A clonagem de mamíferos por transferência nuclear de células somáticas (TNCS) ainda é afetada pela baixa eficiência. As modificações epigenéticas estabelecidas durante o processo de diferenciação celular estão entre os principais fatores. Uma vez que estas modificações atuam como barreiras epigenéticas restringindo a reprogramação do núcleo somático. Considerando isso, a maioria dos fatores que promovem a descondensação da cromatina, incluindo os inibidores das Histonas Deacetilases (HDACis), tem sido demonstrado aumentarem a eficiência da reprogramação nuclear, tornando o seu uso comum para melhorar as taxas da TNCS. Neste trabalho, nós testamos dois inibidores das histonas deacetilases: o Ácido Valpróico (VPA) e o Ácido β-Hidróxibutírico (BOHB), sendo um farmacológico e o outro um metabólito endógeno na TNCS. Nosso objetivo era testar se o tratamento de células doadoras de núcleo ou zigotos com estes HDACis melhoravam o desenvolvimento de embriões bovinos clonados. Em relação ao VPA, nós observamos que o tratamento de fibroblastos com o VPA aumentou a acetilação das histonas e a expressão de genes importantes para o desenvolvimento como IGF2R e PPARGC1A. Entretanto, quando as células tratadas foram usadas como doadoras de núcleo, não foi observado diferença nos níveis de acetilação das H3K9 entre os grupos. Além disso, as alterações foram rapidamente removidas após a transferência nuclear. Em relação as taxas de desenvolvimento, o uso de células tratadas como doadoras de núcleo não resultou em diferença durante o desenvolvimento pré- e pós-implantacional. Em relação ao BOHB, nós executamos um série de experimentos para testar se esta molécula age como um inibidor das HDACs em bovinos. Nós observamos que fibroblastos tratados com BOHB apresentam aumento nos níveis globais de H3K9ac. O tratamento altera a expressão de genes importantes como os transportadores de glicose e a enzima chave no metabolismo lipídico SCD. Também, nós demonstramos que este metabólito é capaz de alterar uma marca epigenética em zigotos clonados, que persiste até o estágio de blastocisto. Entretanto, o tratamento dos zigotos com este metabólito endógeno não aumentou a taxa de desenvolvimento pré-implantacional, embora tenha alterado a expressão de um fator de transcrição que protege embriões contra estresse oxidativo, o FOXO3a. O tratamento de zigotos partenogenéticos com BOHB não afetou o desenvolvimento embrionário, nem a produção de ATP, sugerindo que o BOHB não apresenta efeitos tóxicos como anteriormente pensado. Concluindo, os resultados deste trabalho mostram que a inibição das HDACs através de uma molécula farmacológica ou um metabólito endógeno, não aumenta a eficiência da TNCS em bovinos. Entretanto, aqui nós mostramos que o corpo cetônico BOHB pode ser um elo de ligação entre o ambiente extracelular e a regulação do metabolismo. E serve como um modelo in vitro para testar como distúrbios metabólicos como a cetose afeta o metabolismo e epigenoma celular e embrionário em bovinos / Cloning of mammals by somatic cell nuclear transfer (SCNT) is still plagued by the low efficiency. The epigenetic marks established during the cell differentiation process are among the main cause. These modifications act as a barrier restricting the nuclear reprogramming process of somatic nuclei. Based on this, molecules that promotes chromatin decondensing, including Histone Deacetylases inhibitors (HDACis), has been demonstrated increase the efficiency of nuclear reprogramming, making their use common on SCNT procedure. Herein, we tested two histone deacetylase inhibitors: Valproic Acid and β-hydroxybutyric Acid, the former a pharmacological drug and the latter, an endogenous metabolite on SCNT. Our objective was to test whether the donor cells treatment or zygotes with these HDACis improve the bovine cloned embryos development. Regarding the VPA, we observed that fibroblasts treatment with VPA increases the histone acetylation and expression of developmentally important genes such as IGF2R and PPARGC1A. However, when treated cells were used as nuclear donors, we did not observe difference on H3K9ac levels between the groups. Moreover, the alterations were quickly removed after SCNT. Regarding the developmental rates, the use of treated cells as nuclear donors did not affect the pre- and post-implantation development. In the second experiment, we used the BOHB in a series of experiments to test whether this molecule acts as a histone deacetylase inhibitor in bovines. We observed that treatment of fibroblasts with BOHB increased the global levels of H3K9ac. Also, treatment alters the expression of important genes such as glucose transporters and a key enzyme regulating lipid synthesis. Additionally, we demonstrated that this metabolite affect at least one epigenetic mark in cloned zygotes, that lasts until the blastocyst stage. However, zygote treatment with this endogenous metabolite did not increase the pre-implantation developmental rates, albeit increased the expression of a transcription factor that protects cells against oxidative stress, the FOXO3a. Treatment of parthenogenetic embryos with BOHB did not affect the embryo development, neither ATP production, suggesting that BOHB is not toxic as previously believed. Concluding, the results presented here shows that the HDAC inhibition through a pharmacological compound or an endogenous metabolite did not increase the efficiency of bovine SCNT. However, here we showed that the ketone body BOHB might be a nexus between the extracellular environment and the cellular metabolism. Also, it can used as a in vitro model to interrogate questions about does metabolic disturbances such as ketosis in cattle affects the epigenome and cellular metabolism in bovines

O conhecimento das exigências de proteína e energia para o ganho de peso e para a mantença dos bovinos de corte é importante para se obter produtividade máxima com custo mínimo. A raça Nelore compõe grande parte do rebanho brasileiro, e a raça Brangus vem sendo muito utilizada como produto de cruzamento entre uma raça zebuína e taurina (Nelore e Angus). Porém, para a alimentação destes animais são utilizados dados de exigências nutricionais gerados na Europa e Estados Unidos, obtidos com animais e ambientes diferentes dos encontrados no Brasil. Os objetivos deste trabalho foram estimar as exigências de proteína e energia para o ganho de peso de animais das raças Brangus e Nelore através da técnica de abates comparativos. Para isso estimou-se o ganho e a composição corporal através do corte da 9-10-11ª costelas de animais destas raças, alimentados com diferentes proporções de concentrado. A ingestão e a digestibilidade das dietas também foram avaliadas. Utilizou-se 56 bovinos machos inteiros, 28 de cada raça, com idade média de 8 meses e peso médio de 212 kg no início experimento. Quatro animais de cada raça foram abatidos no início do período experimental para a estimativa da composição corporal inicial. Os outros animais foram confinados em baias coletivas (doze animais por baia, com alimentação individual através de portões eletrônicos Calan) e alimentados com rações experimentais com 20, 40, 60 e 80% de concentrado na matéria seca. As pesagens foram realizadas em intervalos de 28 dias após jejum completo de 18 horas, e o período de confinamento foi de 145 dias. O peso médio final foi de 400 kg para a raça Brangus e 361 kg para a raça Nelore. O delineamento experimental foi inteiramente casualizado em arranjo fatorial 2X4. O ensaio de digestibilidade foi realizado com quatro animais de cada raça, alojados em gaiolas de metabolismo, com coleta total de fezes. O delineamento foi em quadrado latino. Os ganhos diários de peso vivo em jejum, de peso vazio e de peso de carcaça quente foram diferentes entre as raças com os maiores ganhos para a raça Brangus e níveis de concentrado na dieta. As maiores médias para as raças Brangus e Nelore foram obtidas com 40% e 60% de concentrado na dieta, respectivamente. Os coeficientes de digestibilidade da proteína bruta e da matéria mineral foram diferentes entre raças (P<0,01), com as maiores médias para a raça Brangus. O teor de nutrientes digestíveis totais foi diferente entre raças ((P<0,09), com as maiores médias para a raça Nelore) e entre níveis de concentrado na dieta. Os coeficientes de digestibilidade da fibra bruta e da fibra em detergente neutro, os teores de energia digestível e metabolizável foram diferentes entre as proporções de concentrado na dieta (P<0,01). Os tratamentos com 20% e 40% de concentrado apresentaram maiores médias para a digestibilidade da fibra em detergente neutro e fibra bruta, respectivamente. O tratamento com 80% de concentrado apresentou maiores médias para os teores de nutrientes digestíveis totais, energia digestível e metabolizável. As composições do corpo vazio e do ganho de peso vazio foram diferentes entre raças. A raça Brangus apresentou as maiores médias de extrato etéreo e energia e a Nelore as maiores médias de água, proteína e cinzas. As exigências líquidas de proteína e de energia para o ganho de peso vazio foram diferentes entre raças, com valores médios para o Brangus e o Nelore de, respectivamente, 0,160 e 0,188 kg de proteína e 3,02 e 2,66 Mcal por kg de ganho de peso vazio. De acordo com estes resultados foi possível observar que a raça Brangus apresentou maior deposição de gordura do que o Nelore. Não foram observadas diferenças entre os níveis de concentrado na dieta, provavelmente devido à idade jovem dos animais que não alcançaram a fase de maior deposição de gordura da curva de crescimento. / The determination of energy and protein requirements for maintenance and growth of beef cattle is very important for an efficient animal production. Nellore and crossed breeds like Brangus are very used in Brazil, but the main source of information about nutritional requirements is the NRC, whose data was obtained with different breeds and environments. The objective of this experiment was to determine the energy and protein requirements of Brangus and Nellore bulls through the comparative slaughter technique, with body and gain composition estimated from the 9-10-11ª rib cut of these breeds fed diets with different concentrate proportions. The fed intake and digestibility of these diets were also determined. Fifty-six young bulls were utilized, 28 of each breed, with 212 kg of shrunk body weight and 8 months of age. Four Brangus and four Nellore bulls were slaughtered in the beginning of the experiment to estimate the initial body composition. The other animals were fed diets with increasing levels of concentrate (20, 40, 60 and 80% of the dry matter). The animals were weighted at 28 days intervals and the daily feed intake individually controlled through Calan Gate equipment. After 145 days of feeding the animals were slaughtered. A completely randomized design with factorial arrangement (2X4) was utilized. Four animals of each breed were utilized in a digestibility trial with total feces collection. The experimental design was the Latin square. The shrunk body gain, empty body gain and hot carcass gain were different for breeds (P<0,01), and for concentrate levels (P<0,01). The Brangus animals were heavier than the Nellore. The Brangus and Nellore breeds showed the best performance with 40% and 60% concentrate diets, respectively. The digestibility of the crude protein and mineral matter was different for breeds (P<0,02), and the Brangus bulls were heavier than the Nellore. The total digestible nutrients also was different for breeds ((P<0,09) the Nellore bulls showed the greatest means), and for concentrate levels (P<0,01). The digestibility of crude fiber and neutral detergent fiber, digestible and metabolizable energy of the diets was different for concentrate levels (P<0,01). The 20% and 40% concentrate diets showed the best crude fiber and neutral detergent fiber digestibility, respectively. The 80% concentrate diet showed the best total digestible nutrients, digestible and metabolizable energy. Fat and energy values in the empty body weight gain were greatest (P<0,01) for Brangus bulls and water, protein and ashes were greatest (P<0,01) for Nellore bulls. Protein and energy requirements for growth were different (P<0,01) for breeds, with values of 0.160 and 0.188 kg of protein and 3.02 and 2.66 Mcal of energy per kg of empty body gain, respectively for Brangus and Nelore bulls. These results showed that Brangus had greater net energy requirement for gain than Nellore. Probably the effect of concentrate levels was not expressive because the animals were young and had not reached the phase of higher fat deposition of the growth curve.

A reprogramação nuclear de uma célula somática a um estado embrionário tem diversas aplicações, como pesquisas básicas na biologia do desenvolvimento, terapia celular, melhoramento genético em animais de produção e conservação de espécies. As principais técnicas utilizadas para a reprogramação nuclear são a transferência nuclear de células somáticas (TNCS) e a geração de células tronco pluripotente induzidas (iPS). Muitos trabalhos têm mostrado uma baixa eficiência no processo de reprogramação nuclear nas duas técnicas, além disso, modificações epigenéticas tem sido apontada como a principal barreira para uma reprogramação nuclear eficiente. Por esse motivo, medidas como a utilização de células menos diferenciadas e/ou alteração do perfil epigenético das células somáticas podem aumentar a eficiência destas técnicas. Por isso, o objetivo deste trabalho foi investigar a influência de marcas epigenéticas em células bovinas utilizadas na reprogramação nuclear mediada por TNCS ou superexpressão de genes relacionados a pluripotêcia (iPS). Para isso, utilizamos 3 abordagens. Primeiro, analisamos marcações epigenéticas relacionadas ao desenvolvimento embrionário e pluripotência (H3K9me2, H3K9me3, H3K9ac, 5mC e 5hmC) em diferentes tipos celulares, analisamos a expressão gênica de genes responsáveis por essas marcações em células de diferentes tecidos (ex. células tronco mesenquimais (MSC) e fibroblastos) e as utilizamos como doadoras de núcleo na TNCS. Na segunda e a terceira abordagem, utilizamos células com menores níveis de H3K9me2 para a geração de iPS e na TNCS, respectivamente. Além disso, por se mostrar eficiente na TNCS, analisamos o efeito da sincronização do ciclo celular por privação de soro fetal bovino (SFB) na geração de células iPS. Com o intuito de diminuir os níveis de H3K9me2, as células foram tratadas com UNC0638, um inibidor especifico das metiltransferases de histona G9a/GLP. Nossos resultados do primeiro experimento mostraram que as MSC podem ser utilizadas como doadoras de núcleo na TNCS, no entanto, mesmo com algumas diferenças na expressão gênica em relação aos fibroblastos, a produção de blastocistos não foi diferente entre as duas células. No segundo experimento, as células privadas de SFB geraram mais colônias que as células controle, enquanto que as células tratadas não apresentaram diferença. Por último, as células tratadas com o UNC0638 apresentaram um menor nível de metilação no DNA em zigotos em relação às células controle. Os resultados encontrados neste trabalho podem contribuir para o melhor entendimento dos mecanismos epigenéticos envolvidos na reprogramação nuclear de bovinos / Nuclear reprogramming of somatic cells to embryonic state has several aplications, such as basic research on developmental biology, cell therapy, genetic improvement in livestock animals and preservation of endangered species. The principal techniques utilized to achieve nuclear reprogramming are Somatic Cell Nuclear Transfer (SCNT) and induced pluripotency. Several works has reported low efficiency rates of nuclear reprogramming when these techniques are used to reprogram somatic cells. Moreover, epigenetic modifications acquired during development act as epigenetic barrier to the complete reprogramming process. For this reason, strategies such as use of less differentiated cells and/or modification of epigenetic profile of somatic cells might increase the efficiency these techniques. The objective of this work was investigate the influence of epigenetic marks in bovine cells utilized on nuclear reprogramming experiments mediated by SCNT or induced pluripotency. To investigate it, we used three approaches. First, we analyzed the epigenetic marks related to the embryonic development and pluripotency (e.g H3K9me2, H3K9me3, H3K9ac, 5mC and 5hmC), gene expression of genes involved in these epigenetic marks in different tissues (i.e. mesenchymal stem cells (MSC) and fibroblasts) and their use as nuclear donor cells on SCNT procedure. Regarding the second and the third approach, we utilized cells with reduced levels of H3K9me2 to generate iPS cells and cloned embryos, respectively. Furthermore, since serum starvation has been demonstrated increase SCNT developmental rates, we assessed the effect of cell cycle synchronization mediated by serum starvation on nuclear reprogramming using iPS cells. Aiming decrease the levels of H3K9me2, cells were treated with UNC0638, a chemical probe that works as a specific inhibitor of the histone methyltransferases G9a and its counterpartner GLP. Our results showed that MSC are suitable to be used as nuclear donors on SCNT procedures, however, in spite of differences on gene expression comparing with fibroblasts, the embryonic developmental rates were not improved. On the second experiment, cells privated of fetal calf serum produced more iPS cells colonies than control cells, whereas cells treated with UNC did not show differences when compared with untreated cells. Lastly, UNC treated donor cells treated produced cloned zygotes with lower levels of DNA methylation compared to zygotes derivated from untreated cells. The results presented here will contribute to the better understanding of the epigenetic mechanisms involved on bovine nuclear reprogramming

Rhodopsin, der Rezeptor der visuellen Kaskade, gehört zu größten Klasse A der G-Protein-koppelnden Rezeptoren (GPCRs) und gilt als Modell-Rezeptor in der GPCR-Forschung. Über 3 % des humanen Genoms kodieren für GPCRs, doch trotz der physiologischen Bedeutung dieser Proteinfamilie sind die fundamentalen Mechanismen, mit denen diese Rezeptoren extrazelluläre Signale in das Zellinnere weiterleiten noch nicht verstanden. In der vorliegenden Dissertation werden Aspekte des Aktivierungsmechanismus von Rhodopsin sowie der Kopplung und Aktivierung des G-Proteins Transduzin untersucht. Die Arbeit ist in drei Schwerpunkte unterteilt: I. Es wurde ein in GPCR’s hochkonserviertes NPxxYx(5,6)F Motiv (Aminosäuresequenz Asn-Pro-x-x-Tyr-x(5,6)-Phe) in der siebten und achten Helix charakterisiert. In diesem konservierten Motiv sind mehrere für die Ausbildung der aktiven Rezeptorkonformation wichtige Funktionen vereint: Verknüpfung zu einem Wasserstoffbrückennetzwerk, Helixflexibilität sowie die exakte Positionierung der achten Helix. Letzteres hat nicht nur bei der Rezeptoraktivierung sondern auch bei der nachfolgenden Interaktion mit dem G-Protein eine Bedeutung. II. Anhand von chimären Rezeptoren, bei denen Teile der achten Helix durch homologe Sequenzen des beta2-adrenergen Rezeptors ausgetauscht wurden, wurde die Rolle der achten Helix bei der Rezeptor-Aktivierung und Bindung des G-Proteins untersucht. Auch bei dieser Studie wurde gezeigt, dass die exakte Positionierung der achten Helix essentiell für die Interaktion mit dem G-Protein ist. Zudem wurde ein bezüglich der G-Protein-Aktivierung funktionsfähiger chimärer Rezeptor gefunden, was auf einen übergeordneten Mechanismus bei der Aktivierung von G-Proteinen durch GPCRs hindeutet. III. Die Funktion des ß-Ionon-Rings des Retinals beim Aktivierungsmechanismus von Rhodopsin wurde an einem Retinal studiert, bei welchem Teile des Retinal-Rings fehlten (azyklisches Retinal). Auch diesem azyklischen Retinal können Eigenschaften eines partiellen Agonisten zugeschrieben werden. Beim Vergleich zu Pigmenten mit dem nativen 11-cis-Retinal wurden starke Analogien bei der initialen Energieaufnahme durch die Retinal-Isomerisierung sowie bei der Weiterleitung der Lichtenergie ins Protein gefunden. Allerdings wird die Energie schlechter auf das Protein übertragen, wodurch wesentlich weniger der aktiven G-Protein bindenden Rezeptorkonformation gebildet wird. Als wichtigste Funktion des Retinal-Rings wurde die Aufrechterhaltung der aktiven Meta-II-Konformation identifiziert. / Rhodopsin, the receptor of the visual cascade, belongs to the largest group A of G-protein coupled receptors (GPCRs) and can be seen as a model receptor in GPCR research. More than 3 % of the human genome code for GPCRs. But despite their physiological relevance, the detailed mechanism of signal transduction from extra cellular signal to different cellular pathways remains to be fully understood. Different aspects of receptor activation and the coupling and activation of the G-protein transducin are investigated in this dissertation. The thesis focuses on the following three subjects: I. A NPxxYx(5,6)F motif (amino acid sequence Asn-Pro-x-x-Tyr-x(5,6)-Phe) has been characterized for rhodopsin. It is localized in helix VII and VIII and is highly conserved throughout the GPCR family. Various roles for rhodopsin activation are combined in this motif: linkage to a hydrogen-bond network, helix flexibility and the exact positioning of helix VIII. The latter is not only relevant for the activation of the receptor but also for interaction with its G-protein. II. The role of helix VIII for receptor activation and G-protein coupling was studied on chimeric receptors, in which parts of helix VIII were exchanged against homologous sequences of the beta2 adrenergic receptor. This study confirmed the importance of helix VIII’s position for G-protein coupling. Furthermore, a chimeric receptor was found, which was fully functional concerning G-protein activation. This indicates that GPCRs might use a single, generic mechanism for G-protein activation. III. The role of the ß-ionone-ring for the activation mechanism of rhodopsin was studied by means of an acyclic retinal, which lacks four carbon atoms of the ß-ionone-ring. This modified retinal could be classified as a partial agonist for rhodopsin. Energy input by retinal isomerization and formation of the G-protein binding Meta-II conformation were found to be very similar to rhodopsin when bound to its native 11-cis-retinal. However, the lack of the ring structure resulted in a lower amount of Meta-II and a fast decay of activity. It was concluded that the main role of the ring structure is to maintain the active state of rhodopsin.

Made available in DSpace on 2016-04-25T18:40:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 CCA - Reginaldo Fernandes Ferreira.pdf: 1444397 bytes, checksum: 1b5ece1e0677f5897e5cb1002da47c2a (MD5) Previous issue date: 2006-08-30 / This paper aims the construction of a managerial model to decision making based on the variable cost to the bovines slaughterhouse freezer developed into a conjoint production with the purpose of short term decision because of the industrial process speed. The development of this work starts approaching questions over the environment which involves the bovines slaughterhouse organizations in Brazil, demonstrating their functioning, economic aspects of this activity, and their importance in the Brazilian economy. Based on bibliography, it will be demonstrated the existent cost methodologies, their main concepts, the advantages and disadvantages of each one of them. The next stage, via bibliography research, it searches to characterize the conjoint production as a particular case predominantly of continuous production. It demonstrates its concepts, ways of cost appropriation more used, nevertheless, emphasizing its inadequate way to the decision making. This work developed practical cases so that are presented common operations to the activity, operations which lead, consequently, the company to the necessity of a decision making. To the decision making, it is adopted the variable cost which will be taken as a base on the contribution margin. Besides the contribution margin, others decisions are taken based on incremental contribution margin because of the separation point that obligates to be considered only the incremental costs and revenues. This work shows a defined point in which the concepts presented by the researched bibliography are not possible to be applied on the decision making over the cost analysis in practice in the bovines slaughterhouses. Based on the contribution margins and fixed costs, this paper also points out how the decision makings can be taken over the minimum quantity of heads of cattle that the slaughterhouse freezer must slaughter and the minimum of pieces to bone and export / Este trabalho objetiva a construção de um modelo gerencial para a tomada de decisão baseado no custeio variável para os frigoríficos abatedouros de bovinos, desenvolvido em produção conjunta com a finalidade de decisões de curto prazo por causa da rapidez do processamento industrial. O desenvolvimento do trabalho inicia-se abordando questões acerca do ambiente que envolve as organizações abatedouro de bovinos no Brasil, demonstrando seu funcionamento, os aspectos econômicos dessa atividade e a importância que têm na economia brasileira. Através de respaldo bibliográfico, são explicitadas as metodologias de custeio existentes, seus principais conceitos, as vantagens e desvantagens de cada uma delas. A etapa seguinte, via pesquisa bibliográfica, busca caracterizar a produção conjunta como um caso particular predominantemente de produção contínua. Demonstra seus conceitos, formas de apropriação de custos mais utilizadas, porém, frisando sua inadequação para a tomada de decisões. O trabalho desenvolveu casos práticos, em que são apresentadas operações comuns à atividade, operações que levarão, conseqüentemente, a empresa à necessidade de tomar decisões. Para a tomada de decisões é adotado o custeio variável no qual elas são tomadas com base na margem de contribuição. Além da margem de contribuição, outras decisões são tomadas com base na margem de contribuição incremental por causa do ponto de separação que obriga a serem levados em conta somente os custos e as receitas incrementais. O trabalho mostra determinado ponto em que os conceitos apresentados pela bibliografia pesquisada não são possíveis de serem aplicados nas tomadas de decisões sobre a análise de custo na prática nos abatedouros de bovinos. Com base nas margens de contribuição e custos fixos, este trabalho, também, aponta como podem ser tomadas as decisões sobre a quantidade mínima de cabeças que o frigorífico deverá abater e o mínimo de peças a desossar e exportar

Orientador: Iveraldo dos Santos Dutra / Banca: Samir Issa Samara / Banca: Vera Cláudia Lorenzetti Magalhães Curci / Resumo: O carbúnculo sintomático é um problema sanitário mundial, responsável por elevados coeficientes de mortalidade em bovinos e ovinos. A imunização dos animais jovens, seguida de reforço anual até 2,5 anos de idade, é a principal medida profilática. Foram realizados três experimentos distintos com intuito de avaliar as respostas sorológicas de bovinos vacinados contra o carbúnculo sintomático, pelos testes de aglutinação em placa e Elisa, empregando-se como antígenos a cepa de referência (MT) e uma cepa de campo (SP). No primeiro experimento, os bezerros foram organizados em três grupos (G1, G2 e G3) e submetidos a três protocolos distintos de vacinação empregando-se uma vacina comercial polivalente contra clostridioses. O G1 foi primovacinado aos 4 meses de idade e recebeu o reforço na desmama (8 meses). O G2 recebeu a primeira dose na desmama e reforço 30 dias após. O G3 foi vacinado somente na desmama. As coletas de soro foram realizas aos 4, 8, 9 e 10 meses de idade dos bezerros. O G1 apresentou a melhor resposta sorológica em comparação aos outros dois protocolos. Quando a avaliação dos grupos foi realizada aos 10 meses de idade, independente do protocolo empregado, a resposta sorológica foi similar. No segundo experimento, foi avaliada a imunidade natural passiva de bezerros, filhos de vacas vacinadas até 30 dias antes do parto (2ª dose), empregando-se duas vacinas comercias polivalente contra clostridioses. As coletas de soro foram realizadas aos (±)7, 45 e 90 dias de idade dos bezerros. Independente das vacinas empregadas na imunização ativa das mães, a resposta sorológica passiva dos bezerros avaliados foi similar até os 3 meses de idade. Houve uma correlação linear da resposta sorológica passiva dos bezerros com a data de vacinação das mães e o dia do parto quando empregado o teste de Elisa. No terceiro experimento, as 30 vacas... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Black leg disease is one of the most important sanitary problem, responsible for high levels of mortality observed in bovines and ovines herds. The vaccination of young animals, followed by annual booter until 2,5 years-old, is the major preventive measure against outbreaks. Three distinct experiments were conducted to measure the vaccinal response from bovines. The vaccinal strains used were the reference MT and field Clostridium chauvoei isolated. Sera from vaccinated animals were tested by agglutination and Enzyme Linked Immunosorbent Assay (Elisa), both standardized for the present study. First experiment, calves were divided into three groups (G1, G2 and G3); and submitted to three vaccination schedule with a polyvalent vaccine. The G1 received first vaccine at 4 months of age and a subsequent booster after calving (8 month-old). The G2 received first vaccine dose after calving and booster at 30 days after. The G3 received only one vaccine dose at 8 months. The sera were colleted at 4, 8, 9 and 10 months for all groups studied. The G1 group showed the best serological response at 10 months of age in comparison to G2 e G3 and control. Moreover, at 10 months of age all groups presented similar levels of serological response. The second experiment, the natural immunity of calves, separated from their mothers vaccinated 30 days before calving with two polyvalent vaccines. The respective serum was colleted at (±) 7, 45 and 90 days of age. All calves presented similar serological response at 3 months of age, independent of vaccinal strain used. The third experiment, 30 heifers, Nelore race, aged above 4 years-old, without vaccination against black leg, were vaccinated with two Clostridium strains. When the SP strain was used the serological response was considered good in G3 (first experiment), second and third experiment for agglutination assay. To compare both techniques, agglutination... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Samir Issa Samara / Banca: Sandra Possebon Gatti / Banca: Edvirges Maristela Pituco / Resumo: O Vírus Respiratório Sincicial Bovino (BRSV) é um dos patógenos pertencentes ao complexo respiratório bovino. Apesar de não provocar enfermidade severa na maioria dos casos, há evidências de que este vírus possa facilitar o estabelecimento de outros patógenos. Assim, o presente estudo buscou estabelecer a possibilidade de relação entre o BRSV e o Herpesvírus Bovino Tipo 1 (BoHV-1), em três propriedades leiteiras, localizadas em três municípios do noroeste do Estado de São Paulo. Além disso, visou também monitorar ao longo do tempo os títulos de anticorpos contra o BRSV em bezerros desde o nascimento. Com base em dados previamente estabelecidos, essas propriedades foram categorizadas como tendo alta, média e baixa prevalência de BoHV-1, respectivamente, propriedade A, no município de Viradouro, (78,6%); propriedade B, no município de Altinópolis, (40%); e, propriedade C, no município de Jaboticabal, (1,6%). Com relação à prevalência de BRSV, a propriedade B apresentou maior prevalência sorológica (82,4%), possivelmente por possuir fatores de risco facilitadores para o desenvolvimento da infecção, enquanto que as propriedades A e C mostraram prevalências estatisticamente equivalentes (45,6% e 59,1%, respectivamente), sem qualquer correlação entre as prevalências de BRSV e BoHV-1. A curva dos títulos de anticorpos contra o BRSV em bezerros nas propriedades A e B monitorados ao longo de um ano foi semelhante, pois ambas apresentaram redução dos títulos a partir do sexto até o oitavo mês de idade dos animais, com seguida retomada de títulos cada vez mais elevados, fato característico de infecção natural. A propriedade C apresentou uma dinâmica semelhante, porém, a maior parte dos bezerros manteve-se positiva durante todo o período, com títulos que decresceram e voltaram a aumentar. / Abstract: The Bovine Respiratory Syncytial Vírus (BRSV) is one of the Bovine Respiratory Complex pathogens. The disease caused by this virus is often mild, but there are evidences that this pathogen may ease the establishment of other pathogens. Data on the epidemiology of BRSV are still scarce. Based on that, this study aimed to determine the prevalence and evaluate antibody titers in calves from three farms. Moreover, the relationship between BRSV and the Bovine Herpesvirus Type 1 (BHV-1) was investigated, based on epidemiological data previously determined in these farms. The three farms were categorized as A, in Viradouro municipality, with high prevalence of BHV-1 (78.6%); B, in Altinópolis municipaltity, with intermediate prevalence for this agent (40%); and C, in Jaboticabal municipality, with low prevalence of BHV-1 (1.6%). Farm B showed higher BRSV prevalence (82.4%), maybe due to larger herd and colder climate than farms A and C, which showed equivalent prevalences for BRSV (45.6% and 59.1%, respectively). The curve of antibody titers against BRSV in calves from farms A and B over one year were similar, as both showed lower titers by 6 to 8 months of age, rising up again due to antigenic induction. Farm C showed equivalent dynamics, but calves remained positive all over the year. In disagree to literature data, this experiment did not showed correlation between BRSV and BHV-1 prevalences, maybe due to lack of circulation of the latter. / Mestre

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The objective of the present study was to evaluate in Charolais and Nellore calves and their crossbred F1 the genetic (crossbreed system, genetic group and heterotic and racial additive effects) and environmental effects influence on weight at birth, adjusted weight for 205, 365, 550 and 730 days of age, and daily average gain of weight from birth to 205, from 205 to 365, from 365 to 550, and from 550 to 730 days of age. Four hundred fifty eight males bovines, all belonging to the same herd, born among the year of 1985 and 1995, from the continuous rotary crossbreed between Charolais and Nellore races were used. The animals were distributed per crossbreed system, defined (Charolais and Nellore) and crossbreed (½ Charolais ½Nellore and ½Nellore ½Charolais). The environmental effects analyzed were cow age at calving (3 to 12 years) and calves birth month (September to December). The data were submitted to variance analysis, f test and t Student test at 5% of significance. The heterotic and racial additive effects were obtained by contrast. Charolais calves presented higher performance in pre- weaning than Nellore, being the individual racial additive genetic effect positive. The maternal racial additive genetic effect influenced just weight at birth (5.26 kg). The heterosis was significant for weaning weight (11.0 kg) and weight gain from birth to weaning (0.052 kg/day). The crossbreed exceeded Nellore in all characteristics and was similar to Charolais for weaning weight. The weight at birth increased with the increasing in cow age at calving, while for the others characteristics of pre- weaning, the influence of genotype x environmental interaction was more evident for defined than crossbreed. The birth month influenced the weight at birth and the gain weight from birth to weaning, with maximum values for born in the months of October (34 kg) and December (0.572 kg/day), respectively. Charolais bovines are superior to Nellore race for performance characteristics in post- weaning, being the individual racial additive genetics effects positives and influence the weight and weight gain from 205 to 365 and from 550 to 730 days of age. Crossbred steers are superior in relation to defined for evaluated weights in post weaning besides of better performance in weight gain from 205 to 365 and from 365 to 550 days of age. The genotype x environmental interaction influenced the weights at year, at yearling and the daily average weight gain from yearling to two years old. The birth month influenced weight at year, and the daily average weight gains from weaning to one year old and from one year old to yearling, with maximum weights for the ones that were born in October, September and December, respectively. / O objetivo do presente estudo foi avaliar em bezerros Charolês, Nelore e suas cruzas F1, a influência dos efeitos genéticos (sistema de acasalamento, grupo genético e efeitos aditivos raciais e heterótico) e ambientais sobre o peso ao nascer, pesos ajustados para 205, 365, 550 e 730 dias de idade, e o ganho de peso médio diário do nascimento aos 205, 205 aos 365, 365 aos 550 e 550 aos 730 dias de idade. Foram utilizados os dados de 458 bovinos machos, do mesmo rebanho, nascidos entre os anos de 1985 a 1995, oriundos do cruzamento rotativo contínuo entre as raças Charolês e Nelore. Os animais foram distribuídos por sistema de acasalamento, definidos (Charolês e Nelore) e cruzados (½ Charolês ½ Nelore e ½ Nelore ½ Charolês). Os efeitos ambientais analisados foram a idade da vaca ao parto (3 a 12 anos) e mês de nascimento dos bezerros (setembro a dezembro). Os dados foram submetidos à análise de variância, teste F, e teste t de Student a 5% de significância. Efeitos aditivos raciais e heteróticos foram obtidos por contraste. Bezerros Charolês apresentaram maior desempenho no pré-desmame do que os Nelore, sendo os efeitos genéticos aditivos raciais individuais positivos. O efeito genético aditivo racial materno influenciou apenas o peso ao nascer (5,26 kg). A heterose foi significativa para peso ao desmame (11,0 kg) e ganho de peso do nascimento ao desmame (0,052 kg/dia). Os cruzados superaram os Nelore em todas as características e foram similares aos Charolês para peso ao desmame. O peso ao nascer incrementou com o aumento na idade da vaca ao parto, enquanto que para as demais características do pré-desmame, a influência da interação genótipo x ambiente foi mais evidente para os definidos do que para os cruzados. O mês de nascimento influenciou o peso ao nascer e o ganho de peso do nascimento ao desmame, com valores máximos para os nascidos nos meses de outubro (34 kg) e dezembro (0,572 kg/dia), respectivamente. Bovinos Charolês são superiores aos da raça Nelore para as características de desempenho no pós-desmame, sendo que os efeitos genéticos aditivos raciais individuais são positivos e influenciam os pesos e ganhos de peso dos 205 aos 365 e 550 aos 730 dias de idade. Os novilhos cruzados são superiores em relação aos definidos para os pesos avaliados no pós-desmame, além do melhor desempenho nos ganhos de peso dos 205 aos 365 e dos 365 aos 550 dias de idade. A interação genótipo x ambiente influenciou os pesos ao ano, ao sobreano e o ganho de peso médio diário do sobreano aos dois anos de idade. O mês de nascimento influenciou o peso ao ano, e os ganhos de peso médio diário do desmame ao ano e de um ano ao sobreano, com pesos máximos para os nascidos em outubro, setembro e dezembro, respectivamente.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-02-19Bitstream added on 2014-06-13T18:48:02Z : No. of bitstreams: 1 araujo_rf_me_jabo.pdf: 248554 bytes, checksum: e7d4bd27c73efa391fb0fac3082dd622 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O carbúnculo sintomático é um problema sanitário mundial, responsável por elevados coeficientes de mortalidade em bovinos e ovinos. A imunização dos animais jovens, seguida de reforço anual até 2,5 anos de idade, é a principal medida profilática. Foram realizados três experimentos distintos com intuito de avaliar as respostas sorológicas de bovinos vacinados contra o carbúnculo sintomático, pelos testes de aglutinação em placa e Elisa, empregando-se como antígenos a cepa de referência (MT) e uma cepa de campo (SP). No primeiro experimento, os bezerros foram organizados em três grupos (G1, G2 e G3) e submetidos a três protocolos distintos de vacinação empregando-se uma vacina comercial polivalente contra clostridioses. O G1 foi primovacinado aos 4 meses de idade e recebeu o reforço na desmama (8 meses). O G2 recebeu a primeira dose na desmama e reforço 30 dias após. O G3 foi vacinado somente na desmama. As coletas de soro foram realizas aos 4, 8, 9 e 10 meses de idade dos bezerros. O G1 apresentou a melhor resposta sorológica em comparação aos outros dois protocolos. Quando a avaliação dos grupos foi realizada aos 10 meses de idade, independente do protocolo empregado, a resposta sorológica foi similar. No segundo experimento, foi avaliada a imunidade natural passiva de bezerros, filhos de vacas vacinadas até 30 dias antes do parto (2ª dose), empregando-se duas vacinas comercias polivalente contra clostridioses. As coletas de soro foram realizadas aos (±)7, 45 e 90 dias de idade dos bezerros. Independente das vacinas empregadas na imunização ativa das mães, a resposta sorológica passiva dos bezerros avaliados foi similar até os 3 meses de idade. Houve uma correlação linear da resposta sorológica passiva dos bezerros com a data de vacinação das mães e o dia do parto quando empregado o teste de Elisa. No terceiro experimento, as 30 vacas... / Black leg disease is one of the most important sanitary problem, responsible for high levels of mortality observed in bovines and ovines herds. The vaccination of young animals, followed by annual booter until 2,5 years-old, is the major preventive measure against outbreaks. Three distinct experiments were conducted to measure the vaccinal response from bovines. The vaccinal strains used were the reference MT and field Clostridium chauvoei isolated. Sera from vaccinated animals were tested by agglutination and Enzyme Linked Immunosorbent Assay (Elisa), both standardized for the present study. First experiment, calves were divided into three groups (G1, G2 and G3); and submitted to three vaccination schedule with a polyvalent vaccine. The G1 received first vaccine at 4 months of age and a subsequent booster after calving (8 month-old). The G2 received first vaccine dose after calving and booster at 30 days after. The G3 received only one vaccine dose at 8 months. The sera were colleted at 4, 8, 9 and 10 months for all groups studied. The G1 group showed the best serological response at 10 months of age in comparison to G2 e G3 and control. Moreover, at 10 months of age all groups presented similar levels of serological response. The second experiment, the natural immunity of calves, separated from their mothers vaccinated 30 days before calving with two polyvalent vaccines. The respective serum was colleted at (±) 7, 45 and 90 days of age. All calves presented similar serological response at 3 months of age, independent of vaccinal strain used. The third experiment, 30 heifers, Nelore race, aged above 4 years-old, without vaccination against black leg, were vaccinated with two Clostridium strains. When the SP strain was used the serological response was considered good in G3 (first experiment), second and third experiment for agglutination assay. To compare both techniques, agglutination... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-06-27Bitstream added on 2014-06-13T18:58:52Z : No. of bitstreams: 1 ferreira_rm_me_jabo.pdf: 499475 bytes, checksum: adcc6fc6d838f270b207706f21c18463 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Os objetivos do estudo foram: avaliar o efeito antioxidante do Trolox® 1) no meio de manutenção de embriões sobre as taxas de concepção (25 e 46 dias) e a perda gestacional de receptoras bovinas Holandesas repetidoras de serviço, em dois períodos (abril-junho/setembro-novembro) e 2) no meio de transporte de oócitos bovinos aspirados de ovários de abatedouro sobre as taxas de clivagem, blastocisto e eclosão in vitro. No Experimento 1, doadoras de embriões foram superovuladas e submetidas à lavagem uterina. Os embriões colhidos foram divididos em dois grupos, deixados em meio com ou sem antioxidante, por 2 a 6h. No Experimento 2, folículos foram aspirados e os complexos cumulus-oócito grau I e II foram divididos em quatro grupos: Controle 8h, Antioxidante 8h, Controle 20h e Antioxidante 20h. Então, foram mantidos em uma transportadora de oócitos (37ºC) por 8 ou 20 horas. Após a maturação, fecundação e cultivo in vitro, as taxas de clivagem (D3), blastocisto (D6, 7 e 9) e eclosão (D11) foram avaliadas. Alíquotas de 200 μL do meio de transporte foram retiradas em cada momento experimental (0, 8 e 20h) para realização dos testes de capacidade antioxidante total (CAT). No Experimento 1, não houve efeito de tratamento sobre as variáveis avaliadas. Foi verificado efeito de período experimental (P=0,001), categoria da doadora (P<0,05), qualidade embrionária (P=0,049) e intervalo Divisão dos Grupos-Inovulação (P<0,0001). No Experimento 2, não houve efeito de tratamento sobre as taxas analisadas. No entanto, houve redução das taxas de clivagem e blastocisto (D7 e 9) nos grupos 20 horas. Ainda, no D6 foram obtidas taxas de blastocisto semelhantes nos grupos Antioxidante 8 e 20h. A análise da CAT evidenciou que o Trolox® auxiliou o combate às ROS. / The objectives of the present study were to evaluate the effect of the addition of an antioxidant (Trolox®) 1) to a holding media for bovine in vivo produced embryos, on conception rates 25 and 46 days of pregnancy and pregnancy loss, in Holstein bovine recipients at 4th or more service, during two periods of the year (April-June/September-November) and 2) to a transport media for bovine oocytes aspirated from slaughter house ovaries, on in vitro cleavage, blastocyst and hatching rates. In Experiment 1, donor cows were superovulated and submitted to uterine flushings. The recovered embryos were divided into two groups, kept in holding media with or without antioxidant, for 2-6h. In Experiment 2, follicles were aspirated and cumulus-oocyte complexes grade I and II were divided into four groups: Control 8h, Antioxidant 8h, Control 20h and Antioxidant 20h. Oocytes were kept in a transportable machine (37ºC) for 8 or 20 hours. After in vitro maturation, fertilization and culture, cleavage (D3), blastocyst (D6, 7 and 9) and hatching rates (D11) were evaluated. Samples (200 μL) of the transport media were collected in each experimental moment (0, 8 e 20h) for total antioxidant capacity assay (TACA). In Experiment 1, no effect of treatment was observed. Effects of experimental period (P=0.001), donor category (P<0.05), embryo quality (P=0.049) and interval Group division-embryo transfer (P<0.0001) were detected. In Experiment 2, no effect of treatment was found on the analyzed rates. However, reduction on cleavage and blastocyst (D7 e 9) rates was detected on Groups 20h. Also, on D6 similar blastocyst rates were observed in Groups Antioxidant 8 and 20h. The analysis of TACA evidenced that Trolox® collaborated with the combat against the ROS.