Tradicionalmente, no tratamento de feridas graves o antimicrobiano tópico deve ser aplicado uma a duas vezes ao dia na área lesada para reduzir as infecções. No entanto, os pacientes geralmente sofrem desconforto com a aplicação de drogas tópicas e com a troca de curativos. Nesse contexto, o desenvolvimento de sistemas curativos biodegradáveis contendo fármaco antimicrobiano são fundamentais para a promoção de ações terapêuticas, reduzindo as infecções causadas por microrganismos e podendo substituir os curativos convencionas que não possuem polímeros biodegradáveis em sua composição. Para ir de encontro com essa necessidade, filmes de PBAT e PBAT/gentamicina foram preparados por meio de duas abordagens. Na primeira abordagem filmes de PBAT obtidos por casting foram funcionalizados por radiação UV durante 90 minutos na presença de O2 atmosférico para posterior inserção de gentamicina na superfície através de soluções tampões contendo EDC e gentamicina. A superfície das amostras foi analisada pelo WCA, FTIR-ATR e XPS. A análise antimicrobiana dos filmes também foi realizada. Os resultados para os filmes de PBAT por casting mostram que o tempo de irradiação produziu superfícies altamente hidrofílicas com grupos oxigenados enxertados na superfície do polímero (C=O e C-OH). A análise antimicrobiana indicou que a gentamicina não ligou covalentemente com o PBAT, porém observou-se a presença de nitrogênio na superfície das amostras pela análise de XPS Na segunda abordagem foram preparadas fibras de PBAT e PBAT/gentamicina a partir da eletrofiação. As soluções utilizadas no processo de eletrofiação foram preparadas com diferentes concentrações de gentamicina e passaram por análises de condutividade e viscosidade. As fibras de PBAT e PBAT/gentamicina foram caracterizadas quanto a suas propriedades físico-químicas, morfológicas, térmicas, antimicrobianas e biológicas. Nos resultados obtidos para as fibras de PBAT e PBAT/gentamicina observou-se que não houve mudança nos espectros após a mistura dos materiais, uma vez que as bandas de absorção foram preservadas e não houve o aparecimento de novos picos. A presença da gentamicina modificou a morfologia das amostras, diminuindo o diâmetro das fibras. O grau de intumescimento foi alterado com o acréscimo de gentamicina e houve modificação da morfologia das fibras após 48 horas de imersão em PBS, porém as fibras mantiveram-se presentes. A gentamicina aumentou o grau de molhabilidade das fibras PBAT. As fibras de PBAT/gentamicina possuem atividade antimicrobiana frente às cepas de E. coli e não apresentaram citotoxicidadede acordo com o padrão ISO 10993-5. Estes resultados reforçam que o PBAT pode ser usado como um sistema curativo com incorporação de fármaco, mostrando ser uma alternativa interessante de curativo/adesivo para uso tópico. / Traditionally in the treatment of serious wounds, topical antimicrobial should be applied 1–2 times daily to the injured area to reduce infections. However, patients often suffer from discomfort with the application of topical drugs and with the exchange of dressings. In this context, the development of biodegradable curative systems containing antimicrobial drug are fundamental for the promotion of therapeutic actions, reducing the infections caused by microorganisms and being able to substitute conventional dressings that there aren’t biodegradable polymers in their composition. To meet this need, PBAT and PBAT/gentamicin films were prepared using two approaches. In the first approach PBAT films obtained by casting were functionalized by UV radiation for 90 minutes in the presence of atmospheric O2 for subsequent insertion of gentamicin on the surface through buffer solutions containing EDC and gentamicin. The surface of the samples was analyzed by the WCA, FTIR-ATR and XPS. Antimicrobial analysis of the films was also performed. The results for the PBAT films by casting show that the irradiation time produced highly hydrophilic surfaces with oxygenated groups grafted onto the polymer surface (C=O and C-OH). Antimicrobial analysis indicated that gentamycin did not bind covalently with PBAT, but nitrogen was observed on the surface of the samples by XPS analysis In the second approach, PBAT and PBAT/gentamicin fibers were prepared from the electrospun. The solutions used in the electrospun process were prepared with different concentrations of gentamicin and underwent conductivity and viscosity analyzes. The PBAT and PBAT/gentamicin fibers were characterized as their physical-chemical, morphological, thermal, antimicrobial and biological properties. In the results obtained for the PBAT and PBAT/gentamicin fibers, it was observed that there was no change in the spectra after the materials were mixed, since the absorption bands were preserved and there were no new peaks. The presence of gentamicin modified the morphology of the samples, reducing the diameter of the fibers. The degree of swelling was altered with the addition of gentamicin and there was a change in the morphology of the fibers after 48 hours of immersion in PBS, but the fibers remained present. Gentamicin increased the degree of wettability of PBAT fibers. PBAT/gentamicin fibers have antimicrobial activity against E. coli strains and did not present cytotoxicity according to ISO 10993-5 standard. These results reinforce that PBAT can be used as a curative system with drug incorporation, proving to be an interesting dressing/adhesive alternative for topical use.

O presente trabalho teve como objetivo avaliar a atividade antimicrobiana dos materiais reparadores de uso endodôntico MTA/Bio Angelus, cimento Portland branco, MTA Angelus branco e MTA ProRoot branco sobre os microorganismos Enterococcus faecalis, Escherichia coli e Staphylococcus aureus pelos os testes de difusão em ágar e de contato direto. Os dados experimentais foram obtidos através da mensuração do halo de inibição formado e pela contagem de unidades formadoras de colônia, respectivamente. Para análise dos dados empregaram-se os testes estatísticos de Análise de Variância (ANOVA) e de Comparações Múltiplas de Tukey. De posse dos resultados, foi possível verificar que o MTA/Bio Angelus apresentou atividade antimicrobiana sobre todas as espécies bacterianas testadas no teste de difusão em ágar e no teste por contato direto, o material reparador demonstrou atividade antimicrobiana superior aos demais materiais testados e que este último teste demonstrou ser uma metodologia segura, reproduzível e confiável. / The aim of this study was to evaluate the antimicrobial activity of repair materials of endodontic use MTA/Bio Angelus, white Portland cement, white MTA Angelus and white MTA ProRooton Enterococcus faecalis, Escherichia coli and Staphylococcus aureus by the agar diffusion test and the direct contact test. Data was retrieved by measuring the zones of inhibiton and by counting colony-forming units, respectively. Statistical analysis was performed using the ANOVA test followed by Tukey Multiple Comparisons test. The results showed that MTA/Bio Angelus presented antimicrobial activity against all bacteria in the agar diffusion test and in the direct contact test, MTA/Bio Angelus presented superior antimicrobial activity. In addition, our results suggest that the use of the direct contact test is a safe, reproducible and trustable method.

Submitted by Morgana Andrade (morgana.andrade@ufes.br) on 2016-04-08T20:24:35Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) tese_6676_Dissertao_Christine Facco_2013.pdf: 1315436 bytes, checksum: 39ff1bc59d15b9b7a17e711efee2949b (MD5) / Approved for entry into archive by Patricia Barros (patricia.barros@ufes.br) on 2016-05-13T14:04:33Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) tese_6676_Dissertao_Christine Facco_2013.pdf: 1315436 bytes, checksum: 39ff1bc59d15b9b7a17e711efee2949b (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-13T14:04:33Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) tese_6676_Dissertao_Christine Facco_2013.pdf: 1315436 bytes, checksum: 39ff1bc59d15b9b7a17e711efee2949b (MD5) / Essa dissertação teve o apoio financeiro do Edital Universal 14/2011 CNPq (nº processo: 483036/2011-0) e do Edital PROEX nº 04/2011. / Na tentativa de obter novas substâncias com atividade antibacteriana, o objetivo desse trabalho foi avaliar o potencial antibacteriano de quatro peptídeos sintetizados, dos quais dois possuem sequência derivada da fragmentação in silico do G-CSF humano, enquanto os outros dois foram planejados teoricamente, verificando, assim, seu interesse como novos agentes terapêuticos na saúde humana. A avaliação foi realizada em duas etapas: análise in silico, que consistiu em predições de propriedades e parâmetros associados à ação antibacteriana, por meio de ferramentas computacionais; e o experimento in vitro para a determinação da concentração inibitória mínima (MIC) dos peptídeos contra bactérias Gram positivas e negativas. A maioria das predições foi favorável para os quatro peptídeos, pois os resultados determinados para hidrofobicidade, anfipaticidade, tamanho, estrutura secundária, carga líquida, potencial de ligação em membrana, meia-vida e índice de Boman encontram-se dentro de valores desejados para o potencial antibacteriano. Na análise in silico, apenas a predição algorítmica da atividade antimicrobiana gerou resultados desfavoráveis para os peptídeos com sequências derivadas do G-CSF (peptídeos 1 e 2), porém essa mesma predição foi positiva para os outros dois. O ensaio in vitro demonstrou que até a concentração mais alta utilizada dos quatro peptídeos (500 μg/mL) foi insuficiente para a determinação de sua concentração inibitória mínima, porém, observou-se considerável diminuição no crescimento de E. coli (58,7%) pelo peptídeo 4 e de E. fecalis (86,1%) e E. coli (54,9%) pelo peptídeo 3, em comparação com o controle de viabilidade. Esses valores indicam a presença de ação antibacteriana por parte dos peptídeos planejados teoricamente (peptídeos 3 e 4), corroborando com as predições computacionais. Dessa forma, é possível concluir que a análise in silico foi de suma importância para a seleção dos peptídeos a serem sintetizados, os quais apresentaram nos ensaios in vitro resultados em concordância com a predição computacional de atividade antimicrobiana. / In attempt to obtain new substances with antibacterial activity, the aim of this study was to evaluate the antibacterial potential of four synthesized peptides, where two of them have sequence derived from human G-CSF in silico fragmentation, while the other two were theoretically planned, allowing the verification of their interest as new therapeutic agents at human health. The evaluation was performed in two stages: in silico analysis, consisting of predictions of properties and parameters associated with antibacterial effect, through computational tools; and the in vitro experiment for determination of the minimum inhibitory concentration (MIC) of the peptides against Gram positive and negative bacteria. Most predictions was favorable for all four peptides, showed by determined results of hydrophobicity, amphipathicity, size, secondary structure, net charge, membrane binding potential, half-life and Boman Index, considered as desirable values for antibacterial potential. In the in silico analysis, only algorithmic prediction of antimicrobial activity revealed unfavorable results for peptides with sequences derived from G-CSF (peptides 1 and 2), nonetheless, the predictions were positive for the other two. The in vitro assay showed that up to the highest concentration used of the four peptides (500 μg/mL) was insufficient for determination of minimum inhibitory concentration, however it was possible to observe significant growing decrease of E. coli (58.7%) by peptide 4 and E. fecalis (86.1%) and E. coli (54.9%) by peptide 3, when compared with the viability control. These values indicate the presence of antibacterial activity in the theoretically planned peptides (peptides 3 and 4), confirming the computational predictions. Thus, it is possible to conclude that the in silico analysis was very important for the selection of the peptides to be synthesized, which showed results of in vitro assays in agreement with the computational prediction of antimicrobial activity.

Submitted by JONÂTAS RAFAEL DE OLIVEIRA null (jroliveira16@hotmail.com) on 2016-04-06T20:01:18Z No. of bitstreams: 1 #TESE COMPLETA.pdf: 2320841 bytes, checksum: da9a41fcb44d79b7879a708f1c2de87e (MD5) / Approved for entry into archive by Felipe Augusto Arakaki (arakaki@reitoria.unesp.br) on 2016-04-08T16:37:41Z (GMT) No. of bitstreams: 1 oliveira_jr_dr_sjc.pdf: 2320841 bytes, checksum: da9a41fcb44d79b7879a708f1c2de87e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-08T16:37:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 oliveira_jr_dr_sjc.pdf: 2320841 bytes, checksum: da9a41fcb44d79b7879a708f1c2de87e (MD5) Previous issue date: 2016-02-12 / Não recebi financiamento / No presente estudo foram avaliadas algumas atividades biológicas dos extratos de R. officinalis L. (alecrim) e T. vulgaris L. (tomilho), verificando: I. Atividade antimicrobiana sobre biofilmes monomicrobianos de Candida albicans, Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis, Streptococcus mutans e Pseudomonas aeruginosa e associações de C. albicans com cada uma destas bactérias, após determinação da concentração inibitória mínima (CIM) e concentração microbicida mínima (CMM) sobre culturas planctônicas destes micro-organismos; II. Viabilidade celular sobre macrófagos de camundongo (RAW 264.7), fibroblastos gengivais humanos (FMM-1), linhagem tumoral de carcinoma mamário (MCF-7) e linhagem tumoral de carcinoma cervical (HeLa); III. Atividade anti-inflamatória sobre RAW 264.7 estimulada por lipopolissacarídeo (LPS) de Escherichia coli; e IV. Atividade genotóxica. Após verificação da capacidade antimicrobiana dos extratos, por método de microdiluição em caldo, as concentrações mais efetivas foram aplicadas nos demais testes. Sobre os biofilmes mono e polimicrobianos, formados por 48 h em poços de placa de microtitulação, a ação dos extratos foi analisada após exposição de 5 min, com quantificação de UFC/mL e analise de sua viabilidade. Da mesma forma, sobre as linhagens celulares (RAW 264.7, FMM-1, MCF-7 e HeLa), cultivadas por 24 h em placas de microtitulação, os extratos foram analisados com os ensaios de MTT, vermelho neutro (VN) e cristal violeta (CV). Foi analisado o efeito anti-inflamatório dos extratos com ensaio imunoenzimático ELISA, pela quantificação de citocinas pró-inflamatórias (TNF-α e IL-1β). A genotoxicidade dos extratos foi verificada pela frequência de micronúcleos (MN) formados em 1000 células. Os resultados foram analisados por T-Test ou ANOVA e Tukey Test (p ≤ 0,05). Em relação ao extrato de R. officinalis L. foi observada redução significativa de todos os biofilmes após exposição de 5 min, bem como, redução de sua viabilidade. Quanto às células, foi observado viabilidade celular acima de 50% a ≤ 50 mg/mL. O nível de IL-1β não se alterou com as concentrações do extrato, entretanto quando RAW 264.7 foi estimulada por LPS, houve inibição da produção desta citocina. Em relação ao nível de TNF-α, houve modulação da síntese desta citocina, sem e com LPS. Foi constatado também ausência de genotoxicidade, uma vez que, a frequência de MN foi semelhante ou menor ao grupo controle. Em relação ao extrato de T. vulgaris L., todos os biofilmes mono e polimicrobianos apresentaram reduções significativas em comparação ao grupo controle. A viabilidade dos biofilmes também foi reduzida. Sobre todas as linhagens celulares foi observada viabilidade celular acima de 50%. Efeito imunomodulador foi observado na síntese de IL-1β e TNF-α. A formação de MN foi semelhante ou inferior ao grupo controle, em todas as linhagens. Com isso, foi concluído que ambos os extratos foram efetivos sobre biofilmes mono e polimicrobianos, proporcionaram viabilidade celular para as culturas acima de 50%, apresentaram efeito imunomodulador e não foram genotóxicos. / This study performed some biological activities of R. officinalis L. (rosemary) and T. vulgaris L. (thyme) extracts, such as: I. Antimicrobial activity on monomicrobial biofilms of Candida albicans, Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis, Streptococcus mutans and Pseudomonas aeruginosa and C. albicans association with each of these bacteria, after determination of the minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum microbicidal concentration (MMC) on planktonic cultures of these microorganisms; II. Cell viability on mouse macrophages (RAW 264.7), human gingival fibroblasts (FMM-1), human breast carcinoma cells (MCF-7) and cervical carcinoma cells (HeLa); III. Anti-inflammatory activity on lipopolysaccharide (LPS)-stimulated RAW 264.7; and IV. Genotoxic activity. After checking the antimicrobial capacity of the extracts by broth microdilution method, the most effective concentrations were applied in the other tests. On mono- and polymicrobial biofilms formed by 48 h in microtitre plate wells, the action of the extracts was analyzed after 5 min exposure, with counting of CFU/mL and analysis of their viability. Likewise, in the cell lines (RAW 264.7, FMM-1, MCF-7 and HeLa cells) cultured for 24 h in microtitre plates, the extracts were analyzed by MTT, neutral red (NR) and crystal violet (CV) assays. By ELISA assay, anti-inflammatory effect of the extracts was analyzed with quantification of proinflammatory cytokines (TNF-α and IL-1β). The genotoxicity of the extracts was verified by the micronuclei frequency (MN) formed in 1000 cells. The results were analyzed by T-Test or ANOVA and Tukey test (p ≤ 0.05). Regarding the R. officinalis L. extract was observed significant reduction of all biofilms after 5 min of exposure, as well as reduction their viability. Additionally, cell viability above 50% to ≤ 50 mg/mL was observed on lineages. The IL-1β level did not change with the concentrations of the extract, but when RAW 264.7 was stimulated by LPS, there was inhibition of the production of this cytokine. In relation to the level of TNF-α, was modulation of the synthesis of this cytokine with and without LPS. It was also observed lack of genotoxicity, since the frequency of MN was similar or less than the control group. Regarding to T. vulgaris L. extract, all mono and polymicrobial showed significant reductions compared to the control group. Their viability was also reduced. On all cell lines was observed cell viability above 50%. Immunomodulatory effect was observed in IL-1β and TNF-α synthesis. The MN formation was similar or lower than the control group in all cell lines. Thus, it was concluded that both extracts were effective on mono- and polymicrobial biofilms, promoted cell viability above 50% for cultures, presented immunomodulatory effect and were non-genotoxic.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:25:26Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-03-28Bitstream added on 2014-06-13T20:53:20Z : No. of bitstreams: 1 pelissari_gp_me_arafcf.pdf: 3328486 bytes, checksum: eca10418295f68f0485506997b0e2f5b (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / Diante do amplo uso popular da espécie Melampodium divaricatum (Rich. In Pers.) DC (Asteraceae) conhecida no Brasil como falsa-calêndula, fica evidente o provável potencial farmacológico desta espécie justificando assim estudos que possam confirmar suas atividades biológicas bem como aspectos que garantam a qualidade e segurança de seu uso pela população. Neste trabalho foram estudados os extratos aquosos, etanólicos e o óleo essencial obtido a partir das partes aéreas desta espécie buscando avaliar possíveis atividades biológicas, bem como o estudo de parâmetros farmacognósticos relacionados à qualidade do material vegetal em estudo. Avaliou-se o efeito destes extrativos no sistema imunológico murino, utilizando cultura de macrófagos peritoneais de camundongos Swiss e também a atividade antimicrobiana pela metodologia de difusão em ágar frente às bactérias Gram-positivas: Staphylococcus aureus e Bacillus subtilis e Gram-negativas: Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Proteus mirabilis, Shigella sonnei, Serratia marcescens. O estudo farmacognóstico foi realizado através de ensaios físico-químicos, qualitativos e quantitativos. Os resultados indicam que o material vegetal encontra-se dentro dos padrões de qualidade estabelecidos para materiais vegetais em geral. Os componentes majoritários presentes no óleo essencial, trans-cariofileno (48,6%); germacreno-D (13,2%); biciclogermacreno (10,6%); óxido de cariofileno (3,0%) e α-humuleno (2,2%) não apresentam variações estatisticamente significativas quando obtidos do material vegetal seco e fresco. Em triagem fitoquímica das partes aéreas foi caracterizada a presença de flavonóides e triterpenos e através de doseamento verificou-se que o extrato etanólico 99,5% apresentou um maior teor de flavonóides totais. / According the ample popular use of the Melampodium divaricatum (Rich. In Pers.) DC (Asteraceae) known in Brazil as false-calendula, it is evident the pharmacological potential of this species which justify studies that confirm its biological activities and aspects that guarantee the quality and safety of its use for the population. In this work the aqueous and ethanolic extracts as well as the essential oil from the aerial parts of this species had been studied in order to evaluate possible biological activities, as well as the study of related pharmacognostic parameters to the quality of the plant. It was evaluated the effect of these extractives in murine imunne system, using peritoneal macrophages cultures from Swiss mice and also the antimicrobial activity for the methodology of agar diffusion to Gram-positive bacteria: Staphylococcus aureus and Bacillus subtilis and Gram-negatives: Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Proteus mirabilis, Shigella sonnei, Serratia marcescens. The pharmacognostic study was carried through qualitative and quantitative assays physicochemical. The results indicate that the vegetal material was according to established standards of quality established for plant drugs in general. The majority components present in the essential oil trans-caryophyllene (48.6%); germacrene-D (13.2%); bicyclogermacrene (10.6%); caryophyllene oxide (3.0%), α-humulene (2.2%), do not present statiscally significant variations when obtained from dry or fresh plant. In phytochemistry analysis of the aerial parts the presence of flavonoids and triterpenoids was characterized and through dosage was verified that the ethanolic extract presented higher level of total flavonoids. As extracts as essential oils presented immunomodulatory activity to the murine macrophages, inhibiting powerfully the production of NO and H2O2 in a form dose-dependent.

A diferenciação entre processos infecciosos e inflamatórios representa um grande desafio na área de diagnóstico. A complexação do antimicrobiano ciprofloxacino (CIP) com o tecnécio (99mTc-CIP) vem sendo estudada com objetivo de desenvolver um radiofármaco com alta especificidade no diagnóstico de infecções, baseado em seu amplo espectro de atividade antibacteriana. O mecanismo de ação do fármaco consiste na ligação deste com a enzima ADN-girase da bactéria, permitindo sua ligação à bactéria ativa e a obtenção de imagens devido a fótons emitidos pelo 99mTc. Tendo em vista que o local de formação do complexo envolve os mesmos grupos funcionais responsáveis pela ligação do fármaco à enzima, sua eficácia pode ser prejudicada. A diferenciação entre processos infecciosos e inflamatórios representa um grande desafio na área de diagnóstico. A complexação do antimicrobiano ciprofloxacino (CIP) com o tecnécio (99mTc-CIP) vem sendo estudada com objetivo de desenvolver um radiofármaco com alta especificidade no diagnóstico de infecções, baseado em seu amplo espectro de atividade antibacteriana. O mecanismo de ação do fármaco consiste na ligação deste com a enzima ADN-girase da bactéria, permitindo sua ligação à bactéria ativa e a obtenção de imagens devido a fótons emitidos pelo 99mTc. Tendo em vista que o local de formação do complexo envolve os mesmos grupos funcionais responsáveis pela ligação do fármaco à enzima, sua eficácia pode ser prejudicada. O objetivo deste trabalho foi avaliar as condições ideais para ligação do 99mTc a duas quinolonas (CIP e pefloxacino), utilizando diferentes agentes redutores (SnCl2 e FSA), pH da solução e temperatura de incubação. A complexação dos fármacos ao radioisótopo 99mTc foi avaliada através do controle radioquímico, utilizando cromatografia em camada delgada. Posteriormente, testou-se sua atividade antimicrobiana in vitro utilizando diferentes microorganismos. O agente redutor FSA não foi eficiente na formação do complexo, resultando em uma concentração alta de Tc livre (37%). A formulação com Sn aumentou a formação de colóide com aquecimento (100 ºC). A complexação dos antimicrobianos ao Tc impediu sua ligação à ADN-girase. A taxa de ligação variou de 10% (filtração) a 16% (centrigugação). Além disso, verificou-se boa correlação entre a formação de colóide e quantidade de radiação ligada à bactéria em ambos os testes. Esta perda de atividade vem de encontro a alguns estudos clínicos relatados na literatura, que revelam a não diferenciação entre processos infecciosos e processos inflamatórios pelas quinolonas marcadas com 99mTc. / Differentiation between inflammation and infection represents a major challenge in clinical diagnostics. Several studies using ciprofloxacin (CIP), a broad spectrum antimicrobial agent, complexed with technetium (99mTc) have been reported in order to evaluate its capacity to diagnose infections. CIP mechanism of action involves its binding with bacterial DNA-gyrase during the growth phase and the acquisition of images due to 99mTc radioactivity. The fact that the sites of complexation are the same as those involved in bacterial binding it may affect its antimicrobial activity. The objective of the present work was to evaluate the ideal conditions for the complexation of CIP and pefloxacin with 99mTc using stannous chloride and formamidinesulfinic acid (FSA) as reducing agents, different pH and temperatures. The efficiency of complexation was monitored using radiochemical control as well as thin layer chromatography. Furthermore the antimicrobial activity of both complexes was evaluated in vitro. FSA was not adequate as a reducing agent and SnCl2 was better at room temperature than using heat (100 oC). The complexes did not bound well to the bacterias with binding efficiencies ranging from 10 (filtration method) to 16% (centrifugation method). Besides that, a good correlation between colloid formation (impurity) and radioactivity bound to bacterias was found. This decrease in bacterial activity was previously reported in some articles suggesting that quinolones complexed with 99mTc are not suitable to diagnose infections in the presence of inflammation.

Resumo: Helicobacter pylori é, atualmente, reconhecido como o principal fator de risco para desenvolvimento da gastrite crônica e úlcera péptica. A resposta inflamatória decorrente da infecção por essa bactéria induz alterações patológicas no microambiente gástrico, com a liberação de citocinas e de grande quantidade de espécies reativas de oxigênio (EROs) por células inflamatórias, especialmente neutrófilos, que contribuem para a injúria da mucosa e desenvolvimento de câncer gástrico. Neste trabalho, a citotoxicidade basal, atividade anti-H. pylori e antioxidante de extratos (apolares e polares), frações, mistura de triterpenos (- amirina e -amirina) e compostos fenólicos (amentoflavona, (+)-catequina, galato de metila, quercetina-3-O--L-arabinopiranosídeo e quercetina-3-O--D-galactopiranosídeo) obtidos de plantas do Cerrado brasileiro, empregadas popularmente no tratamento de distúrbios gastrintestinais, foram determinadas pela técnica do vermelho neutro, microdiluição em caldo, redução do radical 1,1-difenil-2-picril-hidrazila (DPPH) e quimiluminescência dependente de luminol, respectivamente. As preparações vegetais (extratos, frações e mistura de triterpenos) apresentaram baixo potencial citotóxico para a linhagem celular empregada (McCoy). Dentre os compostos fenólicos, quercetina (padrão comercial) e (+)-catequina apresentaram maior citotoxicidade quando comparadas aos extratos, frações e mistura de triterpenos. As espécies Byrsonima crassa (Malpighiaceae) e Davilla elliptica (Dilleniaceae) demonstraram maior potencial para o tratamento de doenças induzidas pelo H. pylori por proporcionarem maior atividade antibacteriana (concentração mínima inibitória = 1024 g/mL), entretanto frações enriquecidas e substâncias isoladas não foram conclusivas para o reconhecimento de grupos ou compostos que pudessem inferir a mesma capacidade... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Helicobacter pylori is a bacterium recognized as the major cause of chronic gastritis and peptic ulcer. The H. pylori infection induces an inflammatory response and pathological changes in the gastric microenvironment. The host immune cells (especially neutrophils) release inflammatory mediators and large amounts of reactive oxygen species (ROS), which are related to an increased risk of developing gastric cancer. In this study, we evaluated the basal cytotoxicity, anti-H. pylori and antioxidant activities of extracts (apolar and polar), fractions, mixture of triterpenes (-amirin and -amirin) and phenolic compounds (amentoflavone, (+)-catechin, methyl gallate, quercetin 3-O--L-arabinopyranoside and quercetin-3-O--D-galactopyranoside) obtained from Brazilian Cerrado plants used to treat gastrointestinal disorders, by neutral red uptake assay, broth microdilution method, 1,1- diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) radical and luminol-dependent chemiluminescence assays, respectively. A low basal cytotoxicity was showed by the vegetal preparations (extracts, fractions and mixture of triterpenes). Among the phenolic compounds tested, quercetin (commercial standard) and (+)-catechin demonstrated higher cytotoxicity as compared to extracts, fractions and mixture of triterpenes. The Byrsonima crassa (Malpighiaceae) and Davilla elliptica (Dilleniaceae) specie presented greater potential for the treatment of H. pylori-induced gastric pathologies, since they have better antibacterial activity (minimum inhibitory concentration = 1024 g/mL). However, fractions and isolated compounds were not conclusive to identify substances that could be accountable for the antimicrobial activity of the extracts. The antioxidant activity in vitro (DPPH assay) was not necessarily the same as those observed in the ex vivo assay (luminol-dependent chemiluminescence). Although the poor anti-H. pylori activity... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Maria Stella Gonçalves Raddi / Coorientador: Luiz Marcos da Fonseca / Banca: Luiz Marcos da Fonseca / Banca: Celso Vataru Nakamura / Banca: Clélia Akiko Hiruma Lima / Banca: Wagner Vilegas / Banca: Iracilda Zeppone Carlos / Doutor

No presente trabalho nanopartículas de prata (NPsAg) foram preparadas via fotoquímica na presença de citrato de sódio ou argila (SWy-1, SYn-1 e Laponita B) como estabilizantes e, Irgacure 2959 ou Lucirin TPO como fotorredutores. As NPsAg foram caracterizadas por Espectroscopia de UV-Vis, Espalhamento de Luz Dinâmico (DLS), Difração de raios X (DRX) e Microscopia Eletrônica de Transmissão (MET). Durante a síntese fotoquímica, foi observado o aparecimento de uma banda de absorção plasmônica por volta de 400 nm, seguida pela alteração da coloração da solução, passando de incolor para amarela, indicando a formação das nanopartículas. As imagens de MET revelaram que durante a formação ocorre a rápida redução da prata, originando pequenas partículas esféricas, como também grandes aglomerações de prata. Durante a irradiação os aglomerados maiores desaparecem por fotofragmentação, as partículas menores coalescem até atingirem certa estabilidade e, no final da irradiação, apenas partículas de morfologia esférica estão em solução. O tipo de estrutura (intercalada ou esfoliada) obtida após a fotorredução da prata mostrou ser um fator determinante no tamanho e estabilidade das NPsAg. Os resultados de DRX mostraram que as amostras de NPsIrg/Lap B, NPsLuc/Lap B e NPsLuc/SWy-1 apresentaram alguma esfoliação da argila após a redução da prata. Nesse caso, as NPsAg obtidas foram mais uniformes e com menores diâmetros (~3 nm). A esfoliação da argila promove uma maior área de adsorção e estabilidade para as NPsAg. Por outro lado as amostras com estrutura intercalada (NPsIrg/SWy-1) e não intercalada (NPsIrg/SYn-1 e NPsLuc/SYn-1) revelaram partículas com diâmetros maiores (5-12 nm), não uniformes e agregação de algumas partículas. A atividade antimicrobiana das argilas puras, NPsLuc/Citrato e NPsLuc/Argila, foi investigada contra as bactérias Escherichia coli (E. coli) e Staphylococcus aureus (S. aureus). A amostra de NPsLuc/SWy-1 apresentou uma ótima atividade antimicrobiana contra ambas as bactérias testadas (~ 4% de índice de sobrevivência). Por outro lado, a argila Laponita B e NPsLuc/Lap B não demonstraram nenhuma atividade antimicrobiana. A presença de sítios ácidos na região interlamelar da argila SWy-1 contribui na liberação de íons Ag+ da superfície das NPsAg e, consequentemente, melhora a atividade antimicrobiana das NPsAg. Os resultados de fotocalorimetria (PCA) mostraram que os valores da porcentagem de conversão e da velocidade de polimerização (Rp) diminuem com a adição de NPsAg (5 e 10% v/v). A porcentagem de conversão mudou de 61%, na ausência de NPsAg/Citrato e NPsAg/Argila, para aproximadamente 53% na presença de de NPsAg/Citrato e NPsAg/Argila. A presença das nanopartículas pode ser responsável por uma menor penetração de luz ao sistema. Portanto, a fotólise do fotoiniciador pode ser menos eficiente. / In the present work was obtained by photochemical method silver nanoparticles (AgNPs) in the presence of citrate or clay (SWy-1, SYn-1, and Laponite B) as stabilizers and Irgacure 2959 or Lucirin TPO as photoreductors. AgNPs were characterized using UV-Vis pectroscopy, Dynamic Light Scattering (DLS), X ray Diffraction (XRD) and Transmission Electron Microscopy (TEM). During the photochemical synthesis was observed a plasmon absorption band around 400 nm, followed by a change of colour in the solution, from colorless to yellow, indicating the formation of nanoparticles. TEM images revealed that during the formation occurs a fast silver reduction, resulting in spherical particles and large silver clusters. During the irradiation, large aggregates desappeared for photofragmentation, smaller particles coalesce to achieve some stability and in the end of irradiation only spherical morphology particles were in solution. The typical structure (intercalated or exfoliated) obtained after silver photoreduction proved to be a determining factor in the size and stability of AgNPs. XRD results showed that NPsIrg/Lap B, NPsLuc/Lap B and NPsLuc/SWy-1 samples presented some clay exfoliation after the silver reduction. The XRD results of AgNPs samples stabilized with Laponite B (NPsIrg/Lap B e NPsLuc/Lap B) and NPsLuc/SWy-1 presented exfoliated and partially exfoliated structures, respectively. In this case, AgNPs obtained were more uniform and presented smaller diameters (~ 3 nm). The clay exfoliation promoted greater absorption area and stability for AgNPs. On the other hand, samples with intercalated (NPsIrg/SWy-1) and non intercalated (NPsIrg/SYn-1 e NPsLuc/SYn-1) structure, presented particles with larger diameters (5-12 nm), non uniform and some aggregation of these particles. The antimicrobial activities of pure clays, NPsLuc/Citrate and NPsLuc/Clay were investigated against Escherichia coli (E. coli) and Staphylococcus aureus (S. aureus). The NPsLuc/SWy-1 sample showed good antimicrobial activity against both tested species (~ 4% survival index). On the other hand, Laponite B and NPsLuc/Lap B samples did not demonstrate any antimicrobial activity. The presence of the acid sities in the interlayer region of the SWy-1 clay contributed to the Ag+ ions release from the AgNPs surface, and consequently improving the AgNPs antimicrobial activity. The results showed that the conversion degree and the polymerization rate (Rp) values decreased with the addition of AgNPs (5 and 10% v/v). The conversion degree changed from 61%, in the absence of AgNPs/Clay, to 53% in the presence of the AgNPs/Clay. The presence of silver nanoparticles can be responsible for less light penetration into system. Therefore, the photolysis of the photoinitiator can be less efficient.

O objetivo do presente estudo foi avaliar a pasta à base de hidróxido de cálcio (Calen®), associada ou não ao digluconato de clorexidina a 0,4%, em cultura de macrófagos da linhagem RAW 264.7, cultura primária de células da linhagem osteoblástica e em tecido subcutâneo de camundongos. Além disso, foi avaliada a atividade antimicrobiana desses materiais. Em cultura de macrófagos RAW 264.7 foram avaliados os seguintes aspectos: a viabilidade celular (Ensaio de MTT), propriedades imunoestimuladoras (dosagem de óxido nítrico) e propriedades antiinflamatórias (dosagem de óxido nítrico, TNF-α e IL-1α). Em cultura primária de células da linhagem osteoblástica foram avaliados viabilidade celular (períodos de 3, 7 e 10 dias), conteúdo de proteína total (Método de Lowry modificado nos períodos de 7 e 10 dias), atividade da fosfatase alcalina (liberação de timolftaleína nos períodos de 7 e 10 dias e in situ pelo método do Fast red), proteínas da matriz não-colágena (marcação por Imunofluorescência Indireta e Fluorescência Direta por meio da utilização da faloidina e DAPI, nos períodos de 3, 7 e 14 dias) e formações nodulares de matriz mineralizada (marcação pelo vermelho de Alizarina nos períodos de 3, 7 e 14 dias). A atividade antimicrobiana foi avaliada por meio do teste de difusão em ágar, sobre 2 microrganismos indicadores (Enterococcus faecalis e Kocuria rhizophila). A biocompatibilidade após implantanção de tubos de polietileno contendo as pastas no tecido subcutâneo de camundongos isogênicos Balb/c. Os dados numéricos foram submetidos à análise estatística por meio do teste de Kruskal-Wallis e pós-teste de Dunn, com nível de significância de 5%. Os resultados referentes à exposição das células da linhagem RAW 264.7 de macrófagos evidenciou baixa atividade imunoestimuladora da pasta à base de hidróxido de cálcio (Calen®), associada ou não ao digluconato de clorexidina 0,4%, nas diferentes concentrações avaliadas. Por outro lado, pôde-se observar atividade antiinflamatória, com inibição na liberação de óxido nítrico e das citocinas (TNF-α e IL1-α), quando da utilização da associação hidróxido de cálcio e clorexidina na concentração de 25µg/ml. Resultados semelhantes ao controle foram observados após a avaliação da pasta à base de hidróxido de cálcio (Calen®), associada ou não ao digluconato de clorexidina a 0,4% em cultura primária de células da linhagem osteoblástica uma vez que os dados numéricos do conteúdo de proteína total, da quantidade de fosfatase alcalina e das formações nodulares de matriz mineralizada não foram estatisticamente diferentes (p>0,05). Em relação à caracterização morfológica das culturas primárias os resultados obtidos foram semelhantes quando comparou-se a pasta Calen®, associada ou não à clorexidina a 0,4%. Em relação à atividade antimicrobiana, a associação hidróxido de cálcio e clorexidina promoveu a formação de maiores halos de inibição (em mm), em relação ao Enterococcus faecalis, embora sem diferença estatística significante com os demais grupos avaliados (p>0,05). No tecido conjuntivo subcutâneo de camundongos, a análise microscópica demonstrou ser esta associação biocompatível, com tecido circunjacente e reacional, apresentando fibrosamento discreto e semelhante ao tecido conjuntivo fibroso normal, aos 63 dias de avaliação, sem diferença estatística com grupo controle (p>0,05). Com base nas metodologias empregadas e nos resultados obtidos pode-se concluir que a adição da clorexidina não apresentou benefícios adicionais à pasta à base de hidróxido de cálcio. / The aim of this study was to evaluate the calcium hydroxide-based paste (Calen®), associated or not to 0.4% chlorexidine digluconate, in culture of RAW 264.7 macrophages lineage, primary culture of osteoblastic lineage, and mice subcutaneous tissue. Besides we evaluated the antimicrobial activity of those materials. In RAW 264.7 macrophages culture the followed aspects were evaluated: cellular viability (MTT assay), immunestimulatory (nitric oxide detection) and anti-inflammatory (nitric oxide, TNF-α and IL-1-α detection) properties. In primary cell culture of osteoblastic lineage we evaluated the cellular viability for 3, 7 and 10 days, total protein content (Lowry modified method for 7 and 10 days), alkalinic phosphatase activity (thymolphthalein liberation for 7 and 10 days, and in situ by Fast red method), extracellular matrix noncollagen protein (stained by indirect immunofluorescence and direct fluorescence by phalloidin and DAPI for 3, 7 and 14 days), and mineralized matrix nodular formation (stained by Alizarin red for 3, 7 and 14 days). Antimicrobial activity was evaluated by agar diffusion test with Enterococcus faecalis and Kocuria rhizophila as indicators, and the biocompatibility after polyethylene tubes with the paste implanted into Balb/c mice subcutaneous tissue. The data were statistically analyzed by Kruskal-Wallis test, followed by Dunn\'s post test, considering a level of significance of 5%. The results of macrophage RAW 264.7 cells lineage exposition showed low stimullatory activity for the different concentrations evaluated of calcium hydroxide-based paste (Calen®), associated or not to 0.4% chlorexidine digluconate. On the other hand, we could observe anti-inflammatory activity with inhibition of nitric oxide and cytokines quantification (TNF--α e IL1--α), after the use of 25-µg/ml calcium hydroxide associated to chlorhexidine (25-µg/ml). Same results to the control were observed after evaluation of Calen® paste associated or not to 0.4% chlorexidine digluconate, in culture of RAW 264.7 macrophages lineage, primary culture of osteoblastic lineage because the data of total protein content, alkaline phosphatase, and mineralized matrix nodular formation were not statistically different (p>0.05). In relation to the morphological characterization of primary culture, the results obtained were the same after comparison of Calen® paste, associated or not to 0.4% chlorexidine digluconate. About antimicrobial activity, the association Calcium hydroxide and chlorhexidine promoted formation of largest inhibition halo (in mm) for Enterococcus faecalis, but with no statistically significant with others evaluated groups (p>0.05). The microscopic analysis in mice conjunctive subcutaneous tissue demonstrated biocompatibility of that association with the around and reactional tissue, sowing a discret fibrosis, as well as the normal conjunctive fibrous tissue after 63 days of evaluation with no statistically difference with the control group (p>0.05). Based on the methodology used, and the results obtained in this work, we could conclude that the addition of chlorexidine showed no additional benefits to the calcium hydroxide-based paste.

The essential oils of six species of plants wild in south Brazil, were investigated as for its chemical composition, antibacterial activity and antioxidant potential. The selected species for this study were Calea clematidea (Asteraceae), Acanthospermum australe (Asteraceae), Tagetes minuta (Asteraceae), Julocroton humilis (Euphorbiaceae), Nectandra megapotamica (Lauraceae) e Nectandra lanceolata (Lauraceae). In this work, the essential oil of each specie was submitted to chromatographic procedures to isolate its constituents in pure form. The structural determination of isolated components were realized through chromatographic technics, obtainment of Kovats indices, GC-MS and RMN of 1H and 13C uni- and bi dimensional. So that, were possible to identify two inedited sesquiterpenes of essential oil from Nectandra megapotamica denominated in this work as PF1 and PF2. From essential oil of Acanthospermum australe were isolated its principal constituent, the mix of Carvacrol isobutirate and Timol isobutirate. In conclusion, the essential oil obtained as well as, the isolated components through chromatographic methods were submitted to antibacterial and antifungical tests, using the microdiluition methods, through which is possible to observe that the essential oils were active against a greater number of microorganisms. The results, between 6,5 a 100 μg/ mL, showed that the PF1 and PF2 have a excellent antimicrobial activity against the tested microorganisms. Furthermore, the antioxidant activity was accessed by the reducing power assay, the scavenging effect on DPPH (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl) radicals model system. In a general way, the essential oils from Acanthospermum australe presented moderate antioxidant activity. / Os óleos essenciais de seis espécies de plantas nativas do sul do Brasil foram obtidos através de hidrodestilações e analisados quanto suas composições químicas, atividades antimicrobianas e potencial antioxidante. As espécies selecionadas para este estudo foram: Calea clematidea (Asteraceae), Acanthospermum australe (Asteraceae), Tagetes minuta (Asteraceae), Julocroton humilis (Euphorbiaceae), Nectandra megapotamica (Lauraceae) e Nectandra lanceolata (Lauraceae). Neste trabalho, os óleos voláteis de cada espécie foram submetidos a procedimentos cromatográficos visando o isolamento de seus constituintes em suas formas puras. As análises estruturais dos componentes isolados puros foram realizadas através de técnicas cromatográficas, obtenção dos respectivos índices de retenção de Kovats, cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massas e ressonância magnética nuclear de 1H e 13C utilizando-se de técnicas uni- e bidimensionais. Desta forma, identificaram-se dois componentes sesquiterpênicos inéditos como componentes do óleo essencial de Nectandra megapotamica, denominado neste trabalho de PF1 e PF2. Do óleo essencial de Acanthospermum australe foi isolado o seu principal constituinte, uma mistura de Carvacrol isobutirato e Timol isobutirato. Finalmente, os óleos essenciais obtidos, assim como os componentes isolados através de métodos cromatográficos, foram testados quanto as suas possíveis atividades antimicrobianas. Para isso foi utilizado o método de Microdiluição em caldo (CIM), através do qual se observou que os óleos analisados foram ativos contra a maioria dos microorganismos utilizados. Os resultados, entre 6,5 a 100 μg /mL), mostraram que a PF1 e PF2 têm uma excelente atividade antimicrobiana contra os microrganismos testados. Além disso, a atividade antioxidante foi realizada pelo método DPPH, que é baseado na captura do radical DPPH (2,2-difenil-1-picril-hidrazil) por antioxidantes. De uma maneira geral, os óleos essenciais de Acanthospermum australe apresentaram atividade antioxidante moderada.