Um total de 237 fetos bovinos abortados foram enviados ao Setor de Patologia Veterinária da Universidade Federal do Rio Grande do Sul entre junho de 1999 e maio de 2004. Tecidos destes fetos foram analisados através da histologia e imunoistoquímica (IHQ) anti-Neospora caninum. Destes, 72 apresentaram lesões histológicas sugestivas de infecção por protozoário, caraterizadas pela presença de miosite não-supurativa, miocardite não-supurativa, pneumonia intersticial mononuclear associada a focos de necrose e encefalite necrosante não-supurativa multifocal. O cérebro apresentava consistência líquida ou semi-líquida em 61,1% dos fetos, dificultando a obtenção de tecido para a análise histológica e IHQ. A IHQ revelou a presença de taquizoítos e raros cistos de N. caninum no cérebro de 33/47 (70,2%) dos fetos que apresentam lesões histológicas sugestivas de infecção por protozoário. No modelo final da análise multivariada, três variáveis estiveram associadas significativamente com resultado positivo na IHQ nos fetos abortados: consistência do cérebro (P=0,031), lesão no cérebro (P=0,028) e idade (P=0,189). As chances de um resultado positivo na IHQ de N. caninum foram 4,35 vezes maiores (OR=4,35; 95% CI:1,1320-2,8116) quando o feto apresentava cérebro com consistência considerada normal e 4,94 vezes maiores (OR=4,94; 95%CI: 0,1646-3,0313) na presença de lesão sugestiva de infecção por protozoário caracterizada por encefalite de intensidade variada. A probabilidade de resultado positivo na IHQ foi inversamente proporcional à idade fetal, cada mês adicional de gestação diminuíram as chances de um feto apresentar resultado positivo na imunoistoquímica por 0,41 (OR=0,41, 95%CI: 1,5982- 0,1436).

Foram testadas na imunoistoquímica (IHQ) para diarréia viral bovina (BVDV) 654 biópsias de tecidos cutâneos da orelha de bovinos e tecidos de 161 fetos bovinos abortados. Concomitantemente, foram avaliados pela necropsia, histologia e IHQ 19 casos ocorridos entre janeiro de 1996 e dezembro de 2003 e dois casos acompanhados entre janeiro de 2004 e agosto de 2005, remetidos ao Setor de Patologia Veterinária (SPV) da Universidade Federal do Rio Grande do Sul. No total, duas biópsias, seis bovinos e três fetos bovinos abortados apresentaram antígenos do BVDV na IHQ. As lesões macroscópicas desses animais ocorreram principalmente no trato digestivo, como enterite e ulcerações na cavidade oral, gengiva e língua. Atrofia de timo e linfadenomegalia também foram observadas. Histologicamente, hiperplasia linfóide e perda da estrutura folicular nos linfonodos, necrose das placas de Peyer, gliose e neuronofagia (cérebro) e nefrite e degeneração tubular renal foram algumas das lesões observadas. Na IHQ a marcação positiva do antígeno viral foi evidenciada principalmente na pele, cérebro, cerebelo, intestino delgado, linfonodos e baço. A prevalência de casos de BVDV em bovinos representou 23,8% do total de 21 bovinos suspeitos necropsiados entre janeiro de 1996 a agosto de 2005 e 1,86% dos fetos abortados examinados entre junho 1999 e maio 2004 no SPV-UFRGS.

O carrapato Boophilus microplus é um ectoparasita hematófago que infesta os rebanhos bovinos de regiões tropicais e subtropicais, causando grande prejuízo à pecuária. O principal método de controle deste parasita baseia-se no uso de acaricidas, entretanto, o uso de vacinas tem sido estudado como um método de controle promissor. A Boophilus Yolk pro-Cathepsin (BYC) é uma aspártico proteinase presente no ovo do carrapato e envolvida na embriogênese que foi anteriormente testada como imunógeno vacinal. Neste estudo, o cDNA da BYC foi amplificado por PCR e clonado em dois vetores de expressão para produção de duas formas da proteína recombinante com cauda de histidina, rBYC e rBYC-Trx (fusionada com tioredoxina). As duas formas foram expressas em Escherichia coli na forma de corpúsculos de inclusão (CI) e comparadas quanto ao nível de expressão, solubilidade e rendimento na purificacão. Três agentes desnaturantes (N-lauroil sarcosina, hidrocloreto de guanidina e uréia) foram testados para solubilização dos CIs. Sarcosina foi o agente mais eficiente, solubilizando mais de 90 % de rBYC-Trx e rBYC. As duas proteínas recombinantes foram purificadas em cromatografia de afinidade por metal (Ni2+), sob condições desnaturantes. O rendimento na purificação da proteína solúvel foi de 84 % para r-BYC-Trx e 6 % para rBYC. As duas formas foram reconhecidas por soro de coelhos, camundongos e bovinos previamente imunizados com BYC nativa, demonstrando a existência de epítopos comuns entre a BYC nativa e as formas recombinantes expressas em E. coli. Para verificar o potencial vacinal da proteína recombinante, um grupo de bovinos Hereford foi imunizado com rBYC e desafiado com 20.000 larvas de B. microplus por animal. Os soros dos bovinos imunizados reconheceram a BYC nativa em ELISA e “Western blot”, com títulos entre 500 e 4.000. Os resultados do desafio mostraram uma proteção parcial contra a infestação, com 25 % de proteção global. O perfil de expressão de citocinas (IL-2, IL-4, IL-10, IFN-γ) foi verificado por RT-PCR, porém os resultados não permitiram identificar a polarização da resposta imune em Th1 ou Th2. Os resultados de imunoproteção obtidos com a BYC recombinante foram similares aos obtidos na imunização de bovinos com BYC nativa, indicando a possibilidade de uso da forma recombinante como imunógeno vacinal.

Submitted by MARIANA FURTADO ZORZETTO (mary-zorze@hotmail.com) on 2017-05-30T20:52:06Z No. of bitstreams: 1 Tese Mariana Zorzetto.pdf: 1032812 bytes, checksum: 6bf6fb1f8c4f684c7b15d0acf665a4cb (MD5) / Approved for entry into archive by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com) on 2017-05-31T18:03:24Z (GMT) No. of bitstreams: 1 zorzetto_mf_dr_bot.pdf: 1032812 bytes, checksum: 6bf6fb1f8c4f684c7b15d0acf665a4cb (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-31T18:03:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 zorzetto_mf_dr_bot.pdf: 1032812 bytes, checksum: 6bf6fb1f8c4f684c7b15d0acf665a4cb (MD5) Previous issue date: 2016-07-01 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A composição dos lipídeos da membrana espermática e do plasma seminal estão entre os fatores que podem influenciar a capacidade fecundante do sêmen. Desta maneira, este estudo objetivou analisar as diferenças do perfil lipídico do ejaculado de bovinos da raça Nelore, resistentes e sensíveis à criopreservação. Foram utilizados 15 touros da raça Nelore para colheitas de sêmen utilizando eletroejaculador. Os ejaculados foram diluídos com meio convencional na concentração de 25x106 espermatozoides/palheta. Os animais foram divididos em dois grupos conforme a resistência pós-criopreservação, grupo A (Bad freezer, touros sensíveis à criopreservação) e grupo B (Good freezer, touros resistentes à criopreservação). O sêmen fresco foi analisado quanto morfologia realizada por microscopia de interferência diferencial (DIC), cinética espermática e integridade