Introdução: o sarcoma de Ewing é um dos tipo mais agressivos de câncer pediátrico. Esse tipo de câncer é um tumor primitivo neuroectodérmico, grupo que inclui ainda outros tumores pediátricos como o meduloblastoma e o neuroblastoma. Apesar de avanços significativos desde o surgimento da quimioterapia, ainda há necessidade de aumento dos índices de cura, redução da toxicidade da quimioterapia e redução da resistência ao tratamento em pacientes com essa doença. Inibidores da acetilação de histonas (HDACIs ou HDIs) e bifosfonatos têm um futuro promissor no tratamento de câncer, especialmente quando utilizados conjuntamente ou em associação com outros agentes citotóxicos, como antineoplásicos clássicos. No entanto, os efeitos destes tratamentos combinados ainda não haviam sido devidamente estudados em Sarcoma de Ewing. Objetivos: este estudo se propôs a avaliar, in vitro, os efeitos do inibidor da acetilação de histonas, butirato sódico (NaB), do bifosfonato, zoledronato (ZA), da associação destes dois agentes e de combinações dos mesmos com antineoplásicos clássicos sobre a proliferação, viabilidade e sobrevivência celular em sarcoma de Ewing. Métodos: as linhagens celulares de sarcoma de Ewing, SK-ES-1 e RD-ES, foram tratadas com NaB, ZA, doxorrubicina, etoposídeo ou vincristina e com diferentes combinações destes agentes. O crescimento tumoral in vitro, incluindo parâmetros de proliferação e viabilidade celular, foi analisado pelos métodos de contagem celular por exclusão com azul de tripan e MTT. Os efeitos tardios (sobrevivência) também foram estudados através da determinação da formação de colônias (ensaio colonogênico). Resultados: a combinação de NaB e ZA teve um efeito citotóxico sinérgico 72h após o tratamento, persistindo durante 10-14 dias após o tratamento, em ambas as linhagens celulares testadas. Todas as combinações entre NaB ou ZA e os antineoplásicos clássicos testados apresentaram efeitos citotóxicos sinérgicos 72h após os tratamentos em ambas linhagens celulares, com a exceção das seguintes associações: NaB + VCR e ZA + Doxo, que apresentaram apenas efeito aditivo nas células RD-ES, quando comparados com cada um dos agentes em monoterapia. Estes efeitos “agudos” observados em ambas as linhagens celulares de sarcoma de Ewing foram confirmados pelo ensaio clonogênico. Conclusão: os dados obtidos sugerem que o uso combinado de bifosfonatos e HDIs e a associação destes agentes com quimioterápicos clássicos representam promissoras alternativas no tratamento de sarcoma de Ewing e proporcionam a base para novos estudos. / Background: Ewing sarcoma, often referred to as Ewing’s sarcoma family tumors, is a peripheral primitive neuroectodermal tumor. Ewing sarcoma is the second most common solid bone and soft tissue malignancy of children and young adults. Despite significant advances in cancer chemotherapy, there is still need for increased rates of cure, reduction of toxicity of chemotherapy and reduced resistance to treatment in patients with this disease. Histone deacetylase inhibitors (HDACIs or HDIs) and bisphosphonates have a promising future in the treatment of cancer as targeted anticancer drugs, especially when used together or in combination with other cytotoxic agents. However, the effects of these combined treatments have not yet been properly evaluated in Ewing sarcoma. Objective: In the present study, we evaluated the in vitro cytotoxic effects (on cellular proliferation, viability, and survival) elicited by the co-treatment of sodium butyrate (NaB) and zoledronic acid (ZA) alone or in combination with three anti-cancer drugs strongly recommended to treat Ewing sarcoma (doxorubicin, etoposide and vincristine) in two human cell lines. Methods: two Ewing sarcoma cell lines, SK-ES-1 and RD-ES, were treated with NaB, ZA, doxorubicin, etoposide, vincristine and with different combinations of these drugs. The proliferation and cell viability were analyzed by counting cell in a hemocytometer, by exclusion of trypan blue and by MTT assay. The survival and proliferation of cells were also studied by clonogenic assay. Results: our results demonstrate that the combination of NaB and ZA has a synergistic cytotoxic effect at 72h after treatment, persisting for 10-14 days post-treatment, in both cell lines tested. All combinations between NaB or ZA and classical antineoplastic drugs demonstrated a synergistic cytotoxic effect at 72h post-treatment in SK-ES-1 and RD-ES cells, with the exception of NaB plus VCR, and ZA plus Doxo, which showed only an additive effect in RD-ES cells when compared to each agent alone. These acute effects observed in both Ewing sarcoma cells were confirmed by the clonogenic assay. Conclusion: These data suggest that HDIs and bisphosphonate co-treatment in combination with classical chemotherapeutic drugs is a promising therapeutic venue the treatment of Ewing sarcoma, and provide a basis for further study in this field.

As limitações ao uso de antibióticos promotores de crescimento vêm aumentando a procura por aditivos substitutos para manter a performance animal, a saúde intestinal e a resposta imune de frangos de corte. Este experimento foi conduzido para comparar o efeito e a dose resposta do produto Ava Cid P (composto por substância húmica, butirato de sódio 30% protegido e uma pequena porção de acidificantes) suplementado na dieta, sobre a performance, resposta imune e saúde intestinal de frangos de corte. O experimento seguiu um design inteiramente casualizado, envolvendo um arranjo fatorial 2 x 5 (2 sexos e 5 tratamentos) com 7 repetições de 15 aves por tratamento. Os tratamentos seguiram a suplementação em diferentes fases de 1 a 49 dias: 1) Controle: dieta basal sem nenhuma suplementação; 2) AVA1-21: aves receberam 0,91 kg/t de Ava Cid P de 1 a 21 d; 3) AVA1-35: 0,91 kg/t de Ava Cid P de 1-21 d e 0,45 kg/t de 22-35 d; 4) AVA1-42: 0,91 kg/t de Ava Cid P de 1 a 21 d e 0,45 kg/t de 22- 42 d; 5) AVA1-49: 0,91 kg/t de Ava Cid P de 1 a 21 d, 0,45 kg/t de 22-35 d e 0,23 kg/t de 36-49 d. A suplementação com Ava Cid P não influenciou a performance de machos e fêmeas, nem mesmo a densidade de células caliciformes (P > 0,05). No entanto, o Ava Cid P foi capaz de modificar a morfometria intestinal, aumentando a altura de vilosidades aos 9 e 35 d (P < 0,05). A área superficial aparente dos vilos e altura de vilos, nas aves que receberam Ava Cid P durante todas as fases experimentais, foi superior à das aves suplementadas somente na fase inicial. No íleo, a área superficial aparente dos vilos também foi superior nas aves suplementadas aos 9 d. Além disso, a expressão do gene para mucina 2 (MUC2) e para o fator de necrose tumoral (TNF-α) diminuiu nas aves recebendo Ava Cid P aos 21 d (P < 0,05), mas não foram observadas diferenças estatísticas para interleucina-1 beta e interleucina-10. Os resultados sugerem que Ava Cid P pode alterar a expressão de mRNA de algumas citocinas e MUC2 e a morfometria intestinal de frangos de corte, aumentando a superfície aparente e a altura dos vilos, o que demonstra a potencialidade do produto como alternativa aos antibióticos promotores de crescimento. / The limitations of the antibiotic growth promoter’s (AGP) usage have been increasing the search for new products to improve poultry performance, gut healthy and immune response. This experiment was conducted to compare the effect and dose response of Ava Cid P (consisted of a humic substance, coated sodium butyrate 30% and a small acidifier portion) diet supplementation on performance, immune response and gut health of broilers. Five dietary regimens were used: 1) birds didn’t receive Ava Cid P in any phase (Control), 2) birds received 0.91 kg/t of Ava Cid P from 1 to 21 d (AVA1-21), 3) 0.91 kg/t of Ava Cid P from 1 to 21 d and 0.45 kg/t from 22 to 35 d (AVA1-35), 4) 0.91 kg/t of Ava Cid P from 1 to 21 d and 0.45 kg/t from 22 to 42 d (AVA1-42), 5) 0.91 kg/t of Ava Cid P from 1 to 21 d, 0.45 kg/t from 22 to 35 d and 0.23 kg/t from 36 to 49 d (AVA1-49). They were applied in a completely randomized design, involving a 2 × 5 factorial arrangement with 2 sex and 5 levels of inclusion, and 7 replications with 15 birds each. The supplementation with Ava Cid P showed no influence on males and females growth performance and goblet cell density (P > 0.05). However, it modified the gut morphometry, increasing jejunum villi height at 9 and 35 days (P < 0.05). The apparent villus surface area and villi height on birds fed with Ava Cid P during all phases also increased in relation to those who received only in the early phase. The expression of mucin 2 (MUC2) and tumor necrosis factor-alpha (TNF-α) decreased on birds that received Ava Cid P at 21 days (P < 0.05), but no differences were seen for interleukin-1beta (IL-1β) and interleukin-10 (IL-10). The results suggest that Ava Cid P can alter the mRNA expression of some inter-leukins, MUC2 and intestinal morphometry in broilers, increasing apparent villus surface area and villi height, which demonstrates the product potential as an alternative growth promoter.

As limitações ao uso de antibióticos promotores de crescimento vêm aumentando a procura por aditivos substitutos para manter a performance animal, a saúde intestinal e a resposta imune de frangos de corte. Este experimento foi conduzido para comparar o efeito e a dose resposta do produto Ava Cid P (composto por substância húmica, butirato de sódio 30% protegido e uma pequena porção de acidificantes) suplementado na dieta, sobre a performance, resposta imune e saúde intestinal de frangos de corte. O experimento seguiu um design inteiramente casualizado, envolvendo um arranjo fatorial 2 x 5 (2 sexos e 5 tratamentos) com 7 repetições de 15 aves por tratamento. Os tratamentos seguiram a suplementação em diferentes fases de 1 a 49 dias: 1) Controle: dieta basal sem nenhuma suplementação; 2) AVA1-21: aves receberam 0,91 kg/t de Ava Cid P de 1 a 21 d; 3) AVA1-35: 0,91 kg/t de Ava Cid P de 1-21 d e 0,45 kg/t de 22-35 d; 4) AVA1-42: 0,91 kg/t de Ava Cid P de 1 a 21 d e 0,45 kg/t de 22- 42 d; 5) AVA1-49: 0,91 kg/t de Ava Cid P de 1 a 21 d, 0,45 kg/t de 22-35 d e 0,23 kg/t de 36-49 d. A suplementação com Ava Cid P não influenciou a performance de machos e fêmeas, nem mesmo a densidade de células caliciformes (P > 0,05). No entanto, o Ava Cid P foi capaz de modificar a morfometria intestinal, aumentando a altura de vilosidades aos 9 e 35 d (P < 0,05). A área superficial aparente dos vilos e altura de vilos, nas aves que receberam Ava Cid P durante todas as fases experimentais, foi superior à das aves suplementadas somente na fase inicial. No íleo, a área superficial aparente dos vilos também foi superior nas aves suplementadas aos 9 d. Além disso, a expressão do gene para mucina 2 (MUC2) e para o fator de necrose tumoral (TNF-α) diminuiu nas aves recebendo Ava Cid P aos 21 d (P < 0,05), mas não foram observadas diferenças estatísticas para interleucina-1 beta e interleucina-10. Os resultados sugerem que Ava Cid P pode alterar a expressão de mRNA de algumas citocinas e MUC2 e a morfometria intestinal de frangos de corte, aumentando a superfície aparente e a altura dos vilos, o que demonstra a potencialidade do produto como alternativa aos antibióticos promotores de crescimento. / The limitations of the antibiotic growth promoter’s (AGP) usage have been increasing the search for new products to improve poultry performance, gut healthy and immune response. This experiment was conducted to compare the effect and dose response of Ava Cid P (consisted of a humic substance, coated sodium butyrate 30% and a small acidifier portion) diet supplementation on performance, immune response and gut health of broilers. Five dietary regimens were used: 1) birds didn’t receive Ava Cid P in any phase (Control), 2) birds received 0.91 kg/t of Ava Cid P from 1 to 21 d (AVA1-21), 3) 0.91 kg/t of Ava Cid P from 1 to 21 d and 0.45 kg/t from 22 to 35 d (AVA1-35), 4) 0.91 kg/t of Ava Cid P from 1 to 21 d and 0.45 kg/t from 22 to 42 d (AVA1-42), 5) 0.91 kg/t of Ava Cid P from 1 to 21 d, 0.45 kg/t from 22 to 35 d and 0.23 kg/t from 36 to 49 d (AVA1-49). They were applied in a completely randomized design, involving a 2 × 5 factorial arrangement with 2 sex and 5 levels of inclusion, and 7 replications with 15 birds each. The supplementation with Ava Cid P showed no influence on males and females growth performance and goblet cell density (P > 0.05). However, it modified the gut morphometry, increasing jejunum villi height at 9 and 35 days (P < 0.05). The apparent villus surface area and villi height on birds fed with Ava Cid P during all phases also increased in relation to those who received only in the early phase. The expression of mucin 2 (MUC2) and tumor necrosis factor-alpha (TNF-α) decreased on birds that received Ava Cid P at 21 days (P < 0.05), but no differences were seen for interleukin-1beta (IL-1β) and interleukin-10 (IL-10). The results suggest that Ava Cid P can alter the mRNA expression of some inter-leukins, MUC2 and intestinal morphometry in broilers, increasing apparent villus surface area and villi height, which demonstrates the product potential as an alternative growth promoter.

The thesis "The proteomic analysis in hematology: Identification of alfa2- macroglobulin as a specific carrier for the hormone hepcidin and proteomic analysis of the leukemic K562 cell differentiation induced by sodium butyrate" describes proteomic approaches, used for the identification and functional characterisation of proteins, which are binding and transporting the iron metabolism regulating hormone hepcidin. Proteomic techniques are also exploited for the identification of proteins, participating in erythroid differentiation of the model cell line K562. In the first section of the thesis, non-denaturing, native techniques, such as chromatography and native electrophoresis are used, in the second section, the control and butyrate - induced K562 cell proteomes are compared using the classical 2D - SDS polyacrylamide gel electrophoresis approach. The methods, described in the thesis are broadening the spectrum of available techniques in experimental hematology. The results, described in this thesis together with the accompanying published manuscripts broaden our knowledge in the function of proteins of iron metabolism and proteins, functioning in erythroid differentiation. Key words: proteomic analysis, hepcidin, alfa2-macroglobulin, iron metabolism, CML, K562, sodium butyrate

Introdução: o sarcoma de Ewing é um dos tipo mais agressivos de câncer pediátrico. Esse tipo de câncer é um tumor primitivo neuroectodérmico, grupo que inclui ainda outros tumores pediátricos como o meduloblastoma e o neuroblastoma. Apesar de avanços significativos desde o surgimento da quimioterapia, ainda há necessidade de aumento dos índices de cura, redução da toxicidade da quimioterapia e redução da resistência ao tratamento em pacientes com essa doença. Inibidores da acetilação de histonas (HDACIs ou HDIs) e bifosfonatos têm um futuro promissor no tratamento de câncer, especialmente quando utilizados conjuntamente ou em associação com outros agentes citotóxicos, como antineoplásicos clássicos. No entanto, os efeitos destes tratamentos combinados ainda não haviam sido devidamente estudados em Sarcoma de Ewing. Objetivos: este estudo se propôs a avaliar, in vitro, os efeitos do inibidor da acetilação de histonas, butirato sódico (NaB), do bifosfonato, zoledronato (ZA), da associação destes dois agentes e de combinações dos mesmos com antineoplásicos clássicos sobre a proliferação, viabilidade e sobrevivência celular em sarcoma de Ewing. Métodos: as linhagens celulares de sarcoma de Ewing, SK-ES-1 e RD-ES, foram tratadas com NaB, ZA, doxorrubicina, etoposídeo ou vincristina e com diferentes combinações destes agentes. O crescimento tumoral in vitro, incluindo parâmetros de proliferação e viabilidade celular, foi analisado pelos métodos de contagem celular por exclusão com azul de tripan e MTT. Os efeitos tardios (sobrevivência) também foram estudados através da determinação da formação de colônias (ensaio colonogênico). Resultados: a combinação de NaB e ZA teve um efeito citotóxico sinérgico 72h após o tratamento, persistindo durante 10-14 dias após o tratamento, em ambas as linhagens celulares testadas. Todas as combinações entre NaB ou ZA e os antineoplásicos clássicos testados apresentaram efeitos citotóxicos sinérgicos 72h após os tratamentos em ambas linhagens celulares, com a exceção das seguintes associações: NaB + VCR e ZA + Doxo, que apresentaram apenas efeito aditivo nas células RD-ES, quando comparados com cada um dos agentes em monoterapia. Estes efeitos “agudos” observados em ambas as linhagens celulares de sarcoma de Ewing foram confirmados pelo ensaio clonogênico. Conclusão: os dados obtidos sugerem que o uso combinado de bifosfonatos e HDIs e a associação destes agentes com quimioterápicos clássicos representam promissoras alternativas no tratamento de sarcoma de Ewing e proporcionam a base para novos estudos. / Background: Ewing sarcoma, often referred to as Ewing’s sarcoma family tumors, is a peripheral primitive neuroectodermal tumor. Ewing sarcoma is the second most common solid bone and soft tissue malignancy of children and young adults. Despite significant advances in cancer chemotherapy, there is still need for increased rates of cure, reduction of toxicity of chemotherapy and reduced resistance to treatment in patients with this disease. Histone deacetylase inhibitors (HDACIs or HDIs) and bisphosphonates have a promising future in the treatment of cancer as targeted anticancer drugs, especially when used together or in combination with other cytotoxic agents. However, the effects of these combined treatments have not yet been properly evaluated in Ewing sarcoma. Objective: In the present study, we evaluated the in vitro cytotoxic effects (on cellular proliferation, viability, and survival) elicited by the co-treatment of sodium butyrate (NaB) and zoledronic acid (ZA) alone or in combination with three anti-cancer drugs strongly recommended to treat Ewing sarcoma (doxorubicin, etoposide and vincristine) in two human cell lines. Methods: two Ewing sarcoma cell lines, SK-ES-1 and RD-ES, were treated with NaB, ZA, doxorubicin, etoposide, vincristine and with different combinations of these drugs. The proliferation and cell viability were analyzed by counting cell in a hemocytometer, by exclusion of trypan blue and by MTT assay. The survival and proliferation of cells were also studied by clonogenic assay. Results: our results demonstrate that the combination of NaB and ZA has a synergistic cytotoxic effect at 72h after treatment, persisting for 10-14 days post-treatment, in both cell lines tested. All combinations between NaB or ZA and classical antineoplastic drugs demonstrated a synergistic cytotoxic effect at 72h post-treatment in SK-ES-1 and RD-ES cells, with the exception of NaB plus VCR, and ZA plus Doxo, which showed only an additive effect in RD-ES cells when compared to each agent alone. These acute effects observed in both Ewing sarcoma cells were confirmed by the clonogenic assay. Conclusion: These data suggest that HDIs and bisphosphonate co-treatment in combination with classical chemotherapeutic drugs is a promising therapeutic venue the treatment of Ewing sarcoma, and provide a basis for further study in this field.

Introdução: o sarcoma de Ewing é um dos tipo mais agressivos de câncer pediátrico. Esse tipo de câncer é um tumor primitivo neuroectodérmico, grupo que inclui ainda outros tumores pediátricos como o meduloblastoma e o neuroblastoma. Apesar de avanços significativos desde o surgimento da quimioterapia, ainda há necessidade de aumento dos índices de cura, redução da toxicidade da quimioterapia e redução da resistência ao tratamento em pacientes com essa doença. Inibidores da acetilação de histonas (HDACIs ou HDIs) e bifosfonatos têm um futuro promissor no tratamento de câncer, especialmente quando utilizados conjuntamente ou em associação com outros agentes citotóxicos, como antineoplásicos clássicos. No entanto, os efeitos destes tratamentos combinados ainda não haviam sido devidamente estudados em Sarcoma de Ewing. Objetivos: este estudo se propôs a avaliar, in vitro, os efeitos do inibidor da acetilação de histonas, butirato sódico (NaB), do bifosfonato, zoledronato (ZA), da associação destes dois agentes e de combinações dos mesmos com antineoplásicos clássicos sobre a proliferação, viabilidade e sobrevivência celular em sarcoma de Ewing. Métodos: as linhagens celulares de sarcoma de Ewing, SK-ES-1 e RD-ES, foram tratadas com NaB, ZA, doxorrubicina, etoposídeo ou vincristina e com diferentes combinações destes agentes. O crescimento tumoral in vitro, incluindo parâmetros de proliferação e viabilidade celular, foi analisado pelos métodos de contagem celular por exclusão com azul de tripan e MTT. Os efeitos tardios (sobrevivência) também foram estudados através da determinação da formação de colônias (ensaio colonogênico). Resultados: a combinação de NaB e ZA teve um efeito citotóxico sinérgico 72h após o tratamento, persistindo durante 10-14 dias após o tratamento, em ambas as linhagens celulares testadas. Todas as combinações entre NaB ou ZA e os antineoplásicos clássicos testados apresentaram efeitos citotóxicos sinérgicos 72h após os tratamentos em ambas linhagens celulares, com a exceção das seguintes associações: NaB + VCR e ZA + Doxo, que apresentaram apenas efeito aditivo nas células RD-ES, quando comparados com cada um dos agentes em monoterapia. Estes efeitos “agudos” observados em ambas as linhagens celulares de sarcoma de Ewing foram confirmados pelo ensaio clonogênico. Conclusão: os dados obtidos sugerem que o uso combinado de bifosfonatos e HDIs e a associação destes agentes com quimioterápicos clássicos representam promissoras alternativas no tratamento de sarcoma de Ewing e proporcionam a base para novos estudos. / Background: Ewing sarcoma, often referred to as Ewing’s sarcoma family tumors, is a peripheral primitive neuroectodermal tumor. Ewing sarcoma is the second most common solid bone and soft tissue malignancy of children and young adults. Despite significant advances in cancer chemotherapy, there is still need for increased rates of cure, reduction of toxicity of chemotherapy and reduced resistance to treatment in patients with this disease. Histone deacetylase inhibitors (HDACIs or HDIs) and bisphosphonates have a promising future in the treatment of cancer as targeted anticancer drugs, especially when used together or in combination with other cytotoxic agents. However, the effects of these combined treatments have not yet been properly evaluated in Ewing sarcoma. Objective: In the present study, we evaluated the in vitro cytotoxic effects (on cellular proliferation, viability, and survival) elicited by the co-treatment of sodium butyrate (NaB) and zoledronic acid (ZA) alone or in combination with three anti-cancer drugs strongly recommended to treat Ewing sarcoma (doxorubicin, etoposide and vincristine) in two human cell lines. Methods: two Ewing sarcoma cell lines, SK-ES-1 and RD-ES, were treated with NaB, ZA, doxorubicin, etoposide, vincristine and with different combinations of these drugs. The proliferation and cell viability were analyzed by counting cell in a hemocytometer, by exclusion of trypan blue and by MTT assay. The survival and proliferation of cells were also studied by clonogenic assay. Results: our results demonstrate that the combination of NaB and ZA has a synergistic cytotoxic effect at 72h after treatment, persisting for 10-14 days post-treatment, in both cell lines tested. All combinations between NaB or ZA and classical antineoplastic drugs demonstrated a synergistic cytotoxic effect at 72h post-treatment in SK-ES-1 and RD-ES cells, with the exception of NaB plus VCR, and ZA plus Doxo, which showed only an additive effect in RD-ES cells when compared to each agent alone. These acute effects observed in both Ewing sarcoma cells were confirmed by the clonogenic assay. Conclusion: These data suggest that HDIs and bisphosphonate co-treatment in combination with classical chemotherapeutic drugs is a promising therapeutic venue the treatment of Ewing sarcoma, and provide a basis for further study in this field.

Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2016-06-09T12:12:43Z No. of bitstreams: 1 Maria Edna Gomes de Barros.pdf: 1315593 bytes, checksum: fa81695d81b1a4b6785e298c1eb69e52 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-09T12:12:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Maria Edna Gomes de Barros.pdf: 1315593 bytes, checksum: fa81695d81b1a4b6785e298c1eb69e52 (MD5) Previous issue date: 2013-02-21 / The modernization of the global poultry industry along with consumer trends in search of safe foods that meet the requirements of importing countries of Brazilian chicken, makes the organic acids are an alternative to replace the use of antibiotics. This study aims to evaluate the morphological, immunological and husbandry of broilers supplemented with microencapsulated sodium butyrate. Therefore, we used 720 chicks a day in life, housed in 40 boxes experimental measuring 1.5 m², with 18 birds each, with a density of 12 chickens / m², distributed in a completely randomized in a 2x6 factorial, where factors were two experimental diets: control: Ration without supplementation of sodium butyrate; Treaty (BS): Feed supplementation with sodium butyrate, with four replicates per treatment and six collection periods 7, 14, 21 and 35 days each week, two birds per plot were weighed and killed by cervical dislocation, which were collected fragments of duodenum, jejunum, ileum, liver, spleen, thymus and bursa of Fabricius. The amostrasforam weighed and opened longitudinally, rinsed in phosphate buffer (0.1M, pH 7.4) and then fixed in 4% glutaraldehyde in 0.1 M phosphate buffer, pH 7.4, for 24 hours, were processed in Routine histological technique in paraffin and historesin and stained by hematoxylin-eosin, hematoxylin-Phloxine, Sudan Black and Alcian Blue. To evaluate the humoral immune response, blood samples were collected before vaccination DNC (Newcastle disease) and at 21, 33 and 42, where we assessed the levels of antibodies in response to vaccination. The antibody levels were quantified by ELISA. In addition we assessed the levels of animal performance, such as feed, daily weight gain, feed intake and viability of diets. Data were subjected to analysis of variance (ANOVA) of SAS, and the averages compared by Tukey method at 5% significance. Were also made correlation analyzes. / A modernização mundial da indústria avícola junto às tendências de consumo em busca de alimentos seguros, que atendam as exigências dos países importadores da carne de frango brasileira, faz com que os ácidos orgânicos sejam uma alternativa em substituição ao uso de antibióticos.O presente trabalho tem o objetivo de avaliar os aspectos morfológicos, imunológicos e zootécnicos de frangos de corte suplementados com butirato de sódio microencapsulado. Para tanto, foram utilizados 720 pintinhos com um dia de vida, alojados em 40 boxes experimentais medindo 1,5 m², com 18 aves cada, com densidade de 12 frangos/m², distribuídos em um delineamento experimental inteiramente casualizado em fatorial 2x6, onde os fatores foram duas rações experimentais: Controle: Ração sem suplementação de butirato de sódio; Tratado (BS): Ração com suplementação de butirato de sódio,com quatro repetições por tratamento e seis períodos de coleta 7, 14, 21 e 35 dias, a cada semana, duas aves por parcela experimental foram pesadas e abatidas por deslocamento cervical, das quais foram coletados fragmentos deduodeno, jejuno, íleo, fígado, baço, bursa de Fabricius e timo. As amostrasforam pesadas e abertas longitudinalmente, lavadas em solução tampão fosfato (0,1 M e pH 7,4) e posteriormente fixadas em glutaraldeido a 4% em tampão fosfato 0,1M e pH 7,4, por 24 horas, foram processadas em técnica histológica de rotina em parafina e historesina e coradas por Hematoxilina- Eosina, Hematoxilina-Floxina, Sudan Black e Alcian Blue. Para a avaliação da resposta imune humoral, foram coletadas amostras de sangue antes da vacinação contra a DNC (Doença de Newcastle) e aos 21, 33 e 42, onde foram avaliados os níveis de anticorpos em resposta a vacinação. Os níveis de anticorpos foram quantificados pela técnica de ELISA. Além disso foram avaliados os índices de desempenho zootécnico, tais como: conversão alimentar, ganho de peso diário, consumo diário de ração e a viabilidade das dietas. Os dados obtidos foram submetidos à análise de variância (ANOVA) do programa SAS, e as médias comparadas entre si pelo método de Tukey a 5% de significância. Foram feitas também análises de correlação.

O carcinoma hepatocelular (HCC) é uma neoplasia primária com mau prognóstico e alta taxa de recorrência. Estudos recentes demostram que o HCC pode ser classificado em três subtipos segundo o perfil molecular. Destes subtipos, o HCC pouco diferenciado apresenta pior prognostico. Neste sentido, torna-se de particular interesse o estudo de compostos com efeitos diferenciadores e citotóxicos nas células destas neoplasias pouco diferenciadas. O butirato, um ácido graxo de cadeia curta produzido pela fermentação microbiana da fibra alimentar no intestino, tem demonstrado atividade anti-neoplásica e capacidade moduladora da diferenciação celular em diversos tipos celulares, incluindo linhagens de HCC humano e células progenitoras hepáticas. Assim, objetivou-se neste estudo, caracterizar o efeito do butirato de sódio (NaBu) em duas linhagens de células neoplásicas de rato: uma pouco diferenciada (GP7TB) e a outra, uma linhagem derivada de um HCC diferenciado (JM-1). A linhagem GP7TB mostrou maior resistência ao NaBu (ED50= 7,7 mM) do que as células JM-1 (ED50= 5,2 mM). A redução na viabilidade celular após 72 h de tratamento com NaBu esteve relacionada com a diminuição na proliferação celular e no caso das células GP7TB, de um aumento na apoptose. O tratamento com NaBu induziu alterações morfológicas nas duas linhagens celulares, porém apenas nas células do tipo GP7TB, essas alterações sugerem um processo de diferenciação/transdiferenciação celular. O aumento na expressão de genes envolvidos no controle da pluripotência de células tronco, assim como de alguns marcadores de células tronco, sugere que o NaBu induziu uma reprogramação profunda das células GP7TB. Por outro lado, a redução na expressão de genes relacionados com migração e plasticidade celular assim como de proliferação celular apontam que estas células diminuíram seu potencial invasivo e a capacidade de autorenovação. Embora sejam necessárias análises adicionais para confirmar o efeito observado nos perfis de expressão gênica, os resultados deste estudo sugerem que o NaBu apresenta efeito antineoplásico por meio da redução da proliferação, aumento da apoptose e modulação da expressão de genes associados com a transição epitéliomesenquimal em células com características tronco tumorais. / Hepatocellular carcinoma (HCC) is a primary neoplasia with poor prognosis and high recurrence rate. Recent evidence suggests that HCC can be classified in three different subtypes based on their molecular profile. Among these subtypes, the poorlydifferentiated HCC has the worst prognosis. Therefore, the study of compounds with pro-differentiating and cytotoxic effects on poorly-differentiated neoplastic cells represents a matter of primary concern. Butyrate which is a short-chain fatty acid produced by microbial fermentation in the intestine, has demonstrated anti-neoplastic activity and pro-differentiating potential in several cell types, including, human HCC cell lines and liver progenitor cells. In this study, we aimed to characterize the effect of sodium butyrate (NaBu) on two neoplastic cell lines derived from rats: a poorlydifferentiated cell line (GP7TB) and, a cell line derived from a well-differentiated HCC. GP7TB showed increased resistance to NaBu treatment (ED50= 7.7 mM) compared to JM-1 (ED50= 5.2 mM). The reduction in cell viability observed after 72 h of treatment was explained by a reduction in cell proliferation and, in the case of GP7TB, by increased levels of apoptosis. The NaBu treatment induced morphological alterations in both cell lines. However, only in the case of GP7TB cells, the alterations suggested a differentiation/transdifferentiation process. The up-regulation of genes involved in pluripotency and genes expressing stem cell markers indicated that NaBu triggered a deep reprogramming of GP7TB cells. Besides, a down-regulation in the expression of genes related with cell migration and plasticity suggested that these cells reduced their invasive potential and their self-renewal capacity. Additional analyses are necessary to confirm the observed effect on gene expression profiles. However, the results of this study suggest that NaBu exert anti-neoplastic effects through apoptosis, reduction of cell proliferation and downregulation of genes associated with epithelial-mesenchymal transition of cancer stem-like cells.

Colorectal cancer (CRC) is one of the most treatable cancers, with a 5-year survival rate of similar to 64%, yet over 50,000 deaths occur yearly in the United States. In 15% of cases, deficiency in mismatch repair leads to null mutations in transforming growth factor beta (TGF-beta) type II receptor, yet genotype alone is not responsible for tumorigenesis. Previous work in mice shows that disruptions in TGF-beta signaling combined with Helicobacter hepaticus cause tumorigenesis, indicating a synergistic effect between genotype and microbial environment. Here, we examine functional shifts in the gut microbiome in CRC using integrated - omics approaches to untangle the role of host genotype, inflammation, and microbial ecology. We profile the gut microbiome of 40 mice with/without deficiency in TGF-beta signaling from a Smad3 (mothers against decapentaplegic homolog-3) knockout and with/without inoculation with H. hepaticus. Clear functional differences in the microbiome tied to specific bacterial species emerge from four pathways related to human colon cancer: lipopolysaccharide (LPS) production, polyamine synthesis, butyrate metabolism, and oxidative phosphorylation (OXPHOS). Specifically, an increase in Mucispirillum schaedleri drives LPS production, which is associated with an inflammatory response. We observe a commensurate decrease in butyrate production from Lachnospiraceae bacterium A4, which could promote tumor formation. H. hepaticus causes an increase in OXPHOS that may increase DNA-damaging free radicals. Finally, multiple bacterial species increase polyamines that are associated with colon cancer, implicating not just diet but also the microbiome in polyamine levels. These insights into cross talk between the microbiome, host genotype, and inflammation could promote the development of diagnostics and therapies for CRC. IMPORTANCE Most research on the gut microbiome in colon cancer focuses on taxonomic changes at the genus level using 16S rRNA gene sequencing. Here, we develop a new methodology to integrate DNA and RNA data sets to examine functional shifts at the species level that are important to tumor development. We uncover several metabolic pathways in the microbiome that, when perturbed by host genetics and H. hepaticus inoculation, contribute to colon cancer. The work presented here lays a foundation for improved bioinformatics methodologies to closely examine the cross talk between specific organisms and the host, important for the development of diagnostics and pre/probiotic treatment.

Orientador: Valquíria Cação Cruz-Polycarpo / Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito do butirato de sódio microencapsulado (BSM) em substituição ao antibiótico sobre o desempenho, hematologia, peso de órgãos do TGI, escores de lesão intestinal e contagem de oocistos nas excretas de frangos de corte desafiados com Eimeria spp. Para isso foram utilizados 1.050 pintos machos Ross, distribuídos em DIC, com seis tratamentos: CN (controle negativo)- ração basal (RB) (aves não desafiadas); CND- RB (aves desafiadas); 0,10%- RB + 1.000 mg/kg de BSM (aves desafiadas); 0,15%- RB + 1.500 mg/kg de BSM (aves desafiadas); 0,20%- RB + 2.000 mg/kg de BSM (aves desafiadas); AVL- RB + avilamicina (aves desafiadas), com cinco repetições. Aos 16 dias de idade, as aves foram inoculadas oralmente e individualmente com oocistos de Eimerias e as aves de CN, inoculadas com solução salina, para que também sofressem o estresse da inoculação. Observou-se maiores GPM e CRM nas aves não desafiadas em comparação às desafiadas na fase de 1 a 21 d, e na fase final de criação e melhor CA e FEP, mostrando o poder da inoculação com o protozoário. Não houve diferença nas variáveis hematológicas e bioquímicas entre as diferentes dietas fornecidas, porém frangos submetidos às Eimerias apresentaram queda nos valores normais após desafio, e demonstraram recuperação ao final da criação. Na alometria de órgãos do TGI, o peso do fígado apresentou-se superior nas aves que receberam aditivo. Já, o peso do pâncreas, mostrou-se superior nas aves suplementadas com... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The objective of this study was to evaluate the effect of microencapsulated sodium butyrate (MSB) in substitution to antibiotics on performance, hematology, weight of organs of the GIT, intestinal injury scores and oocyst count in the excreta of broilers challenged with Eimeria spp. For this, 1,050 male Ross chicks were used, distributed in completely randomized design, with six treatments: NC - basal diet (BD) (non-challenged birds); NCC- BD (challenged birds); 0.10% - BD+1,000 mg/kg of MSB (challenged birds); 0.15% - BD+1,500 mg/kg of MSB (challenged birds); 0.20% - BD+2,000 mg/kg of MSB (challenged birds); AVL - BD + avilamycin (challenged birds), with five repetitions. At 16 days of age, the birds were inoculated orally and individually with Eimerias oocysts and the NC birds were inoculated with saline solution, so that they also suffered the stress of inoculation. Higher ABW and AFI were observed in the unchallenged birds compared to those challenged in the 1 to 21 day phase, and in the final breeding phase, better FCR and PEF, showing the power of inoculation with the protozoan. There was no difference in hematological and biochemical variables between the different diets provided, but chickens subjected to inoculation with Eimerias showed a drop in normal values after challenge, and showed recovery at the end of the rearing period. In the allometry of organs of the TGI, the liver weight was higher in the birds that received additive. The weight of the pancreas, on the ... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre