A periodontite é uma resposta inflamatória desencadeada por um complexo biofilme constituído por diversos microrganisnos, particularmente por bactérias anaeróbias, tais como Porphyromonas spp. e Fusobacterium spp. Essas bactérias produzem vários fatores de virulência capazes de atuar no início e progressão da doença. Cem amostras subgengivais foram analisadas, sendo 50 de cães com periodontite e 50 de cães sadios, obtendo-se 144 isolados bacterianos identificados como pertencentes aos gêneros Porphyromonas e Fusobacterium. A produção de hemolisinas e hemaglutininas, susceptibilidade aos soros humano, canino e equino, e susceptibilidade a dez antibióticos foram avaliadas, assim como a presença dos genes prtC (colagenase), fimA (fímbrias), tetQ e tetM (resistência à tetraciclina). Igualmente, a capacidade quimiotática de neutrófilos e a produção de IL-1<font face=\"Symbol\">&#946, IL-8, TNF-<font face=\"Symbol\">&#945, IL-11 e IL-17, foram avaliadas. <font face=\"Symbol\">&#946-hemólise foi produzida por P. gulae, P. crevioricanis, P. cangingivalis, P. gingivicanis e P. circumdentaria. Dos 144 isolados, 21 P. gulae e 2 F. nucleatum aglutinaram eritrócitos humanos. A maioria dos isolados foi resistente à ação dos soros humano, equino ou canino. Todos os 144 isolados foram sensíveis à amoxicilina, clindamicina, tetraciclina, amoxicilina/clavulanato, cefoxitina e penicilina G. Três P. gulae, 2 P.macacae e 2 P. canifelinum abrigaram o gene tetQ e apenas um F. nucleatum e um P. catoniae foram positivos para a presença do gene tetM. As espécies P. gulae, P. cangingivalis e P. circumdentaria abrigaram o gene prtC. A maioria dos isolados abrigou o gene fimA tipo I e nenhum deles abrigou o gene fimA tipo V. Somente nas P. gulae foi observada a presença de cápsula pela microscopia eletrônica de transmissão. Todos os isolados estimularam quimiotaxia dos neutrófilos. Interleucinas IL-1<font face=\"Symbol\">&#946, IL-8, TNF-<font face=\"Symbol\">&#945 e IL-11 foram detectadas após estímulo com as espécies de Porphyromonas. As espécies de Fusobacterium não estimularam a produção de IL-11 e P. gulae induziu elevada concentração dessa citocina. Nenhum dos isolados estimulou a liberação de IL-17. / Periodontitis is an inflammatory response caused by a complex microbial biofilm, including anaerobic bacteria such as Porphyromonas spp. and Fusobacterium spp. Those species present several virulence factors which act on early step and during the disease evolution. One hundred of subgingival samples were analyzed, obtained from 50 dogs with and 50 without periodontitis. One hundred and forty four bacterial species were isolated belonging to both Porphyromonas and Fusobacterium genus. Hemolysin and hemagglutinin production, susceptibility to human, equine and canine sera, and antimicrobial susceptibility to 10 antibiotics were evaluated. In addition, the presence of gene prtC (collagenase), fimA (fimbriae), tetQ and tetM (tetracycline resistance), as well as neutrophils chemotaxis and IL-1<font face=\"Symbol\">&#946, IL-8, TNF-<font face=\"Symbol\">&#945, IL-11 and IL-17 production were also determined. <font face=\"Symbol\">&#946-hemolysis was produced by P. gulae, P. crevioricanis, P. cangingivalis, P. gingivicanis and P. circumdentaria. Of the 144 isolates, 21 P. gulae and 2 F. nucleatum were able to agglutinate human erythrocytes. Most of the isolates were resistant to the action of human, equine or canine serum. All isolates were susceptible to amoxicillin, clindamycin, tetracycline, amoxicillin/clavulanate, cefoxitin and penicillin G. Three P. gulae, 2 P.macacae and 2 P. canifelinum harbored tetQ, and only one F. nucleatum and one P. catoniae were tetM positive. P. gulae, P. cangingivalis and P. circumdentaria harbored prtC. Most of the isolates harbored fimA I gene and none of them harbored fimA V. Only P. gulae showed capsule through transmission electron microscopy. All isolates induced neutrophils chemotaxis and IL-1<font face=\"Symbol\">&#946, IL-8, TNF-<font face=\"Symbol\">&#945 and IL-11 were produced when neutrophils were stimulated by Porphyromonas spp. Fusobacterium spp. did not stimulate IL-11 production and P. gulae induced high concentration of cytokine. None of the isolates stimulated IL-17.

A necessidade de atendimento à legislação ambiental aumenta a necessidade da implantação de aterros sanitários. Associada à adequada disposição dos resíduos a legislação vigente também exige maiores eficiências no tratamento do lixiviado gerado nos aterros sanitários. A alta concentração de poluentes e a diversidade de compostos existentes no lixiviado apresentam necessidade de melhores sistemas e equipamentos para o adequado tratamento destes resíduos líquidos. Uma das mais promissoras tecnologias é o uso de sistemas anaeróbios de fluxo ascendente com leito fluidizado, devido à característica operacional destes sistemas que aumentam o tempo de contato entre a biomassa e o efluente, com melhora na eficiência global do tratamento, além da redução do tamanho dos reatores necessários. Associado a isto, sistemas de membranas tem sido objeto de pesquisas em sistemas de tratamento de efluentes, pois além da retenção de biomassa, o efluente final de um sistema de membranas tem possibilidade de reuso em função de suas excepcionais características físico-químicas. Para avaliação desta possibilidade foi feito o desenvolvimento de um reator anaeróbio de leito fluidificado associado a um sistema de membranas de microfiltração. O leito do reator anaeróbio foi constituído de areia de rio com granulometria 28/35Mesh. A vazão ascensional de alimentação do leito apresentou resultados de velocidades ascensionais de 0,00629 m.s-1 segundo Leva. Considerando a seção transversal do reator livre o resultado da velocidade ascensional foi 0,0099 m.s-1. A velocidade ascensional calculada através de Leva foi 63% da velocidade ascensional calculada através da seção transversal do reator. O tempo de residência hidráulica no interior do reator foi de 16,5 a 33,0 horas, durante o experimento. As membranas de microfiltração apresentaram resultados operacionais satisfatórios, tendo sido submetido a limpezas químicas e limpezas com água ao longo do processo. A limpeza química se mostrou mais efetiva na recuperação do fluxo de permeado, que apresentou valor de 62,55 L.m-2.h-1 imediatamente após a limpeza, enquanto que o valor após a limpeza com água foi de 14 Lm-2.h-1. Apesar destes valores a resistência da membrana ao fluxo foi reduzida em até 91% com a limpeza com água, o que pode ser considerada como uma estratégia viável para períodos curtos na operação do sistema. / Submitted by Marcelo Teixeira (mvteixeira@ucs.br) on 2014-05-23T18:56:12Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao Paulo A Boff.pdf: 1607938 bytes, checksum: a915f637c8a81295536201e670cd23f3 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-05-23T18:56:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Paulo A Boff.pdf: 1607938 bytes, checksum: a915f637c8a81295536201e670cd23f3 (MD5) / The requirements to achieve what is demanded by the environmental laws make important the use of areas for sanitary landfills. The adequate disposal of waste associated with the current legislation also demands larger efficiencies to the treatment processes of the leachate generated in the sanitary landfills. The high concentrations and the different kind of pollutant compounds in the leachate, require more adequate treatment processes to the wastewater. One of the most promising technologies is the use of anaerobic fluidized bed reactors due to the possibility of increasing the contact between the biomass and the wastewater, with improvement in the global efficiency of the treatment, besides the reduction of the size of the reactors. Associated to this, membrane systems have been object of researchers in wastewaters treatment processes, because besides the biomass retention, the final wastewater of a process using membranes shows a possibility of reuse due to the good physical-chemical characteristics. It was made an experimental unit consisted of an anaerobic fluidized bed reactor associated with a microfiltration membranes unit for evaluation of this process. The bed of the anaerobic reactor was constituted of river sand with granulometry of 28/35 Mesh. The feeding flow rate resulted in the upflow velocities 0.000479 m.s-1 and 0.00118m.s-1, according Leva and of 0.00364 m.s-1, according to Ergun. It was calculated a upflow velocity of 0.0099 m.s-1 when was considered only the cross-sectional area. The upflow velocity calculated by Ergun equation was 63% that calculated using the cross-sectional area, only. The hydraulic detention time laid in the range of 16.5 to 33.0 hours, during the experiment. The system of membranes presented satisfactory operational results, having been submitted to chemical cleanings and cleanings with water along the process. The chemical cleaning was better than water when executed in the recovery of the flow of having permeated. The permeate flux value was 62.55 L.m-2.h-1 immediately after the chemical cleaning, while the value after the cleaning with water reaching 14 L.m-2.h-1. Despite these flux values, the membrane resistances during the operation time were reduced in up to 91% with the cleaning with water only, proving the viability of this strategy cleaning for short periods in the operation of these systems.

A necessidade de atendimento à legislação ambiental aumenta a necessidade da implantação de aterros sanitários. Associada à adequada disposição dos resíduos a legislação vigente também exige maiores eficiências no tratamento do lixiviado gerado nos aterros sanitários. A alta concentração de poluentes e a diversidade de compostos existentes no lixiviado apresentam necessidade de melhores sistemas e equipamentos para o adequado tratamento destes resíduos líquidos. Uma das mais promissoras tecnologias é o uso de sistemas anaeróbios de fluxo ascendente com leito fluidizado, devido à característica operacional destes sistemas que aumentam o tempo de contato entre a biomassa e o efluente, com melhora na eficiência global do tratamento, além da redução do tamanho dos reatores necessários. Associado a isto, sistemas de membranas tem sido objeto de pesquisas em sistemas de tratamento de efluentes, pois além da retenção de biomassa, o efluente final de um sistema de membranas tem possibilidade de reuso em função de suas excepcionais características físico-químicas. Para avaliação desta possibilidade foi feito o desenvolvimento de um reator anaeróbio de leito fluidificado associado a um sistema de membranas de microfiltração. O leito do reator anaeróbio foi constituído de areia de rio com granulometria 28/35Mesh. A vazão ascensional de alimentação do leito apresentou resultados de velocidades ascensionais de 0,00629 m.s-1 segundo Leva. Considerando a seção transversal do reator livre o resultado da velocidade ascensional foi 0,0099 m.s-1. A velocidade ascensional calculada através de Leva foi 63% da velocidade ascensional calculada através da seção transversal do reator. O tempo de residência hidráulica no interior do reator foi de 16,5 a 33,0 horas, durante o experimento. As membranas de microfiltração apresentaram resultados operacionais satisfatórios, tendo sido submetido a limpezas químicas e limpezas com água ao longo do processo. A limpeza química se mostrou mais efetiva na recuperação do fluxo de permeado, que apresentou valor de 62,55 L.m-2.h-1 imediatamente após a limpeza, enquanto que o valor após a limpeza com água foi de 14 Lm-2.h-1. Apesar destes valores a resistência da membrana ao fluxo foi reduzida em até 91% com a limpeza com água, o que pode ser considerada como uma estratégia viável para períodos curtos na operação do sistema. / The requirements to achieve what is demanded by the environmental laws make important the use of areas for sanitary landfills. The adequate disposal of waste associated with the current legislation also demands larger efficiencies to the treatment processes of the leachate generated in the sanitary landfills. The high concentrations and the different kind of pollutant compounds in the leachate, require more adequate treatment processes to the wastewater. One of the most promising technologies is the use of anaerobic fluidized bed reactors due to the possibility of increasing the contact between the biomass and the wastewater, with improvement in the global efficiency of the treatment, besides the reduction of the size of the reactors. Associated to this, membrane systems have been object of researchers in wastewaters treatment processes, because besides the biomass retention, the final wastewater of a process using membranes shows a possibility of reuse due to the good physical-chemical characteristics. It was made an experimental unit consisted of an anaerobic fluidized bed reactor associated with a microfiltration membranes unit for evaluation of this process. The bed of the anaerobic reactor was constituted of river sand with granulometry of 28/35 Mesh. The feeding flow rate resulted in the upflow velocities 0.000479 m.s-1 and 0.00118m.s-1, according Leva and of 0.00364 m.s-1, according to Ergun. It was calculated a upflow velocity of 0.0099 m.s-1 when was considered only the cross-sectional area. The upflow velocity calculated by Ergun equation was 63% that calculated using the cross-sectional area, only. The hydraulic detention time laid in the range of 16.5 to 33.0 hours, during the experiment. The system of membranes presented satisfactory operational results, having been submitted to chemical cleanings and cleanings with water along the process. The chemical cleaning was better than water when executed in the recovery of the flow of having permeated. The permeate flux value was 62.55 L.m-2.h-1 immediately after the chemical cleaning, while the value after the cleaning with water reaching 14 L.m-2.h-1. Despite these flux values, the membrane resistances during the operation time were reduced in up to 91% with the cleaning with water only, proving the viability of this strategy cleaning for short periods in the operation of these systems.

O tratamento antimicrobiano pode destruir o equilíbrio da microbiota gastrintestinal, podendo induzir sintomas clínicos, principalmente a diarréia. A influência de Lactobacillus casei Shirota sobre a microbiota intestinal foi avaliada em um estudo prospectivo, randomizado, duplo-cego e controlado. Sessenta e três crianças hospitalizadas com idade de 2 a 14 anos, sob tratamento com antibióticos &#946;-lactâmicos, foram randomizadas para receber o leite fermentado por L. casei Shirota, 108-9 UFC/mL, ou o placebo, durante o tratamento antimicrobiano. As amostras de fezes foram colhidas antes da administração do leite fermentado, durante o tratamento antibiótico e uma semana após o término do tratamento com o antimicrobiano e a ingestão do leite fermentado. O número de L. casei Shirota aumentou significativamente (p<0,001) durante o período de ingestão do leite fermentado. Foi observado na microbiota do grupo que recebeu o placebo um aumento na contagem de Pseudomonas aeruginosa (p<0,05) e Clostridium sp (p<0,05), principalmente no último período da terapia antimicrobiana. A alteração da microbiota intestinal em decorrência do tratamento antibiótico foi constatada pela diminuição de acetato (p<0,05), butirato (p<0,05) e formato (p<0,05). Embora nenhuma criança deste estudo tenha apresentado diarréia, na avaliação geral, a microbiota daquelas que receberam o leite fermentado mostrou uma recuperação precoce da microbiota intestinal. Foi observado que a variação da contagem bacteriana realizada não foi significativa para as crianças do grupo que recebeu o leite fermentado, enquanto que no grupo placebo a contagem bacteriana ficou alterada, mostrando desequilíbrio da microbiota. Cerca de 50% das crianças ainda apresentaram L. casei Shirota nas fezes após uma semana da ingestão do leite fermentado. Este estudo mostrou que a ingestão do leite fermentado contendo L. casei Shirota promoveu um reequilíbrio mais rápido da microbiota intestinal quando comparada com a do grupo que ingeriu o placebo. / Antimicrobial treatment can destroy the balance of gastrointestinal microflora, which may induce clinical symptoms, mainly diarrhoea. The influence of Lactobacillus casei Shirota on the intestinal microflora was assessed in a prospective, randomised, double-blind controlled study. Sixty-three hospitalised children, with ages between 2 and 14 years, under treatment with &#946;-lactam antibiotics were randomised to receive milk fermented by L. casei Shirota, 108-9 CFU/mL, or placebo during the antimicrobial treatment. Stool samples were collected before the administration of fermented milk, during the antibiotic treatment, and one week after the end of treatment with the antimicrobial agent and the ingestion of fermented milk. The number of L. casei Shirota increased significantly (p<0.05) during the period in which fermented milk was ingested. An increase in the Pseudomonas aeruginosa (p<0.05) and Clostridium sp (p<0.05) count was observed in the microflora of the group that received placebo, mainly in the last period of antimicrobial therapy. The alteration of intestinal microflora as a result of antibiotic treatment was found by the reduction of acetate (p<0.05), butyrate (p<0.05) and formate (p<0.05). The variation in bacterial count proved not to be significant for the children under antimicrobial treatment who received fermented milk, while the placebo group showed imbalance of microflora with the result of the altered bacterial count. About 50% of the children still presented L. casei Shirota in their stools after interrupting the ingestion of fermented milk for one week. This study showed that ingestion of fermented milk containing L. casei Shirota promoted a much faster re-balance of the intestinal microflora when compared to the group that ingested a placebo.

Xanthomonas axonopodis pv citri (Xac), uma bactéria gram negativa, é a causadora da doença Cancro Cítrico que ocasiona enormes prejuizo na citricultura brasileira. Com o seqüenciamento do genoma deste patógeno foram encontradas inúmeras sequências codificadores com funções desconhecidas. Assim com a finalidade de estudos funcionais do genoma de Xac, foram gerados mutantes randômicos usando o transposon EZ::TN, que induziu disrupção aleatoria de seus genes com o intuito de avaliar que genes inativados afetam a patogenicidade da bactéria. Para o mapeamento do local de inserção do transposon foi desenvolvida uma metodologia baseada na técnica de PCR touchdown utizando oligonucleotídeos semidegenerados. A confiabilidade deste novo método foi comprovada através do mapeamento por Southem blot de alguns mutantes. Conseguiu-se mapear 90 mutantes randômicos com este método. Os testes de patogenicidade em citros mostraram mutantes com sua patogenicidade afetada observando-se variações nos sintomas da doença. Mutantes interessantes contendo uma ORF hipotética inativada ou tendo uma inserção num espaço intergênico foram achadas, sendo também detectados alguns mutantes com nocaute de genes nos seus plasmídeos pXac33 e pXac66. / Xanthomonas axonopodis pv citri (Xac), a gram-negative bacteria, is the causer of the Citrus Canker disease that produces enormous losses to the brazilian citrus sector. Many coding sequences with unknown functions were found in the genome sequence of this pathogen. Therefore, with the goal of functional studies of Xac\'s genome, random mutants using the EZ::TN transposon, have been generated, which carry aleatory disruptions of their genes, with the aim of evaluating inactived genes that potentially affect bacterial pathogenicity. A method based in the PCR touchdown technique using semidegenerate primers was developed for the mapping of the transposon insertion site. The reliability of this new method was tested by means of mapping some mutants using Southern blot. Ninety random mutants were mapped with this method. The pathogenicity tests in citrus showed mutants with their pathogenicity affected and variations in the disease symptoms were observed. Interesting mutants containing an inactive hypothetical ORF or with an insertion in intergenic regions have been found, and also some mutants with inactivated genes in their plasmids pXac33 and pXac66 were detected.

Bordetella pertussis e Bordetella parapertussis são os principais agentes causadores da coqueluche no homem. O óxido nítrico é fundamental para o controle de diversos processos fisiopatológicos. Neste trabalho analisamos sinais moleculares envolvidos na produção de NO em macrófagos derivados de medula óssea murina (BMDMO) infectadas por Bpertussis e Bparapertussis. Nossos resultados mostraram que BMDMO de C57BL/6 estimulados com Bpertussis não sintetizaram níveis significativos de nitrito, ao contrário da infecção com Bparapertussis. BMDMO de C57BL/6 infectados por Bpertussis e Bparapertussis produziram níveis elevados de arginase e de TGFb e esta produção foi dependente de TLR4, porém a produção de NO pelos BMDMO de C3H/HeJ infectados com Bparapertussis foi independente deste receptor. A adição exógena de PT em BMDMO infectados com Bparapertussis reduziu a quantidade de NO sintetizada. Concluímos que TGFb e arginase contribuem para o controle da produção de NO durante a infecção in vitro de BMDMO com Bpertussis e este mecanismo depende de LPS envolvendo TLR4 e PT. / Bordetella pertussis and Bordetella parapertussis are the main etiologic causes of human whooping cough. Nitric oxide (NO) is crucial for several physiopathologic events. Herein we analyzed the molecular signals required for NO production by murine bone marrow-derived macrophages (BMDM) infected with Bpertussis or Bparapertussis. Our data show that BMDM obtained from C57Bl/6 mice was not able to produce measurable levels of nitrite when stimulated with Bpertussis while infection of these cells with Bparapertussis induced high levels of nitrite. Arginase and TLR4-dependent TGF-b were produced in response to infection with either Bpertussis or Bparapertussis. NO production by BMDM obtained from C3H/HeJ mice occurred after Bparapertussis infection in the absence of TLR4. Addition of pertussis toxin to the C57Bl/6 BMDM cultures infected with Bparapertussis decreased NO levels. In conclusion, TGF-b and arginase play a role controlling NO production by BMDM during in vitro infection by Bpertussis. This effect depends on the presence of LPS-TLR4 and PT signaling pathways.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:52:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 443818 bytes, checksum: 511a55303b3b59b278ccd2fab938970a (MD5) Previous issue date: 2006-04-28 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The mango (Mangifera indica Linn.) is one of the most important tropical fruits. It is very appreciated due to its flavor and nutritional characteristics. The fruits are easily spoiled because of intrinsic factors, which makes difficult its commercialization in natura. An alternative to reduce the losts is the conservation of the mango as pulp, juice and nectar. The thermal treatment is the most used process to conservate these products. However, the complete inativation of microorganisms during the thermal processing adopted by most industries of fruit juices and fruit pulps is limited by the presence of spore formers and termorresistents microorganisms. This work aimed to isolate and to identificate spoilage bacteria from thermally processed mango pulp, and to characterize the fermentative activity of these microorganisms. Samples of 25 lots of spoiled mango pulp from two industrial units processing mango pulp were evaluated in plate count agar, added with 20 % of steril mango pulp. A number of 104 bacteria were isolated and were characterized as Gram-positive rods, spore formers and mostly strict anaerobic, indicating that belonged to the genus Clostridium. Four isolated named LMA 45, LMA 63, LMA 72 and LMA 104, provenient of different lots of mango pulp from two industrial units, were identified by biochemical tests and by the cell membrane fatty acids profile as Clostridium tyrobutyricum. These four isolates were selected for use in the experiments that followed. The isolates were cultivated in BHI broth within a pH range of 3.0 to 7.0 and temperatures between 7 °C to 50 °C. C. tyrobutyricum grew in the pH range of 4.0 to 7.0, except for isolate LMA 104, that did not grow in pH 4.0 up to 48 hours of incubation. None of the isolates was able to grow in pH 3.5. The specific growth rate (&#956;) was higher in pH values between 6.5 and 7.0 and varied from 0.18 to 0.31 h-1. The growth was observed in a temperature range from 10 °C to 40 °C, with an optimum between 35 °C and 40 °C. The fermentative activity of C. tyrobutyricum LMA 45, LMA 63, LMA 72 and LMA 104 was evaluated in mango pulp with pH varying from 3.0 to 5.0. Gas production was detected in pH of 4.0, 4.5 and 5.0 before 50 hours of the incubation at 30 ºC, except for isolate LMA 104 which produced gas only after 100 hours of incubation. The other main products that resulted from mango pulp fermentation in pH values between 4.0 and 4.5 were acetate and butyrate, which was determined by high performance liquid chromatography (HPLC). The consumption of sucrose, glucose and frutose during mango pulp fermentation in pH 4.0 and 4.5 was also determined using HPLC. The C. tyrobutyricum isolates evaluated could grow at high sugar concentrations, as they fermented the mango pulp containing 729,2 mM of sugars, but did not use all the substrate. The growth of the isolates was inhibited in mango pulp at pH 3.5. This results suggest the adoption of the acidification strategy by the industries, wich generally process mango pulp with pH 4.0. This strategy might ensure the conservation of the fruit product, without changes in the thermal treatment. / A manga (Mangifera indica Linn.) é uma das mais importantes frutas tropicais, muito apreciada pelo sabor, aroma e por suas propriedades nutricionais. Os frutos são perecíveis em razão dos fatores intrínsecos, dificultando a sua comercialização in natura. Uma alternativa para reduzir as perdas é a conservação da manga na forma de polpa, suco ou néctar. O tratamento térmico é o processo mais empregado para a conservação desses produtos. Entretanto, a inativação completa de microrganismos durante o processamento térmico normalmente adotado pelas indústrias processadoras de sucos e polpas é limitada pela presença de organismos formadores de esporos e de termorresistentes. Este trabalho teve como objetivos isolar e identificar as bactérias deterioradoras de polpa de manga tratada termicamente e caracterizar a atividade fermentativa desses microrganismos. Amostras de 25 lotes de polpa de manga deteriorada provenientes de duas unidades industriais processadoras de polpa de manga foram analisadas em ágar padrão para contagem, enriquecido com 20 % de polpa de manga esterilizada. Um total de 104 isolados foi obtido e essas bactérias foram caracterizadas como bastonetes, Gram-positivas, formadoras de esporos sendo a grande maioria constituída de anaeróbias estritas, do gênero Clostridium. Destes, os isolados LMA 45, LMA 63, LMA 72 e LMA 104 obtidos de lotes diferentes de polpa de manga provenientes de duas unidades industriais, foram identificados por teste bioquímicos e pelo perfil de ácidos graxos de membrana como Clostridium tyrobutyricum e selecionados para a continuidade deste estudo. Os isolados foram cultivados em caldo BHI com pH variando de 3,0 a 7,0 e em temperatura entre 7 °C e 50 °C. O crescimento de C. tyrobutyricum ocorreu em valores de pH de 4,0 a 7,0 com exceção do isolado LMA 104 que não apresentou crescimento em pH 4,0 em até 48 horas de incubação. Não houve crescimento em pH 3,5. A velocidade específica de crescimento (&#956;) foi maior em pH entre 6,5 e 7,0 e alcançou valores entre 0,18 e 0,31 h-1. O crescimento foi observado em temperaturas de 10 °C a 40 °C, com ótimo entre 35 °C e 40 °C. A atividade fermentativa de C. tyrobutyricum LMA 45, LMA 63, LMA 72 e LMA 104 foi avaliada em polpa de manga com pH variando de 3,0 a 5,0. A produção de gás foi detectada em valores de pH de 4,0, 4,5 e 5,0 em menos de 50 horas de incubação a 30 ºC, com exceção do isolado LMA 104 cuja produção de gás foi detectada após 100 horas de incubação. Além de gás, os principais produtos da fermentação da polpa de manga com pH entre 4,0 e 4,5 foram acetato e butirato, determinados por cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC). O consumo de sacarose, glicose e frutose durante a fermentação de polpa de manga com pH 4,0 e 4,5 foi determinado utilizando-se HPLC. Os isolados de C. tyrobutyricum avaliados apresentaram capacidade de crescer em altas concentrações de açúcar, pois fermentaram a polpa de manga com 729,2 mM de açúcares e não utilizaram todo o substrato durante a fermentação. A inibição do crescimento dos isolados em polpa de manga com pH 3,5 permite sugerir a adoção da estratégia de acidificação para garantir a conservação do produto pela indústria, que geralmente processa esse produto com pH 4,0.

Xanthomonas axonopodis pv citri (Xac), uma bactéria gram negativa, é a causadora da doença Cancro Cítrico que ocasiona enormes prejuizo na citricultura brasileira. Com o seqüenciamento do genoma deste patógeno foram encontradas inúmeras sequências codificadores com funções desconhecidas. Assim com a finalidade de estudos funcionais do genoma de Xac, foram gerados mutantes randômicos usando o transposon EZ::TN, que induziu disrupção aleatoria de seus genes com o intuito de avaliar que genes inativados afetam a patogenicidade da bactéria. Para o mapeamento do local de inserção do transposon foi desenvolvida uma metodologia baseada na técnica de PCR touchdown utizando oligonucleotídeos semidegenerados. A confiabilidade deste novo método foi comprovada através do mapeamento por Southem blot de alguns mutantes. Conseguiu-se mapear 90 mutantes randômicos com este método. Os testes de patogenicidade em citros mostraram mutantes com sua patogenicidade afetada observando-se variações nos sintomas da doença. Mutantes interessantes contendo uma ORF hipotética inativada ou tendo uma inserção num espaço intergênico foram achadas, sendo também detectados alguns mutantes com nocaute de genes nos seus plasmídeos pXac33 e pXac66. / Xanthomonas axonopodis pv citri (Xac), a gram-negative bacteria, is the causer of the Citrus Canker disease that produces enormous losses to the brazilian citrus sector. Many coding sequences with unknown functions were found in the genome sequence of this pathogen. Therefore, with the goal of functional studies of Xac\'s genome, random mutants using the EZ::TN transposon, have been generated, which carry aleatory disruptions of their genes, with the aim of evaluating inactived genes that potentially affect bacterial pathogenicity. A method based in the PCR touchdown technique using semidegenerate primers was developed for the mapping of the transposon insertion site. The reliability of this new method was tested by means of mapping some mutants using Southern blot. Ninety random mutants were mapped with this method. The pathogenicity tests in citrus showed mutants with their pathogenicity affected and variations in the disease symptoms were observed. Interesting mutants containing an inactive hypothetical ORF or with an insertion in intergenic regions have been found, and also some mutants with inactivated genes in their plasmids pXac33 and pXac66 were detected.

O tratamento antimicrobiano pode destruir o equilíbrio da microbiota gastrintestinal, podendo induzir sintomas clínicos, principalmente a diarréia. A influência de Lactobacillus casei Shirota sobre a microbiota intestinal foi avaliada em um estudo prospectivo, randomizado, duplo-cego e controlado. Sessenta e três crianças hospitalizadas com idade de 2 a 14 anos, sob tratamento com antibióticos &#946;-lactâmicos, foram randomizadas para receber o leite fermentado por L. casei Shirota, 108-9 UFC/mL, ou o placebo, durante o tratamento antimicrobiano. As amostras de fezes foram colhidas antes da administração do leite fermentado, durante o tratamento antibiótico e uma semana após o término do tratamento com o antimicrobiano e a ingestão do leite fermentado. O número de L. casei Shirota aumentou significativamente (p<0,001) durante o período de ingestão do leite fermentado. Foi observado na microbiota do grupo que recebeu o placebo um aumento na contagem de Pseudomonas aeruginosa (p<0,05) e Clostridium sp (p<0,05), principalmente no último período da terapia antimicrobiana. A alteração da microbiota intestinal em decorrência do tratamento antibiótico foi constatada pela diminuição de acetato (p<0,05), butirato (p<0,05) e formato (p<0,05). Embora nenhuma criança deste estudo tenha apresentado diarréia, na avaliação geral, a microbiota daquelas que receberam o leite fermentado mostrou uma recuperação precoce da microbiota intestinal. Foi observado que a variação da contagem bacteriana realizada não foi significativa para as crianças do grupo que recebeu o leite fermentado, enquanto que no grupo placebo a contagem bacteriana ficou alterada, mostrando desequilíbrio da microbiota. Cerca de 50% das crianças ainda apresentaram L. casei Shirota nas fezes após uma semana da ingestão do leite fermentado. Este estudo mostrou que a ingestão do leite fermentado contendo L. casei Shirota promoveu um reequilíbrio mais rápido da microbiota intestinal quando comparada com a do grupo que ingeriu o placebo. / Antimicrobial treatment can destroy the balance of gastrointestinal microflora, which may induce clinical symptoms, mainly diarrhoea. The influence of Lactobacillus casei Shirota on the intestinal microflora was assessed in a prospective, randomised, double-blind controlled study. Sixty-three hospitalised children, with ages between 2 and 14 years, under treatment with &#946;-lactam antibiotics were randomised to receive milk fermented by L. casei Shirota, 108-9 CFU/mL, or placebo during the antimicrobial treatment. Stool samples were collected before the administration of fermented milk, during the antibiotic treatment, and one week after the end of treatment with the antimicrobial agent and the ingestion of fermented milk. The number of L. casei Shirota increased significantly (p<0.05) during the period in which fermented milk was ingested. An increase in the Pseudomonas aeruginosa (p<0.05) and Clostridium sp (p<0.05) count was observed in the microflora of the group that received placebo, mainly in the last period of antimicrobial therapy. The alteration of intestinal microflora as a result of antibiotic treatment was found by the reduction of acetate (p<0.05), butyrate (p<0.05) and formate (p<0.05). The variation in bacterial count proved not to be significant for the children under antimicrobial treatment who received fermented milk, while the placebo group showed imbalance of microflora with the result of the altered bacterial count. About 50% of the children still presented L. casei Shirota in their stools after interrupting the ingestion of fermented milk for one week. This study showed that ingestion of fermented milk containing L. casei Shirota promoted a much faster re-balance of the intestinal microflora when compared to the group that ingested a placebo.

Bordetella pertussis e Bordetella parapertussis são os principais agentes causadores da coqueluche no homem. O óxido nítrico é fundamental para o controle de diversos processos fisiopatológicos. Neste trabalho analisamos sinais moleculares envolvidos na produção de NO em macrófagos derivados de medula óssea murina (BMDMO) infectadas por Bpertussis e Bparapertussis. Nossos resultados mostraram que BMDMO de C57BL/6 estimulados com Bpertussis não sintetizaram níveis significativos de nitrito, ao contrário da infecção com Bparapertussis. BMDMO de C57BL/6 infectados por Bpertussis e Bparapertussis produziram níveis elevados de arginase e de TGFb e esta produção foi dependente de TLR4, porém a produção de NO pelos BMDMO de C3H/HeJ infectados com Bparapertussis foi independente deste receptor. A adição exógena de PT em BMDMO infectados com Bparapertussis reduziu a quantidade de NO sintetizada. Concluímos que TGFb e arginase contribuem para o controle da produção de NO durante a infecção in vitro de BMDMO com Bpertussis e este mecanismo depende de LPS envolvendo TLR4 e PT. / Bordetella pertussis and Bordetella parapertussis are the main etiologic causes of human whooping cough. Nitric oxide (NO) is crucial for several physiopathologic events. Herein we analyzed the molecular signals required for NO production by murine bone marrow-derived macrophages (BMDM) infected with Bpertussis or Bparapertussis. Our data show that BMDM obtained from C57Bl/6 mice was not able to produce measurable levels of nitrite when stimulated with Bpertussis while infection of these cells with Bparapertussis induced high levels of nitrite. Arginase and TLR4-dependent TGF-b were produced in response to infection with either Bpertussis or Bparapertussis. NO production by BMDM obtained from C3H/HeJ mice occurred after Bparapertussis infection in the absence of TLR4. Addition of pertussis toxin to the C57Bl/6 BMDM cultures infected with Bparapertussis decreased NO levels. In conclusion, TGF-b and arginase play a role controlling NO production by BMDM during in vitro infection by Bpertussis. This effect depends on the presence of LPS-TLR4 and PT signaling pathways.