Resultados de pesquisas prévias tem encontrado potencial aumentado para a consolidação de enxertos ósseos mediante desmineralização do material enxertado e/ou das superfícies de consolidação. Entretanto há carência de embasamento apoiado em evidências biológicas do benefício de tal procedimento. Para testar esta hipótese, o tecido ósseo da calvária de cobaias (Cavia porcellus) foi exposto ao condicionamento por ácido cítrico durante 15, 30, 90 e 180 segundos (grupos teste). Quarenta e cinco discos ósseos de três milímetros de diâmetro foram removidos dos animais, dos quais 36 foram condicionados com ácido cítrico pH 1 a 50% e nove não receberam condicionamento (grupo controle). Sobre nove discos de cada grupo foram cultivados pré-osteoblastos MC3T3-E1 durante 24, 48 e 72 horas (três discos de cada grupo em cada tempo). Análises da morfologia celular, do número de células aderidas sobre as superfícies e da área de cobertura destas superfícies por préosteoblastos foram realizadas à microscopia eletrônica de varredura. Observou-se aumento do número de células aderidas às superfícies com o tempo, independentemente de haver condicionamento ou de seu tempo de aplicação. Entretanto, essa diferença só foi estatisticamente significante intragrupos (p<0,05) e quando comparados os períodos de 24 e 72 horas de incubação. A área de cobertura das superfícies por células aumentou significantemente com o tempo somente nos grupos teste, também entre os períodos de incubação de 24 e 72 horas (p<0,01). O grupo controle apresentou-se com 50% ou menos de área de cobertura superficial em relação aos demais. A duração de aplicação do ácido não interferiu significantemente nesse parâmetro de avaliação, mas nos grupos 15 e 30, a área de recobrimento ósseo mais do que triplicou às 72 horas em relação às 24 horas (p<0,01), com cerca de 70% das superfícies cobertas por células, contra 30% no grupo controle. Conclui-se que a desmineralização óssea nos tempos de condicionamento estudados propicia um substrato sobre o qual as células pré-osteoblásticas adquirem morfologia compatível com estágio de diferenciação mais avançado, promovendo maior cobertura de área, o que aumenta o potencial para deposição de novo osso sobre essas superfícies em comparação ao tecido não condicionado. / Results of previous research has found increased potential for the consolidation of bone grafts by demineralization of the graft material and / or areas of consolidation. However there is a lack of foundation supported by biological evidence of benefits from such procedures. To test this hypothesis, the bone tissue of the calvaria of guinea pigs (Cavia porcellus) were exposed to conditioning by citric acid for 15, 30, 90 and 180 seconds (test group). Forty-five bone disks measuring three millimeters in diameter were removed from the animals, of which 36 were conditioned with citric acid pH 1 to 50% and nine did not receive conditioning (control group). About nine disks in each group were pre-cultured with MC3T3- E1 osteoblasts for 24, 48 and 72 hours (three discs of each group at each time point). Analysis of cell morphology, number of cells attached on the surface and the coverage area of these surfaces by pre-osteoblasts were performed on scanning electron microscopy. There was na increase in the number of cells attached to surfaces over time, regardless of conditioning or application time. However, this difference was not statistically significant intra-group (p <0.05) when comparing the periods of 24 and 72 hours of incubation. The coverage area of the surfaces of cells increased significantly with time only in the test groups, also among the incubation periods of 24 and 72 hours (p <0.01). The control group presented with 50% or less of surface area coverage compared to the other. The duration of application of the acid did not affect significantly this parameter of evaluation, but in groups 15 and 30, the bonearea covered more than tripled from 24 to 72 hours (p <0.01), with about 70 % of the area covered by cells, versus 30% in the control group. It was concluded that bone demineralization in the studied conditioning times provides a substrate on which cells acquire pre-osteoblastic morphology compatible with more advanced stage of differentiation, promoting greater coverage area, which increases the potential for deposition of new bone on these surfaces compared to the tissue-air basis.

O objetivo deste trabalho foi investigar a influência do enxerto ósseo autógeno particulado no processo de reparo do alvéolo dental de ratos Wistar após exodontia. Os animais foram divididos em grupos controle e experimental. Os ratos controles foram submetidos à intervenção cirúrgica para exodontia do incisivo superior direito apenas, enquanto nos ratos experimentais foram realizadas a exodontia e enxertia óssea no alvéolo dental. A eutanásia dos ratos foi realizada no 5o, 15o, 21o e 28o dias de pós-operatório. As amostras obtidas foram processadas para análise histológica. A densidade de área ocupada por osso foi quantificada por um método de contagem diferencial de pontos e com auxílio de um programa de imagens. Os resultados mostraram que a densidade de área preenchida por tecido ósseo não apresentou diferenças estatísticas em nenhum dos tempos pós-operatórios nos grupos analisados. Concluiu-se que o enxerto ósseo autógeno não promoveu um aumento significativo da neoformação óssea no alvéolo dental após exodontia. / After tooth extraction a continuous bone resorption of the alveolar process is observed in the maxilla and in the mandible. The unfavorable anatomy of the reabsorbed bone ridge limits the rehabilitation of the edentulous area with prostheses over dental implants. Filling the dental alveolus after the exodontia with bone grafts and/or biomaterials is a procedure that tries to delay the physiologic resorption of the alveolar process and stimulates bone formation. The aim of this study is to investigate the influence of the particulated autogenous bone graft in the alveolar socket healing following tooth extraction in Rattus Norvegicus Albinus lineage Wistar. Sixty-seven male rats were used, each weighing 190 to 250 g. The animals were divided in a control and an experimental group. The upper right incisor was extracted in the rats of both groups. Following the tooth extraction, in the animals of the experimental group, the socket was grafted with particulated autogenous bone. The bone graft was obtained from the iliac bone of the same grafted animal. At 7, 14 and 21 days of postoperative, some rats received subcutaneous applications of the ossification marker calcein dissolved in a sodium bicarbonate 2% solution. The euthanasia of the animals was accomplished in the 5th, 15th, 21st and 28th days of postoperative. After the euthanasia the bone parts that contain the dental socket of each right maxilla were removed and reduced to small samples. All the samples were then fixed and processed for histological analysis. The total area of bone was quantified in the socket by a differential point-counting method and by use of an image analyzing program. The data were analyzed statistically and showed that there was a progressive increase of the bone total area during the postoperative periods. However, the morphometric analysis of the total area of bone in the control and experimental groups, did not show a significant statistical difference in none of the postoperative periods. The results reveal that the autogenous bone graft did not promote a significant increase of the bone new formation in the dental socket following tooth extraction.

O osso é um tipo especializado de tecido com alto teor mineral e desempenha variadas funções no organismo, como a reserva de cálcio, proteção de estruturas vitais e alavanca para a movimentação dos musculos. Constantemente o osso passa por processos de remodelação, o que mantém sua estrutura funcional e repara pequenas fraturas que ocorrem normalmente devido ao estresse do uso contínuo. O sistema de reparo funciona em perfeita sincronia mediante células que produzem os componentes ésseos e células que os reabsorvem permitindo a organização do tecido. Esse sistema de manuteção depende da interação entre estas células bem como dos sinais enviados por mediadores e moduladores. Varias proteínas funcionam como indutores de formação óssea, mas também no sentido de facilitar essa reconstrução. Dentre estas proteínas se encontram as BMPs, que possuem grande potencial osteoindutor, e MMPs, que atuam em diversas fases da construção e manutenção deste tecido. Particularmente a BMP-2 tem mostrado um potencial significativo em termos de indução e sua forma recombinante a rhBMP-2, produzida por engenharia recombinante, foi liberada para comercialização e utilizacao clínica. Quanto às MMPs, há importante função das MMP-2 e MMP-9 neste tecido. A primeira estruturando a matriz e modulando o processo de reabsorção nos processos inflamatórios inerentes ao reparo; a segunda atuando desde fases iniciais às tardias, produzida principalmente por osteoclastos e utilizada na remodelação do osso novo. Porém, esta capacidade de reparo do osso é limitada e defeitos ósseos de grande extensão exigem muito do organismo, podendo levar a um reparo que não se estrutura devidamente. Assim, várias técnicas foram propostas para estimular o desenvolvimento ósseo e a utilizacao de enxertos se mostrou eficaz para fornecer um arcabouço de crescimento, facilitando a implantacao do osso neofomado e protegendo o leito do defeito durante todo o extenso período de recuperação. O presente estudo enfocou três diferentes tipos de enxerto ósseo (autólogo, homólogo e heterólogo) e suas associações com a proteína rhBMP-2, verificando sob o aspecto bioquímico a relação de cada um com a quantidade de MMP-2 e MMP-9 em dois tempos de reparo diferentes. De maneira geral, verificou-se que no primeiro momento há maior produção de MMP-2 e os níveis de MMP-9 se mantém de forma relativamente constante nos dois tempos cirúrgicos. O enxerto autólogo apresenta melhores resultados, seguido dos obtidos no enxerto homólogo e heterólogo respectivamente, entretanto a adição de rhBMP-2 a estes enxertos não parece influenciar nos níveis de MMP-2 e MMP-9 nos dois períodos. A dosagem de cálcio revelou que se apresentavam mais mineralizados os grupos de enxerto autólogo e homólogo, os demais grupos além de apresentar menores niveis de cálcio, ainda decresceram nestes níveis no segundo período do experimento. / Bone is a special tissue with a high mineral content and performs various functions in the body, such as calcium reserves, protection of vital structures and muscles lever during the movement. Bone constantly undergoes remodeling processes, which keeps its functional structure and repair small fractures that commonly occur due to the stress of continuous use. The repair system works perfectly synchronized by the cells that produce bone components and resorbing cells, allowing the perfect tissue organization. This maintenance system depends on the interaction between these cells and the signals sent by mediators and modulators. Several proteins operate to induce bone formation, but also to facilitate the reconstruction. Among these proteins are the BMPs, which have great osteoinductive potential, and MMPs that act at different stages of construction and maintenance of this tissue. Particularly BMP-2 has shown significant potential in terms of induction and its recombinant form, rhBMP-2, produced by recombinant engineering, has been released for clinical use and commercialization. In relation to MMPs, there are important functions of MMP-2 and MMP-9 in this tissue. First, structuring the matrix and modulating the resorption during inflammatory processes inherent to repair; second, acting at early to later stages, produced mainly by osteoclasts and used during bone remodeling. However, this repair capacity is limited and large bone defects require a lot of strength of the body, may leading to a bone repair not well structured. Thus, several proposed techniques to stimulate the development and use of bone grafts were effective to provide a framework for growth, facilitating the implementation of new bone and protecting the defect bed throughout the extended recovery period. This study focused on three different types of bone graft (autologous, homologous and heterologous) and their association with rhBMP-2 protein, evaluating the biochemical aspects according to the amount of MMP-2 and MMP-9 in two different periods of time. In general, it was found that firstly, there is an increased production of MMP-2, and MMP-9 levels remain relatively constant in both considered periods of time. The autologous graft presented the best results followed by homologous and heterologous, respectively; however the addition of rhBMP-2 in these grafts did not seem to influence the MMP-2 and MMP-9 levels, in both periods of time. The calcium dosage revealed more mineralization at the autologous and homologous groups, the other groups, besides having lower calcium levels, decreased these levels at the second period of this experiment.

O objetivo deste trabalho foi avaliar a morfologia periodontal vestibular e lingual do canino permanente movimentado para a região enxertada em fissuras alveolares unilaterais com comprometimento do rebordo alveolar por meio de mensurações realizadas em imagens de exames de tomografia computadorizada cone-beam (TCCB). Esses valores foram comparados com o canino e incisivo lateral presentes no lado não comprometido pela fissura. A amostra consistiu de exames de TCCB de 30 pacientes com fissura unilateral em fase de contenção pós-tratamento ortodôntico. Foram realizados exames de TCCB com protocolo de FOV de 6cm, voxel de 0,25mm por 26,9 segundos. Os exames foram avaliados por apenas um ortodontista duas vezes em um intervalo de 30 dias para calcular o erro do método. A padronização da posição da cabeça foi determinada com o plano palatino paralelo ao solo. Foram realizados cortes axiais na altura da trifurcação do dente 16 para mensurar a espessura da tábua óssea vestibular e lingual do canino do lado da fissura (CF), canino do lado sem fissura (CsF) e incisivo lateral do lado sem fissura (IL). Para a avaliação do nível da crista óssea vestibular e lingual, foram realizados cortes parassagitais passando pelo centro da coroa de cada dente avaliado: CF, CsF e IL. Calculou-se a distância da junção cemento-esmalte (JCE) à crista óssea alveolar vestibular e lingual. Para a comparação dos valores do CF com o CsF e IL, foram utilizados o teste t e o teste de Wilcoxon a depender da distribuição de normalidade. A espessura da tábua óssea vestibular do CF se mostrou significantemente menos espessa do que a do CsF (p=0,002) e do que a do IL (p=0,001). Além disso, a distância da JCE à crista óssea se apresentou estatisticamente maior para o CF (p<0,001). A movimentação do canino superior permanente para a área de fissura alveolar enxertada consiste em uma opção terapêutica viável. No entanto, a condução do tratamento ortodôntico demanda cautela, incluindo uma movimentação lenta e a verificação da qualidade da mucosa ceratinizada. / The purpose of this research was to assess the buccal and lingual periodontal morphology of the permanent canine moved to the grafted region in unilateral alveolar clefts with commitment of the alveolar bone by measuring images of conebeam computed tomography (CBCT) exams. These values were compared to the canine and lateral incisor present in the non-clefted side. The sample comprised CBCT exams of 30 patients with unilateral cleft lip and/or palate during retention period after orthodontic treatment. The protocol used for the CBCT exam was FOV of 6cm, voxel of 0,25mm for 26.9 seconds. The exams were assessed by one orthodontist two times with an interval of 30 days to assess intraoperator reliability. The standard position of the head was determined with the palatal plane parallel to the horizontal plane. Axial slices of the trifurcation of the right permanent molar were obtained to assess the buccal and lingual alveolar bone thickness of the canine in the clefted side (CF), the canine in the non-clefted side (CsF) and the lateral incisor in the non-clefted side (IL). To assess the buccal and lingual bone crest height, parassagital slices were obtained passing through the center of the crown of each evaluated teeth. It was calculated the distance form the cemento-enamel junction (CEJ) to the buccal and lingual alveolar bone crest. The comparison among the CF values with the CsF and IL was performed with the t test or the Wilcoxon test, depending on the distribution of normality. The buccal alveolar bone thickness of the CF is statistically thinner than the buccal alveolar bone thickness of the CsF (p=0,002) and of the IL (p=0,001). Other than that, the distance between the CEJ and the alveolar crest was significant higher for the CF (p<0,001). The movement of the upper permanent canine to the grafted alveolar consists in a viable therapeutic option. However, the orthodontic treatment demands caution, including a very slow movementation and the verification of the quality of the keratinized mucosa.

Orientador: Iguatemy Lourenço Brunetti / Banca: Luís Carlos Spolidorio / Banca: Marília Afonso Rabelo Buzalaf / Banca: Maria Teresa Pepato / Banca: Maria Lúcia Rubo de Rezende / Resumo: O tratamento cirúrgico da fissura congênita do processo alveolar superior compreende o enxerto ósseo, um procedimento bem aceito e de grande importância na restauração da forma e da função perdidas. Associado ao enxerto ósseo tem-se utilizado um produto atóxico, não imunoreativo e de fácil obtenção, denominado plasma rico em plaquetas (PRP). Neste estudo foi analisado o comportamento dos marcadores fosfatase alcalina, fosfatase alcalina isoforma óssea, osteocalcina e fosfatase ácida tartarato resistente em 50 pacientes, com idade entre 10 e 20 anos e que foram submetidos à cirurgia de enxerto ósseo autógeno alveolar pelo serviço de Cirurgia Buco-maxilofacial do Hospital de Reabilitação de Anomalias Craniofaciais da Universidade de São Paulo. O objetivo foi acompanhar de forma sistêmica e em curto período a formação ou reabsorção óssea após a realização do enxerto ósseo alveolar, bem como avaliar a eficácia do uso do plasma rico em plaquetas no processo de formação óssea. O estudo concluiu que as propriedades restauradoras do PRP não puderam ser demonstradas por nenhum dos marcadores bioquímicos do metabolismo ósseo nos primeiros 70 dias do ato cirúrgico; a análise temporal dos marcadores de formação óssea testados demonstrou uma tendência de queda com 35 dias e retorno próximo aos níveis basais com 70 dias do ato cirúrgico nos dois grupos estudados; não houve uma correlação significativa dos marcadores com o número de plaquetas e nem com a área da fissura e o resultado do exame ao raio X foi considerado inconclusivo para a presença ou não de trabeculado ósseo organizado em fase inicial de formação. / Abstract: The surgical treatment of the congenital cleft of the upper alveolar process understands the bone graft, a well accepted procedure of great importance in the restoration of the lost form and function. Together with the bone graft it is being used a non-toxic, non imunoreactive and easily obtained product, denominated platelet-rich plasma (PRP). In this study it was analysed the behavior of the alkaline phosphatase, bone alkaline phosphatase, osteocalcin and tartrate-resistant acid phosphatase markers in 50 patients, with age between 10 and 20 years and that were undergone to alveolar autogenous bone graft performed by the Bucomaxillofacial Service of the "Hospital for Rehabilitation of Craniofacial Anomalies, University of São Paulo". The aim was follow in a sistemic and early way the bone formation or reabsorption after the accomplishment of the alveolar bone graft, as well as to evaluate the effectiveness of the use of the platelet-rich plasma in the process of bone formation. The study concluded that the restorative properties of the PRP could not be demonstrated by of the biochemistry markers of the bone metabolism in the first 70 days of the surgery; the temporal analisys of the bone formation markers tested demonstrated a fall tendency in 35 days with return near to basal levels in 70 days in the two studied groups; there was not a significant correlation between markers and the number of platelets and neither with the area of the cleft and the result of the x-ray examination was not considered conclusive for the presence or not of organized bone trabeculae in the initial phase of formation. / Doutor

Aims: This study uses radiological and clinical evaluations of the healing of endosseous titanium implants presented with different surface characteristics in the clinical situation (paper I-III) and experimentally to describe the early bone healing in maxillary sinus membrane elevation with and without the use of grafting material (paper IV). Material and methods: In paper I, 136 patients were treated with 394 dental implants – 199 were oxidized titanium implants (Nobel Biocare TiUnite) and 195 were turned titanium surface implants (Nobel Biocare Mark III). Implant survival rates were retrospectively investigated after a minimum of five months after functional loading of the implants. At the five-year follow-up (paper II), eight patients were deceased and 128 were invited. Twenty-five patients refrained from participating in the study. The remaining 103 patients (287 implants – 133 with a turned surface and 154 with an oxidized surface) were examined after at least five years of functional loading. Clinical examinations of bleeding on probing (BoP) and pocket depth (PD) were performed. Intraoral radiographs were used to assess marginal bone levels (MBLs). In paper III, 28 patients were subjected to autologous bone graft and delayed implant placement, with a total of 92 dental implants. Thirteen patients received 47 implants with a turned surface and 15 patients received 45 implants with an oxidized surface. After a minimum of five years of functional loading, all patients were clinically examined regarding PD and BoP. The MBL was measured in intraoral radiographs. Cone beam computed tomography (CBCT) was used to evaluate the apical bone level (ABL) of the implants and intra-sinus conditions. The experimental study (paper IV) used nine adult male tufted capuchin primates (Cebus apella). Eight animals were subjected to bilateral maxillary sinus membrane elevation using a lateral replaceable bone window technique. One oxidized dental implant was placed in the residual bone of the sinus floor, protruding into the maxillary sinus cavity on both sides. In four animals, one sinus was left without any additional treatment, while the contralateral sinus was filled with autologous bone grafts from the tibia. In two animals, the implants were inserted under the elevated sinus membrane on both sides. In two animals, the sinus membrane was totally removed bilaterally before placement of implants. The animals were euthanized after 10 (n=4) or 45 (n=4) days. One non-operated animal representing pristine tissue conditions served as the control. The maxillary sinuses with implants were retrieved and further processed to prepare light microscopic ground sections or decalcified sections for immunohistochemical analyses. Results: In paper I seven implants were lost in five patients – six in the maxilla and one in the mandible. All failed implants were Mark III turned implants. The overall implant survival rate was 98.2% with a survival rate of 96.4% for implants with turned surface after a minimum of five months after functional loading. In paper II, one additional oxidized implant failed, giving an overall cumulative survival rate of 94.7 and 99.4%, respectively, after at least five years of functional loading. There was no difference for BoP, PD, or MBL between turned and oxidized implants. A total of two implants, three oxidized and one turned, showed a PD &gt; 3 mm, MBL &gt; 4 mm, and BoP. However, none of these were associated with suppurative infection on examination. In paper III no difference was found between the two implants surfaces used in terms of PD, BoP, MBL, or ABL. Pathological reactions to the sinus membrane were seen in four of the patients (14%). Radiographic signs of sinus pathology were not correlated to either survival rate of the implants or any of the investigated parameters. In the experimental paper IV, bone formation started from the bottom of the sinus floor, sprouting into the granulation tissue along the implant surface under the elevated membrane irrespective of time and surgical technique. Bone formation was not seen in direct conjunction with the sinus membrane. A distinct expression of osteopontin was observed in the serous glands of deeper portion of the lamina propria in direct connection with the elevated sinus membrane and close to the implant within all groups. Conclusion: After more than five years of function in non-grafted patients, oxidized implants had a survival rate higher than turned implants, although this was not statistically significant. No difference was found in MBL, PD, or BoP. Grafting of the maxillary sinus floor with intra- orally harvested bone and delayed placement of either turned or oxidized implants resulted in equally high long-term survival rates, MBL, ABL, and BoP. Pathological findings in the maxillary sinus cavity, in terms of sinus membrane health, are few and not correlated to any of the other investigated parameters. In the experimental study bone formation after sinus membrane elevation with or without additional bone grafts started at the sinus floor and sprouted into the elevated space along the implant surface. Removal of the membrane resulted in less bone formation. The sinus membrane did not seem to present osteoinductive potential in sinus membrane elevation procedures.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:28Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005-12-06Bitstream added on 2014-06-13T18:40:39Z : No. of bitstreams: 1 marchesano_lh_dr_arafcf.pdf: 336354 bytes, checksum: 54de5ce8ee681faefedf0567be191430 (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / O tratamento cirúrgico da fissura congênita do processo alveolar superior compreende o enxerto ósseo, um procedimento bem aceito e de grande importância na restauração da forma e da função perdidas. Associado ao enxerto ósseo tem-se utilizado um produto atóxico, não imunoreativo e de fácil obtenção, denominado plasma rico em plaquetas (PRP). Neste estudo foi analisado o comportamento dos marcadores fosfatase alcalina, fosfatase alcalina isoforma óssea, osteocalcina e fosfatase ácida tartarato resistente em 50 pacientes, com idade entre 10 e 20 anos e que foram submetidos à cirurgia de enxerto ósseo autógeno alveolar pelo serviço de Cirurgia Buco-maxilofacial do Hospital de Reabilitação de Anomalias Craniofaciais da Universidade de São Paulo. O objetivo foi acompanhar de forma sistêmica e em curto período a formação ou reabsorção óssea após a realização do enxerto ósseo alveolar, bem como avaliar a eficácia do uso do plasma rico em plaquetas no processo de formação óssea. O estudo concluiu que as propriedades restauradoras do PRP não puderam ser demonstradas por nenhum dos marcadores bioquímicos do metabolismo ósseo nos primeiros 70 dias do ato cirúrgico; a análise temporal dos marcadores de formação óssea testados demonstrou uma tendência de queda com 35 dias e retorno próximo aos níveis basais com 70 dias do ato cirúrgico nos dois grupos estudados; não houve uma correlação significativa dos marcadores com o número de plaquetas e nem com a área da fissura e o resultado do exame ao raio X foi considerado inconclusivo para a presença ou não de trabeculado ósseo organizado em fase inicial de formação. / The surgical treatment of the congenital cleft of the upper alveolar process understands the bone graft, a well accepted procedure of great importance in the restoration of the lost form and function. Together with the bone graft it is being used a non-toxic, non imunoreactive and easily obtained product, denominated platelet-rich plasma (PRP). In this study it was analysed the behavior of the alkaline phosphatase, bone alkaline phosphatase, osteocalcin and tartrate-resistant acid phosphatase markers in 50 patients, with age between 10 and 20 years and that were undergone to alveolar autogenous bone graft performed by the Bucomaxillofacial Service of the Hospital for Rehabilitation of Craniofacial Anomalies, University of São Paulo. The aim was follow in a sistemic and early way the bone formation or reabsorption after the accomplishment of the alveolar bone graft, as well as to evaluate the effectiveness of the use of the platelet-rich plasma in the process of bone formation. The study concluded that the restorative properties of the PRP could not be demonstrated by of the biochemistry markers of the bone metabolism in the first 70 days of the surgery; the temporal analisys of the bone formation markers tested demonstrated a fall tendency in 35 days with return near to basal levels in 70 days in the two studied groups; there was not a significant correlation between markers and the number of platelets and neither with the area of the cleft and the result of the x-ray examination was not considered conclusive for the presence or not of organized bone trabeculae in the initial phase of formation.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Enxertos ósseos homólogos congelados têm sido documentados apresentando bons resultados clínicos como substituto ao material autógeno nas reconstruções alveolares. Entretanto, dados referentes à incorporação e remodelação destes enxertos não estão disponíveis na literatura. Este estudo tem por objetivo determinar um período ótimo de espera para instalação de implantes em rebordos reconstruídos com enxertos ósseos homólogos em bloco no que se refere à incorporação e reabsorção. 24 pacientes foram submetidos à reconstrução alveolar óssea homóloga previamente à instalação de implantes. Os indivíduos foram alocados randomicamente em um de 3 grupos de acordo com o tempo de espera para o segundo estágio cirúrgico (4, 6 e 8 meses). Análises tomográficas, histológicas e histomorfométricas foram utilizadas a fim de determinar o grau de reabsorção e incorporação dos enxertos nos diferentes intervalos de tempo para cada grupo. Os dados de reabsorção sofrida pelos enxertos demonstraram diferenças estatisticamente significativas para os três intervalos de espera. Da mesma forma, parâmetros histomorfométricos como contagem de osteócitos e quantificação de remanescentes de osso homólogo nas biópsias apresentaram diferenças significativas entre os grupos. De acordo com os dados do presente trabalho, no que diz respeito à remodelação e incorporação, o período mais favorável à instalação dos implantes a curto prazo após recontruções com enxertos homólogos é de 4 meses. / Fresh-frozen homologous bone grafts have been reported achieving good clinical results as a substitute for autogenous bone in alveolar reconstruction. However, data regarding the incorporation and remodeling of these grafts are not available in the literature. The aim of this study is to determine the optimal period for the implant placement in alveolar ridges reconstructed with bone block allografts. 24 patients underwent alveolar ridge reconstruction with homologous bone prior to implant placement. Subjects were randomly assigned into one of three groups according to the waiting time for the second surgical stage (4, 6 and 8 months). Tomographic, histological and histomorphometric analisys were used to determine the rates of grafts resorption and incorporation at different time intervals for each group. Data from graft resorption showed statistically significant differences for the three healing intervals. Similarly, histomorphometric parameters as: osteocytes count and quantification of remaining graft in the biopsies showed significant differences between groups. According to this work, with regard to the remodeling and incorporation, the most favorable the short term period to implant placement after fresh-frozen block allografts ridge reconstruction is 4 months.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Bone defects due to trauma, postoperative and mutilating surgery complications, associated to removal of neoplasia, are part of the routine of hospitals and veterinary clinics. Bone grafts, within all their variants, represent the main viable alternative in the structural correction of great bone losses. Currently, the search for alternatives to correct these problems and the great potential of cellular therapy, have led numerous researchers to ingress into this line of study. The present work aimed to evaluate the influence of the hydration of bone implants conserved in glycerin 98% over their biomechanical resistance; the viability of a bone marrow harvesting protocol, for application in the clinical surgical routine; and the effect of intralesional application of bone marrow mononuclear cell fraction, over the consolidation of graft-host interface of dogs submitted to segmental bone grafting, with bone implants conserved in glycerin 98%. This research was developed in two phases. The first, ex-vivo, in which 108 bone fragments conserved in glycerin 98% were separated in six different groups, according to hydration period, and later were submitted to axial load test for biomechanical resistance evaluation. The second phase, in-vivo, in which 20 mongrel dogs, with mean weight of 13kg, were divided in four different groups according to the type of graft employed and with or without application of bone marrow mononuclear cell fraction. All animals were submitted to a bone marrow harvesting protocol, obtaining a final volume of 5ml kg-1 of body weight. The collected bone marrow was analyzed by means of myelogram and later submitted to isolation of the mononuclear cell fraction by a technique already affirmed in the literature. A diaphyseal femoral bone defect was created and repaired with the same removed segment (groups I and III) or with a bone segment conserved in glycerin 98% (groups II and IV). The bone marrow mononuclear cell fraction, after isolation, was injected via intralesional route in dogs of the treated groups (I and II), whereas the control group (III and IV) received an injection of the same volume, however, of 0.9% sodium chloride solution. The bone consolidation progress of the graft-host interfaces was followed by serial radiographic exams up to 90 days after surgical intervention, whereas the presence of mononuclear cells was followed up to seven days after implantation, by detection of Qtracker-665 nanocrystal fluorescence, used as cell marker. According to the results obtained, it can be concluded that: hydration of bone implant conserved in glycerin 98% does not produce statistically significant alterations in the biomechanical resistance of cortical bone for the different evaluated times. However, the bone mineral density has a close relationship with this property; bone marrow harvesting protocol with reduced volume of 5ml kg-1 of body weight, obtained from different long bones, proved to be adequate for isolation of mononuclear cell fraction and for obtaining a cell button with adequate number of cells and high viability, essential for the success of its therapeutic application; the consolidation of proximal and distal graft-host interfaces at 90 days after surgery no showed clinical and radiographic difference in the groups control and treated with bone marrow mononuclear cell fraction. Nevertheless, it cannot be confirmed that the cellular therapy used in this study is not an effective bone healing adjuvant, as it is believed that the restriction of load deposition on the focus of the fracture, achieved by reduced postoperative exercise, has influenced directly on the result of the consolidation. / As falhas ósseas decorrentes de trauma, complicações pós-operatórias e cirurgias mutilantes, associadas à remoção de neoplasias, fazem parte da rotina dos hospitais e clínicas veterinárias. Os enxertos ósseos, dentre todas as suas variantes, representam a principal alternativa viável na correção estrutural de grandes perdas ósseas. Na atualidade, a busca por alternativas para corrigir estes problemas e o grande potencial da terapia celular, tem levado inúmeros pesquisadores a ingressar nesta linha de estudo. No presente trabalho, buscou-se avaliar a influência da hidratação de implantes ósseos conservados em glicerina 98% sobre a resistência biomecânica dos mesmos; a viabilidade de um protocolo de colheita de medula óssea, para aplicação na rotina clínico-cirúrgica; e o efeito da aplicação intralesional da fração de células mononucleares da medula óssea, sobre a consolidação da interface enxerto-hospedeiro de cães submetidos à enxertia óssea segmentar, com implantes ósseos conservados em glicerina 98%. Esta pesquisa foi desenvolvida em duas fases. A primeira, ex-vivo, onde 108 fragmentos ósseos conservados em glicerina 98% foram separados em seis diferentes grupos, de acordo com o período de hidratação, sendo posteriormente submetidos a teste de compressão axial para avaliação de sua resistência biomecânica. A segunda fase, in-vivo, onde 20 cães sem raça definida e peso médio de 13kg, foram separados em quatro diferentes grupos de acordo com o tipo de enxerto empregado e com a aplicação ou não da fração de células mononucleares da medula óssea. Todos os animais foram submetidos a um protocolo de colheita de medula óssea, obtendo-se um volume final de 5ml kg-1 de peso corporal. A medula óssea colhida foi analisada por meio de mielograma e posteriormente submetida ao isolamento da fração de células mononucleares por técnica já consagrada na literatura. Um defeito ósseo femoral diafisário foi criado e reparado com o próprio segmento removido (grupos I e III) ou com um segmento ósseo conservado em glicerina 98% (grupos II e IV). A fração de células mononucleares da medula óssea, após isolamento, foi injetada por via intralesional nos cães dos grupos tratados (I e II), enquanto os grupos controle (III e IV) receberam a injeção do mesmo volume, porém, de solução de cloreto de sódio a 0,9%. A progressão da consolidação óssea das interfaces enxerto-hospedeiro foi acompanhada por exames radiográficos seriados até os 90 dias após a intervenção cirúrgica, enquanto a presença das células mononucleares, até os primeiros sete dias após a implantação, foi acompanhada pela detecção da fluorescência do nanocristal Qtracker-665, utilizado como marcador celular. De acordo com os resultado obtidos, pode-se concluir que: a hidratação do implante ósseo conservado em glicerina 98%, não produz alteração estatisticamente significativa na resistência biomecânica do osso cortical para os diferentes tempos avaliados. Contudo, a densidade mineral óssea possui estreita relação com esta propriedade; O protocolo de colheita de medula óssea em volume reduzido a 5ml kg-1 de peso corporal, obtidos de diferentes ossos longos, demonstrou-se adequado para isolamento da fração de células mononucleares e obtenção de um botão celular com adequado número de células e alta viabilidade, essenciais ao sucesso de sua aplicação terapêutica; a consolidação das interfaces enxerto-hospedeiro proximal e distal aos 90 dias após a cirurgia não apresentou diferença clínica e radiográfica entre os grupos controle e tratados com a fração de células mononucleares da medula óssea. Porém, não se pode afirmar que a terapia celular empregada neste estudo, não seja bom adjuvante da cicatrização óssea, pois se acredita, que a restrição na deposição de carga no foco de fratura, proveniente do reduzido exercício pós-operatório, tenha influenciado diretamente no resultado da consolidação.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:46:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 741759 bytes, checksum: aa0908de8ca0efc968041d218848f7b4 (MD5) Previous issue date: 2005-08-26 / Centro Universitário Vila Velha / The bone morphogenetic proteins (BMPs) are growth promoters capable of inducing the formation of bone and cartilage, promoting quimiotaxy and differentiation of mesenchymal cells in the place where they were implanted, but for an effective osteoconduction they need a carrier substance. When implanted in animal tissues, the BMPs link to specific receptors located in the surface of the osteoinduced cells, they activate the SMAD cytoplasmatic proteins (mothers against decapentaplegic proteins) and, in the nucleus of the receiver cell, they begin to regulate the transcription of genes related with calcification and bone formation. In the present study, aspects of clinical-surgical, macroscopic and radioscopic of the bone repair were evaluated after the implantation of the BMPs in different concentrations, carried by autogenous bone graft, in defects created on skulls of 20 adult-young female rabbits, randomizedly separated on five experimental groups that correspond to five periods of observations (7, 15, 21, 35 and 60 days). After the exposure of bones skull, six bone defects were performed on the fronto-parietal region of each animal. The defect I wasn´t filled, the II was completed filled with approximately 3,0 mg of autogenous bone graft and the defects III, IV, V and VI were filled with autogenous bone graft associed with 0,5; 1,0; 2,0 and 5,0 mg of BMPs respectively. There wasn´t clinical complications after the surgery. In the macroscopic evaluations, post-mortem, it was observed that independently of the treatment period of the defects, the bony filling began starting from the borders to the center and from the bottom to the surface of the flaws. The bony filling of defect I was the smallest found when compared with the others defects, in all the observation periods. It was also verified that until 2,0 mg the bigger the concentration of BMPs used, better was bone cover. The radiographic assessment did not permit the classification of the grade of bone filling and through the statistic analyses, it was comproved that there are significant differences between the treatments. It was verified microscopically in the first evaluations, at the seventh day, that the bone growth started from the borders and from the bottom of the lesion, with mobilization and differentiation of cells deriving from the periosteum and of the meninges, respectively, and in the subsequent evaluations, the osteoblastic activity also derived from "ossification islands" to ossification centers, located in the center of the flaw. The trabecular formation increased proportionally with the concentration of BMPs used, and the apposition and bone organization increased proportionally with the time of observation. The presence of cartilaginous tissue was verified in almost all the flaws. The best relation of quantities of autogenous bone graft and BMPS were 3,0 mg and 2,0 mg, respectively, and the association of this protein with this graft contributed to the formation of new bone tissue, promoting larger mobilization, differentiation and cellular organization. It also abbreviated the time of bone formation, suggesting an endochondral ossification process. / As proteínas morfogenéticas ósseas (BMPs) são promotores de crescimento capazes de induzir a formação de osso e cartilagem, promovendo a quimiotaxia e diferenciação de células mesenquimais para o local onde foram implantadas, mas para uma efetiva osteocondução necessitam de uma substância carreadora. Quando implantadas em tecidos animais, as BMPs se ligam a receptores específicos existentes na superfície das células osteoinduzidas, ativam as proteínas citoplasmáticas SMAD (mothers against decapentaplegic proteins) e, no núcleo da célula receptora, passam a regular a transcrição de genes relacionados com calcificação e formação óssea. No presente estudo, foram avaliados os aspectos clínico-cirúrgicos, macroscópicos, radiográficos e microscópicos da reparação óssea, após implantação de BMPs em diferentes concentrações, carreadas por enxerto ósseo esponjoso, em falhas criadas no crânio de 20 coelhas adultas-jovens, separadas aleatoriamente em cinco grupos experimentais, que corresponderam a cinco períodos de observação (7, 15, 21, 35 e 60 dias). Após a exposição dos ossos do crânio, foram realizadas seis falhas ósseas na região fronto-parietal de cada animal. A falha I não foi preenchida, a II foi completamente preenchida com aproximadamente 3,0 mg de autoenxerto ósseo esponjoso e as falhas III, IV, V e VI foram preenchida com o autoenxerto associado a 0,5; 1,0; 2,0 e 5,0 mg de BMPs, respectivamente. Não foram observadas complicações clínicas após a cirurgia. Nas avaliações macroscópicas, postmortem, verificou-se que independentemente do período de tratamento das falhas, o preenchimento ósseo iniciava-se a partir das bordas para o centro e do fundo para a superfície das falhas. O preenchimento ósseo das falhas I foi o menor encontrado quando comparado com as demais falhas, em todos os períodos de observação. Constatou-se também que até os valores de 2,0 mg, quanto maior a concentração de BMPs utilizada, maior foi a cobertura óssea. A avaliação radiográfica não permitiu a classificação do grau de preenchimento ósseo e por meio de análises estatísticas, foi comprovado que há diferenças significativas entre os tratamentos. Microscopicamente verificou-se nas primeiras avaliações, aos sete dias, que o preenchimento ósseo iniciava-se a partir das bordas e do fundo da lesão, com mobilização e diferenciação de células provenientes do periósteo e das meninges, respectivamente e, nas avaliações subseqüentes, a atividade osteoblástica provinha também de ilhas de ossificação , semelhantes a centros de ossificação, localizadas no centro da falha. A formação trabecular aumentou proporcionalmente com a concentração utilizada de BMPs e a aposição e organização óssea aumentaram proporcionalmente com o tempo de observação. Em quase todas as falhas foi verificada a presença de tecido cartilaginoso. A melhor relação de quantidade de autoenxerto ósseo esponjoso e BMPs foi de 3,0 mg e 2,0 mg, respectivamente e a associação desta proteína com esse enxerto contribuiu para a formação de novo tecido ósseo, promovendo maior mobilização, diferenciação e organização celular e, abreviou o tempo de formação óssea, sugerindo processo de ossificação endocondral. Os trabalhos apresentados como parte integrante desta tese estão seguindo as normas de publicação do Arquivo Brasileiro de Medicina Veterinária e Zootecnia da Universidade Federal de Minas Gerais, indexada ao ISI, AGRIS, BIOSIS, CAB, CAS, MEDLARS, Referatvnyi Zhumal, Bibliografia Brasileira de Medicina Veterinária e Zootecnia e LILACS. ISSN 01020935.