da membrana. Na pós-descongelação as amostras foram avaliadas quanto a cinética espermática, integridade das membranas plasmáticas e acrossomal, caspase ativa, peroxidação lipídica. A análise do perfil de lipídios foi realizada por espectrometria de massa MALDI-MS. Foi possível observar diferença no perfil lipídico dos espermatozoides e do plasma seminal entre os grupos, com maior abundância relativa dos íons m/z 704,59; m/z 804,59 e m/z 943,77 no grupo A nos espermatozoides. No plasma seminal houve maior abundância relativa de 34 íons lipídicos nos touros do grupo B. Assim sendo, conclui-se que existe diferença no perfil de lipídios dos espermatozoides e no plasma seminal de touros sensíveis ou resistentes à criopreservação. / Lipid compositions of the sperm membrane are among the factors that can influence the semen fertilizing capacity. Likewise, the lipid composition of seminal plasma can interfere in sperm quality. In this sense, this study aimed to analyze differences between lipid profile of the ejaculate and sperm parameters from bulls (Nelore breed) wich are resistant and susceptible to cryopreservation. In the study 15 Nelore bulls were used for semen collection by electroejaculation. The samples were diluted with yolk egg-based extender (Botu-Bov®). The animals were divided into two groups according to semen quality after cryopreservation: group A (Bad freezer, bulls sensitive to cryopreservation) and group B (Good freezer, bulls resistant to cryopreservation). Fresh semen was analyzed for sperm morphology by differential interference contrast microscopy (DIC), kinetic parameters by CASA and by plasma membrane integrity by epifluorescence microscopy. In post-freezing the samples were evaluated for kinetic parameters by CASA, sperm viability by flow cytometry (plasma and acrosomal membrane integrity, lipid peroxidation and active caspase) and plasma mebrane integrity by epifluorescence microscopy. Analysis of lipid profile were carried out by mass spectrometry MALDIMS of the sperm membrane lipids (Experiment 1) and from seminal plasma (Experiment 2). In Experiment 1 was observed difference in sperm lipid profile between the groups. The group A showed highest relative abundance of ions m/z 704.59; m/z 804.59 e m/z 943.77 on spermatozoa. In seminal plasma, here was a greater relative abundance of 34 lipid ions in bulls than group B. Therefore, in conclusion there are differences in the sperm lipid profile and seminal plasma lipid profile between sensitive or resistant bulls to semen cryopreservation.

Foram testadas na imunoistoquímica (IHQ) para diarréia viral bovina (BVDV) 654 biópsias de tecidos cutâneos da orelha de bovinos e tecidos de 161 fetos bovinos abortados. Concomitantemente, foram avaliados pela necropsia, histologia e IHQ 19 casos ocorridos entre janeiro de 1996 e dezembro de 2003 e dois casos acompanhados entre janeiro de 2004 e agosto de 2005, remetidos ao Setor de Patologia Veterinária (SPV) da Universidade Federal do Rio Grande do Sul. No total, duas biópsias, seis bovinos e três fetos bovinos abortados apresentaram antígenos do BVDV na IHQ. As lesões macroscópicas desses animais ocorreram principalmente no trato digestivo, como enterite e ulcerações na cavidade oral, gengiva e língua. Atrofia de timo e linfadenomegalia também foram observadas. Histologicamente, hiperplasia linfóide e perda da estrutura folicular nos linfonodos, necrose das placas de Peyer, gliose e neuronofagia (cérebro) e nefrite e degeneração tubular renal foram algumas das lesões observadas. Na IHQ a marcação positiva do antígeno viral foi evidenciada principalmente na pele, cérebro, cerebelo, intestino delgado, linfonodos e baço. A prevalência de casos de BVDV em bovinos representou 23,8% do total de 21 bovinos suspeitos necropsiados entre janeiro de 1996 a agosto de 2005 e 1,86% dos fetos abortados examinados entre junho 1999 e maio 2004 no SPV-UFRGS.

O carrapato Boophilus microplus é um ectoparasita hematófago que infesta os rebanhos bovinos de regiões tropicais e subtropicais, causando grande prejuízo à pecuária. O principal método de controle deste parasita baseia-se no uso de acaricidas, entretanto, o uso de vacinas tem sido estudado como um método de controle promissor. A Boophilus Yolk pro-Cathepsin (BYC) é uma aspártico proteinase presente no ovo do carrapato e envolvida na embriogênese que foi anteriormente testada como imunógeno vacinal. Neste estudo, o cDNA da BYC foi amplificado por PCR e clonado em dois vetores de expressão para produção de duas formas da proteína recombinante com cauda de histidina, rBYC e rBYC-Trx (fusionada com tioredoxina). As duas formas foram expressas em Escherichia coli na forma de corpúsculos de inclusão (CI) e comparadas quanto ao nível de expressão, solubilidade e rendimento na purificacão. Três agentes desnaturantes (N-lauroil sarcosina, hidrocloreto de guanidina e uréia) foram testados para solubilização dos CIs. Sarcosina foi o agente mais eficiente, solubilizando mais de 90 % de rBYC-Trx e rBYC. As duas proteínas recombinantes foram purificadas em cromatografia de afinidade por metal (Ni2+), sob condições desnaturantes. O rendimento na purificação da proteína solúvel foi de 84 % para r-BYC-Trx e 6 % para rBYC. As duas formas foram reconhecidas por soro de coelhos, camundongos e bovinos previamente imunizados com BYC nativa, demonstrando a existência de epítopos comuns entre a BYC nativa e as formas recombinantes expressas em E. coli. Para verificar o potencial vacinal da proteína recombinante, um grupo de bovinos Hereford foi imunizado com rBYC e desafiado com 20.000 larvas de B. microplus por animal. Os soros dos bovinos imunizados reconheceram a BYC nativa em ELISA e “Western blot”, com títulos entre 500 e 4.000. Os resultados do desafio mostraram uma proteção parcial contra a infestação, com 25 % de proteção global. O perfil de expressão de citocinas (IL-2, IL-4, IL-10, IFN-γ) foi verificado por RT-PCR, porém os resultados não permitiram identificar a polarização da resposta imune em Th1 ou Th2. Os resultados de imunoproteção obtidos com a BYC recombinante foram similares aos obtidos na imunização de bovinos com BYC nativa, indicando a possibilidade de uso da forma recombinante como imunógeno vacinal.

Um total de 237 fetos bovinos abortados foram enviados ao Setor de Patologia Veterinária da Universidade Federal do Rio Grande do Sul entre junho de 1999 e maio de 2004. Tecidos destes fetos foram analisados através da histologia e imunoistoquímica (IHQ) anti-Neospora caninum. Destes, 72 apresentaram lesões histológicas sugestivas de infecção por protozoário, caraterizadas pela presença de miosite não-supurativa, miocardite não-supurativa, pneumonia intersticial mononuclear associada a focos de necrose e encefalite necrosante não-supurativa multifocal. O cérebro apresentava consistência líquida ou semi-líquida em 61,1% dos fetos, dificultando a obtenção de tecido para a análise histológica e IHQ. A IHQ revelou a presença de taquizoítos e raros cistos de N. caninum no cérebro de 33/47 (70,2%) dos fetos que apresentam lesões histológicas sugestivas de infecção por protozoário. No modelo final da análise multivariada, três variáveis estiveram associadas significativamente com resultado positivo na IHQ nos fetos abortados: consistência do cérebro (P=0,031), lesão no cérebro (P=0,028) e idade (P=0,189). As chances de um resultado positivo na IHQ de N. caninum foram 4,35 vezes maiores (OR=4,35; 95% CI:1,1320-2,8116) quando o feto apresentava cérebro com consistência considerada normal e 4,94 vezes maiores (OR=4,94; 95%CI: 0,1646-3,0313) na presença de lesão sugestiva de infecção por protozoário caracterizada por encefalite de intensidade variada. A probabilidade de resultado positivo na IHQ foi inversamente proporcional à idade fetal, cada mês adicional de gestação diminuíram as chances de um feto apresentar resultado positivo na imunoistoquímica por 0,41 (OR=0,41, 95%CI: 1,5982- 0,1436).

Made available in DSpace on 2018-08-01T22:56:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_6708_TALITA PAOLI20140326-101818.pdf: 1646891 bytes, checksum: de14d9da58942614842c7040aa3e1f9d (MD5) Previous issue date: 2013-08-20 / A tuberculose bovina é uma doença bacteriana crônica, causada pelo Mycobacterium bovis, que atinge animais e humanos. Além de uma importante zoonose, também causa perdas econômicas na produção de carne e leite. Até o momento a prevalência e distribuição regional da tuberculose não estão bem caracterizadas para o território brasileiro e este conhecimento é fundamental para o direcionamento das ações de controle dessa doença. Pelo exposto, buscou-se para o Estado do Espírito Santo estimar a prevalência e determinar o risco dos bovinos nas diferentes regiões do Estado de desenvolverem tuberculose com base nos achados de lesões tuberculosas em bovinos abatidos em matadouros estaduais no período de janeiro de 2009 a dezembro de 2012. A análise estatística dos dados revelou prevalência de 0.23% para tuberculose bovina no Estado. Os bovinos da região D, que abrange os municípios do extremo sul capixaba, apresentam risco relativo de desenvolver tuberculose 11.36, 7.07 e 1.7 vezes superior às regiões A, B e C respectivamente. O município de Muqui apresentou a maior prevalência (1%) e risco relativo para tuberculose bovina até 19.6 vezes superior quando comparado aos demais municípios da região D. Estes resultados indicam a necessidade de elaboração e adoção de medidas que visem o controle da tuberculose no Estado, sobretudo na região de maior prevalência.

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / La alta prevalencia de enfermedades infecciosas bacterianas ha generado la continua búsqueda de nuevos elementos terapéuticos que ayuden a su control y prevención. Entre estas herramientas terapéuticas se encuentran los bacteriófagos o fagos, virus que, a través de su ciclo reproductivo lítico, destruyen bacterias. Es por esto que la investigación sobre el uso de fagos en Medicina Veterinaria se ha vuelto cada vez más importante. Fagos que infectan Salmonella han sido documentados, siendo abundantes y ampliamente distribuidos en ambientes relacionados a producciones bovinas. En este estudio investigamos la abundancia y diversidad de fagos de Salmonella en muestras de bovinos provenientes de 6 sectores distintos de Isla de Pascua. Como resultado, se aislaron en total 90 fagos, provenientes de los 6 sectores muestreados. La caracterización del rango de hospederos (RH) determinó que los fagos aislados lisan entre 1 y 19 cepas de Salmonella hospederas, siendo S. Javiana, S. Dublin, S. Heidelberg, S. Enteritidis y S. Agona las más susceptibles a la lisis. Además, según el número de cepas lisadas, 26 de los 90 fagos aislados (28,9%) fueron clasificados en estrecho RH, mientras los otros 63 (70%) en amplio RH. Solo 1 fago fue clasificado en muy amplio RH, por lisar 19 cepas hospederas. Nuestro estudio no solo mostró la considerable diversidad fenotípica que presentan los fagos de Salmonella que se encuentran común y ampliamente distribuidos a lo largo del territorio de Isla de Pascua, sino también muestra que fagos que lisan serotipos que comúnmente causan salmonelosis en bovinos, son obtenidos con frecuencia, sugiriendo que los fagos podrían jugar un rol importante en la ecología de Salmonella en estos animales. / The high prevalence of bacterial infectious diseases has generated the continuous search for new therapeutic elements that help its control and prevention. Among these therapeutic tools are bacteriophages or phages, viruses that cross their lytic reproductive cycle, destroy bacteria. Therefore research on the use of phages in Veterinary Medicine has become increasingly important. Phages that infect Salmonella have been documented, being abundant and widely distributed in environments related to bovine production. In this study, we investigated the abundance and diversity of Salmonella phage in samples of cattle from 6 different sectors of Easter Island. As a result, a total of 90 phage were isolated from the 6 sampled sectors. The characterization of the host ranges (HR) determined that phages isolated lysed between 1 and 19 Salmonella host strains, being S. Javiana, S. Dublin, S. Heidelberg, S. Enteritidis and S. Agona, the most susceptible to lysis. In addition, according to the number of lysed strains, 26 of the 90 isolated phages (28.9%) were classified in narrow RH, while the other 63 (70%) in broad RH. Only 1 phage was classified in very broad RH, by lysing 19 host strains. Our study not only showed the considerable phenotypic diversity of the Salmonella phages that are common and widely distributed throughout the Easter Island territory, but also shows that phage lysing serotypes that commonly cause salmonellosis in cattle are obtained with frequency, suggesting that phages could play an important role in the ecology of Salmonella in these animals.

Orientador: Marion Burkhardt De Koivisto / Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar a qualidade espermática, compactação/integridade e deficiência de protamina da cromatina de espermatozoides, somado às características reprodutivas de acordo com a idade. Procurou-se avaliar a interferência da idade nas variáveis analisadas e a evolução das mesmas ao longo de quatro coletas mensais. Foram selecionados 43 touros de elite Bos taurus indicus da raça Gir com idades iniciais entre 18 e 42 meses e divididos em três grupos: jovens (18,5-24,7 meses de idade, n=15), jovens adultos (25,2-28,6 meses de idade, n=16) e adultos (29,1-42,0 meses de idade, n=12). Nessa primeira avaliação as características reprodutivas foram incluídas (Fertilidade, Classificação Andrológica por Pontos e Índice de Classificação de Touros). Em seguida 38 dos 43 touros foram divididos em 3 grupos (mesmas faixas etárias): jovens (n=12), jovens adultos (n=13) e adultos (n=13). Após descongelamento, as amostras foram submetidas às técnicas de coloração do azul de toluidina, para avaliar concomitantemente condensação/integridade da cromatina e morfometria da cabeça espermática, e coloração pela cromomicina A3 (CMA3), para investigar deficiência de protamina espermática. Animais do grupo jovem apresentaram espermatozoides com maior heterogeneidade da compactação da cromatina (CV) (2,52±0,31%) que animais do grupo jovem adulto (1,75±0,10 %). Além disso, o grupo jovem apresentou alteração de cromatina em todas as coletas (Dif > 2 e/ou CV > 5%). O grupo jovem adulto ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of this study was to evaluate sperm quality, condensation/integrity and protamine deficiency of sperm's chromatin packaging, as well as the behavior of reproductive characteristics according to age. For that, two approaches were done: 1st) evaluate how age would interfere in the analyzed variables, 2nd) evaluate how the variables would evolve along four monthly collections. On the 1st approach, 43 elite Gir bulls (Bos taurus indicus) with initial ages between 18 and 42 months were divided into three groups: young (18.5-24.7 months, n=15), young adult (25.2-28.6 months, n=16) and adult (29.1-42.0 months, n=12). Results of reproductive characteristics evaluation (Fertility, Andrological Classification by Points and Bull Classification Index) were included in this first approach. For the 2nd approach, 38 of the 43 bulls were divided into three groups (using the same criteria described before): young (n=12), young adult (n=13) and adult (n=13). After thawing, semen samples were evaluated trough the toluidine blue method, for chromatin condensation/integrity and sperm head morphometry assessment and chromomicin A3 (CMA3) to analyze protamine deficiency. Animals from the young group presented spermatozoa with higher heterogeneity of chromatin compaction (CV) (2.52±0.31 %) than animals from the young adult group (1.75±0.10 %). Young bulls also presented chromatin alteration in all the four collections ((Dif > 2 and/or CV > 5%). The young adult group showed higher fertility i... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre