Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:24Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2003Bitstream added on 2014-06-13T18:41:59Z : No. of bitstreams: 1 coutinho_as_dr_botfmvz.pdf: 748919 bytes, checksum: c3d99611d777fe2a213bb8f475b4bee3 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / A Mannheimia haemolytica A1 é o agente etiológico da Mannheimiose Pneumônica Bovina (MPB), uma doença de grande importância econômica. Um modelo experimental de MPB foi utilizado com o objetivo de avaliar os sinais clínicos, as alterações hematológicas e as espécies bacterianas das cavidades nasais e nasofaringeanas de bezerros com MPB, em diferentes momentos do curso da doença. Um total de 28 bezerros foi divido em sete lotes e os bezerros de cada lote foram distribuídos aleatoriamente em cada um dos quatro grupos. Cada grupo foi avaliado em um momento do curso da MPB: grupo I às 12, grupo II às 24, grupo III às 48 e grupo IV às 72 horas após a inoculação. Após incubação por cinco horas, a 37ºC e sob rotação de 150 ciclos/min, os inóculos da cepa D153 de M. haemolytica A1, com concentrações variando entre 1,5 x 10 8 a 8,20 x 10 9 UFCs (Unidades Formadoras de Colônias), foram infundidos na região da carina em todos os bezerros de cada lote, por via transtraqueal, enquanto eram mantidos em decúbito lateral direito. As respostas dos bezerros de cada grupo, I a IV, à M. haemolytica A1 foram caracterizadas por: hipertermia e taquicardia, com a temperatura corporal e a freqüência cardíaca tendendo a ser mais baixa nos grupos I a III e alcançando valores mais elevados no grupo IV. A freqüência respiratória aumentou em todos os grupos após a inoculação, com os valores dos grupos III e IV tendendo a ser mais elevados. Os sinais clínicos qualitativos da MPB que indicaram alterações da condição física geral, do sistema cardiovascular e alterações oculares tenderam a melhorar à medida que a doença progrediu, quando os quatro grupos foram comparados. Adicionalmente, a freqüência da secreção nasal mucosa e a intensidade da secreção nasal muco-purulenta tenderam a aumentar, concomitantemente com o aumento da... . / Mannheimia haemolytica A1 is the etiologic agent of Bovine Pneumonic Mannheimiosis (BPM), a disease of great economic importance. An experimental model of BPM was utilized with the objective of evaluating the clinical signs, hematologic changes and the bacterial species of the nasal and nasopharynx cavities of calves with BPM at different moments of the course of the disease. A total of 28 calves were divided in seven blocks, and the calves of each block were randomized to take part in one of four groups. Each group was evaluated at one moment of the course of BPM: group I at 12, II at 24, III at 48 and IV at 72 hours after inoculation. After incubation for 5 hours at 37ºC and under rotation of 150 cycles/min, the inoculums of the D153 strain of M. haemolytica A1, with concentrations varying between 1,5 x 10 8 a 8,20 x 10 9 CFU (Colonies Forming Unit), were infused at the karin region in all calves of each block, through transtraqueal route, while the calves were in right side lying. The reaction of the calves of each group (I to IV) to M. haemolytica A1 was characterized by: hipertermia and tachycardia, with body temperature and heart rate tending to be lower in groups I to III and reaching higher values in group IV. Respiratory rate increased in all groups after inoculation, with the values of groups III and IV tending to be higher. BPM qualitative clinical signs which indicated alterations of general physical condition, alterations of the cardiovascular system and ocular changes tended to improve along the progression of the disease when the four groups were compared. Additionally, the frequency of the mucous nasal... (Complete abstract, click electronic address below).

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2018-09-06T14:03:31Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1674163 bytes, checksum: b5cc972ba56b4bcc4577fa26b6b1813f (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-06T14:03:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1674163 bytes, checksum: b5cc972ba56b4bcc4577fa26b6b1813f (MD5) Previous issue date: 2018-02-28 / As doenças parasitárias representam um dos principais problemas para pecuária. No Brasil, a cisticercose é a patologia de maior ocorrência no exame postmortem de bovinos, gerando perdas econômicas para a cadeia produtiva da carne, além de constituir um problema para a saúde publica. Apesar disso, a mensuração das perdas econômicas devido a cisticercose bovina, assim como a origem de tais perdas ainda é negligenciada. Assim, estudos que integram informações do diagnóstico da cisticercose no frigorífico, somado à informação de origem do animal, possibilita a identificação das áreas de ocorrência da doença, quantificação e determinação de perdas econômicas. O objetivo da pesquisa foi o de avaliar as perdas econômicas relacionadas a dados epidemiológicos da cisticercose bovina rastreada a partir de estabelecimentos de abate e em propriedades rurais localizadas na Microrregião de Uberlândia de 2015 à 2017, analisados em diferentes cenários. Para tal foi realizado um estudo observacional analítico, do tipo transversal retrospectivo em abatedouro frigoríficos, simultaneamente a um levantamento sorológico da cisticercose bovina nas propriedades rurais, no período de janeiro de 2015 a agosto de 2017. Foram analisados os registros de condenação 1.186 animais positivos a cisticercose bovina num total de 175.947 abatidos (0,67% de prevalência) num abatedouro frigorífico localizado no município de Uberlândia e coletado amostras de sangue de 1024 bovinos e aplicado um questionário epidemiológico nas propriedades rurais. Foi realizado diagnóstico pelo método de inspeção postmortem (anatomopatológico) e pelo método laboratorial, utilizando o teste de ELISA (triagem), seguido do Immunoblot. As perdas econômicas no segmento da cadeia produtiva foram estimadas em 271.245 kg equivalente a R$ 570.667,95 sendo maior parte desta perda na obtenção da carne (R$565.093,75) em relação a produção animal (R$5.574,20). De acordo com a origem dos animais as maiores perdas ocorreram nas Microrregiões de Uberlândia e Araxá. Identificou­se a associação entre fatores de risco e as perdas econômicas como a ausência de assistência médico­veterinária, o acesso dos animais a rio/ribeirão, a não vermifugação dos animais e a origem dos animais. Este estudo revelou prevalência e perdas econômicas maiores no método de diagnóstico laboratorial, de 5,08% e R$12.185,33 em comparação ao método de diagnóstico anatomopatológico, com 0,62% de prevalência e perdas de R$1.496,51. Os resultados da pesquisa permitiram mensurar as perdas econômicas da cisticercose bovina na sua cadeia produtiva e determinar a origem de tais perdas. / Parasitic diseases represent one of the main problems for livestock farming. In Brazil, cysticercosis is the most frequent pathology in bovine postmortem examination, generating economic losses for the meat production chain, besides to constitute a problem for public health. Despite this, the measurement of economic losses due to bovine cysticercosis, as well as the origin of such losses is still neglected. Thus, studies that integrate information on the diagnosis of cysticercosis in the slaughterhouse, added to the information of origin of the animal, allows the identification of the areas of occurrence of the disease, quantification and determination of economic losses. The objective of the research was to evaluate the economic losses related to epidemiological data of bovine cysticercosis traced from slaughterhouses and rural properties located in the Microregion of Uberlândia from 2015 to 2017, analyzed in different scenarios. An observational, cross­sectional, retrospective cross­sectional study was carried out in a slaughterhouse at the same time as a serological survey of bovine cysticercosis in the rural properties, from January 2015 to August 2017. A total of 1,186 animals positive for bovine cysticercosis in a total of 175.947 slaughters (0,67% of prevalence) in a slaughterhouse located in the city of Uberlândia, and blood samples of 1024 cattle were collected and an epidemiological questionnaire was applied in the rural properties. The diagnosis was performed by the method of post­mortem inspection (pathology) and by the laboratory method, using ELISA (screening), followed by Immunoblot. The economic losses in the segment of the productive chain were estimated at 271.245 kg equivalent to R$ 570.667,95, most of this loss in obtaining the meat being (R$ 565,093.75) in relation to animal production (R$ 5.574,20). According to the origin of the animals, the greatest losses were to the Microregions of Uberlândia and Araxá. The association between risk fators and economic losses was identified as the absence of veterinary medical assistance, the access of the animals to the river / stream, the non­vermifugation of the animals and the origin of the animals. This study revealed a higher prevalence and economic losses due to a higher prevalence in the laboratory diagnosis method, 5.08% and R$ 12.185,33, compared to the method of pathological diagnosis at the post­mortem inspection, with a prevalence of 0.62% and a loss of R$ 1.496,51. The results of the research allowed to measure the economic losses of bovine cysticercosis in the productive chain and to determine the origin of such losses.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:22Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-02-07Bitstream added on 2014-06-13T19:16:12Z : No. of bitstreams: 1 pereira_mhc_me_botfmvz.pdf: 261210 bytes, checksum: 2050ad8bcfea0fcd04c28e04b116b34b (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / O objetivo deste estudo foi avaliar se vacinação contra doenças da reprodução melhora o desempenho reprodutivo de vacas de leite em lactação. Foram realizados quatro experimentos. O experimento 01 foi realizado em 38 fazendas que não utilizavam vacina contra Rinotraqueíte Infecciosa Bovina (IBR), Diarreia Viral Bovina (BVD) e Leptospirose, foram utilizadas 853 vacas Girolando que foram vacinadas (grupo tratado) ou não (grupo controle) no dia -11 (inicio do protocolo de IATF). A segunda dose da vacina foi realizada no dia 30 (diagnóstico de gestação). A vacina que foi utilizada é composta de amostras atenuadas quimicamente alteradas do vírus da IBR associada a amostras citopáticas e não citopáticas do vírus da BVD e culturas inativadas contra cinco sorotipos da Leptospira spp (canicola, grippotyphosa, hardjo, icterohaemorrhagiae e pomona). O experimento 02 foi realizado em 28 fazendas que não utilizavam vacina contra IBR, BVD e Leptospirose, foram utilizadas 287 vacas Girolando que foram pré vacinadas (grupo tratado) ou não (grupo controle) entre os dias -41 a -32, e a segunda dose da vacina foi realizada no dia -11 (inicio do protocolo de IATF). O experimento 03 foi realizado em 17 fazendas que não utilizavam vacina contra IBR/BVDV e Leptospirose, foram utilizadas 1680 vacas holandesas, sendo que vacas com mais de 28 dias em lactação foram vacinadas (grupo tratado) ou não (grupo controle), e a segunda dose da vacina foi realizada 14 dias após a primeira dose. As inseminações foram realizadas entre 15 a 135 dias após a segunda dose da vacina e as perdas de gestação foram avaliadas até 60 dias após a última IA. O experimento 04 foi realizado em 15 fazendas que utilizavam vacina contra IBR, BVD e Leptospirose, foram utilizadas 820 vacas Girolando que foram re-vacinadas... / The aim of this study was to evaluate the effect of vaccination against reproductive diseases on the reproductive performance of lactating dairy cows. The experiment 01 was performed in 38 farms that did not utilize vaccine against IBR/BVD and Leptospirosis, 853 Girolando cows were vaccinated (treated group) or not (control group) on day -11 (beginning of the TAI protocol). The second dose of vaccine was held on day 30 (preganancy diagnosis). The vaccine that was used consists of chemically altered live samples of the IBR virus associated with samples of cytpathic and non cytopathic BVD virus and inactivated cultures against five serotypes of Leptospira spp. (canicola, grippotyphosa, hardjo, icterohaemorrhagiae e pomona). The experiment 02 was performed in 28 farms that did not utilize vaccine against IBR/BVD and Leptospirosis, 287 Girolando cows were pre - vaccinated (treated group) or not (control group), between the days -41 to – 31, the second dose of vaccine was held on day -11 (beginning of the TAI protocol). The experiment 03 was performed in 17 farms that did not utilize vaccine against IBR/BVD and Leptospirosis, 1680 Holstein cows were used in this study, cows with more than 28 days in milk were vaccinated (treated group) or not (control group), the second dose of vaccine was performed 14 days after de first dose. The AI were performed between 15 and 135 days after the second vaccine dose and the pregnancy loss at 60 days after the last AI. The experiment 04 was performed in 15 farms that utilize vaccine against IBR/BVD and Leptospirosis, 820 Girolando cows were vaccinated (treated group) or not (control group) on day -11 (beginning of the TAI protocol). The pregnancy rate was evaluated in the experiments 1, 2 and 4 at 30 and 71 days after TAI, in experiment 03 the pregnancy...(Complete abstract click electronic access below)

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2018-09-06T11:51:20Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 929936 bytes, checksum: a92c4c289b141c7d1bcc147b944ab7c6 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-06T11:51:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 929936 bytes, checksum: a92c4c289b141c7d1bcc147b944ab7c6 (MD5) Previous issue date: 2018-05-25 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / A cisticercose bovina é uma enfermidade de distribuição cosmopolita e de caráter zoonótico, causada pela forma larval Taenia saginata. A prevalência dessa zoonose em estabelecimentos de abate é responsável por consideráveis perdas econômicas para o país devido à condenação e ao aumento do custo de processamento das carcaças submetidas a aproveitamento condicional de bovinos infectados. Apesar da importância da cisticercose bovina para a saúde pública, para a saúde animal e para economia, a realidade epidemiológica da ocorrência dessa zoonose no Brasil é pouco conhecida. Dessa forma, esta pesquisa teve por objetivo realizar um levantamento epidemiológico e avaliar os principais fatores de risco relacionados com a transmissão da cisticercose bovina em animais enviados para abate provenientes de propriedades localizadas na região do Triângulo Mineiro, com base no rastreamento dos casos de cisticercose bovina detectados em um estabelecimento de abate do município de Uberlândia-MG. Foi realizado um estudo de corte transversal em 87 propriedades. A partir da Guia de Trânsito Animal (GTA) foram obtidos os endereços das propriedades incluídas no estudo e realizadas as coletas de sangue de 1024 bovinos. O diagnóstico sorológico realizado por triagem pelo teste Elisa indireto e Immunoblot para confirmação. Foi aplicado também um questionário epidemiológico sobre as condições sanitárias das propriedades, em relação ao sistema de criação animal, como por exemplo, manejo, origem dos animais, atividade predominante, fonte de abastecimento de água, higiene pessoal, padrão de alimentação e moradia das propriedades, a fim de determinar os possíveis fatores de risco associados a transmissão T. saginata. A prevalência encontrada foi de 5,1% (IC 95%= 3,74-6,42). Os fatores de risco identificados na área de estudo foram a origem dos bovinos (RC= 4,9 IC 95%= 1,5 – 15,8), sistema de pastejo (RC= 6,4 IC 95%= 2,0-20,2) e destino do esgoto das propriedades (RC= 3,6 IC 95%= 2,3-5,6). A partir da análise espacial foi identificado um aglomerado na região de estudo, com risco de infecção 2,85 vezes maior nas propriedades localizados dentro desse aglomerado quando comparado com as propriedades localizadas fora dessa área. Esses resultados mostram que a região do Triângulo mineiro é endêmica para a doença e medidas preventivas devem ser aplicadas em relação ao sistema de manejo e a estrutura infra sanitária das propriedades. / Bovine cysticercosis is a zoonotic, cosmopolitan disease caused by the larval form of Taenia saginata. The prevalence of this zoonosis in slaughterhouses is responsible for considerable economic losses to the country due to the condemnation and increase of the cost of processing the carcasses subject to the conditional use of infected cattle. Despite the importance of bovine cysticercosis to public health, animal health and economics, the epidemiological reality of the occurrence of this zoonosis in Brazil is poorly understood. Thus, this research aimed to carry out an epidemiological survey and evaluate the main risk factors related to the transmission of bovine cysticercosis in animals sent to slaughter from farms located in the Triângulo Mineiro region, based on the tracing of cases of bovine cysticercosis detected in a slaughter establishment in the municipalitiy of Uberlândia-MG. Conducted a cross-sectional epidemiological study on 87 farms. From the Animal Transit Guide (GTA), obtained the addresses of the farms included in the study and blood samples collected from 1024 cattle. The serological diagnosis performed by screening by the indirect Elisa test and Immunoblot for confirmation. Was also applied an epidemiological questionnaire on the sanitary conditions of farms, in relation to the animal husbandry system, such as management, origin of animals, predominant activity, source of water supply, personal hygiene, and feeding pattern and housing of the farms, in order to determine the possible risk factors associated with the transmission of T. saginata. The prevalence was 5.1% (95% CI = 3.74-6.42). The risk factors identified in the study area were the cattle origin (OR= 4.9/ 95% CI = 1.5 – 15.8), grazing system (OR= 6.4/ 95% CI = 2.0-20.2) and the destination of the farms' sewage (OR= 3,6/ 95% CI = 2.3-5.6). From the spatial analysis, in the study region identified a cluster, with a risk of infection 2.85 times higher in farms located inside this cluster when compared to farms located elsewhere. These results show that the Triângulo Mineiro region is endemic to the disease and preventive measures should be applied in relation to the management system and the infra-sanitary structure of the farms.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-03-14T18:51:10Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 943385 bytes, checksum: 8adee72c3a2e9d49512f689910c76c69 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-14T18:51:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 943385 bytes, checksum: 8adee72c3a2e9d49512f689910c76c69 (MD5) Previous issue date: 2016-12-09 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Mastite causada por Escherichia coli tem a capacidade de estimular intensamente o sistema imunológico e desencadear rapida inflamação na glândula mamária. Em contraste, Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (MAP), agente etiológico da paratuberculose, caracterizada por enterite granulomatosa crônica, pode infectar a glândula mamária sem estimular intensamente a resposta inflamatória. A interação dessas duas bactérias na glândula mamária ainda é desconhecida. Em alguns casos, tanto a eliminação de MAP pelo leite como pelas fezes podem ocorrer de forma passiva, após a infecção ascendente da glândula mamária ou após ingestão de MAP, respectivamente. Estes animais, chamados passive-shedders, são importantes como uma fonte de infecção a animais suscetíveis no rebanho. O objetivo deste estudo foi investigar a relação entre MAP e E. coli em células de glândula mamária sob condições experimentais e verificar a presença de animais passive-shedders. A relação entre uma cepa K-10 de MAP e E. coli isolada de leite mastítico em linhagem de células epiteliais mamárias (MAC-T) foi avaliada. As células previamente infectadas com MAP diminuíram a invasão de E. coli durante 120 min de experimentação. Contudo, a eficiência da translocação de E. coli e a viabilidade das células MAC-T não foram comprometidas. Ao contrário, células previamente infectadas por E. coli aumentaram a capacidade de translocação baso-apical de MAP até os 30 min e diminuiu aos 120min pós-infecção. A quantificação de citocinas relevou que a expressão de IL-1β aos 120min foi significativa (P<0.05) para células infectadas por MAP + E. coli e E. coli apenas. As expressões de MAPKp 38 e IL-10 não foram significativas, independente do tempo pós-infecção. Para detectar a ocorrência de animais passive-shedders, 10 propriedades foram previamente investigadas para a presença de MAP. Treze cabras foram positivas por cultura de fezes e/ou PCR de leite. Dentre os animais positivos, quatro (4/13) foram adquiridas e avaliados por IS900-PCR, cultura de fezes, de leite e de tecido, e sorologia (ELISA). Todos os resultados foram negativos no período de um ano, demonstrando que os animais realizaram o fenômeno pass-through e a contaminação ascendente da glândula mamária, sem tornarem-se infectados. No geral, esses resultados indicam que a presença de MAP nas células mamárias pode dificultar a capacidade de invasão de E. coli, mas quando no interior da célula mamária, translocam-se mais eficientemente. No entanto, quando as células são previamente infectadas por E. coli, MAP é rapidamente atraído da região subepitelial para a superfície celular. A produção de IL-1β intensifica a atração de macrófagos para o sítio de infecção, onde MAP se beneficia, infectando-os. / Mastitis caused by Escherichia coli can intensely stimulate the immune system and rapidly trigger inflammation in the mammary gland. In contrast, Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (MAP), the etiological agent of paratuberculosis, characterized by chronic granulomatous enteritis, can infect the mammary gland without intensely stimulating the inflammatory response. The interaction of these two species in the mammary gland is still unknown. In some cases, both the elimination of MAP by milk and faeces may occur passively, either through ascending infection of the mammary gland or through ingestion of MAP, respectively. These animals are called passive- shedders and are important as a source of infection to susceptible animals in the herd. The aim of this study was to investigate the relationship between MAP and E. coli in mammary gland cells under experimental conditions and verify the presence of passive- shedder animals. The relationship between a K-10 strain of MAP and E. coli isolated from mastitic milk in mammary epithelial cell lines was evaluated. Cells previously infected by MAP decreased E. coli invasiveness during 120min experimentation. However, the efficiency of E. coli translocation was not compromised, nor was the viability of the MAC-T cells. In contrast, cells previously infected by E. coli showed increased basal-apical translocation capacity of MAP up to 30 min and decreased at 120 min postinfection. Quantification of cytokines showed that IL-1β expression at 120 min was significantly increased in cells infected by MAP + E. coli and E. coli only. Expression of MAPKp 38 and IL-10 were not significant, regardless of time postinfection. To determine the occurrence of passive-shedders, 10 properties were previously investigated for MAP detection. Thirteen goats were positive by faeces culture and/or milk PCR. Among the positive animals, four (4/13) were evaluated by IS900-PCR, feces culture, milk and tissue culture and serology (ELISA). All the results were negative over a one-year period, demonstrating that the animals performed pass- through phenomenon and upward contamination of the mammary gland without becoming infected. Together, these results indicate that the presence of MAP in mammary cells may hamper capacity of E. coli invasion, but when within the mammary cell, the bacteria evade more efficiently. However, when the cells are pre-infected by E. coli, MAP is rapidly attracted from the subepithelial region to the cell surface. IL-1β production enhances the attraction of macrophages to the site of infection, where MAP benefits by infecting them.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-03-28T13:39:39Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 14234774 bytes, checksum: 47bb074ba73e29750ddfef0ea6c3e59b (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-28T13:39:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 14234774 bytes, checksum: 47bb074ba73e29750ddfef0ea6c3e59b (MD5) Previous issue date: 2017-02-10 / Recently, R. microplus has extended its distribution to higher altitudes in Colombia. Proper identification of acaricide resistance mechanisms is required, as well as tick- borne diseases diagnosis and vaccine candidates for Babesia bovis and Anaplasma marginale. Patent restrictions and the scholarship funding requirements established three separated, but related, chapters for the DSc thesis. Chapter 1: Detection of genes to synthetic pyrethroids resisntance and Babesia spp. in Rhipicephalus microplus and cattle blood samples from Colombia. Samples of R. microplus (engorged females and larvae) and cattle blood were collected from selected farms in 8 municipalities in Colombia. A PCR screening for mutations on CzEst 9 and IIIS6 genes that confer synthetic pyrethroid resistance showed all tick samples had a heterozygous genotype to CzEst9 and most of the samples had an IIIS6 susceptible genotype. A nested PCR screening for detection of B. bovis rra and B. bigemina rap-1c genes resulted in unexpected bands prevented conclusive evidence. Chapter 2: Transformation process of Pichia pastoris KM71 with the synthetic gene H1Bbo23290 derivative from Babesia bovis RAP-1 protein. The transformation process of Pichia pastoris KM71 with H1Bbo23290 (a promising vaccine candidate against bovine babesiosis) was unsuccessful. Plasmid DNA extraction and subsequent linearization were the major obstacles. Chapter 3: Bovine immune response produced by oMP7, oPM8, and oMP9 Outer Membrane proteins from Anaplasma marginale St. Maries strain in confined experimental immunized animals. OMP7, OMP8, and OMP9 proteins were used to test potential conserved sequences containing CD4 T-cell epitopes. Using in vitro T-cell proliferation assays to test recombinant A. marginale and A. centrale OMP7, OMP8, and OMP9, and their overlapping peptides spanning each protein, conserved immunogenic T-cell epitopes were been identified in some peptides. / Recentemente, R. microplus tem ampliado a sua distribuição a altitudes maiores na Colômbia. A identificação dos mecanismos de resistência a acaricidas é requerida, e também do diagnóstico e dos candidatos a vacina dos patógenos transmitidos Babesia bovis e Anaplasma marginale. Restrições devidas a patentes e requerimentos da bolsa de doutorado estabeleceram três capítulos a tese de DSC. Capitulo 1: Deteção de genes de resistência a piretróides sintéticos e de Babesia spp. em amostras de Rhipicephalus microplus e sangue bovino da Colômbia. Amostras de Rhipicephalus microplus (teleoginas e larvas) e de sangue bovino foram coletadas de fazendas selecionadas em 8 municípios na Colômbia. Uma triagem por PCR procurando mutações nos genes CzEst9 e IIIS6, os quais conferem resistência a piretróides sintéticos, mostrou que todas as amostras de carrapatos foram heterozigóticas para CzEst9 e a maioria mostraram suscetibilidade para IIIS6. Uma triagem por nested PCR para a deteção dos genes rra de Babesia bovis e rap-1c de B- bigemina resultou em bandas adicionais evitando evidência conclusiva. Capitulo 2: Processo de transformação de Pichia pastoris KM71 com o gene sintético H1Bbo23290 derivado da proteína RAP-1 de Babesia bovis. O processo de transformação de Pichia pastoris KM71 com H1Bbo23290 (um candidato vicinal promissório contra a babesiose bovina) não foi bem sucedido. A extração de DNA plasmidial e a sua posterior linharização foram os maiores obstáculos. Capitulo 3: Resposta immune bovina produzida pelas proteínas da membrana externa de Anaplasma marginale OPM7, OMP8, e OMP9 da cepa St. Maries em novilhos experimentais confinados e imunizados. As proteínas OMP7, OMP8, e OMP9 de A. marginale e A. centrale foram usadas para testar a presença de potenciais sequências conservadas. As proteínas recombinates e seus peptídeos superpostos periodicamente foram usados em ensaios de proliferação de células T. Epítopes de células T, imunogênicos e conservados foram identificados.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2018-11-12T17:12:40Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1291733 bytes, checksum: e4cfacdbab2bf88dacbcaac2e6ee8e4a (MD5) / Made available in DSpace on 2018-11-12T17:12:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1291733 bytes, checksum: e4cfacdbab2bf88dacbcaac2e6ee8e4a (MD5) Previous issue date: 2018-07-23 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Bovine herpesvirus 1 (BoHV-1) pertence a ordem Herpesvirales, família Herpesviridae, subfamília Alphaherpesvirinae e gênero Varicellovirus. É o agente causador da Rinotraqueíte Infecciosa Bovina (IBR). Apresenta dominância cosmopolita e alta disseminação em rebanhos bovinos de todo o mundo, acarretando prejuízos econômicos associados aos problemas produtivos e reprodutivos. O objetivo desta pesquisa foi estudar a interação do BoHV-1 com o útero, ovários e tubas uterinas, além de investigar a presença e a capacidade de penetração do BoHV-1 em complexos cumulus-ovócitos de vacas não vacinadas contra o BoHV-1, por meio da imunomarcação viral utilizando a microscopia confocal de varredura a laser. Coletou-se amostras de sangue e os órgãos genitais de 75 vacas abatidas em frigorífico e avaliou-se a imunomarcação viral nos tecidos uterino, tubárico e ovariano. Total de 719 COCs foram divididos em dois grupos: COCs derivados de vacas soropositivas e de vacas soronegativas e processados para a microscopia confocal de varredura a laser. Além disso, este estudo investigou a capacidade de penetração do BoHV-1 nos ovócitos de vacas soronegativas. Para tal, os ovócitos foram divididos em dois grupos: Grupo I: COCs (n=312) e ovócitos desnudados (n=296) infectados experimentalmente com BoHV-1 e incubados durante uma hora a 38,5°C e 5% de CO 2 . O controle negativo formado por COCs (273) e ovócitos desnudados (n=310) foram submetidos ao mesmo protocolo, exceto a exposição ao BoHV-1 que não foi realizada. Grupo II: COCs (n=425) e ovócitos desnudados (n=405) foram submetidos ao mesmo protocolo de co-incubação com o BoHV-1, porém durante 24 horas. O controle negativo deste grupo foi formado por 398 COCs e 425 ovócitos desnudados submetidos ao mesmo protocolo exceto a exposição ao BoHV-1. Os resultados gerados nesta tese apresentam um grande significado para a área de reprodução animal. Os achados sugerem novos esclarecimentos sobre a infecção do BoHV-1 nos tecidos reprodutivos. As partículas virais do BoHV-1 foram detectadas no útero de 100% das vacas soropositivas (P<0,01). As tubas uterinas apresentaram o BoHV-1 em 73,2% e os ovários em 58,5% (P>0,05). Não foi observada a presença do vírus em nenhum órgão genital dos 34 animais soronegativos. Nenhum COC (n=276) proveniente de vacas soronegativas apresentou o vírus. No entanto, foi evidenciada a presença do BoHV-1 no citoplasma das células do cumulus em alta porcentagem de COCs (n=158) dos 443 COCs aspirados de vacas soropositivas. Em relação aos ovócitos com e sem a presença das células do cumulus, co- incubados com o BoHV-1, o vírus foi evidenciado no seu interior após 24 horas. Conclui- se que, aparentemente, este estudo é o primeiro a relatar a detecção de BoHV-1 no útero em 100% das vacas soropositivas, o que sugere que este órgão atua como uma fonte de infecção fetal e esteja implicado em desempenhar um papel no abortamento. A detecção do BoHV-1 nas células do cumulus de vacas soropositivas, sugere que vacas infectadas naturalmente e assintomáticas podem apresentar os COCs infectados pelo vírus. Ademais, este estudo é o primeiro a detectar o BoHV-1 no interior de ovócitos bovinos apresentando a zona pelúcida intacta. / Bovine herpesvirus 1 (BoHV-1) belongs to the Herpesvirales order, Herpesviridae family, Alphaherpesvirinae subfamily and Varicellovirus genus. It is the causative agent of Infectious Bovine Rhinotracheitis (IBR). Its cosmopolitan distribution and high dissemination in cattle herds around the world lead to economic losses related to productive and reproductive disorders. This research aimed to study the interaction of BoHV-1 in the uterus, oviducts, and ovarian tissues, also to investigate the ability of virus penetration in cumulus-oocyte complexes (COCs) from cows unvaccinated against BoHV-1 by immunofluorescence using confocal laser scanning microscopy. Blood samples and genital organs were collected from 75 cows to assess viral immunolabeling in the uterus, oviducts, and ovarian tissues. A total of 719 COCs were divided into two groups: COCs derivate from seropositive cows and those from seronegative cows. Then, the samples were processed for confocal microscopy analysis. Moreover, this study investigated the penetration capacity of BoHV-1 in oocytes from seronegative cows. Subsequently, oocytes were divided into two groups: Group I: COCs and denuded oocytes experimentally infected with BoHV-1 and incubated for 1 h at 38.5 °C and 5% CO 2 . The negative control group were formed by COCs (n = 273) and denuded oocytes (n = 310), which were subjected to the same protocol except for exposure to BoHV-1. Group II: COCs (n = 425) and denuded oocytes (n = 405) were subjected to the same co- incubation protocol with BoHV-1, but for 24 h. The negative control of this group consisted of 398 COCs and 425 denuded oocytes that were subjected to the same protocol except exposure to BoHV-1. The results generated in this thesis have a great significance for the field of animal reproduction. The findings suggest new insights regarding the BoHV-1 infection in reproductive tissue. The virus was detected in the uterus in 100% of seropositive cows (P<0.01), 73.2% of oviduct samples and 58.5% of ovarian tissue samples (P>0.05). No genital organ samples from the 34 seronegative animals had virus presence. None of 276 COCs from the seronegative cows presented BoHV-1. However, BoHV-1 was present in the cytoplasm of cumulus cells from 158 out of 443 COCs recovered from seropositive cows. The virus was detected after 24h co-incubation with the BoHV-1within oocytes (with or without the presence of cumulus cells). In conclusion, the virus detection of 100% in the uterine samples suggests this organ as a fetal infection source to be implicated in playing a role in abortion. The detection of BoHV-1 in the COCs of seropositive cows suggests that COCs from naturally infected and asymptomatic cows may be infected with BoHV-1. Moreover, this study appears to be the first to detect BoHV-1 within COCs and denuded oocytes exhibiting intact ZP, co-incubated with the virus for 24 h.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2018-11-13T12:15:03Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1654335 bytes, checksum: bce0b05d7832cce3f6841e6c11b57384 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-11-13T12:15:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1654335 bytes, checksum: bce0b05d7832cce3f6841e6c11b57384 (MD5) Previous issue date: 2018-07-23 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O bovine herpesvirus 1 (BoHV-1) é de fácil disseminação, difícil controle e está amplamente disseminado nos rebanhos bovinos no mundo. Essa infecção viral é responsável por prejuízos à pecuária principalmente quanto aos aspectos reprodutivos. Estudos prévios envolvendo infecção experimental com o BoHV-1 em um sistema de produção in vitro de embriões reportou que a presença do vírus afetou o desenvolvimento embrionário. Neste trabalho, foi avaliada a interferência do BoHV-1 sobre a maturação in vitro de complexos cumulus-ovócito (COCs) e ovócitos desnudados com células do cumulus em suspensão (DOs). Foram coletados sangue e os ovários de fêmeas bovinas sabidamente não vacinadas contra o BoHV-1. Após o teste de soroneutralização, os animais soropositivos foram classificados de acordo com a sua titulação de anticorpos. Os ovócitos recuperados após aspiração folicular foram divididos em COCs e DOs e avaliados através da sua capacidade de maturação nuclear associado a detecção viral pela microscopia confocal de varredura a laser. Dois experimentos foram realizados: (I) maturação após infecção in vitro de COCs e DOs de animais soronegativos; (II) maturação in vitro de COCs e DOs de animais soropositivos. No experimento I, diferença (P<0,01) foi observada entre as taxas de maturação do grupo COCs controle (78,2%) e os grupos infectados dos COCs (43,6%). No experimento II verificou-se diferença (P<0,01) na taxa de maturação entre os animais de titulação de anticorpos ≥ 16 (56,9%) e o grupo controle (79,4%). Os ensaios de imunofluorescência permitiram a identificação do BoHV-1 nos COCs e DOs. Diante disso, conclui-se que o BoHV-1 foi capaz de afetar o processo de maturação in vitro tanto nas condições de infecção in vitro e em condições naturais de infecção. / Bovine herpesvirus 1 (BoHV-1) disseminates easily, is difficult to control, and is widely spread in cattle herds worldwide. BoHV-1 causes a broad range of losses to the cattle industry, mainly concerning reproduction. Previous studies involving experimental infection of BoHV-1 in an in vitro embryo production system have reported impairment of embryonic development by BoHV-1. In this study, we evaluated the interference of BoHV-1 in the in vitro maturation system of cumulus- oocyte complexes (COCs) and denuded oocytes (DOs) cultured with a cumulus cell suspension. Blood samples and ovaries were collected from slaughterhouse cows unvaccinated against BoHV-1. Using virus neutralization assays, the seropositive animals were classified according to their antibody titers. The oocytes were recovered by follicular aspiration and divided into two groups, COCs and DOs, which were evaluated for their nuclear maturation capacity using immunofluorescence assays by laser scanning confocal microscopy. Two experiments were carried out: (I) in vitro maturation of COCs and DOs after artificial infection of seronegative animals and (II) in vitro maturation of COCs and DOs of seropositive animals. In experiment I, a difference (P <0.01) was observed between the maturation rates of the control group COCs (78.2%) and the infected COCs (43.6%). In experiment II, there was a difference (P <0.01) in the maturation rate between animals with antibody titers ≥ 16 (56.9%) and the control group (79.4%). Immunofluorescence assays identified BoHV-1 in the COCs and DOs. Therefore, it was concluded that BoHV-1 affects the in vitro maturation process in both in vitro and natural infections.

