Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:21Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-11-01Bitstream added on 2014-06-13T18:31:26Z : No. of bitstreams: 1 sandrini_gb_me_jabo.pdf: 333023 bytes, checksum: 103aefb6c00d464c83f63b4a78d2cb4c (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Bactérias do gênero Enterobacter sp. são conhecidas por produzir ácidos orgânicos e solubilizar fosfato inorgânico presente no solo. O objetivo do trabalho foi caracterizar a enzima fosfatase ácida ligada à membrana de Enterobacter sp. isolada de raízes de orquídeas Cyrtopodium paludicolum. A enzima ligada à membrana foi purificada por centrifugação a 100.000 x g durante uma hora a 4ºC. A atividade da p-nitrofenilfosfatase (PNFFásica) foi determinada descontinuamente a 37°C. A bactéria foi inoculada em meio de cultura líquido e a enzima foi estritamente regulada pelo fósforo, atingindo expressão máxima a 5 mM, em pH ótimo aparente de 3,5. Em relação aos inibidores avaliados, verificouse que o cobre apresentou inibição não-competitiva. Já o arsenato, vanadato e fosfato inibiram competitivamente a enzima, demonstrando que são análogos estruturais. A enzima exibiu comportamento “michaeliano” para a hidrólise do PNFF (atividade específica de 30,67 U/mg, Km = 0,55 mM e n = 1). Interações sítio-sítio foram observadas para a hidrólise do ATP (atividade específica de 11,2 U/mg, Km = 0,62 mM e n = 1,8) e para a hidrólise do pirofosfato (atividade específica de 15,64 U/mg, Km = 0,89 mM e n = 2,8). Os valores obtidos pela inativação térmica demonstraram que a enzima manteve-se estável a 45°C e a atividade enzimática diminuiu com o aumento da temperatura. Os resultados sugerem que a produção da fosfatase ácida promove aumento na disponibilidade dos nutrientes para as plantas, solubilizando minerais insolúveis através da produção de enzimas, sendo um dos mecanismos que esses microrganismos utilizam para solubilização de fosfato mineral / Bacteria of the genus Enterobacter sp. are known as organic acid producers and are able to solubilize inorganic phosphate which is present in soil. The aim of this work was to characterize the cell-wall associated acid phosphatase of Enterobacter sp. symbionts of plants and were isolated from roots of orchid Cyrtopodium paludicolum. The enzyme was obtained by centrifugation at 100.000 x g, for one hour at 4ºC and the activity from p-nitrophenilphosphatase (PNPPase) was determined at 37°C Culture medium was inoculate d with bacteria and supplemented with phosphorus. Under optimal conditions (5mM phosphorus, pH 3.5) the enzyme was expressed. The activity from p-nitrophenylphosphatase (PNPPase) was determined at 37°C. The enzyme presen ted Michaelis behavior for the hydrolysis of PNPP (specific activity of 30.67 U/mg, Km = 0.55 mM and n = 1). Besides site-site interactions were observed for ATP hydrolysis (specific activity of 11.2 U/mg, Km = 0.62 mM and n = 1.8) and pyrophosphate hydrolysis (specific activity of 15.64 U/mg, Km = 0.89 mM and n = 2.8). It was observed that enzyme activity decreased with increasing temperature. Inhibition studies revealed that copper inhibited the enzyme in a non-competitive manner. In contrast arsenate, and vanadate which are structural analogues of phosphate presented a competitive inhibition. The results suggest that plants expressing acid phosphatase are able to solubilize mineral phosphate and are able to hydrolyse insoluble minerals thereby increasing the availibilty of nutrients which can be used by the plant

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:22Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-03-27Bitstream added on 2014-06-13T19:55:55Z : No. of bitstreams: 1 nakagi_vs_me_jabo.pdf: 402591 bytes, checksum: bde6a86608bbb9a9d68eb164ee5cc8ca (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / A produção de fosfatase ácida extracelular pelo fungo Penicillium implicatum foi estudada em diferentes concentrações de fosfato no meio de cultivo e na presença e ausência de agitação. A produção de fosfatase ácida extracelular repressível foi cerca de 15 vezes maior em meio agitado e na presença de 50 ìM de KH2PO4 quando comparada ao tratamento controle. A enzima foi purificada 19 vezes em Fenil Sepharose CL-4B, e apresenta uma atividade específica de 27,3U/mg. A enzima é um monômero de massa molecular (Mr) da ordem de 45KDa. O pH ótimo aparente das atividades p-NFFásica e de pirofosfatase é de 5,5. Os íons Zn, Mg, e Co; EDTA, tartarato e iodoacetamida exerceram pouca ou nenhuma influência sobre a atividade da fosfatase ácida de P. implicatum; enquanto que a enzima foi inibida por molibdato e arsenato. A enzima apresenta atividade pirofosfatásica de 297,78U/mg a 4mM de pirofosfato e pH 5,5. A cinética de hidrólise simultânea dos substratos PNFF e PPi mostrou que ambos os substratos ligaram-se ao mesmo sítio. A aplicação da fosfatase na hidrólise de fitato em ração animal sugere uma forma de disponibilizar fosfato para o organismo e também minimizar o impacto ambiental. / The extracellular production of acid phosphatase by Penicillium implicatum was studied at different concentrations of phosphate and in the presence and absence of agitation growth medium. The production of extracellular repressible acid phosphatase was about 15-fold highest in agitated medium with 50ì M of KH2PO4 when compared to the control treatment. The enzyme was purified 19-fold on Phenyl Sepharose CL-4B and showed specific activity of 27,3U/mg. The enzyme is a monomer with molecular weight (Mr) of ~ 45KDa. The optimum pH of the p-NPP and pyrophosphate activities was 5,5. The Zn, Mg, Ca, Mn and Co ions, EDTA and tartarate had no effects; but it was inhibitored by arsenate and molybdate. The pyrophosphate activity was 298U/mg at 4mM and pH 5,5. The kinetics data of simultaneous p-NPP and pyrophosphate hydrolysis, showed that both substrates had bound the same active site. The phosphatase application on fitate hydrolysis in animal food suggests a mean to dispose phosphate to the organism and also to minimize the environmental impact.

Orientador: João Martins Pizauro Júnior / Banca: Maria Inês Tiraboschi Ferro / Banca: Pietro Ciancaglini / Resumo: A produção de fosfatase ácida extracelular pelo fungo Penicillium implicatum foi estudada em diferentes concentrações de fosfato no meio de cultivo e na presença e ausência de agitação. A produção de fosfatase ácida extracelular repressível foi cerca de 15 vezes maior em meio agitado e na presença de 50 ìM de KH2PO4 quando comparada ao tratamento controle. A enzima foi purificada 19 vezes em Fenil Sepharose CL-4B, e apresenta uma atividade específica de 27,3U/mg. A enzima é um monômero de massa molecular (Mr) da ordem de 45KDa. O pH ótimo aparente das atividades p-NFFásica e de pirofosfatase é de 5,5. Os íons Zn, Mg, e Co; EDTA, tartarato e iodoacetamida exerceram pouca ou nenhuma influência sobre a atividade da fosfatase ácida de P. implicatum; enquanto que a enzima foi inibida por molibdato e arsenato. A enzima apresenta atividade pirofosfatásica de 297,78U/mg a 4mM de pirofosfato e pH 5,5. A cinética de hidrólise simultânea dos substratos PNFF e PPi mostrou que ambos os substratos ligaram-se ao mesmo sítio. A aplicação da fosfatase na hidrólise de fitato em ração animal sugere uma forma de disponibilizar fosfato para o organismo e também minimizar o impacto ambiental. / Abstract: The extracellular production of acid phosphatase by Penicillium implicatum was studied at different concentrations of phosphate and in the presence and absence of agitation growth medium. The production of extracellular repressible acid phosphatase was about 15-fold highest in agitated medium with 50ì M of KH2PO4 when compared to the control treatment. The enzyme was purified 19-fold on Phenyl Sepharose CL-4B and showed specific activity of 27,3U/mg. The enzyme is a monomer with molecular weight (Mr) of ~ 45KDa. The optimum pH of the p-NPP and pyrophosphate activities was 5,5. The Zn, Mg, Ca, Mn and Co ions, EDTA and tartarate had no effects; but it was inhibitored by arsenate and molybdate. The pyrophosphate activity was 298U/mg at 4mM and pH 5,5. The kinetics data of simultaneous p-NPP and pyrophosphate hydrolysis, showed that both substrates had bound the same active site. The phosphatase application on fitate hydrolysis in animal food suggests a mean to dispose phosphate to the organism and also to minimize the environmental impact. / Mestre

Orientador: Hiroshi Aoyama / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-20T12:05:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ferreira_CarmenVerissima_M.pdf: 6901592 bytes, checksum: ae281be837b3a7c042cf49f019d3a59e (MD5) Previous issue date: 1995 / Resumo: Quatro frações contendo atividade fosfatásica ácida (AP1, AP2, AP3A e AP3B) foram detectadas e purificadas à partir do extrato solúvel de sementes de soja quiescentes através da precipitação com sulfato de amônio e acetona e cromatografias de troca iônica, filtração em gel e afinidade. Em coluna de SP-Sephadex a fração APl foi eluída com o tampão de equilíbrio (tampão acetato 0,01 M, pH 5,0), enquanto as frações AP2 e AP3 foram eluídas com 0,05 e 0,3 M de fosfato, respectivamente. As frações AP3A e AP3B foram obtidas da fração AP3 aplicada em coluna de DEAE-Sephadex. A atividade enzimática foi determinada utilizando p-NPP como substrato em tampão acetato 100 mM, pH 5,0, a 37°C. Atividades específicas de 50, 10, 0,84 e 2 'um¿ .min-1.mg-1 foram obtidas para Apl (purificação de 910 vezes), AP2 (180 vezes), AP3A (16 vezes), e AP3B (36 vezes), respectivamente. Massas moleculares relativas de 51.000, 58.000, 52.000 e 30.000 foram determinadas para APl, AP2, AP3A e AP3B, respectivamente, através de filtração em gel na coluna SW 300 (Waters Protein Glass) acoplada a um sistema de LC. Das 4 frações, somente a APl se ligou à coluna de conA-Sepharose, embora provavelmente as outras frações também tenham carboidratos em suas estruturas. O perfil de eluição nas cromatografias de troca iônica mostrou que as 4 frações apresentavam pI diferentes. Após a purificação, foram realizados estudos cinéticos para as 4 frações de fosfatases ácidas. A fração APl apresentou uma alta atividade em pH 4,5-6,0, enquanto para as outras frações, a faixa de pH ótimo foi 5,0-6,5. APl e AP2 exibiram maior especificidade pelo substrato do que AP3A e AP3B. Os valores de Km foram determinados para p-NPP, Tyr-P e PPi, em pH 5,0 a 37°C. As fosfatases ácidas apresentaram os seguintes valores de Km: APl (p-NPP - 0,49, PPi - 0,51 e Tyr-P - 1,14 mM); AP2 (p-NPP - 0,38, PPi - 1,33 e Tyr-P - 1,14 mM); AP3A (p- NPP - 0,20, PPi - 0,16 e Tyr-P - 0,19 mM) e AP3B (p-NPP - 0,086, PPi - 0,17 e Tyr-P - 0,17 mM). A atividade das 4 frações não foi afetada na presença de EDTA, DTT, GSH e 2-mercaptoetanol. O fosfato, fluoreto, vanadato, molibdato e os cátions CU2+e Zn2+,inibiram as 4 frações, quando se utilizou o p-NPP como substrato. Ao contrário de outras fosfatases ácidas de planta, as 4 frações apresentaram alta atividade em temperatura acima de 80°C, durante 10 minutos de incubação. No entanto, quando as mesmas foram pré-incubadas a 80°C houve perda da atividade após 5 min., indicando portanto que a presença do substrato é importante para a manutenção da atividade nesta temperatura. Nenhuma das frações catalizou a reação de transfosforilação, uma vez que na presença de aceptores de fosfato (glicerol, metanol e etanol) não ocorreu aumento da atividade enzimática. Os resultados obtidos mostram que as 4 frações não apresentaram diferenças significativas em suas propriedades cinéticas / Abstract: Four fractions of acid phosphatase (API, AP2, AP3A,and AP3B) have been detected and purified from soybean seeds soluble extract through ammonium sulfate and acetone precipitations, and ion exchange, gel filtration and concanavalin Asepharose chromatographies. API was eluted with equilibrium buffer, while AP2 and AP3 were eluted with 0.05 and 0.3 M inorganic phosphate, respectively, from SP-Sephadex column, AP3A and AP3B were the enzymatic fractions originated from AP3 applied on the DEAE-Sephadex column. The enzyme activity was determined using p-nitrophenylphosphate as substrate in 100mM acetate buffer, pH 5, at 37°C. Specific activity values of 50, 10, 0.84 and 2 Umol.min-1.mg-w1 ere obtained for API (910-fold purification), AP2 (180-fold), AP3A (16-fold), and AP3B (36-fold), respectively.The relative molecular mass of API, AP2, AP3A and AP3B were determined by 300 SW Waters Protein Glass column, were found to be 51,000, 58,000, 52,000 and 30,000, respectively. The four acid phosphatase forms purified seemed to be glycoproteins, however, only AP1 could bind to concanavalina A Sepharose. Ion exchange chromatography elution pattems showed that soybean seed acid phosphatases essentially differed in relation to their isoelectric point. The kinetic properties of the four fractions of soybean seeds acid phosphatases were studied. API presented a high activity at pH 4.5-6.0, while for the other fractions the optimum pH range was 5.0-6.5. API and AP2 exhibited higher substrate specificity than AP3A and AP3B. The Km values were determined for p-nitrophenylphosphate, tyrosinephosphate and inorganic pyrophosphate, at pH 5.0 and 37°C. The acid phosphatases presented the following apparent Km values: API (pNPP -0.49, PPi -0.51 and TyrP - 1.14mM);AP2 (pNPP- 0.38, PPi - 1.33 and TyrP - 1.14 mM); AP3A (pNPP - 0.20, PPi - 0.16 and TyrP - 0.19 mM) and AP3B (pNPP - 0.086, PPi - 0.17 and TyrP - 0.17 mM). Using pNPP as substrate, no effect was observed in the acid phosphatases activity in the presence of EDTA, dithiothreitol, glutathione and 2-mercaptoethanol. The four fractions were inhibited by inorganic phosphate, fluoride, vanadate, molybdate, CU2+and Zn2+.In contrast to other plant acid phosphatases alI the soybean seeds enzymatic forms presented high activities above 80°C, during 10 min incubation. However the enzymes were inactivated after 5 min when pre-incubated at 80°C in the absence of substrate. The soybean seeds acid phosphatases did not catalyze the transphosphorylation reaction since no stimulation was observed with inorganic phosphate acceptors (glycerol, methanol and ethanol). Our results showed that no significative differences could be observed on the kinetic properties for the four soybean seed acid phosphatase fractions / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Ciências Biológicas

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:22Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-03-29Bitstream added on 2014-06-13T19:35:22Z : No. of bitstreams: 1 sato_vs_me_jabo.pdf: 522350 bytes, checksum: 34c42a9a6f174fa4f2002e3d48b07c50 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A capacidade de bactérias endofíticas em solubilizar fosfato inorgânico é alvo de grande interesse por parte dos microbiologistas, uma vez que as fosfatases são responsáveis por hidrolisar compostos orgânicos produzindo fósforo solúvel. Dessa forma, a fosfatase ácida ligada à membrana (MBAP) foi obtida a partir de Enterobacter sp. isolada de raízes de Cattleya walkeriana (Orchidaceae) e identificada pelo seqüenciamento do gene 16S rRNA. A expressão da enzima mostrou-se estritamente regulada pelo fósforo (expressão ideal em 7 mm). O pH ótimo aparente (3,5) não foi afetado pela concentração de p-nitrofenilfosfato. Em pH 3,5, a enzima é uma fosfomonidrolase inespecífica capaz de hidrolisar os substratos PNPP (61,2 U/mg), ATP (19,7 U/mg), e o pirofosfato (29,7 U/mg), com K0.5 de 0,06 mM, 0,11 mM e 0,08 mM, respectivamente. A enzima exibi cinética Michaelina para o pNPP (n=1,2). Para o ATP e o pirofosfato interações sítio-sítio foram observadas com n=1,6 e 2,3, respectivamente. Os íons de magnésio foram potentes estimuladores (K0.5=2,2 mM), enquanto o arsenato e o fosfato foram potentes inibidores competitivos. A atividade PNPPase foi inibida pelo EDTA, mas não pelo cálcio, levamisol, zinco, cobalto e phidroximercuribenzoato. A entalpia de inativação térmica foi da ordem de 77,5 kcal.mol- 1. Os resultados sugerem que a produção da fosfatase ácida ligada à membrana representa um mecanismo de solubilização do fosfato mineral aumentando a disponibilidade de nutrientes para as plantas / The ability of endophytic bacteria in solubilizing inorganic phosphate is of great interest by microbiologists since phosphatases are responsible for catalyzing the hydrolysis of organic compounds producing soluble phosphorus. Thus, the membranebound acid phosphatase (MBAP) was obtained from Enterobacter sp. isolated from Cattleya walkeriana (Orchidaceae) roots and identified by the 16S rRNA gene sequencing analysis. The enzyme expression was demonstrated to be strictly regulated by phosphorus (optimal expression at 7 mM). The enzyme was obtained by centrifugation at 100.000g for 1 h at 4ºC. The apparent optimal pH (3.5) was not affect by p-Nitrophenyl phosphate concentration. At pH 3.5, the enzyme showed a broad substrate specificity hydrolyzing different substrates such as PNPP (61.2 U/mg), ATP (19.7 U/mg), and pyrophosphate (29.7 U/mg), with K0.5 values of 0.06 mM, 0.11 mM and 0.08 mM, respectively. The hydrolysis of PNPP by the enzyme exhibited Michaelian kinetics with n= 1.2. For ATP and pyrophosphate site-site interactions were observed with n= 1.6 and 2.3, respectively. Although magnesium ions were stimulatory (K0.5= 2.2 mM), arsenate and phosphate were a powerful competitive inhibitor. The PNPPase activity was inhibited EDTA but not by calcium, levamisole, zinc, cobalt and phydroxymercurybenzoate. The ΔH for thermal inactivation was 77.5 kcal.mol-1. Our results suggest that the production of a membrane-bound acid phosphatase might be one mechanism of mineral phosphate solubilization turn it´s nutrients availability to plants

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:40Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-10-24Bitstream added on 2014-08-13T18:01:27Z : No. of bitstreams: 1 000747308_20151025.pdf: 50918 bytes, checksum: 2f9471b48a639ddfac8ff68f077cd7c6 (MD5) Bitstreams deleted on 2015-11-03T14:39:14Z: 000747308_20151025.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2015-11-03T14:40:16Z : No. of bitstreams: 1 000747308.pdf: 853831 bytes, checksum: 3cafe2fda59448cec774287e9b1b29d0 (MD5) / O manejo adequado do P é importante na cana-de-açúcar podendo interferir em todo o desenvolvimento da cultura, elevando, portanto os retornos econômicos com o seu cultivo. Objetivou-se avaliar o efeito de fontes de P e torta de filtro na cana-planta, a partir de avaliações do teor de P no solo e na planta, acúmulo do nutriente na folha, colmo e parte aérea (folha e colmo), trocas gasosas, fosfatase ácida, produção de colmos. O experimento foi realizado em um Latossolo Vermelho Amarelo Distrófico, textura média, no munícipio de Itajobi-SP. O delineamento experimental foi em blocos ao acaso, com três repetições, dispostos em esquema fatorial 3x4x2 sendo três fontes de P (superfosfato triplo, fosfato natural reativo Bayóvar e fosfato natural de Araxá), quatro doses (0, 90, 180 e 360 kg de P2O5 ha-1), na ausência e na presença da torta de filtro (7,5 t ha-1, base seca). O efeito das doses de fósforo no aumento do teor de P no solo, na folha, no acúmulo na planta destaca-se na presença da torta de filtro em relação a sua ausência. No entanto, o uso da torta de filtro sem a adubação fosfatada foi suficiente para propiciar a maior produção de colmos da cana-planta. O uso da maior dose de superfosfato triplo ou a associação da torta de filtro com esta fonte propiciou as maiores reduções na atividade da fosfatase ácida. O uso da maior dose de fósforo aumentou a atividade da fotossíntese, condutância estomática e transpiração nas plantas de cana-de-açúcar / Proper management of phosphorus is important in cane sugar and may interfere with the whole development of culture, raising therefore the economic returns to its cultivation. This study aimed to evaluate the effect of sources of phosphorus and filter cake on the cane, from assessments of P content in soil and plant P, accumulation in leaves, stalks and canopy (leaf and stalk), gas exchange, acid phosphatase stalk production. The experiment was conducted on a Dystrophic Red Yellow Latosoil, medium texture, in the city of Itajobi-SP. The experimental design was a randomized block design with three replications in a factorial 3x4x2 with three phosphorus sources (triple superphosphate, natural Bayóvar reactive phosphate and natural Araxá phosphate), four doses (0, 90, 180 and 360 kg of P2O5 ha-1) in the absence and in the presence of filter cake (7,5 t ha-1, dry basis). The effect of increasing doses of phosphorus in the P content in soil, leaf, accumulation in the plant stands out in the presence of the filter cake in relation your absence. However, the use of filter cake without phosphorus was sufficient to provide the highest stalks yield of sugarcane. The use of higher dose of triple superphosphate or the combination of the filter cake with this source provided the greatest reductions in acid phosphatase activity. The use of higher dose of phosphorus increased the activity of photosynthesis, stomatal conductance and transpiration in plants of cane sugar

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:37Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-09-19Bitstream added on 2014-06-13T18:45:37Z : No. of bitstreams: 1 000740033.pdf: 1372910 bytes, checksum: 6a08312b779cfdefd59b787ad4b6c7ed (MD5) / A adubação fosfatada no sulco de plantio da cana-de-açúcar, com fertilizante mineral associado a resíduo orgânico, apresenta-se como alternativa para aumentar a taxa de recuperação do fósforo (P) pelas plantas. Objetivou-se avaliar os efeitos de doses e fontes de P, na ausência e na presença de torta de filtro, sobre o P no solo, estado nutricional e a produtividade da cana planta cultivada em Argissolo e em Latossolo. Foram realizados dois ensaios durante o ano agrícola 2012/2013 no estado de São Paulo, em áreas com baixos teores de P. Utilizaram-se três fontes (fosfato de Araxá, fosfato Bayóvar e superfosfato triplo) e quatro doses de P (zero; 90; 180 e 360 kg ha-1 de P2O5), na ausência e na presença de 7,5 t ha-1 de torta de filtro (base seca). Os tratamentos foram aplicados no sulco de plantio da cana-deaçúcar. Avaliaram-se as variáveis de crescimento aos quatro e aos seis meses após a brotação, a disponibilidade de P no solo aos seis meses após o plantio, o teor foliar de macro e micronutrientes aos quatro e aos oito meses após a brotação, a atividade da fosfatase ácida foliar aos oito meses após a brotação, a produtividade de palhada e de colmos e o acúmulo de fósforo pelas plantas aos 12 meses após a brotação, assim como a qualidade tecnológica da cana-de-açúcar. A aplicação de doses de P, independentemente da fonte, aumentou a disponibilidade do nutriente no solo, o crescimento da cana-de-açúcar, melhorou a nutrição fosfatada da cana planta e resultou em aumento de produtividade, no entanto, não influenciou a qualidade tecnológica. A determinação do teor de P no solo pelo método resina mostrou-se mais adequado que o remanescente. A diagnose foliar em P pode ser realizada seguindo ambos os critérios de recomendação. A atividade da fosfatase ácida não demonstrou eficiência no diagnóstico nutricional em P. Em ambos os solos os efeitos... / Phosphorus fertilization in sugarcane planting furrow with mineral fertilizer combined with organic waste is presented as an alternative to increase the rate of recovery of phosphorus by plants. The aim of the study was to evaluate the effects of different phosphorus rates and sources, in the absence or presence of filter cake on phosphorus in soil, nutritional status and productivity of sugarcane crop grown in Ultisol and Oxisol. Two experiments were conducted during the agricultural year 2012/2013 in the state of São Paulo, in areas with low levels of phosphorus. Three phosphorus sources were used (triple superphosphate, Araxa rock phosphate and Bayovar rock phosphate) and four application rates (0, 90, 180 and 360 kg ha-1 of P2O5) in the presence or absence of filter cake (7.5 t ha-1, dry basis). Treatments were applied in sugarcane planting furrow. The growth variables were evaluated at four and six months after sprouting, the availability of phosphorus in soil at six months after planting, the leaf content of macro and micronutrients at four and eight months after sprouting, the activity of leaf acid phosphatase at eight months after sprouting, the productivity of straw and stalks and phosphorus accumulation by plants at 12 months after planting, as well as the sugarcane technological quality. The application rates of phosphorus, regardless of source, increased this nutrient availability in soil, the growth of the sugarcane, improved phosphorus nutrition of sugarcane plant and resulted in increased productivity, although, it did not influence the technological quality. The determination of phosphorus in soil by the resin method was more suitable than the remaining. Leaf phosphorus analysis can be performed following both criteria of sampling recommendation. The acid phosphatase activity showed no efficiency in diagnosing nutritional phosphorus. In both soil treatment effects were ...

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:22Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-08-11Bitstream added on 2014-06-13T20:56:20Z : No. of bitstreams: 1 rombola_th_me_jabo.pdf: 290913 bytes, checksum: 08f244b9cd35a229582ac7563c4b4ff9 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Espécies de Burkholderia filogenéticamente distantes do complexo B. cepacia, são versáteis solubilizadores de minerais insolúveis, através da produção de ácidos, viabilizando nutrientes para as plantas. Descrevemos a purificação e caracterização da fosfatase ácida ligada à membrana, produzida pela bactéria do gênero Burkholderia, isolada de solo agrícola em Ponta grossa-PR-BRASIL, e identificada através da análise do 16s rDNA. A expressão da enzima se mostrou estritamente dependente ao fósforo (expressão ótima a 5 mM). A enzima ligada à membrana foi purificada por ultracentrifugação a 100.000g por 1 hora a 4°C e testada com atividade enzimática para p-nitrofenilfosfato (PNFF) e Pirofosfato. O pH ótimo da enzima foi 6 e não foi afetado pela concentração de PNFF. Em pH 6 a hidrolise do PNFF seguiu os seguintes parâmetros cinéticos com n=1.5, Vm= 103.8 U.mg-1 e K0,5=0,06 mM em uma faixa de 0,003 e 10 mM de PNFF. Estudos do pH sobre os parâmetros cinéticos demonstraram 26 pontos de variação na faixa de 3,5 a 6 e em seguida diminui até pH 8 enquanto K0,5 não mostrou variação nesta faixa. O H para hidrólise do PNFF foi de 5,74 kcal.mol-1. A atividade PNFFase foi inibida pelo arsenato e Cálcio, mas não por levamisol, EDTA, zinco e cobalto. A hidrolise do pirofosfato na presença de 2 mM de MgCl2 seguiu os parâmetros cinéticos de Michaelis-Menten” com Km= 0.142 mM e Vm= 237 U.mg-1.Os resultados sugerem que a produção da fosfatase ácida ligada à membrana pode ser um mecanismo de solubilização de fosfato mineral por essa bactéria. / Burkholderia species phylogenetically greatly distant from the B. cepacia complex species are versatile organisms that solubilize insoluble minerals through the production of acids, increasing the availability of nutrients to plants. Here we describe the purification and characterization a membrane-bound acid phosphatase produced by bulkholderia isolated from an agricultural soil in Ponta grossa-PR-BRASIL and identified through analysis of the 16S rDNA gene. The expression of this enzyme was demonstrated to be strictly regulated by phosphorus (optimal expression at 5 mM). The membrane bound enzyme was purified by centrifugation at 100.000g for 1 h at 4ºC and the enzyme was assayed for p-Nitrophenyl phosphatase (PNPPase) and pyrophosphatase activities. The optimal pH (6.0) was not affect by p-Nitrophenyl phosphate concentration. At pH 6.0 the hydrolysis of PNPP following a cooperative kinetics with n= 1.5, Vm= 103.8 U.mg-1 and K0.5= 0.60 mM in the range between 0.003 and 10 mM. Studies of pH effects on kinetics parameters revealed a 26-folds variation in the range of pH 3.5 to 6 following decreases until pH 8.0, wile K0,5 and cooperativity did not varied considerably in this range. The H for hydrolysis of PNPP was 5,74 kcal.mol-1. PNPPase activity was inhibited by arsenate, phosphate and calcium, but not for levamisole, EDTA, zinc, magnesium and cobalt. The hydrolysis of pyrophosphate in presence of 2 mM MgCl2 follows Michaelis-Menten” kinetics with Km= 0.142 mM and Vm= 237 U.mg-1. Our results suggesting that the production of membranebound acid phosphatase might be one mechanism of mineral phosphate solubilization by this genus of Bacterium.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:47Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005-12-16Bitstream added on 2014-06-13T20:56:53Z : No. of bitstreams: 1 chavesneto_ah_me_araca.pdf: 216462 bytes, checksum: a077ffffb43a7f52121fc844bcf5ba50 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A saliva é coletada através de métodos simples e não invasivos, além de ser facilmente armazenada. A coleta não-traumática é atrativa especialmente para crianças e quando repetidas coletas são requeridas. A desvantagem da saliva como uma ferramenta de diagnóstico é a variabilidade, que ocorre em decorrência dos fatores fisiológicos e do modo de coleta. Numa primeira etapa o trabalho teve por objetivo estudar as atividades das enzimas fosfatase alcalina (FAlc), fosfatase ácida total (FAT) e fosfatase ácida resistente ao tartarato (TRAP) na saliva total não estimulada de crianças, investigando as influências de fatores como sexo, faixa etária e horário de coleta, bem como a correlação das enzimas com a taxa de fluxo salivar. Nesta etapa, 120 crianças saudáveis de ambos os sexos, nas faixas etárias de 1-5 e 6-12 anos de idade tiveram as amostras de saliva coletada entre 8:00-10:00 horas ou entre 14:00-16:00 horas. A segunda parte do trabalho teve por objetivo avaliar a correlação das atividades enzimáticas da FAT, TRAP, proteína tirosina fosfatase de baixa massa molecular relativa (PTP-BMr) e FAlc na saliva e no soro de crianças, além de analisar a influência do sexo e da faixa etária na atividade das enzimas, no soro e na saliva total. Para tanto 32 crianças de ambos os sexos, nas faixas etárias de 1-5 anos e 6-12 anos de idade tiveram as amostras de saliva e sangue coletadas entre 8:00-10:00 horas. Os resultados da primeira etapa sugerem que as atividades da FAT, TRAP e FAlc são influenciadas, de formas distintas, pelos fatores sexo, faixa etária e horário de coleta e que não existe correlação entre as atividades das enzimas e a taxa de fluxo salivar. / Saliva can be collected by simple, non-invasive methods and is easily stored. The non-traumatic collection is specially appealing for children and when repeated collections are required. The main disadvantage of the saliva as a diagnosis tool is the variability that happens due to the physiologic factors and dependence on mode of the collection. In a first stage the work had for objective to study the activities of the enzymes alkaline phosphatase (ALP), total acid phosphatase (TAP) and tartrate-resistant acid phosphatase (TRAP) in the whole unstimulated saliva of children, investigating the influences of factors as sex, age group and time of collection, as well as the correlation of the enzymes with the salivary flow rate. In this stage, 120 healthy children of both sexes, in the age groups of 1-5 and 6-12 years of age had the saliva samples collected between 8:00-10:00 hours or between 14:00-16:00 hours. In a second stage, the work had for objective to evaluate the correlation of the enzymatic activities of TAP, TRAP, low molecular weight protein tyrosine phosphatase (LMW-PTP) and ALP in the saliva and in the children's serum, besides analyzing the influence of the sex and of the age group in the activity of the enzymes, in the serum and in the whole unstimulated saliva. For so much 32 children of both sexes, in the 1-5 year-old age groups and 6-12 years of age had the saliva samples and blood collected between 8:00-10:00 hours. The results of the first stage suggest that the activities of TAP, TRAP and ALP are influenced, in different ways, for the factors sex, age group and time of collection and that correlation doesn't exist between the activities of the enzymes and the salivary flow rate.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:22:58Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-04-29Bitstream added on 2014-06-13T20:49:38Z : No. of bitstreams: 1 oliveira_vb_me_rcla.pdf: 812138 bytes, checksum: 4216fafea92a64448c1da2de14e85096 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Carrapatos são ectoparasitas obrigatoriamente hematófagos que podem transmitir diversas doenças aos hospedeiros durante o seu processo de alimentação. Ao lesionar mecanicamente o tecido acabam induzindo respostas inflamatórias na pele, local onde se fixam. Na tentativa de minimizar a ação destes sobre os hospedeiros tem-se recorrido ao controle químico por meio da utilização de diversos produtos, dentre estes a selamectina, princípio ativo de muitos acaricidas, inclusive do Revolution® (Pfizer), uma lactona macrocíclica capaz de causar danos neurotóxicos no carrapato. Foi objetivo deste trabalho analisar, por meio de técnicas histológica, histoquímica, detecção da atividade da fosfatase ácida (enzimas hidrolíticas responsáveis pela detecção de morte celular autofágica) e microscopia confocal de varredura a laser, a ocorrência de alterações morfofisiológicas na pele de coelhos hospedeiros expostos à selamectina e infestados por Rhipicephalus sanguineus adultos. Os coelhos (n=12) foram expostos ao produto nas concentrações de 100% (grupo de tratamento I – GTI) e de 80% (grupo de tratamento II – GTII) e posteriormente infestados apresentaram no exame histológico diminuição da espessura da camada córnea do epitélio, o qual sofreu diminuição da quantidade de camadas celulares (adelgaçamento), processo este acompanhado pela formação acentuada de edemas subepidérmicos (com aumento de exudato), o que provocou a desorganização das fibras colágenas do tecido conjuntivo da camada dérmica. Os testes histoquímicos revelaram forte marcação PAS positiva nos folículos pilosos e em algumas regiões da derme e ressíntese de fibras colágenas demonstrada por meio da técnica do tricômico de Mallory. Os resultados obtidos para a detecção da atividade da fosfatase ácida nos indivíduos expostos às... / Ticks are ectoparasites obligatorily hematophagous that can transmit various diseases to their hosts during the feeding process. By mechanically injured in the tissue eventually inducing inflammatory responses in the skin where they attach. In an attempt to minimize their action on the host has recourse to chemical control through the use of various acaricides, among these selamectin, the active principle of many acaricides, including the Revolution ® (Pfizer), a macrocyclic lactone capable of causing neurotoxic damage. This study aimed to analyze, using histological techniques, histochemical, detection of acid phosphatase activity (hydrolytic enzymes responsible for the detection of autophagic cell death) and confocal laser scanning, the occurrence of morphophysiological changes in the skin of hosts rabbits exposed to the selamectin and infested by adults of Rhipicephalus sanguineus. The rabbits (n=12) exposed to the product at concentration of 100% (treatment group I - TGI) and 80% (treatment group II - TGII) and infested showed, in histologic examination, a partial and/or complete decrease in the stratum corneum of epithelium, which suffered a decrease in the amount of cell layers with consequent reduction of stratification (thinning) of the epithelium and marked subepidermal edema formation (with increase of exudates) which caused the disorganization of the collagen fibers of the connective tissue of the dermal layer. Histochemical tests showed strong staining PAS positive in hair follicles and in some regions of the dermis, and the resynthesis of collagen fibers has been demonstrated by Mallory trichrome technique. The confocal images corroborate the results of the histological analysis, showing the thinning of the epithelium of the individuals’ skin of the treatment groups I and II (TGI and TGII), where this layer... (Complete abstract click electronic access below)