Orientadora: Rosangela Zacarias Machado / Banca: Ana Patrícia Yatsuda Natsui / Banca: Carlos Wilson Gomes Lopes / Banca: Aramis Augusto Pinto / Banca: Rosemeri de Oliveira Vasconcelos / Resumo: A neosporose é uma doença causada pelo protozoário Neospora caninum, e causa um grande impacto econômico na pecuária mundial. Sabe-se que muitos mamíferos são considerados hospedeiros intermediários, e que recentemente, foi confirmado o papel das aves no ciclo de vida de N. caninum como hospedeiros intermediários. O presente trabalho teve como finalidade estudar o ciclo evolutivo e patogenia de N. caninum em cães alimentados com ovos embrionados de Gallus gallus domesticus previamente inoculados com taquizoítas. Realizou-se diariamente o exame de fezes dos animais, pela técnica de flutuação, constatando a presença de oocistos nas fezes a partir de 7 dia apósinfecção. Anticorpos anti- N. caninum foram pesquisados semanalmente nos cães pela RIFI, sendo observados anticorpos a partir dos 14dai. Semanalmente um cão foi eutanasiado e durante a necropsia observou-se em todos os cinco animais, aumento dos linfonodos mesentéricos e das tonsilas, presença de muco no duodeno e jejuno e hepatoesplenomegalia, com hiperplasia de polpa branca do baço. Pelo exame histopatológico detectou-se reatividade dos linfonodos, lesões no fígado, coração, pulmão, baço e rim. Pelas técnicas de imunoistoquímica, imunofluorescência indireta dos tecidos e no Real-time PCR, observou-se a presença do parasito. Os resultados obtidos apontam que, os ovos embrionados infectados pelo parasito mostraram eficiência como modelo experimental para infectar cães, que eliminaram oocistos nas fezes, mesmo não apresentando sinais clínicos da neosporose. Ademais, os cães infectados apresentaram prematura soroconversão pela prévia administração de bicarbonato de sódio e o uso das técnicas citadas tornou possível a detecção do parasito nos tecidos analisados. / Abstract: Neosporosis is a protozoan disease caused by Neospora caninum and affects the reproductive system in cattle worldwide. Infection by the parasite has been widely described in mammals, and recently the role of birds in its lifecycle was confirmed as intermediate hosts. This work aimed to study the life cycle of N. caninum and the pathogeny in dogs that were fed with embryonated eggs inoculated with tachyzoites. The tested dogs were followed up for oocyst shedding, by flotation technique, and it was detected at 7 days after infection. Antibodies anti- N. caninum were detected at 14dai. Once a week, one dog was euthanized and at the necropsy alterations was observed on the mesenteric lymph nodes and tonsils, presence of mucus at duodenum and jejunum portions, and hepatosplenomegaly. At the histopathological examination lymph nodes alterations were noticed ranging from moderate to intense. In addition, there were alterations in liver, heart, lung, spleen and kidney. The parasite was detected by immunochemistry and indirect immunofluorescense tests as well as by Real-time PCR. The results herein presented suggest that inoculated embryonated eggs showed to be an efficient model to infect dogs, because of shedding oocysts, and no clinical alterations. Moreover, the infected dogs presented earlier seroconvertion because of sodium bicarbonate solution administration and the parasite detection in the analyzed tissues was successful by the techniques used. / Doutor

Orientadora: Silvana Martinez Baraldi Artoni / Banca: Nilce Maria Soares / Banca: Douglas Emygdio de Faria / Banca: Edivaldo Antônio Garcia / Banca: Otto Mack Junqueira / Resumo: A água é um recurso natural escasso que deve ser utilizada de forma racional e apresentar qualidade química, física e microbiológica. Neste contexto, o presente trabalho avaliou a densitometria óssea, os níveis séricos de cálcio e fósforo, a histologia, a microscopia eletrônica de varredura, a morfometria intestinal e renal, o desempenho de frangos de corte, a qualidade microbiológica e química da água de consumo em frangos de corte tratados com água filtrada e não filtrada. Observou-se que a densitometria óssea apresentou níveis crescentes aos 14 e aos 21 dias de idades, estabilizando-se aos 45 dias de idade. A densidade mineral óssea foi maior na epífise distal de aves que ingeriram água filtrada fazendo com que estas aves resistissem a uma maior pressão óssea nesta região em relação às aves que ingeriram água não filtrada. Os valores médios de cálcio sérico não apresentaram variações significativas entre os tratamentos analisados. Por outro lado, os níveis de fósforo sérico de aves tratadas com água filtrada foram menores em relação às que receberam água não filtrada. Na microscopia eletrônica de varredura, observou-se que enquanto a densidade dos vilos intestinais aumentou em aves que receberam água não filtrada, a integridade intestinal foi mantida em frangos tratados com água filtrada em resposta à sua condição microbiológica. Na análise macroscópica do intestino delgado e dos rins, não houve diferença entre os tratamentos para as medidas de comprimento, largura, peso absoluto e relativo dos órgãos. Na morfometria intestinal, observou-se que o comprimento das vilosidades e o número de células caliciformes não variaram entre os tratamentos. Entretanto, houve aumento na profundidade das criptas intestinais em aves que receberam água não filtrada provavelmente em função do aumento da taxa de turnover intestinal... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Water is a lean natural resource that must be used in a rational way and must be present chemical, physical and microbiological quality. In this context, the present work evaluated bone densitometry, serum levels of calcium and phosphorus, chicken performance, chemical, physical and microbiological quality of consumption water by chickens treated with filtered water and no filtered. It was observed that the bone densitometry presented crescent levels from 14 to 21 days old, and it was being stabilized on 45 days old. The bone mineral density was larger on the epiphyisis distal of birds that ingested filtered water doing these birds to resist a larger bone pressure in this area comparing to birds that ingested no filtered water. The medium values of serum calcium didn't present significant variations among the analyzed treatments. On the other hand, the serum levels of phosphorus of birds treated with filtered water were smaller in relation to the one that received water no filtered. On the scanning electron microscopy, it was observed that while the density of intestinal villi increased in birds that received no filtered water, the intestinal integrity was maintained in chickens treated with water filtered in response to their microbiological condition. In macroscopic analysis of the small intestine and of the kidneys, there wasn't difference among the treatments for length measures, width, absolute and relative weight of the organs. In the intestinal morphometry, it was observed that the length of the villi and the number of goblet cells didn't vary among the treatments. However, there was increase of small intestinal crypts depth in birds that received no filtered water, probably in function of the tax of intestinal turnover increase. Moreover, length intestinal villi were more significant in duodenum of birds that ingested water no filtered in relation to filtered water... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Hélio José Montassier / Banca: Adolorata Aparecida Bianco Carvalho / Banca: Clarice Weins Arns / Banca: Geraldo Aleixo da Silva Passos Júnior / Banca: Liana Brentano / Resumo: As respostas imunes inatas e adquiridas, incluindo-se aí tanto as mediadas por fatores humorais como celulares normalmente induzidas após a infecção ou vacinação com o vírus da BI (VBI), são caracterizadas por sua grande complexidade e por aspectos relevantes que ainda são pouco conhecidos, no que tange aos elementos capazes de exercer uma ou mais ações efetoras contra esse patógeno e que culminassem na restrição da replicação viral, seguido de sua eliminação do organismo hospedeiro e também no impedimento de lesões mais severas. Isso posto, foi formulado o presente estudo com o fito principal de fazer a avaliação das respostas imunes humorais e celulares em diferentes intervalos pós-desafio com o VBI de aves previamente vacinadas ou não, realizando-se a mensuração de anticorpos no soro e na lágrima, e a quantificação da expressão de genes relacionados às respostas imunes na superfície traqueal, a fim de correlacionar tais parâmetros com o estado de proteção ao desafio. Os resultados demonstraram que os aumentos significativos nos níveis de anticorpos lacrimais dos isótipos IgG e IgA nas aves previamente vacinadas e também na expressão dos genes relacionados às respostas imunes, sobretudo o CD8, a Granzima A e o IFNg foram correlacionados negativamente com um ou mais parâmetros de alterações patológicas traqueais. Constatou-se também, que a memória das respostas imunes humorais e cito-mediadas conferida por uma única vacinação contra a BI no primeiro dia de idade é dependente da dose vacinal administrada / Abstract: Avian infectious bronchitis virus (IB) is a worldwide infectious disease which causes significant economic losses in poultry industry. The innate and acquired immune responses, including whether there mediated by both cellular and humoral factors that are induced after infection or vaccination with IB virus (IBV) are characterized by their higher complexity and for the relevant aspects that are still poorly known, with respect to the elements able to exercise one or more actions against the pathogen and that culminate in the restriction of its propagation and also on your clearance of the host organism. So, this project was formulated with the main done to make the evaluation of cellular and humoral immune responses at different intervals post-immunization or postchallenge with IBV poultry previously vaccinated or not, performing the measurement of antibodies in serum or tears and quantitation of the expression of genes related to immune responses in tracheal surface, correlating these parameters with the protection against IBV. The results showed that both significative increase of IgG and IgA isotypes in tears of previously vaccinated chickens and the expression levels of genes related to immune responses, especially CD8, Granzyme A and IFN g were negatively correlated with one or more parameters of pathological lesions at trachea. Moreover, we found that the immune memory conferred by vaccination against BI on the first day of age is dependent on vaccine dose administered / Doutor

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-11-26Bitstream added on 2014-06-13T20:48:10Z : No. of bitstreams: 1 okino_ch_dr_jabo.pdf: 2216742 bytes, checksum: fe4b5f21894b32b436b973278d8ed733 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / As respostas imunes inatas e adquiridas, incluindo-se aí tanto as mediadas por fatores humorais como celulares normalmente induzidas após a infecção ou vacinação com o vírus da BI (VBI), são caracterizadas por sua grande complexidade e por aspectos relevantes que ainda são pouco conhecidos, no que tange aos elementos capazes de exercer uma ou mais ações efetoras contra esse patógeno e que culminassem na restrição da replicação viral, seguido de sua eliminação do organismo hospedeiro e também no impedimento de lesões mais severas. Isso posto, foi formulado o presente estudo com o fito principal de fazer a avaliação das respostas imunes humorais e celulares em diferentes intervalos pós-desafio com o VBI de aves previamente vacinadas ou não, realizando-se a mensuração de anticorpos no soro e na lágrima, e a quantificação da expressão de genes relacionados às respostas imunes na superfície traqueal, a fim de correlacionar tais parâmetros com o estado de proteção ao desafio. Os resultados demonstraram que os aumentos significativos nos níveis de anticorpos lacrimais dos isótipos IgG e IgA nas aves previamente vacinadas e também na expressão dos genes relacionados às respostas imunes, sobretudo o CD8, a Granzima A e o IFNg foram correlacionados negativamente com um ou mais parâmetros de alterações patológicas traqueais. Constatou-se também, que a memória das respostas imunes humorais e cito-mediadas conferida por uma única vacinação contra a BI no primeiro dia de idade é dependente da dose vacinal administrada / Avian infectious bronchitis virus (IB) is a worldwide infectious disease which causes significant economic losses in poultry industry. The innate and acquired immune responses, including whether there mediated by both cellular and humoral factors that are induced after infection or vaccination with IB virus (IBV) are characterized by their higher complexity and for the relevant aspects that are still poorly known, with respect to the elements able to exercise one or more actions against the pathogen and that culminate in the restriction of its propagation and also on your clearance of the host organism. So, this project was formulated with the main done to make the evaluation of cellular and humoral immune responses at different intervals post-immunization or postchallenge with IBV poultry previously vaccinated or not, performing the measurement of antibodies in serum or tears and quantitation of the expression of genes related to immune responses in tracheal surface, correlating these parameters with the protection against IBV. The results showed that both significative increase of IgG and IgA isotypes in tears of previously vaccinated chickens and the expression levels of genes related to immune responses, especially CD8, Granzyme A and IFN g were negatively correlated with one or more parameters of pathological lesions at trachea. Moreover, we found that the immune memory conferred by vaccination against BI on the first day of age is dependent on vaccine dose administered

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:33Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-05-08Bitstream added on 2014-06-13T21:06:28Z : No. of bitstreams: 1 amoroso_l_dr_jabo.pdf: 911409 bytes, checksum: 08411eef5f28e10b8e5b18153c1a6e73 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A água é um recurso natural escasso que deve ser utilizada de forma racional e apresentar qualidade química, física e microbiológica. Neste contexto, o presente trabalho avaliou a densitometria óssea, os níveis séricos de cálcio e fósforo, a histologia, a microscopia eletrônica de varredura, a morfometria intestinal e renal, o desempenho de frangos de corte, a qualidade microbiológica e química da água de consumo em frangos de corte tratados com água filtrada e não filtrada. Observou-se que a densitometria óssea apresentou níveis crescentes aos 14 e aos 21 dias de idades, estabilizando-se aos 45 dias de idade. A densidade mineral óssea foi maior na epífise distal de aves que ingeriram água filtrada fazendo com que estas aves resistissem a uma maior pressão óssea nesta região em relação às aves que ingeriram água não filtrada. Os valores médios de cálcio sérico não apresentaram variações significativas entre os tratamentos analisados. Por outro lado, os níveis de fósforo sérico de aves tratadas com água filtrada foram menores em relação às que receberam água não filtrada. Na microscopia eletrônica de varredura, observou-se que enquanto a densidade dos vilos intestinais aumentou em aves que receberam água não filtrada, a integridade intestinal foi mantida em frangos tratados com água filtrada em resposta à sua condição microbiológica. Na análise macroscópica do intestino delgado e dos rins, não houve diferença entre os tratamentos para as medidas de comprimento, largura, peso absoluto e relativo dos órgãos. Na morfometria intestinal, observou-se que o comprimento das vilosidades e o número de células caliciformes não variaram entre os tratamentos. Entretanto, houve aumento na profundidade das criptas intestinais em aves que receberam água não filtrada provavelmente em função do aumento da taxa de turnover intestinal... / Water is a lean natural resource that must be used in a rational way and must be present chemical, physical and microbiological quality. In this context, the present work evaluated bone densitometry, serum levels of calcium and phosphorus, chicken performance, chemical, physical and microbiological quality of consumption water by chickens treated with filtered water and no filtered. It was observed that the bone densitometry presented crescent levels from 14 to 21 days old, and it was being stabilized on 45 days old. The bone mineral density was larger on the epiphyisis distal of birds that ingested filtered water doing these birds to resist a larger bone pressure in this area comparing to birds that ingested no filtered water. The medium values of serum calcium didn't present significant variations among the analyzed treatments. On the other hand, the serum levels of phosphorus of birds treated with filtered water were smaller in relation to the one that received water no filtered. On the scanning electron microscopy, it was observed that while the density of intestinal villi increased in birds that received no filtered water, the intestinal integrity was maintained in chickens treated with water filtered in response to their microbiological condition. In macroscopic analysis of the small intestine and of the kidneys, there wasn´t difference among the treatments for length measures, width, absolute and relative weight of the organs. In the intestinal morphometry, it was observed that the length of the villi and the number of goblet cells didn't vary among the treatments. However, there was increase of small intestinal crypts depth in birds that received no filtered water, probably in function of the tax of intestinal turnover increase. Moreover, length intestinal villi were more significant in duodenum of birds that ingested water no filtered in relation to filtered water... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Hélio José Montassier / Banca: Camillo Del Cistia Andrade / Banca: Janete Apparecida Desidério Sena. / Resumo: Anticorpos monoclonais se constituem na base de vários testes usados na detecção e na identificação de antígenos. Nesse contexto, tais imuno-reagentes têm sido extensivamente empregados na identificação de estirpes virais envolvidas na etiologia de surtos de bronquite infecciosa a campo, permitindo o aperfeiçoamento das técnicas de detecção e caracterização antigênica do vírus da bronquite infecciosa das galinhas (VBI). No presente estudo, uma biblioteca de fragmentos de anticorpos de galinha originalmente preparada por "phage display" contra a estirpe vacinal (H120) do VBI, foi usada para a seleção de fragmentos de anticorpos recombinantes com reatividade cruzada para as estirpes heterólogas IBVPR01, IBVPR05, isoladas de surtos a campo no Brasil e SE-17, isolada nos Estados Unidos. Após três ciclos de "panning", foi identificado pelo ELISA um conjunto de 15 anticorpos scFv expressos em fagos e com reatividade cruzada para essas mesmas estirpes do VBI. A análise por Western-blotting revelou que três desses clones apresentavam fagos expressando fragmentos de anticorpos monoclonais com reatividade cruzada para a nucleoproteína N das três estirpes do VBI e também para a forma recombinante dessa nucleoproteína derivada da estirpe M41. Concluindo, os fragmentos de anticorpos monoclonais recombinantes scFv-N produzido em fagos interagem com um epítopo mais conservado da proteína N do VBI e apresentam um grande potencial para utilização na detecção e no diagnóstico direto desse vírus e no estudo de evolução de variantes desse vírus. / Abstract: Monoclonal antibodies are the basis of various techniques used for antigen detection or characterization, and their use is specially recommended for the identification of viral strains involved in the etiology of outbreaks of infectious bronchitis, because these antibodies are homogeneous, highly specific and fully characterized, allowing the improvement of detection of immunological techniques and antigenic characterization of avian infectious bronchitis virus strains (IBV). We used a phage display library prepared previously against the IBV vaccine strain (H120) for the selection of new scFv antibody fragments reacting with heterologous IBV strains isolated from outbreaks in Brazil (IBVPR01, IBVPR05) and USA (SE-17). After three cycles of panning a set of 15 scFv antibodies was expressed in phages and exhibited crossreaction in ELISA with these three viral strains. Western-blotting analysis showed that three of this clone set were expressing scFv specific for the nucleoprotein of these IBV strains, as well as to the recombinant form of this protein derived from M41 strain of IBV. In conclusion, the recombinant fragments of monoclonal antibodies expressed by phage-display technique have a great potential for future use in immunodiagnostic techniques and study the evolution of variant strains of this virus. / Mestre