Orientador: Maria Jaqueline Mamprim / Banca: Maria Denise Lopes / Banca: Geórgia Bignardi Jarreta / Resumo: Nenhuma avaliação clínica ou a receptividade à cobertura pelo macho é suficientemente rigorosa para detectar com exatidão a ocorrência e o dia das ovulações nas cadelas. Algumas cadelas podem ovular no quinto dia do ciclo estral, enquanto outras, ovulam mais tardiamnente, como no trigésimo dia. A técnica mais recente para determinar a ovulação na cadela é a exploração ovariana por ultrasonografia. Portanto, o presente trabalho tem por objetivo avaliar o grau de confiabilidade e rigor do exame ultra-sonográfico, em modo B e a possibilidade de avaliações dopplerfluxométricas de artérias intra-ovarianas para uma detecção segura da ovulação nas cadelas. Para tanto foram utilizadas 5 cadelas, SRD, adultas, com peso de até 10 Kg e em início de fase folicular do ciclo estral. Durante a fase de proestro e estro foram realizados exames ultra-sonográficos (Logic 3, GE) com transdutor de 10Mhz, seriados, com no máximo 48horas de intervalo. Foram realizados cortes sagitais e transversais para se detectar e mensurar os folículos ovarianos. A partir da detecção do colapso folicular ou da substituição da imagem circunscrita anecóica de parede regular por uma estrutura hipoecogênica de contornos irregulares foi monitorado o início de formação luteal. Na fase luteal do ciclo foram realizadas mensurações dos corpos lúteos. Foram realizadas também imagens com o doppler colorido e espectral. Para avaliação do Doppler espectral o cursor foi colocado sobre a artéria ângulo insonação 60º, procedendo-se a avaliação da velocidade máxima do pico sistólico (VPS), dos índices de resistividade (IR) e pulsatilidade (IP). Foi realizada uma análise descritiva dos resultados obtidos. Pela imagem ultra-sonográfica convencional foi possível detectar 100% dos ovários das cadelas estudadas, possibilitando acompanhar o desenvolvimento folicular, colapso e formação... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: No clinical evaluation or the receptivity to the male can be rigorous enough to detect precisely the occurrence and the day of the ovulations in dogs. Some dogs can ovulate on the fifth day of the estral cycle, while others, ovulate later, on the thirtieth day. The latest technique to determine the ovulation in dogs is the ovarian exploration with ultrasound. Therefore, the present work evaluates the degree of dependability and accuracy of the ultrasound examination, in B mode and the possibility of dopplerfluxometric evaluations of intra-ovarian arteries for a safe detection of the ovulation in dogs. Therefore 5 mongrel adult bitches, with weight of up to 10 kg and at the onset of follicular phase, were used. During proestrus and estrus ultrasound examinations (Logic 3, GE) with transducer of 10Mhz were carried out in series with the maximum of 48-hour intervals. Sagittal and transversal cuts were taken to detect and measure the ovarian follicules. From the detection of the folicular collapse or the substitution of the anecoiccircumscribed image of regular wall for a hipoecogenic structure of irregular outline was monitored the beginning of luteal formation. In the luteal phase of the cycle measurements of the luteum bodies were carried out. Images with the spectral doppler had been carried also through colorful and. For evaluation of the spectral Doppler the cursor was placed on the artery angle insonation = 60º, proceeding it evaluation from the maximum speed of the systolic peak (SSP), of the resistivity rate (RR) and pulsatility rate (PR). A descriptive analysis of the results was carried out. For the conventional ultrasound image it was possible to detect 100% of the ovarius of the studied dogs, making possible to follow the development of the follicule, collapse and formation of luteum body in 85.7% of the follicules. The presence of luteum bodies was identified in 100% of the... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Maria Denise Lopes / Banca: Fernanda da Cruz Landim e Alvarenga / Banca: Camila Infantosi Vannucchi / Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos do benzoato de estradiol na prevenção de gestação em cadelas recém-acasaladas. Utilizou-se 24 fêmeas: GRUPO I (Experimental) - 12 cadelas que receberam uma única aplicação de benzoato de estradiol, dose de 0,2 mg/Kg, via intramuscular, entre o 2º e 7º dia da data da última cobertura. GRUPO II (Controle)- 12 cadelas que receberam solução oleosa diluente, dose de 0,2 ml/Kg, via intramuscular, entre os dias 2 e 7 da última data de cobertura. A ovariohisterectomia (OSH) foi realizada entre os dias 6 a 16 após a última cobertura e foram avaliadas: taxa de recuperação e degeneração ovocitária/ embrionária; viabilidade embrionária e a influência do fármaco sobre à migração, clivagem e implantação embrionária. Foi examinado, também, os efeitos do benzoato de estradiol no sistema hematológico após a utilização da droga. Para avaliação dos hemogramas foi realizado análise de variância -ANOVA (p< 0,05) para medidas repetidas e o teste de Tukey para os parâmetros hematológicos. Para as variáveis recuperação ovocitária e embrionária foi utilizado o coeficiente de correlação de Pearson; para migração embrionária e clivagem embrionária foi realizado o teste de qui-quadrado, na análise de viabilidade embrionária foi utilizado teste exato de Fisher e na análise da implantação foi utilizada análise descritiva dos dados. Todos os testes foram realizados a 5% de nível de significância. Obteve-se 03 embriões no grupo experimental e 52 no grupo controle; o benzoato de estradiol exerceu influencia sobre o número de estruturas recuperadas, porém não influenciou a migração, clivagem e a viabilidade embrionária quando utilizado até o 7°dia após a cobertura. Não foi detectada a presença de vesículas embrionárias implantadas em ambos os grupos, porém... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The purpose of this experiment was to evaluate the effects of the estradiol benzoate on the prevention of pregnancy in mismantig dogs. For that, 24 bitches were divided, in: Experimental Group - 12 bitches that has received a single application of the estradiol benzoate (dose of 0,2 mg/Kg, intramuscular application), in a 2 to 7º days after the last mating. Control Group - 12 bitches received an oily solution (dose of 0,2 mL/Kg, intramuscular application) on the same period (between 2 to 7 days after the last mating). Ovariohysterectomy (OSH) has performed, between days 6 and 16 after the last mating and the parameters evaluated were the recovery rate and the embryonic/ oocytary degeneration rate and the influence of the drug on the migration, the viability, clivage and embryonic implantation. The effect of the estradiol benzoate on the hematologic system after the use of the drug was also investigate. For the oocytary and embryonic recovery variables the coefficient of Pearson correlation was used, in the analysis of the embryonic migration and embryonic clivage a qui-square test was carried qui-square test, in the analysis of embryonic viability were used the Fisher's exact test were used and in the analysis of the implantation descriptive analysis o was used. All the tests used 5% of significance level.Three embryos in the experimental group and 52 embryos in the control group were acquired; estradiol benzoate did practise influences on the number of structures recouvered, but, nor on the migration, clivage and embryonic viability, when used until the 7° day after the mating. There was no detection the presence of embryonic vesicles in both the groups, Apparently, OSHs were performed to soon for the detection of embryonic vesicle... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Maria Denise Lopes / Banca: Eunice Oba / Banca: Fabiana Ferreira de Souza / Resumo: A cadela apresenta particularidades no ciclo estral e, o conhecimento de tais características é fundamental para a implantação de técnicas de reprodução assistida. A indução do estro é uma importante ferramenta tanto em pesquisas quanto no manejo reprodutivo de canis. Portanto, o presente trabalho utilizou um agonista da dopamina - cabergolina - 105 -120 dias após o final do estro na dose de 5μg/Kg por no máximo 15 dias ou até a fêmea apresentar sinais de estro, a fim de induzir e acompanhar os estros, espontâneo e induzido em cadelas, desde o início do proestro até o final do estro. As fêmeas foram divididas em 2 grupos: controle (espontâneo) e experimental (induzido). Amostras de sangue para a dosagem de progesterona e esfregaço vaginal foram coletadas a cada 2 dias, além de, observação dos sinais clínicos e comportamentais. Todas as 5 fêmeas do grupo experimental responderam ao tratamento com cabergolina em média após 42,6 dias, sendo que em 2 fêmeas essa resposta foi mais rápida e ambas apresentaram sinais de estro antes do final do tratamento. Ademais, o Intervalo Interestral (IIE) foi menor nas fêmeas do grupo experimental, 159 ± 15.01, em relação às do grupo controle, 169 ± 13.43 dias. O perfil da progesterona e o padrão citológico não apresentaram diferenças entre os grupos estudados bem como os sinais clínicos e comportamentais. Em suma, a cabergolina pode ser empregada como agente indutor do estro na cadela, a fim de diminuir o IIE e facilitar o manejo reprodutivo. / Abstract: The bitch presents certain peculiarities in her estrus cycle that makes the knowing of such differences a sine qua non condition to the ones that want to implement assisted reproduction techniques. The estrus induction is an important tool not only for researches but also for kennels' reproductive managements. Hence this present study has used the cabergoline, which is a dopamine agonist, from 105 to 120 days after the end of the estrus at 5μg/Kg until the bitch presented estrus signs (maximum of 15 days of injection). Both spontaneous and induced estruses were observed from the beginning of proestrus until the end of estrus. Bitches were divided into 2 groups: control (spontaneous) and experimental (induced). Blood samples to check progesterone levels and vaginal smears were taken every 2 days, and clinical signs and behavioral changes were also observed and taken into consideration. All 5 females from the experimental group responded to the cabergoline treatment (42,6 days), but 2 bitches responded earlier than that and both presented estrus signs before the end of the treatment. Not only that but also the interestral interval (IEI) was shorter for the bitches in the experimental group, 159 ± 15,01, if compared to the control group, 169 ± 13,43 days. The progesterone profile and the cytological standard did not present any difference among the studied groups, and so happened to the clinical and behavioral signs. To sum up, cabergoline can be used as a tool to induce estrus in bitches in order to reduce the IEI and facilitate the reproductive management. / Mestre

Orientador: Fernanda da Cruz Landim / Banca: Maria Denise Lopes / Banca: Carlos Eduardo Ambrósio / Resumo: As células tronco mesenquimais (CTMs) estão presentes na maioria dos tecidos adultos, e por isso são atrativas para a terapia celular, pois possuem alto potencial de diferenciação e proliferação, sendo assim, utilizadas na reconstrução tecidual. O presente experimento objetivou obter maior conhecimento sobre CTMs derivadas da membrana amniótica e cordão umbilical de cães, antes e após criopreservação, visando a formação de um banco de células. Assim, oito amostras de membrana amniótica e oito amostras de gelatina de Wharton foram obtidas de cesarianas, as quais foram submetidas a digestão enzimática, e cultivadas em meio basal. Uma porção celular, de cada amostra, foi criopreservada em 1ª passagem, de forma lenta, e armazenada por 4 semanas. As células antes e após a criopreservação foram submetidas à caracterização, onde foi observado características de adesão, proliferação, diferenciação e expressão de marcadores de superfícies utilizando-se citometria de fluxo, e imunocitoquímica. A partir destas avaliações, foi possível demonstrar que as células antes e após a criopreservação exibiram comportamento semelhante, quanto à proliferação e crescimento. A viabilidade celular da membrana amniótica apresentou 97,0% das células viáveis antes da criopreservação e 94,6% após, já a gelatina de Wharton 98,8 antes e 93,5% após a criopreservação. O potencial de diferenciação nas linhagens osteogênica e adipogênica foi mantido, no entanto foi necessário um tempo maior (p<0,05) para que as células de gelatina de Wharton se diferenciassem após a criopreservação. E ainda mantiveram a expressão de CD44, em níveis satisfatórios para que fossem consideradas positivas, onde a membrana amniótica expressou 85,6% antes e 67,8% após a criopreservação e a gelatina de Wharton expressou 86,0% antes e 82,1% após a criopreservação e a ausência de expressão ... / Abstract: Mesenchymal stem cells (MSCs) are present in most of adult tissues, and are therefore attractive for cell therapy. Because of their high potential for differentiation and proliferation, they are being used in tissue reconstruction. This experiment aimed to enrich knowledge of canine MSCs derived from umbilical cord and amniotic membrane before and after cryopreservation regarding the formation of a cell bank. Thus, eight samples of amniotic membrane and eight samples of Wharton's jelly were obtained from dogs at birth, which were subjected to enzymatic digestion and basal medium culture. Slow freezing of a sample from each culture was held at the first passage and stored for four weeks. Before and after freezing cells were subjected to characterization being observed adhesion, proliferation, differentiation and expression of surfaces markers using flow cytometry and immunocytochemistry. Based on these analyses it was demonstrated that the cells before and after cryopreservation exhibited similar behavior for proliferation and cell growth. Cell viability of amniotic membrane showed 97.0% of viable cells before freezing and 94.6% after, and the Wharton's jelly 98.8% before and 93.5% after cryopreservation. The potential of the osteogenic and adipogênica differentiation as well as maintained, however it required a longer time (p <0.05) for the cells from Wharton's jelly to differentiate themselves after freezing. And still maintained the expression of CD44, at satisfactory levels to be considered positive, where the amniotic membrane expressed 85.6% before and 67.8% after freezing and Wharton's Jelly expressed 86.0% before and 82.1% after cryopreservation and absence of expression of CD34 and MHC II. A peculiar feature observed was that before and after freezing spontaneous differentiation in both lineages (osteogenic and adipogenic) occurred in the controls that were not induced to differentiation. We conclude that ... / Mestre

Orientador: Gilson Hélio Toniollo / Coorientador: Fabiana Ferreira de Souza / Banca: Katia Denise Saraiva Bresciani / Banca: Leandro Luís Martins / Banca: Maria Isabel Mello Martins / Banca: Valeska Rodrigues / Resumo: A criação comercial de cães é uma atividade econômica importante no Brasil e tem aumentado, em média, 20% ao ano. Tais empresas têm se preocupado cada vez mais no aprimoramento das raças, modernização e utilização de biotecnologias da reprodução. Contudo, a performance reprodutiva é desconsiderada neste tipo de criação, apesar de perdas expressivas em vista de transtornos reprodutivos, causados por manejo sanitário inadequado, culminando em abortamentos e perdas de neonatos. Em vista disto, objetivou-se com este estudo efetuar um levantamento epidemiológico do Herpesvírus canino tipo 1, Toxoplasma gondii, Neospora caninum, Brucella canis, Leptospira spp e Ehrlichia canis em canis comerciais e correlacionar os achados com a ocorrência de transtornos reprodutivos, idade, sexo e raça. Foram colhidas amostras de sangue de 400 cães adultos com idade média 29,1 ± 8,9 meses, de canis comerciais localizados na microrregião de Ribeirão Preto, SP, para realização de testes sorológicos e moleculares. Os dados sobre manejo sanitário e reprodutivo foram colhidos em forma de entrevistas aplicados ao proprietários dos canis. O estudo foi baseado na ocorrência de Brucella canis (imunocromatografia), Toxoplasma gondii (reação de imunofluorescência indireta), Neospora caninum (imunofluorescência indireta), Leptospira spp (soroaglutinação microscópica), Herpesvírus canino (PCR), Ehrlichia canis e Ehrlichia sp (PCR). A análise estatística empregada consistiu no tratamento descritivo geral dos resultados obtidos, avaliados pelo software Epi Info 7, com a determinação das estimativas de prevalência e cálculo do intervalo de confiança das taxas de doenças na microrregião de Ribeirão Preto. Essa análise investigou o efeito simultâneo de vários fatores (doenças) em uma variável resposta (abortamento e morte neonatal). A população canina estudada foi constituída de 108 machos (27,0%, IC95%: 22,65-31,35) e... / Abstract: The commercial kennel breeding is an important economic activity in Brazil and has increased, in media, on 20% per year. The breeding has given importance to concern in the improvement of breeds, modernization and use of reproductive biotechnologies. Nevertheless, the reproductive performance is overlooked in breeding of dogs, though of significant losses due of reproductive disorders caused by inadequate sanitary management, culminating in abortions and neonatal/pup losses. Thus, the aim of this study was investigated the infectious causes of abortion and neonatal/pup deaths in commercial kennels. Blood samples from 400 dogs with an average age 29.1 ± 8.9 months were collected from kennels located in the microregion of Ribeirão Preto, SP, for serological and molecular. The data regarding to health and reproductive management were collected by a questionnaire. The studied was based on prevalence of Brucella canis (imunochromatography), Toxoplasma gondii (indirect immunofluorescence reaction), Neospora caninum (indirect immunofluorescence), Leptospira ssp (microscopic soroagglutination), canine Herpesvirus (PCR), Ehrlichia canis e Ehrlichia sp (PCR). The statistical analysis was descriptive, and we used the simple and multiple linear regressions to verify the interaction between dependent variables (abortion and neonatal/pup deaths) and percent positive cases. Canine population studied consisted of 108 males (27,0%, IC95%: 22,65-31,35) and 292 females (73,0%; IC95%: 68,65-77,35). The prevalence of diseases studied was B. canis (15,0%; IC95%: 11,50-18,50), T. gondii (17,3%; IC95%: 13,55-20,95), N. caninum (30,50%; IC95%: 26,19-35,18), Leptospira spp (34%; IC95%: 29,53-38,77), Ehrlichia sp (4,5%; IC95%: 2,87-7,00) and E. canis (15,5%; IC95%: 11,95-19,05), There was no positive case of canine herpesvirus. When the variable abortion was avaliable we can got one association with T. gondii (p = 0,004260) and B. canis (p = 0,0000012). When ... / Doutor

Orientador: Maria Denise Lopes / Banca: Fernanda da Cruz Landim e Alvarenga / Banca: Fabiana Ferreira Souza / Banca: Maria Isabel Mello Martins / Banca: Maria Dalva Cesario / Resumo: Este trabalho teve como objetivo investigar a expressão dos receptores hormonais: estrógeno beta (ER-β), estrógeno alpha (ER- α), progesterona (PR), ocitocina (OTR) e também do fator inibidor de leucemia (LIF) e seu receptor (LIFR) e da osteopontina (OPN) em embriões e tecido materno durante diestro gestacional e cíclico, realizar a análise ultra-estrutural de embriões e tecido materno e avaliar o perfil protéico de lavados uterinos e tubáricos de fêmeas gestantes e não gestantes. Foram utilizadas 24 fêmeas separadas em - GRUPO I- subdividido em: Grupo IA - 05 fêmeas submetidas à OSH aos 8 dias de gestação; Grupo IB - 05 cadelas submetidas à OSH aos 12 dias de gestação e Grupo IC - 05 cadelas submetidas à OSH 21 dias de gestação e Grupo ID- 4 cadelas submetidas a cesariana 60 dias de gestação. O GRUPO II- 05 cadelas, não inseminadas, que foram submetidas a OSH, 12 dias após a onda pré-ovulatória de LH. Para a expressão gênica foi usada a técnica de qRT- PCR, em tecido materno e em embriões dos Grupos I e II. Para a caracterização eletroforética das proteínas do lavado uterino e tubárico foi utilizada a técnica de eletroforese unidimensional. Na avaliação ultraestrutural dos embriões e tecido materno foi realizada a técnica de microscopia eletrônica de transmissão. Os genes ER-, PR, LIF-R foram expressos somente em blastocistos; não houve expressão de ER-, OPN e LIF e o gene OTR esteve presente tanto em mórulas quanto em blastocistos caninos. Os genes ER- α, ER- β, PR, OTR, LIFR, OPN e LIF foram expressos em tubas e útero de cadelas gestantes e não gestantes, sendo que somente o LIF-R foi mais expresso em útero e tuba de cadelas não gestantes. Somente a expressão do gene ER- β foi significativamente superior em tubas de... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: We aimed to investigate the gene expression of leukemia inhibitory factor (LIF) and it receptor (LIFR), osteopontin (OPN) and hormonal receptors: estrogen beta (ER-β), estrogen alpha (ER-β), progesterone (PR) and oxytocin (OTR) in bicthes embryos and maternal tissue during cyclic and gestational diestrus. We also aimed to performed the ultrastructural analysis of bitches embryos and maternal tissue and evaluate the protein profile of uterine and oviducts washes in pregnant and non pregnant bitches. Twenty-for bitches were placed in: GROUP I subdivided in: Group IA - 05 females submitted to OVH at day 8 of pregnancy; GROUP IB - 05 females submitted to OVH at day 12 of pregnancy; GROUP IC - 05 females submitted to OVH at day 21 of pregnancy and GROUP ID - 05 females submitted to OVH at day 60 of pregnancy. And GROUP II - 05 females, not inseminated submitted to OVH 12 after the LH surge. For gene expression the qRT-PCR was used in embryos and maternal tissue at group I and II. For electrophoretic characterization of protein flushes from uterus and oviduct the unidimensional electrophoresis was used. The transmission electron microscopy technique was performed for the ultrastructural evaluation of embryos and maternal tissue. The ER-, PR, LIF-R genes were expressed only in blastocysts; there were no ER-, OPN e LIF expression and the OTR gene was present in both morula and blastocysts. The ER- α, ER- β, PR, OTR, LIFR, OPN and LIF genes were expressed in oviduct and uterus of pregnant and non pregnant bitches, however the LIF-R was more expressed in non pregnant females. Only the ER- β was more expressed in the oviduct of non pregnant femaleshas opposite to the OPN expression. Ultrastructural changes were observed during the embryo development. The uterine enviroment modified... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Maria Denise Lopes / Banca: Fernanda da Cruz Landim / Banca: Fabiana Ferreira de Souza / Banca: Marcelo Rezende Luz / Banca: Maricy Apparício Ferreira / Resumo: Objetivou-se com este estudo comparar os efeitos da congelação lenta vs vitrificação sobre a viabilidade, ultraestrutura e expressão gênica de blastocistos caninos produzidos in vivo. A coleta dos embriões foi realizada por lavagem uterina 12 dias após a primeira IA. A congelação lenta foi realizada em máquina programável e a vitrificação pela técnica do cryotop. O cultivo in vitro (CIV) foi realizado por 24 horas, em meio SOFaa acrescido de 20% de soro fetal bovino. A reexpansão embrionária foi avaliada 24 horas após a CIV e a viabilidade embrionária avaliada com o uso das sondas Hoscht 33342 e Iodeto de propídeo. A extração e amplificação do RNA foram realizadas segundo recomendações do fabricante. Foram utilizados 70 blastocistos separados nos grupos Co, Co24, Cg, Cg24, Vi e Vi24. No experimento I foram utilizados 34 embriões. Não foi evidenciada reexpansão da blastocele após 24 horas de CIV nos grupos Cg24 e Vi24, já no grupo Co24, 100% dos embriões reexpandiram. Não foi verificada diferença na intensidade da fluorescência do Hoescht entre os grupos Co, Cg e Vi, em ambos os momentos de avaliação, 0 e 24 horas. Quando comparada a intensidade do iodeto de propídeo (IP) foi observada diferença significativa entre o grupo Co em relação aos grupos Cg e Vi, independente da metodologia de criopreservação. Observou-se uma redução na quantidade de gotas lipídicas após 24 horas de CIV comparando-se os grupos Co e Co24. No grupo Vi foram observadas mitocôndrias alongadas, integridade da membrana dos blastômeros e nuclear, reticulo endoplasmático liso, vesículas de digestão, microvilosidades, junções do tipo tight e desmossomas. No Experimento II, foram utilizados 36 embriões para a avaliação da expressão gênica. Todos os genes estudados, com excessão do LIF, foram expressos. Entretanto, não houve diferença na expressão dos genes BAX, Bcl2, AQP3, Na+/K+-ATPases α1, Na+/K+-ATPases β1 e ... / Abstract: The purpose of this study was to compare the effects of slow freezing versus vitrification in canine embryo produced in vitro: viability, ultra structure and gene expression. Embryos collection was performed using uterus flush technique 12 days after the first AI. For slow freezing protocol we used a programmed machine and vitrification was performed using cryotop. In vitro culture (IVC) was conducted for 24 hours using SOFaa added with 20% of fetal bovine serum. Embryo expansion was evaluated 24 hours after in vitro culture (IVC) and embryo viability was evaluated using Hoscht 33342 and iodine propidium (PI). Extraction and amplification of the RNA was performed according to manufacturer recommendations. We used 70 blastocysts divided in groups: Co, Co24, Cg24, Vi and Vi24. In experiment I 34 embryos were used. No blastocoele expansion was observed after 24 hr of IVC in groups Cg24 and Vi24, however 100% of embryos expanded in Co24. No difference was observed in Hoescht staining intensity between Co, Cg and Vi groups, which were observed at the 0 and 24 hr periods. The iodine propidium (PI) intensity in Co was different when compared to Cg and Vi, independent of the cryopreservation method used. A reduction in the quantity of lipid drops was observed after 24 hr of IVC when comparing groups Co and Co24. In group Vi, elongated mitochondria, membrane and nuclear integrity of blastomere, smooth endoplasmic reticulum, vesicle digestion, microvilli, tight junctions and types of desmosomes were observed. In experiment II, 36 dog embryos were used for gene expression evaluation. All studied genes, except LIF were expressed. However no difference between gene expression of BAX, Bcl2, AQP3, Na+/K+-ATPases α1, Na+/K+-ATPases β1 and LIFr were observed at 0 and 24h in all groups. We concluded that the vitrification technique was the best method to cryopreserve canine embryo when we observe ultrastructure. However, it was not possible ... / Doutor

Orientador: Raul José Silva Gírio / Banca: Vicente Borelli / Banca: Silvio Arruda Vasconcellos / Banca: Luís Antônio Mathias / Banca: Samir Issa Samara / Resumo: O trabalho presente objetivou pesquisar a presença de Leptospira interrogans sorovar Canicola em 32 cães, dos quais 20 infectados e 12 controle, em 4 grupos de estudo com 5 infectados e 3 de controle. No G1 os animais foram eutanasiados 7 dias após a inoculação, no G2, 15 dias, no G3, 30 dias e no G4 45 dias. Colheu-se sêmen, urina e sangue nos dias 0, 3, 5, 7, 10 e após, a cada 5 dias, com realização de exames andrológicos do sêmen e bioquímicos da urina e do sangue, e reação em cadeia da polimerase (PCR) dessas amostras. Avaliou-se o estado clínico, e o soro sangüíneo foi submetido à soro-aglutinação microscópica (SAM). Os títulos sorológicos dos infectados chegaram a 2.560. Na PCR, detectou-se DNA de leptospiras primeiro no sêmen e depois na urina, e não se detectou nos testículos, epidídimos, próstata, rins e fígado. Na Levaditi, foi encontrada leptospira em um fígado, e no histopatológico, 5 animais com prostatite, evidenciada também pelo aumento do número de espermatozóides com a patologia cabeça isolada. O exame andrológico mostrou declínio na motilidade, no vigor, na concentração espermática e defeitos maiores acima de 10%. No hemograma, observou-se alterações a partir do dia 3 pós-infecção, e ao exame bioquímico a partir do dia 30, indicando possíveis alterações hepáticas e renais. Conclui-se que cães infectados com Leptospira interrogans sorovar Canicola apresentam queda na qualidade espermática, sendo importantes fontes de infecção para o homem e animais, podendo inclusive transmitir a leptospirose por meio de sêmen nos primeiros dias pós-infecção, antes da transmissão urinária, sendo detectada pela PCR anteriormente a SAM. / Abstract: The present study aimed to investigate the presence of Leptospira interrogans serovar Canicola. in 32 dogs, of which 20 are infected and 12 control, 4 study groups with 5 infected and 3 of control. In G1 animals were euthanasing 7 days after inoculation, the G2, 15 days, the G3, 30 days in the G4 and 45 days. It is collected semen, urine and blood on days 0, 3, 5, 7, 10 and after, every 5 days, with laboratory tests of semen andrological and biochemical of urine and blood, and polymerase chain reaction (PCR ) Of these samples. Evaluated the clinical status, and serum was submitted to serum-microscopic agglutination (SAM). The serological evidence of infection arrived in 2560. In PCR, DNA was found in semen of leptospires first and then in the urine, and is not detected in testis, epididymis, prostate, kidney and liver. In Levaditi, was found leptospira in a liver, and the histopathology, 5 animals with prostatitis, evidenced also by increasing the number of sperm with the pathology head alone. The examination showed andrologic decline in motility, in effect, defects in sperm concentration and higher above 10%. In the blood, it was observed changes from day 3 post-infection, and the biochemical examination on the day 30, indicating possible kidney and liver abnormalities. It follows that dogs infected with Leptospira interrogans serovar Canicola present decrease in sperm quality, and important sources of infection for humans and animals, which may include forward to leptospirosis through semen during the first day post-infection, before urinary transmission, and PCR detected earlier by the SAM. / Doutor

Orientador: Maria Jaqueline Mamprim / Banca: Maria Denise Lopes / Banca: Franklin de Almeida Sterman / Resumo: A ultra-sonografia é um método de grande utilidade na Medicina Veterinária, apresentando grande valia no diagnóstico gestacional em cadelas, por ser um método precoce, acompanhar o desenvolvimento e a viabilidade embrionária e fetal. Entretanto possui algumas limitações para estimar a idade fetal, quando comparada com a Medicina Humana, principalmente devido a grande variação do porte nos cães. Foi realizado acompanhamento ultra-sonográfico em 27 cadelas prenhes de diferentes raças distribuídas em grupos segundo o peso corpóreo, com o objetivo de estudar a utilização do exame ultra-sonográfico como método de diagnóstico e acompanhamento gestacional, avaliando o desenvolvimento embrionário e fetal (organogênese), além de comparar os métodos de avaliação da idade gestacional e dias anteriores ao parto propostos por diversos autores, sendo utilizados para os cálculos as mensurações da vesícula embrionária, crânio, corpo e coração em três diferentes fases gestacionais, visando auxiliar o médico veterinário na escolha dos cálculos mais indicados para cada fase gestacional nos diferentes grupos de cadelas. / Abstract: Ultrasonography is a useful technique in veterinary medicine, showing high value in gestational diagnosis in bitches, because its use for early pregnancy detection as well as easiness to follow embrionary and fetal viability and development. However, as compared with human medicine, veterinary ultrasound technique has some limitations in estimating fetal age mainly because the high variation in size of dogs. Ultrasound accompaniments of 27 pregnant, all age and breed bitches separated in groups, were performed, with the objective of studying the ultrasound as a technique for gestational diagnosis and further observation, evaluating both embrionary and fetal development (organogenesis), and comparing previous evaluation techniques of gestational age on days before parturition proposed by different author. Mensurations of embryonic vesicles, skull, body size and heart at three different gestational stages were achieved, to help practitioners in choosing the most accurate estimation method at each gestational stage in different groups of bitches. / Mestre