Micotoxinas são metabólitos secundários produzidos por fungos filamentosos que podem contaminar os grãos em diferentes períodos de pré e pós-colheita. O objetivo desse trabalho foi avaliar a contaminação fúngica e por micotoxinas em diferentes períodos do cultivo do amendoim no Rio Grande o Sul, considerando diferentes regiões e cultivares, durante as safras 2006/2007 e 2007/2008 e, ainda, desenvolver um método eficiente de quantificação de aflatoxina B1, baseado na cromatografia em camada delgada com detector de carga acoplada. Foram coletadas nas regiões de Augusto Pestana e Ivorá, amostras dos cultivares Tatu e Paraguaio, em diferentes períodos da cultura: (1) solo pré-plantio, (2) enchimento dos grãos, (3) colheita, (4) pós-secagem e (5) solo pós-colheita. Os fungos contaminantes do solo foram quantificados pela técnica de diluição seriada e nos grãos, o percentual de incidência foi determinado pela técnica de plaqueamento direto. O potencial toxigênico de Aspergillus seção Flavi e Aspergillus seção Nigri foi verificado em Agar Coco e Agar Extrato de Levedura Sacarose, respectivamente. Aflatoxina B1 e ocratoxina A foram determinadas por cromatografia em camada delgada com detector de carga acoplada. As espécies predominantes em todas as amostras foram Aspergillus flavus e Aspergillus niger var. niger. Entre as espécies de A. flavus e A. parasiticus, 89,3% e 39,2%, se mostraram produtoras de aflatoxina B1, respectivamente. Nenhum dos isolados de A. niger var. niger produziu ocratoxina nas condições testadas. Aflatoxina B1 foi detectada em 50% das amostras, com níveis entre 16 μg/Kg e 115 μg/Kg. Ocratoxina A foi detectada em 25% das amostras, com níveis entre 12,2 μg/Kg e 76,9 μg/Kg. Foi observada a ocorrência simultânea das duas micotoxinas em amostras do período pós-colheita. O método desenvolvido para quantificação de aflatoxina B1, baseado em procedimentos de fotometria fotográfica, se mostrou sensível, eficiente e prático, apresentando um limite de detecção de 0,4 ng por mancha, um limite de quantificação de 1,2 μg/kg e média de recuperação de 92%. / Mycotoxins are secondary metabolites produce by filamentous fungi that can contaminate grains in different stages of pre and postharvest management. The objective of this study was to investigate the occurrence of fungi and mycotoxins at different maturation stages of peanut produced in different regions of south of Brazil during 2006/2007 and 2007/2008 harvests. Moreover, to develop an efficient quantification method of aflatoxin B1, based on thin-layer chromatography and charged coupled device detector. Peanut samples, Tatu and Paraguaio varieties, were obtained in regions of Augusto Pestana and Ivorá, in different stages of cultura: (1) soil before planting, (2) pod filling, (3) at harvest, (4) after drying, (5) soil after harvest. The soil contamination was quantified by serial dilution technique and the fungi incidence on grains was determinate by direct planting technique. The toxigenic potential of Aspergillus section Flavi and Aspergillus section Nigri was verified in Coco Medium Ágar and Yeast Extract Sucrose agar medium, respectively. Aflatoxin B1 and ochratoxin A were determinate by on thin-layer chromatography and charged coupled device detector. The predominant species in all samples were Aspergillus flavus and Aspergillus niger var. niger. Among the species of A. flavus and A. parasiticus, 89,3% e 39,2%, produced aflatoxin B1, respectively. None of A. section Nigri isolates were ochratoxin A producers in the conditions tested. Aflatoxin B1 was detected in 50% of samples, with levels of 16.0 μg/Kg to 115.0 μg/Kg. Ochratoxin A was detected in 25% of samples, with levels of 12.2 μg/Kg to 76.9 μg/Kg. It was observed the co-occurrence of both mycotoxins in samples of postharvest. The method developed for aflatoxin B1 quantification was sensitive, efficient and practical, with a detection limit of 0.4 ng per spot, a limit of quantification of 1.2 μg/kg and average recovery of 92%.

