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Estudio de las alfa-quimioquinas en la regulación del proceso de diferenciación de neuroesferas obtenidas de médula espinal de ratón

Cristi Muñoz, Francisca January 2012 (has links)
Tesis presentada a la Universidad de Chile para optar al grado académico de Magíster en Bioquímica en el área de especialización Toxicología y Diagnóstico Molecular y Memoria para optar al título profesional de Bioquímico / El recambio de elementos celulares en el tejido nervioso es sustentado por la existencia de una célula troncal neural, responsable del proceso de neurogénesis a través del cual se generan neuronas, astrocitos y oligodendrocitos. Recientemente se han identificado algunas quimioquinas con la capacidad de regular el proceso de neurogénesis a partir de una célula troncal neural. En particular, se ha descrito que la alfa-quimioquina CXCL12 y su receptor CXCR4 participan en el desarrollo de estructuras del sistema nervioso central y regulan procesos de proliferación y diferenciación en el cerebro adulto. Sin embargo, el rol que cumplen las alfaquimioquinas y específicamente la quimioquina CXCL12 y sus dos receptores CXCR4 y CXCR7 regulando capacidades funcionales de las células troncales neurales de la médula espinal, aún no está claro. Por lo anterior, esta tesis postula que “las alfa-quimioquinas regulan el proceso de diferenciación de células troncales neurales cultivadas como neuroesferas obtenidas de médula espinal de ratones”. Para evaluar esta hipótesis se utilizaron neuroesferas derivadas de la médula espinal de embriones en estadio E18,5. Se demostró que estas neuroesferas contenían células troncales neurales evaluando las capacidades de autorrenovación y diferenciación. En ellas se determinó que sólo estaba presente el RNA mensajero de la alfa-quimioquina CXCL12 y sus receptores y no el de CXCL1 y sus receptores mediante RT-PCR. De esta manera el estudio se focalizó en CXCL12 y sus receptores CXCR4 y CXCR7. Mediante inmunofluorescencia se detectaron estos receptores en neuroesferas luego de 4 días de diferenciación y se observó que estaban en las células troncales neurales. Finalmente se analizó el proceso de diferenciación, evaluando mediante inmunofluorescencia marcadores de linajes neurales. Se observó que CXCL12 favoreció la diferenciación astroglial sobre la neuronal, comparando la intensidad de fluorescencia de marcadores neurales como GFAP y beta-III-tubulina y que, aparentemente, tanto CXCR4 como CXCR7 participan en el proceso de diferenciación, deducido de los resultados conseguidos con el uso del antagonista de CXCR4, AMD3100. En consecuencia, es posible proponer a la quimioquina CXCL12 como un blanco terapéutico pudiendo bloquearla en casos de lesión a la médula espinal, donde ésta se ve aumentada, para así impedir que las células troncales endógenas se diferencien a astrocitos / The renewal of cells in nervous tissue is sustained by neural stem cells, which are responsible for the neurogenesis that originates neurons, astrocytes and oligodendrocytes. The mechanisms that regulate the functional capabilities of neural stem cells in the spinal cord are unknown. Recently, some chemokines have been identified as regulating factors of neurogenesis of neural stem cells. In particular, the CXCL12 alpha-chemokine and its receptor CXCR4 participate in the development of central nervous system structures and regulate proliferation and differentiation processes in the adult brain. However, the role of alphachemokines and specifically of CXCL12 and its receptors CXCR4 and CXCR7, on the regulation of functional properties of neural stem cells from spinal cord is not clear yet. With this background, this thesis postulates that “alpha-chemokines regulates the differentiation of neural stem cells cultured as neurospheres obtained from mouse spinal cord”. To evaluate this hypothesis, neurospheres from E18,5 mouse spinal cord were used. It was shown that the neurospheres had neural stem cells by assessing their self-renewal and differentiation capabilities. The presence of mRNA of alpha chemokines CXCL1 and CXCL12 and their receptors in neurospheres was evaluated by RT-PCR. Showing that neurospheres have CXCL12 and its receptors mRNA and not CXCL1 and its receptors mRNA. Therefore, the investigation continued with CXCL12 and its receptors CXCR4 and CXCR7. Both receptors were detected on neural stem cells by immunofluorescence after 4 days of differentiation. Finally, the process of differentiation was analyzed by immunofluorescence of neural markers. The comparison between GFAP and beta-III-tubulin fluorescence intensity indicates that CXCL12 promotes astroglial over neuronal differentiation. Apparently, inferred from the use of the CXCR4 antagonist AMD3100, both CXCR4 and CXCR7 participate in the differentiation of the neural stem cells from spinal cord. Given the results obtained in this thesis, it is possible to propose CXCL12 as a potential therapeutic target: blocking it to promote neuronal differentiation, for example, in cases of spinal cord injury, in which CXCL12 mRNA is increased; preventing differentiation of neural stem cells to astrocytes / FONDECYT; MINREB
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Efectos del tratamiento con oxígeno hiperbárico sobre la proliferación de las células troncales intestinales y su relación con la vía mTORc1 en Mus musculus

Casanova Maldonado, Ignacio J. 03 1900 (has links)
Tesis entregada a la Universidad de Chile en cumplimiento parcial de los requisitos para optar al grado de Magíster en Ciencias Biológicas. / Se ha demostrado que la terapia con oxigeno hiperbárico (HBOT) promueve la proliferación de células troncales somáticas in vivo en diversos modelos animales. Sin embargo, los mecanismos moleculares que subyacen este efecto no han sido estudiados en profundidad. El intestino de mamíferos tiene un alto índice de recambio celular debido al desgaste que sufre en el ejercicio de las funciones de degradación, absorción de nutrientes y evacuación de los restos innecesarios. Es por ello que en este órgano hay un gran volumen de células troncales en constante división y diferenciación, convirtiendo al intestino en un modelo atractivo para evaluar el impacto de HBOT. Mediante el uso de HBOT en esta tesis se logró modular gradualmente en el tiempo la proliferación y migración de las células troncales intestinales (CTI) murinas. La exposición a HBOT por veinte días promueve un aumento sincronizado de la proliferación de las CTI por cripta. Dado que la enzima metabólica mTORc1 modifica su actividad dependiendo de los niveles de oxígeno, en respuesta a factores intermediarios tales como HIF-1α o REDD1, se ensayó a continuación si la vía mTORc1 está mediando los efectos de HBOT. Ratones inyectados con Rapamicina (inhibidor alostérico de mTORc1) aumentan la proliferación de las CTI, a similares niveles observados en animales sometidos a HBOT por 20 días. Rapamicina, en nuestro modelo, estaría provocando una respuesta similar a lo que se ha descrito previamente ante una restricción calórica (RC). Sin embargo, llama la atención que el uso combinado de HBOT con Rapamicina no genera dicho aumento en la proliferación de 2 las CTI. Se ha planteado que la RC pudo ser simulada por la administración de Rapamicina, esto último evaluado mediante la disminución en los niveles de fosforilación de una de las proteínas efectoras de la vía mTORc1, S6K1. No obstante, tratamientos de 20 días con uso combinado de HBOT y Rapamicina logran recuperar la fosforilación sobre de S6K1 a niveles controles. Se propone por tanto que el aparente efecto antagónico entre la inhibición por Rapamicina y una posible estabilización del complejo mTORc1 por parte de HBOT se traduciría en la anulación del aumento de la proliferación de las CTI, esto último sería por un mecanismo que aún se desconoce y que debería ser abordado en futuros estudios. Se concluye que HBOT promueve la proliferación de las CTI y por tanto el funcionamiento del intestino. Extrapolando nuestros resultados, HBOT se podría utilizar como parte de un plan de tratamiento integral para tratar eficazmente afecciones intestinales, al ser administrado en conjunto con otras terapias y medicamentos que se adapten a las necesidades individuales del paciente. / It has been described that hyperbaric oxygen therapy (HBOT) promotes somatic stem cell proliferation in vivo in several animal models. However, the molecular mechanisms underlying this effect have not been studied in depth. The mammalian intestinal epithelium has one of the highest cells turn-over rates due the constant attrition suffered due to its functions of degradation, absorption of nutrients and evacuation of unnecessary remains. As such, in this organ there is a large volume of stem cells in constant division and differentiation, making the intestine an attractive model to evaluate the impact of HBOT. In this thesis we were able to modulate gradually murine intestinal stem cell (ISC) proliferation and migration using HBOT. Exposure to HBOT for twenty days in an experimental hyperbaric chamber promotes a synchronized increase in the proliferation of CTIs per crypt. Since the metabolic enzyme mTORc1 modifies its activity depending on oxygen levels, in response to intermediary factors such as HIF-1α or REDD1, it was tested whether the mTORc1 pathway is mediating the effects of HBOT. Interestingly, mice injected with Rapamycin (an allosteric inhibitor of mTORc1) increased the proliferation of ISCs, at similar levels observed in animals submitted to HBOT for 20 days. However, it is striking that the combined use of HBOT with Rapamycin does not generate such an increase in the proliferation of ISC. Rapamycin effects can be explained due its ability to mimic a caloric restriction (CR). It has been suggested that CR could be simulated by the administration of Rapamycin, the latter evaluated by the decrease in phosphorylation levels of one of the
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La señalización de angiopoyetinas a través de receptores TIE estimula la diferenciación de células troncales neurales obtenidas desde médula espinal de ratón

Silva Pinto, Pablo Roberto 12 1900 (has links)
Magíster en Bioquímica en el área de especialización en Bioquímica Clínica Aplicada / Memoria para optar al título profesional de Bioquímico / En los últimos años, las células troncales han surgido como una promisoria alternativa de terapia regenerativa en la búsqueda de nuevas estrategias para abordar distintas patologías que involucran un daño celular y la consecuente disfunción de un tejido u órgano. En el caso del sistema nervioso central, el recambio celular se encuentra sustentado sobre una población de células multipotentes denominadas células troncales neurales (CTN). Recientes estudios sugieren que este tipo células troncales está presente en la médula espinal, donde el nicho neurovascular jugaría un rol protagónico en la regulación funcional de CTN presentes a través de moléculas angiogénicas y su señalización. En este contexto, las angiopoyetinas (Angs) han sido relacionadas con mecanismos de neuroprotección y/o neurogénesis en zonas encefálicas, aunque se desconoce su eventual participación en médula espinal (ME). Sobre la base de estos antecedentes, esta tesis postula que “Angiopoyetina 1 (Ang1) estimula la diferenciación de CTN aisladas de médula espinal, de manera independiente a su receptor Tie2”. Para evaluar este postulado se generaron cultivos de neuroesferas a partir de ME de ratones, las cuales fueron validadas como modelo de CTN sobre la base de su potencial de proliferación y diferenciación. En estas neuroesferas se detectó la expresión del mRNA de Ang1, sin embargo fue imposible detectar el mRNA del receptor Tie2 tanto en condiciones proliferativas, como de diferenciación. Finalmente se estudió el eventual rol de Ang1 sobre las CTN, para lo cual se agregó Ang1 recombinante sobre los cultivos, y se evaluaron cambios en los patrones de expresión de los marcadores diferenciación. Los resultados obtenidos indican que las células tratadas con con Ang1 mantendrían la expresión, del marcador de troncalidad, SOX2, en comparación a células con el mismo tiempo de diferenciación, pero sin tratamiento. Paralelamente se observó una disminución de la diferenciación astrocítica, reflejada en la baja de la expresión de GFAP. Los resultados de este proyecto podrán entregar valiosa información respecto de los mecanismos involucrados en la regulación funcional de CTN en ME y constituir la base de estrategias dirigidas a la posible modulación de un evento de regeneración en este tejido. / Over the past few years, stem cells have emerged as one promissory alternative of regenerative therapy in the discovery of new therapies to overcome different pathologies than induce tissue or organ malfunction, due to cellular damage. In the case of central nervous system, cellular renewal is sustained by a population of multipotent cells known as neural stem cells (NSC). Recent studies suggest this type of cells are present on the spinal marrow, where the neurovascular center would have an important role on the regulation of the present NSC, through the signaling of angiogenic molecules. In this context, angiopoietins (Angs) have been related with mechanisms of neuroprotection and/or neurogenesis in encephalic zones, although their possible participation in the spinal marrow (SM) is unknown. Considering this background, this thesis postulates that “Agiopoietin 1 (Ang1) stimulates the differentiation of neural stem cells (NSC) isolated from spinal marrow, in a Tie2 receptor independent way”. To evaluate this assumption, neurospheres cultures were grown from mice SM, which were validated as a model of NSC due to their ability to proliferate and differentiate. On these neurospheres, the expression of Ang1 mRNA was detected, however, detection of Tie2 receptor mRNA was impossible, neither on proliferation or differentiation conditions. Finally, the possible role of Ang1 over NSC was studied. In order to do this, recombinant Ang1 was added to the obtained cultures and changes on expression patterns of neural differentiation markers were evaluated. The obtained results indicate that the Ang1 treatment would remain stemness, measure by SOX2 expression, in comparison to cells with the same time of differentiation, but without treatment. At the same time, a decrease in astrocytic differentiation was observed, reflected by the low expression of GFAP. The results of this project may deliver valuable information with respect of the possible mechanisms involved in functional regulation of NSC in SM and, constitute the foundations for directed strategies to the possible modulation of regeneration events on this tissue
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Células troncales mesenquimáticas humanas (hMSC) eliminan eficientemente las especies reactivas de oxígeno (ROS) y de nitrógeno (RNS)

Valle Prieto, María Araceli January 2010 (has links)
Tesis presentada a la Universidad de Chile para optar al grado académico de Doctor en Farmacología / El trasplante de células troncales mesenquimáticas humanas (hMSC) derivadas de médula ósea ha mostrado ser terapéutico en patologías como osteogénesis imperfecta, reacción del injerto contra huésped e infarto agudo al miocardio. Además, ha permitido recuperar las funciones motoras y sensoriales en animales con infarto cerebral, la producción de insulina en animales diabéticos y evitar la muerte neuronal en animales con enfermedad de Parkinson. En todas estas patologías el daño tisular se vincula a estrés oxidativo (EO). A la fecha, los mecanismos propuestos para explicar los efectos terapéuticos de las MSC son: i) diferenciación a células del parénquima, ii) producción de factores tróficos que promueven proliferación y diferenciación de progenitores locales, iii) neovascularización, iv) inmunomodulación. Nosotros proponemos que las hMSC además actuarían como “atrapadores” de especies reactivas de oxígeno (ROS) y/o de nitrógeno (RNS), protegiendo así a las células del parénquima del daño oxidativo. Para evaluar esta hipótesis hemos caracterizado a las hMSC con respecto a su capacidad de manejar el EO. Primero, se determinó si las hMSC resisten a la muerte inducida por la exposición a ROS (H2O2), a RNS (SNAP) o a ambas (SIN-1) y se determinaron los niveles intracelulares de ROS/RNS cuando las células son expuestas a SIN-1. Luego, se determinaron las herramientas que las hMSC poseen para depurar las especies reactivas. Para ello, se cuantificó la expresión (RT-PCR tiempo real) y actividad (espectrofotometría) de enzimas asociadas a la eliminación de ROS y/o RNS: superóxido dismutasa (SOD), catalasa (CAT) y glutatión peroxidasa (GPX1). Además, se evaluaron los niveles basales de glutatión total (GSx). Finalmente, se determinó cual es la contribución del GSx dentro de los mecanismos asociados al manejo del EO que poseen las hMSC. Para ello se evaluó la resistencia a la muerte inducida por la exposición a ROS y/o RNS de hMSC a las cuales se les depletó de GSx. Los resultados de esta tesis muestran que las hMSC son significativamente más resistentes a la muerte inducida por ROS y/o RNS que las células INS-1 (modelo de células susceptibles al EO) y tan resistentes como los fibroblastos de piel (modelo de células resistentes al EO). Las hMSC constitutivamente expresan todas las enzimas estudiadas y tienen altos niveles de GSx. Esto se correlaciona con una baja acumulación intracelular de ROS/RNS y una baja susceptibilidad a la muerte inducida por EO. Dentro de las herramientas para eliminar ROS y/o RNS encontrados en las hMSC, el GSx es central de vital importancia, ya que cuando la producción de éste es inhibida, las hMSC pierden su capacidad para resistir a la muerte inducida por EO. En conjunto estos resultados permiten concluir que, al menos in vitro, las hMSC manejan eficientemente el EO. De mantenerse esta propiedad in vivo, las hMSC contribuirían a la regeneración tisular disminuyendo el daño producido por el EO / Bone marrow-derived human mesenchymal stem cells (hMSC) transplantation is therapeutic for osteogenesis imperfecta, graft versus host disease, and acute myocardial infarction. Pre-clinical studies have shown that exogenous hMSC induces recovery of motor and sensory functions after stroke, preventing neuronal death in models of Parkinson's and promoting hyperglycemia reversion in diabetic rodents. With these pathologies tissue damage is associated to oxidative stress (OS). The mechanisms behind therapeutic effects of MSC are: i) differentiation into parenchymal cells, ii) production of trophic factors that promote proliferation and differentiation of local stem cells, iii) neovascularization, and iv) immuno modulation. Here we propose that hMSC also might act as reactive oxygen species (ROS) and/or reactive nitrogen species (RNS) scavenges. Hence, parenchymal cells could be protected from oxidative damage and death. To test this hypothesis we characterized the potential of hMSC to manage OS. First, it was determined hMSC susceptibility to ROS (H2O2), RNS (SNAP) or both (SIN-1) induced death. Also, intracellular levels of ROS/RNS were determined in cells exposed to SIN-1. Then we identified hMSC tools to eliminate the reactive species. To do this, gene expression coding enzymes associated to ROS and/or RNS elimination (superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT) and glutathione peroxidase (GPX1)) were quantified by real time RT-PCR and enzymatic activity was measured by spectrophotometry. In addition, baseline levels of total glutathione (GSx) were evaluated. Finally we determined the importance of the GSx for hMSC tools associated with the management of the OS. To do this, we evaluated hMSC without GSx resistance to ROS and/or RNS induced death. Our results of this thesis show that hMSC are significantly more resistant to death induced by ROS and/or RNS than INS-1 cell model (susceptible to OS) and stronger as skin fibroblasts (cell model resistant to OS). hMSC constitutively express all the enzymes studied and have high levels of GSx. This correlates with a low accumulation of intracellular ROS/RNS and low susceptibility to death induced by OS. Among the tools to eliminate ROS and/or RNS found in hMSC, GSx is critical, because when this production is inhibited hMSC lose their resistance to the death induced by OS. Taken together these results allow to conclude that, at least in vitro, hMSC efficiently managed the OS. If this property exists in vivo, hMSC could contributed to tissue regeneration and decrease of the damage caused by OS
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Células troncales mesenquimáticas en presencia de ácido hialurónico y dexametasona regeneran cartílago articular

Nazal Lama, Nicolás Ignacio January 2006 (has links)
Memoria para optar el título de Bioquímico / No autorizada por el autor para ser publicada a texto completo en el Portal de Tesis Electrónicas / Las estrategias clínicamente usadas para el tratamiento de lesiones articulares se enfocan en aliviar el dolor y la inflamación, porque el cartílago adulto tiene una mínima capacidad regenerativa. Así, frente a un daño severo el cartílago hialino es remplazado por cartílago fibroso, que se distingue del primero en la composición de su MEC y en consecuencia, en sus propiedades biomecánicas. El objetivo del presente trabajo es desarrollar una estrategia de terapia celular que permita regenerar el cartílago articular. La hipótesis de trabajo es que células troncales mesenquimáticas (MSC) autólogas, embebidas en ácido hialurónico (HA) e implantadas en una lesión condral grave, en presencia de dexametasona como anti-inflamatorio e inductor de diferenciación, regeneran in vivo cartílago hialino y no fibrocartílago. Para evaluar dicha hipótesis, se produjo quirúrgicamente una lesión de 20,25 mm2 x 1,5 mm de profundidad (aproximadamente 30 mm3) en el cartílago patelar de conejos New Zealand. Dos semanas después, en dicha lesión se implantaron 1x106 cMSC, previamente aisladas de la médula ósea del mismo animal, embebidas en HA. A partir de ese momento, se inyectó intra-articularmente 0,25 mg/Kg de dexametasona una vez a la semana. A las 6 semanas post-implante, los conejos fueron sometidos a eutanasia, se disectaron sus cartílagos articulares y se analizaron molecularmente en función de la expresión de col1, col2, vers, agg y gapdh, para discriminar entre cartílago hialino y fibroso. Los resultados obtenidos en este trabajo muestran que es factible obtener MSC a partir de aspirados de médula ósea de conejo, dado que las células adherentes aisladas proliferan en presencia de un medio definido suplementado con suero fetal bovino (SFB) y se diferencian in vitro a adipocitos, osteocitos y condrocitos. Por su parte y como era de esperar, se observó que las lesiones condrales de espesor completo cicatrizan a expensas de tejido fibroso, que expresa altos niveles de col1 y vers y bajos niveles de col2 y agg. En cambio, si a 2 semanas post-lesión, en ella se implantan cMSC embebidas en HA y luego se inyecta intra-articular y post-operatoriamente dexametasona, 6 semanas post-implante se genera un cartílago que expresa altos niveles de col2 y agg y bajos niveles de col1 y vers. Estos resultados sugieren que es posible regenerar cartílago hialino utilizando MSC en presencia de HA y dexametasona en un plazo de 6 semanas. Lo cual debe corroborarse con estudios histológicos y funcionales, para poder afirmar que se dispone de una estrategia terapéutica que garantiza la regeneración del cartílago hialino
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Perfil fenotípico y capacidad inmunomoduladora de distintos clones de células troncales mesenquimales

Martínez-Peinado, Pascual 26 January 2017 (has links)
Las células madre mesenquimales (MSC) son un grupo heterogéneo de células multipotentes que pueden ser aisladas de distintos tejidos. Las MSC tienen propiedades inmunológicas únicas, que han hecho de éstas células un foco de interés en el campo de la terapia celular. Esta función inmunomoduladora de las MSC, fue descrita por primera vez en el año 2000 por Lietchty KW, pero los mecanismos mediante los cuales las MSCs ejercen dicha función inmunomoduladora son, todavía, desconocidos. El contacto célula-célula o la liberación de factores solubles pueden ejercer un papel esencial. En cuanto a la terapia celular con MSCs, el primer ensayo clínico fue en 1995 y, desde ese momento, el número de ensayos ha ido en aumento, hasta que, a día de hoy, hay en curso más de 200 ensayos clínicos para distintas enfermedades. No obstante, debido al bajo número de pacientes tratados, no se ha podido establecer una conclusión definitiva de la seguridad del tratamiento con dichas células. Por otro lado, la mayoría de los trabajos publicados relacionados con MSCs, son trabajos en los cuales se han utilizado poblaciones heterogéneas de MSCs y no poblaciones homogéneas clonogénicas. Publicaciones recientes han demostrado la capacidad de las MSCs para aumentar in vitro la frecuencia de células Treg, postulándose que éste puede ser precisamente uno de los principales mecanismos responsables de la inmunomodulación ejercida por las MSCs. Ello podría tener importantes implicaciones clínicas, tanto en el campo de los alotransplantes, para tratar el rechazo inmunológico mediante el establecimiento o inducción del proceso de tolerancia inmunológica, como en patologías autoinflamatorias/ autoinmunes, al reestablecer la tolerancia inmunológica perdida; e incluso, permitiría reducir la dosis de los fármacos inmunosupresores habitualmente utilizados en estas enfermedades, con la consiguiente disminución de efectos secundarios. En este trabajo se lleva a cabo el estudio de comparación de cinco clones de MSC derivados de tejido adiposo. En dicho se han comparado marcadores de membrana, perfiles de citocinas, capacidad para inhibir las distintas poblaciones del Sistema Inmunitario, así como su efecto sobre la población Treg. Además, se realizaron ensayos para determinar el efecto sobre la viabilidad de linfocitos. La conclusión final de este trabajo es, brevemente, que los distintos clones poseen capacidades diferentes de inmunomodulación, a todos los niveles. Estas diferencias pueden ser aprovechadas en pro de una optimización de los protocolos de terapia celular con el objetivo último de realizar las mismas de una forma más eficaz, personalizada y reproducible.
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Proyecto de consultoría: "Evaluación de implementación de micro-planta de producción de células y aumento de capital en cellus medicina regenerativa S.A."

Arancibia Reyes, Rodrigo Esteban January 2015 (has links)
Autor no autoriza el acceso a texto completo de su documento hasta el 18/12/2020. / Magíster en Gestión para la Globalización / Las células madre adultas cumplen un papel fundamental en la regeneración y mantención de los tejidos durante toda la vida. La terapia celular autóloga es un procedimiento personalizado con múltiples aplicaciones en diversas patologías. Consiste en la purificación de células a partir de una pequeña muestra de tejido, para luego ser reinyectadas en los órganos dañados del mismo paciente. CELLUS Medicina Regenerativa S.A. (CELLUS) es una empresa de biotecnología dedicada a la investigación, innovación y comercialización de productos biológicos personalizados y terapias celulares autólogas. Para esto, la empresa necesita contar con instalaciones idóneas que permitan el desarrollo y aplicación clínica de estas nuevas tecnologías, y por ende se requiere la implementación de una micro-planta de producción de células humanas y pabellón de cirugía menor. Para esto, el directorio de CELLUS solicitó a Rodrigo Arancibia, Gerente General de la compañía, desarrollar la evaluación técnico-económica y búsqueda del financiamiento necesario. El presente trabajo resume los pasos efectuados de análisis y gestión hasta llegar al aumento de capital requerido para realizar el proyecto. El objetivo general consiste en evaluar la factibilidad estratégica y financiera de implementar una Micro-Planta de Producción de Células, y analizar las opciones para realizar un aumento de capital en Cellus Medicina Regenerativa S.A, con el fin de financiar el proyecto. Se determinó el potencial de mercado, tamaño de la inversión, proyecciones y estrategia de financiamiento. Se realizó un estudio estratégico de la compañía definiendo propósitos visionarios, y realizando un análisis competitivo y del entorno. Se recomendó efectuar el proyecto por tratarse de una inversión estratégica para la compañía y además por tener un impacto positivo en la proyección de flujos de efectivo con un VAN de CLP $167 millones a 5 años, una TIR del 67% y un break even de 2,3 años. El tamaño de la inversión para el primer año es cercano a los $70 millones de pesos, pero existen requerimientos de capital para el segundo y tercer año de proyecto. Esto se financiará con capitales del gobierno y otros potenciales inversionistas. Se investigaron distintas fuentes de financiamiento provenientes desde el gobierno, inversionistas ángeles, venture capital y nuevos socios estratégicos. Se optó por una combinación de capitales provenientes de fondos públicos y un aumento de capital de CLP $90,05 millones a cambio del 10% de la compañía. Esto fue posible gracias a la incorporación de un nuevo socio estratégico llamado Clínica CEYS. A la fecha, CELLUS se encuentra ya con sus nuevas instalaciones construidas y certificadas, que incluyen el pabellón y sala limpia en el edifico Torre Marriott en Santiago, y se cumplieron los requerimientos de capital del proyecto de construcción.
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The role of Cbx4/Polycomb-2 in epidermal stem cell homeostasis.

Luis, Nuno Miguel 07 November 2011 (has links)
Human epidermis relies on a population of adult stem cells to maintain its homeostasis. Stem cells transit from a dormant to an active state and undergo a tightly regulated process of differentiation that replenishes the tissue according to its needs. This process either replaces cells that get shed away, or contributes to tissue healing upon injuries, such as wounding. Distinct molecular mechanisms are required to keep human epidermal stem cells localized in their niche and for their active proliferation and mobilization, while others regulate their differentiation status. However, little is known about the proper global chromatin modifications that ensure the correct transition between these stem cell states. This work shows that Cbx4, a Polycomb Repressive Complex-1 (PRC1)-associated protein, maintains human epidermal stem cells slow-cycling and undifferentiated, while protecting them from senescence. Interestingly, abrogating the polycomb activity of Cbx4 impairs its anti-senescent function without affecting stem cell differentiation, indicating that differentiation and senescence are independent processes in human epidermis. Conversely, Cbx4 inhibits stem cell activation and differentiation through its SUMO ligase activity. Global transcriptome and chromatin occupancy analyses indicate that Cbx4 regulates modulators of epidermal homeostasis and represses factors, such as Ezh2, Dnmt1, and Bmi1, to prevent the active stem cell state. Interestingly, Cbx4 also represses genes required for neuronal fate repression, suggesting that it might have a role in ectoderm patterning during development. Cbx proteins are differently expressed during epidermal differentiation and the activity of Cbx4 towards promoting human epidermal stem cell quiescence is unique among the Cbx proteins. This suggests that different Polycomb complexes are assembled, based on the availability of its core member, and balance epidermal stem cell dormancy and activation, while continually preventing senescence and differentiation. / La homeostasis de la epidermis humana depende de una población de células troncales adultas (CTAs). Las CTAs alternan ciclos de quiescencia y actividad, seguidos por una regulación estricta de su diferenciación, según las necesidades celulares del tejido. Este proceso es esencial para repoblar el tejido de células envejecidas o dañadas. Cada estadío por el que transita una CTA está regulado por procesos moleculares específicos. Sin embargo, aún sabemos poco sobre los procesos que regulan la reorganización de la cromatina necesarios para mediar dichas transiciones en la población de las CTAs. Estos resultados demuestran que la proteina Cbx4, pertenciente al complejo Polycomb Repressive Complex-1 (PRC1), es necesaria para mantener a las CTAs de la epidermis humana quiescentes, indiferenciadas, y protegidas de la senescencia. A nivel molecular, la actividad polycomb de Cbx4 es únicamente necesaria para su función antisenescente, pero es dispensable para la regulación de la proliferación y diferenciación de las CTAs. La inhibición de la proliferación y diferenciación celular sin embargo depende de la activdad E3 SUMO ligasa de Cbx4. Analisis del transcriptoma global y de unión a la cromatina (ChIP), demuestran que Cbx4 regula la expresión de moduladores esenciales de la homeostasis de la epidermis, y reprime la expresión de factores necesarios para la activación de las CTAs, tales como Ezh2, Dnmt1 y Bmi1. Cabe destacar que Cbx4 también reprime la expresión de genes que determinam el linage neuronal, lo que sugiere que Cbx4 pueda ser importante para separar el neuroectodermo entre ectodermo y neuronas, durante el desarrollo embrionario. Cbx4 es la única proteina Cbx capaz de inducir entrada en quiescencia de las CTAs, y el resto de proteinas Cbx se expresa de forma diferente durante la diferenciación en la epidermis. Por lo tanto, nuestros estudios sugieren que la actividad de distintos complejos Polycomb actúa en los sucesivos estadíos de quiescencia, proliferación y diferenciación de las CTAs, a la vez que impiden su senescencia de forma constante.

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