Para o sucesso das estratégias de manejo de Rhipicephalus (Boophilus) microplus (carrapato bovino) são necessários testes práticos, econômicos e confiáveis que possam detectar a presença de fenótipos resistentes a drogas em suas populações. O fipronil é um acaricida de uso relativamente recente não havendo testes padronizados para o diagnóstico de resistência do carrapato à molécula. No presente trabalho, foram padronizados bioensaios in vitro para esta finalidade: Teste de Imersão de Adultas, Teste de Imersão de Larvas e Teste de Pacote com Larvas. Os testes foram aplicados e, de forma inédita, populações resistentes foram diagnosticadas tanto no Brasil quanto no Uruguai. Ensaios com inibidores enzimáticos não evidenciaram participação importante de enzimas detoxificadoras no mecanismo de resistência. Foi demonstrada reação cruzada entre fipronil e lindano, não verificada para ivermectina. Em algumas situações, foi observado interferência do controle químico de pragas agrícolas no desenvolvimento de resistência dos carrapatos. / For the success of the strategies for the management of Rhipicephalus (Boophilus) microplus (cattle tick), practical, economical and reliable tests are needed to detect the presence of drug-resistant phenotypes in their populations. Fipronil is a relatively new acaricide with no standardized tests for the diagnosis of tick resistance to this molecule. In this study, were standardized in vitro bioassays for this purpose: Adult Immersion Test, Larval Immersion Test and Larval Packet Test. The tests were applied and for the first time, resistant populations were diagnosed in Brazil and Uruguay. Tests with enzymatic inhibitors showed no significant involvement of detoxification enzymes in the mechanism of resistance. Cross-resistance was demonstrated between lindane and fipronil but not with ivermectin. In some situations, it was observed interference of the chemical control of agricultural pests in the development of resistance in ticks.

Para o sucesso das estratégias de manejo de Rhipicephalus (Boophilus) microplus (carrapato bovino) são necessários testes práticos, econômicos e confiáveis que possam detectar a presença de fenótipos resistentes a drogas em suas populações. O fipronil é um acaricida de uso relativamente recente não havendo testes padronizados para o diagnóstico de resistência do carrapato à molécula. No presente trabalho, foram padronizados bioensaios in vitro para esta finalidade: Teste de Imersão de Adultas, Teste de Imersão de Larvas e Teste de Pacote com Larvas. Os testes foram aplicados e, de forma inédita, populações resistentes foram diagnosticadas tanto no Brasil quanto no Uruguai. Ensaios com inibidores enzimáticos não evidenciaram participação importante de enzimas detoxificadoras no mecanismo de resistência. Foi demonstrada reação cruzada entre fipronil e lindano, não verificada para ivermectina. Em algumas situações, foi observado interferência do controle químico de pragas agrícolas no desenvolvimento de resistência dos carrapatos. / For the success of the strategies for the management of Rhipicephalus (Boophilus) microplus (cattle tick), practical, economical and reliable tests are needed to detect the presence of drug-resistant phenotypes in their populations. Fipronil is a relatively new acaricide with no standardized tests for the diagnosis of tick resistance to this molecule. In this study, were standardized in vitro bioassays for this purpose: Adult Immersion Test, Larval Immersion Test and Larval Packet Test. The tests were applied and for the first time, resistant populations were diagnosed in Brazil and Uruguay. Tests with enzymatic inhibitors showed no significant involvement of detoxification enzymes in the mechanism of resistance. Cross-resistance was demonstrated between lindane and fipronil but not with ivermectin. In some situations, it was observed interference of the chemical control of agricultural pests in the development of resistance in ticks.