UCHOA, Paula Karina Santos. Estudo do potencial químico-farmacológico de metabólitos secundários de fungos da Costa Cearense: Aspergillus niger. 2017. 2011 f. Tese (Doutorado em Química)-Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2017. / Submitted by Anderson Silva Pereira (anderson.pereiraaa@gmail.com) on 2017-02-08T20:45:42Z No. of bitstreams: 1 2017_tese_pksuchoa.pdf: 16649275 bytes, checksum: ef700c069cae733143409f052e0350e3 (MD5) / Approved for entry into archive by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2017-02-10T21:07:38Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_tese_pksuchoa.pdf: 16649275 bytes, checksum: ef700c069cae733143409f052e0350e3 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-10T21:07:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_tese_pksuchoa.pdf: 16649275 bytes, checksum: ef700c069cae733143409f052e0350e3 (MD5) Previous issue date: 2017 / EtOAc extract from the BRF074 strain (Aspergillus niger), cultivated in BD medium and isolated from sediments collected on Pecém beach (CE), showed high cytotoxic activity (77%, IC50 0,95) against the cancer cell line HCT-116 (colon). Thus, a bioguided study aiming the optimization of the culturing conditions of A. niger was conducted in which four different culture media were evaluated: PD (potato, dextrose), PDY (potato, dextrose and yeast), MPD (malt, peptone and dextrose) and MntPY (mannitol, peptone and yeast), in four growth periods: 07, 14, 21 and 28 days. From the cultive of A. niger in BD culture medium during 28 days, seven secondary metabolites were isolated: cyclo(4-hydroxy-L-Pro-L-Leu), cyclo(4-hydroxy-L-Pro-L-Phe), cyclo(L-Pro-L-Leu), cyclo(L-Pro-L-Phe), pseurotin D, pseurotin A and chlovalicin. The BDL culture medium (14 days) led to the isolation of the diketopiperazine cyclo(L-Pro-L-Val) and cyclopeptides malformin A and malformin C, whereas the MPD medium for 7 days provided a new compound, an ester furanic first report in the literature. Malformins A and C and the new compound were active against the cancer cell line HCT-116. A quantitative method of high performance liquid chromatography (HPLC) was developed and validated for the quantification of these cytotoxic metabolites in different nutritional media and growth periods. This method reveal that in the BDL medium, within 21 and 28 days, greater amounts of malformin A and C were produced, whereas the furanic ester was produced in higher levels in the MPD medium with 28 days. In parallel, an epigenetic study was performed using SAHA as reagent and the fungus strain LG0949. This experiment led to the isolation of the compounds phomalactone, dihydrophomalactone and acetophomalactone, acetanilide and a dimer of the SAHA. Isolation of the secondary metabolites was conducted using C18 reverse phase chromatography using a solid phase extraction cartridge and high performance liquid chromatography (HPLC). The structural characterization was done using spectrometric techniques such as mass spectrometry, nuclear magnetic resonance (1H and 13C) and infrared, in addition to comparison with literature data. / O extrato AcOEt da cepa BRF074 (Aspergillus niger), cultivada em BD e isolada a partir de sedimentos coletados na praia do Pecém (Fortaleza-CE), apresentou alta atividade citotóxica (77%; IC50 0,95) frente à linhagem de células tumorais HCT-116 (cólon). Desta forma, um estudo bioguiado de cultivo foi conduzido para este micro-organismo utilizando quatro meios de culturas distintos: BD (batata, dextrose), BDL (batata, dextrose e levedura), MPD (malte, peptona e dextrose) e MntPL (manitol, peptona e levedura), em quatro períodos de crescimento: 07, 14, 21 e 28 dias. A partir do cultivo de A. niger em meio de cultura BD por 28 dias, foram isolados sete metabólitos secundários: ciclo(4-hidroxi-L-Pro-L-Leu), ciclo(4-hidroxi-L-Pro-L-Phe), ciclo(L-Pro-L-Leu), ciclo(L-Pro-L-Phe), pseurotin D, pseurotin A e clovalicina. O meio de cultivo BDL (14 dias) levou ao isolamento da dicetopiperazina ciclo(L-Pro-L-Val) e dos ciclopeptídeos malformina A e malformina C, enquanto que o meio MPD durante 7 dias forneceu um ester furânico, de caráter inédito na literatura. As malforminas A e C e o composto inédito apresentaram-se ativas frente a linhagem de células HCT-116. Um método quantitativo de cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) foi desenvolvido e validado para a quantificação destes metabólitos citotóxicos em diferentes meios nutricionais e períodos de crescimento. A partir deste método, foi observado que no meio BDL, nos períodos de 21 e 28 dias as malforminas A e C foram produzidos em maior quantidade, enquanto que o ester furânico foi produzido em maiores teores no meio MPD em 28 dias. Em paralelo, foi realizado um estudo envolvendo epigenética utilizando o reagente SAHA e a cepa do fungo LG0949. A partir deste experimento foram isolados os compostos phomalactona, dihidrophomalactona e acetophomalactona, e os compostos acetanilida e dímero do reagente SAHA. O isolamento dos metabólitos secundários foi realizado através de cromatografia em fase reversa C18, utilizando cartucho para extração em fase sólida e cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE). A caracterização estrutural foi realizada através do uso de métodos espectrométricos, tais como espectrometria de massas, ressonância magnética nuclear (1H e 13C) e infravermelho, além de comparação de dados da literatura.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-07-31Bitstream added on 2014-06-13T20:06:58Z : No. of bitstreams: 1 silva_ea_dr_ilha.pdf: 796725 bytes, checksum: 88d835150a4d717b29f645c6af744ff6 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Os solos de regiões tropicais apresentam alta capacidade de fixação de fósforo, processo que resulta na sua baixa disponibilidade para as plantas. Como o fósforo nas culturas é indispensável, justificam-se estudos relacionados à maximização do aproveitamento do fósforo não lábil do solo por meio de microrganismos solubilizadores de fosfato e fungos micorrízicos arbusculares. O objetivo do presente trabalho foi de averiguar os efeitos de Aspergillus niger Tiegh e de Glomus clarum Nicol. & Schenck em dois latossolos com diferentes teores de óxidos de ferro e alumínio e no crescimento de Urochloa brizantha (Hochst. ex A. Rich.) Stapf, visando o aproveitamento do fósforo não lábil do solo. O experimento foi conduzido em condições naturais de luz e temperatura, com solo não esterilizado, empregando vasos plásticos com capacidade para 30 dm3 de solo. O delineamento experimental utilizado foi inteiramente casualizado, com 6 repetições e esquemas fatoriais diferenciados. Para as variáveis da caracterização química do solo e as variáveis microbiológicas do solo utilizou-se o fatorial 5x2x7, correspondendo aos tratamentos: épocas, solos e inoculação com 5, 2 e 7 níveis, respectivamente. Os níveis de épocas foram: 0, 90, 180, 270 e 360 dias após o corte de uniformização e os níveis de solo foram LVdA e LVd1. O tratamento inoculação contou com os níveis: controle fosfatado, controle não fosfatado, A. niger 19, A. niger 26, G. clarum, G. clarum + A. niger 19, G. clarum + A. niger 26. Fósforo total, fósforo inorgânico e fósforo orgânico foram avaliados no esquema fatorial 2x2x7 com os mesmos tratamentos do esquema anterior, porém com apenas dois níveis para épocas: 180 e 360 dias. O fósforo disponível total e o fósforo não lábil foram analisados no esquema fatorial 2x7 ao final do experimento com os níveis de solo e inoculação... (Resumo completo, clicar acesso el / The tropical soils have high phosphorus fixation capacity, a process that results in low availability to plants. As the phosphor in the cultures is essential, justifies related studies to maximize the use of non-labile soil phosphorus by phosphate solubilizing microorganisms and arbuscular mycorrhizal fungi. The aim of this study was to investigate the effects of Aspergillus niger and Glomus clarum Tiegh Nicol. & Schenck in two soils with different levels of iron and aluminum oxides, and the growth of Urochloa brizantha (Hochst. ex A. Rich.) Stapf, targeting the use of non-labile soil phosphorus. The experiment was conducted under natural conditions of light and temperature, with non-sterile soil, using plastic pots with a capacity of 30 dm3 of soil. The experimental design was completely randomized with six replications and differentiated factorial schemes. The variables for the soil chemical and microbiological characterization were analyzed in the 5x2x7factorial scheme, corresponding to the treatments: time, soil and inoculation, with 5, 2 and 7 levels, respectively. The levels of time were 0, 90, 180, 270 and 360 days after the uniformity cut, and the soil were LVdA and LVd1. The inoculation treatment levels included: control phosphate, no phosphate control, A. niger 19, A. niger 26, G. clarum, G. clarum + A. niger 19 and A. niger 26+G. clarum. Total phosphorus, inorganic and organic phosphorus were evaluated in a 2x2x7 factorial, with the same treatments as the previous scheme, but with only two levels for time: 180 to 360 days. The total available phosphorus and the non-labile phosphorus were analyzed in a 2x7 factorial scheme, at the end of the experiment, using the same levels of soil and inoculation as described. The plant variables were analyzed in a 2x7 factorial with the same levels of soils and inoculation... (Complete abstract click electronic access below)

Trezentos pacientes portadores de colonização intracavitária pulmonar (pelos exames soro lógico e/ou tecidual) foram investigados num período de 10 anos. Os casos foram classificados como: Aspergillus fumigatus (246 casos); Ao niger (21 casos); A. flavus (7 casos); Pseudallescheria boydii (1 caso); colonização fúngica não especificada (21 casos) e colonização actinomicética (4 casos). os grupos A. niger (çasos)e A. fumigatus (controles) foram comparados a respeito de variáveis clínicas e laboratoriais, por serem os mais freqUentes e pela pobreza da literatura sobre A. niger. Esta análise mostrou associações estatisticamente significativas com o A. niger para;sexo masculino (Razão de Chances = 3,28; p <0,05); infecção nosocomial, ocorrendo em hospitais de conservação precária (RC = 150,8; p< 0,001); tuberculose ativa (RC = 8,03; P <0,001); diabete mélito tipo 11 (RC = 10,67; p<O,OOl); e êxito letal (RC = 3,1; p<0,02). Por outro lado, cristais de oxalato de cálcio no escarro e oxalose sitêmica só ocorreram no grupo A.niger. As implicações etiológicas e diagnósticas destes achados sao discutidas, enfatizando o papel do ambiente externo, da oxalose, do acúmulo de ácidos e da tuberculose ativa na etiopatogenia do A. niger. / Three hundred patients with intracavitary pulmonary colonization (by serologic and/or tissue examinations) were analysed during a ten years period. The cases were classified as: Aspergillus fumigatus (246 cases); A. niger (21 cases); A. flavus (7cases); Pseudallescheria boydii (1 case); fungal colonization not especified (21 cases) and actinomycetic colonization (4 cases). Due to their frequency and the scarcity of literature about A. niger, the groups A. niger (cases) and A. fumigatus (controls) were compared with respect to clinical and laboratorial variables. This analysis showed statistically significant associations with A. niger for: male sex (Odds Ratio = 3,28; p< 0,05); nosocomial infection, which occurred.in hospitaIs in poor state of repair (aR = 150.8; p<O,ooU; active tuberculosis (aR = 8,03; p<O,OOl); type 11 diabete mellitus (aR = 10,67; p<O,ooU; and lethal outcome (aR = 3, 1; p < o, 02). On the other hand, calcium oxalate crystals in the sputum and sistemic oxalosis occured only in A. niger group. The etiologic and diagnostic implications of these findings are discussed, with emphasis on the role of the externa 1 environernent, oxalosis, acid acurnulation and ative tuberculosis in the etiopathogenesis of A. niger.

