Orientador: Herculano Penna Medina Filho / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-21T02:10:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Carvalho_MarliRezendeTessarinide_M.pdf: 3607140 bytes, checksum: 67cfd5fabfb4f17d48e3c396bcee69b2 (MD5) Previous issue date: 1995 / Mestrado / Genetica / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador: Marcos Antonio Machado / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-25T23:46:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Justino-Kuga_ElaineAparecida_M.pdf: 5500665 bytes, checksum: 5d07026a0dc49cbeb174c82abd0c0995 (MD5) Previous issue date: 1999 / Resumo: Estudos preliminares sobre a localização de epítopos na proteína do capsídeo (CP) de três isolados de CTV ('Pêra IAC', 'Pêra CB-22' e 'Pêra CB-104') foram realizados em três etapas. Na primeira, foi realizada a amplificação de oito regiões distintas do gene da CP, codificantes para três regiões Nterminais (aa 1 até 70; aa 1 até 120; aa 1 até 170), três regiões C-terminais (aa 70 até 223; aa 120 até223; aa 170 até 223) e duas regiões internas da CP (aa 37 até 67 e aa 64 até 94) onde haviam sido determinadas diferenças significativas entre as CPs dos três isolados. Na segunda etapa, foram avaliadas duas estratégias para expressão dos peptídeos de interesse: clonagem em vetor de expressão através de ligação AT (vetor Pinpoint TM Xa-1 T, Promega) e clonagem das seqüências alvo em vetores do sistema de expressão pET. O vetor Pinpoint TM Xa-1 T, carreando como inserto o gene inteiro da CPCTV, obtido como produto de PCR após amplificação do cDNA dos três isolados, transformou células competentes de E. coli JM109, mas após indução com IPTG, não houve expressão da proteína de fusão esperada. Os vetores do sistema pET, após ligação das seqüências alvo, não transformaram células competentes de E. coli BL21(DE3)pLysS. Na terceira etapa, três proteínas recombinantes (MBP-CPCTV, CB-22 e CB-104) produzidas a partir da expressão do gene da CP-CTV dos três isolados, foram clivadas com brometo de cianogênio. Os produtos de clivagem foram avaliados através de '¿Western Blotting¿ contra anticorpos monoclonais específicos para CTV. O monoclonal IC-04.6, desenvolvido contra a proteína recombinante CB-22 detectou epítopos, numa reação intensa, em peptídeos com massa estimada em 27 kDa e 18 kDa, originários da CB-22; o monoclonal 39-08, desenvolvido contra a proteína recombinante CB-104 detectou epítopos, numa reação moderada, em peptídeos com massa estimada de 28 kDa e 14 kDa, originários qa CB-104; o monoclonal MCA-13, desenvolvido contra um isolado da Florida, detectou epítopos em peptídeos originários das proteínas recombinantes MBP-CPCTV e CB-104; o monoclonal 3DF1, desenvolvido contra isolados de CTV espanhóis, detectou epítopos em peptídeos originários da CB-22 e CB-104 e o monoclonal 3CA5, desenvolvido contra isolados espanhóis de CTV, detectou epítopos apenas num peptídeo com massa estimada de 18 kDa presente na CB-22. Estes resultados sugerem que diferentes epítopos são reconhecidos pelos cinco monoclonais avaliados e que serão necessárias novas estratégias para avaliá-los / Abstract: Preliminary studies about the epitopes location in the capside protein of the isolates of the citrus tristeza virus of three isolate ('Pêra IAC', 'Pêra CB-22' and 'Pêra CB-104') were accomplished. In the first phase, the amplification was accomplished with specific direct and reverse primers of eight different regions of the CP gene, coding for three N-terminal peptides (aa 1 to 70, aa 1 to 120 and aa 1 to 170), three C-terminal peptides (aa 70 to 223, aa 120 to 223 and aa 170 to 223) and two internal peptides of CP (aa 37 to 64 and aa 64 to 90). In the second phase they were appraised two strategies for expression of the peptides: cloning in expression vector through AT cloning site (vector Pinpoint TM Xa-1 T promega), and cloning of the coding sequences in vectors of the system pET. Vector Pinpoint TM Xa-1, containing as insert the whole gene of CP, obtained as PCR's product after amplification of the three isolates' cDNA, transformed competent cells E. coli JM109, but after induction with IPTG there was not expression of the peptides of interest. The vectors of the pET system didn't transform competent cells E. coli BL21 (DE3)pLysS. In the third phase, three recombinant proteins (MBP-CPC1V, CB-22 and CB-104), produced from the expression of the CP-C1V gene of the three isolates, they were broken with cyanogen bromide. The break products were evaluated through "Western Blotting" against monoclonal antibodies specific for CTV. The