Neste trabalho foi desenvolvida uma metodologia para a determinação da capacidade anti-radicalar de substâncias hidrofílicas e lipofílicas baseada na quimiluminescência do luminol em meio micelar. A reação de luminol, hemina e peróxido de hidrogênio foi estudada na presença de tensoativos carregados (CTAB/CTAC e SDS). Variou-se independentemente a concentração de cada reagente de forma a avaliar seu papel sobre a intensidade inicial de emissão (I0), que é proporcional à velocidade inicial da reação. Em solução aquosa de SDS, a I0 apresentou correlação linear com a concentração de H2O2 entre 5,0 10-6 e 6,0 10-5 mol/L e com a concentração de hemina no intervalo de 8,0 10-9 a 4,0 10-7 mol/L. O aumento da concentração de luminol no intervalo de 5,0 10-7 a 1,0 10-3 provocou aumento na I0 até 5,0 10-5 mol/L, permanecendo constante para concentrações maiores. Na presença de CTAB, o valor de I0 variou linearmente com a concentração de H2O2 no intervalo estudado (2,0 10-5 a 6,7 10-4 mol/L). A I0 aumentou com o aumento da concentração da hemina entre 8,0 10-8 e 8,0 10-6 mol/L. A variação da concentração de luminol de 5,0 10-7 a 5,0 10-5 também provocou aumento na I0, a qual ficou constante para concentrações maiores. Para este tensoativo foram realizadas também medidas de cmc nas condições de reação (tampão fosfato pH 11,6 e µ = 0,1), obtendo-se um valor de 2 10-4 mol/L, cinco vezes menor do que a cmc em água. As mudanças espectrais de hemina e luminol em diferentes concentrações de CTAB foram avaliadas, obtendo-se evidências da interação destes reagentes com o tensoativo. Destes estudos, foi possível compreender melhor o comportamento do sistema e foram encontradas condições nas quais se obtêm decaimento lento da intensidade de emissão e I0 alto. Estas condições são ideais para a realização de um ensaio de determinação da capacidade anti-radicalar. O efeito do antioxidante trolox, utilizado como padrão, foi avaliado nestas condições nos sistemas baseados nos três tensoativos. Em todos os casos, observou-se correlação linear entre a concentração de trolox e a área suprimida na cinética de emissão, a qual é proporcional ao número de radicais seqüestrados pelo antioxidante. Os limites de detecção para trolox ficaram abaixo de 1,0 10-7 mol/L, e a faixa de linearidade é de no mínimo uma ordem de grandeza (não foram testadas concentrações superiores a 2,0 10-6 mol/L). No meio de reação com CTAB foram determinadas as capacidades anti-radicalares (n) dos seguintes antioxidantes: vitamina E (n=3,5 ± 0,1), rutina (n=4,0 ± 0,2), quercetina (n=3,8 ± 0,4) e ácido úrico (n=1,3 ± 0,1). Os valores de n determinados com este método foram muito similares com aqueles medidos utilizando-se o ensaio com o radical estável DPPH. Portanto, o ensaio desenvolvido com luminol em meio micelar se mostrou adequado para testar tanto substâncias hidrossolúveis como lipossolúveis. Foram testadas condições para a realização de ensaios consecutivos com injeções repetidas de várias alíquotas de antioxidante na presença de CTAB. Os valores encontrados com o ensaio realizado desta forma foram iguais aos obtidos com o ensaio onde as injeções são feitas individualmente. Este método permite automação e resulta na economia de reagentes e redução do tempo de ensaio / In this work, a methodology to evaluate the anti-radical capacity of hydrophilic and lipophilic compounds based on luminol chemiluminescence in micellar media was developed. The reaction of luminol, hemin and hydrogen peroxide was studied in the presence of charged surfactants (CTAB/CTAC and SDS). The concentration of each reagent was independently varied in order to evaluate its influence on the initial emission intensity (I0), which is proportional to the initial reaction rate. In aqueous SDS solution, I0 showed a linear correlation with the H2O2 concentration between 5,0 10-6 and 6,0 10-5 mol/L, and with the hemin concentration between 8,0 10-9 and 4,0 10-7 mol/L. An increase in the luminol concentration between 5,0 10-7 and 1,0 10-3 mol/L led to an increase in I0 up to 5,0 10-5 mol/L, higher luminol concentrations do not further increased I0. In the presence of CTAB, I0 increased linearly with the H2O2 concentration in the interval studied (2,0 10-5 to 6,7 10-4 mol/L). An increase in I0 was also observed on increasing the hemin concentration from 8,0 10-8 to 8,0 10-6 mol/L. An increase of the luminol concentration from 5,0 10-7 to 5,0 10-5 increased the observed I0, which did not change for higher luminol concentrations. The cmc of CTAB was measured in the reaction conditions (phosphate buffer pH 11,6 and µ= 0,1), and the value determined, 2 10-4 mol/L, was five times lower than the cmc in water. The absorption spectra of hemin and luminol in different CTAB concentrations showed significant variation with the surfactant concentration, indicating an interaction between these reagents and the surfactant. With these studies it was possible to understand well the behavior of the system and to establish experimental conditions which lead to kinetic curves with a slow emission intensity decay and relatively high I0, ideal conditions for the performance of the anti-radical capacity assay. The effect of trolox, the antioxidant used as reference, was evaluated in this conditions in the systems based on the three surfactants. In all the cases a linear correlation between the trolox concentration and the suppressed area in the emission kinetics was observed. This area is proportional to the number of radicals trapped by the antioxidant. Detection limits for trolox were below 1,0 10-7 mol/L, and the linear range was at least one order of magnitude (concentrations higher than 2,0 10-6 mol/L were not evaluated). The antioxidant capacity (n) was determined in the reaction medium containing CTAB for vitamin E (n= 3,5 ± 0,1), rutin (n=4,0 ± 0,2), quercetin (n=3,8 ± 0,4) and uric acid (n=1,3 ± 0,1). The n values determined by this method were very similar to those measured with the DPPH assay. Hence, the assay developed with luminol in micelar media was adequate to evaluate the anti-radical capacity of hidrosoluble as well as liposoluble compounds. The assay conditions established in the presence of CTAB allowed the consecutive injection of antioxidant samples during the same kinetic run. The values determined in this consecutive injection assay proved to be very similar to those obtained in the assay where injections were made individually. This method allows automation, economy of reagents and reduction of assay time

Interferentes endócrinos (IE) são substâncias capazes de afetar o sistema endócrino causando danos à saúde. Os compostos estrogênicos são um tipo de IE que geram resposta biológica semelhante aos hormônios endógenos, chamada atividade estrogênica, são frequentemente encontrados no ambiente devido à poluição de origem antrópica e ineficiência de processos de tratamento de água e esgoto. O objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade estrogênica de águas de mananciais e águas tratadas para abastecimento no Estado de São Paulo por meio de bioensaios. Foram utilizados dois métodos, baseados em diferentes linhagens da levedura Saccharomyces cerevisiae capazes de responder a agentes estrogênicos pela presença do gene que codifica para o receptor de estrogênio humano e sistemas de gene repórter da atividade estrogênica. Uma das linhagens contém o gene luc, método denominado neste trabalho de Lesk, enquanto a outra contém genes lux como repórter, denominado método San. Os métodos foram comparados quanto à especificidade e sensibilidade de resposta aos principais interferentes endócrinos de ocorrência em águas e com dados de análises cromatográficas das respectivas amostras ambientais. Foi observada atividade estrogênica expressiva nas águas brutas coletadas em pontos específicos nas cidades de Campinas, Barueri, Cerquilho e em efluente hospitalar e em todas essas amostras foram detectados compostos estrogênicos-alvo. As amostras de água tratada não apresentaram atividade estrogênica nem compostos estrogênicos, com apenas uma exceção. O método San foi mais sensível que o método Lesk, tanto para compostos químicos puros quanto para amostras ambientais. O teor de substâncias detectado por análises cromatográficas não foi suficiente para explicar a atividade estrogênica observada nos bioensaios, indicando que concentrações abaixo dos limites de detecção podem gerar o efeito biológico ou que compostos estrogênicos não estudados e suas misturas podem estar presentes gerando efeitos aumentados. / Endocrine disrupting (ED) chemicals are compounds able to interact with the endocrine system causing health adverse effects. Estrogenic compounds are a type of ED that produce a biological response similar to organism\'s natural hormones, called estrogenic activity; they are frequently found in the environment and are usually associated to the pollution from human activities. The goal of this work was to evaluate the estrogenic activity of rivers raw and treated water around the State of São Paulo Brazil - using bioassays. Two different strains of Saccharomyces cerevisiae able to respond to estrogenic compounds, due to the presence of genes that encodes for the human estrogen receptor, were used. One of the strains has the luc gene (method Lesk), a reporter of estrogenic activity and the other contains lux genes (method San) as reporter of estrogenic activity. Both methods were compared regarding their specificity and sensitivity for chemical substances and environmental samples. The results were also compared with the chemical analysis data of target pure compounds in those waters and with the literature. Estrogenic activity was detected in raw water samples collected in Campinas, Barueri and Cerquilho and also in hospital effluent, for all those samples estrogenic compounds were determined. San method showed to be more sensitive to pure chemical compounds and environmental samples. For treated water no estrogenic activity was found, except for one sample from Barueri that presented a low response. The amounts of compounds detected by chromatographic analysis were not sufficient to explain the observed estrogenic activity when bioassays were used, therefore low compounds concentration or other compounds and their mixtures may be responsible for the high biological effet detected by bioassays.

Neste trabalho foi desenvolvida uma metodologia para a determinação da capacidade anti-radicalar de substâncias hidrofílicas e lipofílicas baseada na quimiluminescência do luminol em meio micelar. A reação de luminol, hemina e peróxido de hidrogênio foi estudada na presença de tensoativos carregados (CTAB/CTAC e SDS). Variou-se independentemente a concentração de cada reagente de forma a avaliar seu papel sobre a intensidade inicial de emissão (I0), que é proporcional à velocidade inicial da reação. Em solução aquosa de SDS, a I0 apresentou correlação linear com a concentração de H2O2 entre 5,0 10-6 e 6,0 10-5 mol/L e com a concentração de hemina no intervalo de 8,0 10-9 a 4,0 10-7 mol/L. O aumento da concentração de luminol no intervalo de 5,0 10-7 a 1,0 10-3 provocou aumento na I0 até 5,0 10-5 mol/L, permanecendo constante para concentrações maiores. Na presença de CTAB, o valor de I0 variou linearmente com a concentração de H2O2 no intervalo estudado (2,0 10-5 a 6,7 10-4 mol/L). A I0 aumentou com o aumento da concentração da hemina entre 8,0 10-8 e 8,0 10-6 mol/L. A variação da concentração de luminol de 5,0 10-7 a 5,0 10-5 também provocou aumento na I0, a qual ficou constante para concentrações maiores. Para este tensoativo foram realizadas também medidas de cmc nas condições de reação (tampão fosfato pH 11,6 e µ = 0,1), obtendo-se um valor de 2 10-4 mol/L, cinco vezes menor do que a cmc em água. As mudanças espectrais de hemina e luminol em diferentes concentrações de CTAB foram avaliadas, obtendo-se evidências da interação destes reagentes com o tensoativo. Destes estudos, foi possível compreender melhor o comportamento do sistema e foram encontradas condições nas quais se obtêm decaimento lento da intensidade de emissão e I0 alto. Estas condições são ideais para a realização de um ensaio de determinação da capacidade anti-radicalar. O efeito do antioxidante trolox, utilizado como padrão, foi avaliado nestas condições nos sistemas baseados nos três tensoativos. Em todos os casos, observou-se correlação linear entre a concentração de trolox e a área suprimida na cinética de emissão, a qual é proporcional ao número de radicais seqüestrados pelo antioxidante. Os limites de detecção para trolox ficaram abaixo de 1,0 10-7 mol/L, e a faixa de linearidade é de no mínimo uma ordem de grandeza (não foram testadas concentrações superiores a 2,0 10-6 mol/L). No meio de reação com CTAB foram determinadas as capacidades anti-radicalares (n) dos seguintes antioxidantes: vitamina E (n=3,5 ± 0,1), rutina (n=4,0 ± 0,2), quercetina (n=3,8 ± 0,4) e ácido úrico (n=1,3 ± 0,1). Os valores de n determinados com este método foram muito similares com aqueles medidos utilizando-se o ensaio com o radical estável DPPH. Portanto, o ensaio desenvolvido com luminol em meio micelar se mostrou adequado para testar tanto substâncias hidrossolúveis como lipossolúveis. Foram testadas condições para a realização de ensaios consecutivos com injeções repetidas de várias alíquotas de antioxidante na presença de CTAB. Os valores encontrados com o ensaio realizado desta forma foram iguais aos obtidos com o ensaio onde as injeções são feitas individualmente. Este método permite automação e resulta na economia de reagentes e redução do tempo de ensaio / In this work, a methodology to evaluate the anti-radical capacity of hydrophilic and lipophilic compounds based on luminol chemiluminescence in micellar media was developed. The reaction of luminol, hemin and hydrogen peroxide was studied in the presence of charged surfactants (CTAB/CTAC and SDS). The concentration of each reagent was independently varied in order to evaluate its influence on the initial emission intensity (I0), which is proportional to the initial reaction rate. In aqueous SDS solution, I0 showed a linear correlation with the H2O2 concentration between 5,0 10-6 and 6,0 10-5 mol/L, and with the hemin concentration between 8,0 10-9 and 4,0 10-7 mol/L. An increase in the luminol concentration between 5,0 10-7 and 1,0 10-3 mol/L led to an increase in I0 up to 5,0 10-5 mol/L, higher luminol concentrations do not further increased I0. In the presence of CTAB, I0 increased linearly with the H2O2 concentration in the interval studied (2,0 10-5 to 6,7 10-4 mol/L). An increase in I0 was also observed on increasing the hemin concentration from 8,0 10-8 to 8,0 10-6 mol/L. An increase of the luminol concentration from 5,0 10-7 to 5,0 10-5 increased the observed I0, which did not change for higher luminol concentrations. The cmc of CTAB was measured in the reaction conditions (phosphate buffer pH 11,6 and µ= 0,1), and the value determined, 2 10-4 mol/L, was five times lower than the cmc in water. The absorption spectra of hemin and luminol in different CTAB concentrations showed significant variation with the surfactant concentration, indicating an interaction between these reagents and the surfactant. With these studies it was possible to understand well the behavior of the system and to establish experimental conditions which lead to kinetic curves with a slow emission intensity decay and relatively high I0, ideal conditions for the performance of the anti-radical capacity assay. The effect of trolox, the antioxidant used as reference, was evaluated in this conditions in the systems based on the three surfactants. In all the cases a linear correlation between the trolox concentration and the suppressed area in the emission kinetics was observed. This area is proportional to the number of radicals trapped by the antioxidant. Detection limits for trolox were below 1,0 10-7 mol/L, and the linear range was at least one order of magnitude (concentrations higher than 2,0 10-6 mol/L were not evaluated). The antioxidant capacity (n) was determined in the reaction medium containing CTAB for vitamin E (n= 3,5 ± 0,1), rutin (n=4,0 ± 0,2), quercetin (n=3,8 ± 0,4) and uric acid (n=1,3 ± 0,1). The n values determined by this method were very similar to those measured with the DPPH assay. Hence, the assay developed with luminol in micelar media was adequate to evaluate the anti-radical capacity of hidrosoluble as well as liposoluble compounds. The assay conditions established in the presence of CTAB allowed the consecutive injection of antioxidant samples during the same kinetic run. The values determined in this consecutive injection assay proved to be very similar to those obtained in the assay where injections were made individually. This method allows automation, economy of reagents and reduction of assay time

Diversas condições durante as etapas de produção dos alimentos podem levar à introdução de micro-organismos patogênicos nas refeições. Esse fato pode ser relevante nos serviços de alimentação localizados em shopping centers pela limitada área física, número de equipamentos insuficientes e volume de refeições servidas. O objetivo do presente estudo foi avaliar esse tipo de estabelecimento quanto ao cumprimento de boas práticas e verificar a presença de matéria orgânica e contaminação bacteriana residual em refrigeradores que haviam sido submetidos à limpeza de rotina. Vinte estabelecimentos localizados em um shopping center de Porto Alegre foram incluídos no estudo. Em cada estabelecimento foi aplicada a Lista de Verificação em Boas Práticas para Serviços de Alimentação prevista na Portaria nº 78 de 28 de Janeiro de 2009 (CEVS) e foram colhidas três amostras com intervalo mensal da parede interna do refrigerador no dia subsequente à limpeza de rotina. As amostras foram avaliadas pelo sistema Clean Trace (3M), quanto à presença de Listeria sp., Coliformes Totais e Escherichia coli. Os dados resultantes da aplicação da Lista de Verificação apontaram que 55% dos estabelecimentos não atingiram a pontuação mínima (>75%) para serem considerados satisfatórios. Em 95% (57/60) das amostras colhidas nos refrigeradores, demonstrou-se a presença de matéria orgânica residual. Já as análises microbiológicas apontaram ausência de Listeria sp., presença de de Coliformes Totais e E. coli em 8,3% e 1,6% das amostras, respectivamente. Não houve associação entre a classificação do estabelecimento (satisfatório/insatisfatório) e a presença de matéria orgânica residual ou Coliformes Totais nos refrigeradores. Estes resultados demonstram a necessidade de constante revisão e monitoramento dos processos de higienização de equipamentos em serviços de alimentação. / Several conditions during all stages of food production can lead to the introduction of pathogenic micro-organisms in food. This fact may be relevant in the food service located in shopping malls by limited physical area, insufficient number of equipment and volume of meals served. The aim of this study was to evaluate this type of establishment for compliance with good practices and verify the presence of organic matter and residual bacterial contamination in refrigerators that had been submitted to routine cleaning. Twenty establishments located in a shopping center from Porto Alegre were included in the study. In each establishment a Checklist for Good Practice for Food Services, provided by Resoltuion No. 78 published on January 28th 2009 (CEVS), was aplied, and three samples were collected at monthly intervals from the inner wall of the refrigerator on the day following the routine cleaning. The samples were evaluated by the Clean Trace system (3M) for the presence of Listeria sp., Total Coliforms and Escherichia coli. The data resulting from application of the Checklist showed that 55% of establishments didn’t attained the minimum score (> 75%) to be classified satisfactory. From de samples taken on the refrigerator’s inner wall, 95% (57/60) demonstrated the presence of residual organic. Nevertheless, microbiological analyzes showed absence of Listeria sp., and isolation of Total Coliforms and E. coli in 8.3% and 1.6% of the samples, respectively. There was no association between the classification of the establishment (satisfactory / unsatisfactory) and the presence of residual organic matter or total coliform in the refrigerator. The results demonstrate the need for constant review and monitoring and improvement of sanitizing procedures of equipment in food service.

Diversas condições durante as etapas de produção dos alimentos podem levar à introdução de micro-organismos patogênicos nas refeições. Esse fato pode ser relevante nos serviços de alimentação localizados em shopping centers pela limitada área física, número de equipamentos insuficientes e volume de refeições servidas. O objetivo do presente estudo foi avaliar esse tipo de estabelecimento quanto ao cumprimento de boas práticas e verificar a presença de matéria orgânica e contaminação bacteriana residual em refrigeradores que haviam sido submetidos à limpeza de rotina. Vinte estabelecimentos localizados em um shopping center de Porto Alegre foram incluídos no estudo. Em cada estabelecimento foi aplicada a Lista de Verificação em Boas Práticas para Serviços de Alimentação prevista na Portaria nº 78 de 28 de Janeiro de 2009 (CEVS) e foram colhidas três amostras com intervalo mensal da parede interna do refrigerador no dia subsequente à limpeza de rotina. As amostras foram avaliadas pelo sistema Clean Trace (3M), quanto à presença de Listeria sp., Coliformes Totais e Escherichia coli. Os dados resultantes da aplicação da Lista de Verificação apontaram que 55% dos estabelecimentos não atingiram a pontuação mínima (>75%) para serem considerados satisfatórios. Em 95% (57/60) das amostras colhidas nos refrigeradores, demonstrou-se a presença de matéria orgânica residual. Já as análises microbiológicas apontaram ausência de Listeria sp., presença de de Coliformes Totais e E. coli em 8,3% e 1,6% das amostras, respectivamente. Não houve associação entre a classificação do estabelecimento (satisfatório/insatisfatório) e a presença de matéria orgânica residual ou Coliformes Totais nos refrigeradores. Estes resultados demonstram a necessidade de constante revisão e monitoramento dos processos de higienização de equipamentos em serviços de alimentação. / Several conditions during all stages of food production can lead to the introduction of pathogenic micro-organisms in food. This fact may be relevant in the food service located in shopping malls by limited physical area, insufficient number of equipment and volume of meals served. The aim of this study was to evaluate this type of establishment for compliance with good practices and verify the presence of organic matter and residual bacterial contamination in refrigerators that had been submitted to routine cleaning. Twenty establishments located in a shopping center from Porto Alegre were included in the study. In each establishment a Checklist for Good Practice for Food Services, provided by Resoltuion No. 78 published on January 28th 2009 (CEVS), was aplied, and three samples were collected at monthly intervals from the inner wall of the refrigerator on the day following the routine cleaning. The samples were evaluated by the Clean Trace system (3M) for the presence of Listeria sp., Total Coliforms and Escherichia coli. The data resulting from application of the Checklist showed that 55% of establishments didn’t attained the minimum score (> 75%) to be classified satisfactory. From de samples taken on the refrigerator’s inner wall, 95% (57/60) demonstrated the presence of residual organic. Nevertheless, microbiological analyzes showed absence of Listeria sp., and isolation of Total Coliforms and E. coli in 8.3% and 1.6% of the samples, respectively. There was no association between the classification of the establishment (satisfactory / unsatisfactory) and the presence of residual organic matter or total coliform in the refrigerator. The results demonstrate the need for constant review and monitoring and improvement of sanitizing procedures of equipment in food service.

Diversas condições durante as etapas de produção dos alimentos podem levar à introdução de micro-organismos patogênicos nas refeições. Esse fato pode ser relevante nos serviços de alimentação localizados em shopping centers pela limitada área física, número de equipamentos insuficientes e volume de refeições servidas. O objetivo do presente estudo foi avaliar esse tipo de estabelecimento quanto ao cumprimento de boas práticas e verificar a presença de matéria orgânica e contaminação bacteriana residual em refrigeradores que haviam sido submetidos à limpeza de rotina. Vinte estabelecimentos localizados em um shopping center de Porto Alegre foram incluídos no estudo. Em cada estabelecimento foi aplicada a Lista de Verificação em Boas Práticas para Serviços de Alimentação prevista na Portaria nº 78 de 28 de Janeiro de 2009 (CEVS) e foram colhidas três amostras com intervalo mensal da parede interna do refrigerador no dia subsequente à limpeza de rotina. As amostras foram avaliadas pelo sistema Clean Trace (3M), quanto à presença de Listeria sp., Coliformes Totais e Escherichia coli. Os dados resultantes da aplicação da Lista de Verificação apontaram que 55% dos estabelecimentos não atingiram a pontuação mínima (>75%) para serem considerados satisfatórios. Em 95% (57/60) das amostras colhidas nos refrigeradores, demonstrou-se a presença de matéria orgânica residual. Já as análises microbiológicas apontaram ausência de Listeria sp., presença de de Coliformes Totais e E. coli em 8,3% e 1,6% das amostras, respectivamente. Não houve associação entre a classificação do estabelecimento (satisfatório/insatisfatório) e a presença de matéria orgânica residual ou Coliformes Totais nos refrigeradores. Estes resultados demonstram a necessidade de constante revisão e monitoramento dos processos de higienização de equipamentos em serviços de alimentação. / Several conditions during all stages of food production can lead to the introduction of pathogenic micro-organisms in food. This fact may be relevant in the food service located in shopping malls by limited physical area, insufficient number of equipment and volume of meals served. The aim of this study was to evaluate this type of establishment for compliance with good practices and verify the presence of organic matter and residual bacterial contamination in refrigerators that had been submitted to routine cleaning. Twenty establishments located in a shopping center from Porto Alegre were included in the study. In each establishment a Checklist for Good Practice for Food Services, provided by Resoltuion No. 78 published on January 28th 2009 (CEVS), was aplied, and three samples were collected at monthly intervals from the inner wall of the refrigerator on the day following the routine cleaning. The samples were evaluated by the Clean Trace system (3M) for the presence of Listeria sp., Total Coliforms and Escherichia coli. The data resulting from application of the Checklist showed that 55% of establishments didn’t attained the minimum score (> 75%) to be classified satisfactory. From de samples taken on the refrigerator’s inner wall, 95% (57/60) demonstrated the presence of residual organic. Nevertheless, microbiological analyzes showed absence of Listeria sp., and isolation of Total Coliforms and E. coli in 8.3% and 1.6% of the samples, respectively. There was no association between the classification of the establishment (satisfactory / unsatisfactory) and the presence of residual organic matter or total coliform in the refrigerator. The results demonstrate the need for constant review and monitoring and improvement of sanitizing procedures of equipment in food service.

Espécies reativas de oxigênio (EROs) são produzidas normalmente durante o metabolismo de organismos aeróbios. Fungos degradadores de lignina geram estas espécies também no processo de degradação da lignina. As espécies de fungos bioluminescentes Gerronema viridilucens e Mycena lucentipes foram utilizadas para se estabelecer possível dependência entre intensidade de bioluminescência, viabilidade celular e atividades das enzimas de defesa antioxidante e ligninolíticas nos micélios e corpos de frutificação. Verificou-se o efeito de espécies causadoras de estresse químico (metais e fenóis) na emissão de luz, viabilidade celular, defesas antioxidantes e enzimas de respiração celular no fungo bioluminescente G. viridilucens, com o objetivo de conectar a inibição da bioluminescência com danos oxidativos ao organismo. Constatou-se que diferentes espécies de fungos bioluminescentes podem apresentar características diferentes quanto à emissão de luz e proteção antioxidante. Diferenças na intensidade e variação temporal da emissão de luz de diferentes espécies foram observadas nos corpos de frutificação e também no micélio. Isto foi revelado pela irregularidade do perfil de luz reprodutível para a espécie M. lucentipes, ao contrário do observado para G. viridilucens. A viabilidade celular de ambas as espécies varia com o tempo, sendo que no caso de G. viridilucens seu perfil é similar ao da bioluminescência. Os ensaios enzimáticos indicam maior atividade no micélio dos fungos do que nos corpos de frutificação, provavelmente pela função específica reprodutora do corpo de frutificação, enquanto a atividade metabólica do fungo está concentrada no micélio. As enzimas ligninolíticas também apresentam atividade baixa nas culturas estudadas, provavelmente por serem enzimas de degradação extracelulares. O fato de ambas viabilidade celular e bioluminescência do micélio serem reduzidas na presença dos metais (cobre e cádmio) e fenóis (fenol e 2,4,6-triclorofenol) testados atesta a interrelação entre atividade luminogênica e injúria oxidativa aos fungos. Os metais parecem afetar mais negativamente as defesas antioxidantes dos fungos do que os fenóis, os quais possivelmente são eliminados pela atividade da glutationa S-transferase (GST), sem também afetar as demais defesas antioxidantes. No conjunto, estes resultados possibilitam estabelecer uma relação metabólica entre abatimento da bioluminescência e as defesas antioxidantes do organismo. No caso dos metais, os sistemas de defesa antioxidante envolvendo a glutationa são bastante importantes, tanto para eliminar peróxidos produzidos na presença de cobre, como na quelação de cádmio pela glutationa. Sob condições normais, a bioluminescência, defesas antioxidantes e respiração celular do organismo estariam funcionando e o NAD(P)H seria mobilizado por todos estes sistemas. Quando o fungo é submetido ao estresse químico, o fluxo de NAD(P)H seria desviado da bioluminescência para sustentar prioritariamente as defesas antioxidantes e a respiração celular, essenciais para a proteção, manutenção e reprodução do organismo / Reactive Oxygen Species (ROS) are normally produced during the metabolism of aerobic organisms. Ligninolitic fungi also produce these oxidizing species also during the lignin degradation process. The bioluminescent species Gerronema viridilucens and Mycena lucentipes were studied aiming to establish a correlation between the temporal profiles of bioluminescence, cellular viability and antioxidant defense enzymes and ligninolitic enzymes in mycelium and fruiting bodies. Chemical toxicants such as metals and phenols were here found to affect light emission, cellular viability, antioxidant defenses and cellular respiration enzymes when administered to G. viridilucens, thereby attesting a metabolic connection between bioluminescence inhibition and fungal oxidative damage. Different species of fungi exhibit different characteristics linked to light emission and antioxidant defenses. Differences in light emission displayed by different species do not resume to fruiting bodies, but the light profile and intensity can also vary in the mycelia. This may explain the irreproducibility of the light profile from M. lucentipes, differently to that observed with G. viridilucens. The cellular viability of both species varies with time, G. viridilucens profile being similar to the time course of bioluminescence. The enzymatic data pointed to higher activities in mycelium than in fruiting bodies, probably due to a main reproductive function of the latter, whereas the metabolic activities are prevalent in the mycelium. Ligninolytic enzymes exhibit low activities in the extracts of fungus samples, probably because they are extracellular degradation enzymes. The inhibition effect of phenols and metals (copper and cadmium) on mycelium viability reinforces the notion that cellular oxidative damage hampers bioluminescence emission. Redox active (copper) and heavy metals (cadmium) were found to display higher impact on antioxidant defenses than phenols (phenol and 2,4,6-trichlorophenol), which are expected to be promptly metabolized and excluded by principally glutathione S-transferase (GST). Notably, a metabolic correlation between bioluminescence inhibition and antioxidant defenses was unveiled by the present work. Regarding the metals, glutathione was found to be a crucial antioxidant, both to eliminate peroxides when in the presence of copper, and to act as a cadmium chelating agent. Under normal conditions, the bioluminescence system, the antioxidant defenses and the cellular respiration sets cooperate through the common demand of reducing power of NAD(P)H. Under chemical stress, the NAD(P)H flux would be deviated from bioluminescence, to principally sustain the antioxidant defenses and cellular respiration, essential for the protection, maintenance and reproduction of the organism.

A análise da qualidade microbiana de matérias-primas e de produtos por meio da técnica convencional de contagem de microrganismos exige demanda elevada de trabalho e fornece resultados em período de tempo não compatível com o desenvolvimento da tecnologia. A indústria farmacêutica e cosmética necessita de liberação rápida de seus produtos, assim métodos alternativos podem reduzir o tempo de trabalho e custo. O método de ATP bioluminescência detecta a presença ou ausência de microrganismos em até 24 horas. O método baseia-se na reação do ATP (adenosina trifosfato) provenientes do microrganismo com o complexo luciferina - luciferase, produzindo luz. Os componentes da formulação de produtos cosméticos, como os corantes e os pigmentos podem interferir na reação e influenciar na leitura da Unidade Relativa de Luz (URL). O objetivo do experimento foi validar método de ATP bioluminescência para avaliação da qualidade microbiana do pigmento Green Nº 7 e dos corantes FD&C Blue Covanor e o FD&C Red Nº 5, usados em produtos cosméticos, verificando se esses podem interferir na reação de ATP-bioluminescência , utilizando os meios de cultura TAT(Tryptone-Azolectin-Tween) , DE ( Dey Engly Neutralization Broth) e LB (Letheen Broth) . A primeira etapa da validação do sistema ATP bioluminescência foi determinar o Efeito da Amostra nas suspensões o qual verifica a presença de ATP não microbiano. A sensibilidade do ensaio foi analisada por meio do teste de limite de detecção inoculando-se os microorganismos Escherichia coli ATCC 8739, Burkholderia cepacea ATCC 25416, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Candida albicans ATCC 10231 na suspensão das amostras. Para C. albicans não foi possível a detecção pois houve a necessidade de tempo maior de incubação. O meio de cultura TAT sem acréscimo de polissorbato 80 apresentou as melhores condições para a validação do pigmento Green Nº 7. Para corantes há necessidade ainda de uma investigação mais criteriosa, estudando outros meios de cultura, reagentes e condições que propiciem resultados adequados em conformidade com as especificações para a validação. / The analysis of the microbiology quality of raw materiais and finished products by means of the conventional technique of counting of microorganism demands high time of work and supplies resulted in period of not compatible time with the development of the technology. The rapid methods provide reliable and cost effective analysis for the microbiological evaluation the pharmaceutical and cosmetic industry. The ATP Bioluminescence detect the presence or absence of microorganisms the reduction in detection times and analysis from 72 hours to 24 hours. The bioluminescence assay is based upon the light-producing enzyme luciferase that will hydrolyze ATP to produce light. Light production is detected by a luminometer and recorded as relative light units (RLU). The purpose of this investigation was to develop and validate the use an ATP bioluminescence assay for detection microbial contamination in artificially contaminated commercial Green Nº 7 pigment and FD&C Blue Covanor e o FD&C Red Nº 5 dyes with some microbial cultures, TAT (Tryptone-Azolectin-Tween) , DE (Dey Engly Neutralization Broth) e LB (Letheen Broth), and to compare the results against standard microbiological analysis. The first step in validation of the ATP bioluminescence system was to determine the sample effect of the sample suspensions on the bioluminescence reaction where analyzed to determine whether the sample contained nonmicrobial ATP. The sensitivity of the assay to detect different levels of Escherichia coli ATCC 8739, Burkholderia cepacea ATCC 25416, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Candida albicans ATCC 10231 was analyzed by spiking into the samples suspensions. For C. albicans contamination detection has not been possible because it has required more time than bacteria. The microbial culture TAT without addition of polissorbato 80 has presented the best conditions for the validation of the Green pigment n° 7. For dyes has still been necessity of studying other microbial culture, reagents and conditions that they propitiate resulted adequate in compliance with the specifications for the validation.

A análise da qualidade microbiana de matérias-primas e de produtos por meio da técnica convencional de contagem de microrganismos exige demanda elevada de trabalho e fornece resultados em período de tempo não compatível com o desenvolvimento da tecnologia. A indústria farmacêutica e cosmética necessita de liberação rápida de seus produtos, assim métodos alternativos podem reduzir o tempo de trabalho e custo. O método de ATP bioluminescência detecta a presença ou ausência de microrganismos em até 24 horas. O método baseia-se na reação do ATP (adenosina trifosfato) provenientes do microrganismo com o complexo luciferina - luciferase, produzindo luz. Os componentes da formulação de produtos cosméticos, como os corantes e os pigmentos podem interferir na reação e influenciar na leitura da Unidade Relativa de Luz (URL). O objetivo do experimento foi validar método de ATP bioluminescência para avaliação da qualidade microbiana do pigmento Green Nº 7 e dos corantes FD&C Blue Covanor e o FD&C Red Nº 5, usados em produtos cosméticos, verificando se esses podem interferir na reação de ATP-bioluminescência , utilizando os meios de cultura TAT(Tryptone-Azolectin-Tween) , DE ( Dey Engly Neutralization Broth) e LB (Letheen Broth) . A primeira etapa da validação do sistema ATP bioluminescência foi determinar o Efeito da Amostra nas suspensões o qual verifica a presença de ATP não microbiano. A sensibilidade do ensaio foi analisada por meio do teste de limite de detecção inoculando-se os microorganismos Escherichia coli ATCC 8739, Burkholderia cepacea ATCC 25416, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Candida albicans ATCC 10231 na suspensão das amostras. Para C. albicans não foi possível a detecção pois houve a necessidade de tempo maior de incubação. O meio de cultura TAT sem acréscimo de polissorbato 80 apresentou as melhores condições para a validação do pigmento Green Nº 7. Para corantes há necessidade ainda de uma investigação mais criteriosa, estudando outros meios de cultura, reagentes e condições que propiciem resultados adequados em conformidade com as especificações para a validação. / The analysis of the microbiology quality of raw materiais and finished products by means of the conventional technique of counting of microorganism demands high time of work and supplies resulted in period of not compatible time with the development of the technology. The rapid methods provide reliable and cost effective analysis for the microbiological evaluation the pharmaceutical and cosmetic industry. The ATP Bioluminescence detect the presence or absence of microorganisms the reduction in detection times and analysis from 72 hours to 24 hours. The bioluminescence assay is based upon the light-producing enzyme luciferase that will hydrolyze ATP to produce light. Light production is detected by a luminometer and recorded as relative light units (RLU). The purpose of this investigation was to develop and validate the use an ATP bioluminescence assay for detection microbial contamination in artificially contaminated commercial Green Nº 7 pigment and FD&C Blue Covanor e o FD&C Red Nº 5 dyes with some microbial cultures, TAT (Tryptone-Azolectin-Tween) , DE (Dey Engly Neutralization Broth) e LB (Letheen Broth), and to compare the results against standard microbiological analysis. The first step in validation of the ATP bioluminescence system was to determine the sample effect of the sample suspensions on the bioluminescence reaction where analyzed to determine whether the sample contained nonmicrobial ATP. The sensitivity of the assay to detect different levels of Escherichia coli ATCC 8739, Burkholderia cepacea ATCC 25416, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Candida albicans ATCC 10231 was analyzed by spiking into the samples suspensions. For C. albicans contamination detection has not been possible because it has required more time than bacteria. The microbial culture TAT without addition of polissorbato 80 has presented the best conditions for the validation of the Green pigment n° 7. For dyes has still been necessity of studying other microbial culture, reagents and conditions that they propitiate resulted adequate in compliance with the specifications for the validation.