A contagem de células somáticas (CCS) é o padrão ouro de avaliação da integridade da glândula mamária e da qualidade do leite. A haptoglobina (Hp) é uma das principais proteínas de fase aguda que se eleva em processos inflamatórios, infecciosos e de estresse em ruminantes. Este estudo avaliou a relação entre os níveis séricos de Hp e a CCS, através de coletas de amostras de leite e sangue de vacas leiteiras de rebanhos do Noroeste do estado do Rio Grande do Sul. As amostras foram obtidas, entre fevereiro e outubro de 2008 de 150 animais da raça Holandesa, sem distinção de idade e número de lactação, divididos em três grupos de 50 animais separados conforme o valor da CCS. O grupo 1 (G1) incluiu vacas com CCS abaixo de 600.000 cel/mL; o grupo 2 (G2), vacas com CCS superior a 600.000 cel/mL e, o grupo 3 (G3), vacas que apresentavam sinais clínicos de mastite. Para cada amostra de leite, foi determinada a CCS, a contagem bacteriana total (CBT) e os níveis de proteína, gordura, lactose e sólidos totais. Coletouse 5 mL de sangue através de punção da veia coccígea para avaliar contagem total e diferencial de leucócitos, fibrinogênio, hematócrito, proteínas plasmáticas totais e haptoglobina. A análise estatística demonstrou diferença significativa entre os três grupos quanto à CCS, CBT e lactose. A proteína apresentou diferença significativa entre G1 para G2 e G3. Nos sólidos totais, G1 e G2 apresentaram diferença significativa para G3. A gordura não apresentou diferença significativa entre os grupos. Análises não paramétricas demonstraram forte correlação positiva entre CCS e CBT (r=0,852, P<0,005). Quanto às análises hematológicas, o leucograma e as proteínas plasmáticas totais não apresentaram diferença significativa entre os grupos. Fibrinogênio e hematócrito se diferenciaram estatisticamente nos grupos 1 e 3. Na análise do diferencial, os monócitos do G1 e G3 apresentaram diferença estatística para G2. Além disso, o fibrinogênio apresentou correlação leve, mas significativa (r= 0,270, P<0,001), em relação ao valor de CCS. Análises não paramétricas apresentaram correlação média entre CCS e concentração de Hp (r= 0,357, P<0,001), demonstrando associação entre as variáveis. Quanto à concentração de Hp, houve diferença significativa do G1 (0,41 g/L) e G2 (0,41 g/L) para G3 (0,70 g/L), ou seja, se comprovou a elevação dos níveis séricos de Hp em vacas com processo inflamatório instalado; entretanto, a Hp não se mostrou sensível para detecção de mastite subclínica. Sugere-se que estudos adicionais possam elucidar tais associações. / Somatic cell count (SCC) is the gold standard of both the mammalian gland and milk quality evaluation. The haptoglobin (Hp) is one of the main acute phase proteins, which increase in inflammation, infectious and stress processes of ruminants. This work evaluated the relation between Hp serum level and SCC, through the analysis of milk and blood samples from dairy cows from herds in the northwest Rio Grande do Sul state. Samples were obtainned, between February and October 2008, from 150 Holstein cows, without age or milking number discrimination and that were separate in three different groups with 50 animals each, according SCC value. Group 1 (G1) included cows with SCC below 600.000 cells/mL; group 2 (G2), cows with SCC above 600.000 cells/mL and group 3 (G3), cows with signs of clinical mastitis. For each milk sample, it was determined SCC, total bacteria count (TBC), and the protein, fat, lactose, and total solid contents. A 5 mL blood sample was collected by puncturing coccigeal vein to evaluate total and differential leucocytes counts, fibrinogen, hematocrit, total serum protein, and haptoglobin. Statistic analysis showed significant differences among the three groups for SCC, TBC, and lactose. The protein average showed significant difference among G1 to G2 and G3. Total solid contents from G1 and G2 were significantly different to that from G3. Fat content had not significant differences among groups. Not parametric analysis demonstrated strong positive association between SCC and TBC (r= 0,852, P< 0,005). For the hematological analysis, leucograma and total serum protein had no significant differences among groups. Both, fibrinogen and hematocrit showed statistical differences in G1 and G3. Regarding the differential analysis, the monocytes of G1 and G3 showed statistical differences to that of G2. Moreover, although short, there was significant correlation (r= 0,270, P<0,001) between fibrinogen and SCC. Not parametric analysis displayed mean correlation between SCC and Hp concentration (r= 0,357, P<0,001), demonstrating association between the variables. For the concentration of Hp, there was significant differences between G1 (0,41 g/L) and G2 (0,41 g/L) to G3 (0,70 g/L) proving the Hp increase in cows affected by clinical mastitis; nevertheless, the Hp was not a sensible marker to subclinical mastitis. It is suggested that further studies may elucidate those associations.

Made available in DSpace on 2016-12-08T16:24:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PGCA15MA184.pdf: 964703 bytes, checksum: 9b63fdeda6cbc9b89c700c8427b99a28 (MD5) Previous issue date: 2015-08-28 / The cryopreservation of somatic cells has been highlighted not only in the preservation of germplasm, but also in the maintenance of genotypes used for the induction of pluripotency, development of strains and cloning by nuclear transfer. The study of the effects of controlled stress in somatic cells or gametes have shown that, in addition to providing increased survival under experimental conditions, it may influence other parameters like the growth pattern in culture. Bovine fibroblasts obtained by standard procedure from a cartilage explant were evenly distributed in four experimental groups as described below: fibroblasts in culture were subjected for 4 minutes to negative pressure 200, 500 and 800 mbar, immediately (PN0h) or 3 hours before (PN3h) freezing, performed in a standard solution (10% DMSO in D-MEM). After trypsinization, the cells were loaded in 0.25 mL straws in a concentration of 1 x 106 cells / mL, and total volume of 200 &#956;L. The straws were sealed and stabilized in a refrigerator (5-7 °C) for 30 minutes, and then exposed to nitrogen vapor (4 cm above the surface) for 5 minutes when were dipped therein. Thawing was performed in a water bath at 36 °C for 20 seconds. Fibroblasts not subjected to pressure were used as frozen (CC) and fresh (FC) controls. There was evaluated the post-thaw viability and subsequently the cell replication index, based on the population doubling time (PDT) performed each 24 h intervals, during 8 days. At each evaluation, the cells of one well of each group were trypsinized and the number of viable cells determined by hemocytometric chamber after staining with Trypan Blue. PDT was determined using the algorithm available online (http://www.doubling-time.com): TD = t x lg2/(lgNt lgN0). Data were submitted to ANOVA and T student test, with 5% significance level. The average cell survival of control group (89.8%) and PN500 0h (88.1%) were higher than all other groups. The PDT average time of all frozen cells was 33.2 h. The PDT time was similar in fresh (27.5 ± 0.35 h), frozen control (30.1 ± 2.3 h) and PN500 0h (32.4 ± 1.6 h) groups. The lowest PDT time was observed in the PN800 0h (21,9h) group. The freezing in plastic straws with 10% DMSO was adequate to cryopreserve bovine fibroblasts allowing high survival rates. It was not observed negative effects of submission to the negative pressure just before freezing, and the level of 200 and 500 mbar resulted in growth rates similar to the obtained with fresh fibroblasts. Although the negative pressure has not increased cryotolerance in bovine fibroblasts, it determined changes in the behavior of these cells during the post-thaw culture. New evaluations should be performed to assess cells subjected to negative pressure in the development of animal clones / A criopreservação de células somáticas vem se destacando não apenas como aliada na preservação de germoplasma, mas também na manutenção de genótipos utilizados para a indução de pluripotencia, formação de linhagens e clonagem por transferência nuclear. O estudo dos efeitos do estresse controlado em gametas ou células somáticas tem demonstrado que, além de proporcionar maior sobrevivência em condições experimentais, outros parâmetros podem ser influenciados, como por exemplo, o padrão de crescimento em cultivo. Para isto, fibroblastos bovinos de primeira passagem, obtidos por procedimento padrão de explantação de cartilagem, foram distribuídos uniformemente em quatro grupos experimentais conforme descrito a seguir: Fibroblastos em cultivo foram submetidos por 4 minutos à pressão negativa de 200, 500 e 800 mbar, imediatamente (PN0h) ou 3horas antes (PN3h) do congelamento, realizado em solução padrão (10% DMSO em D-MEM). Após a tripsinização, as células eram envasadas em uma concentração de 1 x 106 células/mL, em palhetas de 0,25 mL, num volume total de 200 &#956;L. As palhetas eram seladas e estabilizadas em geladeira (5-7 &#730;C) por 30 minutos, expostas ao vapor de nitrogênio (4 cm acima da superfície) por 5 minutos, e então mergulhadas no mesmo. O descongelamento era realizado em banho-maria a 36 °C por 20 segundos. Fibroblastos não submetidos à pressão foram utilizados como controles congelado (CC) e fresco (FC). Foram avaliados a viabilidade pós-congelamento, e posteriormente o índice de replicação, baseado no tempo de duplicação da população (PDT) celular, com intervalos de 24h e duração de 8 dias. A cada avaliação, um poço de cada grupo era tripsinizado sendo o número de células viáveis determinado em câmara hemocitométrica, após a coloração com Azul de Trypan. O PDT foi 10 12 determinado utilizando-se o algoritmo disponível online (http://www.doubling-time.com): TD = t x lg2/(lgNt lgN0). Os dados foram submetidos à ANOVA e teste T Student, com 5% de significância. A sobrevivência celular média dos grupos controle (89,8%) e PN500 0h (88,1%) foram superiores aos outros grupos. O tempo médio de PDT de todas as células congeladas foi 33,2h; o tempo de PDT foi semelhante nos grupos fresco (27,5 ± 0,35 h), controle congelado (30,1 ± 2,3 h) e PN500 0h (32,4 ± 1,6 h), o menor tempo foi observado no grupo PN800 0h (21,9 h). As palhetas plásticas se mostraram adequadas para o congelamento de fibroblastos bovinos, não sendo observados efeitos negativos da submissão à pressão negativa imediatamente antes do congelamento, sendo os valores de 200 e 500 mbar os que possibilitaram as melhores taxas de crescimento. Muito embora o emprego de pressão negativa não tenha aumentado a criotolerância de fibroblastos bovinos, determinou mudanças no comportamento destas células durante o cultivo pós-descongelamento. Novas avaliações devem ser realizadas para avaliar a qualidade das células submetidas à pressão negativa, no desenvolvimento de clones animais

A mastite um dos grandes problemas relacionados com criação de ovinos de leite devido às perdas econômicas decorrentes da redução na produção, gastos com medicamento e perdas de animais. A Contagem de Células Somáticas (CCS) e o isolamento bacteriano são ferramentas diagnósticas indicativas da saúde da glândula mamária que pode ser determinada através de método automatizado e por método manual, através de contagem celular em microscópio, sobre o qual existem discussões quanto à coloração adequada ao leite de ovelhas devido a celularidade diferenciada nesta espécie. Esta tese compreende três estudos que visam realizar o diagnóstico de mastite subclínica em ovelhas leiteiras do Estado Rio Grande do Sul – Brasil em um total de 315 amostras de leite oriundos de casos desta enfermidade em ovelhas de leite. [Capítulo 2] Foram utilizadas 116 amostras com o objetivo de identificar e validar uma metodologia de CCS microscópica adequada à espécie ovina. Assim foram confeccionadas lâminas de esfregaços de 10 μL de leite em 1 cm2, onde foram testados os fixadores de xilol e solução de Carnoy e as colorações de May-Grünwald (MG), Broadhurst- Paley (BP), Wrigth (W) e Panótico (P). Elegeu-se a solução de Carnoy, pois esta permitiu uma melhor fixação do filme lácteo às lâminas de microscopia, e o corante BP, pois permitiu uma boa coloração e visualização das células, bem como a diferenciação dos corpúsculos citoplasmáticos. Os valores de CCS variaram de 2,6x104 a 4,4x106 células.mL-1 e de 1,9x104 a 8,1x106 células.mL-1, respectivamente, pelos métodos automático e microscópico. [Capítulo 3] O objetivo do presente capítulo foi determinar a ocorrência de mastite subclínica em rebanho ovino leiteiro, através do isolamento bacteriano e da CCS. Determinou-se, ainda, a composição (gordura, lactose, proteína e sólidos totais) do leite e a relação entre estes parâmetros e a presença de mastite. Para tanto, coletaram-se 315 amostras de leite, individualizadas por teto, das quais 85 (27%) foram identificadas como mastite subclínica, sendo Staphylococcus coagulase negativos o agente prevalente (64,7%), seguido por Staphylococcus coagulase positivas (19,1%). A CCS variou de 2,5x103 a 9,3x106. Verificou-se CCS significativamente maior (p<0,0001) nas amostras com isolamento bacteriano. Entretanto, o mesmo não foi observado entre os parâmetros de composição. Não foi determinada correlação entre os parâmetros de composição e a CCS. [Capítulo 4] Este capítulo teve como objetivos identificar as espécies de SCN em 32 isolados de casos de mastite subclínica em ovinos, através da técnica de PCR-RFLP e sequenciamento do gene gap, e determinar a suscetibilidade dos isolados frente a nove agentes antimicrobianos, pela técnica de disco difusão em ágar. Foram obtidos quatro perfis no sequenciamento, sendo observada a presença de três espécies de SCN: Staphylococcus epidermidis (59,4%), Staphylococcus chromogenes (34,4%) e Staphylococcus devriesei (6,2%), pela primeira vez descrita na região Sul do país em casos de mastite ovina. Todos os isolados foram suscetíveis a cefalotina, ceftiofur e penicilina+novobiocina. Vinte e um isolados (65,6%) apresentaram resistência a pelo menos um agente antimicrobiano e onze isolados (34,4%) mostraram-se suscetíveis a todos os agentes testados. Quatro isolados (12,5%) apresentaram multirresistência e, entre estes, um isolado da espécie S. epidermidis apresentou resistência à oxacilina, confirmada através da amplificação do gene mecA por PCR. Os estudos permitem concluir que os SCN são os agentes etiológicos mais prevalentes relacionados com mastite subclínica em ovelhas leiteiras e sua presença tem correlação com CCS elevada. A determinação da CCS através de método manual demonstra que esta é uma ferramenta aplicável à espécie ovina. Além de se constituir em problema de sanidade animal, a mastite ovina, tem como consequência perdas econômicas ao produtor, SCN possuem potencial zoonótico, destacando a importância destes micro-organismos na saúde pública, tornando primordial a identificação destes agentes, através de ferramentas genotípicas seguras e confiáveis. / The mastitis is one of the major problems related to breeding of milk sheep due to the economic losses arising from the reduction in production, expenditure on medication and loss of animals. The Somatic Cell Count (SCC) and bacterial isolation are diagnostic tools indicative of mammary gland’s health that can be determined by automated method and manual method, through the counting of cell under a microscope, whereupon there are discussions concerning the appropriated staining to the ewe’s milk due to different cellularity in this species. This thesis comprises three studies that aim to make the diagnosis of subclinical mastitis in dairy sheep in Rio Grande do Sul - Brazil in a total of 315 milk samples originated from cases of this disease in dairy sheep. [Chapter 2] It were used 116 samples to identify and validate a method for microscopic SCC suitable for ovine specie. Therefore, were made glass slides for smear of 10 μL of milk in 1 cm2, where were tested xylol fixers and Carnoy solution and May-Grünwald (MG), Broadhurst- Paley (BP), Wright (W) and Panotic (P) dyes. Carnoy solution was elected, because this one allowed a better fixation of the milk film to the microscope slides, and BP staining as it allowed a good staining and visualization of cells and the differentiation of cytoplasmic corpuscles. The SCC values ranged from 2,6x104 to 4,4x106 cells.mL-1 and 1,9x104 to 8,1x106 cells.mL-1, respectively by automatic and microscopic methods. [Chapter 3] The purpose of this chapter was to determine the occurrence of subclinical mastitis in dairy sheep flock, by bacterial isolation and SCC. It was determined also the composition (fat, lactose, protein and total solids) of milk and the relationship between these parameters and the presence of mastitis. In order to do that, were collected 315 milk samples, individualized by teat, of which 85 (27%) were identified as subclinical mastitis and Staphylococcus coagulase negative (SCN) was the prevalent agent (64.7%), followed by Staphylococcus coagulase positive (SCP) (19. 1%). The SCC ranged from 2,5x103 to 9,3x106. There was significant higher SCC (p <0.0001) in samples with bacterial isolation. However, the same was not observed between the composition parameters. There was no correlation between the composition parameters and SCC. [Chapter 4] This chapter aims to identify the species of CNS in 32 isolated from cases of subclinical mastitis in sheep by PCR-RFLP and sequencing of the gap gene and determine the susceptibility of isolates face to nine antimicrobials, by disk agar diffusion technique. Four profiles were obtained in sequencing, revealing the presence of three species of SCN: Staphylococcus epidermidis (59.4%), Staphylococcus chromogenes (34.4%) and Staphylococcus devriesei (6.2%), first described in the south region of the country in cases of sheep mastitis. All isolates were susceptible to cephalothin, ceftiofur and penicillin + novobiocin. Twenty-one isolates (65.6%) showed resistance to at least one antimicrobial agent and eleven isolates (34.4%) were susceptible to all tested agents. Four isolates (12.5%) had multidrug resistance and, among these, an isolated of S. epidermidis was resistant to oxacillin, confirmed by amplifying the mecA gene by PCR. The studies support the conclusion that the SCN are the most prevalent etiologic agents related to subclinical mastitis in dairy sheep and their presence correlates with high SCC. The determination of SCC through manual method demonstrates that this tool is applicable to the ovine species. Besides being an animal health problem, the sheep mastitis results in a economic losses to producers, SCN have zoonotic potential, highlighting the importance of these microorganisms in public health, making it crucial to identify these agents through secure and reliable genotypic tools.

O presente trabalho teve como objetivo a análise microbiológica das amostras de leite de fêmeas bubalinas, a avaliação da quantidade de UFC/mL dos microrganismos isolados e a contagem de células somáticas/mL. Os quartos mamários foram submetidos ao teste de tamis e CMT e foram colhidas 262 amostras de leite de fêmeas bubalinas primíparas e pluríparas; para análise microbiológica, quantificação das UFC/mL e contagem de células somáticas/mL. A contagem das células somáticas foi realizada através da leitura em microscopia ótica dos esfregaços de leite. A leitura foi realizada utilizando-se a totalidade dos campos existentes no esfregaço de 1cm2. No teste do tamis, 99,6% das amostras apresentaram resultado negativo. No CMT, observamos resultado negativo em 88,2% das amostras; traços (8%), positivo 1+ (1,5%); positivo 2+ (1,15%); positivo 3+ (1,15%). A análise microbiológica apresentou amostras sem crescimento de microrganismos (75,6%); isolamento de Staphylococcus spp. (11,8%); Corynebacterium spp. (7,3%); Streptococcus spp, (3,1%) e crescimento de microrganismos associados (1,2%). A contagem total de células somáticas das amostras avaliadas apresentou mediana de 2300 células/mL de leite; a mediana da contagem de PMN e MN foi, respectivamente, 700 células/mL e 1500 células/ml de leite, com diferença estatisticamente significante (P<0,0001). As quantidades totais de células somáticas/mL e as quantidades de células polimorfonucleares e mononucleares nas amostras negativas ao exame microbiológico foram estatisticamente menores do que nas amostras que apresentaram isolamento de microrganismos. A mediana relativa às quantidade de UFC/mL foi de 550 UFC/mL para as amostras com isolamento de Corynebacterium spp.; 500 UFC/mL para as amostras com isolamento de Staphylococcus spp e 1100 UFC/mL para Streptococcus spp. ,sendo que não houve diferença estatisticamente significativa entre eles. Concluiu-se que a espécie bubalina, apresenta baixos índices de mastite; nas amostras com isolamento de microrganismos, o número de UFC/mL é pequeno.Existe um número de animais que apresenta resultado positivo no exame microbiológico do leite, sem contudo apresentar sinais de processo inflamatório. / The aim of the present study was the microbiological analysis of milk samples from female buffaloes, the amount evaluation of CFU/mL of the isolated microorganisms and the somatic cells counting/mL. The mammary quarters were submitted to strip cup test and CMT and 262 milk samples were colletected from buffalo cows to microbiological analysis, CFU/mL quantification and somatic cells counting. The somatic cells countings were obtained through optical microscopy reading of the milk smears, where all fields of the 1 cm2 smears area were considered. In the strip cup test, 99,6% of the samples had negative results. In the CMT, the negative results were observed in 88,2% of the samples; traces (8%), 1+ positive (1,5%), 2+ positive (1,15%) and 3+ positive (1,15%). The microbiological analysis resulted in samples with no microorganism growth (75,6%); Staphylococcus spp (11,8%); Corynebacterium spp (7,3%) and Streptococcus spp (3,1%) and associated microorganisms growth (1,15%). The total counting of somatic cells in the evaluated milk samples showed median of 2300 cells/mL; while PMN and MN counting median were 700 cells/mL and 1500 cells/mL respectivelly, with a significant statisticall difference (P< 0,0001). The total somatic cells counting/mL and the amount of PMN and MN cells in the microbiological negative samples were statistically smaller than the findings in the samples that showed microorganism isolation. Concerning the amount of CFU/mL, the median obtained for samples with Corynebacterium spp was 550CFU/mL; 500 CFU/mL for Staphylococcus spp samples and 1100 CFU/mL for Streptococcus spp results, with no statiscally significant difference between them. It follows that he buffalo species has a low rate of mastitis; the number of CFU/mL is small in the microbiological positive samples. There are a number of animals that despite presenting milk microbiological exam with positive results, showed no signs of inflamatory process.

A mastite um dos grandes problemas relacionados com criação de ovinos de leite devido às perdas econômicas decorrentes da redução na produção, gastos com medicamento e perdas de animais. A Contagem de Células Somáticas (CCS) e o isolamento bacteriano são ferramentas diagnósticas indicativas da saúde da glândula mamária que pode ser determinada através de método automatizado e por método manual, através de contagem celular em microscópio, sobre o qual existem discussões quanto à coloração adequada ao leite de ovelhas devido a celularidade diferenciada nesta espécie. Esta tese compreende três estudos que visam realizar o diagnóstico de mastite subclínica em ovelhas leiteiras do Estado Rio Grande do Sul – Brasil em um total de 315 amostras de leite oriundos de casos desta enfermidade em ovelhas de leite. [Capítulo 2] Foram utilizadas 116 amostras com o objetivo de identificar e validar uma metodologia de CCS microscópica adequada à espécie ovina. Assim foram confeccionadas lâminas de esfregaços de 10 μL de leite em 1 cm2, onde foram testados os fixadores de xilol e solução de Carnoy e as colorações de May-Grünwald (MG), Broadhurst- Paley (BP), Wrigth (W) e Panótico (P). Elegeu-se a solução de Carnoy, pois esta permitiu uma melhor fixação do filme lácteo às lâminas de microscopia, e o corante BP, pois permitiu uma boa coloração e visualização das células, bem como a diferenciação dos corpúsculos citoplasmáticos. Os valores de CCS variaram de 2,6x104 a 4,4x106 células.mL-1 e de 1,9x104 a 8,1x106 células.mL-1, respectivamente, pelos métodos automático e microscópico. [Capítulo 3] O objetivo do presente capítulo foi determinar a ocorrência de mastite subclínica em rebanho ovino leiteiro, através do isolamento bacteriano e da CCS. Determinou-se, ainda, a composição (gordura, lactose, proteína e sólidos totais) do leite e a relação entre estes parâmetros e a presença de mastite. Para tanto, coletaram-se 315 amostras de leite, individualizadas por teto, das quais 85 (27%) foram identificadas como mastite subclínica, sendo Staphylococcus coagulase negativos o agente prevalente (64,7%), seguido por Staphylococcus coagulase positivas (19,1%). A CCS variou de 2,5x103 a 9,3x106. Verificou-se CCS significativamente maior (p<0,0001) nas amostras com isolamento bacteriano. Entretanto, o mesmo não foi observado entre os parâmetros de composição. Não foi determinada correlação entre os parâmetros de composição e a CCS. [Capítulo 4] Este capítulo teve como objetivos identificar as espécies de SCN em 32 isolados de casos de mastite subclínica em ovinos, através da técnica de PCR-RFLP e sequenciamento do gene gap, e determinar a suscetibilidade dos isolados frente a nove agentes antimicrobianos, pela técnica de disco difusão em ágar. Foram obtidos quatro perfis no sequenciamento, sendo observada a presença de três espécies de SCN: Staphylococcus epidermidis (59,4%), Staphylococcus chromogenes (34,4%) e Staphylococcus devriesei (6,2%), pela primeira vez descrita na região Sul do país em casos de mastite ovina. Todos os isolados foram suscetíveis a cefalotina, ceftiofur e penicilina+novobiocina. Vinte e um isolados (65,6%) apresentaram resistência a pelo menos um agente antimicrobiano e onze isolados (34,4%) mostraram-se suscetíveis a todos os agentes testados. Quatro isolados (12,5%) apresentaram multirresistência e, entre estes, um isolado da espécie S. epidermidis apresentou resistência à oxacilina, confirmada através da amplificação do gene mecA por PCR. Os estudos permitem concluir que os SCN são os agentes etiológicos mais prevalentes relacionados com mastite subclínica em ovelhas leiteiras e sua presença tem correlação com CCS elevada. A determinação da CCS através de método manual demonstra que esta é uma ferramenta aplicável à espécie ovina. Além de se constituir em problema de sanidade animal, a mastite ovina, tem como consequência perdas econômicas ao produtor, SCN possuem potencial zoonótico, destacando a importância destes micro-organismos na saúde pública, tornando primordial a identificação destes agentes, através de ferramentas genotípicas seguras e confiáveis. / The mastitis is one of the major problems related to breeding of milk sheep due to the economic losses arising from the reduction in production, expenditure on medication and loss of animals. The Somatic Cell Count (SCC) and bacterial isolation are diagnostic tools indicative of mammary gland’s health that can be determined by automated method and manual method, through the counting of cell under a microscope, whereupon there are discussions concerning the appropriated staining to the ewe’s milk due to different cellularity in this species. This thesis comprises three studies that aim to make the diagnosis of subclinical mastitis in dairy sheep in Rio Grande do Sul - Brazil in a total of 315 milk samples originated from cases of this disease in dairy sheep. [Chapter 2] It were used 116 samples to identify and validate a method for microscopic SCC suitable for ovine specie. Therefore, were made glass slides for smear of 10 μL of milk in 1 cm2, where were tested xylol fixers and Carnoy solution and May-Grünwald (MG), Broadhurst- Paley (BP), Wright (W) and Panotic (P) dyes. Carnoy solution was elected, because this one allowed a better fixation of the milk film to the microscope slides, and BP staining as it allowed a good staining and visualization of cells and the differentiation of cytoplasmic corpuscles. The SCC values ranged from 2,6x104 to 4,4x106 cells.mL-1 and 1,9x104 to 8,1x106 cells.mL-1, respectively by automatic and microscopic methods. [Chapter 3] The purpose of this chapter was to determine the occurrence of subclinical mastitis in dairy sheep flock, by bacterial isolation and SCC. It was determined also the composition (fat, lactose, protein and total solids) of milk and the relationship between these parameters and the presence of mastitis. In order to do that, were collected 315 milk samples, individualized by teat, of which 85 (27%) were identified as subclinical mastitis and Staphylococcus coagulase negative (SCN) was the prevalent agent (64.7%), followed by Staphylococcus coagulase positive (SCP) (19. 1%). The SCC ranged from 2,5x103 to 9,3x106. There was significant higher SCC (p <0.0001) in samples with bacterial isolation. However, the same was not observed between the composition parameters. There was no correlation between the composition parameters and SCC. [Chapter 4] This chapter aims to identify the species of CNS in 32 isolated from cases of subclinical mastitis in sheep by PCR-RFLP and sequencing of the gap gene and determine the susceptibility of isolates face to nine antimicrobials, by disk agar diffusion technique. Four profiles were obtained in sequencing, revealing the presence of three species of SCN: Staphylococcus epidermidis (59.4%), Staphylococcus chromogenes (34.4%) and Staphylococcus devriesei (6.2%), first described in the south region of the country in cases of sheep mastitis. All isolates were susceptible to cephalothin, ceftiofur and penicillin + novobiocin. Twenty-one isolates (65.6%) showed resistance to at least one antimicrobial agent and eleven isolates (34.4%) were susceptible to all tested agents. Four isolates (12.5%) had multidrug resistance and, among these, an isolated of S. epidermidis was resistant to oxacillin, confirmed by amplifying the mecA gene by PCR. The studies support the conclusion that the SCN are the most prevalent etiologic agents related to subclinical mastitis in dairy sheep and their presence correlates with high SCC. The determination of SCC through manual method demonstrates that this tool is applicable to the ovine species. Besides being an animal health problem, the sheep mastitis results in a economic losses to producers, SCN have zoonotic potential, highlighting the importance of these microorganisms in public health, making it crucial to identify these agents through secure and reliable genotypic tools.

A contagem de células somáticas (CCS) é o padrão ouro de avaliação da integridade da glândula mamária e da qualidade do leite. A haptoglobina (Hp) é uma das principais proteínas de fase aguda que se eleva em processos inflamatórios, infecciosos e de estresse em ruminantes. Este estudo avaliou a relação entre os níveis séricos de Hp e a CCS, através de coletas de amostras de leite e sangue de vacas leiteiras de rebanhos do Noroeste do estado do Rio Grande do Sul. As amostras foram obtidas, entre fevereiro e outubro de 2008 de 150 animais da raça Holandesa, sem distinção de idade e número de lactação, divididos em três grupos de 50 animais separados conforme o valor da CCS. O grupo 1 (G1) incluiu vacas com CCS abaixo de 600.000 cel/mL; o grupo 2 (G2), vacas com CCS superior a 600.000 cel/mL e, o grupo 3 (G3), vacas que apresentavam sinais clínicos de mastite. Para cada amostra de leite, foi determinada a CCS, a contagem bacteriana total (CBT) e os níveis de proteína, gordura, lactose e sólidos totais. Coletouse 5 mL de sangue através de punção da veia coccígea para avaliar contagem total e diferencial de leucócitos, fibrinogênio, hematócrito, proteínas plasmáticas totais e haptoglobina. A análise estatística demonstrou diferença significativa entre os três grupos quanto à CCS, CBT e lactose. A proteína apresentou diferença significativa entre G1 para G2 e G3. Nos sólidos totais, G1 e G2 apresentaram diferença significativa para G3. A gordura não apresentou diferença significativa entre os grupos. Análises não paramétricas demonstraram forte correlação positiva entre CCS e CBT (r=0,852, P<0,005). Quanto às análises hematológicas, o leucograma e as proteínas plasmáticas totais não apresentaram diferença significativa entre os grupos. Fibrinogênio e hematócrito se diferenciaram estatisticamente nos grupos 1 e 3. Na análise do diferencial, os monócitos do G1 e G3 apresentaram diferença estatística para G2. Além disso, o fibrinogênio apresentou correlação leve, mas significativa (r= 0,270, P<0,001), em relação ao valor de CCS. Análises não paramétricas apresentaram correlação média entre CCS e concentração de Hp (r= 0,357, P<0,001), demonstrando associação entre as variáveis. Quanto à concentração de Hp, houve diferença significativa do G1 (0,41 g/L) e G2 (0,41 g/L) para G3 (0,70 g/L), ou seja, se comprovou a elevação dos níveis séricos de Hp em vacas com processo inflamatório instalado; entretanto, a Hp não se mostrou sensível para detecção de mastite subclínica. Sugere-se que estudos adicionais possam elucidar tais associações. / Somatic cell count (SCC) is the gold standard of both the mammalian gland and milk quality evaluation. The haptoglobin (Hp) is one of the main acute phase proteins, which increase in inflammation, infectious and stress processes of ruminants. This work evaluated the relation between Hp serum level and SCC, through the analysis of milk and blood samples from dairy cows from herds in the northwest Rio Grande do Sul state. Samples were obtainned, between February and October 2008, from 150 Holstein cows, without age or milking number discrimination and that were separate in three different groups with 50 animals each, according SCC value. Group 1 (G1) included cows with SCC below 600.000 cells/mL; group 2 (G2), cows with SCC above 600.000 cells/mL and group 3 (G3), cows with signs of clinical mastitis. For each milk sample, it was determined SCC, total bacteria count (TBC), and the protein, fat, lactose, and total solid contents. A 5 mL blood sample was collected by puncturing coccigeal vein to evaluate total and differential leucocytes counts, fibrinogen, hematocrit, total serum protein, and haptoglobin. Statistic analysis showed significant differences among the three groups for SCC, TBC, and lactose. The protein average showed significant difference among G1 to G2 and G3. Total solid contents from G1 and G2 were significantly different to that from G3. Fat content had not significant differences among groups. Not parametric analysis demonstrated strong positive association between SCC and TBC (r= 0,852, P< 0,005). For the hematological analysis, leucograma and total serum protein had no significant differences among groups. Both, fibrinogen and hematocrit showed statistical differences in G1 and G3. Regarding the differential analysis, the monocytes of G1 and G3 showed statistical differences to that of G2. Moreover, although short, there was significant correlation (r= 0,270, P<0,001) between fibrinogen and SCC. Not parametric analysis displayed mean correlation between SCC and Hp concentration (r= 0,357, P<0,001), demonstrating association between the variables. For the concentration of Hp, there was significant differences between G1 (0,41 g/L) and G2 (0,41 g/L) to G3 (0,70 g/L) proving the Hp increase in cows affected by clinical mastitis; nevertheless, the Hp was not a sensible marker to subclinical mastitis. It is suggested that further studies may elucidate those associations.

Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2017-05-09T15:36:26Z No. of bitstreams: 1 Ney Braulio de Oliveira Lins.pdf: 535128 bytes, checksum: bf7b656b16605ec0590fcb36feaac735 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-09T15:36:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ney Braulio de Oliveira Lins.pdf: 535128 bytes, checksum: bf7b656b16605ec0590fcb36feaac735 (MD5) Previous issue date: 2013-07-01 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / High somatic cell counts and high bacteria counts are related to health problems of the mammary gland and milking hygiene, what can bring harm to the industry, as well as to public health. The lactoperoxidase system acts directly on the mammary gland health generating hypothiocyanate ions, a bactericidal compound, wich concentrations depend, among other factors, on the presence of plants in the diet rich in cyanogenic glycosides. The objective of this study was to evaluate the quality of the milk in lactating Saanen goats fed maniçoba hay. Seven Saanen goats were used, with 39 ± 2,9 days of lactation and body weight 43,3 ± 7,6 kg in an statistical Latin square design 4 x 4. The treatments consisted of the replacement of the Tifton hay by maniçoba hay (0; 33,3; 66,7 and 100%). The concentrations of thiocyanate ions, fat, protein, lactose, total solids and dry extract in milk were not affected (P <0,05) neither by the substitution of tifton hay for maniçoba nor by the preservative. The SCC was lower (P <0,05) in samples without preservative and was quadratic affected of (P<0,0001) by the substitution of tifton hay for maniçoba. The total bacteria count increased significantly in milk samples without preservative, but was not affected by the substitution of tifton hay for the maniçoba hay. / Altas contagens de células somáticas e altas contagens bacterianas estão relacionadas com problemas de saúde da glândula mamária e de higiene na ordenha, e podem trazer prejuízos para indústria, assim como para a saúde pública. O sistema lactoperoxidase atua diretamente sobre a saúde da glândula mamária gerando íons hipotiocianato, composto de ação bactericida, cujas concentrações dependem, entre outros fatores, da presença na dieta de plantas ricas em glicosídeos cianogênicos. Objetiva-se com o presente trabalho avaliar a qualidade do leite de cabras Saanen em lactação alimentadas com feno de maniçoba. Foram utilizadas sete cabras Saanen, com 39 ± 2,9 dias de lactação e peso corporal médio de 43,3 ± 7,6 kg em um delineamento estatístico quadrado latino 4 x 4. Os tratamentos consistiram da substituição do feno do capim tífton por feno de maniçoba (0; 33,3; 66,7 e 100%). As concentrações de íons tiocianato, gordura, proteína, lactose, sólidos totais e extrato desengordurado no leite não foram influenciadas (P < 0,05) pela substituição do feno de tifton por feno de maniçoba nem pelo conservante. A CCS foi menor (P < 0,05) nas amostras sem conservante e foi influenciada de forma quadrática (P < 0,0001) pela substituição do feno de tifton por feno de maniçoba. A contagem de bactérias totais aumentou significativamente nas amostras de leite sem conservante, mas não foi influenciada pela substituição do feno de tifton por feno de maniçoba.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2016-12-16T13:38:06Z No. of bitstreams: 1 joaoemidioferreiralopesjunior.pdf: 532387 bytes, checksum: f67257afd82c1f48bc4db36846964b05 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2016-12-19T12:35:33Z (GMT) No. of bitstreams: 1 joaoemidioferreiralopesjunior.pdf: 532387 bytes, checksum: f67257afd82c1f48bc4db36846964b05 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-12-19T12:35:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 joaoemidioferreiralopesjunior.pdf: 532387 bytes, checksum: f67257afd82c1f48bc4db36846964b05 (MD5) Previous issue date: 2010-02-23 / Resultados de 2007 mostram a incontestável importância da cadeia produtiva do leite para o Brasil. A despeito disso, recentes publicações evidenciam um cenário de má qualidade no leite de uma significativa parte dos rebanhos. Dentro da conjuntura de economia global, a má qualidade configura um obstáculo para consolidação do País como exportador de lácteos. Na reversão deste quadro, duas iniciativas governamentais merecem destaque. A implantação da Rede Brasileira de Laboratórios de Controle da Qualidade do Leite e a adoção de indicadores da qualidade do leite: contagem de células somáticas (CCS) e contagem total bacteriana (CTB). A CCS estima os níveis de mastite em rebanhos, refletindo a resposta inflamatória frente à invasão da glândula mamária. A CTB indica a qualidade microbiológica, estimando os cuidados durante a ordenha e conservação do leite nas fazendas. O leite pode ser contaminado por três principais fontes bacterianas: pele dos tetos e úbere, superfície dos equipamentos e pelo interior das glândulas. A mastite consiste no estado inflamatório da glândula mamária, geralmente por etiologia infecciosa. Apresenta-se na forma clínica, com leite alterado e sintomatologia local a sistêmica, ou na subclínica, com total ausência de sinais. A forma subclínica é de grande relevância pela sua altíssima prevalência, de 15 a 40 vezes mais que a clínica, com redução da secreção láctea, aumento das bactérias e da CCS no leite. A resposta inflamatória associada às mastites classifica seus patógenos como principais, pelo grande aumento na CCS (S. aureus, S. agalactiae, coliformes, Streptococcus spp. que não S. agalatiae), e secundários, pela menor resposta inflamatória e pequena variação na CCS (Staphylococcus coagulase negativos e Corynebacterium bovis). Deste modo, a variação da CCS estima a resposta inflamatória segundo os diferentes patógenos da mastite. A quantidade de bactérias liberadas no leite também sofre variação conforme os patógenos envolvidos. Estudos nos Estados Unidos e Europa associam mastites pelo gênero Streptococcus spp. à repentinos picos de CTB, enquanto S. aureus a pequenas elevações na contagem bacteriana em rebanhos. O objetivo geral do trabalho é quantificar o efeito dos patógenos da mastite subclínica (S. aureus, Staphylococcus coagulase negativos, S. agalactiae e Streptococcus spp. que não S. agalatiae) na variação da CCS e da liberação de bactérias pelos quartos mamários (LBQM). O objetivo secundário consta do estudo das relações entre os resultados conforme o patógeno isolado. De junho a dezembro de 2009, três amostras de 638 quartos assepticamente preparados foram colhidas para provas de bacteriológicas de identificação dos patógenos da mastite, CCS e CTB. O programa SPSS calculou as estatísticas descritivas, teste t e modelos de regressão linear. As médias geométricas das CCS (células/mL) e CTB (UFC/mL) de acordo com os patógenos foram respectivamente: sem crescimento (52.000; 12.000), estafilococos coagulase negativa (85.000; 17.000), Staphylococcus aureus (587.000; 77.000), Streptococcus spp. que não o S. agalatiae (432.000; 108.000) e Streptococcus agalactiae (1.572.000; 333.000). Os resultados sugerem que quanto maior a intensidade do processo inflamatório, maior liberação de bactérias pela glândula mamária e que a CCS é uma ferramenta útil no controle da mastite, mais também na manutenção de baixas CTB. / Results of 2007 show the importance of the milk productive chain in Brazil. In spite of this fact, recent publications indicate the poor quality of milk from a significant number of herds. Considering the global economy, the low quality of milk configures an obstacle for the consolidation of the Country as a milk exporter. In order to reverse this situation, two governmental initiatives deserve consideration. The deployment of the Brazilian Milk Quality Control Lab Net and the adoption of raw milk quality indicators: somatic cell counting (SCC) and total bacterial counting (TBC). The SCC signs the levels of mastitis in herds, reflecting the inflammatory response to the invasion of mammary gland. The TBC indicates the microbiological quality of milk, demonstrates the care of milking and the conservation of milk in the farms. Milk can be contaminated by three main bacterial sources: skin of the teats, surface of the equipment and the inner side of the glands. Mastitis is the inflammatory state of mammary glands, generally caused by infection. It is observed in clinical form, with modified milk properties and local symptoms, or in sub-clinical form, with total absence of signals. However, this last one is most relevant for its highly prevalence (from 15 to 40 times more than the clinical form), reduction of secretion, increase of bacteria and SCC in milk. The inflammatory response to mastite classifies its pathogens as principal, for great SCC (S. aureus, S. agalactiae, coliforms and Strepotococcus spp. that not S. agalatiae) increase, and secondary, for less inflammatory response with small variation in the SCC (Coagulase negative staphylococci and Corynebacterium bovis). In this way, the SSC of milk can measure variation of the inflammatory response by the pathogens of the mastitis. The amount of bacteria released in milk also varies with the pathogens. In the United States and Europe, infections of the group Streptococcus spp. had caused sudden peaks while S.aureus caused small rises in the TBC of herds. The general goal of this work is to evaluate the effect of subclinic mastitis pathogens (S. aureus, Staphylococcus coagulase negativos, S. agalactiae, Streptococcus spp. that not S. agalatiae) on the variation SCC and the magnitude of bacteria shedding by the mammary quarter (BSMQ). A secondary objective is the study of relations between the results as the pathogen isolated. From 2009, June to 2009, December, three samples of 638 mammary quarters aseptically prepared had been collected for bacteriological tests, SCC and TBC. The SPSS program calculated descriptive statistics, t test and linear regression. The SCC (cell/mL) and TBC (CFU/mL) geometric means results, according to the isolated pathogens, have been respectively: without growth (52.000; 12.000), coagulase negative staphylococci (85.000; 17.000), Staphylococcus aureus (587.000; 77.000), Streptococcus spp. not S. agalatiae (432.000; 108.000) and Streptococcus agalactiae (1.572.000; 333.000). The results suggest that the more intense is inflammatory process the grater release of bacteria by the mammary gland will be. It also suggests that SCC is a useful tool for controlling mastitis and maintaining TBC decreases.

Os objetivos gerais deste estudo foram avaliar o efeito suplementação de zinco (Zn), cobre (Cu) e selênio (Se) orgânicos para vacas leiteiras e os seus efeitos sobre a qualidade do leite, saúde da glândula mamária e consumo de alimentos. Os objetivos específicos foram avaliar: a contagem de células somáticas (CCS), a prevalência de mastite clínica e subclínica,a produção e composição de leite nos 80 primeiros dias de lactação; monitorar a atividade enzimática de superóxido dismutase (CuZnSOD), glutationa peroxidase (GSH-Px) e ceruloplasmina (CP); o consumo de alimentos; a concentração plasmática de Zn, Cu e Se; e as variações de peso e escore dos animais. Dezenove vacas leiteiras, com prenhez confirmada, foram selecionadas por peso, escore de condição corporal (ECC), número de lactações e produção de leite da lactação anterior, e distribuídas ao acaso em dois grupos para receber fontes de Zn, Cu e Se orgânica (n=9) ou inorgânica (n=10). As dietas foram formuladas para suprir os requerimentos nutricionais dos animais dos 60 dias antes da data prevista do parto aos 80 dias de lactação. Amostras dos alimentos fornecidos e das sobras foram coletadas diariamente para posterior análise de composição. O leite foi coletado semanalmente a partir da 3ª semana de lactação para determinação da composição e CCS, e nos dias 1 e 7 de lactação, e quando diagnosticados casos clínicos de mastite, para cultura microbiológica. Amostras de sangue foram coletadas aos -60, -21, 1, 21, 40 e 80 dias do período experimental para análises da concentração de CuZnSOD, GSH-Px e CP. Para determinação das concentrações plasmáticas de Zn, Cu e Se amostras de sangue foram coletas aos 60 dias antes da data prevista de parto, e no 1º, 40º e 80º dias de lactação. Avaliações do escore de condição corporal (ECC) e do peso corporal (PC) foram realizadas no início e final do experimento, no parto, e uma vez por semana durante todo o período experimental. A incidência (novos casos)e o total de casos de mastite subclínica foi menor para o grupo de vacas alimentadas com fontes orgânicas de Zn, Cu e Se em comparação com os animais que receberam fontes inorgânicas. A CCS durante os primeiros 80 dias de lactação foi menor (P = 0,056) para o grupo alimentado com Zn, Cu e Se orgânicos. Não foram observados efeitos de fontes orgânicas de Zn, Cu e Se sobre as concentrações de CuZnSOD , GSH-Px e CP, Zn, Cu e Se plasmáticos, produção e composição de leite, consumo de nutrientes, ECC, mudança de ECC e PC. Foi observado efeito (P=0,024) da fonte sobre a mudança de PC. / The general objectives of this study were to evaluate the effect organic zinc (Zn), copper (Cu) and selenium (Se) supplementationto dairy cows on milk quality, mammary gland health and feed intake. The specific objectives were to evaluate: the somatic cell count (SCC), clinical and subclinical mastitis prevalence, milk production and composition during the first 80 days of lactation; the superoxide dismutase (CuZnSOD), glutathione peroxidase (GSH-Px) and ceruloplasmin (CP) enzyme activity; the nutrients intake; Zn, Cu and Se plasmatic concentrations; changes in weight and body condition score. Nineteen dairy cows, with confirmed pregnancy, were selected by body weight (BW), body condition score (BCS), number of lactation, and milk yield in previous lactation, and randomly distributed among two groups to receive organic (n=9) or inorganic (n=10) sources of Zn, Cu and Se. The diets were formulated to meet the nutritional requirements of animals from 60 days before the expected date of calving up to 80 days of lactation. Every day, food samples and leftovers were collected for composition analysis. Milk samples was collected weekly after 15 days of lactation to determine the composition and CCS, on days 1 and 7 of lactation, and when a mastitis clinical case was diagnosed for microbiological culture. Blood samples were collected on -60, -21, 1, 21, 40 and 80 days of the experimental period for CuZnSOD, GSH-Px, and CP analysis. For plasma concentrations of Zn, Cu and Se blood samples were collected at 60 days before calving, and at 1st, 40th and 80th days of lactation. Assessments of body condition score (BCS) and body weight (BW) were performed at the beginning and at the end of the experiment, the day of calving, and once a week throughout the experimental period. The incidence (new cases) and total number of subclinical mastitis cases was lower for the group of cows fed organic Zn, Cu and Se in comparison with animals that received the inorganic sources. The SCC during the first 80 days of lactation was lower (P = 0,056) for the group fed organic Zn, Cu and Se. There were no effects of Zn, Cu and Se organic supply on concentrations of CuZnSOD, GSH-Px and CP, Zn, Cu and Se plasma, production and composition of milk, consumption of nutrients, BW, BCS and changes on BCS. It was observed effect of source on BW changes (P=0,024).

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2016-06-20T13:11:06Z No. of bitstreams: 1 everaldozeni.pdf: 719009 bytes, checksum: c9a17cca0a53151211303468319fb794 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2016-07-13T15:13:36Z (GMT) No. of bitstreams: 1 everaldozeni.pdf: 719009 bytes, checksum: c9a17cca0a53151211303468319fb794 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-13T15:13:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 everaldozeni.pdf: 719009 bytes, checksum: c9a17cca0a53151211303468319fb794 (MD5) Previous issue date: 2014-12-11 / A contagem de células somáticas (CCS) é utilizada como indicador de qualidade tanto do leite de vacas como de cabras. A contagem total de bactérias (CTB) é de particular interesse para o produtor e para a indústria, pois reflete as condições gerais de higiene no processo de produção do leite na fazenda. A interferência do tempo e temperatura na conservação do leite para análise de CCS e CTB pode ser usada para mensurar a qualidade higiênico-sanitário do leite. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito do binômio tempo e temperatura de conservação sobre o aspecto de qualidade higiênico-sanitário do leite de cabra. Foram coletadas 20 amostras de 1,8 litros de leite de cabras das raças Saanen e Toggenburg em garrafas plásticas para análise de CCS, CTB e CIB, de cada animal. Após chegada das amostras no laboratório, o leite foi homogeneizado e distribuído em 40 frascos esterilizados, sendo 20 frascos contendo um comprimido do conservante azidiol e 20 frascos contendo um comprimido do conservante bronopol, totalizando 320 alíquotas para cada conservante, respectivamente. Os frascos com amostras de leite foram colocados em geladeiras e incubadoras com diferentes temperaturas (5, 10, 20 e 30ºC). Essas amostras foram analisadas com 1, 3, 5 e 7 dias após a coleta. A CCS e CTB foram realizadas pelo método de citometria de fluxo. O delineamento utilizado foi o de parcelas subdivididas. Os resultados de CCS, CTB e CIB foram transformados em logaritmo neperiano para comparação de médias. Foi utilizado o teste Student-Newman-Keuls (SNK) para comparação das médias da CCS, CTB e CIB de acordo com a temperatura e tempo de armazenamento. O maior impacto sobre a variação da CCS foi devido ao tempo dentro da temperatura apresentando diferença significativa nas temperaturas 20 e 30ºC, tendo uma diminuição da CCS de 3,5 e 3,9% a cada dia de aumento no tempo de armazenamento a uma temperatura de 20 e 30ºC, respectivamente. O maior impacto sobre a variação da CTB foi devido ao tempo dentro da temperatura apresentando diferença significativa nas temperaturas 10 e 30ºC, tendo uma diminuição da CTB de 8,9% a cada dia de aumento no tempo de armazenamento a uma temperatura de 10ºC e um aumento da CTB de 33,3% a cada dia de aumento no tempo de armazenamento a uma temperatura de 30ºC. O maior impacto sobre a variação da CIB foi devido ao tempo dentro da temperatura apresentando diferença significativa nas temperaturas 10 e 30ºC, tendo uma diminuição da CIB de 11,1% a cada dia de aumento no tempo de armazenamento a uma temperatura de 10ºC e um aumento da CIB de 44,3% a cada dia de aumento no tempo de armazenamento a uma temperatura de 30ºC. Amostras armazenadas em temperaturas superiores a 20ºC podem gerar diminuição nos resultados de CCS e aumento nos resultados de CTB. Os resultados mostram a necessidade de se encaminhar as amostras de leite para CCS e CTB sob refrigeração e de ser feita análise até sete dias após a coleta. / The somatic cell count (SCC) is used as an indicator of milk quality for both cows and goats. The total count of bacteria (TCB) is of particular interest to the producer and to the industry, because it reflects the general conditions of hygiene in the production process of milk on the farm. The interference of time and temperature on the preservation of milk for analysis of SCC and TCB may measure the quality and hygienic-sanitary milk. The objective of this study was to evaluate the effect of the binomial time and storage temperature on the aspect of quality and hygienic-sanitary of goat's milk. We collected 20 samples of milk from goats in the races Saanen and Toggenburg in plastic bottles for analysis of SCC, TCB and ICB, totaling approximately 1.8 liters of each animal. After arrival of the samples in the laboratory, the milk was homogenized and distributed in 40 bottles sterilized, being 20 vials containing a compressed of preservative azidiol and 20 vials containing a compressed of preservative bronopol, totaling 320 aliquots with samples for each preservative, respectively. The bottles with milk samples were placed in refrigerators and incubators with different temperatures (5, 10, 20 and 30oC) and analyzed with 1, 3, 5 and 7 days after collection. The SCC and TCB were determined by the method of flow cytometry. The experimental design was a split-plot. The results of SCC, TCB and ICB were transformed into Neperian Logarithm for comparison of means. Was SNK test for comparison of means of SCC, TCB and ICB in accordance with the temperature and time of storage. The greatest impact on the variation of SCC was due to time within the temperature showing significant difference in temperatures 20 and 30oC, having a decrease in SCC 3.5 and 3.9% each day increase in time of storage at a temperature of 20 and 30oC, respectively. The greatest impact on the variation of TCB was due to the length of time within the temperature showing significant difference in temperatures 10 and 30oC, having a decrease in the TCB of 8.9% for each day of an increase in the time of storage at a temperature of 10oC and an increase in the TCB of 33.3% each day increase in time of storage at a temperature of 30oC. The greatest impact on the variation of the ICB was due to time within the temperature showing significant difference in temperatures 10 and 30oC, having a decrease in the ICB of 11.1% each day increase in long-term storage at a temperature of 10oC and an increase in the ICB of 44.3% each day to increase the time of storage at a temperature of 30oC. Samples stored at temperatures higher than 20oC can generate decrease in results of SCC and increase in results of TCB. The results show the need to forward the samples of milk for SCC and TCB under cooling and be done analysis up to seven days after collection.