Foram isoladas 169 colônias de bactérias endofíticas de folhas de diferentes genótipos de plantas de milho sadias, pertencentes às populações BR-105, BR-106 e população de híbridos simples entre essas, em duas localidades e coletas distintas. Trinta isolados foram identificados por não de testes morfológicos e bioquímicos clássicos, definindo-se a ocorrência e porcentagem relativa dos gêneros: Bacillus (55%), Corynebacterium (15%), Micrococcus (12%), Listeria (9%), Pseudomonas (6%) e Erwinia (3%). A técnica de RAPD foi aplicada a treze isolados do gênero Bacillus, o mais ocorrente, para medir o grau de similaridade genética entre esses e linhagens de referência, não endofíticas de Bacillus megaterium e Bacillus subtilis, e relacionar a origem dos isolados com o local de coleta e número da coleta. A análise de RAPD permitiu a diferenciação de quatro grupos entre Bacillus sp. endofíticos e as linhagens de referência, com aproximadamente de 32% de similaridade entre si. Revelou-se grande variabilidade dentro do grupo, havendo relação dentro de dois grupos com o local de coleta e o número de coleta. Foi realizado um ensaio in vitro de antagonismo fungo-bactéria endofítica, entre dez isolados de bactérias, sendo os principais gêneros testados, Bacillus e Micrococcus e os fungos endofíticos Penicillium purpurogenum, P. spinulosum e Fusarium moniliforme, todos isolados de milho, e duas linhagens produtoras de antibióticos não endofíticas de P. chrysogenum IFO-4626 e IZ1671. Este ensaio revelou não haver inibição do crescimento das bactérias pelos fungos endofíticos. Entretanto dois isolados endofíticos foram inibidos pelas linhagens de P. chrysogenum, indicando um tipo de associação diferente da que ocorreu entre os endofíticos, caracterizada por uma antibiose / Endophytic bacteria were isolated in healthy maize leaves from different genotypes of BR-105 and BR-106 populations and from their simple hybrids population. Isolation was performed on two experimental areas by two distinct harvests. The total number of isolated bacteria colonies was 169. Thirty isolates were identified by classic morphologic and biochemical tests, and defined the genus occurence and relative percentage: Bacillus (55%), Corynebacterium (15%), Micrococcus (12%), Listeria (9%), Pseudomonas (6%) and Erwinia (3%). RAPD technique was performed to measure the genetic similarities among the thirteen main occurring Bacillus endophytes, and the reference strains not endophytes Bacillus megaterium and Bacillus subtilis, also relating the endophyte origins with the harvest area and harvest number. RAPD analysis allowed to differentiate four groups among Bacillus endophytes and Bacillus reference strains, presenting nearly 32% of similarity themselves. High variability was detected within the group, being detected within two groups relationships with harvest area and harvest number. It was performed an in vitro endophyte bacteria- fungi antagonism assay, with ten bacteria isolates, being the major genus assayed Bacillus and Micrococcus, and the endophytes Penicillium purpurogenum, P. spinulosum and Fusarium moniliforme, all of them isolated from maize, and two antibiotic producers, not endophytes, P. chrysogenum IF04626 and IZ1671. Such assay has shown that endophytic fungi was not able to inhibit endophytic bacteria growth. Althoug, two endophytes were inhibited by antibiotic producers lineages P. chrysogenum, indicating a different kind of association from that occuring among endophytes, characterized by antibiosis

O trabalho foi desenvolvido em três etapas experimentais. A primeira consistiu da avaliação, em campo de 90 genótipos de soja, sendo 68 pertencentes ao grupo de maturação precoce e 22 ao grupo tardio, quanto à variação na capacidade de nodulação da planta hospedeira. A inoculação dos genótipos foi feita com a mistura de três estirpes de B. japonicum: SEMIA-587, SEMIA-5019 e CB-1809. Os caracteres avaliados foram número e peso de nódulos, atividade da nitrogenase (ARA) e produtividade. O tratamento estatístico dos dados incluiu análise multidimensional. Os resultados revelaram diferenças genotípicas entre os materiais testados, indicando o potencial genético da leguminosa para a fixação do N2. Não foi detectada correlação entre dados de nodulação e produtividade. A segunda etapa experimental foi conduzida em casa de vegetação com o objetivo de avaliar a resposta da bactéria dentro e entre as três estirpes de B. japonicum, inoculadas separadamente no genótipo Bossier (precoce) e IAC-9 (tardio). Os dados foram agrupados em classes de frequência da ARA e do tamanho de 60 nódulos individuais. Os resultados mostraram comportamentos diferenciais dentro das estirpes para ambos os caracteres avaliados, atribuídos à variação genética intrínseca da estirpe. A CB-1809 apresentou curva de distribuição normal, ao passo que a SEMIA-587 e SEMIA-5019 inoculadas no genótipo Bossier expressaram alta frequência de nódulos com baixa atividade, mas de grande tamanho, no período de florescimento. Isto indicou que o grupo de maturação a que pertence o genótipo poderia estar influindo no ciclo de nodulação da estirpe. A última etapa, também conduzida em casa de vegetação, constou do estudo da interação entre dois isolados da estirpe SEMIA-587 e três genótipos selecionados em campo (Bossier, Planalto e SOC 81-76, do grupo precoce e IAC-9, Tropical e GO 79-1084, do grupo tardio). Foi avaliada a nodulação (número, peso e tamanho de nódulos e ARA) e rendimento da planta (peso da parte aérea e N-total). A ausência de interação significativa entre os tratamentos permitiu o estudo da ação independente da bactéria e da planta na simbiose, para todos os caracteres avaliados. Os resultados indicaram que somente a seleção praticada dentro da estirpe produziu acréscimos significativos, indicando a necessidade de pesquisas dirigidas à manipulação da planta hospedeira para aumento da eficiência simbiótica na fixação do N<sub.2 / The present research was undertaken in three experimental phases. The first one, consisted on a field evaluation of 90 soybean genotypes, 68 of them from the early maturity group and 22 from the late maturity group, to measure the range of variability for nodulation ability in the host. The inoculation was performed with a mixture of three strains of B. japonicum: SEMIA-587, SEMIA-5019 and CB-1809. The parameters studied were: nodule number, weight, nitrogenase activity (ARA) and seed yield. The statistical anaIysis of data include da multidimensional analysis. The results revealed differences among genotypes, indicating their genetical potential for biological nitrogen fixation. It was not detected correlation between nodulation and seed yield. The second experimental phase was conducted under greenhouse conditions with the aim of evaluating the bacterial response within and among the three strains of B. japonicum when applied alone to Bossier (early maturity) and IAC-9 (late maturity) genotypes. Data were grouped in classes of frequencies of ARA and size of 60 individual nodules. The results showed the differencial behaviour among strains for bot parameters, and was atributed to the intrinsec genetical variation of the strain. Strain CB-1809 presented a normal distribution of data, whereas S EMIA-587 and SEMIA-5019 when inoculated in the Bossier, expressed a high frequency of nodules with low activity but with 1 arge size at the mid-flowering period. This indicated the nodulation traits of the strain probably was influenced by the lenght period for the genotype to reach the maturity. The last phase was also undertaken at the greenhouse and consisted in the study of the interaction among isolates from strain SEMIA-587 nodules picked up from one plant at the second phase and introduced into genotypes selected from the field trial - Bossier, Planalto and SOC 81-76 (early maturity group) and IAC-9, Tropical and GO 79-1084 (late maturity group). Nodulation (number, weight and size of nodules and NA) and weight and N-accumulation in the plant were also evaluated. The absence of a significant interaction among treatments showed that both plant and bacteria acted independently. The results indicated an overall superioty of the strain to enhance the N and weight of the plant. This suggested the need of research toward the manipulation of the host plant for enhancing the symbiotic efficiency of biological N2 fixation

Xylella fastidiosa é bactéria Gram-negativa e fastidiosa, limitada ao xilema das plantas com uma ampla gama de hospedeiros, incluindo mono e dicotilêdoneas, algumas de grande interesse econômico. No Brasil a X. fastidiosa é o agente causal da Clorose Variegada dos Citros (CVC), sendo observada nos Estados de São Paulo, Minas Gerais e Paraná. O objetivo deste trabalho foi o isolamento de X. fastidiosa de laranja doce (Citrus sinensis), análise molecular da variabilidade genética e resistência a antibióticos. A linhagem 9a5c de X. fastidiosa e isolados de cafeeiro e videira foram utilizados como controle nos estudos genéticos e de resistência a antibióticos juntamente com os isolados obtidos neste estudo. A diversidade genética de dezenove isolados foi determinada pela técnica de RAPD. Os resultados mostraram três grupos: o primeiro compreende dezesseis isolados de CVC (incluindo a linhagem 9a5c), o segundo dois isolados de cafeeiro, o terceiro um isolado de videira. Dois subgrupos foram observados no grupo citros, mostrando 72% de similaridade. A linhagem 9a5c foi incluída em um subgrupo menor, mostrando maior divergência que os outros isolados. Os níveis de resistência aos antibióticos foram avaliados empregando duas técnicas: difusão do antibiótico em meio de cultura sólido e diluição em meio líquido. A análise de resistência a antibióticos mostrou que a polimixina B, rifampicina, estreptomicina, canamicina, ampicilina, neomicina, tetraciclina, cloranfenicol e vancomicina o inibiram o crescimento dos isolados estudados, mas esses isolados foram resistentes a penicilina. Estes resultados dão suporte para a hipótese de homogeneidade entre isolados causadores da CVC e indicam quais os antibióticos que poderão ser utilizados no desenvolvimento de um sistema de transformação para esta bactéria, além de indicar o potencial emprego da antibiótico-terapia como uma alternativa a mais de convivência com a CVC. Testes de interação com bactérias endofíticas e X. fastidiosa mostraram que Methylobacterium sp. estimulou"in vitro"o crescimento de X. fastidiosa / not available

Xylella fastidiosa é bactéria Gram-negativa e fastidiosa, limitada ao xilema das plantas com uma ampla gama de hospedeiros, incluindo mono e dicotilêdoneas, algumas de grande interesse econômico. No Brasil a X. fastidiosa é o agente causal da Clorose Variegada dos Citros (CVC), sendo observada nos Estados de São Paulo, Minas Gerais e Paraná. O objetivo deste trabalho foi o isolamento de X. fastidiosa de laranja doce (Citrus sinensis), análise molecular da variabilidade genética e resistência a antibióticos. A linhagem 9a5c de X. fastidiosa e isolados de cafeeiro e videira foram utilizados como controle nos estudos genéticos e de resistência a antibióticos juntamente com os isolados obtidos neste estudo. A diversidade genética de dezenove isolados foi determinada pela técnica de RAPD. Os resultados mostraram três grupos: o primeiro compreende dezesseis isolados de CVC (incluindo a linhagem 9a5c), o segundo dois isolados de cafeeiro, o terceiro um isolado de videira. Dois subgrupos foram observados no grupo citros, mostrando 72% de similaridade. A linhagem 9a5c foi incluída em um subgrupo menor, mostrando maior divergência que os outros isolados. Os níveis de resistência aos antibióticos foram avaliados empregando duas técnicas: difusão do antibiótico em meio de cultura sólido e diluição em meio líquido. A análise de resistência a antibióticos mostrou que a polimixina B, rifampicina, estreptomicina, canamicina, ampicilina, neomicina, tetraciclina, cloranfenicol e vancomicina o inibiram o crescimento dos isolados estudados, mas esses isolados foram resistentes a penicilina. Estes resultados dão suporte para a hipótese de homogeneidade entre isolados causadores da CVC e indicam quais os antibióticos que poderão ser utilizados no desenvolvimento de um sistema de transformação para esta bactéria, além de indicar o potencial emprego da antibiótico-terapia como uma alternativa a mais de convivência com a CVC. Testes de interação com bactérias endofíticas e X. fastidiosa mostraram que Methylobacterium sp. estimulou"in vitro"o crescimento de X. fastidiosa / not available

As interações que ocorrem entre as bactérias e amebas podem dar-se através de relações mútuas, onde ambos os organismos se beneficiam da associação ou parasitárias, em que um organismo se beneficia em detrimento do outro. Quando esses organismos compartilham o mesmo ambiente, pode resultar em algumas alterações, seja no crescimento dos organismos, nos padrões de adaptação, na morfologia, no seu desenvolvimento ou até mesmo na sua capacidade para sintetizar proteínas e outras substâncias. No presente estudo, avaliou-se a interação entre Acanthamoeba polyphaga e Staphylococcus aureus (MRSA) através de um modelo de cocultivo em diferentes tempos de incubação. A partir deste, 89% das células amebianas permaneceram viáveis após contato com a bactéria. O isolado bacteriano foi visualizado no interior da ameba através de microscopia confocal e de fluorescência em até 216 horas de cocultivo, sendo considerado um microrganismo resistente à ameba. O contato de A. polyphaga com S. aureus (MRSA) não demonstrou alteração fenotípica da ameba através dos testes fisiológicos de osmo e termotolerância. O lisado da cultura amebiana aumentou o crescimento de S. aureus (MRSA) nos diferentes tempos de incubação, porém houve diferença significativa apenas entre o controle e 96 horas de cocultivo. O crescimento de S. aureus (MRSA) foi inibido ao longo dos tempos de incubação pelo efeito do sobrenadante da cultura amebiana apresentando diferença significativa entre o controle e 96 horas de cocultivo, sugerindo-se que A polyphaga tenha secretado algum tipo de metabólito, que inibiu o crescimento da bactéria. A interação dos microrganismos não apresentou alterações significativas no perfil de susceptibilidade aos antibióticos testados. S. aureus (MRSA) permaneceu viável em cistos de A. polyphaga, reforçando a hipótese de que Acanthamoeba pode desempenhar um papel crucial na propagação de S. aureus (MRSA) na comunidade e ambiente hospitalar. O maior percentual de amebas encistadas deu-se em 96 horas de incubação quando cocultivadas com o isolado de S. aureus (MRSA), apresentando um aumento progressivo deste percentual a cada período de incubação. A partir disso, estudos devem intensificar-se para melhor compreender os mecanismos de virulência envolvidos na interação entre ambos os microrganismos. / The interactions that occur between bacteria and amoebae can give through mutual relations, where both organisms benefit from the association or parasitic in which one organism benefits at the expense of the other. When these organisms share the same environment, can result in some changes in the growth of organisms, in adaptation patterns, in morphology, development or even in their ability to synthesize proteins and other substances. In the present study, we evaluated the interaction between Acanthamoeba polyphaga and Staphylococcus aureus (MRSA) using a coculture model at different incubation times. From this, 89% of amoebic cells remain viable after contact with the bacteria. The bacterial isolate was visualized inside the amoeba through confocal microscopy and fluorescence for up to 216 hours of cocultivation, being considered a resistant microorganism to the amoeba. The contact of A. polyphaga with S. aureus (MRSA) showed no phenotypic changes of amoeba through physiologic osmo or thermotolerance tests. The lysate of amoebic culture increased the growth of S. aureus (MRSA) in the different incubation times, but there was a significant difference only between the control and 96 hours of cocultivation. The growth of S. aureus (MRSA) has been inhibited over the incubation times for the effect of amoebic culture supernatant showing a significant difference between the control and 96 hours of coculture, suggesting tha A. polyphaga has some kind of secreted metabolites inhibiting the growth of bacteria. The interaction of microorganisms showed no significant changes in the susceptibility profile of the tested antibiotics. S. aureus (MRSA) remained viable cysts of A. polyphaga, reinforcing the hypothesis that Acanthamoeba can play a crucial role in the spread of S. aureus (MRSA) in the community and hospital. The highest percentage of encysted amoebae occurred in 96 hours of incubation when cocultured with the isolate of S. aureus (MRSA), with a progressive increase in this percentage to each incubation period. From this, studies should be intensified to better understand the virulence mechanisms involved in the interaction between these two organisms.

Made available in DSpace on 2018-08-01T23:19:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_10558_Resumo da Dissertação Final de Mestrado - Clara Suprani Marques.pdf: 39560 bytes, checksum: 3b868b60e3724bea11f4bb70715fc3cc (MD5) Previous issue date: 2018-02-23 / Óleos essenciais apresentam interessante atividade antimicrobiana. Por serem produtos naturais, extraídos de plantas, seu uso como antimicrobianos em alimentos é bastante estudado, no entanto, fatores como baixa estabilidade a luz, calor e oxigênio, além do forte odor característico que apresentam, podem limitar essa aplicação. A sua complexação com &#946;-ciclodextrina (&#946;-CD) é uma opção para proteger os compostos dos óleos essenciais e facilitar sua aplicação como conservante de alimentos. Portanto, um dos objetivos desta pesquisa foi caracterizar e investigar a atividade antimicrobiana de óleos essenciais de folhas de Pimenta dioica (OEPD) e de manjericão (OEM), além de realizar sua complexação com &#946;-CD por meio de dois métodos (malaxagem e liofilização) e em duas proporções distintas (1:1 e 2:1 óleo essencial:&#946;-CD), com posterior caracterização dos complexos obtidos e sua avaliação microbiológica. Além disso, o melhor complexo obtido foi escolhido para a confecção de um sachê antimicrobiano para conservar uma salada composta de alface, rúcula e tomate uva submetida a diferentes tratamentos sanitizantes e armazenada por seis dias a 7 ºC. Os procedimentos sanitizantes foram: controle ou sem sanitização (SS), ultrassom (US), dicloroisocianurato de sódio (DC), dicloroisocianurato de sódio associado a ultrassom (DC+US), ácido peracético (AP) e ácido peracético associado a ultrassom (AP+US). As características físico-químicas e a microbiota natural da salada foram investigadas, bem como a aceitação sensorial da salada e sua intenção de compra. Também objetivou-se verificar se os tratamentos realizados seriam capazes de inativar o patógeno Listeria monocytogenes, propositalmente aderido à superfície dos componentes da salada. O OEPD apresentou &#946;-mirceno, eugenol e d-limoneno como majoritários, além de maior atividade antimicrobiana contra todos os microrganismos testados do que o OEM, cujos majoritários foram metil chavicol e linalol. A complexação dos dois óleos com &#946;-CD foi alcançada e assegurada por análises térmicas, microscopia eletrônica de varredura e espectroscopia na região do infravermelho, com obtenção, ao final, de oito complexos de inclusão. Os complexos de OEPD obtidos por malaxagem, em ambas proporções, apresentaram os melhores resultados nas análises microbiológicas in vitro, e o complexo de OEPD 2:1 foi escolhido para confecção do sachê. As características físico-químicas da salada não foram muito afetadas pelos procedimentos de sanitização, nem pela presença de sachê na embalagem. O tempo de armazenamento ocasionou uma ligeira perda de massa fresca, mas que foi considerada baixa. Os tratamentos DC, DC+US e AP foram os melhores para reduzir a contagem de psicrotróficos e bactérias láticas. Para fungos e leveduras, DC e DC+US alcançaram maiores reduções decimais, e AP+US foi melhor do que AP. Contra L. monocytogenes, DC, DC+US e AP+US apresentaram melhores resultados. Quanto aos sanitizantes, concluiu-se que o ácido peracético, associado ou não ao ultrassom, pode substituir o cloro na sanitização de vegetais. Em relação ao sachê, nas condições testadas, não foi verificada ação antimicrobiana no alimento. Além disso, as amostras de salada com sachê em seu interior receberam as menores notas para odor e impressão global na avaliação sensorial, bem como tiveram as menores intenções de compra.

Orientador: Eliana Gertrudes de Macedo Lemos / Coorientador: Tereza Cristina Luque Castellane / Banca: Maria de Lourdes Corradi Custodio da Silva / Banca: Luciana Maria Saran / Banca: Tsai Siu Mui / Banca: Jackson Antonio Marcondes de Souza / Resumo: As estruturas e alguns compostos produzidos pelos microrganismos apresentam elevada quantidade de cargas como, por exemplo, parede celular e biopolímeros. Os exopolissacarídeos (EPSs) de bactérias pertencentes à ordem Rhizobiales apresentam biopolímeros que têm sido muito estudados. Os EPSs são moléculas que apresentam grupos polares, esta característica é capaz de reduzir a tensão interfacial de mistura água/óleo e óleo/água. A formação de emulsões é um fator importante para a biodegradação de óleos e hidrocarbonetos. As cargas presentes na parede celular das células bacterianas são de natureza predominantemente aniônica. Estas estruturas são capazes de interagir fortemente com cátions metálicos e desempenham um papel importante no sequestro ou imobilização de íons no ambiente. A aplicação dos isolados de rizóbios são interessantes ferramentas biotecnológicas no processo de biorremediação, por estes microrganismos não apresentarem toxicidade à saúde e ao meio ambiente. Dos isolados de rizóbios pertencentes ao Laboratório de Bioquímica de Microrganismos e Plantas, da FCAV/UNESP, foram selecionados quatro, que demonstraram elevada produção de goma 'in vitro'. Este trabalho teve como objetivo investigar o potencial biotecnológico, de isolados de Rhizobium spp. (SEMIA 4064 e JAB6) e dois isolados de Mesorhizobium spp. (LMG 6125 e LMG 11892), como bioemulsificantes e biossorventes. Para a identificação dos isolados foi sequenciada a região 16S rRNA (1500pb). Foram estudados a produção de EPS e aplicação desses biopolímeros como bioemulsificantes de óleos e hidrocarbonetos. Investigando a Reologia e a ... / Abstract: The structures and some compounds produced by microorganisms have a high amount of charges such as, for example, cell wall and biopolymers. The exopolysaccharides (EPSs) of bacteria belonging to the order Rhizobiales have biopolymers that have been widely studied. The EPSs are molecules that have polar groups, this feature they are can to reduce the interfacial tension of water/oil and oil/water. The formation of emulsions is important factor for the biodegradation of oils and hydrocarbons. The charges present in the cell wall on the bacterial cells are predominantly of anionic in nature. These structures are capable of interacting strongly with metal ions and play an important role in sequestering or immobilization of ions in the environment. The application of the populations of rhizobia are interesting biotechnological tools in bioremediation process, these organisms do not present toxicity to health and the environment. Rhizobial isolates belonging to the Laboratory of Biochemistry of Plants and Microorganisms, FCAV / UNESP, four were chosen that demonstrated high gum production in vitro. This work aimed to investigate the potential of biotechnology of the isolates of Rhizobium spp. (SEMIA 4064 and JAB6) and two strains of Mesorhizobium spp. (LMG 6125 and LMG 11892), as biosorbents and bioemulsifiers. For the identification of the isolates were done sequencing of the gene 16S rRNA (1500pb). The production and application of these EPSs were studied as bioemulsifiers of oils and hydrocarbons. Investigating the monosaccharides composition and rheology of the EPSs. These isolates were explored for sensitivity of live cells and the process of removal of dead cells by copper ions (Cu2+) and chromium (Cr6+). The sequencing showed that the isolates LMG 6125 and LMG 11892 were not consistent with the genus and species previously described / Doutor

Orientador: Luiz Felipe Valandro / Banca: Renata Marques de Melo Marinho / Banca: Antonio Olavo Cardoso Jorge / Banca: Marina Amaral / Banca: Rodrigo Othavio de Assuncão e Souza / Resumo: O presente estudo teve como objetivo avaliar o efeito de diferentes métodos de remoção do excesso de cimento e do polimento na formação de biofilme e micromorfologia na região de margem dente/restauração. A partir de dentes bovinos, foram obtidos 96 blocos de dentina (4 mm x 8 mm x 2 mm) que foram moldados e reproduzidos em gesso tipo IV, sobre os quais foram produzidos 96 blocos prensados de cerâmica (Vita PM9, Vita Zahnfabrik; 4 mm x 8 mm x 2 mm) pela técnica de cera perdida. Os blocos de dentina e seus respectivos blocos cerâmicos foram cimentados com um cimento resinoso auto-adesivo (RelyX U200, 3M ESPE) e o excesso de cimento foi removido utilizando diferentes técnicas: MBr: microbrush e fotoativação, MBr-Pol: microbrush, fotoativação e polimento, Pi: pincel e fotoativação, Pi-Pol: pincel, fotoativação e polimento, Foto- Expl: 5 s de fotoativação inicial, explorador e fotoativação final, Foto-Expl- Pol: 5 s de fotoativação inicial, explorador, fotoativação final e polimento, Foto-Bi: 5 s de fotoativação inicial, bisturi e fotoativação final, Foto-Bi-Pol: 5s de fotoativação inicial, bisturi, fotoativação final e polimento. Após 24 h, a rugosidade da região de margem das amostras foi analisada utilizando um rugosímetro (Mitutoyo SJ-400 Tóquio, Japão; três medições em cada amostra). Análise micromorfológica da região foi obtida por microscópio estereoscópico e MEV. Em seguida, as amostras foram contaminadas em caldo de sacarose com suspensão padronizada com Streptococcus mutans, Staphylococcus aureus e Candida albicans e incubados por um período de 48 h. As amostras foram analisadas quantitativamente para aderência bacteriana na região da margem por microscopia de varredura confocal a laser e contagem das unidades formadoras de colônias (UFC/mL), e analisadas qualitativamente usando MEV. Os dados de rugosidade superficial (Ra) foram submetidos à análise de variância (2- way), teste de Tukey.. / Abstract This study evaluated the effects of excess cement removal techniques, with or without posterior polishing, on the biofilm formation and micromorphology in the marginal region of the tooth/restoration. From bovine teeth, 96 dentin blocks (4 x 8 x 2 mm) were produced, molded and reproduced in type IV gypsum, on which 96 pressed ceramic blocks (Vita PM9 4 mm x 8 mm x 2 mm, Vita Zahnfabrik) were produces via lost wax technique. The dentin blocks and their respective ceramic blocks were cemented with a self-adhesive resin-cement (RelyX U200, 3M ESPE) and cement excess was removed using different techniques, followed by polishing with silicone tips or, in some cases, not polished at all: MBr: microbrush and photoactivation, MBr-Pol: MBr + polishing, Pi: brush and photoactivation, Pi-Pol: PI + polishing, Photo-Expl: 5 s initial photoactivation, explorer and final curing, Photo-Expl-Pol: Photo-Expl + polishing, Photo-Bi: 5 s initial photoactivation, scalpel and final curing, Photo-Bi-Pol: Photo-Bi + polishing. After 24 hours, the samples marginal region roughness was analyzed using a profilometer (Mitutoyo SJ-400 Tokyo, Japan; three measurements on each sample). Micromorphological analyses of the region were performed by stereoscopic microscope and SEM. Then the samples were contaminated with sucrose broth standardized suspension with Streptococcus mutans, Staphylococcus aureus and Candida albicans and incubated for a period of 48 hours. The samples were quantitatively analyzed for bacterial adherence in the marginal region by confocal laser scanning microscopy and counting of colony forming units (CFU/ml), and qualitatively analyzed using SEM. Roughness data (Ra) were submitted to 2-way ANOVA, Tukey test (5%) and Student's-t tests. CFU, Biomass and bio thickness data were analyzed by Kruskal Wallis', Mann-Whitney's e Dunn's tests. The removing technique statistically influenced the roughness (Ra; p ˂ 0.05), when comparing polished and unpolished... / Doutor

A produção de resíduos gerou uma problemática a ser abordada em nível de redução, reciclagem e reutilização de produtos. A técnica da compostagem é uma alternativa promissora para tratar resíduos sólidos orgânicos, bem como o lodo produzido nas estações de tratamento de esgotos. Os micro-organismos que promovem a degradação durante o processo de compostagem podem apresentar perfil de resistência a antimicrobianos e metais pesados, consequência da pressão seletiva de produtos químicos que estão misturados à matéria orgânica. Para avaliar o perfil de resistência a antimicrobianos, foram testadas 344 bactérias isoladas do processo de compostagem, utilizando-se 14 antimicrobianos. Para os ensaios de concentração inibitória mínima (CIM) de metais pesados, foram avaliados 91 isolados do início e final do processo, utilizando cromo, cobre, zinco e chumbo. Também foi avaliada a qualidade microbiológica do composto, segundo a Resolução 375/2006 do CONAMA. Os resultados apontaram para um perfil de 88% dos isolados resistentes a pelo menos um antimicrobiano. O antimicrobiano com maior índice de resistência foi a nitrofurantoína (64,82%), e o mais eficiente foi o imipenem, com apenas um isolado resistente. Das bactérias isoladas do início do processo de compostagem, 33,3% foram resistentes a MIC acima de 710 mg.L-1 de cromo, 38,9% foram resistentes ao mínimo de 1020 mg.L-1 de cobre, 91,7% resistentes ao zinco, e 100% resistentes ao chumbo. No final do processo, 41,8% dos isolados foram resistentes ao cromo, 41,8% ao cobre, 94,5% ao zinco e 96,4% ao chumbo. Escherichia coli apresentou NMP de 4x104 UFC/g-1, acima do limite preconizado pelo CONAMA. / With the production of residues comes the need for reduction, recycling and reuse of products. The composting technique is a promising alternative for the treatment of solid organic residues, along with the sludge produced in sewage treatment plants. The microorganisms that promote the degradation during the composting process might show antimicrobial and heavy metal resistance as a result of the selective pressure of chemical products mixed to the organic matter. The antimicrobial resistance profile was evaluated by testing 344 bacteria isolated from the composting process, using 14 antimicrobial agents. The minimum inhibitory concentration (MIC) for heavy metals was evaluated using 91 isolates from the initial and final stages of the process, using chrome, copper, zinc and lead. The microbial quality of the compound was also evaluated, according to the 375/2006 resolution from the Conselho Nacional do Meio Ambiente (CONAMA). The results showed that 88% of the isolates showed resistance to at least one antimicrobial. The antimicrobial nitrofurantoin showed the highest resistance rate (64.82%), and imipenem was the most efficient, as only one isolate showed resistance. Among the bacteria isolated during the initial stages of the composting process, 33.3% showed resistance to MIC over 710 mg.L-1 chrome, 38.9% showed resistance to a minimum of 1020 mg.L-1 copper, 91.7% were resistant to zinc, and 100% were resistant to lead. In the end of the process, 41.8% of the isolates showed resistance to chrome, 41.8% to copper, 94.5% to zinc and 96.4% to lead. Escherichia coli’s NMP was 4x104 UFC/g-1, above the limit recommended by CONAMA.

Tese de mestrado integrado. Engenharia Química. Faculdade de Engenharia. Universidade do Porto. 2008