilitaria entender a susceptibilidade a doenças infecciosas, isto é, as duas classes de marcadores se complementam na busca de um melhor entendimento da transição entre a saúde e a doença. ________________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The state of the art of the knowledge about the relationship between genetic variability and the dynamics of human populations is a result of yeas of describing allelic and genotypic frequencies. The patterns of variation for genetic markers in coding and non-coding regions are not the same, since mutations in coding regions might have significant impact in one’s ability to survive. The main goal for this work is to explore the human genetic variability under two different perspectives. In health, it refers to the genetic variability that is accessed by neutral genetic markers, which describe the variability relationships among population groups in an unbiased way. To achieve that, a panel of 100 Alu insertions was used in a set of 1125 worldwide samples, including 160 samples from two admixed Brazilian populations, Brasília and Kalunga. The insertion panel showed a tenfold increase in the number of linked loci to each locus in Brasilia, Kalunga and Utah when compared to African, European, Asian and Indian populations. Which is mainly due to the recent admixture of different populations in the making of those populations (250 years). Kalunga clusters with the African populations, but still shows differentiation due to being admixed, Brasilia clusters with both the European and the Middle- Eastern groups, being the last one more genetically similar to Brasilia than the first due to an African genetic component. The population groups cannot be considered homogeneous, despite at least one population of each group not showing population differentiation to the other populations of its group. In health, the genetic variability of genes and coding regions were evaluated using as a model the susceptibility of an individual to severe forms of H1N1 influenza virus infection, by searching a global genetic variability that exists in the 1000 Genome Project database. The genetic variability of genetic markers that are associated to susceptibility to severe forms of influenza infection is small, occurring mainly in intergenic regions that, a priori, do not affect gene expression. However, mutations that have been associated to severe forms of infection have reached larger frequencies in populations that had larger mortality rates during the H1N1/2009 pandemic. Therefore, the neutral genetic markers were sufficient to the clustering of samples related to their geographic region. An exception to that were the admixed Brazilian populations that clustered with the groups that had contributed most to their genetic composition. The genetic markers related to susceptibility to influenza virus infection, on the other hand, could tell apart few groups, usually coincidental to their genetic ancestry. In this way, understanding the genetic ancestry of a population group would make it easier to understand the susceptibility to infectious diseases, that is to say that both classes of genetic markers complete each other in the search for a better understanding of the transition between health and sickness.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas, 2016. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2016-12-09T12:51:09Z No. of bitstreams: 1 2016_LucasMaltaAlmeida.pdf: 1459581 bytes, checksum: af5a3e20b5f22a3bc29afc656de07f6f (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2017-01-05T20:34:30Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_LucasMaltaAlmeida.pdf: 1459581 bytes, checksum: af5a3e20b5f22a3bc29afc656de07f6f (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-05T20:34:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_LucasMaltaAlmeida.pdf: 1459581 bytes, checksum: af5a3e20b5f22a3bc29afc656de07f6f (MD5) / Introdução: O desenvolvimento da Doença Celíaca (DC) está fortemente relacionado à presença de HLA-DQ2.5, HLA-DQ2.2 e HLA-DQ8. Há poucos dados sobre a distribuição desses alelos em pacientes celíacos e na população geral no Brasil e não há informação sobre seu uso clínico. A ausência deles torna pouco provável o desenvolvimento da DC. Assim, para levantar dados consistentes sobre a frequência de alelos HLA-DQ predisponentes à DC e sugerir risco genético de desenvolver a DC, realizamos este estudo caso-controle. Metodologia: 237 pacientes celíacos e 237 controles (ambos os grupos com 164 mulheres) foram testados quanto à presença de anticorpos anti-transglutaminase (htTG-IgA) e antiendomísio (EMA-IgA) e genotipados quanto à presença dos alelos HLA-DQ predisponentes à DC utilizando qPCR e kit comercial. As frequências de HLA-DQ2.5, -DQ2.2 e -DQ8 entre pacientes celíacos e controles foi comparada (teste de Fischer e teste do qui-quadrado). Os resultados foram considerados significantes quando p<0.05. O risco foi apresentado como 1:N para cada uma das categorias HLA-DQ descritas neste estudo. Resultados: Os resultados de qPCR foram 100 % concordantes com aqueles gerados por kit comercial. HLA-DQ2.5 e/ou HLA-DQ8 foi detectado em 224 pacientes (94,5 %) e em 84 controles (35,4 %). Oito celíacos (3,4 %) e 38 controles (16 %) possuíam exclusivamente HLA-DQ2.2. HLA-DQ2.5, sem HLADQ8, foi encontrado em 178 celíacos (75,1 %) e 38 controles (16 %). HLA-DQ8, sem outros alelos HLA-DQ predisponentes à DC, estava presente em dez celíacos (4,2 %) e em 36 controles (15,2 %). Indivíduos que possuem apenas DQA1*05 ou DQA1*03 ou não possuem alelos predisponentes à DC somam, juntos, 5 celíacos (2,1 %) e 115 controles (48,4 %). Os riscos genéticos variaram entre 1:7 a 1:3014 sendo que HLA-DQ2.5/DQ2.5, HLA-DQ2.5/DQ2.2 e HLA-DQ2.5/DQ8 predispõem mais ao desenvolvimento da DC. Embora HLA-DQ2.2 tenha baixo risco de desencadear a DC (1:251, homozigose e 1:550, heterozigose com HLA-DQ ≠ HLA-DQ2.5 e HLA-DQ8), quando associado a HLA-DQ2.5 mostra o segundo maior risco de desenvolvê-la (1:10; p < 0.0001). Conclusões: O estudo permitiu gerar dados significantes sobre a frequência de HLA-DQ2.5, -DQ2.2, e -DQ8 em grupo populacional representativo de pacientes celíacos e controles do Distrito Federal, Brasil, e estabelecer um gradiente de risco baseado em alelos HLA-DQ aplicável à população brasileira. __________________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Introduction: Celiac Disease (CD) development is strongly related to HLA-DQ2.5, HLA-DQ2.2 and HLA-DQ8 genotypes. In Brazilian population, few studies have described the frequency of these genotypes. All of them have just used few cases and no clinical use was attributed to this information. DC is unlikely in people without predisposing genotypes. In order to establish the frequency of HLA-DQ predisposing alleles to CD and a risk gradient related to HLA-DQ, this case-control study was developed. Methodology: 237 celiac and 237 controls were tested to IgA-htTG and IgA-EMA (both groups with 164 females and 73 males). All of them were genotyped for CD predisposing genotypes/alleles HLA-DQ by qPCR and commercial kit. HLADQ2.5, -DQ2.2 and -DQ8 frequencies were compared between celiac and controls (Fisher exact test and qui-squared test). The results were significant when p<0.05. The risk were assigned using 1:N representation, according to each HLA-DQ category described. Results: qPCR results were 100 % concordant with the commercial kit results. HLA-DQ2.5 and/or HLADQ8 were detected in 224 patients (94.5 %) and in 84 controls (35 %). HLA-DQ2.2, without another CD HLA-DQ, were detected in eight celiac (3.4 %) and 38 controls (16 %). HLA-DQ2.5, without HLA-DQ8 were detected in 178 celiac (75.1 %) and 38 controls (16 %). Isolated HLADQ8 were present in ten celiac (4.2 %) and 36 controls (15.2 %). Five celiac (2.1 %) and 115 controls (48.4 %) had α5 (DQA1*05), α8 (DQA1*03) or no CD HLA-DQ. Genetic risk ranged from 1:7 to 1:3014 with HLA-DQ2.5/DQ2.5, HLA-DQ2.2/DQ2.2 and HLA-DQ2.5/DQ8 being the major CD risk factors. Even though HLA-DQ2.2 showed a low CD risk of 1:251 (homozygosis) and 1:550 (heterozygosis with HLA-DQ different from HLA-DQ2.5 and HLA-DQ8), when associated with HLA-DQ2.5 it showed a second highest CD risk of 1:10 (p < 0.0001). Conclusions: This study enables us to show the frequency of genotypes HLA-DQ2.5, -DQ2.2, - DQ8 in a representative population group of celiac patients and controls in the city of Brasilia (Brazil) and surroundings (DF) and to establish a risk gradient based on HLA-DQ profile applicable to the Brazilian population.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas, 2016. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2017-02-08T16:44:15Z No. of bitstreams: 1 2016_PatriciaMariaFritsch_Parcial.pdf: 434999 bytes, checksum: d804f99dc14943754f9ab44bbad28e70 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2017-03-20T21:45:41Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_PatriciaMariaFritsch_Parcial.pdf: 434999 bytes, checksum: d804f99dc14943754f9ab44bbad28e70 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-20T21:45:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_PatriciaMariaFritsch_Parcial.pdf: 434999 bytes, checksum: d804f99dc14943754f9ab44bbad28e70 (MD5) / A Doença Celíaca (DC) é uma desordem sistêmica, imunomediada, desencadeada pelo consumo do glúten e suas prolaminas relacionadas (gliadina e glutenina) em indivíduos geneticamente predispostos. A doença combina fatores genéticos e ambientais para promover inflamação, dano na mucosa intestinal e o quadro clínico observado no doente celíaco. Uma vez presente na dieta do doente celíaco, a gliadina e seus fragmentos peptídicos entram em contato com as células da barreira epitelial intestinal e desencadeiam a resposta inflamatória antes mesmo que esses peptídeos atinjam a lâmina própria para iniciarem a resposta mediada pelo reconhecimento via MHC de classe II e seus alelos predisponentes HLA-DQ2 e DQ8. O tratamento baseado na dieta livre de glúten e o diagnóstico da DC estão bem estabelecidos. Entretanto o evento inicial da resposta inflamatória, a patogênese iniciada na barreira epitelial imediatamente após a interação com a gliadina e seus peptídeos ainda precisam ser elucidadas. Na tentativa de contribuir para a entendimento dos mecanismos de disparo da patogênese da DC, o presente trabalho propõe analisar a interação inicial da gliadina e seus peptídeos em células epiteliais Caco-2 e observar a modulação gênica, a produção de citocinas pró-inflamatórias e o estresse oxidativo mediados por essa interação. Nesse sentido, células Caco-2 foram cultivadas e estimuladas com LPS, gliadina e peptídeos imunogênicos e tóxicos da gliadina p56-88, p57-68, p69-82, p31-49, p57-68E65 e p69-82E72 por 6, 24 e 48 horas. O produto dessa interação e a modulação gênica produzida foram avaliados por qPCR e por dosagens do óxido nítrico e das citocinas pró-inflamatórias produzidas em cada tempo analisado. A gliadina e seus peptídeos imunogênicos foram tão eficientes quanto LPS em produzir inflamação nas células Caco-2, modulando a expressão de transcritos gênicos das citocinas pró-inflamatórias, principalmente de IL-1, IL-6, IL-8 e IL-15 especialmente nos tempos de 24 e 48 horas de interação, além de modularem a expressão do gene TLR-4. Para confirmar estes dados, a dosagem elevada de óxido nítrico e das citocinas IL-6, IL-21, IL-2, IL-8 e TNF-α evidenciou a presença de uma resposta inflamatória induzida pelas interações estudadas. Após análise dos dados, podemos inferir que a gliadina intacta ou seus peptídeos modularam a resposta inflamatória em células Caco-2, tal como observado in vivo no doente celíaco. Observamos que o receptor TLR-4 pode apresentar um papel importante na patogênese da DC, principalmente no reconhecimento da gliadina e seus peptídeos no evento inicial da resposta imunológica desencadeada pela célula epitelial intestinal. Os resultados sugerem que TLR-4 poderá representar uma nova rota de entrada da gliadina e seus derivados para a lâmina própria intestinal, contribuindo para o entendimento desta lacuna na patogênese da doença. / Celiac disease is a systemic, immunomomediated disorder, triggered by the ingestion of gluten and its related prolamins (gliadin and glutenin) in genetically predisposed individuals. In celiac disease, genetic and environmental factors are combined to promote inflammation, damage of the intestinal mucosa and the characteristic clinical manifestations of celiac patients. Once present in the celiac patient´s dietary gliadin and its fragments interact with cells from the epithelial intestinal barrier, and initiate an inflammatory response even before reaching the lamina propria. This process is mediated by specific MHC-II molecules’ recognition, HLADQ2/ DQ8. Both the treatment, based on a gluten free diet, and the diagnosis of celiac disease are well established. However, the initial inflammatory response which takes place in the epithelial intestinal barrier immediately after the interaction between the intestinal cells, gliadin, and its peptides, still need to be elucidated. To contribute to the understanding of this mechanisms, this work intends to analyse the initial interaction between gliadin, its immunogenic peptides, and Caco-2 cells, by studying the differences in gene expression, inflammatory cytokines production and the oxidant stress. Caco-2 cells were cultured and exposed to LPS, gliadin and its immunogenic peptides P56-88, P57-68, P69-82, P31-49, P57- 68E65 and P69-82E72 for 6, 24 and 48 hours. The products of these interactions were evaluated using qPCR, to analyze the differential expression of target mRNAs, and by dosing the production of Nitric oxide and pro-inflammatory cytokines at the stipulated times. Our results showed that gliadin and its immunogenic peptides were as efficient as LPS in activating an immune response in Caco-2 cells. They all promoted oxidative stress, transcription of IL-1, IL-6, IL-8 e IL-15 and production of the cytokines IL-6, IL-21, IL-2 e IL-8, mainly after 24 and 48 hours of challenge. We could also observe high levels of TNF- α cytokine and TLR4 transcripts. After analyzing our data, we could infer that both gliadin and its peptides could modulate the inflammatory response in Caco-2 cells, which is consistent with what is observed in vivo in celiac patients. We noticed that TLR-4 receptor can have an important role in the pathogenesis of celiac disease, mainly during the initial phase of the inflammatory response when gliadin and its peptides are recognized after the interaction with epithelial intestinal cells. This receptor could also be involved in the interiorization of gliadin and its peptides, contributing to the understanding of this gap in the pathogenesis of celiac disease.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Departamento de Biologia Celular, Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2015. / Submitted by Kathryn Cardim Araujo (kathryn.cardim@gmail.com) on 2016-04-27T13:05:16Z No. of bitstreams: 1 2016_MarianaSennaQuirino.pdf: 4546958 bytes, checksum: 7d7bc37fcf79d63d378011f3efea44d6 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2016-04-27T14:34:47Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_MarianaSennaQuirino.pdf: 4546958 bytes, checksum: 7d7bc37fcf79d63d378011f3efea44d6 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-27T14:34:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_MarianaSennaQuirino.pdf: 4546958 bytes, checksum: 7d7bc37fcf79d63d378011f3efea44d6 (MD5) / No capítulo I avaliamos a presença e análise filogenética de vírus de melancia no estado do Tocantins. Folhas com sintomas de infecção viral foram coletadas em 2013 eparticulas virais foram parcialmente purificadas e o RNA total dessas partículas foi purificado e sequenciado usando a plataforma Ilumina HiSeq 2000. As sequências obtidas foram analisadas com o programa CLC Genomics Workbench, e fases abertas de leitura (ORFs) foram procuradas usando o programa Blast x. Os 4.912 contigs que obtiveram hits com vírus de plantas foram analisados e comparados com o auxílio do programa Geneious. A presença dos vírus foi confirmada por diferentes métodos. Foram identificados genomas completos de vírus pertencentes às famílias Potyviridae,BunyaviridaeePartitiviridae. No capítulo II foi realizado estudo biotecnológico na tentativa de construção de um vetor de expressão de proteínas heterólogas com o genoma do baculovírusAnticarsiagemmatalismultilenucleopolyhedrovirus(AgMNPV), baseado no sistema de transposição sítio-específica comercialmente disponível para o baculovírus Autographacalifornicamultiplenucleopolyhedrovirus(AcMNPV). Foram utilizadas três metodologias: i) Recombinação homóloga em células de inseto; ii) Recombinação homóloga em células de E. coli (cepa BJ5183); iii) Digestão e ligação em sítio único Bsu36I e FseI no DNA genômico de AgMNPV. Foi construído um vetor de transferência p2100-KLM, para recombinação homóloga e/ou ligação em sítio único do baculovírus, porém, as tentativas para construção do vetor de expressão não foram efetivas. ______________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / In chapter I we analized the presence and phylogeny of viruses found in watermelon in Tocatinsstate. Watermelon leaves with viral symptoms were collected in 2013, and viral particles were partialy purified and total RNA was extracted and sequenced using the Illumina HiSeq 2000 platform. The sequences obtained were analyzed using the CLC Genomics Workbench program, and used for ORF search with theBlastx program. The 4.912 contigs who got hits with plant viruses were analyzed and compared with the help of Geneious program. The presence of viruses in leaves with viral symptoms was confirmed using different methods. Possible complete viral genomes were identified and were related to viruses belonging to the families Potyviridae,Bunyaviridae, Partitiviridae. In chapter II we tried to construct a vector for expression of heterologous proteins using the baculovirusAnticarsiagemmatalismultiple nucleopolyhedrovirus(AgMNPV). This vector was based on site specific transposition system commercially available for the baculovirusAutographacalifornica multiple nucleopolyhedrovirus (AcMNPV). Three methodologies were used: i) Homologous recombination in insect cells; ii) Homologous recombination in E. coli cells (strain BJ5183); iii) Direct ligation in Bsu36I and FseI unique restriction sites in the genomic DNA of AgMNPV. One transfer vector (p2100-KLM) was constructed for homologous recombination and / or ligation in the baculovirus single site. However, all the different strategies were not effective.