Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-02-22Bitstream added on 2014-06-13T18:55:48Z : No. of bitstreams: 1 nader_tt_me_jabo.pdf: 599172 bytes, checksum: 763899c02a69274b2e4175a8a9dc4707 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O presente estudo teve como objetivo avaliar o potencial de atividade antimicrobiana in vitro dos extratos de algumas plantas endêmicas do Cerrado, tais como Baccharis dracunculifolia, Cochlospermum regium, Croton antisyphiliticus, Eugenia dysenterica e Lippia sidoides, frente a estirpes de Staphylococcus aureus isoladas de leite de vacas com mastite e de fontes de contaminação envolvidas na epidemiologia da mastite bovina. Os extratos foram preparados a partir das partes aéreas e sistema radicular das plantas, utilizando os solventes metanol, hexano e clorofórmio, por processo de maceração estática. Para avaliação da atividade antimicrobiana foram aplicadas as técnicas de difusão em disco, microdiluição em caldo para determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM) e Concentração Bactericida Mínima (MBC). Dentre os extratos que apresentaram atividade bacteriostática, o extrato hexânico de Baccharis dracunculifolia destacou-se com CIM de 10 mg/mL sobre 45% das estirpes. Enquanto o extrato clorofórmico de Croton antisyphiliticus, com atividade bactericida, inibiu a multiplicação de 100% das estirpes de Staphylococcus aureus, com CIM variando entre 1,03mg/mL e 4,15 mg/mL. O estudo demonstra ainda, que tais extratos vegetais apresentaram resultados superiores aos obtidos com a gentamicina, princípio ativo muito utilizado no combate à mastite bovina, reforçando a importância das plantas medicinais como recurso terapêutico. / The purpose of this study was to assess the potential of in vitro antimicrobial activity of the extracts of certain endemic plants in the Brazilian Cerrado, such as Baccharis dracunculifolia, Cochlospermum regium, Croton antisyphiliticus, Eugenia dysenterica and Lippia sidoides, against strains of Staphylococcus aureus isolated from the milk of cows with mastitis and sources of contamination involved in the epidemiology of bovine mastitis. The extracts were prepared by using aerial parts and radicular systems of the plants, using methanol, hexane and chloroform as solvents, extracted with static maceration. Techniques of disc diffusion, broth microdillution for the determination of Minimum Inhibitory Concentration (MIC) and Minimal Bactericidal Concentration (MBC) were used for the assessment of antimicrobial activity. Among the extracts with bacteriostatic activity, the hexanic extract of Baccharis dracunculifolia had a 10 mg/mL MIC against 45% of the strains, whereas the chloroformic extract of Croton antisyphiliticus, with bactericidal activity, inhibited the multiplication of 100% of the Staphylococcus aureus strains, whose MIC varied between 1.03mg/mL and 4.15 mg/mL. The study also demonstrated that the results of these plant extracts are superior to the results obtained with gentamicin, an active principle commonly used against bovine mastitis, reinforcing the importance of medicinal plants as a therapeutic resource.

The Boophilus microplus tick is one of the most important arthropods that can parasitize bovines, causing great damages to the world livestock through direct and indirect effects. The application of chemical products is the principal method of controlling this parasite, but in function of the disadvantages of this practice, the use of vaccines is a good alternative, because they are residue free, specifics and present smaller possibility to develop resistance. With the objective of selecting synthetic peptides expressed in the capsid of phage display bacteriophages, it was produced the serum policlonal in chickens previously sensitized with total larva proteins of the Boophilus microplus tick. The peptides found in larger frequency and with larger antigenic index (bioinformatics and dot blotting with chicken serum) were selected for the immunization of mice and bovines. The initial data infer that the peptides in phagos induced immune response, evaluated by Elisa test, and the more immunogenic are: 2D7 (SNNADYKQSLL), 2E6 (VNWNSWHKTNLS), 2F3 (SIPTYTPDKVTY) and 2E4 (DAWKMRLSQMYD). The sequences selected in the present work introduce the protean motives NxxxKxxL (2D7, 2E6 and 2E4) and the motive TPDKS (2E4). These sequences presented structural similarities with some tick proteins, mainly the calreticulin. Complementary studies are being accomplished to characterize the sensibility and specificity to the selected peptides. / O carrapato Boophilus microplus é um dos mais importantes artrópodes que parasitam os bovinos, causando grandes prejuízos à pecuária mundial pelos seus efeitos diretos e indiretos. A aplicação de produtos químicos é o principal método de controle deste parasita, mas em função das desvantagens desta prática, o uso de vacinas é uma boa alternativa, por serem livres de resíduos, específicas e apresentarem menor possibilidade de desenvolver resistência. Com o objetivo de selecionar peptídeos sintéticos expressos no capsídeo de bacteriófagos phage display produziu-se soro policlonal em galinhas previamente sensibilizadas com proteínas totais de larvas do carrapato Boophilus microplus. Os peptídeos encontrados em maior freqüência e com maior índice antigênico (bioinformática e dot blotting com soro de galinha), foram selecionados para a imunização de camundongos e bovinos. Os dados iniciais inferirem que os peptídeos em fagos induziram resposta imune, avaliada pelo teste de Elisa, sendo os mais imunogênicos o 2D7 (SNNADYKQSLLL), o 2E6 (VNWNSWHKTNLS), o 2F3 (SIPTYTPDKVTY) e o 2E4 (DAWKMRLSQMYD). As seqüências selecionadas no presente trabalho apresentam os motivos protéicos NxxxKxxL (2D7, 2E6 e 2E4) e o motivo TPDKS (2E4). Estas seqüências apresentaram similaridades estruturais com algumas proteínas do carrapato principalmente a calreticulina. Estudos complementares estão sendo realizados para caracterizar a sensibilidade e especificidade aos peptídeos selecionados. / Doutor em Genética e Bioquímica

A inibição da secreção pulsátil de prostaglandina F2alfa (PGF2α) uterina (atividade antiluteolítica) pela ação do interferon-tau (IFN-τ) trofoblástico, mantêm a secreção de progesterona pelo corpo lúteo, fundamental ao estabelecimento da gestação nas fêmeas bovinas. Supõe-se que essa atividade antiluteolítica esteja presente no microambiente uterino bovino, portanto objetivou-se estudá-la. Dada à inexistência de ensaios que meçam especificamente a atividade antiluteolítica propôs-se elaborar um ensaio biológico para tal. Observou-se que células BEND tratadas com forbol 12,13 dibutirato (PdBu) por 6 horas em cultivo sintetizam PGF2α e tal síntese é inibida na presença de interferon-tau recombinante bovino (rbIFN-τ). Em outro estudo definiu-se que 25 ng/mL de PdBu promove estímulo consistente à síntese de PGF2α. A partir da análise de regressão do percentual de inibição à síntese de PGF2α estimulada por PdBu, em função da concentração de interferon-tau recombinante (rbIFN-τ), calculou-se a concentração de rbIFN-τ que inibiu em 50% a síntese máxima de PGF2α (observada na presença apenas de PdBu). Definiu-se a atividade antiluteolítica como o recíproco da concentração proteica requerida para atingir esse percentual de inibição (50%), e que a solução com uma unidade antiluteolítica é aquela que com um micrograma exerça tal efeito. Caracterizou-se a utilização dessa isoforma como padrão do ensaio antiluteolítico e calculou-se a atividade antiluteolítica do mesmo, 9,61 x 10² UA/µg de proteína. Em estudo seguinte observou-se a modulação da síntese de PGF2α estimulada por PdBu, em função da concentração proteica de um pool de lavados uterinos ou meios condicionados por conceptos obtidos no décimo sétimo dia de gestação. Notou-se que para cada fluido testado há um intervalo de concentrações onde observa-se aumento linear na atividade antiluteolítica em função do acréscimo proteico. A partir da análise por regressão linear desse evento calculou-se a atividade antiluteolítica de cada amostra. Para o pool de lavados uterinos calculou-se 1,63 x 10-¹ UA/ µg de proteína, e para o pool de meios condicionados por conceptos 1,66 x 10² UA/µg de proteína. Estes estudos permitiram desenvolver uma metodologia para observar a atividade antiluteolítica em humores biológicos. Aplicando o ensaio antiluteolítico estudou-se a atividade antiluteolítica presente em lavados uterinos obtidos durante o período crítico de fêmeas bovinas prenhes ou cíclicas ( respectivamente, 56,2 e 33,9 UA/µg de proteina), notou-se que a atividade antiluteolítica foi maior no microambiente uterino de fêmeas gestantes. Tal resultado associado à potente atividade antiluteolítica observada para os meios condicionados por conceptos indicam a participação do IFN-τ secretado pelo concepto na modulação da síntese de PGF2α. Entretanto, observou-se atividade antiluteolítica nos lavados uterinos obtidos de fêmeas cíclicas, o que indica que a síntese de PGF2α estimulada por PdBu pode ser modulada por outras proteínas, além do IFN-τ. Sugere-se que a atividade antiluteolítica, observada através do ensaio biológico proposto, é resultante da atuação de fatores estimulatórios e inibitórios presentes nos humores biológicos. Conclui-se que a atividade antiluteolítica pode ser mensurada pelo ensaio biológico proposto, no entanto outros estudos devem ser conduzidos para correlacionar essa atividade com a atuação do IFN-τ. / The inhibition of pulsatile secretion of PGF2α mediated by interferon-tau (IFN) is fundamental on the maternal recognition of pregnancy, maintaining the progesterone secretion by corpus luteum. Therefore the measurement of interferon activity in the uterine microenvironment was studied. Due to a lack of assays those measure specific antiluteolytic capacities we suggest develop a biological assay for it. In this research we observed that BEND cells treated with PdBu synthesize PGF2α, wich is inhibited by the presence of recombinant bovine interferon-tau (rbIFN-τ). Following we defined 25ng/mL as PdBu (phorbol 12,13 dibutirate) stimulus at the PGF2α synthesis to be applied in this biological assay. Studies about the modulation of PdBu-stimulated PGF2α synthesis by the rbIFN-τ validate the use of this isoform as a reference, defining a standard-curve and allowing estimating the antiluteolytic activity of 9.61 x 10² antiluteolytic units per microgram (UA/µg) of protein. Further, we observed the modulation of PdBu-stimulated PGF2α synthesis exerted by a pool of uterine flushings or conceptus conditioned medium, and for each tested fluid, there is a range of concentrations where is observed an increasing rate on the inhibition of PGF2α synthesis. A restrict analysis on this concentrations range shows a linear behavior and allow calculate the antiluteolytic activity of each sample1.63 x 10-¹ UA/ µg of protein from a pool of uterine flushings, and 1.66 x 10² UA/µg from conceptus conditioned medium. These studies validated a method to observe the antiluteolytic activity from biological fluids. Using the antiluteolytic assay, we studied the antiluteolytic activity present in uterine flushings obtained during the critic period by pregnant or cyclic bovine females cíclicas (respectively 56,2 e 33,9 UA/µg of protein). We observed higher antiluteolytic activity from pregnant uterine microenvironment than in cyclic uterine microenvironment. This result linked with the high antiluteolytic activity observed to conceptus conditioned medium, suggest the participation of IFN-τ secreted by the conceptus in the PGF2α synthesis modulation. However, we observed the antiluteolytic activity in uterine flushing obtained by cyclic cows, suggesting that the PGF2α synthesis could be modulated by another proteins. We believe that the antiluteolytic activity, observed by the antiluteolytic assay, ensue the action of inhibitors or stimulators factors in the biological fluids. We conclude that the antiluteolytic assay could be measured by the proposed biological assay, nevertheless another studies must be done in order to correlate this activity with the interferon action.

O carrapato Rhipicephalus (Boophilus) microplus é um ectoparasito hematófago que infesta os rebanhos bovinos de regiões tropicais e subtropicais, e é um dos principais causadores de prejuízos econômicos à pecuária. O principal método de controle baseia-se no uso de acaricidas. No entanto, devido à crescente preocupação com os problemas criados pela poluição química do meio ambiente, ao alto custo e toxicidade das drogas e ao aparecimento de carrapatos resistentes aos acaricidas, métodos alternativos para o controle do R. microplus devem ser encontrados. Um dos métodos alternativos estudados é o uso de vacinas. As glutationa S-transferases (GST) são enzimas que estão presentes em organismos animais e vegetais e entre suas funções podem-se destacar transporte intracelular, participação em processos digestivos, síntese de prostaglandinas, e detoxificação de substâncias tóxicas e proteção contra estresse oxidativo. Neste estudo foi analisada a resposta imunológica comparativa de camundongos para a GST de R. microplus (GST-Bm) e para a GST de Haemaphysalis longicornis (GST-Hl). Ambas as proteínas foram expressas em Escherichia coli linhagem AD494, e purificadas por cromatografia de afinidade por glutationa utilizando a coluna GSTrap FF. Para verificar a imunogenicidade das proteínas, foram utilizados 25 camundongos Balb/c divididos em 12 grupos. As condições testadas foram as inoculações das proteínas GST-Bm e GST-Hl com os adjuvantes Montanide, saponina ou sem adjuvantes. Camundongos controle foram inoculados com extrato de E. coli ou somente com os adjuvantes. Foi coletado sangue de todos os animais com intervalos de sete dias durante 70 dias. Os soros foram analisados por ELISA para acompanhar a cinética da produção de anticorpos de todos os animais imunizados. Os camundongos inoculados com GST-Hl emulsificada com Montanide mostraram aumento dos níveis de anticorpos a partir do dia 21. O nível máximo de anticorpos foi detectado no dia 42, e diminuiu após o dia 56. Todos os outros animais não apresentaram aumento nos níveis de anticorpos. / Rhipicephalus (Boophilus) microplus tick is a hematophagous ectoparasite that infests cattle in tropical and subtropical regions and is one of the principal causes of economic losses in the cattle farm. The principal method of control is the use of acaricides. However, due to increased worry about environmental chemical pollution, high costs and drugs toxicity and the selection of ticks resistant to acaricides, alternative methods for R. microplus control should be developed. One of these methods is vaccination. Glutathione S-transferases (GSTs) enzymes are present in animal and vegetal organisms and the functions are intracellular transport, participation in digestive process, synthesis of prostaglandins and detoxification of toxic substances and protection against oxidative stress. In this study the immunological response of mice inoculated with R. microplus GST (GST-Bm) and with Haemaphysalis longicornis GST (GST-Hl) was analysed. Both proteins were expressed in Escherichia coli strain AD494 and were purified by affinity chromatography using GSTrap FF columm. To verify the protein immunogenicity, 25 Balb/c mice divided into 12 groups were used. The tested conditions were inoculation of GST-Bm, GST-Hl proteins with Montanide and saponin adjuvants or without adjuvant. Control mice were inoculated with E. coli extract or the adjuvant alone. Blood from all animals were collected with intervals of seven days during seventy days, the sera were analyzed by ELISA to verify the kinetic of antibodies production of all immunized animals. Mice inoculated with GST-Hl emulsified with Montanide showed an increase in the antibodies levels from day 21. The maximum level of antibodies was detected on day 42 and decreased after day 56. The other animals did not show an increase in antibodies levels.

Este estudo teve por objetivo analisar e comparar metodologias estatísticas para fins de mapeamento de QTL associados à resistência a ectoparasitas em bovinos. Os animais, submetidos à infestação artificial, foram periodicamente avaliados por contagens, como número de carrapatos. Estes dados se caracterizam como medidas repetidas e, via de regra, não atendem ou atendem parcialmente as exigências usuais da análise, para mapeamento de QTL, dentre elas a de apresentar distribuição normal e independência dos erros. Ainda não está bem definido qual seria a melhor estratégia para analisar dados com o perfil descrito. Algumas alternativas seriam transformações de dados que permitam o uso dos programas já disponíveis, ou o desenvolvimento de programas que utilizem outras distribuições como Poisson ou Poisson inflada de zeros (ZIP). Esta proposta está inserida na parceria entre EMBRAPA - Gado de Leite e a ESALQ/USP, para desenvolvimento do projeto de mapeamento de QTL em bovinos mestiços (Gir x Holandês), para várias características incluindo a resistência a parasitas. Foram utilizados 263 animais F2, genotipados com 5 marcadores moleculares no cromossomo 23, na tentativa de mapear QTL para característica de resistência a carrapatos. Dados coletados naquela população F2 e dados simulados em diferentes cenários, serão a base para a comparação de estratégias de análise e mapeamento de QTL. Os modelos de mapeamento clássico, assim como a utilização de transformações dos dados originais foram comparados a modelos de regressão Poisson e modelo ZIP. Os modelos Poisson e ZIP apresentaram os melhores resultados quando trabalhamos com dados de contagem inflacionados de zeros, porém em outros cenários a transformação dos dados originais se mostrou igualmente eficiente. Dependendo do propósito do mapeamento (seja ele localizar ou estimar o efeito), cada modelo possui suas vantagens e suas limitações. Assim, sempre é recomendável uma prévia análise descritiva dos dados para que o melhor modelo seja utilizado. / This study has as main objective to analyze and compare statistical approaches to QTL mapping for parasites resistance in bovines. The animals, under artificial infestation, were periodically evaluated by counting, as ticks count. These data are characterized as repeated measures and, usually, dont follow or partially follow the usual requirements for the analysis, for QTL mapping, that is to present normal distribution and error independence. It is not clear yet which will be the best strategy to analyze this kind of data. Some alternatives could be data transformation that allows the use of software available on the web, or the development of specific programs that use other types of distribution like Poisson or Zero Inflated Poisson (ZIP).This work is an association between EMBRAPA Gado de Leite and ESALQ/USP, to the development of the QTL mapping project for crossbred bovines (Gyr x Holstein), for different characteristics including the parasite resistance. Were used 263 animals F2, genotyped for 5 molecular markers on the chromosome 23, aiming to map QTL for characteristics of parasite resistance. Data collected on this F2 population and simulated data in different scenarios will be the base for the strategies of the QTL mapping approaches comparison. The classical mapping models and the use of data transformation of the original data were compared to Poisson regression and ZIP models. The Poisson and ZIP models presented the best results when working with zero inflated count data however in some other scenarios the data transformation showed similar efficiency. Depending on the purpose of the mapping (this meaning locate or estimate the QTL effect) each model has its vantages and its limitations. This way, it is always advisable to make a previous descriptive analysis of the data to better choose the model.

Os minerais são de extrema importância no metabolismo geral e no desempenho produtivo e reprodutivo dos bovinos. Atualmente, no Brasil, existem poucos estudos sobre o diagnóstico de deficiências minerais em bovinos, através de análise de macroelementos e elementos traço em fluidos biológicos. A maior parte das informações disponíveis limitam-se ao diagnóstico clínico de deficiências isoladas e à análise de elementos nas pastagens e no solo, que podem sugerir deficiências sub clínicas de alguns minerais, mas apresentam várias limitações e interferências. O objetivo deste trabalho foi desenvolver um método de análise simples, com introdução direta da amostra, utilizando a técnica de q-ICP-MS e DRC-ICP-MS, para determinação de Ca, Cu, Fe, Mg, Zn, I, Mo, As, Se, Ni, Co, Ba, Cs, Mn e Pb em sêmen bovino. Para realização das análises, foi utilizada calibração em meio aquoso e as amostras foram diluídas na proporção 1:50 em solução contendo 0,01% v/v Triton® X-100 e 0,5% v/v de ácido nítrico. Também foram avaliadas a calibração por ajuste de matriz e a análise das amostras após digestão por microondas, para confirmação dos resultados obtidos por introdução direta e calibração em meio aquoso. O DRC foi essencial para determinação de níquel. O gás de reação utilizado foi H2 e os parâmetros RPq e vazão do gás foram estudados para otimização do método. Os limites de detecção para determinação de 44Ca, 63Cu, 57Fe, 24Mg, 64Zn, 127I, 98Mo, 75As, 82Se, 59Co, 138Ba, 133Cs, 55Mn e 208Pb foram: 0,262; 0,003; 0,168; 0,004; 0,004; 0,026; 0,007; 0,007; 0,033; 0,002; 0,005; 0,002; 0,003; 0,002 µg L-1 respectivamente, e para determinação de 60Ni por DRC-ICP-MS o LD foi 0,020 µgL-1. O método desenvolvido foi aplicado para determinação de 15 elementos em amostras de sêmen de bovinos de diferentes raças usadas em programas de reprodução e inseminação artificial. / The minerals are of extreme importance in the general metabolism and in the productive and reproductive performance of the bovines. Nowadays, in Brazil, few studies exist on the diagnosis of mineral deficiencies in bovine, through macroelementos analysis and trace elements in biological fluids. Most of the available information is limited to the clinical diagnosis of isolated deficiencies and the analysis of elements in the pastures and in the soil, that can suggest sub clinical deficiencies of some minerals, but present several limitations and interferences. The objective of this work was to develop a method of simple analysis, with direct introduction of the sample, using the technique of q-ICP-MS and DRC-ICP-MS, for determination of Ca, Cu, Fe, Mg, Zn, I, Mo, As, Se, Ni, Co, Ba, Cs, Mn and Pb in bovine semen. Aqueous medium calibration was used in the analysis and the samples were diluted in the proportion 1:50 in solution containing 0,01% v/v Triton® X-100 and 0,5% v/v of nitric acid. They were also evaluated the matrix matching and the analysis of samples after digestion for microwave, for confirmation of the results obtained by direct introduction and calibration in aqueous medium. DRC went essential for nickel determination. The reaction gas used it was H2 and the parameters RPq and gas flow rate were studied for optimization of the method. The detection limits for determination of 44Ca, 63Cu, 57Fe, 24Mg, 64Zn, 127I, 98Mo, 75As, 82Se, 59Co, 138Ba, 133Cs, 55Mn and 208Pb were: 0,262; 0,003; 0,168; 0,004; 0,004; 0,026; 0,007; 0,007; 0,033; 0,002; 0,005; 0,002; 0,003; 0,002 µg L-1 respectively, and for determination of 60Ni for DRC-ICP-MS the LOD was 0,020 µgL-1. The developed method was applied for determination of 15 elements in bovine semen samples of different breed used in reproduction programs and artificial insemination.

A leptospirose bovina é uma das principais doenças reprodutivas que interfere diretamente nos índices de produção e produtividade da pecuária brasileira e mundial e por isso necessita de um aprimoramento do diagnóstico laboratorial. O objetivo do presente trabalho foi investigar a conveniência do emprego de estirpes de leptospiras autóctones isoladas no Brasil, na coleção de antígenos da microtécnica de soroaglutinação microscópica (SAM) aplicada a leptospirose. A coleção de antígenos de referência foi constituída pelos sorovares: Australis, Bratislava, Autumnalis, Butembo, Castellonis, Bataviae, Canicola, Whitcombi, Cynopteri, Grippotyphosa, Hebdomadis, Copenhageni, Icterohaemorrhagiae, Javanica, Panama, Pomona, Pyrogenes, Hardjo, Wolffi, Shermani, Tarassovi, Patoc e Sentot. As dez estirpes isoladas no Brasil incluíram os sorovares: Bananal (duas estirpes), Brasiliensis, Canicola (três estirpes), Copenhageni, Guaricura e Pomona (duas estirpes). Foram amostradas por conveniência, 109 propriedades e 9820 bovinos, fêmeas em idade de procriar, distribuídos em 84 municípios, dos Estados de: Goiás, Mato Grosso, Mato Grosso do Sul, Minas Gerais, Paraná, Rio Grande do Sul, Santa Catarina e São Paulo. Dos 9820 animais examinados, 5806 (59,12%) foram reagentes na SAM para qualquer sorovar com a coleção de 23 sorovares de referência. Com a coleção de antígenos de referência e dez estirpes autóctones houve 6400 (65,17%) reagentes, a diferença observada foi significante (p= 0,001). O único Estado em que não houve diferença significante no número de animais reatores para qualquer sorovar foi o de Santa Catarina (p=0,522). Das 109 propriedades trabalhadas, 106 foram consideradas positivas com pelo menos um animal reagente na SAM. Não houve diferença no número de propriedades positivas segundo a coleção de antígenos empregada. Os sorovares mais prováveis identificados com a coleção de antígenos de referência foram Hardjo (43,03 %), Shermani (20 %), Wolffi (9,96%), Grippothyphosa (5,42%) e Pomona (4,28%). Com a coleção ampliada por dez estirpes isoladas no Brasil, os sorovares mais prováveis foram Hardjo (31,00%), Guaricura - M4/84 (22,50%), Shermani (15,43%), Wolffi (4,76%), Grippothyphosa (3,71%) e Autumnalis (3,24%). O sorovar Guaricura, estirpe M4/84, isolada de bovinos e búfalos no Estado de São Paulo, foi o primeiro colocado como sorovar mais provável no Estado de Mato Grosso, diferença significante do valor obtido para o sorovar Hardjo (p= 0,0001). No Mato Grosso do Sul a despeito do valor absoluto ter sido superior para o sorovar Guaricura, a diferença observada com o sorovar Hardjo foi destituída de significado estatístico (p=.0,753). Em São Paulo o Guraricura foi o segundo colocado e em Minas Gerais Goiás ocupou a terceira posição. Esta mesma estirpe foi a mais provável em 27 propriedades das 109 trabalhadas (24,77%). A introdução de estirpes autóctones na coleção de antígenos da SAM propiciou a confirmação do diagnóstico de leptospirose em 594 animais (6,00%) classificados como não reagentes pela coleção de referência (p=0,001) / Bovine leptospirosis is one of the main reproductive diseases which interferes economically on the livestock and thus it is needed the amelioration of the laboratory diagnostic procedures. The aim of this work is to investigate the adequacy to use autochthonous strains of leptospires isolated in Brazil, added into the antigen collection applied for the microscopic agglutination test (MAT). The reference antigen collection was constituted by the following serovars: Australis, Bratislava, Autumnalis, Butembo, Castellonis, Bataviae, Canicola, Whitcombi, Cynopteri, Grippothyphosa, Hebdomadis, Copenhageni, Icterohaemorrhagiae, Javanica, Panama, Pomona, Pyrogenes, Hardjo, Wolffi, Shermani, Tarassovi, Patoc and Sentot. The ten strains isolated in Brazil included the serovars: Bananal (two strains), Brasiliensis, Canicola (three strains), Copenhageni, Guaricura and Pomona (two strains). By means of non-probability sampling, 109 farms and 9,820 bovines, females at reproductive age were chosen from the 84 municipalities of the states of Goiás, Mato Grosso, Mato Grosso do Sul, Minas Gerais, Paraná, Rio Grande do Sul, Santa Catarina e São Paulo . Among the 9,820 examined animals, 5,806 (59.12%) were reactants to the MAT for any serovar using the 23 reference serovars. Using the collection of reference serovars and the ten autochthonous strains there were 6,400 (65.24%) reactants, and the difference found was significant (p=0.001). The only state with non-significant results in the number of reactants for any serovar was the State of Santa Catarina (p=0.522). Of the 109 properties analyzed, 106 were considered positive at least with one reactant animal by MAT. According to the antigens used, there was no significant difference among the properties. The most probable serovars identified by the collection of reference antigens were Hardjo (43.03%), Shermani (20.00%), Wolfi (9.96%), Grippothyphosa (5.42%) and Pomona (4.28%). With the collection amplified with the ten strains isolated in Brazil, the most probable serovars were Hardjo (31.00%), Guaricura M4/84 (22.50%), Shermani (15.43%), Wolffi (4.76%), Grippothyphosa (3.71%) and Autumnalis (3.24%). The serovar Guaricura, strain M4/84, isolated from bovines and buffaloes in the State of São Paulo, was ranked at the first place as the most probable serovar in the State of Mato Grosso and Mato Grosso do Sul, but the differences observed with the serovar Hardjo were significant only in Mato Grosso (p=0,0001). In São Paulo State, the Guaricura serovar was the second most probable and in the states of Minas Gerais and Goiás the third one. This same strain was the most probable in 27 properties among the 109 examined (24.77%). The addition of autochthonous strains into the MAT antigen collection provided the confirmation of the diagnosis of leptospirosis in 594 animals (6.00%) which have been classified as non-reactants by the reference collection

O Programa Nacional de Controle e Erradicação de Brucelose e Tuberculose (PNCEBT) proposto pelo MAPA (Ministério da Agricultura Pecuária e Abastecimento) adotou como medida central à vacinação com a B19 de todas as fêmeas das espécies bovina e bubalina, entre três e oito meses de idade. Embora a B19 seja capaz de conferir 65 a 70 % de proteção contra a maioria dos níveis de exposição de fêmeas bovinas, se utilizada na dose correta e na idade recomendada, o período de excreção e seu efeito sobre animais comunicantes e suscetíveis, incluindo o homem ainda são pouco conhecidos e por se tratar de uma vacina viva e virulenta deve-se atentar para o papel zoonótico no manejo dos animais excretores. O presente estudo avaliou a excreção da estirpe B19 pelo leite e urina, de 14 fêmeas bovinas de diferentes faixas etárias, que foram imunizadas dos três aos oito meses de idade, provenientes de um rebanho de exploração leiteira, empregando-se o diagnóstico bacteriológico e PCR, correlacionando-os com as fases hormonais de um ciclo reprodutivo completo. Todas as amostras positivas na PCR para Brucella spp. foram confirmadas como sendo da estirpe vacinal B19, sendo sua excreção predominantemente no momento do cio aos 150 dias de gestação e no pós-parto imediato (30 dias), ou seja, independentemente da fase hormonal. A persistência e excreção de B19 foi observada em fêmeas bovinas de até nove anos de idade. / The National Program of Brucellosis and Tuberculosis Control and Eradication (PNCEBT) designed by MAPA (Ministério da Agricultura Pecuária e Abastecimento) adapted as the central of vaccination by law with B19 the of all females of bovine and bubaline species, between three and eight months of age. However the B19 should be capable of verifying 65 - 70% of protection against a large number of levels of exposition of bovines if utilized in the correct dose and age recommended the period of excretion and your effect about communicant animals and bound to included men but are still not well known and for the subject of biovaccines of a high infectious should be watchful for the role of zoonotic in the handling of animals that?s eliminate these vaccines. This studies evaluated the excretion of B19 strain in milk and urine of 14 bovine females the different ages that was immunized at three and eight months of age originated from heads of milky exploration, based on the bacteriologic tests and polymerize chain reaction (PCR) diagnoses correlated with hormonal fases of complete reproductive cycle. All of positive samples in PCR for Brucella spp. was confirmed for B19 strain being its excretion predominantly at moment of cio about 150 pregnant days and the pos parturition (30 days) or else independently the hormonal fase. The persistence and excretion of B19 was observed in bovine females until nine years old.

Submitted by Sandra Pereira (srpereira@ufrrj.br) on 2017-07-10T12:15:47Z No. of bitstreams: 1 2010 - Ana Paula Lopes Marques.pdf: 4063044 bytes, checksum: 1fcd80ee7f867ac56d9bdf91442e48d9 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-10T12:15:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010 - Ana Paula Lopes Marques.pdf: 4063044 bytes, checksum: 1fcd80ee7f867ac56d9bdf91442e48d9 (MD5) Previous issue date: 2010-12-21 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico, CNPq, Brasil. / With the objective to contribute to the study of mineral deficiencies, a survey was conducted through questionnaires, farmers interviews and visits in the properties for a initial diagnosis of the problem. Among the reported outbreaks highlight the signs suggestive of phosphorus deficiency: stiff joints (7.35%), lameness and creaking joints during movement (10.29%) and gnaw and/or chew bones (39.71 %). "Mumps" in calves was reported in three properties (4.41%) suggesting that iodine deficiency or hypoproteinemia. Manifestations of deficiency of cobalt were evidenced by biting and/or chewing tree bark (8.82%), loss of appetite in good pastures (5.88%) and pastures where horses develop only (1.47%). Were also reported signs of deficiencies of zinc, copper and sodium, as well as nonspecific signs (abortion, retained fetal membranes, and retarded growth of calves). The data were collected on soil management and pasture in 20 properties and seven farms were conducted analysis of macro and micronutrient minerals as well as to evaluate soil fertility. The results in soils and pastures showed deficiencies of phosphorus and high amounts of minerals such as iron, zinc, manganese and magnesium which interfere with absorption of copper mainly explaining the signs of this deficiency. The fertile soil condition and fodder were also compromised by the high acidity and high value of aluminum in soils. Failures were observed in the nutritional management of herds and in relation to grazing and management of mineral salt. The opinion of the owners of the herds on mineralization was also elucidated the majority in favor of its use, but admitting mistakes in handling and troughs in the supply of mineral mixtures. In blood serum Mg, Fe and Mn were within normal limits, Ca, Na, K, Co, Cu and Zn below normal and P stood out as being above normal values. Cows compared to calves had higher K and Zn deficiency and comparing the seasons, Co, Fe and Mn were lower at the beginning of the rainy season and Mg and K with smaller values in the early dry season. / Com o objetivo de contribuir com o estudo das car?ncias minerais foi realizado um levantamento atrav?s de question?rios, visitas as propriedades e entrevistas a pecuaristas para um diagn?stico inicial do problema. Dentre as manifesta??es relatadas destacam-se os sinais sugestivos de defici?ncia de f?sforo: articula??es endurecidas (7,35%), claudica??o e ranger das articula??es durante a movimenta??o (10,29%) e h?bito de roer e/ou mastigar ossos (39,71%), ?Papeira? em bezerros foi informada em tr?s propriedades (4,41%) sugerindo defici?ncia de iodo ou hipoproteinemia. As manifesta??es de defici?ncia de cobalto foram evidenciadas por roer e/ou mastigar casca de ?rvore (8,82%), perda de apetite em pastos bons (5,88%) e pastos onde s? equinos se desenvolvem (1,47%). Foram ainda relatados sinais de defici?ncias de zinco, s?dio e cobre, bem como sinais inespec?ficos (abortos, reten??o de placenta e crescimento retardado de bezerros). Foram levantados dados sobre o manejo do solo e pastagens em 20 propriedades e coletas em 7 para an?lise de macro e micronutrientes minerais, bem como avaliada a fertilidade dos solos. Os resultados de solos e pastagens evidenciaram defici?ncias de f?sforo e altos valores de minerais como ferro, zinco, mangan?s e magn?sio que interferem principalmente na absor??o do cobre justificando os sinais dessa defici?ncia. A fertilidade dos solos e a condi??o das forragens tamb?m se mostraram comprometidas pela acidez elevada e altos valores de alum?nio nos solos analisados. Foram evidenciadas falhas no manejo nutricional dos rebanhos e em rela??o ?s pastagens e suplementa??o mineral. A opini?o dos propriet?rios sobre suplement??o mineral dos rebanhos tamb?m foi elucidada sendo a maioria a favor do seu uso, mas admitindo-se os erros no manejo de cochos e no fornecimento das misturas minerais. No soro sangu?neo Mg, Fe e Mn ficaram dentro da normalidade; Ca, Na, K, Co, Cu e Zn abaixo dos valores normais e o P se destacou como estando acima dos valores considerados normais. As vacas em rela??o aos bezerros apresentaram maior defici?ncia de K e Zn e, comparando-se ?s esta??es do ano, Co, Fe e Mn ficaram mais baixos no in?cio da esta??o chuvosa e Mg e K com valores menores no in?cio da esta??o seca.

Made available in DSpace on 2014-08-20T13:32:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_luana_alves_dummer.pdf: 909354 bytes, checksum: d2af8cc0772177718829cf7f15391d43 (MD5) Previous issue date: 2008-06-12 / Outbreaks of fatal meningoencephalitis caused by Bovine Herpesvirus type 5 (BoHV-5) cause important economic losses in national trade of bovine beef. Commercial vaccines developed against Bovine Herpesvirus type 1 can protect cattle of neurological disease caused by BoHV-5. These cross-reactions are due to its genetic and antigenic similarities of both BoHV-1 and 5. However, these vaccines can not prevent latent infection of BoHV-5, even viral spread to healthy animals. This way, new vaccines strategies are based on envelope glycoproteins and are focusing safety, economic viability and on prevention of BoHV-5 latency and spread. This glycoprotein acts in initial steps of viral infection and glycoprotein D has drawn the attention in studies carried out with BoHV-1 and other homologous herpesvirus. The gD acts on viral membrane fusion with permissive cells through glycoproteins and host receptors interactions, so it is essential for viral entry. A vaccine that is capable to stimulate specific humoral and cellular immunity against BoHV-5 must be developed. The aim of this work was the production of a recombinant truncated form of gD of BoHV-5 in yeast Pichia pastoris and its antigenicity and immunogenicity evaluation. Data show that yeast P. pastoris can express the truncated form of BoHV-5 gD to the supernatant due to its secretion of ~190mg/L of recombinant protein, simplifying protein purification. The recombinant protein was successfully recognized by antibodies of animals immunized with BoHV-5, suggesting its antigenicity and immunogenicity and that native protein characteristic are conserved. The data presented herein allow the design of future studies aiming at expression optimization and further immunogenicity evaluation, as well as its capacity to neutralize the virus in biological models and on cattle. / Surtos de meningoencefalites fatais causadas pelo Herpesvírus Bovino tipo 5 (BoHV-5) ocasionam importantes perdas econômicas no comércio nacional de carne bovina. Vacinas comerciais destinadas ao Herpesvírus Bovino tipo 1 são capazes de impedir o aparecimento de sintomatologia clínica do BoHV-5. Estas reações cruzadas se devem a existência de semelhanças genéticas e antigênicas existentes entre ambos os vírus. No entanto, estas vacinas não impedem o estabelecimento da infecção latente e a disseminação do BoHV-5 para animais não imunizados. Desta forma, estratégias que visem à produção de vacinas seguras, economicamente viáveis e que possam ser capazes de impedir a latência do BoHV-5 e sua disseminação estão focadas para glicoproteínas localizadas no envelope viral e que atuam nas etapas iniciais da infecção. Dentre estas, a glicoproteína D tem se destacado em estudos realizados com BoHV-1 e outros herpesvírus homólogos. A gD atua na fusão do envelope viral com a membrana da célula permissiva no hospedeiro através de interações com receptores celulares e com outras glicoproteínas virais, sendo essencial para a entrada do capsídeo na célula. Assim, uma vacina que seja capaz de estimular respostas humorais e celulares contra esta glicoproteína deve ser desenvolvida. Os objetivos deste trabalho foram à produção da forma truncada da gD do BoHV-5 em levedura Pichia pastoris e a avaliação desta quanto a sua antigenicidade e imunogenicidade. Os resultados demonstram que a Pichia pastoris expressou a forma truncada da gD de BoHV-5 secretando para o meio de cultivo ~190mg/L da proteína recombinante, facilitando a purificação da mesma. Testada quanto a sua a sua antigenicidade e imunogenicidade, a proteína recombinante foi reconhecida por anticorpos de animais imunizados com o BoHV-5, sugerindo que características da proteína nativa foram conservadas na proteína recombinante. Os dados apresentados irão permitir o desenvolvimento de estudos 6 futuros com o objetivo de aperfeiçoar a expressão da proteína recombinante e avaliar a sua capacidade de neutralizar o vírus na espécie-alvo.