A maior expectativa de vida dos pacientes com talassemia maior, as repetidas transfusões de concentrado de hemácias como parte do tratamento, podem ocasionar maior deposição de ferro nos órgãos, e consequentemente, as comorbidades. Dessa forma, dentre as comorbidades endócrinas, temos o diabetes mellitus como uma das principais, sendo necessário conhecer o panorama em nossa realidade. O estudo tem como objetivos determinar a prevalência do diagnóstico de diabetes em pacientes com talassemia maior, caracterizar e comparar os pacientes com talassemia maior, e diabetes mellitus, segundo as variáveis sociodemográficas e clínicas.Trata-se de um estudo descritivo e transversal, realizado em um centro de referência no tratamento de talassemia do interior paulista. A amostra foi constituída por 31 pacientes com talassemia maior. Para a coleta de dados utilizou-se um instrumento subdividido em duas partes. Os dados sociodemográficos e clínicos foram obtidos por meio de entrevista dirigida e os resultados de exames laboratoriais pelo prontuário eletrônico do paciente, no período de junho a agosto de 2015. Os dados foram digitados e importados para o programa SPSS for Windows, versão 17.0 e submetidos à análise estatística descritiva. O projeto foi aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa da Escola de Enfermagem de Ribeirão Preto da Universidade de São Paulo (CEP/EERP-USP), sob Protocolo nº 41912415.3.0000.5393. Dos 31 pacientes com talassemia maior, 5 (16,1%) tinham diabetes mellitus. Em relação as variáveis sociodemográficas, não houve diferenças na distribuição dos pacientes entre os sexos, a maioria eram solteiros e cursaram até o ensino médio completo. A idade variou de cinco a 48 anos, com média de 24,9 anos de idade, a maioria recebia até 10 salários mínimos, eram estudantes e possuíam carteira de trabalho assinada. No que tange às variáveis clínicas, temos que o tratamento utilizado predominante foi o quelante oral deferasirox, e naqueles pacientes com diabetes, além do deferasirox, a maioria utilizava a insulina. O esquema transfusional predominante foi o de 15 a 22 dias. O índice de massa corpórea foi classificado como eutrófico e a pressão arterial, considerada ótima para a maioria dos pacientes. Quanto aos achados dos exames laboratoriais, os pacientes com diabetes e talassemia apresentaram valores alterados de glicemia de jejum e transaminase, já os pacientes sem diabetes apresentaram valores alterados de ferritina sérica. No que se refere aos achados dos exames de imagem, nenhum paciente com diabetes e Talassemia maior apresentou massa óssea adequada, o que reforça a importância de seu monitoramento. Destaca-se o aumento de sobrecarga cardíaca para os pacientes com diabetes e talassemia. Para os pacientes com talassemia e sem diabetes, a maioria apresentou grave sobrecarga de ferro hepático na ressonância magnética do fígado, enquanto para a maioria dos pacientes com diabetes foi considerado normal. Dessa forma, conhecer as características clínicas dos pacientes com talassemia maior e diabetes permite subsidiar a assistência de enfermagem qualificada e contribuir com a saúde dos pacientes com condições crônicas. Contudo, os nossos achados corroboram com as taxas de prevalência de diabetes em pacientes com talassemia maior encontradas na literatura nacional e internacional / The longer life expectancy of patients with thalassemia major, repeated red blood cell transfusions as part of the treatment, may lead to increased iron deposition in the organs, and consequently, comorbidities. Thus, among the endocrine comorbidities, we have diabetes mellitus as one of the main ones, being necessary to know the panorama in our reality. The aim of the study was to determine the prevalence of diabetes in patients with thalassemia major and to characterize and compare patients with thalassemia major, and diabetes mellitus, according to sociodemographic and clinical variables.This is a descriptive and cross-sectional study, carried out in a reference center in thalassemia treatment of São Paulo countryside. The sample consisted of 31 patients with thalassemia major. For data collection, an instrument was divided into two parts. Sociodemographic and clinical data were obtained by means of a directed interview and the laboratory tests results by the patient\'s electronic record, from June to August 2015. Data were loaded into SPSS for Windows software, version 17.0 and submitted to descriptive statistical analysis. The project was approved by the Research Ethics Committee of the University of São Paulo at Ribeirão Preto College of Nursing (CEP / EERP-USP) under Protocol No. 41912415.3.0000.5393. Of the 31 patients with thalassemia major, 5 (16,1%) had diabetes mellitus. Regarding the sociodemographic variables, there were no differences in the distribution of the patients between the sexes, most of them were single and enrolled in high school. The age ranged from five to 48 years, with a mean of 24,9 years of age, the majority received up to 10 minimum wages, were students and had a work contract. Regarding the clinical variables, we have that the predominant treatment was the oral chelator deferasirox, and in those patients with diabetes, in addition to deferasirox, the majority used insulin. The predominant transfusion regimen was 15 to 22 days. Body mass index was classified as eutrophic and blood pressure was considered optimal for most patients. Regarding the laboratory findings, patients with diabetes and thalassemia had altered values of fasting glycemia and transaminase, whereas patients without diabetes had altered values of serum ferritin. Regarding imaging exams findings, no patient with diabetes and major thalassemia presented adequate bone mass, which reinforces the importance of their monitoring. The increase in cardiac overload for patients with diabetes and thalassemia stands out. For patients with thalassemia and without diabetes, the majority had severe hepatic iron overload in the magnetic resonance imaging of the liver, while for most patients with diabetes it was considered normal. Thus, knowing the clinical characteristics of patients with thalassemia major and diabetes allows subsidizing qualified nursing care and contributing to the health of patients with chronic conditions. However, our findings corroborate the prevalence rates of diabetes in patients with thalassemia major found in the national and international literature

Talassemias são as mais comuns desordens monogenéticas em humanos; são caracterizadas pela presença de anemia microcíticas e hipocrômicas que resultam da redução ou ausência na síntese de uma ou mais cadeias globínicas. No Brasil a beta-talassemia tem importante significado clínico e sua ocorrência pode ser explicada como conseqüência da grande mistura étnica. A beta-talassemia é extremamente heterogênea e mais de 200 mutações têm sido descritas causando diferentes graus de anemia. Essas mutações são regionalmente específicas e cada país possui seu grupo de alterações característico. No estado homozigoto são classificadas clinicamente como major e no estado heterozigoto como intermédia e minor. Os pacientes com talassemia intermédia podem não apresentar sintomas clínicos, mas constatam-se características laboratoriais específicas. A avaliação dos índices hematológicos, dosagens dos parâmetros bioquímicos e dos valores das hemoglobinas fetal e HbA2 em combinação com o entendimento das possíveis interações gênicas são os procedimentos recomendados para o diagnóstico laboratorial. O objetivo deste estudo foi determinar a presença de mutações em pacientes que utilizam a Divisão de Laboratório Central do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade São Paulo (DLC-HC-FMUSP) e que apresentavam perfil laboratorial sugestivo para beta-talassemia. Estudou-se a região do gene da globina em onde estão descritas as mutações mais freqüentes para nosso meio através da técnica de PCR, e posterior seqüenciamento para identificação das mutações. As mutações observadas na população avaliada (N=40), em ordem crescente de freqüência foram: Codon 39 (CT), IVS-I-110 (GA), IVS-I-1(GA), IVS-I-5 (GC), IVS-I-6 (TC), IVS-I-Exon-II (GA), Exon-II-IVS-II (GA), Stop Cd 6 (GT), Stop Cd15 (GA), Del C Cd 44 e 5UTR+20. Os primeiros quatro genótipos representaram 82,5% das mutações observadas neste trabalho. O uso combinado dos índices hematimétricos, parâmetros bioquímicos e avaliação das características morfológicas das hemácias demonstraram eficiência no rastreamento de pacientes portadores de beta-talassemia, assintomáticos A técnica do PCR e posterior processo de seqüenciamento demonstraram elevada eficiência na determinação das alterações moleculares no grupo de pacientes avaliados. / Thalassemias are the most common monogenic disorders in humans; are characterized by hypochromic and microcytic anemia arising from the reduction or absence in the synthesis of one or more chains globínicas. In Brazil, beta-thalassemia has important clinical significance and its occurrence can be explained as a result of the large ethnic mix. The beta-thalassemia is extremely heterogeneous and more than 200 mutations have been described causing varying degrees of anemia, these mutations are regionally specific and each country has its characteristic group of amendments. In the homozygous state are clinically classified as major and the heterozygous state as intermediate and minor. Patients with thalassemia can not present interim clinical symptoms, but have characteristics specific laboratory. The evaluation of hematologic indices, strengths and biochemical parameters of fetal hemoglobin and HbA2 values in combination with an understanding of possible interactions genes, are the recommended procedures for laboratory diagnosis. The purpose of this study was to determine the presence of mutations in patients who use the Division of Central Laboratory of the Hospital of the Faculty of Medicine of the University Sao Paulo (DLC-HCFMUSP) who presented suggestive profile laboratory for beta-thalassemia. It was studied the region of the gene of beta globin where they are frequently described the changes to our region through the PCR technique, and subsequent sequencing to identify the mutations. Of the 40 patients evaluated were found the following changes: Codon 39 (CT), IVS-I-110 (GA), IVS-I-1 (GA), IVS-I-5 (GC), IVS-I-6 (TC), IVS-I-Exon-II (GA), Exon-II-IVS-II (GA), Stop Cd 6 (GT), Stop Cd15 (G A), Del Cd 44 and 5UTR+20. The first four genotypes accounted for 82.5% of mutations observed in this study. The combined use of hematologic indices, biochemical parameters and evaluation of morphological characteristics of red blood cells demonstrated efficiency in the tracking of patients with beta- thalassemia, asymptomatic. The technique of PCR and subsequent process of sequencing demonstrated high efficiency in determining the molecular changes in the group of patients evaluated.