monoclonal IC-04.6, developed against the recombinant protein CB-22 detected epitopes, in an intense reaction, in peptides with mass esteemed in 27 kDa and 18 kDa, original of CB-22; the monoclonal 39-08, developed against the recombinant protein CB-104 detected epitopes, in a moderate reaction, in peptides with esteemed mass of 28 kDa and 14 kDa, original of CB-104; the monoclonal MCA-13, developed against the T-36 isolate from Florida, detected epitopes in original peptides of the recombinants proteins MBP-CPCTV and CB-104; the monoclonal 3DF1, developed against Spanish isolates of CTV, detected epitopes in original peptides of CB-22 and CB-104 and the monoclonal 3CA5, developed against Spanish isolates of C1V, just detected epitopes in a peptide with esteemed mass of 18 kDa present in CB-22. These results suggest that the five monoclonal recognizes different epitopes and that will be necessary new strategies to evaluate them / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Avelino Rodrigues de Oliveira / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-18T01:54:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Musumeci_MariaRaphaela_D.pdf: 2493138 bytes, checksum: e7f8cf3f51346d74cff2a6545a19d351 (MD5) Previous issue date: 1974 / Resumo: O desenvolvimento de compostos neo-sintetizados acumulados após inoculação com Phytophthora citrophthora foi verificado em tecidos de duas espécies cítricas - Citrus aurantium L. (laranjeira azeda) e Citrus sinensis Osbeck (laranjeira doce), respectivamente resistente s suscetível a esse fungo. Casca, lenho e ramos dos dois hospedeiros foram colocados em placas de Petri e inoculados com uma suspensão micelial do fungo. Em diferentes períodos após a inoculação os tecidas foram extraídos com Etanol 95% á quente e os extratos concentrados foram cromatografados e bioensaiados. 0 exame a luz ultra-violeta detectou nos cromato gramas de extratos de cascas e ramos de laranjeira azeda inoculada, um composto fluorescente com Rf 0,30 em Benzeno ; Éter (80:20). Esse composto foi denominado "composto 1" (C1) e é sintetizado pelos tecidos do hospedeiro rasistente 24 horas após a inoculação. A região do ramo importante para a síntese desse composto foi a casca, não se observando o desenvolvimento do nos tecidos do lenho. O C1 foi desenvolvido também em resposta a lesão mecânica nos tecidos de casca não inoculados e incubados por 72 horas. O C1 foi produzido pelos tecidos de laranjeira azeda em resposta a inoculação com os patógenos Phytophthora parasitica e Phytophthora cinnamomi e não foi produzido após a inoculação com os não patógenos Phytophthora infestans e Ceratocystis paradoxa. Os tecidos da laranjeira doce não desenvolveram o em resposta a inoculação com o patógeno ...Observação: O resumo, na íntegra poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: The development of newly synthetized compounds which a cumulate after inoculation with Phytophthora citrophthora was verified in tissues of two Citrus varieties - Citrus aurantiurn L (sweet orange) and Citrus sinensis Osbeck (sour orange), respectively resistant and susceptible to this fungus. Detached bark, wood and stems of both hosts were placed in Petri dishes and inoculated with a mycelial suspension of the fungus. At different periods after inoculation the tissues were extracted with hot 95% Ethanol and the concentrated extracts we re chromatagraphed and bioassayed. A fluorescent compound with Rf 0.30 in Benzenb:Ether (80:20) was detected in chromatograms of bark and stems of inoculated sour orange by observation under the ultraviolet light. This compound was named Compound 1 and it was developed in the resistant hast tissues 2 4 hours after inoculation. Compound 1 was detected only in bark extracts when bark and wood were inoculated separately. Compound 1 was also developed after 72 h in response to mechanical injury in incubated and noniculated bark tissues. Compound 1 was produced by sour orange in response to inoculation with the pathogens P.parasitica and P.cinnamomi, but not after inoculation with the non-pathogens P.infestans and C.paradoxa. Sweet orange tissues did not develop Compound 1 in response at inoculation with the pathogen P.citrophthora. Chromatography of extracts from stem and bark tissues showed a compound with Rf 0.36 in Benzene:Ether (80:20) which was visible under the UV light ...Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Doutorado / Doutor em Ciências

A fin de obtener información sobre las especies de artrópodos depredadores que viven en los cultivos de cítricos del País Valenciano se han analizado muestras recogidas cada quince días en diez parcelas de cítricos durante tres años, 1999 a 2001. El muestreo se ha realizado con aspirador de motor, aspirándose en cada muestra 8.000 hojas aproximadamente. Sobre un total de 5.265 adultos se han identificado 16 especies de coccinélidos, siendo las mas frecuentes Scymnus interruptus y Sc. subvillosus. Ambas especies aparecen asociadas y predominan fundamentalmente entre junio y octubre. Junto a Propylaea 14-punctata, se alimentan aparentemente de pulgones. Otros coccinélidos comunes son Stethorus punctillum y Rodolia cardinalis. En 7.038 adultos de neurópteros capturados se han identificado ocho especies. Las mas abundantes fueron Semidalis aleyrodiformis y Conwentzia psociformis, que aparecen asociadas en las mismas parcelas aunque abundan en épocas del año distintas. Las dos especies de coniopterígidos muestran una correlación negativa con los crisópidos, y en particular con la tercera especie de neurópteros en abundancia, Chrysoperla carnea. A partir de 15.983 adultos muestreados se han identificado trece especies de formícidos, siendo la mas abundante Lasius niger, seguida de Pheidole pallidula. Ambas muestran dos máximos anuales, entre mayo y septiembre. Hemos encontrado correlaciones negativas entre la abundancia de estas dos especies en las mismas parcelas y correlación positiva entre Ph. pallidula, Plagiolepis schmitzii y Tapinoma erracticum. L. niger aparece asociada a parcelas donde los pulgones son abundantes. Se han encontrado 11.486 arañas y entre ellas se han identificado 55 especies, incluidas en 17 familias. Las especies mas abundantes son Icius hamatus y Theridion pinastri. Como especies secundarias se encuentran Philodromus cespitum, Cheiracanthium mildei y Oxyopes heterophthalmus. Las poblaciones de arañas están formadas sobre todo por inmaduros... / A fi d'obtindre informació sobre les espècies d'artròpodes depredadors que viuen en els cultius de cítrics del País Valencià s'han analitzat mostres arreplegades cada quinze dies en deu parcel·les de cítrics durant tres anys, 1999 al 2001. El mostratge s'ha realitzat amb aspirador de motor, aspirant-se en cada mostra 8.000 fulles aproximadament. Sobre un total de 5.265 adults s'han identificat 16 espècies de coccinèlids, sent les més freqüents Scymnus interruptus i Sc. subvillosus. Ambdós espècies apareixen associades i predominen fonamentalment entre juny i octubre. Junt amb Propylaea 14- punctata, s'alimenten aparentment de pugons. Altres coccinèlids comuns són Stethorus punctillum i Rodolia cardinalis. En 7.038 adults de neuròpters capturats s'han identificat huit espècies. Les més abundants van ser Semidalis aleyrodiformis i Conwentzia psociformis, que apareixen associades en les mateixes parcel·les encara que abunden en èpoques de l'any distintes. Les dos espècies de coniopterígids mostren una correlació negativa amb els crisópids, i en particular amb la tercera espècie de neuròpters en abundància, Chrysoperla carnea. A partir de 15.983 adults mostrejats s'han identificat tretze espècies de formícids, sent la més abundant Lasius níger, seguida de Pheidole pallidula. Ambdós mostren dos màxims anuals, entre maig i setembre. Hem trobat correlacions negatives entre l'abundància d'estes dos espècies en les mateixes parcel·les i correlació positiva entre Ph. pallidula, Plagiolepis schmitzii i Tapinoma erracticum. L. níger apareix associada a parcel·les on els pugons són abundants. S'han trobat 11.486 aranyes i entre elles s'han identificat 55 espècies, incloses en 17 famílies. Les espècies mes abundants són Icius hamatus i Theridion pinastri. Com a espècies secundàries es troben Philodromus cespitum, Cheiracanthium mildei i Oxyopes heterophthalmus. Les poblacions d'aranyes estan formades sobretot per immadurs i apareixen al llarg de tot l'any, amb un màxim a l'estiu. Finalment, en 243 adults trobats en els mostratges s'han identificat 5 espècies d'antocòrids, destacant per la seua abundància Cardiastethus fasciiventris i dos espècies d'Orius, O. albidipennis i O. laevigatus. Els antocòrids són escassos i de distribució irregular. / To obtain information on the identity, abundance and seasonal trend along the year of arthropod predators that live in citrus orchards from Valencia (Spain), samples were collected every 15 days all along the year for three years (1999 to 2001) from 10 commercial citrus plantations. Samples were collected with an engine-powered vacuummachine and each simple came from about 8,000 leaves. Out of 5,265 adults, 16 species of coccinellids were identified, being the most common Scymnus interruptus y Sc. subvillosus. Both species appear associated in the same orchards and are abundant between June and October. Together with Propylaea 14-punctata, they feed apparently on aphids. Other common coccinellids were Stethorus punctillum y Rodolia cardinalis. Out of 7,038 adults of Neuroptera collected, eight species were identified. The two most abundants, Semidalis aleyrodiformis and Conwentzia psociformis, appeared associated in the same orchards, though in different periods of the year. The two coniopterigid species showed a negative correlation with the chrysopids, and especially with the third species of Neuroptera in abundance, Chrysoperla carnea. From 15.983 adults sampled, thirteen species of Formicidae were identified. Lasius niger was the most abundant, followed by Pheidole pallidula. Both show two annual peaks, between May and September. Negative correlations between the abundance of these two species in the same orchards were found and positive correlations appeared between Ph. pallidula, Plagiolepis schmitzii and Tapinoma erracticum. L. niger appeared associated with orchards where aphids were abundants. In all, 11.486 spiders were collected, and among them 55 especies were identified, belonging to 17 families. The most abundant species were Icius hamatus and Theridion pinastri. As secondary species appeared Philodromus cespitum, Cheiracanthium mildei and Oxyopes heterophthalmus. Spider populations were formed mostly by immatures and appeared all along the year, with a maximum in summer. Finally, out of 243 adults found in the samples, five species of anthocorids were identified. The most common were Cardiastethus fasciiventris and two species of Orius, O. albidipennis and O. laevigatus. Anthocorids were scarce and irregularly distributed. / Alvis Dávila, L. (2003). Identificación y abundancia de artrópodos depredadores en los cultivos de cítricos valencianos [Tesis doctoral no publicada]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/119175 / TESIS

Orientadora: Derlene Attili de Angelis / Banca: Katia Cristina Kupper / Banca: Andre Rodrigues / Resumo: A transformação da produção agrícola atual de forma sustentável e produtiva se caracteriza como um dos maiores desafios da atualidade. A transição de manejos convencionais para aqueles mais sustentáveis é uma alternativa de transformação, na qual as plantas se tornam mais dependentes das interações microbianas, constituindo-se um fator chave no controle da produtividade e da qualidade nos ecossistemas agrícolas. O objetivo deste trabalho foi avaliar a influência do manejo de transição, da agricultura convencional para a agricultura orgânica, sobre a diversidade de fungos do solo, em cultivo de citros. O experimento foi realizado na área experimental de citros na Fazendo Santo Antonio do Lageado em Mogi Guaçu-SP. O delineamento utilizado foi em faixas contemplando dois tratamentos, manejo convencional (MC) e manejo de transição (MT) com quatro anos de implantação, avaliados no período seco e úmido, sob os parâmetros de número de unidades formadoras de colônia (UFC), riqueza e diversidade dos principais grupos de fungos, parâmetros micorrízicos e físico-químicos do solo. Os dados individuais foram submetidos a análise de variância e as médias comparadas pelo teste t. A associação das variáveis microbiológicas e físico-químicas do solo foi avaliada por meio do coeficiente de correlação de Pearson, sendo ambos os testes a 5% de probabilidade. Além disso, foi utilizada a análise de componentes principais para interpretação geral dos dados. As contagens de UFC não apresentaram diferenças entre tratamentos nos períodos avaliados, no entanto o MT demonstrou maior riqueza e diversidade de grupos fúngicos no solo em ambos os períodos. Foram identificados 11 táxons distintos, dentre eles Aspergillus spp., Fusarium spp., Metarhizium spp., Paecilomyces spp., Penicillium spp., Phialophora spp., ... (Resumo completo clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The productive and sustainable changing of the current agricultural production is one of the greatest challenges of our time. The transition from conventional agriculture to sustainable models is an alternative, which plants become more dependent for microbial interactions. That is a key factor for agricultural yield and quality in the ecosystems. The aim of this study was to evaluate the effects of transition management, from conventional agriculture to organic farming, on the soil fungal diversity in citrus cultivation. This experiment was performed in a citrus orchard settled at the Santo Antonio do Lageado farm, in Mogi Guaçu-SP. The design was in strip with two treatments, conventional management (CM) and transition management (TM). This assay has been conducted for four years and the present data refers to one year, assessed at the dry and wet season. The amount of colony forming units (CFU), richness and diversity of the major groups of fungi, mycorrhizal and physico-chemical parameters of the soil were applied. The individual data were submitted to analysis of variance and the means were compared by t test. The correlation of the soil microbiological and the physico-chemical attributes were tested by the Pearson correlation coefficient, all of them under probability of 5%. The principal component analysis (PCA) was applied in order to get a general overview of the data. The count UFC data showed no difference between treatments in the evaluated periods. However, the TM showed greater richness and diversity of the soil fungi groups at the both periods. We identified 11 distinct fungal taxa, including Aspergillus spp., Fusarium spp., Metarhizium spp., Paecilomyces spp., Penicillium spp., Phialophora spp., Neurospora spp., Trichoderma spp., Dematiaceous, Yeasts and Mucoromycotina. The fungal frequency showed ... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Resumo: Com o objetivo de verificar o efeito da concentração de ácido giberélico (0, 20, 40 e 80 mg/L) sobre a floração e produção da safra e entressafra da lima ácida 'Tahiti', foi conduzido um experimento em solo tipo Latossolo Vermelho Amarelo localizado no distrito de Kilombo, município de Iacanga - SP. O experimento foi constituído de quatro tratamentos, cinco blocos e o delineamento estatístico foi de blocos casualizados. Buscando melhorar a distribuição do produto na planta foi utilizado um espalhante adesivo organosiliconado. Verificou-se que com o aumento da concentração de ácido giberélico ocorreu diminuição na produção de flores da safra normal nos dois anos do experimento. Também foi observado, para a safra normal, redução no número de frutos, na produtividade por planta e uma tendência de aumento no peso médio individual dos frutos, como conseqüência da menor competição entre órgãos reprodutivos na planta. O diâmetro dos frutos também aumentou como conseqüência dessa menor competição. A concentração que promoveu os resultados mais efetivos foi de 80 mg/L. A produção da entressafra também foi afetada pelo aumento da concentração. Foi observado um aumento de 61,54% na produção em relação à testemunha, para a concentração de 80 mg/L. A testemunha e as demais concentrações não apresentaram diferenças estatísticas entre si com relação a produção da entressafra. A técnica apresentou-se economicamente viável para a produção da entressafra com a concentração de 80mg/L, estimando-se um retorno de R$ 2,26 por planta. / Abstract: With the objective to verify the effect of concentration of gibberellic acid on budding and fruit production of the Tahiti Lime's in the season and out of season an experiment was designed in "Yellow Red Latossolo" (type of soil), located in the district of Kilombo, Iacangaþs city (state of São Paulo). The experimental design was randomized blocks composed of five blocks each with four treatments (control, 20, 40 and 80 mg/L). In order to improve the distribution of the product in the tree, an adhesive organic sulfate was used. It was verified that an increase of gibberellic acid concentration decreased the number of flowers for the two years of the experiment occurred. In the season, it was observed that the number of fruits and the productivity diminished in the tree. It was also observed a trend of increase in the individual average weight of the fruits for the normal harvest as consequence of the lesser competition between reproductive organs in the tree. The diameter of the fruits also was magnified as consequence of the lower competition. The concentration that promoted the most effective results was 80 mg/L. The production of out season was also affected by the raise of concentration. An increase of 61.54% in production was observed evaluate control with the treatment of 80 mg/L. The control and others concentration (except 80 mg/l) didn't represent statistical significance in production of out season. / Orientadora: Izabel Cristina Leite / Coorientador: Paulo Roberto de Camargo e Castro / Banca: Selma Dzimidas Rodrigues / Banca: Teresinha de Jesus Deléo Rodriges / Mestre

Resumo: Xanthomonas axonopodis pv. citri (Xac) constitui um dos principais patógenos da citricultura mundial. Essa litobactéria causa cancro em folhas. ramos e frutos de citros em geral. ocasionando grandes perda econômicas anuais. A fim de estudar a interação dessa bactéria com seu hospedeiro empregou-se a análise de mutantes e da expressão gênica global por meio de microarranjos de DNA (transcrissoma). Na primeira parte do estudo foi obtida uma biblioteca de cerca de 10.000 Illutantes do isolado 306 de Xac. Desses. 3.300 foram inoculados em folhas de limoeiro cravo e sua capacidade em causar cancro cítrico foi avaliada aos três dias da inoculação. Após quatro inoculaçàes. 56 mutantes foram selecionados por apresentarem virulência alterada e suas ORFs interrompidas foram identificadas por meio de seqüenciamento. Uma análise dessas ORFs mostrou que havia tanto ORFs quc codificavam para genes relacionados com a patogenicidade em fitobactérias como possihilitou identificar novos genes associados à infecção. além de ORFs hipotéticas. para as quais ainda não foi atrihuída nenhuma função. Dentre os genes previamente implicados na patogênese. pode-se citar o gene "rpB4. o qual participa do sistema de secreção do tipo três. Já o gene hrlA. que contribui na virulência de algumas bactérias patogênicas de animais. até o presente ainda não tinha sido relatado como tendo importância no processo de patogênese em fitobactérias. A ORF XACO~40 é um exemplo de uma proteína hipotética que interfere significativamente no processo infeccioso. uma vez que o mutante para esse locos não induziu sintomas da doença. assim como os demais mutantes citados acima. Na segunda parte deste trabalho. produziu-se um microarranjo de DNA contendo 6.9 I 2 sondas imobilizadas (2.673 ORFs. 87 ORFs repetidas. 312 controles negativos e X4 controles positivos...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Xanthomonas axonopodis pv. citri constitutes one of the main and most damaging pathogcn of lhe world-wide citriculture. This phytobacteria causes canker in leaves, branches and fruits of citrus. causing scvcre cconomic losses. In order to study the interaction of this bacterium with its citrus host. two approaches had been used to proceed a post-genomic functional analysis: wholc genol11c mutagcncsis and global expression analysis by cDNA microarrays technique. In the first part of this study a Xac 306 mutants library with '" 10,000 mutants was obtained. From thesc. 3.300 wcrc inoculatcd in mexicam lemon tree leaves and its capacity to cause citrus canker was cvalualcd. Aftcr four inoculation cicIes, 56 mutants had been selected as having modified palhogcnicily. The inlcrruplcd ORFs were identified by DNA sequencing and analysis of these ORFs identificd ORFs coding for genes previously known as related to pathogenicity proccss in phytobactcrilll11 as wcll gcnes not yet described as involved in pathogenicity, incIuding hypothetical gcncs. Al110ng the gencs previously known as implied in pathogens attack, the hrpB4 gene is one that was found, whic participates of the type three secretion system. To the hrtA gene, whose participation in the virulcnce process has been described to some animal pathogenic bacteria but never yet as having a role in to pathogenicity process in phytobacteria, was found to be involved in the pathogenicity of Xac. The ORF XAC0340 is an example of hypothetical protein which presents grcat intcrfcrcncc in thc infcctious process: the mutant for this gene does not induce any diseasc sYl11ploms in citric Icaves...(Complete abstract, click electronic access below) / Orientador: Jesus Aparecido Ferro / Coorientador: Julio Cezar Franco de Oliveira / Banca: Acelino Couto Alfenas / Banca: Shaker Chuck Parah / Banca: Eliana Gertrudes Macedo Lemos / Banca: Maria Helena de Souza Goldman / Doutor

Orientador: Katia Cristina Kupper / Coorientador: Marco Aurélio Takita / Banca: Helia Harumi Sato / Banca: Eliana Gertrudes de Macedo Lemos / Resumo: O bolor verde e a podridão azeda destacam-se entre as doenças de pós-colheita em frutos cítricos, causados por Penicillium digitatum e Geotrichum citri-aurantii, diminuindo a qualidade e a quantidade dos frutos e, consequentemente, resultando em significativas perdas econômicas. Uma alternativa para controle destes fungos é através da toxinas killer produzidas por algumas espécies de levedura, capazes de matar fungos filamentosos. Saccharomyces cerevisiae produz toxinas killer proteicas que são letais para células sensíveis de levedura. Estas toxinas foram agrupadas em quatro tipos, K1, K2, K28 e Klus, codificado por elementos extra cromossomais associados a partículas virais na forma de dsRNA. Este trabalho tem como objetivo caracterizar a toxina killer de S. cerevisiae ACB-K1 e testar sua atividade antagônica em patógenos pós-colheita de citros. O isolado ACB-K1 apresentou atividade killer, sobre levedura sensível (S. cerevisae NCYC 1006) além do fitopatógeno P. digitatum, não apresentando porém inibição contra o patógeno G. citri-aurantii. A toxina apresentou máxima atividade em pH 4,1 a 22 °C, tanto para a levedura sensível quanto para o fitopatógeno P. digitatum. A toxina apresentou estabilidade em diferentes pH de 4,1 a 6,0, após a incubação de 24h a 22 °C sobre o fungo. O isolado ACB-K1 apresentou dsRNA, sendo detectadas duas formas (LA e M-dsRNA), sugerindo que a base genética para a produção da toxina é extra cromossomal, dado confirmado pela cura do fenótipo killer ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Green mold and sour rot are among post-harvest diseases in citrus fruits, caused by Penicillium digitatum and Geotrichum citri-aurantii, reducing a quality and quantity of fruits and, consequently, resulting in significant economic losses. An alternative for the control of fungi is using killer toxins produced by some species of yeasts, capable of killing filamentous fungi. Saccharomyces cerevisiae produces protein killer toxins that are lethal to yeast sensitive cells. These toxins were grouped into four types, K1, K2, K28 and Klus, encoded by extrachromosomal elements associated with viral particles in the form of dsRNA. This work aims to characterize a killer toxin of S. cerevisiae ACB-K1 and to test its antagonistic activity in post-harvest citrus pathogens. The isolate ACB-K1 showed activity killer on sensitive yeast (S. cerevisae NCYC 1006) besides the phytopathogenic P. digitatum, but did not present inhibition against the pathogen G. citri-aurantii. The killer toxin showed maximum activity at pH 4.1 at 22 ° C for both a sensitive yeast and the phytopathogenic P. digitatum. The toxin presented stability at pH range from 4.1 to 6.0, after a 24h incubation at 22 ° C on the fungus. The ACB-K1 isolate showed dsRNA and two forms were detected (LA and M-dsRNA), suggesting that a genetic basis for a toxin production is extrachromosomal, confirmed by curing the killer phenotype at 40 ° C. The fractions obtained by exclusion chromatography Sephadex G75 gel, de... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Silvio Aparecido Lopes / Banca: Antonio de Góes / Banca: Glauco de Souza Rolim / Banca: Renato Beozzo Bassanezi / Banca: Alécio Souza Moreira / Resumo: O huanglongbing (HLB), associada a bactérias de floema (Candidatus Liberibacter spp) transmitidas por insetos (Diaphorina citri), é a doença mais destrutiva dos citros e muitos têm sido os esforços visando reduzir sua disseminação nos pomares, porém, nem sempre bem-sucedidos. Somente no cinturão citrícola paulista mais de 45 milhões de plantas já foram erradicadas por causa do HLB. O objetivo deste trabalho foi investigar diferentes aspectos associados ao patossistema HLB, visando trazer informações que ajudem na contenção da doença. Foram estudados: 1) hospedeiros alternativos do inseto vetor e do patógeno; 2) ontogenia do broto vegetativo de citros e seu potencial em multiplicar D. citri; 3) requerimentos térmicos para o desenvolvimento do broto; e 4) influência do porta-enxerto na biologia de D. citri. No primeiro capítulo é apresentada revisão de literatura sobre os aspectos mais relevantes da citricultura e do patossistema em estudo e, nos demais, os resultados das pesquisas. No segundo é apresentada a importância Swinglea glutinosa (rutácea muito comum em certas regiões citrícolas) como fonte de Ca. Liberibacter asiaticus e criadouro de D. citri. A bactéria do HLB multiplicou na planta, porém atingiu populações consideravelmente menores do que em laranjeira 'Valência'. Apresenta, portanto, baixo potencial como fonte de inóculo para os citros. Por outro lado, D. citri reproduziu abundantemente em S. glutinosa, tanto quanto nas principais variedades de laranjeiras doces e... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Huanglongbing (HLB), associated with insect-borne phloem bacteria (Candidatus Liberibacter spp), is the most destructive disease of citrus and many efforts have been made to reduce its spread in orchards, but not always well-succeeded. Only in the citrus belt of São Paulo state (Brazil), more than 45 million plants have already been eradicated because of HLB. The objective of this work was to investigate different aspects associated to the HLB pathosystem, aiming to bring information that helps in the management of the disease. We studied: 1) alternative vector insect and pathogen hosts; 2) ontogeny of the citrus vegetative shoot and its potential to multiply D. citri; 3) thermal requirements for shoot development; and 4) influence of the rootstock on the biology of D. citri. In the first chapter, a literature review on the most relevant aspects of citriculture and pathosystem in study is presented and, in the others, the results of the experiments. In the second one the importance of Swinglea glutinosa (a Rutaceae very common in certain citrus regions) as a source of Ca. Liberibacter asiaticus and host for D. citri is presented. The HLB bacteria multiplied in the plant, but reached populations considerably smaller than in 'Valencia' sweet orange. Therefore, it presents low potential as a source of inoculum for citrus. On the other hand, D. citri reproduced abundantly in S. glutinosa, as well as in the main sweet orange and lemon varieties of the 'Sicilian' group cultivated in Brazil. In the third chapter, it is presented details of the development of the 'Valencia' orange new shoot and how the different stages influence the biotic potential of D. citri. The insect completed its life cycle at all stages of new shoots, but at different intensities, being larger in the early stages. With the data, an insect reproduction... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Kátia Cristina Kupper / Coorientador: Maurício Ventura Mazzi / Banca: Taicia Pacheco Fill / Banca: Maria Fátima das Graças Fernandes da Silva / Banca: João Martins Pizauro Junior / Banca: Eliana Gertrudes de Macedo Lemos / Resumo: O fenômeno killler é característico de leveduras que produzem e excretam proteínas ou glicoproteínas que são inibidoras de células microbianas sensíveis. A estabilidade e atividade das toxinas killer são altamente sensíveis a fatores como pH, temperatura de incubação das leveduras, composição e propriedades físico-químicas do meio e concentração de células sensíveis. Sporobolomyces koalae é uma nova espécie de levedura com potencial para produção de toxina killer. No intuito de se conhecer mais sobre as funções desse microrganismo no ecossistema, esse trabalho teve por objetivos: (i) detectar a atividade killer do precipitado proteico de S. koalae, (ii) caracterizar bioquimicamente e funcionalmente o precipitado proteico S. koalae, (iii) purificar parcialmente a toxina killer produzida por S. koalae e, finalmente, (iv) verificar sua ação antagônica sobre Geotrichum citri-aurantii e Penicillium digitatum, patógenos que ocorrem na póscolheita de citros. Pelos resultados obtidos neste trabalho, foi possível detectar a presença de atividade killer no precipitado proteico da levedura S. koalae contra células sensíveis da levedura Saccharomyces cerevisiae NCYC 1006. O precipitado proteico da levedura apresenta várias proteínas com diferentes tamanhos moleculares e, parte dessas proteínas é positiva para atividade de β1,3-glucanase, quitinase e protease, podendo ser uma dessas enzimas ou, o sinergismo entre elas, o responsável pelo fator killer da levedura. A funcionalidade de suas ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The killer phenomenon is characterized by yeasts that produce and excrete proteins or glycoproteins that are inhibitors of sensitive microbial cells. The stability and activity of killer toxins are highly sensitive to the factors such as pH, the temperature of incubation of yeasts, composition and physical-chemical properties of the medium and concentration of sensitive cells. Sporobolomyces koalae is a new species of yeast with potential for killer toxin production. In order to know more about the functions of this microorganism in the ecosystem, this work had as objectives: (i) to detect the killer activity of the S. koalae protein precipitate, (ii) to characterize biochemically and functionally the S. koalae protein precipitate, (iii) to partially purify the killer toxin produced by S. koalae, and, finally, (iv) to verify its antagonistic action on Geotrichum citri-aurantii and Penicillium digitatum, pathogens that occur in the postharvest of citrus. By the results obtained in this work, it was possible to detect the presence of killer activity in the protein precipitate of S. koalae against sensitive cells of Saccharomyces cerevisiae NCYC 1006. The protein precipitate from yeast has several proteins with different molecular sizes and some of these proteins are positive for β1,3-glucanase, chitinase and protease activity. It may be one of these enzymes or synergism between them, the responsible for the killer factor. The functionality of their proteins for killer activity ... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor