Orientador: Edésio Luiz Simionatto. / Dissertação (Mestrado em Química) - Programa de Pós-Graduação em Química, Centro de Ciências Exatas e Naturais, Universidade Regional de Blumenau, Blumenau.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2018. / A nanobiotecnologia, que aplica técnicas, princípios biológicos e nanotecnológicos para melhorar a compreensão e transformação dos biossistemas, é oferecida como proposta de inovação tecnológica para tratamento do câncer. Dentre os avanços da nanobiotecnologia nos diversos setores do campo da saúde, destacam-se aqueles aplicados à terapia fotodinâmica (TFD), modalidade terapêutica minimamente invasiva e cujo uso é clinicamente aprovado para o tratamento de diferentes tipos de doenças oncológicas e não oncológicas. A TFD é capaz não apenas de destruir o tumor devido à sua toxicidade direta às células cancerosas, mas também de causar infarto do tecido canceroso por destruir a microvasculatura tumoral, bem como por ativar o sistema imunitário contra antígenos tumorais. Diante disso, o objetivo principal deste estudo foi avaliar a indução de morte celular imunogênica (MCI) causada pela TFD mediada por nanoemulsão com cloreto de alumínio-ftalocianina (TFD-NE-AlFtCl) em células de câncer de mama murino in vitro e in vivo. Para tanto, foi realizada a produção de um novo lote da NE-AlFtCl, que foi caracterizado e teve a estabilidade para suas prorpiedades coloidais, fotofísicas e físico-química avaliada. Concomitantemente aos testes de estabilidade, a NE-AlFtCL foi utilizada para avaliação do perfil de internalização pelas células 4T1, bem como para a avaliação de qual via de endocitose estava sendo utilizada para internalização, além da investigação de sua colocalização subcelular. Após a avaliação dos perfis de internalização, da via endocítica e da colocalização, as células 4T1 foram submetidas a diferentes protocolos da TFD-NE-AlFtCl, variando os tempos e doses de energia (J/cm²). As células 4T1 foram avaliadas quanto à via de morte desencadeada pela exposição a TFD-NE-AlFtCl. Foi verificada também a emissão de padrões moleculares associados a dano (DAMP) —HSP70, HSP90, Calreticulina, HMGB1 e IL-1β—, fator-chave para a indução de morte celular imunogênica (MCI). Por fim, após a avaliação dos perfis de liberação desses DAMP, as células pré-tratadas com TFD-NE-AlFtCl foram utilizadas como vacina em camundongos da espécie Balb-C a fim de verificar a ativação de uma resposta antitumoral. Para tanto, após as vacinações, os animais foram submetidos ao enxerto de células 4T1 viáveis, e monitorados quanto ao surgimento de tumor, volume tumoral e sobrevida durante todo experimento. O tempo de 15 minutos foi suficiente para identificação do FS AlFtCl dentro das células 4T1 e essa internalização foi dependente de caveolinas. Os resultados obtidos quanto à internalização e à colocalização subcelular do FS AlFtCl nas organelas núcleo, lisossomos, mitocôndrias e no retículo endoplasmático (RE) demonstraram diferenças na retenção do FS AlFtCl. Sendo que, os tempos de 15, 30 e 45 minutos apresentaram uma maior quantidade de FS AlFtCl nas organelas supracitadas, quando comparados como os tempos de 60, 120 e 240 minutos. Os diferentes protocolos da TFD-NE-AlFtCl aplicados nas células foram eficazes quanto à diminuição da viabilidade das células 4T1. Vale ressaltar ainda que à medida em que o tempo e a dose de energia foram variados, houve variação do perfil de morte e da via de morte ocasionada (apoptose/necrose). Os tratamentos com TFD-NE-AlFtCl 9,01 nM 25 J/cm² apresentaram maior perfil de apoptose, o que refletiu numa maior emissão de DAMP: HSP70, HSP90, Calreticulina, HMGB1 e IL-1β, quando comparados com os demais protocolos. Esses resultados apresentados pelo tratamento com TFD-NE-AlFtCl 9,01 nM 25 J/cm² se refletiram também, na avaliação in vivo, sendo verificada uma maior resistência dos animais quanto ao surgimento do tumor, a apresentação de menores volumes tumorais e maior sobrevida. Contudo, o presente estudo conclui que os diferentes protocolos de TFD-NE-AlFtCl aplicados às células 4T1 foram capazes de fazer a emissão dos DAMP — sendo esse requisito chave para ação de uma ativação de MCI e uma ativação antitumoral — porém, essas emissões ocorreram de formas diferentes mediante as alterações de tempo de dose de energia. Conclui-se também que a aplicação da TFD-NE-AlFtCl 9,01 nM 25 J/cm² mais branda demonstrou melhores resultados quanto ao surgimento e desenvolvimento do tumor, além de apresentaremm uma maior taxa de sobrevida. / Nanobiotechnology, which applies techniques, biological principles and nanotechnologies that improve the understanding and transformation of biosystems, is offered as a proposal of technological innovation for the treatment of cancer. Among the advances in nanobiotechnology in the various sectors of the health field, the most important are those applied to photodynamic therapy (PDT), a minimally invasive therapeutic modality and whose use is clinically approved for the treatment of different types of oncological and non-oncological diseases. PDT is capable not only of destroying the tumor due to its direct toxicity to the cancer cells but also by causing infarction of the cancerous tissue by destroying the tumor microvasculature as well as by activating the immune system against tumor antigens. Therefore, the main objective of these studies was to evaluate the induction of immunogenic cell death (ICD) of nanoemulsion-mediated PDT with aluminum chloride-phthalocyanine (PDT-NE-AlFtCl) in murine breast cancer cells in vitro and in vivo. For this, the production of a new batch of NE-AlFtCl was carried out, which was characterized and had its stability for its colloidal, photophysical and physicochemical properties evaluated. In parallel to the stability tests, NE-AlFtCL was used to evaluate the internalization profile by 4T1 cells, as well as to evaluate which pathway of endocytosis was being used for internalization, and to evaluate its subcellular colocalization. After the evaluation of the internalization profiles, the endocytic pathway and colocalization, the 4T1 cells were submitted to different protocols of the PDT-NE-AlFtCl, varying the time and energy doses (J/cm²). 4T1 cells were evaluated for the path of death triggered by exposure to PDT-NE-AlFtCl. DAMPs—HSP70, HSP90, Calreticulin, HMGB1 and IL-1β—, a key factor for the induction of immunogenic cell death (ICD), were also verified. Finally, after evaluation of the release profiles of these DAMPs, cells that we pretreated with PDT-NE-AlFtCl were used as vaccine in mice of the Balb-C species in order to verify the activation of an antitumor response. To do this, after the vaccinations, the animals were submitted to the grafting of viable 4T1 cells and monitored for appearance of tumor, tumor volume and survival throughout the experiment. The time of 15 minutes was sufficient for identification of the FS AlFtCl within the 4T1 cells and this internalization was dependent on caveolinas. The results obtained on the internalization and the subcellular colocalization of FS AlFtCl in the nucleus, lysosomes, mitochondria and in the endoplasmic reticulum (ER) showed differences in the retention of FS AlFtCl. The times of 15, 30 and 45 minutes showed a higher amount of FS AlFtCl in the aforementioned organelles when compared with the times of 60, 120 and 240 minutes. The different protocols of PDT-NE-AlFtCl applied in cells were effective in decreasing the viability of the 4T1 cells. It is worth noting that as time and energy dose were varied, there was variation of the death profile and of the way of death (apoptosis / necrosis). Treatments with 9.01 nM PDT-25 J/cm² had a higher apoptosis profile, which reflected in a higher emission of DAMPs: HSP70, HSP90, Calreticulin, HMGB1 and IL-1β, when compared to the other protocols. These results presented by the treatment with PDT-NE-AlFtCl 9.01 nM 25 J /cm2 also reflected in the in vivo evaluation, which demonstrated a greater resistance of the animals regarding the appearance of the tumor, the presentation of smaller tumor volumes and greater survival rates. However, the present study concludes that the different PDT-NE-AlFtCl protocols applied to the 4T1 cells were able to make the DAMPs emission — this being a key requirement for the action of ICD activation and antitumor activation —; it is worth mentioning that these emissions occurred in different ways regarding modification in time and energy doses. It was also concluded that the application of the milder 9,01 nM 25 J / cm2 PDT-NE-AlFtCl demonstrated better results regarding the occurrence and development of the tumor, besides presenting better survival rates.

Dissertação (mestrado)—Fundação Universidade de Brasília, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2018. / No câncer de mama as metástases estão intimamente relacionadas com modificações na matriz extracelular, onde a modificação mais proeminente observada em estudos recentes é o aumento da deposição de colágeno. As terapias atuais são pouco eficazes em impedir o desenvolvimento e progressão da doença, bem como a reincidência da mesma ao longo dos anos. Com o intuito de incrementar os efeitos da terapia, a associação entre a nanotecnologia e os fármacos utilizados busca melhorar aspectos do tratamento como a eficácia e diminuir os efeitos adversos relacionados ao seu uso. No presente trabalho um modelo de enxerto tumoral de células de carcinoma mamário murino (4T1®ATCC), a uma concentração de 4x104 células/50μL de meio de cultivo, enxertadas no flanco esquerdo de camundongos BalbC fêmeas foi utilizado para avaliação da eficácia do quimioterápico doxorrubicina associado a nanoemulsões e administração simultânea de losartana. Visando potencializar o efeito da terapia, a administração simultânea de losartana foi utilizada como uma tentativa de diminuir os níveis de deposição de colágeno na matriz extracelular de tecidos pulmonares e facilitar a chegada do fármaco aos sítios alvos por meio da ação descompressora dos vasos que permeiam o microambiente tumoral. O tratamento foi administrado por cinco dias consecutivos após quatro semanas do enxerto, nas concentrações de 20mg/kg para doxorrubicina em sua forma livre, 20mg/kg+ 40mg/kg para doxorrubicina livre e losartana, 40mg/kg para doxorrubicina associada a nanoemulsão e 40mg/kg + 40mg/kg para doxorrubicina associada a nanoemulsão e losartana, respectivamente. O acompanhamento in vivo do estado clínico dos camundongos ao longo de cinco semanas mostrou que o tratamento com nanoemulsão e losartana não foi tóxico, enquanto a doxorrubicina promoveu toxicidade que pôde ser observada no comportamento e aspecto físico dos camundongos. As avaliações ex vivo de materiais biológicos realizadas por meio de histologia, imunohistoquímica, ELISA e contagem de nódulos corroboram dados encontrados em estudos científicos, como o menor nível de colágeno nos grupos com administração simultânea de losartana e menor grau metastático. Concluiu-se que a doxorrubicina associada a nanoemulsões e administração de losartana não apresentou diferenças significativas em comparação à doxorrubicina em sua forma livre quando se trata da atividade antitumoral no sítio primário, mas foi capaz de diminuir o grau de colágeno encontrado nos tecidos, bem como as metástases nos tecidos pulmonares, não apresentando toxicidade significativa para os camundongos. / In breast cancer metastasis are closely related to changes in the extracellular matrix, where the most prominent modification observed in recent studies is the increase in collagen deposition. Current therapies are poorly effective in preventing the development and progression of the disease, as well as its recurrence over the years. In order to increase the effects of therapy, the association between nanotechnology and the drugs aims to improve treatment efficacy and to reduce adverse effects related to its use. In the present work a murine mammary carcinoma cell (4T1®ATCC) tumor graft model, at a concentration of 4x10 4 cells/50μl culture medium, grafted on the left flank of female BalbC mice was used to evaluate the efficacy of doxorubicin with nanoemulsions and simultaneous administration of losartan. In order to potentiate the effect of the therapy, the simultaneous administration of losartan was used as an attempt to decrease the levels of collagen deposition in the extracellular matrix of lung tissues and to facilitate the drug delivery at the target sites through the decompressive action of the vessels that permeate the tumor microenvironment. The treatment was administered for five consecutive days after four weeks of grafting, at concentrations of 20mg/kg for doxorubicin in its free form, 20mg/kg + 40mg/kg for free doxorubicin and losartan, 40mg/kg for doxorubicin associated with nanoemulsion and 40mg/kg + 40mg/kg for doxorubicin associated with nanoemulsion and losartan, respectively. In vivo monitoring of the clinical status of mice over five weeks showed that treatment with nanoemulsion and losartan was non-toxic, whereas doxorubicin promoted toxicity that could be observed in the behavior and physical appearance of the mice. Ex vivo evaluations of biological materials performed using histology, immunohistochemistry, ELISA and lung nodule counts corroborate data found in scientific studies, such as the lower level of collagen in the groups with simultaneous administration of losartan and lower metastatic degree. It was concluded that doxorubicin associated with nanoemulsions and administration of losartan did not present significant differences compared to doxorubicin in its free form when it treated the antitumor activity at the primary site, but was able to decrease the degree of collagen found in the tissues, as well as metastasis in the lung tissues, showing no significant toxicity to the mice.

Orientador: Áureo Evangelista Santana / Coorientadora: Annelise Carla Camplesi / Banca: Marco Antônio de Andrade Belo / Banca: Thiago Demarchi Munhoz / Resumo: A quimioterapia metronômica é uma estratégia de uso crescente em Medicina Veterinária, que emprega fármacos em baixas doses e por longos períodos de tempo para controlar o crescimento tumoral. Objetivou-se avaliar os efeitos tóxicos de dois quimioterápicos antineoplásicos em animais livres de tumores seguindo esquemas metronômicos, assim como os efeitos residuais uma vez que a terapia foi suspensa. Para tanto, foram empregados 54 ratos Wistar, divididos em 3 grupos de tratamento de 18 animais cada, que receberam doses baixas de ciclofosfamida (CPX), metotrexato (MTX) ou placebo (grupo controle, CTR), via oral, por meio de gavage, durante 45 dias. Os animais tiveram acompanhamento periódico para pesagem e monitoramento clínico e do consumo de alimento e água. Realizou-se eutanásia em seis animais de cada grupo aos 30 (M1), 45 (M2) e 60 dias (M3), para coleta de amostras para hemograma, bioquímica sérica, citologia de medula óssea e análise histopatológica de baço, fígado, rim, intestino, pulmão, coração, cérebro e artéria. Empregou-se o teste de Qui-quadrado para análise estatística das variáveis não paramêtricas e o teste T-student para amostras não pareadas ou uma ANOVA seguida de uma comparação múltipla de Tukey para as variáveis paramêtricas. Seis animais do grupo CPX morreram, portanto a terapia foi suspensa aos 30 dias de tratamento, mantendo o período de observação até 45 dias. Os animais tratados com CPX exibiram significativa redução de peso e do consumo de alimento e... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Metronomic chemotherapy is a growing strategy in veterinary medicine that uses low doses of antineoplastic drugs for sustained periods of time to control tumor growth. This work aimed to evaluate toxic effects of metronomic chemotherapy schemes in tumor-free animals, and residual toxicity once treatment was suspended. There were used 54 healthy Wistar rats, divided in 3 groups (18 animals each), that received low-doses of cyclophosphamide (CPX), methotrexate (MTX) or placebo (control group, CTR) by oral gavage during 45 days. Clinical alterations, body weight, water and food intake were monitored periodically. Euthanasia was practiced within 6 animals from each group at 30 (M1), 45 (M2) and 60 days (M3) to perform hematological, biochemical and histopathologic analysis (spleen, liver, kidney, gut, lung, heart, brain and artery), and bone marrow cytology. An unpaired T-student test or a one-way ANOVA in conjunction with a Tukey multiple comparison test were done to analyze parametrical data, as a Chi-square test for semi-quantitative parameters. Six animals treated with CPX died and therapy was suspended at 30 days, within 15 days of observation after withdrawal. CPX treated animals exhibited significant reduction of weight gain, water and food intake (p<0.05), and clinical alterations related to respiratory and neuromuscular involvement, which even persisted after CPX withdrawal. At M1, significant neutrophil augmentation and reduction of leukocytes, lymphocytes and albumin was predominant in blood, as bone marrow reduction of lymphocytes, plasmatic cells and mature erythroid populations were significantly prevalent (p<0.05). At M2, only higher neutrophils count and reduction of lymphocytes persisted, as depletion of mature erythroid populations (p<0.05). MTX treated animals only evidenced mild to moderate (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação Nanociência e Nanobiotecnologia, 2016. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2016-05-25T13:46:24Z No. of bitstreams: 1 2016_AliciaSimalieOmbredane.pdf: 2064852 bytes, checksum: b44036cc1dea0669306297b2c133343e (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2016-05-25T20:43:52Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_AliciaSimalieOmbredane.pdf: 2064852 bytes, checksum: b44036cc1dea0669306297b2c133343e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-25T20:43:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_AliciaSimalieOmbredane.pdf: 2064852 bytes, checksum: b44036cc1dea0669306297b2c133343e (MD5) / O câncer de pele não melanoma (CPNM) é o tipo de tumor de maior incidência no Brasil, e o subtipo maligno denominado de carcinoma epidermoide representa 70% das mortes por CPNM. Os tratamentos convencionais apresentam grande chance de cura, entretanto, são geralmente associados a vários efeitos colaterais adversos localizados e/ou sistêmicos. Portanto, o desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas é de grande interesse. O uso de compostos naturais e de nanopartículas de prata (AgNPs) demonstram uma grande relevância para o tratamento de vários tipos de câncer. Adicionalmente, a síntese verde de AgNPs consiste em utilizar organismos biológicos e/ou biomoléculas isoladas como agentes redutores e estabilizantes. Portanto, o método de síntese se torna mais eco-amigável, de menor custo e biocompatível. Diante do exposto, o objetivo deste trabalho é de sintetizar AgNPs utilizando extrato aquoso (EA) do tubérculo de açafrão (Curcuma longa) e nitrato de prata (AgNO3), associá-las com polímeros de quitosana, caracterizá-las, avaliar a citotoxicidade em células tumorais de CPNM (A431) e não tumorais (queratinócitos - HaCAT) e investigar seus possíveis mecanismos de ação em linhagem de CPNM (A431), in vitro. O rendimento da síntese de AgNPs foi dependente da variação de temperatura de armazenamento da C. longa, do método de extração, da temperatura de síntese e da concentração de EA e de AgNO3. Após a otimização da síntese (C. longa armazenada a temperatura ambiente, extração por fervura, síntese a 75°C por 24 horas com 2 mg/mL de EA e 1 mM de AgNO3) a quitosana foi utilizada para recobrir as AgNPs devido às suas propriedades de biocompatibilidade, biodegradabilidade e bioadesividade. As AgNPs obtidas apresentaram uma homogeneidade e estabilidade coloidal moderadas (PdI de 0,319 ± 0,043 e potencial Zeta de -24,8 ± 2,2 mV) com diâmetro hidrodinâmico (DH) de 210,3 ± 57,1 nm. Em paralelo, as AgNPs recobertas por quitosana (CH-AgNPs) apresentaram DH de 328,0 ± 61,6 nm, moderada homogeneidade (PdI de 0,372 ± 0,059) e estabilidade coloidal (potencial Zeta de +53,9 ± 3,1 mV). A forma das nanopartículas foi avaliada por técnicas de microscopia. As amostras demonstraram ser estáveis por 30 dias a 4°C. Além disso, ambas demonstraram atividade citotóxica dose-dependente em células A431 e HaCAT. A investigação dos possíveis mecanismos de ação das AgNPs expostas às células A431 por 24 horas a 50μM demonstrou a indução de lesão de membrana plasmática (50%), diminuição da proliferação celular (50%), aumento da taxa de fragmentação de DNA (40%) e do potencial de membrana mitocondrial. Além disso, as CH-AgNPs bloquearam as células em fase G1 do ciclo celular e apresentaram maior marcação por Anexina-V, sugerindo morte celular por apoptose. Em suma, pode-se concluir que a síntese verde demonstrou ser uma boa alternativa para a obtenção de AgNPs com grande potencial citotóxico. A associação com a quitosana pode representar um potencial promissor para o tratamento de CPMN. _______________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Nonmelanoma skin cancers (NMSC) represents the most incident tumor in Brazil, and the malignant subtype squamous cell carcinoma accounts for 70% of deaths from NMSC. Conventional treatments have great chance of cure, however, they are usually associated with several localized and/or systemic adverse side effects. Therefore, the development of new therapeutic strategies is of great interest. The use of natural compounds and silver nanoparticles (AgNPs) showed a great importance for the treatment of various cancers. Additionally, the green synthesis of AgNPs consists of using biological organisms and/or biomolecules isolated as reducing agents and stabilizers. Therefore, this method of synthesis becomes more eco-friendly, less costly and biocompatible. Given the above, the objective of this study is to synthesize AgNPs using aqueous extract (EA) of turmeric tuber (Curcuma longa) and silver nitrate (AgNO3), associate them with chitosan polymers, characterize them, analyze the cytotoxicity NMSC tumor (A431) and non-tumor cells (keratinocytes - HaCaT) and investigate the possible mechanisms of action in NMSC cells line (A431) in vitro. The yield of synthesis was dependent on the variation of the storage temperature of C. longa, the method of extraction, the temperature of synthesis and the concentration of EA and AgNO3. After optimization of the synthesis parameters (C. longa stored at room temperature, extraction by boiling, and synthesis at 75°C for 24 hours with 2 mg/ml EA and 1 mM AgNO3) chitosan was used to coat AgNPs due to its properties of biocompatibility, biodegradability and bioadhesiveness. The obtained AgNPs showed a moderate homogeneity and colloidal stability (0.319 ± 0.043 PDI and Zeta potential of - 24.8 ± 2.2 mV) with hydrodynamic diameter (HD) of 210.3 ± 57.1 nm. In parallel, covered with chitosan (CH-AgNPs) exhibited HD of 328.0 ± 61.6 nm, moderate homogeneity (PDI 0.372 ± 0.059), and colloidal stability (Zeta potential of +53.9 ± 3.1 mV). The shape of the nanoparticles was analyzed by microscopy techniques. The samples proved to be stable for 30 days at 4°C. In addition, both showed dosedependent cytotoxic activity in HaCaT and A431 cells. The investigation of possible mechanisms of action of AgNPs exposed to A431 cells for 24 hours at 50 μM demonstrated the induction of plasma membrane injury (50%), reduction of cell proliferation (50%), increased of DNA fragmentation rate (40%) and mitochondrial membrane potential and induction of cell death by apoptosis. Furthermore, CH-AgNPs blocked cells in G1 phase of the cell cycle and presented anexin-V dialing suggesting cell death by apoptosis. In short, it can be concluded that the green synthesis proved to be a good alternative for obtaining AgNPs with high cytotoxic potential. The association with chitosan may represent a promising potential for the treatment of CPMN.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-11-17T12:54:09Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 3046226 bytes, checksum: ad24171995edc5f39a7e2eaa3b5ffb67 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-11-17T12:54:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 3046226 bytes, checksum: ad24171995edc5f39a7e2eaa3b5ffb67 (MD5) Previous issue date: 2016-12-22 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Os rubrolídeos naturais e seus análogos sintéticos, bem como as y -hidroxi- y -lactamas e y -alquilideno- y -lactamas, apresentam grande variedade de atividades biológicas. Neste trabalho, eles foram usados como modelo para o desenvolvimento de novos compostos com potenciais atividades biológicas. Uma série de análogos aos rubrolídeos foi sintetizada e convertida nas y -hidroxi- y -lactamas e y -alquilideno- y - lactamas correspondentes. A rota sintética escolhida para a síntese desses compostos teve como material de partida o ácido mucobrômico, cuja redução com boroidreto de sódio levou à formação da 3,4-dibromofuran-2(5H)-ona com 81% de rendimento. Esse composto foi posteriormente submetido à reação de acoplamento de Suzuki com diferentes ácidos arilborônicos para a obtenção regiosseletiva de quatro novas 4-aril-3-bromofuran-2(5H)-onas, com rendimentos que variaram de 43% a 70%. Numa etapa posterior, as 4-aril-3-bromofuran-2(5H)-onas foram submetidas a reações de adição aldólica com diferentes aldeídos aromáticos. Essas reações foram realizadas na temperatura ambiente e na presença de N,N-diisopropiletilamina e tert- butildimetilsililtrifluorometanossulfonato. O tratamento dos adutos aldólicos obtidos com 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno sob refluxo resultou na obtenção estereosseletiva de 13 y -alquilidenobutenolídeos análogos aos rubrolídeos na configuração Z, com rendimentos variando de 58% a 93%. Esses compostos foram convertidos nas y -hidroxi- y -lactamas correspondentes, por meio da reação de lactamização com isobutilamina a 0 oC, apresentando rendimentos que variaram de 81% a 97%. Finalmente, a desidratação das y -hidroxi- y -lactamas com ácido p- toluenossulfônico levou à formação das (Z) e (E)- y -alquilideno- y -lactamas, com rendimentos totais que variaram entre 77% e 94%. Após a purificação por coluna cromatográfica, apenas o isômero Z foi isolado. Todos os compostos sintetizados foram caracterizados por espectrometria de massas, espectroscopia no IV e RMN de 1 H e 13 C. Técnicas bidimensionais como HSQC e NOESY auxiliaram na atribuição de sinais dos espectros de RMN de hidrogênio e de carbono e na elucidação da configuração da ligação dupla das unidades y -alquilideno. Cinquenta e dois compostos foram sintetizados, sendo 51 inéditos. Todos os compostos foram submetidos a ensaios para avaliação da inibição do crescimento planctônico e inibição da formação de biofilme de duas bactérias de grande importância médica, Staphylococcus aureus e Staphylococcus epidermidis. Para S. aureus, a maioria dos compostos apresentaram IC 50 maior que 40 μg mL -1 . Apenas (Z)34a e (Z)34b inibiram fortemente o crescimento bacteriano (IC 50 = 5,6 e 1,8 μg mL -1 , respectivamente), e 32m e 33l apresentaram atividades moderadas (IC 50 = 13,8 e 18,9 μg mL -1 , respectivamente). Para S. epidermidis, os compostos exibiram, em sua maioria, IC 50 maior que 40 μg mL -1 . O composto 34b foi o único que demonstrou elevada atividade (IC 50 6,0 μg mL -1 ). De forma geral, os compostos não demonstraram atividade sobre a formação do biofilme de S. epidermidis. Entretanto, para S. aureus, cinco compostos foram capazes de inibir em 50% a formação de biofilme em concentrações menores que 10 μg mL -1 , destacando-se os compostos (Z)34e e (Z)34f, com valores de IC 50 iguais a 0,9 e 1,3 μg mL -1 , respectivamente. Os derivados lactâmicos aqui descritos apresentaram valores de IC 50 até quatro vezes menores do que os descritos anteriormente. Foi avaliada, ainda, a citotoxicidade dos compostos sintetizados sobre as linhagens de células tumorais SF-295 (glioblastoma), HCT-116 (carcinoma de cólon) e PC-3 (adenocarcinoma de próstata). Os compostos demonstraram baixo potencial de diminuição da viabilidade celular na concentração avaliada, e apenas o composto 32k apresentou atividade moderada, com redução de 50,4% da viabilidade celular sobre a linhagem HCT-116. Os compostos 33f, 33h, 33j, 33k, 34a, 34c, 34f e 34k apresentaram redução da viabilidade celular maior que 40% sobre, pelo menos, uma linhagem testada. / Natural rubrolides and their synthetic analogs, as well as y -hydroxy- y -lactams and y - alkylidene y -lactams, present a wide variety of biological activities. In this work, they were used as a model for the development of new compounds with potential biological activities. A series of analogs to the rubrolides was synthesized and converted into the corresponding y -hydroxy- y -lactams and y -alkylidene- y -lactams. The synthetic route chosen for the synthesis of these compounds had the starting material mucobromic acid, which reduction with sodium borohydride led to the formation of 3,4- dibromofuran-2-(5H)-one in 81% yield. This compound was subsequently subjected to the Suzuki coupling reaction with different arylboronic acids for the regioselective production of four novel 4-aryl-3-bromofuran-2-(5H)-ones in yields ranging from 43% to 70%. In a subsequent step, the 4-aryl-3-bromofuran-2-(5H)-ones were subjected to aldol addition reactions with different aromatic aldehydes. These reactions were carried out at room temperature and in the presence of N,N -diisopropylethylamine and tert-butyldimethylsilyltrifluoromethanesulfonate. Treatment of aldol adducts obtained with 1,8-diazabicyclo[5.4.0]undec-7-ene under reflux resulted in the stereoselective generation of 13 y -alkylidenobutenolides analogous to the rubrolides in the Z configuration, in yields ranging from 58% to 93%. These compounds were converted to the corresponding y -hydroxy- y -lactams by the lactamization reaction with isobutylamine at 0 °C, yields ranging from 81% to 97%. Finally, dehydration of y - hydroxy- y -lactams with p-toluenesulfonic acid led to the formation of (Z) and (E)- y - alkylidene- y -lactams, in total yields ranging from 77% to 94%. After purification by column chromatography, only the Z isomer was isolated. All synthesized compounds were characterized by mass spectrometry, IR spectroscopy and 1 H and 13 C NMR. Two- dimensional techniques such as HSQC and NOESY aided the assignment of signals from the hydrogen and carbon NMR spectra and elucidation of the y -alkylidene unit double bond configuration. Fifty-two compounds were synthesized, 51 of which were unpublished. All the compounds were tested for inhibition of planktonic growth and inhibition of biofilm formation of two highly important bacteria, Staphylococcus aureus and Staphylococcus epidermidis. For S. aureus, most of the compounds had IC 50 greater than 40 μg mL -1 . Only (Z)34a and (Z)34b strongly inhibited bacterial growth (IC 50 = 5.6 and 1.8 μg mL -1 , respectively), and 32m and 33l presented moderate activities (IC 50 = 13.8 and 18.9 μg mL -1 , respectively). For S. epidermidis, the compounds exhibited, for the most part, IC 50 greater than 40 μg mL -1 . Compound 34b was the only one that demonstrated high activity (IC 50 6.0 μg mL -1 ). In general, the compounds did not demonstrate activity on the formation of the S. epidermidis biofilm. However, for S. aureus, five compounds were able to inhibit biofilm formation in concentrations lower than 10 μg mL -1 by 50%, with the compounds (Z)34e and (Z)34f, with the same IC 50 values To 0.9 and 1.3 μg mL -1 , respectively. The lactam derivatives described herein have IC 50 values up to four times lower than those described above. Cytotoxicity of the compounds synthesized on SF-295 (glioblastoma), HCT-116 (colon carcinoma) and PC-3 (prostate adenocarcinoma) tumor cell lines was also evaluated. The compounds showed low potential for decreased cell viability in the evaluated concentration, and only 32k showed moderate activity, with a reduction of 50.4% in cell viability over the HCT-116 lineage. Compounds 33f, 33h, 33j, 33k, 34a, 34c, 34f and 34k showed reduction of cell viability greater than 40% on at least one tested lineage.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:24Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-08-12Bitstream added on 2014-06-13T18:45:05Z : No. of bitstreams: 1 bidinotto_lt_dr_botfm.pdf: 1761792 bytes, checksum: 806774ddebe4807459be347866970236 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Estudos prévios mostraram que uma dieta rica em óleo de peixe aumentou a eficácia quimioprotetora do tamoxifeno contra a carcinogênese mamária induzida pela N-metil-Nnitrosuréia (MNU) em ratas Sprague-Dawley. O presente trabalho evidenciou que o tratamento com tamoxifeno modifica a expressão gênica de tumores mamários dependendo to tipo de gordura administrado na dieta dos animais. Ratas Sprague-Dawley iniciadas com MNU e tratadas com tamoxifeno receberam uma dieta rica em óleo de milho ou óleo de peixe. Após oito semanas, tumores do mesmo tipo histológico (cribriformes) foram coletados, e análise do RNA mensageiro (mRNA) foi executada através de microarray de expressão gênica e seguinte validação dos resultados por PCR em tempo real. A maior expressão do mRNA dos genes SerpinB10, Wisp2 e Apod em tumores de animais tratados com óleo de peixe é indicativo de que esses tumores eram altamente diferenciados. A redução da expressão de mRNA dos genes H19 e Igf2 nos grupos tratados com tamoxifeno, e de Thrsp e Wnt5b no grupo tratado com óleo de peixe e tamoxifeno pode estar relacionado à redução do crescimento tumoral e baixa capacidade metastática. A expressão aumentada do nível de transcrito Irf7 nos animais tratados com óleo de peixe sugere melhora na resposta imune antitumoral (padrão Th1), enquanto o aumento nos transcritos dos genes Fcer1a, Hdc, Ms4a2, Slp1, Mcpt1 and Mcpt2 nos animais tratados com óleo de peixe e tamoxifeno podem indicar uma mudança no padrão de resposta imune para Th2. O padrão Th2 representa um potencial mecanismo de escape da resposta imune adquirido pelas células tumorais dos animais tratados com óleo de peixe e tamoxifeno. Esses resultados sugerem que, apesar do tamoxifeno modular a expressão gênica levando à redução do crescimento tumoral, modulações de genes adicionais são influenciadas pela dieta rica em óleo de peixe... / Studies have shown that a fish oil-rich diet increased the chemopreventive efficacy of tamoxifen (Tam) against N-methyl-N-nitrosourea (MNU)-induced rat mammary carcinogenesis. Herein, we evidence that tamoxifen treatment modifies gene expression of mammary tumors depending upon the type of dietary fat fed to the animals. Rats initiated with MNU and treated with Tam were fed a diet rich in corn oil (CO) or fish oil (FO). After 8 weeks, tumors of the same histological type (cribriform) were collected and comprehensive analysis of messenger RNA expression was performed. The mRNA expression of genes such as SerpinB10, Wisp2 and Apod in tumors from FO-treated rats is indicative of highly differentiated tumors. Decreased expression of H19 and Igf2 mRNA in Tam-treated groups, and Thrsp and Wnt5b mRNA in FO+Tam group may be related to tumor growth impairment and lower metastatic capacity. Increased Irf7 transcript levels in FO-treated animals suggests an improved immune response against tumors (Th1 pattern) whereas decreased mRNA of Fcer1a, Hdc, Ms4a2, Slp1, Mcpt1 and Mcpt2 may indicate a shift of the immune response towards Th2 pattern. The Th2 pattern of gene expression represents a potential mechanism of escape from the immune response caused by FO+Tam treatment. These data show that, although tamoxifen modulates the expression of genes leading to tumor growth impairment, further modulations of genes are influenced by FO altering Tam-modulated expression of genes in a manner that may, in part, account for its enhancing chemopreventive effect against MNU-induced mammary carcinogenesis

Made available in DSpace on 2015-01-26T13:21:29Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-24Bitstream added on 2015-01-26T13:30:21Z : No. of bitstreams: 1 000798819.pdf: 983001 bytes, checksum: 2fc0b03354d07607d8a8e61e7ab3880b (MD5) / Fundação Oswaldo Cruz (Fiocruz) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais (FAPEMIG) / A alta prevalência do câncer de mama é um fator que nos instiga a investigar novos biomarcadores para a doença. Proteínas séricas ou plasmáticas já são utilizadas rotineiramente no rastreamento de algumas neoplasias. As micropartículas (MPs) são fragmentos da membrana plasmática liberadas por diversos tipos celulares e estão associadas com a resposta inflamatória. Estudos recentes mostram que a presença de MPs e citocinas/quimiocinas circulantes possuem uma relevante associação clínica com o câncer de mama. O objetivo deste estudo foi medir os níveis desses biomarcadores inflamatórios (MPs, citocinas e quimiocinas) no soro de mulheres com câncer de mama pré e pós-quimioterapia comparando com o grupo controle; assim como associar esses dados com diversos parâmetros clínicos e hemograma. Foi coletado sangue periférico de mulheres sem evidências de doenças (n=20) e com câncer de mama (n=38). Foi utilizada a citometria de fluxo para dosagens dos níveis séricos de citocinas (IL-1, IL-2, IL-4, IL-6 IL-10, IL-12, IL- 17A, TNF, IFN-gama), quimiocinas (CXCL-8, CXCL-9, CXCL-10, CCL-2, CCL-5) e micropartículas provenientes de diversas células (neutrófilos, leucócitos, monócitos, eritrócitos, endotélio, plaquetas, linfócitos). As diferenças entre os grupos foram avaliadas pelo teste de Mann-Whitney ou Kruskal- Walis. As diferenças com valor de p<0,05 foram consideradas significativas. Não houveram diferenças significativas nos níveis de micropartículas, citocinas e quimiocinas estudadas entre os grupos controle e câncer de mama. Entretanto houve uma diminuição dos níveis de micropartículas derivadas de plaquetas nas pacientes pós-quimioterapia e um aumento de níveis séricos de IL-6, CCL-5 e CXCL-10 pós-quimioterapia. Em associação com os dados clínicos foi demostrado que baixos níveis de micropartículas derivadas de monócitos e altos níveis de CCL-2 e CXCL10 estão associados a tumores mais ...

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas, 2015. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2015-05-22T16:13:56Z No. of bitstreams: 1 2015_LucianaPaganiniPiazzolla.pdf: 1031661 bytes, checksum: f5a5639ddabe2264687f5a021fe636c1 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2015-05-25T13:17:41Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_LucianaPaganiniPiazzolla.pdf: 1031661 bytes, checksum: f5a5639ddabe2264687f5a021fe636c1 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-05-25T13:17:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_LucianaPaganiniPiazzolla.pdf: 1031661 bytes, checksum: f5a5639ddabe2264687f5a021fe636c1 (MD5) / Introdução: O câncer colorretal (CCR) é a terceira neoplasia maligna mais frequente e a segunda causa de morte por câncer, no mundo ocidental. A mediana de idade na época do diagnóstico do CCR é 70 anos. O aumento da expectativa de vida e o envelhecimento populacional fazem do câncer colorretal um grande problema de saúde para idosos. Como a expectativa de vida aumenta, pesquisas relacionadas ao comportamento do CCR em idosos são necessárias. Embora a idade apenas, não seja contraindicação de terapia adjuvante, pacientes idosos recebem menos neoadjuvância, menos tratamento cirúrgico e menos quimioterapia adjuvante. As explicações para esses fatos são que, no tempo do diagnóstico, essa população exibe menor performance status, doença mais avançada e especialmente, mais comorbidades. Objetivos: Avaliar a influência da idade na apresentação clínica, no estadiamento patológico, na terapêutica e nos resultados oncológicos em pacientes diagnosticados com câncer colorretal esporádico fora de programa de rastreamento. Métodos: Os prontuários de 216 pacientes, com adenocarcinoma de câncer colorretal, tratados no Hospital Universitário de Brasília, no Serviço de Cirurgia Colorretal, entre janeiro de 2006 a dezembro de 2012, foram revisados. Os pacientes foram categorizados em dois grupos: 50 a 64 anos e ≥ 65 anos. Características clínicas e demográficas, estadiamento patológico, tratamento cirúrgico, neoadjuvância ou adjuvância, mortalidade operatória e resultados oncológicos foram comparados entre os dois grupos. Resultados: O grupo idoso foi composto por 116 pacientes com média de idade de 71,13±4,72 anos, e o grupo não idoso (controle) por 100 pacientes com média de 56,97±4,55 anos. O grupo idoso e não idoso apresentaram taxas semelhantes de sangramento intestinal, (72 vs. 67%, p=0,439), mudanças no hábito intestinal (72 vs. 68%, p=0,538), e perda de peso (55 vs. 53%, p=0,698). Dor abdominal foi menos frequente no grupo idoso (53 vs. 68%, p=0,003). Na análise multivariada, a idade não influenciou o tempo de aparecimento dos sintomas até o diagnóstico, também não interferiu nos estágios patológicos T3/T4 e estágios finais III e IV. O tratamento cirúrgico foi similar entre os dois grupos, e o tumor primário foi ressecado em mais de 95% dos casos. A mortalidade operatória foi 11 (9,5%) vs. 6 (6%) (p=0,087). O grupo não idoso recebeu mais terapia adjuvante que o grupo idoso. (45% vs. 23,3%, p=0,002). Na análise multivariada, a idade não foi um fator de risco significante para óbito, durante seguimento (p=0,147), mas o risco de recorrência foi 2 vezes maior para os pacientes ≥ 65 anos. A sobrevida livre de doença foi maior no grupo de não idoso. (p=0,035). Conclusão: Pacientes idosos apresentam menor frequência de dor abdominal, mas o intervalo de tempo do início dos sintomas até o diagnóstico e o estadiamento patológico foram semelhantes nos dois grupos. A idade influenciou o tratamento do CCR, com idosos recebendo menos terapia adjuvante e com piores resultados oncológicos, apresentando maior taxa de recorrência e menor tempo de sobrevida livre de doença. / Background: Colorectal cancer (CRC) is the third most common cancer and the second leading cause of cancer death in the Western world. The median age at diagnosis of colorectal cancer is 70 years. Increasing life expectancies and population-wide aging mean that CRC is a major health issue in the elderly. As life expectancy increases, research into the clinical presentation and staging of colorectal cancer in older adults is warranted. Although age alone is no contraindication to adjuvant treatment, elderly patients receive less neoadjuvant therapy, less surgical treatment, and less supportive care. Objectives: To evaluate the clinical presentation and pathological staging, therapy and oncologic outcomes in unscreened adults diagnosed with sporadic colorectal cancer after symptom onset. Methods: The medical records of 216 patients with adenocarcinoma colorectal cancer treated at Hospital Universitário de Brasília, Department of Colorectal Surgery, between January 2006 and December 2012, were reviewed. Patients were divided into age into two groups: 50-64 years and ≥ 65 years. Clinical and demographic characteristics, pathological staging surgical and neoadjuvant or adjuvant therapy, operative mortality, and oncologic outcomes were compared between two groups. Results: The older group comprised 116 patients with a mean age of 71,13±4,72 years, and the younger group, 100 patients with a mean age of 56,97±4,55. Older and adults had similar rates of lower gastrointestinal bleeding (72 vs. 67%, p=0,439), changes in bowel habit (72 vs. 68%, p=0,538), and weight loss (55 vs. 53%, p=0, 698). Abdominal pain was less common in the older group (53 vs. 68%, p=0,003). On multivariate analysis, age did not influence the time elapsed since symptom onset, pathological stage T3/T4, or final pathological stage III/IV. The rate of surgery was similar between groups, and the primary tumor was resected in > 95% of cases. The operative mortality rate was 11 (9,5) vs. 6 (6) (p=0,087). Adults patients were more likely to receive adjuvant chemotherapy (45% vs. 23,3%, p=0,002). On multivariate analysis, age was not a significant risk factor for death during follow-up (p=0,147), but the risk of recurrence was twofold higher in the older group. Cancer-free survival was longer in the adult group (p=0,035). Conclusion: Older patients reported a lower frequency of abdominal pain, but time from symptom onset to diagnosis and pathological staging were similar to those of younger patients Our findings suggest that age influences treatment of colorectal cancer, as older patients received less adjuvant chemotherapy regardless of performance status and, consequently, had inferior oncologic outcomes, with a higher recurrence rate and shorter cancer-free survival.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2017. / Submitted by Raquel Almeida (raquel.df13@gmail.com) on 2017-11-06T17:24:37Z No. of bitstreams: 1 2017_NataliaLemosChaves.pdf: 23423845 bytes, checksum: b3e5a1dad73107ecd8ace4dd296cccae (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2017-12-01T18:06:38Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_NataliaLemosChaves.pdf: 23423845 bytes, checksum: b3e5a1dad73107ecd8ace4dd296cccae (MD5) / Made available in DSpace on 2017-12-01T18:06:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_NataliaLemosChaves.pdf: 23423845 bytes, checksum: b3e5a1dad73107ecd8ace4dd296cccae (MD5) Previous issue date: 2017-12-01 / Os nano carreadores têm o potencial de melhorar o índice terapêutico dos medicamentos atualmente disponíveis, aumentando a eficácia do fármaco, reduzindo sua toxicidade, e alcançando níveis terapêuticos por um período prolongado. A associação de citrato de ródio II (RC) com nanopartículas (NPs) magnéticas pode aumentar a especificidade da ação citotóxica, uma vez que estes complexos podem ser guiados ou transportados para um alvo através da utilização de um campo magnético externo. No entanto, a interação de nanopartículas de maghemita associada a citrato de ródio(MRC) com células, o mecanismo de captação celular, e a localização subcelular ainda não são compreendidos. Este trabalho avalia o mecanismo de captação de nanopartículas de maghemita associadas a citrato de Ródio (MRC) em linhagens de células de câncer de mama metastático e não metastático comparando-as com um modelo celular não tumoral. É possível supor que a captação de MRC NPs em células de câncer da mama é mais eficaz do que em células não tumorais, tanto na quantidade de material internalizado como na distribuição intracelular mais estratégica. Além disso, este processo ocorre através da via de endocitose dependente de clatrina com diferentes níveis de expressão basal desta proteína nas linhagens celulares testadas. MRC é um nano material promissor que pode fornecer uma rota conveniente para direcionamento de fármacos e tratamento do câncer de mama. Conjuntamente, nossos dados sugerem que as NPs MRC atuam no núcleo, inibindo a síntese de DNA e a proliferação celular e induzindo a morte celular. Os efeitos foram verificados em ambas linhagens tumorais (MCF-7 e MDAMB-231), mas as células metastáticas de câncer de mama, MDA-MB-231, parecem ser mais responsivas aos efeitos das NPs. / Nanocarriers have the potential to improve the therapeutic index of currently available drugs by increasing drug efficacy, lowering drug toxicity, and achieving steady state therapeutic levels of drugs over an extended period of time. The association of rhodium (II) citrate (RC) with magnetic nanoparticles (NPs) has the potential to increase specificity of the cytotoxic action, since these complexes can be guided or transported to a target by the use of an external magnetic field. However, these nanoparticles interaction with cells, their uptake mechanism, and subcellular localization are not understood. This work evaluates the uptake mechanism of Maghemite nanoparticleswith Rhodium citrated associated (MRC) nanoparticles in a metastatic and nonmetastatic breast cancer cell models comparing them to a non-tumor cell line. It is possible to assume that MRC NPs uptake in breast cancer cells is more effective than in normal cells both in amount of internalized material and in the achievement of a more strategic intracellular distribution. Moreover, this process occurs through clathrin-dependent endocytosis pathway with different basal expression levels of this protein in the tested cell lines. Taken together, our data suggest that MRC NPs act in cells nuclei, inhibiting DNA synthesis and cell proliferation inducing cell death. The effects were verified in both tumor cells but the metastatic line, MDA-MB-231, seemed to be more responsive to MRC NPs effects.