A maior expectativa de vida dos pacientes com talassemia maior, as repetidas transfusões de concentrado de hemácias como parte do tratamento, podem ocasionar maior deposição de ferro nos órgãos, e consequentemente, as comorbidades. Dessa forma, dentre as comorbidades endócrinas, temos o diabetes mellitus como uma das principais, sendo necessário conhecer o panorama em nossa realidade. O estudo tem como objetivos determinar a prevalência do diagnóstico de diabetes em pacientes com talassemia maior, caracterizar e comparar os pacientes com talassemia maior, e diabetes mellitus, segundo as variáveis sociodemográficas e clínicas.Trata-se de um estudo descritivo e transversal, realizado em um centro de referência no tratamento de talassemia do interior paulista. A amostra foi constituída por 31 pacientes com talassemia maior. Para a coleta de dados utilizou-se um instrumento subdividido em duas partes. Os dados sociodemográficos e clínicos foram obtidos por meio de entrevista dirigida e os resultados de exames laboratoriais pelo prontuário eletrônico do paciente, no período de junho a agosto de 2015. Os dados foram digitados e importados para o programa SPSS for Windows, versão 17.0 e submetidos à análise estatística descritiva. O projeto foi aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa da Escola de Enfermagem de Ribeirão Preto da Universidade de São Paulo (CEP/EERP-USP), sob Protocolo nº 41912415.3.0000.5393. Dos 31 pacientes com talassemia maior, 5 (16,1%) tinham diabetes mellitus. Em relação as variáveis sociodemográficas, não houve diferenças na distribuição dos pacientes entre os sexos, a maioria eram solteiros e cursaram até o ensino médio completo. A idade variou de cinco a 48 anos, com média de 24,9 anos de idade, a maioria recebia até 10 salários mínimos, eram estudantes e possuíam carteira de trabalho assinada. No que tange às variáveis clínicas, temos que o tratamento utilizado predominante foi o quelante oral deferasirox, e naqueles pacientes com diabetes, além do deferasirox, a maioria utilizava a insulina. O esquema transfusional predominante foi o de 15 a 22 dias. O índice de massa corpórea foi classificado como eutrófico e a pressão arterial, considerada ótima para a maioria dos pacientes. Quanto aos achados dos exames laboratoriais, os pacientes com diabetes e talassemia apresentaram valores alterados de glicemia de jejum e transaminase, já os pacientes sem diabetes apresentaram valores alterados de ferritina sérica. No que se refere aos achados dos exames de imagem, nenhum paciente com diabetes e Talassemia maior apresentou massa óssea adequada, o que reforça a importância de seu monitoramento. Destaca-se o aumento de sobrecarga cardíaca para os pacientes com diabetes e talassemia. Para os pacientes com talassemia e sem diabetes, a maioria apresentou grave sobrecarga de ferro hepático na ressonância magnética do fígado, enquanto para a maioria dos pacientes com diabetes foi considerado normal. Dessa forma, conhecer as características clínicas dos pacientes com talassemia maior e diabetes permite subsidiar a assistência de enfermagem qualificada e contribuir com a saúde dos pacientes com condições crônicas. Contudo, os nossos achados corroboram com as taxas de prevalência de diabetes em pacientes com talassemia maior encontradas na literatura nacional e internacional / The longer life expectancy of patients with thalassemia major, repeated red blood cell transfusions as part of the treatment, may lead to increased iron deposition in the organs, and consequently, comorbidities. Thus, among the endocrine comorbidities, we have diabetes mellitus as one of the main ones, being necessary to know the panorama in our reality. The aim of the study was to determine the prevalence of diabetes in patients with thalassemia major and to characterize and compare patients with thalassemia major, and diabetes mellitus, according to sociodemographic and clinical variables.This is a descriptive and cross-sectional study, carried out in a reference center in thalassemia treatment of São Paulo countryside. The sample consisted of 31 patients with thalassemia major. For data collection, an instrument was divided into two parts. Sociodemographic and clinical data were obtained by means of a directed interview and the laboratory tests results by the patient\'s electronic record, from June to August 2015. Data were loaded into SPSS for Windows software, version 17.0 and submitted to descriptive statistical analysis. The project was approved by the Research Ethics Committee of the University of São Paulo at Ribeirão Preto College of Nursing (CEP / EERP-USP) under Protocol No. 41912415.3.0000.5393. Of the 31 patients with thalassemia major, 5 (16,1%) had diabetes mellitus. Regarding the sociodemographic variables, there were no differences in the distribution of the patients between the sexes, most of them were single and enrolled in high school. The age ranged from five to 48 years, with a mean of 24,9 years of age, the majority received up to 10 minimum wages, were students and had a work contract. Regarding the clinical variables, we have that the predominant treatment was the oral chelator deferasirox, and in those patients with diabetes, in addition to deferasirox, the majority used insulin. The predominant transfusion regimen was 15 to 22 days. Body mass index was classified as eutrophic and blood pressure was considered optimal for most patients. Regarding the laboratory findings, patients with diabetes and thalassemia had altered values of fasting glycemia and transaminase, whereas patients without diabetes had altered values of serum ferritin. Regarding imaging exams findings, no patient with diabetes and major thalassemia presented adequate bone mass, which reinforces the importance of their monitoring. The increase in cardiac overload for patients with diabetes and thalassemia stands out. For patients with thalassemia and without diabetes, the majority had severe hepatic iron overload in the magnetic resonance imaging of the liver, while for most patients with diabetes it was considered normal. Thus, knowing the clinical characteristics of patients with thalassemia major and diabetes allows subsidizing qualified nursing care and contributing to the health of patients with chronic conditions. However, our findings corroborate the prevalence rates of diabetes in patients with thalassemia major found in the national and international literature

Η λεπτίνη, μια ορμόνη που ρυθμίζει την όρεξη έχει βρεθεί να ενισxύει την τύπου 1 ανοσολογική απόκριση και να αναστέλλει την παροδική ανοσοπάρεση που παρατηρείται στα ζώα με έλλειψη λεπτίνης ή στους ανθρώπους που υποφέρουν από εγγενή ή φυσιολογική έλλειψη λεπτίνης. Οι ασθενείς που υποφέρουν από β-θαλασσαιμία έχει παρατηρηθεί ότι έχουν έλλειψη λεπτίνης, ένα φαινόμενο που αποδίδεται κυρίως στην υπερφόρτωση με σίδηρο και τις πολλαπλές ενδοκρινοπάθειες που συνοδεύουν αυτή τη νόσο. Ο σκοπός της μελέτης μας ήταν να καθοριστούν τα επίπεδα λεπτίνης και φερριτίνης του ορού των ασθενών που υποφέρουν από μείζονα β-θαλασσαιμία και να διερευνηθεί η επίδραση της λεπτίνης στην Th1 (IL-2, IFN-γ ) και Th2 (IL-4, IL-10) έκκριση κυτταροκινών από περιφερικά Τ κύτταρα που απομονώθηκαν από ασθενείς και controls. Τα δείγματα αίματος προήλθαν από143 ασθενείς και 58 υγιείς κατά αντιστοιχία ηλικίας και ΒΜΙ (δείκτη μάζας σώματος). Από όλους τους ασθενείς το μόνο γκρουπ που έδειξε μια ασθενή θετική συσχέτιση μεταξύ ΒΜΙ και λεπτίνης ήταν αυτό των ενήλικων γυναικών που λάμβαναν θεραπεία ορμονικής υποκατάστασης. Μια αρνητική συσχέτιση λεπτίνης και φεριττίνης παρατηρήθηκε σε όλους τους ασθενείς. Η ανασυνδυασμένη λεπτίνη όταν προστέθηκε στα Τ κύτταρα των controls δεν επηρέασε σημαντικά την έκκριση της IFN-, IL-2 ή της IL-4 ενώ μείωσε ελαφρώς την έκκριση της IL-10. Στα Τ-κύτταρα των ασθενών η ανσυνδυασμένη λεπτίνη οδήγησε στην έκκριση μόνο της IFN-γ. Οι ομόζυγοι θαλασσαιμικοί ασθενείς λαμβάνουν πολλαπλές μεταγγίσεις και χρειάζονται μια ισχυρή Th1 ανσολογική απόκριση για να χειριστούν αποτελεσματικά την συνεχή έκθεση σε παθογόνα. Η ικανότητα της λεπτίνης να αλλάζει την έκφραση των κυτταροκινών στους ασθενείς με θαλασσαιμία προς έναν ευνοϊκό γι’ αυτούς τύπου 1 φαινότυπο θα μπορούσε να ληφθεί υπόψη για τον σχεδιασμό νέων θεραπευτικών σχημάτων. / Leptin, a hormone that regulates appetite, has been shown to enhance the type 1 immune response and reverse the partial immunoparesis observed in leptin-deficient animals or humans suffering from congenital or physiological leptin deficiency. Patients suffering from -thalassemia have also been reported to be leptin deficient, a phenomenon attributed mainly to the iron overload and multiple endocrinopathies that accompany this disease. The purpose of our study was to determine the serum leptin and ferritin levels of patients suffering from -thalassemia major and investigate the effect of leptin on Th1 (IL-2, IFN- ) and Th2 (IL-4, IL-10) cytokine secretion patterns of peripheral blood T-cells isolated from thalassemic patients and controls. Blood samples were drawn from 143 patients and 58 age- and Body Mass Index-matched controls. From all the patients, the only group that showed a week positive correlation between BMI and leptin values was this of adult females that were treated with sex hormones. A negative correlation of leptin and ferritin levels was observed in all patients. Recombinant leptin (rleptin) added alone to control T-cells did not significantly influence IFN-, IL-2 or IL-4 production whereas it weakly induced IL-10 secretion. In patients’ T-cells, rleptin induced IFN- secretion only. Homozygous thalassemic patients receive multiple blood transfusions and need a strong Th1 immune response to cope with the resulting exposure to pathogens. Leptin’s ability to skew the cytokine secretion pattern in thalassemic patients towards a beneficial for them Th1 phenotype, could be taken into consideration for the design of new therapeutics.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:05Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2003-02-19Bitstream added on 2014-06-13T18:29:24Z : No. of bitstreams: 1 carvalho_lb_me_sjrp.pdf: 1246135 bytes, checksum: f9e7b5e083804e53df6d7ddd95e67ddc (MD5) / A talassemia beta constitui um grupo heterogêneo de distúrbios genéticos da síntese de hemoglobina sendo uma das doenças monogênicas mais comums, identificada e estudada por várias décadas. É originária da região do Mediterrâneo porém, atualmente apresenta-se amplamente distribuída pelo mundo devido ao fluxo gênico pela migração das populações. No Brasil, os tipos de talassemia mais prevalentes são as talassemias alfa e beta e apresentam número variável de indivíduos portadores devido ao alto grau de miscigenação da população. As formas graves de talassemia beta são facilmente diagnosticadas entretanto, as formas mais suaves muitas vezes são interpretadas e tratadas como anemia ferropriva. O presente estudo teve como objetivo caracterizar as formas talassêmicas do tipo beta e verificar os interferentes na expressão do fenótipo como a possível co-herança com hemocromatose hereditária. Através da associação de análise hematimétrica, metodologias clássicas e análise por HPLC analisamos 332 amostras de sangue com suspeita de talassemia beta. Um total de 70 amostras foram identificadas como portadores de hemoglobinas normais (AA), 145 portadores de talassemia beta heterozigota (BTH) e 117 portadores de talassemia alfa/beta (ABT). A análise estatística por regressão linear entre as metodologias clássicas e HPLC para quantificação de hemoglobina A2 e Fetal para os três grupos foram estatisticamente significativas. A análise molecular por PCR-ASO para identificação dos mutantes para hemocromatose hereditária mostraram 11,76% de mutação C282Y e 70,58% para H63D no grupo de talassemia beta e 25% de mutação C282Y e 75% H63D para o grupo de talassemia alfa/beta. Esses resultados evidenciam a necessidade da associação de metodologias para o correto diagnóstico da talassemia beta, bem como caracterização molecular para hemocromatose... / The beta-thalassemia constitutes a heterogeneous group of genetic disorders of hemoglobin synthesis. It has been one of the most common monogenic diseases identified and studied for many decades. Its origins are from Mediterranean region, although nowadays it is spread for the whole world due to gene flow of migration populations. In Brazil, the most prevalent types of thalassemia are the alpha-thalassemia and beta-thalassemia. They present a variable number of individual carriers due to high degree of miscigenation. The serious forms of beta-thalassemia are easily identified, but the milder forms are many times diagnosed and treated as iron deficiency anemia. The objective of the present study was to characterize the thalassemic forms and verify the interferents in the expression of the phenotype as the possible co-inheritance with hereditary hemochromatosis. It was analysed, utilizing hematimetric analysis, classic methodologies and HPLC analysis, 332 blood samples suspect of beta-thalessemia. The total of 70 samples were identified as carriers of normal hemoglobins (AA), 145 carriers of beta-thalassemia heterozigote (BTH) and 117 carriers of alpha/beta-thalassemia (ABT). The statistic analysis by linear regression between classic methodologies and HPLC for quantification of hemoglobin A2 and Fetal hemoglobin were statistically differents and significants. The molecular analysis by PCR-ASO to identify the mutants with hereditary hemochromatosis showed 11,76% of mutation C282Y and 70,58% to H63D in the beta-thalassemia group and 25% of mutation C282Y and 75% of H63D in the alpha/beta- thalassemia group. These results prove the necessity of association of methodologies in order to achieve the correct diagnosis of beta-thalassemia, as well as the molecular characterization of hemochromatosis, due to the fact of its possible co-inheritance with beta-thalassemia in the vast genotypic diversity found in Brazil.

Talassemias são as mais comuns desordens monogenéticas em humanos; são caracterizadas pela presença de anemia microcíticas e hipocrômicas que resultam da redução ou ausência na síntese de uma ou mais cadeias globínicas. No Brasil a beta-talassemia tem importante significado clínico e sua ocorrência pode ser explicada como conseqüência da grande mistura étnica. A beta-talassemia é extremamente heterogênea e mais de 200 mutações têm sido descritas causando diferentes graus de anemia. Essas mutações são regionalmente específicas e cada país possui seu grupo de alterações característico. No estado homozigoto são classificadas clinicamente como major e no estado heterozigoto como intermédia e minor. Os pacientes com talassemia intermédia podem não apresentar sintomas clínicos, mas constatam-se características laboratoriais específicas. A avaliação dos índices hematológicos, dosagens dos parâmetros bioquímicos e dos valores das hemoglobinas fetal e HbA2 em combinação com o entendimento das possíveis interações gênicas são os procedimentos recomendados para o diagnóstico laboratorial. O objetivo deste estudo foi determinar a presença de mutações em pacientes que utilizam a Divisão de Laboratório Central do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade São Paulo (DLC-HC-FMUSP) e que apresentavam perfil laboratorial sugestivo para beta-talassemia. Estudou-se a região do gene da globina em onde estão descritas as mutações mais freqüentes para nosso meio através da técnica de PCR, e posterior seqüenciamento para identificação das mutações. As mutações observadas na população avaliada (N=40), em ordem crescente de freqüência foram: Codon 39 (CT), IVS-I-110 (GA), IVS-I-1(GA), IVS-I-5 (GC), IVS-I-6 (TC), IVS-I-Exon-II (GA), Exon-II-IVS-II (GA), Stop Cd 6 (GT), Stop Cd15 (GA), Del C Cd 44 e 5UTR+20. Os primeiros quatro genótipos representaram 82,5% das mutações observadas neste trabalho. O uso combinado dos índices hematimétricos, parâmetros bioquímicos e avaliação das características morfológicas das hemácias demonstraram eficiência no rastreamento de pacientes portadores de beta-talassemia, assintomáticos A técnica do PCR e posterior processo de seqüenciamento demonstraram elevada eficiência na determinação das alterações moleculares no grupo de pacientes avaliados. / Thalassemias are the most common monogenic disorders in humans; are characterized by hypochromic and microcytic anemia arising from the reduction or absence in the synthesis of one or more chains globínicas. In Brazil, beta-thalassemia has important clinical significance and its occurrence can be explained as a result of the large ethnic mix. The beta-thalassemia is extremely heterogeneous and more than 200 mutations have been described causing varying degrees of anemia, these mutations are regionally specific and each country has its characteristic group of amendments. In the homozygous state are clinically classified as major and the heterozygous state as intermediate and minor. Patients with thalassemia can not present interim clinical symptoms, but have characteristics specific laboratory. The evaluation of hematologic indices, strengths and biochemical parameters of fetal hemoglobin and HbA2 values in combination with an understanding of possible interactions genes, are the recommended procedures for laboratory diagnosis. The purpose of this study was to determine the presence of mutations in patients who use the Division of Central Laboratory of the Hospital of the Faculty of Medicine of the University Sao Paulo (DLC-HCFMUSP) who presented suggestive profile laboratory for beta-thalassemia. It was studied the region of the gene of beta globin where they are frequently described the changes to our region through the PCR technique, and subsequent sequencing to identify the mutations. Of the 40 patients evaluated were found the following changes: Codon 39 (CT), IVS-I-110 (GA), IVS-I-1 (GA), IVS-I-5 (GC), IVS-I-6 (TC), IVS-I-Exon-II (GA), Exon-II-IVS-II (GA), Stop Cd 6 (GT), Stop Cd15 (G A), Del Cd 44 and 5UTR+20. The first four genotypes accounted for 82.5% of mutations observed in this study. The combined use of hematologic indices, biochemical parameters and evaluation of morphological characteristics of red blood cells demonstrated efficiency in the tracking of patients with beta- thalassemia, asymptomatic. The technique of PCR and subsequent process of sequencing demonstrated high efficiency in determining the molecular changes in the group of patients evaluated.

Orientador: Fernando Ferreira Costa / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-13T14:17:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bezerra_MarcosAndreCavalcanti_D.pdf: 919225 bytes, checksum: 5524005c5d425fe7e16e9c36cfd7275b (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: O estado inflamatório crônico que ocorre na doença falciforme (DF) é decorrente de diversos fatores que se interligam e se retroalimentam, formando um ciclo inflamatório permanente. Estudos prévios sobre as propriedades adesivas e funcionais das células são restritos à forma homozigota do gene da HbS (SS). No entanto, trabalhos que avaliem essas características celulares, que possam contribuir para o esclarecimento da heterogeneidade clínica em outros grupos de DF e talassemia intermediária (TI), são escassos na literatura. O objetivo desse trabalho foi avaliar a capacidade adesiva de células vermelhas, neutrófilos e plaquetas, quimiotaxia dos neutrófilos, os níveis plasmáticos das citocinas inflamatórias e o stress oxidativo na DF e ß-TI. Dessa maneira foram selecionados pacientes com DF: SS (n=20), SC (n=20), 3 grupos com S/ß talassemia - S/ß-IVS-I-6 (T->C) (n=17), S/ß-IVS-I-5 (G->C) (n=16), S/ß-Códon39 (C??T) (n=12) - e TI homozigotos para a mutação IVS-I-6 (T->C) (n=20), acompanhados na Fundação HEMOPE. As técnicas utilizadas no desenvolvimento desse estudo foram: ensaio de quimiotaxia (ChemoTx) para avaliação da capacidade migratória dos neutrófilos, adesão estática para determinação da adesão basal das células, citometria de fluxo para avaliar a produção de ROS e a expressão de moléculas de adesão, e ELISA para determinar a atividade da superóxido dismutase (SOD) e a dosagem das citocinas. Para avaliação de nossos resultados, todos os grupos de pacientes foram comparados ao grupo controle AA: a adesão de neutrófilos e plaquetas mostrou-se significativamente aumentada em todos dos grupos de DF; somente os grupos SS e SC apresentaram capacidade quimiotática significativamente aumentada, assim como a adesão de células vermelhas e a expressão das moléculas de adesão CD36 e CD49d. Os níveis plasmáticos das citocinas IL1-ß, IL-6, IL-8 e TNF-a mostraram-se significativamente aumentados no grupo SS, e nos demais grupos de DF apresentaram uma distribuição heterogênea. Observamos um aumento significativo na produção de ROS em células vermelhas, mononucleares e neutrófilos de todos os grupos de DF, exceto para os grupos S/ß nas células vermelhas. Além disso, a atividade plasmática da SOD mostrou-se reduzida nos grupos SS, SC e S/ß-Cd39. A adesão dos neutrófilos, células vermelhas e plaquetas foi significativamente maior nos pacientes com TI, assim como a expressão das moléculas CD36 e CD49d nas células vermelhas e a capacidade quimiotática dos neutrófilos. Nesses pacientes, a produção de ROS e os níveis plasmáticos das citocinas foram significativamente aumentados, enquanto que a atividade enzimática da SOD foi significativamente reduzida. Apesar da doença SC possuir uma clínica mais branda, nossos dados sugerem que neutrófilos, glóbulos vermelhos e plaquetas desses pacientes possuem características adesivas e quimiotáticas semelhantes às encontradas nas células de pacientes com AF. Além disso, nossos resultados sugerem que quanto maiores os níveis de HbA na S/ß talassemia, menor a adesão de neutrófilos, células vermelhas e plaquetas, podendo explicar as diferenças clínicas encontradas nesses pacientes em função do genótipo. É possível que o aumento da aderência, da capacidade quimiotática, da produção de ROS, das citocinas e diminuição do mecanismo antioxidante, observados neste estudo, contribuam nas complicações clínicas encontradas na ß-TI, tais como hipertensão pulmonar e úlceras de perna. Estudos adicionais podem contribuir para o entendimento das diferenças na apresentação clínica desses pacientes. / Abstract: The chronic inflammatory state that occurs in sickle cell disease (SCD) is due to several factors that are interlinked and feeds back to a permanent inflammatory cycle. Previous studies about the adhesive properties and functional cells are restricted to the homozygous form of the HbS gene (SS). However, studies that assess the cellular characteristics that may contribute to the clarification of clinical heterogeneity in other groups of SCD and thalassemia intermedia (TI), are scarce in the literature. The aim of this study was to evaluate the adhesive properties of red blood cells (RBC), platelets and neutrophils (NS), NS chemotaxis, inflammatory cytokine plasma levels and oxidative stress in SCD and ß-TI patients. Thus, we selected patients with different SCD genotypes: SS (n=20), SC (n=20), three groups of HbS/ß thalassemia - HbS/ß39 (C->T) (n=12), HbS/IVSI- 5 (G->C) (n=16), and HbS/IVS-I-6 (T->C) (n=17) - and patients with homozygous thalassemia intermedia IVS-I-6 (T->C) - followed regularly at the Fundação HEMOPE - Brazil. The techniques used in the development of this study were: chemotaxis assay (ChemoTx) to evaluate the migratory ability of neutrophils, basal adhesion was compared using static adhesion assays, flow cytometry to assess the production of ROS and expression of adhesion molecules, and ELISA to determine the superoxide dismutase (SOD) activity and cytokine plasma levels. For evaluation of our results, all groups of patients were compared with the AA control group: the neutrophil and platelet adhesions were significantly increased in all groups of SCD, only the SS and SC groups showed significant increase in the chemotactic ability, as well as the RBC adhesion and the expression of adhesion molecules CD36 and CD49d. All the SCD groups investigated showed an increase in IL-6 plasma levels. IL1-ß levels were significantly higher in the S/ß-IVS-I-5 (G??C), S/ß-Cd39 and SS groups. Plasma levels of IL-8 were increased only in the SS and SC groups, however TNF-a levels were significantly higher in SS and the three groups with HbS-ß thalassemia. NS and mononuclear cell ROS production was significantly increased in all SCD groups, however red blood ROS production was higher only in the SS and SC groups. Moreover, the SOD plasma activity was shown to be reduced in groups SS, SC and S/ß-Cd39. The NS, RBC and platelets adhesion was significantly higher in TI patients, as well as the expression of molecules CD36 and CD49d in RBC and chemotactic ability of NS. In these patients, the ROS production and cytokines plasma levels were significantly increased, while SOD plasma activity was significantly reduced. Although SC disease has a milder clinical manifestations, our data suggest that NS, RBC and platelets of these patients have chemotactic and adhesive characteristics similar to those found in cells of patients with SS. Moreover, our results suggest that the higher levels of HbA in S/ß thalassemia reduce the NS, RBC and platelets adhesion and may explain the clinical differences found in these patients, according to genotype. It is possible that the increase in the cell adherence, chemotactic capacity, ROS production, of cytokines levels and the reduction in antioxidant mechanism, observed in this study, contribute to several clinical complications of ß-TI, such as pulmonary hypertension and leg ulcers. Further studies may contribute to our understanding of the differences in the clinical presentation of these patients. / Doutorado / Medicina Experimental / Doutor em Fisiopatologia Medica

β-thalassemia is an autosomal recessive blood disease caused by mutations in β-globin genes that either reduce or altogether abolish β-globin chain synthesis. Normally, two β-globin chains would combine with two α-globin chains and a heme group to form hemoglobin. Because α-globin chain synthesis is unaffected in β-thalassemia patients, the unpaired α-globin chains accumulate and precipitate. The reduced formation of hemoglobin and accumulation of unpaired α-globin chains are the two fundamental molecular pathologies. In the most serious cases of the disease, the resulting complications develop before two years of age. Most often, these include severe anemia, pallor, jaundice, abdominal enlargement, and distinct craniofacial features. If left untreated, the disease is fatal before the age of three in the most serious cases. Each year, more than 40,000 births, mostly in Southeast Asia, Middle East, or Africa, are affected with β-thalassemia. With increased migration, however, β-thalassemia is becoming more common in Europe and North America. Currently, the most widespread treatment for the disease is transfusions and iron chelation therapy, and the only cure is hematopoietic stem cell transplantation. In recent years, however, multiple treatments and potential cures such as fetal hemoglobin inducers and gene therapy have shown promise. By analyzing the cost-efficiency, viability, and therapeutic benefits of current and future treatments, it can be seen that a combination of fetal hemoglobin inducers, transfusions, and iron chelation therapy will have the greatest impact for the vast majority of β-thalassemia patients.

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Beta-talassemia é uma das doenças genéticas mais comuns no mundo, com graus variados de anemia crônica, tratados por transfusões sanguíneas rotineiras nos casos mais graves. A sobrecarga de ferro acentuada a que esses pacientes são submetidos é a principal responsável pela morbimortalidade, sendo o acúmulo de ferro no miocárdio e a doença cardíaca disso decorrente, a principal causa de morte nessa população. A ressonância magnética cardíaca (RMC) é ferramenta central no acompanhamento desses pacientes, utilizando-se da técnica T2*, capaz de determinar a presença e grau da deposição de ferro no miocárdio, modificando o tratamento da terapia quelante de ferro (TQF). Além disso, outros parâmetros volumétricos e funcionais obtidos no exame de RMC podem estar alterados nesses pacientes. Até a atualidade, inexistem estudos nacionais descrevendo uma população de pacientes beta-talassêmicos pelos parâmetros da RMC. Objetivos: 1. Caracterizar a partir dos diversos parâmetros dos exames de RMC, a população dos pacientes talassêmicos acompanhados no Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto. 2. Avaliar o impacto dos diversos parâmetros da RMC com informações clinicas como mudança terapêutica, ocorrência de insuficiência cardíaca e óbito. Métodos: foram avaliados 44 pacientes com diagnóstico de beta-talassemia em seguimento no serviço de hematologia, para os quais foram solicitados exames de RMC na rotina clínica. Os exames incluíram sequências cine SSFP (steady state free precession) nos diversos planos cardíacos, incluindo uma sequência do eixo curto de ambos os ventrículos, esta utilizada para as medidas de volumes e função ventriculares. A sequência T2* utilizada foi gradiente eco com pré-pulso de saturação do sangue, com aquisição de 9 ecos consecutivos em apenas uma apneia. Sequência semelhante foi obtida para cálculo do T2* hepático. Foi feita revisão dos prontuários dos pacientes para avaliação dos dados clínicos. Resultados: 44 pacientes foram avaliados (25 do sexo masculino 56,8 %), com idade de 23,1±10,3 anos e diagnóstico de beta-talassemia maior em 30 casos (68,2 %) e talassemia intermedia em 14 casos (31,8 %). Foram descritos os volumes, massa e função para ambos os ventrículos, bem como a distribuição da medida do T2* miocárdico. Não foram observadas diferenças desses parâmetros entre os diferentes grupos de impregnação miocárdica pelo T2*. O seguimento médio do estudo foi de 4,0 (±1,1) anos com 4,7 (±1,6) exames por paciente. Foram identificados cinco pacientes com doença cardíaca e dois óbitos. Esses pacientes apresentaram redução significativa do T2* miocárdico, da fração de ejeção do ventrículo direito (VD), massa ventricular direita e esquerda e do volume sistólico final do VD, quando comparados aos indivíduos sem acometimento cardíaco reportado. Conclusão: Caracterizou-se a população de pacientes beta-talassêmicos acompanhados nesta instituição, em relação aos diversos parâmetros da RMC, salientando-se o impacto da introdução do método na mudança terapêutica. A medida do T2* miocárdico está correlacionada ao desenvolvimento de cardiopatia e pior evolução clínica, incluindo óbito. Acometimento do VD pode ser indicador precoce da impregnação miocárdica. / Beta-thalassemia is one of the most common genetic disorders worldwide, with different degrees of chronic anemia, treated with routine blood transfusions in severe cases. Morbidity and mortality is mainly related to the chronic iron overload and iron burden these patients endure. Myocardial iron overload and the development of cardiac disease remain the main cause of death for this population. Cardiac magnetic resonance (CMR) plays a central role in patient management, utilizing T2* sequences, which allows for detection and quantification of myocardial iron deposits, thus prompting changes in iron chelation therapy (ICT). Besides, there are other significant CMR volumetric and functional parameters to present abnormalities in these patients. To the present date, no national data has been published, describing a beta-thalassemia patient population from the standpoint of CMR parameters. Objectives: 1. To characterize, from the different CMR parameters, the beta-thalassemia patient population followed at a Brazilian tertiary hospital. 2. To evaluate the impact of these different CMR parameters, in relation to clinical data, such as therapeutic change, cardiac disease and death. Methods: 44 beta-thalassemia patients followed by the hematology service of this institution were evaluated, to whom CMR exams were performed in routine clinical practice. CMR exams included SSFP (steady state free precession) cine images through the different cardiac planes, including a short axis stack through both ventricles, used to calculate ventricular volumes and function. A gradient echo sequence with a dark blood pre-pulse saturation was used to calculate myocardial T2* values, with 9 consecutive echo times acquisition in one breath hold. A similar sequence was used to determine liver T2* values. Medical records were reviewed for clinical data. Results: 44 patients were evaluated (25 males, 56.8 %), with a mean age of 23,1 (±10,3) years, and diagnosis of betathalassemia major in 30 patients (68,2 %) and beta-thalassemia intermedia in 14 (31,8 %). Ventricular volumes, mass and function were described, as well as myocardial T2* distribution. There were no statistical difference observed among the different CMR parameters and the myocardial T2* degrees. Mean follow up was 4,0 (±1,1) years, with 4,7 (±1,6) exams per patient. Five patients with cardiac disease were identified with two deaths during observation. These patients showed a significantly reduced myocardial T2* and RVEF, and an elevated ventricular mass, for both ventricles, and final systolic right ventricular volume, when compared to patients without cardiac disease. Conclusion: A betathalassemia patient population was characterized through the different CMR parameters, highlighting the impact of CMR introduction to treatment decision. Myocardial T2* is related to cardiac disease development, clinical worsening and death. Right ventricular functional worsening could be an early sign of myocardial iron involvement.