Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:55Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-06-01Bitstream added on 2014-06-13T19:01:01Z : No. of bitstreams: 1 zieri_r_dr_sjrp.pdf: 889017 bytes, checksum: 170c2d62d9c91d29ca0d8ba71a162b3b (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Os vertebrados ectotérmicos apresentam um desenvolvido sistema de células com pigmentos melânicos em seu citoplasma, localizado em diversos órgãos e membranas. A dispersão dos grãos de melanina dentro dos melanócitos responde fortemente à exposição ao hormônio estimulante de melanócitos (MSH) e aos hormônios sexuais, promovendo alteração na coloração. Este trabalho buscou avaliar o efeito dos esteróides cipinato de testosterona, 17 β-estradiol e do MSH sobre a pigmentação hepática e testicular de Eupemphix nattereri, mediante análise histológica, e ultra-estrutural. Foram coletados 60 machos adultos na região de São José do Rio Preto, SP. Para cada experimento, dez machos adultos receberam doses subcutâneas contendo 0,5 mg/kg de cipionato de testosterona e 0,5 mg/kg de 17 β-estradiol, dissolvidos em óleo vegetal e, 2,5x10-7 mmol/10g de α-MSH dissolvido em PBS, durante 7 dias, a cada 48h. O grupo controle recebeu apenas óleo vegetal ou PBS. Grupos com cinco animais foram eutanasiados 24h após do término do tratamento, e outros cinco, após 15 dias. Foram realizados estudos morfológicos utilizando microscopia de luz e microscopia eletrônica de transmissão. No tecido hepático foram encontradas células de Kupffer. No interstício testicular observou-se melanócitos, com inúmeros melanossomos. Para o grupo tratado com cipionato de testosterona, foi observado um aumento de aproximadamente 2x na área ocupada pelas células pigmentadas no fígado e 4x nos testículos mediante analise a curto prazo. Para o mesmo tratamento, foi observado aumento de 1,8x no fígado dos animais eutanasiados após 15 dias. Tal resposta pode ser decorrente do aumento da atividade melanossintética, do aumento do número de células, ou ambos. Os animais tratados com 17 β-estradiol e α- MSH não apresentaram alterações na pigmentação hepática e testicular mediante... / Ectothermic vertebrates have a well-developed system of melanin-containing cells, which are distributed throughout several organs and tissues. The dispersion of melanin-containing granules within melanocytes responds to prolonged exposure to high concentration of MSH and sexual hormones inducing color change. The present study aimed to characterize morphological and stereological patterns of pigmented cells in liver and testis of the Eupemphix nattereri under effect of testosterone cypionate, 17 β-estradiol and α-MSH. Sixty adult males were collected in São José do Rio Preto, São Paulo State, Brazil. For each experiment, ten adult males were treated with the following hormones injected in the dorsal lymph sac during seven days: (1) 5 mg/kg dose of testosterone cypionate or (2) 5 mg/kg dose of 17 β-estradiol (dissolved in vegetal oil) or (3) 2,5x10-7 mmol/10g of α-MSH (dissolved in PBS). The control group received only vegetal oil or PBS solution at the same hormonal concentration. Groups of five animals were euthanatized after 24h and the other five, after 15 days. Morphological studies with light and transmission electron microscopy were carried out in the groups. In the hepatic tissue were found Kupffer cells, which are characterized by multivesicle bodies in the cytoplasm and large amount of melanosomes. In the testis, melanocytes-like cells are present in the interstitium. They presented large and irregular aspect and a great amount of intensely pigmented cytoplasm. For the groups treated with testosterone cypionate an increase of approximately 2x in the occupied area by the pigmented cells in the liver and 4x in the testis was observed in the treatment group against the control. The observed response can be due to increase of melanosynthesis Introdução 3 Zieri et al., 2010 activity, increase in the number of pigmented cells, or both. Moreover, for the same treatment... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:22:56Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-04-23Bitstream added on 2014-06-13T18:50:01Z : No. of bitstreams: 1 francobelussi_l_me_sjrp.pdf: 2526687 bytes, checksum: f8848ac8327a2c55f2bd6e149e411197 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Os anfíbios compartilham com os demais vertebrados ectotérmicos a existência de um sistema pigmentar extracutâneo, constituído por células com o citoplasma repleto de melanina, em vários tecidos e órgãos. O papel funcional dessas células ainda não está definido, havendo várias hipóteses, dentre elas o papel na defesa contra patógenos. O objetivo do trabalho foi observar a resposta das células pigmentares viscerais presentes no fígado e testículos dos anuros frente ao processo inflamatório induzido experimentalmente por lipopolissacarídeo (LPS) de Escherichia coli. Para isso, foram realizadas análises morfológicas, estereológicas e histoquímicas; com o intuito de observar as respostas celulares envolvendo mudanças na forma e substâncias presentes desse tipo celular no fígado e testículos, além da descrição anatômica do sistema pigmentar extracutâneo desses animais após infecção. Foram utilizados 30 exemplares da espécie Eupemphix nattereri, os animais foram inoculados, com dose única de LPS de E. coli, sendo analisados 2 e 24 horas após a inoculação. Após esse período, os animais foram eutanasiados, a pigmentação visceral foi descrita, em 12 regiões pré-estabelecidas; sendo o fígado e testículos posteriormente retirados e submetidos ao processamento histológico para realização das análises. A pigmentação presente no fígado aumentou no grupo tratado após 24 horas, enquanto que nos testículos é observado aumento após 2 horas. As substâncias hemosiderina e lipofuscina não são verificadas nas gônadas, estando presentes apenas no fígado. Quanto à hemosiderina, não há variação significativa entre os tratamentos. Já a lipofuscina apresenta um aumento significativo nos animais tratados após 24 horas, estando ainda correlacionada positivamente com a quantidade... / Ectothermic vertebrates have a well-developed system of melanin-containing cells present on several organs (liver, spleen, lung, heart, thymus, and gonads) and tissues (meninges and connective tissues surrounding blood vessels), constituting an extracutaneous pigmentary system. The functional role of these pigmented cells in the visceral organs are not known, however there are several hypotheses, including a bactericide function. Our aim was to characterize the response of visceral pigmented cells in the liver of the anuran Eupemphix nattereri inoculated with lipopolysaccharide (LPS) of Escherichia coli. Morphological, estereological and histochemicals analyses were carried out in order to describe the cellular responses involving changes in the form and amount of pigmentary substances that occur in this cellular type in the liver and testes. We inoculated twenty animals with one dose of LPS of E. coli, and analyzed 2 and 24 hours after the inoculation for observation of pigmented cells. After this period, the animals were euthanized and the liver and the testes were submitted to the histological processing. The pigmentation increased in the liver of the treatment group after 24 hours, whereas the pigmentation on testes increased after 2 hours of inoculation. In the liver, haemosiderin and lipofuscin are located within melanomacrophages, along with melanin. Haemosiderin showed no variation between the treatments, but lipofuscin increased in the treatment group after 24 hours. The amount of haemosiderin was not correlated neither with melanin nor lipofuscina, but melanin and lipofuscin were significantly correlated in the animals analyzed 24 hours after LPS inoculation. Haemosiderin and lipofuscin were not observed on testes. Although the liver and testes in E. nattereri presented pigmented... (Complete abstract click electronic access below)

A coloração dos vertebrados deve-se a presença de pigmentos, sintetizados e/ou armazenados em células denominadas células pigmentares cutâneas. A mudança de cor nos vertebrados é principalmente regulada por α-MSH e uma família de enzimas melanossômicas, que incluem tirosinase e as proteínas relacionadas à tirosinase 1 e 2 (TRP-1 e TRP-2, respectivamente). Sua ação está ligada à dispersão dos melanossomos ou síntese de melanina, processos que resultam em escurecimento do animal, enquanto a agregação ou inibição de síntese leva ao seu empalidecimento. Opsinas, como a melanopsina e a rodopsina, além de presentes na retina, podem ser expressas em células pigmentares cutâneas, intermediando foto-respostas de proliferação e de dispersão de melanossomos. O objetivo deste trabalho foi investigar a expressão temporal da rodopsina, tirosinase e do receptor MC1R, bem como os efeitos do tratamento com α-MSH 10-7 M, 10-8 M e 10-9 M por 24 horas sobre esses parâmetros, em melanócitos B16 de Mus musculus, mantidos em escuro constante. Através de PCR em tempo real (quantitativo) demonstrou-se que α-MSH 10-7 M não modula os níveis de mRNA para o receptor MC1R quando comparado com o grupo controle, contudo há uma evidente tendência de redução dos níveis do transcrito. Todavia, na concentração de 10-8 M, observou-se um aumento estatisticamente significativo no nível do transcrito na hora 20 quando comparado ao grupo controle e na concentração de 10-9 M o tratamento mostrou uma diminuição estatisticamente significativa no nível do transcrito entre o grupo controle e o tratado para cada ponto temporal analisado. Para a rodopsina, foi demonstrado que &alpha-MSH 10-7 M modula os níveis do mRNA quando comparado ao grupo controle, mostrando uma diminuição estatisticamente significativa na hora 0 e 16. Na concentração de 10-8 M houve um aumento estatisticamente significativo nos níveis do transcrito na hora 4 quando comparado ao grupo controle. Já, na concentração de 10-9 M, o hormônio induziu um robusto aumento no nível do transcrito quando comparado ao grupo controle para cada ponto temporal analisado. Nossos resultados são pioneiros em demonstrar a modulação de rodopsina por α-MSH, pois não há dados na literatura, seja em retina ou em outros tecidos, que tenham investigado essa ação do hormônio melanotrópico. O mesmo padrão foi observado para a tirosinase, demonstrando uma diminuição estatisticamente significativa na concentração de 10-7 M na hora 0 e um aumento significativo na concentração de 10-8 M na hora 8 e na concentração de 10-9 M na hora 12 e 8. Através de PCR em tempo real (quantitavo) nós demonstramos que α-MSH apresenta uma modulação dose-dependente para o transcrito do mRNA do receptor MC1R, tirosinase e rodopsina, mas não sincronizou a expressão desses genes, que permaneceram arrítmicos / In vertebrates, skin color is given by pigments, synthesized and/or stored in cutaneous pigment cells. The vertebrate color change is mainly regulated by α-MSH and a family of melanosome enzymes, which includes tyrosinase and tyrosinaserelated proteins 1 and 2 (TRP-1 and TRP-2, respectively). α-MSH action is associated with melanosome dispersion or melanin synthesis, processes which lead to skin darkening, whereas melanin aggregation or synthesis inhibition results in skin lightening. Opsins, such as melanopsin and rhodopsin, may be expressed in skin pigment cells, besides being present in the retina, and mediate non visual photoresponses such as cell proliferation and melanosome dispersion. The aim of this study was to investigate the temporal expression of rhodopsin, tyrosinase and the receptor MC1R, as well as the effects of 10-7 M, 10-8 M and 10-9 M α-MSH for 24 hours in Mus musculus B16 melanocytes, kept in constant darkness. Using real time PCR (quantitative) we demonstrated that 10-7 M α-MSH does not modulate MC1R mRNA levels, as compared to the control group, although a tendency to reduction was evident. On the other hand, at the concentration of 10-8 M, we observed a statistically significant increase of the transcript level at the hour 20, as compared to the control group and at the concentration of 10-9 M the treatment showed a statistically significant decrease of the transcript level for each temporal point analyzed. For rhodopsin, we showed that 10-7 M α-MSH modulates mRNA levels, as compared to the control group, demonstrating a statistically significant decrease at the hour 0 and 16. At the concentration of 10-8 M there was a statistically significant increase of transcript levels at the hour 4, as compared to the control group. The hormone at 10-9 M induced a robust increase of the transcript levels, as compared to the control group, for each time point analyzed. Our results are pioneering in demonstrating the regulation of rhodopsin by α-MSH, since there are no data in the literature which report the action of melanotropic hormone on rhodopsin in either the retina or other tissues. Similar pattern was observed for the tyrosinase gene, demonstrating a statistically significant decrease in the concentration of 10-7 M at the hour 0 and a significant increase in the concentration of 10-8 M at the hour 8 and in the concentration of the 10-9 M at the hour 12 and 8. Using real time PCR (quantitative) we demonstrated that α-MSH shows a dose-dependent modulation for mRNA transcripts of the MC1R receptor, tyrosinase and rhodopsin, but the hormone was not able to synchronize the expression of these genes, which remained arhythmic

A coloração dos vertebrados deve-se a presença de pigmentos, sintetizados e/ou armazenados em células denominadas células pigmentares cutâneas. A mudança de cor nos vertebrados é principalmente regulada por α-MSH e uma família de enzimas melanossômicas, que incluem tirosinase e as proteínas relacionadas à tirosinase 1 e 2 (TRP-1 e TRP-2, respectivamente). Sua ação está ligada à dispersão dos melanossomos ou síntese de melanina, processos que resultam em escurecimento do animal, enquanto a agregação ou inibição de síntese leva ao seu empalidecimento. Opsinas, como a melanopsina e a rodopsina, além de presentes na retina, podem ser expressas em células pigmentares cutâneas, intermediando foto-respostas de proliferação e de dispersão de melanossomos. O objetivo deste trabalho foi investigar a expressão temporal da rodopsina, tirosinase e do receptor MC1R, bem como os efeitos do tratamento com α-MSH 10-7 M, 10-8 M e 10-9 M por 24 horas sobre esses parâmetros, em melanócitos B16 de Mus musculus, mantidos em escuro constante. Através de PCR em tempo real (quantitativo) demonstrou-se que α-MSH 10-7 M não modula os níveis de mRNA para o receptor MC1R quando comparado com o grupo controle, contudo há uma evidente tendência de redução dos níveis do transcrito. Todavia, na concentração de 10-8 M, observou-se um aumento estatisticamente significativo no nível do transcrito na hora 20 quando comparado ao grupo controle e na concentração de 10-9 M o tratamento mostrou uma diminuição estatisticamente significativa no nível do transcrito entre o grupo controle e o tratado para cada ponto temporal analisado. Para a rodopsina, foi demonstrado que &alpha-MSH 10-7 M modula os níveis do mRNA quando comparado ao grupo controle, mostrando uma diminuição estatisticamente significativa na hora 0 e 16. Na concentração de 10-8 M houve um aumento estatisticamente significativo nos níveis do transcrito na hora 4 quando comparado ao grupo controle. Já, na concentração de 10-9 M, o hormônio induziu um robusto aumento no nível do transcrito quando comparado ao grupo controle para cada ponto temporal analisado. Nossos resultados são pioneiros em demonstrar a modulação de rodopsina por α-MSH, pois não há dados na literatura, seja em retina ou em outros tecidos, que tenham investigado essa ação do hormônio melanotrópico. O mesmo padrão foi observado para a tirosinase, demonstrando uma diminuição estatisticamente significativa na concentração de 10-7 M na hora 0 e um aumento significativo na concentração de 10-8 M na hora 8 e na concentração de 10-9 M na hora 12 e 8. Através de PCR em tempo real (quantitavo) nós demonstramos que α-MSH apresenta uma modulação dose-dependente para o transcrito do mRNA do receptor MC1R, tirosinase e rodopsina, mas não sincronizou a expressão desses genes, que permaneceram arrítmicos / In vertebrates, skin color is given by pigments, synthesized and/or stored in cutaneous pigment cells. The vertebrate color change is mainly regulated by α-MSH and a family of melanosome enzymes, which includes tyrosinase and tyrosinaserelated proteins 1 and 2 (TRP-1 and TRP-2, respectively). α-MSH action is associated with melanosome dispersion or melanin synthesis, processes which lead to skin darkening, whereas melanin aggregation or synthesis inhibition results in skin lightening. Opsins, such as melanopsin and rhodopsin, may be expressed in skin pigment cells, besides being present in the retina, and mediate non visual photoresponses such as cell proliferation and melanosome dispersion. The aim of this study was to investigate the temporal expression of rhodopsin, tyrosinase and the receptor MC1R, as well as the effects of 10-7 M, 10-8 M and 10-9 M α-MSH for 24 hours in Mus musculus B16 melanocytes, kept in constant darkness. Using real time PCR (quantitative) we demonstrated that 10-7 M α-MSH does not modulate MC1R mRNA levels, as compared to the control group, although a tendency to reduction was evident. On the other hand, at the concentration of 10-8 M, we observed a statistically significant increase of the transcript level at the hour 20, as compared to the control group and at the concentration of 10-9 M the treatment showed a statistically significant decrease of the transcript level for each temporal point analyzed. For rhodopsin, we showed that 10-7 M α-MSH modulates mRNA levels, as compared to the control group, demonstrating a statistically significant decrease at the hour 0 and 16. At the concentration of 10-8 M there was a statistically significant increase of transcript levels at the hour 4, as compared to the control group. The hormone at 10-9 M induced a robust increase of the transcript levels, as compared to the control group, for each time point analyzed. Our results are pioneering in demonstrating the regulation of rhodopsin by α-MSH, since there are no data in the literature which report the action of melanotropic hormone on rhodopsin in either the retina or other tissues. Similar pattern was observed for the tyrosinase gene, demonstrating a statistically significant decrease in the concentration of 10-7 M at the hour 0 and a significant increase in the concentration of 10-8 M at the hour 8 and in the concentration of the 10-9 M at the hour 12 and 8. Using real time PCR (quantitative) we demonstrated that α-MSH shows a dose-dependent modulation for mRNA transcripts of the MC1R receptor, tyrosinase and rhodopsin, but the hormone was not able to synchronize the expression of these genes, which remained arhythmic

Os ambientes cavernícolas podem ser vistos como um experimento natural de exclusão de alguns fatores ecológicos, dentre os quais o mais importante e a ausência do fotoperíodo. A perda ou redução dos olhos e da pigmentação cutânea melânica em relação aos indivíduos viventes na superfície são os exemplos mais comuns das alterações sofridas pelas espécies exclusivamente subterrâneas. Alterações nas características relacionadas ao sistema ocular sempre receberam grande atenção por parte dos pesquisadores. Por outro lado, as publicações sobre a pigmentação nesses organismos são relativamente incomuns, com uma abrangência taxonômica bastante reduzida. Nossos experimentos foram realizados com três espécies pertencentes ao mesmo gênero: Pimelodella kronei e P. spelaea, viventes em ambientes de caverna e P. transitória, de superfície. Visamos comparar se existe um padrão que correlacione o grau de redução da pigmentação, medida pelas características macroscópicas, com as características das células pigmentares. Dentro do esperado, P. spelaea e Pimelodella kronei apresentaram menor tamanho e menor densidade de melanóforos do que seu congênere epígeo, P. transitória. Nossos resultados não apontaram para uma correlação positiva entre o grau de troglomorfismo, medido pelas características macroscópicas, e a resposta fisiológica observada nos exemplares cavernícolas. A variabilidade observada nos estados da pigmentação em peixes troglomórficos brasileiros e compatível com hipóteses envolvendo pressões seletivas neutras, corroborando, portanto, o modelo neutralista. / The cave environments can be seen as a natural experiment of exclusion of certain ecological factors, among which the most important is the absence of photoperiod. The loss or reduction of eyes and skin melanin pigmentation in relation to individuals living on the surface are the most common examples of the changes undergone by the species exclusively subterraneous. Changes in characteristics related to the ocular system have always received great attention from researchers. However, publications on the pigmentation in these organisms are relatively uncommon, with a very small taxonomic range. Our experiments were conducted with three species of the same genre: Pimelodella kronei and P. spelaea, living in cave environments, and P.transitoria, living in surface. We aim to compare if there is a pattern that correlates the degree of reduction of the pigment with the characteristics of pigment cells. As expected, P. spelaea and Pimelodella kronei showed smaller size and lower density of melanophores than its counterpart epigeal, P. transitória. Our results did not suggest a positive correlation between the degree of troglomorfism measured by macroscopic characteristics, and physiological response observed in cave specimens. The variability observed in the states of pigmentation in Brazilian troglomorfic fish is compatible with neutral hypotheses involving selective pressures, supporting therefore the neutralist model.

Os ambientes cavernícolas podem ser vistos como um experimento natural de exclusão de alguns fatores ecológicos, dentre os quais o mais importante e a ausência do fotoperíodo. A perda ou redução dos olhos e da pigmentação cutânea melânica em relação aos indivíduos viventes na superfície são os exemplos mais comuns das alterações sofridas pelas espécies exclusivamente subterrâneas. Alterações nas características relacionadas ao sistema ocular sempre receberam grande atenção por parte dos pesquisadores. Por outro lado, as publicações sobre a pigmentação nesses organismos são relativamente incomuns, com uma abrangência taxonômica bastante reduzida. Nossos experimentos foram realizados com três espécies pertencentes ao mesmo gênero: Pimelodella kronei e P. spelaea, viventes em ambientes de caverna e P. transitória, de superfície. Visamos comparar se existe um padrão que correlacione o grau de redução da pigmentação, medida pelas características macroscópicas, com as características das células pigmentares. Dentro do esperado, P. spelaea e Pimelodella kronei apresentaram menor tamanho e menor densidade de melanóforos do que seu congênere epígeo, P. transitória. Nossos resultados não apontaram para uma correlação positiva entre o grau de troglomorfismo, medido pelas características macroscópicas, e a resposta fisiológica observada nos exemplares cavernícolas. A variabilidade observada nos estados da pigmentação em peixes troglomórficos brasileiros e compatível com hipóteses envolvendo pressões seletivas neutras, corroborando, portanto, o modelo neutralista. / The cave environments can be seen as a natural experiment of exclusion of certain ecological factors, among which the most important is the absence of photoperiod. The loss or reduction of eyes and skin melanin pigmentation in relation to individuals living on the surface are the most common examples of the changes undergone by the species exclusively subterraneous. Changes in characteristics related to the ocular system have always received great attention from researchers. However, publications on the pigmentation in these organisms are relatively uncommon, with a very small taxonomic range. Our experiments were conducted with three species of the same genre: Pimelodella kronei and P. spelaea, living in cave environments, and P.transitoria, living in surface. We aim to compare if there is a pattern that correlates the degree of reduction of the pigment with the characteristics of pigment cells. As expected, P. spelaea and Pimelodella kronei showed smaller size and lower density of melanophores than its counterpart epigeal, P. transitória. Our results did not suggest a positive correlation between the degree of troglomorfism measured by macroscopic characteristics, and physiological response observed in cave specimens. The variability observed in the states of pigmentation in Brazilian troglomorfic fish is compatible with neutral hypotheses involving selective pressures, supporting therefore the neutralist model.