Orientador: Rubens Monti / Banca: José Roberto Ernandes / Banca: Eleonora Cano Carmona / Banca: Hamilton Cabral / Banca: Sandra Helena da Cruz / Resumo: As endoglicanases EC 3.2.1.4 são enzimas capazes de hidrolisar as ligações glicosídicas β-1,4 da celulose, resultando na liberação de glicose, celobiose e celo-oligossacarídeos. Empregadas mundialmente em diversos processos industriais, por exemplo, como amaciante de tecidos de algodão e bioestonagem de jeans, na extração de sucos de frutas, na adição em detergentes comerciais, na fabricação de cerveja, e na produção de papel e de etanol. Atualmente, há um grande interesse em enzimas que hidrolisem biomassa lignocelulósica para obtenção de etanol de segunda geração. A imobilização de enzimas em matrizes sólidas oferece muitas vantagens, entre as quais, reuso da enzima, a fácil separação do produto e o aumento da estabilidade operacional. Os objetivos deste trabalho foram: produzir CMCases secretadas por Aspergillus niger e Humicola grisea var. thermoidea em cultivo sólido e submerso; imobilizar CMCases em suporte agarose com diferentes ativações químicas; determinar a estabilidade térmica e as propriedades cinéticas dos derivados obtidos, comparando-os com as enzimas livres; avaliar a capacidade de reuso dos derivados ativos e estáveis e analisar qualitativamente o produto de hidrólise dos substratos celulósicos. O fungo A. niger secretou grandes quantidades de CMCases, 34,1 U.mg-1, em meio Vogel, utilizando pó de bagaço de cana-de-açúcar como fonte de carbono. O pH 5 foi determinado como o ótimo para a enzima, apresentando instabilidade ao pH 10. Com a utilização de aditivos estabilizante, a trealose a 10% (m/v), manteve, em pH 10, 80% de atividade residual, por 25 horas. Em relação à temperatura, apresentou uma faixa ampla de atividade entre 45°C a 75°C, tendo como temperatura ótima 65°C. O derivado enzimático que ofereceu melhor estabilidade foi aquele em que a imobilização foi conduzida juntamente com o substrato carboximeticelulose (CMC 1%), em... / Abstract: The endoglucanases EC 3.2.1.4 are enzymes that hydrolyze the β-1, 4 glycosidic linkages of the cellulose producing glucose, cellobiose and cello-oligosaccharides. Used worldwide in many industrial processes such as fabric softener and bioestonagem cotton jeans, extraction of fruit juices, in the addition of commercial detergents, in brewing, and the production of paper and ethanol. Currently, there is great interest in enzymes that hydrolyze lignocellulosic biomass to obtain second-generation ethanol. The immobilization of enzymes on solid arrays provides many advantages as the enzyme reuse, easy separation of the product and increased operational stability. The aims of this study were to produce secreted: CMCases produce secreted by Aspergillus niger and Humicola grisea var. thermoidea in solid and submerged cultivation; CMCases immobilized on agarose support with different chemical activations; determine the thermal stability and kinetic properties of the derivatives obtained comparing them with the free enzyme; evaluate the reuse capacity assets and stable derivatives and qualitatively analyze the product of hydrolysis of cellulosic substrates. The fungus A. niger secreted large amounts of CMCases, 34.1 U.mg-1 amid Vogel, using powdered sugarcane bagasse as a carbon source. The pH of 5 was determined as the optimum for the enzyme, presenting instability to pH 10. With the use of stabilizing additives, the 10% trehalose (w / v), kept at pH10, 80% residual activity for 25 hours. Regarding temperature there was a broad activity range from 45 °C to 75 °C and the optimum temperature as 65 °C. The enzyme derivative which offered better stability was one in which immobilization was conducted with the carboxymethycellulose substrate (1% CMC) in agarose support Glutaraldehyde (70% of reactive groups), preserving catalytic activity of 35% at 60 °C for 250 hours. Through qualitative TLC analysis, it... / Doutor

Orientador: Ana Maria Rodrigues Cassiolato / Banca: katia Luciene Maltoni / Banca: Francisco Maximino Fernandes / Banca: Júlio César Lima Neves / Banca: Edson Luiz Souchie / Resumo: Os solos de regiões tropicais apresentam alta capacidade de fixação de fósforo, processo que resulta na sua baixa disponibilidade para as plantas. Como o fósforo nas culturas é indispensável, justificam-se estudos relacionados à maximização do aproveitamento do fósforo não lábil do solo por meio de microrganismos solubilizadores de fosfato e fungos micorrízicos arbusculares. O objetivo do presente trabalho foi de averiguar os efeitos de Aspergillus niger Tiegh e de Glomus clarum Nicol. & Schenck em dois latossolos com diferentes teores de óxidos de ferro e alumínio e no crescimento de Urochloa brizantha (Hochst. ex A. Rich.) Stapf, visando o aproveitamento do fósforo não lábil do solo. O experimento foi conduzido em condições naturais de luz e temperatura, com solo não esterilizado, empregando vasos plásticos com capacidade para 30 dm3 de solo. O delineamento experimental utilizado foi inteiramente casualizado, com 6 repetições e esquemas fatoriais diferenciados. Para as variáveis da caracterização química do solo e as variáveis microbiológicas do solo utilizou-se o fatorial 5x2x7, correspondendo aos tratamentos: épocas, solos e inoculação com 5, 2 e 7 níveis, respectivamente. Os níveis de épocas foram: 0, 90, 180, 270 e 360 dias após o corte de uniformização e os níveis de solo foram LVdA e LVd1. O tratamento inoculação contou com os níveis: controle fosfatado, controle não fosfatado, A. niger 19, A. niger 26, G. clarum, G. clarum + A. niger 19, G. clarum + A. niger 26. Fósforo total, fósforo inorgânico e fósforo orgânico foram avaliados no esquema fatorial 2x2x7 com os mesmos tratamentos do esquema anterior, porém com apenas dois níveis para épocas: 180 e 360 dias. O fósforo disponível total e o fósforo não lábil foram analisados no esquema fatorial 2x7 ao final do experimento com os níveis de solo e inoculação... (Resumo completo, clicar acesso el / Abstract: The tropical soils have high phosphorus fixation capacity, a process that results in low availability to plants. As the phosphor in the cultures is essential, justifies related studies to maximize the use of non-labile soil phosphorus by phosphate solubilizing microorganisms and arbuscular mycorrhizal fungi. The aim of this study was to investigate the effects of Aspergillus niger and Glomus clarum Tiegh Nicol. & Schenck in two soils with different levels of iron and aluminum oxides, and the growth of Urochloa brizantha (Hochst. ex A. Rich.) Stapf, targeting the use of non-labile soil phosphorus. The experiment was conducted under natural conditions of light and temperature, with non-sterile soil, using plastic pots with a capacity of 30 dm3 of soil. The experimental design was completely randomized with six replications and differentiated factorial schemes. The variables for the soil chemical and microbiological characterization were analyzed in the 5x2x7factorial scheme, corresponding to the treatments: time, soil and inoculation, with 5, 2 and 7 levels, respectively. The levels of time were 0, 90, 180, 270 and 360 days after the uniformity cut, and the soil were LVdA and LVd1. The inoculation treatment levels included: control phosphate, no phosphate control, A. niger 19, A. niger 26, G. clarum, G. clarum + A. niger 19 and A. niger 26+G. clarum. Total phosphorus, inorganic and organic phosphorus were evaluated in a 2x2x7 factorial, with the same treatments as the previous scheme, but with only two levels for time: 180 to 360 days. The total available phosphorus and the non-labile phosphorus were analyzed in a 2x7 factorial scheme, at the end of the experiment, using the same levels of soil and inoculation as described. The plant variables were analyzed in a 2x7 factorial with the same levels of soils and inoculation... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Micotoxinas são metabólitos secundários produzidos por fungos filamentosos que podem contaminar os grãos em diferentes períodos de pré e pós-colheita. O objetivo desse trabalho foi avaliar a contaminação fúngica e por micotoxinas em diferentes períodos do cultivo do amendoim no Rio Grande o Sul, considerando diferentes regiões e cultivares, durante as safras 2006/2007 e 2007/2008 e, ainda, desenvolver um método eficiente de quantificação de aflatoxina B1, baseado na cromatografia em camada delgada com detector de carga acoplada. Foram coletadas nas regiões de Augusto Pestana e Ivorá, amostras dos cultivares Tatu e Paraguaio, em diferentes períodos da cultura: (1) solo pré-plantio, (2) enchimento dos grãos, (3) colheita, (4) pós-secagem e (5) solo pós-colheita. Os fungos contaminantes do solo foram quantificados pela técnica de diluição seriada e nos grãos, o percentual de incidência foi determinado pela técnica de plaqueamento direto. O potencial toxigênico de Aspergillus seção Flavi e Aspergillus seção Nigri foi verificado em Agar Coco e Agar Extrato de Levedura Sacarose, respectivamente. Aflatoxina B1 e ocratoxina A foram determinadas por cromatografia em camada delgada com detector de carga acoplada. As espécies predominantes em todas as amostras foram Aspergillus flavus e Aspergillus niger var. niger. Entre as espécies de A. flavus e A. parasiticus, 89,3% e 39,2%, se mostraram produtoras de aflatoxina B1, respectivamente. Nenhum dos isolados de A. niger var. niger produziu ocratoxina nas condições testadas. Aflatoxina B1 foi detectada em 50% das amostras, com níveis entre 16 μg/Kg e 115 μg/Kg. Ocratoxina A foi detectada em 25% das amostras, com níveis entre 12,2 μg/Kg e 76,9 μg/Kg. Foi observada a ocorrência simultânea das duas micotoxinas em amostras do período pós-colheita. O método desenvolvido para quantificação de aflatoxina B1, baseado em procedimentos de fotometria fotográfica, se mostrou sensível, eficiente e prático, apresentando um limite de detecção de 0,4 ng por mancha, um limite de quantificação de 1,2 μg/kg e média de recuperação de 92%. / Mycotoxins are secondary metabolites produce by filamentous fungi that can contaminate grains in different stages of pre and postharvest management. The objective of this study was to investigate the occurrence of fungi and mycotoxins at different maturation stages of peanut produced in different regions of south of Brazil during 2006/2007 and 2007/2008 harvests. Moreover, to develop an efficient quantification method of aflatoxin B1, based on thin-layer chromatography and charged coupled device detector. Peanut samples, Tatu and Paraguaio varieties, were obtained in regions of Augusto Pestana and Ivorá, in different stages of cultura: (1) soil before planting, (2) pod filling, (3) at harvest, (4) after drying, (5) soil after harvest. The soil contamination was quantified by serial dilution technique and the fungi incidence on grains was determinate by direct planting technique. The toxigenic potential of Aspergillus section Flavi and Aspergillus section Nigri was verified in Coco Medium Ágar and Yeast Extract Sucrose agar medium, respectively. Aflatoxin B1 and ochratoxin A were determinate by on thin-layer chromatography and charged coupled device detector. The predominant species in all samples were Aspergillus flavus and Aspergillus niger var. niger. Among the species of A. flavus and A. parasiticus, 89,3% e 39,2%, produced aflatoxin B1, respectively. None of A. section Nigri isolates were ochratoxin A producers in the conditions tested. Aflatoxin B1 was detected in 50% of samples, with levels of 16.0 μg/Kg to 115.0 μg/Kg. Ochratoxin A was detected in 25% of samples, with levels of 12.2 μg/Kg to 76.9 μg/Kg. It was observed the co-occurrence of both mycotoxins in samples of postharvest. The method developed for aflatoxin B1 quantification was sensitive, efficient and practical, with a detection limit of 0.4 ng per spot, a limit of quantification of 1.2 μg/kg and average recovery of 92%.

Micotoxinas são metabólitos secundários produzidos por fungos filamentosos que podem contaminar os grãos em diferentes períodos de pré e pós-colheita. O objetivo desse trabalho foi avaliar a contaminação fúngica e por micotoxinas em diferentes períodos do cultivo do amendoim no Rio Grande o Sul, considerando diferentes regiões e cultivares, durante as safras 2006/2007 e 2007/2008 e, ainda, desenvolver um método eficiente de quantificação de aflatoxina B1, baseado na cromatografia em camada delgada com detector de carga acoplada. Foram coletadas nas regiões de Augusto Pestana e Ivorá, amostras dos cultivares Tatu e Paraguaio, em diferentes períodos da cultura: (1) solo pré-plantio, (2) enchimento dos grãos, (3) colheita, (4) pós-secagem e (5) solo pós-colheita. Os fungos contaminantes do solo foram quantificados pela técnica de diluição seriada e nos grãos, o percentual de incidência foi determinado pela técnica de plaqueamento direto. O potencial toxigênico de Aspergillus seção Flavi e Aspergillus seção Nigri foi verificado em Agar Coco e Agar Extrato de Levedura Sacarose, respectivamente. Aflatoxina B1 e ocratoxina A foram determinadas por cromatografia em camada delgada com detector de carga acoplada. As espécies predominantes em todas as amostras foram Aspergillus flavus e Aspergillus niger var. niger. Entre as espécies de A. flavus e A. parasiticus, 89,3% e 39,2%, se mostraram produtoras de aflatoxina B1, respectivamente. Nenhum dos isolados de A. niger var. niger produziu ocratoxina nas condições testadas. Aflatoxina B1 foi detectada em 50% das amostras, com níveis entre 16 μg/Kg e 115 μg/Kg. Ocratoxina A foi detectada em 25% das amostras, com níveis entre 12,2 μg/Kg e 76,9 μg/Kg. Foi observada a ocorrência simultânea das duas micotoxinas em amostras do período pós-colheita. O método desenvolvido para quantificação de aflatoxina B1, baseado em procedimentos de fotometria fotográfica, se mostrou sensível, eficiente e prático, apresentando um limite de detecção de 0,4 ng por mancha, um limite de quantificação de 1,2 μg/kg e média de recuperação de 92%. / Mycotoxins are secondary metabolites produce by filamentous fungi that can contaminate grains in different stages of pre and postharvest management. The objective of this study was to investigate the occurrence of fungi and mycotoxins at different maturation stages of peanut produced in different regions of south of Brazil during 2006/2007 and 2007/2008 harvests. Moreover, to develop an efficient quantification method of aflatoxin B1, based on thin-layer chromatography and charged coupled device detector. Peanut samples, Tatu and Paraguaio varieties, were obtained in regions of Augusto Pestana and Ivorá, in different stages of cultura: (1) soil before planting, (2) pod filling, (3) at harvest, (4) after drying, (5) soil after harvest. The soil contamination was quantified by serial dilution technique and the fungi incidence on grains was determinate by direct planting technique. The toxigenic potential of Aspergillus section Flavi and Aspergillus section Nigri was verified in Coco Medium Ágar and Yeast Extract Sucrose agar medium, respectively. Aflatoxin B1 and ochratoxin A were determinate by on thin-layer chromatography and charged coupled device detector. The predominant species in all samples were Aspergillus flavus and Aspergillus niger var. niger. Among the species of A. flavus and A. parasiticus, 89,3% e 39,2%, produced aflatoxin B1, respectively. None of A. section Nigri isolates were ochratoxin A producers in the conditions tested. Aflatoxin B1 was detected in 50% of samples, with levels of 16.0 μg/Kg to 115.0 μg/Kg. Ochratoxin A was detected in 25% of samples, with levels of 12.2 μg/Kg to 76.9 μg/Kg. It was observed the co-occurrence of both mycotoxins in samples of postharvest. The method developed for aflatoxin B1 quantification was sensitive, efficient and practical, with a detection limit of 0.4 ng per spot, a limit of quantification of 1.2 μg/kg and average recovery of 92%.

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2016-11-28T13:54:18Z No. of bitstreams: 1 Daniela Dambros.pdf: 1123648 bytes, checksum: 7957dada7599c282694fc633775a8539 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-11-28T13:54:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Daniela Dambros.pdf: 1123648 bytes, checksum: 7957dada7599c282694fc633775a8539 (MD5) Previous issue date: 2015-02-27 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / The grapevine is one of the oldest plants cultivated by human and has significant social and economic importance worldwide. The Submedio San Francisco Valley has a key role in the production and export of the grape, however, the culture has a high susceptibility to postharvest fungal infections generating significant losses from cultivation to marketing. Aspergillus niger is a common fungal species in the region today, especially when harvesting occurs during rainy periods. In general, there is darkening and softening of the berries, in the fruit storage period, resulting in depreciation of the commercial value of the grape. There is a strong need to explore alternative measures in the postharvest that are safe and effective to reduce decay and increase shelf life. Thus, the objective of this study was to evaluate the inoculum concentration (102, 103, 104, 105, 106 e 107 conídia.mL-1), the wetness period (0, 12, 24, 36 e 48 h) and temperature (2, 5, 10, 15, 20 e 25 °C) that are optimal for disease establishment in table grape cv. Italy, evaluate the effect of Ca, K, Cu, Mg and Zn phosphites salts applied at postharvest by dipping the clusters in solutions at different concentrations (0,3; 0,9; 1,25; 1,7 and 2,0 g.L-1) in two inoculation periods of A. niger (12 and 24 h), and in vitro tests, by mycelial growth and conidia germination as well the chemical characteristics of the grape. The highest inoculum concentrations (106 and 107 conídia.mL-1), wetness period 48 h and temperature 25 °C showed the greatest mean lesion size, it means, that these are optimal conditions for the development of Aspergillus rot in Italy table grape. The phosphites inhibit mycelial growth and germination of conidia. Zn phosphite had significantly lower EC50 values to the others, as well as phosphite Ca for micelial growth. The lowest EC50 values are represented by K and Ca phosphite for conidial germination. There was no significant interaction between the salts in the applied concentrations and is not effective in reducing the severity of the disease in table grape. The Ca phosphite showed lower average size values of the lesion when the berries were treated 12 hours before inoculation, and could be relevant in future research. / A videira é uma das mais antigas plantas cultivadas pelo homem e apresenta significativa importância social e econômica no mundo todo. O Submédio do Vale do São Francisco tem papel primordial na produção e exportação da uva. Porém, essa cultura apresenta grande suscetibilidade a infecções fúngicas pós-colheita gerando perdas significativas desde o cultivo até a comercialização. Aspergillus niger é uma espécie fúngica freqüente na região principalmente quando a colheita ocorre em períodos chuvosos e os sintomas geralmente aparecem no período de armazenamento dos frutos. É um patógeno de grande importância, pois causa escurecimento e amolecimento das bagas depreciando o valor comercial da uva e resultando em sérios prejuízos. Há uma forte necessidade de explorar medidas alternativas na pós-colheita que sejam seguras e eficazes para reduzir os danos e aumentar o tempo de conservação de frutas e hortaliças em geral. Desta forma, o objetivo do trabalho foi avaliar, para dois isolados de A.niger, a concentração de inóculo (102, 103, 104, 105, 106 e 107 conídios.mL-1), o período de molhamento (0, 12, 24, 36 e 48 h) e a temperatura (2, 5, 10, 15, 20 e 25 °C) ideais para o estabelecimento da doença em uva de mesa cv. Itália, verificar o efeito de sais de fosfitos de Ca, K, Cu, Mg e Zn aplicados na pós colheita através da imersão dos cachos nas soluções em diferentes concentrações (0,3; 0,9; 1,25; 1,7 e 2,0 g.L-1) em dois tempos de inoculação do A. niger (12 e 24 h), bem como, avaliar o efeito desses sais in vitro através da mensuração do crescimento micelial e da germinação de conídios, sendo também avaliados os atributos químicos da uva. Em relação aos aspectos epidemiológicos verificou-se que as maiores concentrações de inóculo (106 e 107 conídios.mL-1), período de molhamento de 48 h e temperatura de 25 °C apresentaram as maiores médias de tamanho da lesão, ou seja, são as condições ótimas para o desenvolvimento da podridão em uva de mesa cv. Itália. As aplicações dos fosfitos inibiram o crescimento micelial e a germinação dos conídios. O fosfito de Zn apresentou valor de CE50 significativamente menor aos demais, assim como o fosfito de Ca para o crescimento micelial. Os menores valores de CE50 foram representados pelos fosfitos de K e Ca para a germinação de conídios. Em relação a aplicação dos fosfitos como manejo alternativo na pós-colheita, não houve interação significativa entre os sais com as concentrações aplicadas e não foram eficientes em reduzir a severidade da doença. O fosfito de Ca apresentou menores valores de tamanho médio da lesão quando tratados 12 h antes da inoculação podendo ser relevante em pesquisas futuras.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:03:07Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo1645_1.pdf: 622008 bytes, checksum: 9d4279a257223f3c1de092e45e4e59c0 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009 / Fundação de Amparo à Ciência e Tecnologia do Estado de Pernambuco / Microrganismos isolados e identificados, quando preservados por processos adequados podem ser armazenados por longos períodos. Existem métodos de preservação que asseguram a viabilidade, morfologia, fisiologia e genética, com o objetivo de manter a cultura por períodos, conservando as características genéticas e propriedades industriais. Aspergillus niger é a espécie mais comumente utilizada para a produção industrial de enzimas pectinolíticas. As enzimas pectinolíticas são um grupo heterogêneo de enzimas que hidrolisam as substâncias pécticas presentes nos vegetais. Este trabalho teve como objetivo avaliar a viabilidade, autenticar taxonomicamente 25 culturas de A. niger estocadas sob óleo mineral na Micoteca URM e produzir pectinases por fermentação em estado sólido (FES) da palma forrageira e da casca do maracujá utilizando a cultura selecionada. Todas as culturas reativadas foram viáveis e autenticadas taxonomicamente, apesar do longo período de estocagem, que variou de 1 a 41 anos. Quanto à capacidade pectinolítica, 23 culturas apresentaram halo de degradação ao redor da colônia, evidenciando a capacidade de degradar pectina. A cultura que apresentou maior halo de degradação foi URM4645 (18 mm), sendo selecionada para as FES, onde foram avaliadas as atividades de endopoligalacturonase (endo-PG), exopoligalacturonase (exo-PG), pectina liase (PL) e pectinesterase (PE). A atividade máxima obtida foi de 66,19 U/g de endo-PG, 3,59 U/g de exo-PG e 40.615,62 U/g de PL, nos tempos de 96, 24 e 72 horas de FES da palma forrageira, respectivamente. A melhor condição para a produção das enzimas foi obtida com 10,0 g do substrato, 107 esporos/g a 28ºC com 96 horas. A atividade ótima de endo-PG e PL foi em pH 5,0 a 50ºC e exo-PG em pH 7,0 a 40ºC. Endo-PG e exo-PG foram estáveis em uma faixa de pH 3,5-11,0 e a 50ºC e a 80ºC, respectivamente, e PL em pH 5,0 e a 50ºC. Utilizando a casca do maracujá a atividade máxima obtida foi de 31,35 U/g de endo-PG, 7,98 U/g de exo-PG, 551.299,39 U/g de PL e 447,93 U/g de PE, nos tempos de 96 horas de FES para a endo-PG e PL e 72 horas para a exo-PG e PE. A melhor condição para a produção das quatro enzimas foi obtida com 5,0 g do substrato, 30% de umidade a 34ºC com 96 horas. Endo-PG apresentou atividade ótima em pH 7,5 a 40ºC, exo-PG e PL em pH 7,0 a 80°C e PE em pH 3,5 a 30°C. Endo-PG foi estável na faixa de pH 7,0-8,0 e a 40ºC, enquanto exo-PG e PL foram estáveis na faixa de pH 6,0-8,0 e 6,0-7,5 e a 60-70ºC, respectivamente. PE foi estável na faixa de pH 3,5-5,0 e a 30-60ºC