Nos últimos anos, notou-se aumento da incidência de carcinoma espinocelular de orofaringe (CECOF) associado ao HPV. Sabe-se que CECOF associado ao HPV apresenta melhor prognóstico do que CECOF não infectado por HPV. Inúmeros estudos em carcinoma cervical demonstram alterações de TLRs, isto provavelmente devido às associações das oncoproteínas E6 e E7 com estes receptores. Em humanos, existem 10 TLRs identificados, os quais colaboram na resposta imune contra bactérias, fungos e vírus, bem como colaboram na promoção ou regressão do tumor. Esta influência do TLR na carcinogênese tem sido alvo de inúmeros estudos devido à ligação entre inflamação e o câncer. O presente trabalho teve como objetivo verificar diferenças na expressão e função de receptores Toll-like em carcinoma espinocelular de orofaringe (CECOF). Para tal, foram utilizados trinta e sete espécimes diagnosticados como CECOF e a expressão imuno-histoquímica das proteínas p16 e TLR4 analisadas. Duas linhagens de CECOF HPV16 + e duas CECOF HPV-. foram utilizadas para análise da expressão de TLR1-10, IL-6 e IL-8, por qPCR. A detecção dos principais TLRs (TLR1, TLR2, TLR6 e TLR4) foi feita por citometria de fluxo. Para ativação da via de sinalização de TLR2, e posterior análise da expressão de IL6 e IL8, as células foram estimuladas com peptidoglicano. Para verificar a expressão e função de TLR4, as células foram estimuladas com LPS e LPS UP para posterior análise de IL-6 e IL-8, por ELISA. Os resultados demonstraram diferenças na expressão gênica de TLR1 e TLR6 entre as linhagens HPV- e o grupo HPV+ e diferenças na expressão proteica de TLR9. TLR2 apresentou aumento da expressão proteica em todas as linhagens e demonstra desencadeamento da resposta imune, com secreção de IL6 e IL8 nas linhagens HPV- (SCC72 e SCC89) e em uma das linhagens HPV+ (SCC2). Interessantemente, TLR4 não apresentou diferenças significativas na expressão gênica e proteica. Entretanto, as linhagens HPV+ não demonstraram resposta pró-inflamatória mesmo quando estimuladas com LPS e LPS ultra puro, agonista específico de TLR4. Assim, este trabalho contribui para estabelecer o perfil da expressão dos receptores Toll-like em linhagens celulares de CECOF HPV- e HPV+, e aponta para alterações ocorridas na via de sinalização mediada por TLR4. Além disso, nossos resultados abrem portas para futuros estudos na avaliação de alterações causadas no sistema imune inato pelo HPV, em carcinomas espinocelulares de orofaringe. / The incidence of HPV- associated oropharynx squamous cell carcinoma (OPSCC) has increased in recent years. HPV- associated OPSCC has a better prognosis than OPSCC not infected with HPV. In cervical carcinoma, HPV oncoproteins E6 and E7 influence the expression of Toll-like receptors (TLR). To date, 10 TLRs have been identified in humans and many are important for the detection of bacteria, fungi and viruses, as well as regression and tumor promotion. This influence of TLR in carcinogenesis has been the subject of numerous studies, due to the connection between inflammation and cancer. This study aimed to determine differences in the expression and function of Toll-like receptor in OPSCC. Thirty-seven tumours were selected and immunohistochemistry for p16 and TLR4 was performed. Two HPV16-associated OPSCC and two OPSCC not associated to HPVcell lines were used. qPCR was performed to analyze the expression of TLR1-10, IL-6 and IL-8. The detection of the main TLRs (TLR1, TLR2, TLR6 and TLR4) was performed by flow cytometry. For activation of the TLR2-signaling pathway and subsequent analysis of IL6 and IL8 expression, cells were stimulated with peptidoglycan. To verify the expression and function TLR4 cells were stimulated with LPS and LPS UP and subsequent analysis of IL-6 and IL-8 by ELISA. The results showed differences in the expression of TLR1 and TLR6 between the HPV- group and the HPV+ group and differences in protein expression of TLR9. TLR2 has increased protein expression in all cell lines and demonstrates the trigger of the immune response, with the secretion of IL6 and IL8 in HPV- cell lines (SCC72 and SCC89) and one HPV+ cell line (SCC2). Interestingly, TLR4 showed no significant differences in gene and protein expression. However, HPV+ cell lines showed no pro-inflammatory response even when stimulated with LPS and LPS UP, a specific agonist of TLR4. This work helps to establish the profile of the expression of Toll-like receptors in OPSCC (SCC72 and SCC89) and HPV- associated OPSCC (SCC2 and SCC90), in vitro, and points to changes in the signaling pathway mediated by TLR4. In addition, our results open new avenues for future studies to assess changes in the innate immune system caused by HPV in oropharynx carcinomas.

Objetivos: O objetivo deste estudo foi o de identificar compostos seletivamente tóxicos ao carcinoma espinocelular de boca in vitro por meio do reposicionamento de fármacos. Material e Métodos: Por meio de um escaneamento baseado na viabilidade celular de 1.280 fármacos, nós selecionamos três princípios ativos (luteolin, metixene hydrochloride e nitazoxanide) letais às células de câncer de boca SCC-25 e pouco tóxicos às células de queratinócitos cutâneos imortalizados HaCaT. Os fármacos candidatos foram investigados quanto à sua dose- e tempo-resposta bem como comparados e combinados à agentes quimioterápicos padrão por meio do ensaio por colorimetria com brometo de tiazolil azul de tetrazolio (MTT). O impacto dos fármacos na motilidade do SCC-25 e do HaCaT foi verificado pelo ensaio de migração celular e seus mecanismos de ação também foram explorados por meio da verificação dos níveis das proteínas fosforiladas pelo western blotting. Todos os experimentos foram realizados em triplicata e, pelo menos, três vezes independentes. O teste t de student foi utilizado para confrontar as variáveis e nível de significância de 5% foi estabelecido para todos os testes. Resultados: O flavonoide natural luteolin exerceu citotoxicidade potente contra as células de câncer de boca in vitro, apresentando baixa toxicidade ao HaCaT e alta eficiência quando comparado a quimioterápicos como a cisplatina e o AG1478. Do ponto de vista molecular, a luteolin ativou a via de sinalização do dano do DNA e, combinada com um inibidor do Chk, apresentou efeitos potencializados. Além disso, nós demonstramos que a nitazoxanide e o metixene hydrochloride são capazes de destruir células SCC-25 porém não as HaCaT de maneira proporcional à dose e ao tempo de tratamento. As combinações entre os três fármacos hit e com a cisplatina ou o AG1478 potencializaram seus efeitos contra as células malignas. Conclusões: O presente estudo traz a luteolin, o metixene hydrochloride e a nitazoxanide como fortes candidatos a agentes terapêuticos contra o câncer de boca uma vez que estes compostos apresentam maior eficácia contra células de câncer de boca e menor toxicidade contra células não tumorais in vitro do que agentes quimioterápicos convencionais. / Objectives: Here we aimed at identifying and reposition approved drugs that could be selectively toxic towards oral squamous cell carcinoma cells. Materials and Methods: Through a cell-based drug screening of 1,280 chemical molecules, we selected 3 compounds (luteolin, metixene hydrochloride, and nitazoxanide) lethal to oral cancer SCC-25 cells, while sparing immortalized keratinocyte HaCaT cells. The drugs were then further challenged for their time- and dose-responses, as well as their comparison and combination to standard chemotherapeutic agents by colorimetric assay 1-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-3,5-diphenylformazan, Thiazolyl blue formazan (MTT). The impact on SCC-25 and HaCaT motility as well as the mode of action of the drugs was then further explored by scratching assay and western blotting, respectively. All the experiments were performed in triplicated and, at least, three independent times. Students t test was performed to verify the differences among the variables and the level of significance was set at 5%. Results: The natural flavonoid luteolin was a potent cytotoxic agent against oral cancer cells in vitro, presenting low toxicity against HaCaT cells and high efficiency as compared to standard-of-care, such as cisplatin and AG1478. From a molecular standpoint, luteolin coopted the DNA-damage pathway and could be efficiently combined with Chk pharmacological inhibitor. Moreover, we demonstrated that nitazoxanide and metixene hydrochloride kill the SCC-25 but not the HaCaT cells in a dose- and time-dependent. The combinations among the three drugs hit and with cisplatin and AG1478 improved their effect against the malignant cells. Conclusions: Luteolin, metixene hydrochloride, and nitazoxanide emerge as strong cytotoxic and/or adjuvant therapy in oral cancer, as these compounds present higher efficiency and lower toxicity against oral cancer cells in vitro than conventional chemotherapeutic agents.

Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-08-30T11:54:52Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_PerfilExpressaoMicroRNAs.pdf: 1891665 bytes, checksum: 8441547cef8f393c58ff8360d7f2a5c1 (MD5) / Approved for entry into archive by Irvana Coutinho (irvana@ufpa.br) on 2017-08-30T14:42:09Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_PerfilExpressaoMicroRNAs.pdf: 1891665 bytes, checksum: 8441547cef8f393c58ff8360d7f2a5c1 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-30T14:42:09Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_PerfilExpressaoMicroRNAs.pdf: 1891665 bytes, checksum: 8441547cef8f393c58ff8360d7f2a5c1 (MD5) Previous issue date: 2016-03-11 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O carcinoma de células escamosas oral (CCEO) é uma doençaa mutifatorial que envolve fatores genéticos, epigenéticos e ambientais. Caracteriza-se por um padrão de crescimento agressivo, altamente metastático e elevadas taxas de mortalidade. Apesar dos avanços da tecnologia nos tratamentos cirúrgicos, rádio e quimioterápicos, a taxa de sobrevivência de cinco anos não houve melhora significativa nos últimos anos. Através da regulação da expressão de genes alvos, os microRNAs desempenham papel importante na iniciação e progressão em cânceres humano, consequentemente, são uma ferramenta promissora para investigação de biomarcadores de identificação de risco, prognóstico e alvos terapêuticos. Com objetivo de investigar o perfil de expressão dos miRNAs no cancêr gástrico, dez tecidos de CCEO foram caracterizados a partir de dados gerados de sequenciamento de alto desempenho. Além disso, por qRT-PCR avaliamos o tecido adjacente ao CCEO para quatro miRNAs. Os resultados mostraram 17 miRNAs diferecialmente expressos, os quais foram capazes de discriminar o tecido CCEO do sem câncer. Dentre esses, encontramos sete novos miRNAs (hsa-let-7c, hsa-miR-10a, hsa-miR- 199a, hsa-miR-381, hsa-miR-501, hsa-miR-654 e hsa-miR-941), os quais ainda não estão descritos na literatura suas participações no CCEO. Adicionalmente, verificamos que os quatro miRNAs hsa-miR-221, hsa-miR-21, hsa-miR-135b e hsa-miR-29c foram hiperexpressos no tecido adjacente, confirmando o efeito de campo de câncerização. Os resultados revelaram que esses miRNAs são potenciais biomarcadores de ocorrencia no CCEO com a capacidade de identificar indivíduos com maior risco de desenvolver este câncer, e indicam sua utilidade como possíveis alvos terapêuticos. / Oral squamous cell carcinoma (OSCC) is a multifactorial disease involving genetic, epigenetic and environmental factors. It is characterized by a pattern of aggressive growth, high metastatic potential and high mortality rates. Despite advances in technology in the surgical treatment, radiotherapy and chemotherapy, the five-year survival rate has no significant improvement in recent years. By regulating the expression of target genes, microRNAs play an important role in the initiation and progression of human cancers. Therefore, they are a promising tool for the identification of biomarkers of risk, as well as prognostic and therapeutic targets. In order to investigate the miRNAs expression profile in ten tissues of OSCC were characterized based on data generated from high-performance sequencing. Furthermore, by qPCR we assessed the adjacent tissue to the OSCC for four miRNAs. The results showed 17 differentially expressed miRNAs were able to discriminate the tissue without cancer. Among these, we found seven new miRNAs (hsalet- 7c, hsa-miR-10a, hsa-miR-199a, hsa-miR-381, hsa-miR-501, hsa-miR-654 and hsamiR- 941) which are not described in the literature their participation in OSCC. Additionally, we found that the four miRNAs hsa-miR-221, hsa-miR-21, hsa-miR-135b and hsa-miR-29c presented overexpression in the adjacent tissue, confirming the field cancerization effect. The results revealed that these miRNAs are potential biomarkers occurring in OSCC with the ability to identify individuals at high risk of developing this type of cancer, and indicate their utility as potential therapeutic targets.

Orientador: Daniel Galera Bernabé / Resumo: Estudos sugerem que a supressão de melatonina e disfunção circadiana em trabalhadores noturnos podem estar relacionadas ao desenvolvimento e à progressão do câncer. Pesquisas têm mostrado também que a incidência tumoral pode ser aumentada pela pinealectomia. Entretanto, nenhum estudo avaliou a influência da cirurgia de pinealectomia sobre o desenvolvimento e a progressão do câncer de boca. No presente estudo, nós investigamos os efeitos da supressão de melatonina sobre a ocorrência e a progressão tumoral um modelo pré-clínico de câncer de boca induzido quimicamente. Nós demonstramos, pela primeira vez, que ratos pinealectomizados tiveram maior ocorrência de carcinoma espinocelular de boca, comparado aos animais controle. Ratos pinealectomizados também exibiram volume e espessura tumorais cerca de 3 e 2 vezes maior que animais sham, respectivamente. Além disso, pinealectomia induziu atrofia do epitélio não-tumoral adjacente às lesões bucais. Os ratos pinealectomizados apresentaram maior resposta inflamatória no front de invasão tumoral, caracterizada principalmente pelo aumento do número de eosinófilos e macrófagos associados ao tumor. Tumores de ratos submetidos à pinealectomia exibiram maior imunoexpressão de ERK1/2 e p53 no microambiente tumoral. Estes resultados revelam que a supressão de melatonina acelera o desenvolvimento e a progressão do câncer de boca associado ao aumento de eosinófilos e macrófagos no front de invasão tumoral e maior expressão de ERK1/2 e p53 no mic... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Studies suggest that melatonin suppression and circadian dysfunction in shift workers can be related to cancer risk. Furthermore, investigations have shown that pinealectomy promotes higher tumor incidence in rats. However, no study evaluated the influence of pinealectomy surgery on oral cancer onset and progression. In the current study, we investigated the effects of melatonin suppression on tumor occurrence and progression in a preclinical model of oral cancer. We demonstrated for the first time that pinealectomized rats had higher oral squamous cell carcinoma occurrence than sham animals. Furthermore, pinealectomized animals displayed tumor volume and thickness about 3 times and twice higher than sham-operated rats, respectively. Moreover, pinealectomy induced atrophy of non-tumor epithelium adjacent to the oral lesions. Pinealectomized rats showed higher mean number of tumor-associated macrophages and eosinophils in the carcinoma invasion front. In addition, tumors from pinealectomized rats displayed increased immunoexpression of ERK1/2 and p53 in the tumor microenvironment. These results reveal that melatonin suppression promotes higher oral cancer occurrence and progression associated with increasing of inflammatory cells and ERK1/2 and p53 expressions in the tumor microenvironment. / Mestre

Made available in DSpace on 2015-05-14T12:56:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Arquivototal.pdf: 1911366 bytes, checksum: 181b7999733ad1fb40bc1e7b4dd0f7a6 (MD5) Previous issue date: 2011-12-05 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The objective of this study was to evaluate the density of mast cells in the lesions of actinic cheilitis and its correlation with the processes of inflammation and epithelial dysplasia. We selected 33 cases of actinic cheilitis recorded in the Department of Head and Neck Surgery, Hospital Dr. Laureano Napoleon, PB. The paraffin blocks were cut and stained with hematoxylin and eosin and toluidine blue. The count of mast cells was performed in 8 fields per case and final reading with the average value expressed. Analysis was descriptive and inferential statistics, and tests were applied to the Mann-Whitney U, Kuskall-Wallis test, chi-square and Spearman coefficient, considering p <0.05. Of the total sample, 57.6% had some degree of epithelial dysplasia, mild dysplasia was 39.4%, 15.2% moderate and 3% severe. In 21.2% of the sample was observed squamous cell carcinoma of the lip. The presence of solar elastosis was observed in 81.8% and some degree of inflammation in 84.9%, as well as 39.4% mild, 15.2% moderate and 30.3% intense. Mast cells were present in 87,8% of cases. The average number of mast cells in specimens of actinic cheilitis was 17.42 ± 10.43 cells / &#956;m² and normal mucosa 1.78 ± 1.64 cells / &#956;m², and this difference was statistically significant (p <0.001). The density of mast cells was significantly higher in cancer cases with p = 0.001. There was a statistically significant correlation between the density of mast cells and the processes of dysplasia (p = 0.004) and inflammatory cell infiltration (p = 0.000) and between epithelial dysplasia and inflammatory cell infiltration (p = 0.002). The increased density of mast cells suggests a possible role of these cells in the malignant transformation of the lesion. / O objetivo do estudo foi avaliar a densidade de mastócitos nas lesões de queilite actínica e sua correlação com os processos de inflamação e displasia epitelial, comparando a controle normal. Para o grupo queilite actínica, selecionaram-se 33 casos de registrados no Serviço de Cirurgia de Cabeça e Pescoço do Hospital do Napoleão Laureano, PB. E para o controle, 9 blocos com diagnóstico de mucocele Os blocos parafinados foram cortados e corados em Hematoxilina e Eosina e por Azul de toluidina. A contagem dos mastócitos foi realizada em 8 campos por espécimes. Realizou-se análise estatística descritiva e aplicaram-se testes U de Mann-Whitney, Kuskall-Wallis, Qui-Quadrado e o coeficiente de Spearman, considerando p<0,05. No grupo queilite actínica, 57,6% apresentaram algum grau de displasia epitelial, sendo 39,4% displasia leve, 15,2% moderada e 3% severa. Em 21,2% da amostra foi observado carcinoma de células escamosas de lábio. A presença de elastose solar foi observada em 81,8% dos casos e algum grau de inflamação em 84,9%, sendo 39,4% leve, 15,2% moderado e 30,3% intenso. Os mastócitos estavam presentes em 87,8% dos casos. A média de mastócitos no grupo queilite actínica foi de 17,42±10,43 células/&#956;m² e no controle 1,78±1,64 células/&#956;m², com diferença estatisticamente significante (p<0,001). A densidade dos mastócitos foi significativamente maior nos casos de carcinoma com p=0,001. Houve correlação estatisticamente significante entre densidade de mastócitos e os processos de displasia (p=0,004) e infiltrado inflamatório(p=0,000); e entre displasia epitelial e infiltrado inflamatório (p=0,002). O aumento da densidade dos mastócitos sugere uma possível participação dessas células no processo de transformação maligna da lesão.

Submitted by Adriana Ávila de Almeida null (celdrica2003@yahoo.com.br) on 2018-03-23T16:45:45Z No. of bitstreams: 1 Tese Final - Adriana Ávila de Almeida.pdf: 2506211 bytes, checksum: e38a3f026d55d541be0fd2ec9142a2a2 (MD5) / Approved for entry into archive by Silvana Alvarez null (silvana@ict.unesp.br) on 2018-04-03T21:06:34Z (GMT) No. of bitstreams: 1 almeida_aa_dr.sjc.pdf: 2506211 bytes, checksum: e38a3f026d55d541be0fd2ec9142a2a2 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-03T21:06:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 almeida_aa_dr.sjc.pdf: 2506211 bytes, checksum: e38a3f026d55d541be0fd2ec9142a2a2 (MD5) Previous issue date: 2018-02-05 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Os carcinógenos do tabaco estão relacionados a diversos tipos de câncer incluindo o carcinoma de células escamosas (CCE) bucal. Aliado ao álcool, o tabaco contribui para o desfecho desfavorável destes casos. A susceptibilidade individual ao câncer pode estar relacionada a expressão das enzimas que metabolizam tais carcinógenos. O objetivo deste trabalho é avaliar a expressão dos genes CYP1A1, CYP1B1, CYP2A6 e CYP2E1 no CCE bucal por meio de qPCR. Foram coletadas amostras de 32 indivíduos com CCE e de 15 controles submetidos a cirurgias bucais por lesões benignas. Foram constituídos quatro grupos: Grupo CCE fumante (n=26), Grupo CCE não fumante (n=6), Grupo controle fumante (n=9) e Grupo controle não fumante (n=6). O Teste de Fagerström para Dependência a Cigarros (TFDC) foi usado para avaliar a dependência nicotínica (DN) e AUDIT para avaliação do consumo de etílicos. Houve diminuição da expressão do gene CYP1B1 nos casos de CCE comparados aos controles. Foram encontradas diferenças estaticamente significativas de expressão gênica de CYP1B1 entre os Grupos CCE fumante e controle fumante (p=0,0018), Grupo CCE não fumante e controle não fumante (p=0,0079) e CCE fumante com CCE não fumante (p=0,0385) e entre os quatro grupos (p<0,0001). Houve diminuição da expressão do CYP2A6 no Grupo CCE fumante em relação ao Grupo controle, mas apenas um paciente do Grupo controle expressou este gene. Houve aumento da expressão de CYP2E1 entre os Grupos CCE fumante e controle fumante (p=0,0424). Concluindo, foi encontrada grande variabilidade interindividual no estudo da expressão dos genes estudados. Houve maior expressão de CYP1A1 e CYP2E1 em amostras de indivíduos fumantes com CCE. Os genes CYP1B1 e CYP2A6 estavam menos expressos no Grupo CCE fumante em relação ao Grupo controle. Para os genes CYP1B1 e CYP2E1 foram encontrados valores significativos na correlação entre a expressão gênica e parâmetros demográficos e de perfil tabágico no Grupo controle fumante, e do AUDIT no Grupo CCE não fumante. O gene CYP2E1, além de estar relacionado ao metabolismo do álcool, também deve ser considerado importante marcador do metabolismo dos carcinógenos derivados do tabaco. / Tobacco carcinogens are related to various types of cancer, including oral squamous cell carcinoma (OSCC). Allied to alcohol, tobacco contributes to the unfavorable outcome of the cases. Individual cancer susceptibility may be related to an expression of the enzymes that metabolize such carcinogens. The aim of this work is to evaluate the expression of the genes CYP1A1, CYP1B1, CYP2A6 and CYP2E1 on OSCC by qPCR. Samples were collected from 32 individuals with OSCC and 15 controls submitted to oral surgeries due to benign lesions. There were four groups: Smoker SCC group (n = 26), nonsmoker SCC group (n = 6), Smoker control group (n = 9) and nonsmoker control group (n = 6). The Fagerström Test for Cigarette Dependence (TFCD) was used to evaluate nicotinic dependence (ND) and AUDIT for the evaluation of alcohol consumption. There was a decrease in CYP1B1 gene expression in cases of SCC compared to controls. (P = 0.0018); smoker CCE and non-smoker control (p = 0.0079); smoker SCC with nonsmoker SCC (p = 0.0385) and between the four groups (p <0.0001). There was a decreased expression in CYP2A6 in the smoker SCC Group compared to the control group, but only one control group patient expressed this gene. There was an increased expression of CYP2E1 between the smoking and nonsmoking SCC groups (p = 0.0424). In conclusion, large interindividual variability was found in the study of the expression of the genes studied. There was greater expression of CYP1A1 and CYP2E1 in samples from smokers with SCC. The CYP1B1 and CYP2A6 genes were less expressed in the smoker SCC Group. Significant values were found for the CYP1B1 and CYP2E1 genes in the correlation between a gene expression and a parameter and a non-smoker control group, non-smoker control group and AUDIT. The CYP2E1 gene, besides being related to alcohol metabolism, should also be considered an important marker of the metabolism of the carcinogens derived from tobacco. / 2016/08633-0

Submitted by Automação e Estatística (sst@bczm.ufrn.br) on 2018-06-05T21:48:08Z No. of bitstreams: 1 LarissaSantosAmaralRolim_DISSERT.pdf: 2305138 bytes, checksum: 14b3b617e544762c66ebb1f48bfcb9de (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2018-06-11T19:21:02Z (GMT) No. of bitstreams: 1 LarissaSantosAmaralRolim_DISSERT.pdf: 2305138 bytes, checksum: 14b3b617e544762c66ebb1f48bfcb9de (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-11T19:21:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 LarissaSantosAmaralRolim_DISSERT.pdf: 2305138 bytes, checksum: 14b3b617e544762c66ebb1f48bfcb9de (MD5) Previous issue date: 2018-02-23 / Introdução: O Carcinoma de Células Escamosas Oral (CCEO) é um grande problema de saúde pública em todo o mundo. Acredita-se que o mecanismo responsável pela progressão tumoral seja baseado na invasão coletiva ou de células individuais, chamado de Transição Epitelial-Mesenquimal (TEM), onde ocorre uma diminuição da expressão de biomarcadores epiteliais e aumento da expressão de biomarcadores mesenquimais, como Twist. A Podoplanina (PDPN), uma glicoproteína transmembranar, está envolvida na motilidade das células neoplásicas que estão passando pela TEM para orientar o complexo celular durante a invasão. Objetivo: Realizar uma análise comparativa entre a imunoexpressão da PDPN e do Twist em 40 casos de CCEs de lábio inferior (CCELI) e 36 casos de língua oral (CCELO), para analisar possíveis associações com parâmetros clínicos-patológicos (tamanho do tumor primário, metástase linfonodal regional e à distância, estadiamento clínico, grau histológico de malignidade e padrão histológico de invasão). Métodos: Para avaliação do grau histopatológico de malignidade, utilizou-se o sistema proposto por Brandwein-Gensler et al (2005). Para os dois marcadores, quatro tipos de análises imuno-histoquímica foram realizados: análise do front de invasão, das áreas compressivas do tumor, das grandes ilhas tumorais (>15 células neoplásicas) e dos ninhos/células dissociadas (<15 células neoplásicas). Para a análise das relações entre os parâmetros clínicos e histopatológicos e as imunoexpressões de PDPN e Twist, foi utilizado o teste não paramétrico de Mann-Whitney. Para verificar possíveis correlações entre as imunoexpressões de PDPN e Twist, foi realizado o teste de correlação de Spearman (r). Para todos os testes estatísticos, foi estabelecido um nível de significância de 5% (p < 0,05). Resultados: Não foram encontradas diferenças estatisticamente significativas na imunoexpressão de PDPN e Twist em relação ao tamanho do tumor, metástase e estadiamento clínico de CCELI (p > 0,05). Porém foram encontradas diferenças estatisticamente significativas na imunoexpressão citoplasmástica de PDPN em relação aos padrões de invasão tipo 4 e 5 (p = 0,032) de Brandwein-Gensler et al. (2005). Também não foram observadas diferenças estatisticamente significativas na imunoexpressão de PDPN e Twist em relação ao tamanho do tumor, metástase e estadiamento clínico de CCELO (p > 0,05). Observou-se diferenças estatisticamente significativas entre a expressão citoplasmática (p = 0,006), membranar (p = 0,030) e geral (p = 0,025) de PDPN nos CCELO com os padrões de invasão tipo 4 e 5 de Brandwein-Gensler et al. (2005). Além disso, foram observadas correlações negativas estatisticamente significativas entre a expressão membranar da PDPN e as expressões geral (r = -0,356; p = 0,024) e citoplasmática do Twist (r = -0,336; p = 0,034) nos CCELI. Conclusões: A expressão da PDPN está inversamente relacionada com o Twist em CCELI, além de demonstrar que ambas proteínas estão associadas com um pior padrão de invasão nos CCELI e CCELO. Também, levantou-se a hipótese de que a relação da PDPN com o Twist em CCELI e CCELO possa estar mais envolvida com uma transição parcial do fenótipo epitelial para o mesenquimal do que uma transição completa coordenada pela PDPN. / Introduction: Oral Squamous Cell Carcinoma (OSCC) is a major public health problem worldwide. It is believed that the mechanism responsible for tumor progression is based on collective invasion of cell groups or individual cells, called Epithelial-Mesenchymal Transition (EMT), where there is a decrease in the expression of epithelial biomarkers and increased expression of mesenchymal biomarkers as Twist. Podoplanin (PDPN), a transmembrane glycoprotein, is assumed to be involved in the motility of neoplastic cells that are undergoing through EMT to guide the cell complex during an invasion. Objective: To perform a comparative analysis of the immunoexpression of PDPN and Twist among 40 cases of lower lip CCEs and 36 cases of oral tongue, (primary tumor size, regional and distal lymph node metastasis, clinical staging, histological grade of malignancy and histological pattern of invasion). Methods: To evaluate the histopathological grade of malignancy, the system proposed by Brandwein-Gensler et al. (2005) was used. For the two markers, four types of immunohistochemical analysis were performed: analysis of the invasion front, tumor compressive areas, large tumor islands (> 15 neoplastic cells) and nests/dissociated cells (<15 neoplastic cells). The non-parametric Mann-Whitney test was used for the analysis of the relationships between the clinical and histopathological parameters and the PDPN and Twist immunoexpressions. To verify possible correlations between the PDPN and Twist immunoexpressions, the Spearman (r) correlation test was performed. For all statistical tests, a significance level of 5% (p <0.05) was established. Results: No statistically significant differences were found between PDPN and Twist immunoexpression and tumor size, metastasis, and clinical staging on lower lip SCC (p > 0.05). However, statistically significant differences were found between the cytoplasmic immunoexpression of PDPN and the invasion patterns type 4 and 5 (p = 0.032) of Brandwein-Gensler et al. (2005). Also, no statistically significant differences were found between PDPN and Twist immunoexpression and tumor size, metastasis and clinical staging on oral tongue SCC (p > 0.05). Statistically significant differences were observed between the cytoplasmic (p = 0.006), membrane (p = 0.030) and general (p = 0.025) PDPN expression in oral tongue SCC with the invasion patterns type 4 and 5 of Brandwein-Gensler et al. (2005). In addition, the Spearman correlation test demonstrated statistically significant negative correlations between PDPN membrane expression and Twist general expression (r = -0.356, p = 0.024) and Twist cytoplasmic expression (r = -0.336; p = 0.034) in the lower lip SCCs. Conclusions: PDPN expression is inversely related to Twist in lower lip SCC, it was demonstrated that both proteins are associatved with a worse invasion pattern in SCC. It has also been hypothesized that the relationship of PDPN with Twist in OSCC may be more involved with a partial transition from the epithelial to the mesenchymal phenotype than a complete transition coordinated by PDPN.

O carcinoma espinocelular (CEC) de cabeça e pescoço é uma neoplasia maligna que implica em baixas taxas de sobrevida e prognóstico desfavorável. A perda de adesão do epitélio e a migração celular são processos biológicos envolvidos na carcinogênese. O objetivo desse estudo foi descrever o padrão de expressão da molécula cinase de adesão focal (FAK) e suas formas fosforiladas, FAK-Tyr576 e FAK-Tyr925, em amostras de CEC no centro do tumor (CT) e zona de invasão (ZI) e no tecido epitelial não neoplásico adjacente a estes tumores (EA). De acordo com a graduação histopatológica, 48,1% do total das amostras de CEC são de grau moderado. Segundo o sistema pTNM, 62,9% eram T1 e T2, 64,8% não apresentaram metástase regional e não houve metástase à distância. O tempo máximo de acompanhamento foi de 5,9 anos e obteve-se a proservação final de 46 dos 54 pacientes, onde foi observado que 58,1% apresentaram boa evolução e 41,9% exibiram evolução ruim. A média em anos para que os pacientes obtivessem o status de evolução ruim foi de 5,01. Quanto ao estadiamento clínico, houve maior imunomarcação no estádio IVa quando comparado ao estádio II no EA da FAK Tyr-576 e ocorreu maior expressão no estádio IVb quando comparado ao estádio I no CT da FAK Tyr-576. Os pacientes que apresentaram evolução ruim após o período máximo de acompanhamento tiveram alta expressão no EA e na ZI da FAK Tyr-576 e no CT da FAK Tyr-925. Na ZI, o aumento de expressão da FAK está associado ao aumento da expressão da FAK Tyr-576. À medida que há aumento da expressão no EA há aumento da expressão na ZI na FAK Tyr-576. E quando há aumento da expressão no EA há aumento da marcação na ZI na FAK Tyr-925. Apesar do papel de todas as FAKs fosforiladas não estar claro, mas sabendo-se que são essas FAKs que estão ativas no câncer, a partir dos dados do presente trabalho pode-se sugerir que a avaliação da marcação FAK Tyr -576 no EA, no CT e na ZI venha a fazer parte da rotina no diagnóstico histopatológico e das margens da peça operatória, como norteadores da conduta terapêutica e do protocolo de acompanhamento. / Squamous cell carcinoma (SCC) of the head and neck is a malignant neoplasm that implies low rates of survival and poor prognosis. The loss of adhesion and cell migration are biological processes involved in carcinogenesis. The aim of this study was to describe the pattern of expression of focal adhesion kinase molecule (FAK) and its phosphorylated forms, FAK-Tyr576, FAK-Tyr925, in SCC samples in the center of the tumor (CT) and invasion zone (ZI) and non-neoplastic epithelial tissue adjacent to these tumors (EA). According to histopathological grading, 48,1% of SCC samples are moderate. According to the system pTNM, 62,9% were T1 and T2, 64.8%, had no regional metastasis and no distant metastasis. The maximum time of follow up was 5,9 years and was obtained as the final proservation 46 of 54 patients, where it was observed that 58,1% of patients had good prognosis and 41,9% of patients had poor prognosis. The average years for patients to obtain the poor prognosis of status was 5.01. As for clinical staging, there was greater immunostaining in the stadium IVa compared to stage II in EA Tyr-576. And FAK expression was higher in stage IVb when compared to CT in stage I of FAK Tyr-576. Patients with poor prognosis after the maximum follow-up period had high expression in EA and ZI of FAK Tyr-576 and CT of FAK Tyr-925. In ZI, increased expression of FAK is associated with increased FAK Tyr-576 expression. As there is increased expression in EA's increased expression in ZI in FAK Tyr-576. And when there is increased expression in EA's increased marking the ZI in FAK Tyr-925. Despite the role of all phosphorylated FAKs not clear, but given that these are FAKs that are active in cancer, from the present data it can be suggested that the evaluation of expression of FAK Tyr 576 in EA, CT and ZI will be part of the routine histopathological diagnosis and surgical specimen margins, as guiding the therapeutic management and monitoring protocol.

Orientador: Cleverton Roberto de Andrade / Resumo: O óleo essencial de Melaleuca alternifolia (tea tree oil - TTO) é composto por aproximadamente 100 componentes, sendo que os de maior concentração são o terpinen-4-ol e gama-terpineno. Os estudos da sua capacidade citotóxica têm demonstrado efeito sobre linhagens neoplásicas malignas. O objetivo do trabalho foi avaliar a capacidade citotóxica e mutagênica do TTO e seus componentes, terpinen-4-ol e gama terpineno em culturas celulares. Duas linhagens de carcinomas espinocelulares orais e uma linhagem de ceratinócitos foram analisadas por: (1) Análise colorimétrica de Metiltetrazolium (MTT); (2) Teste do Micronúcleo. Os resultados foram expressos na forma de ensaios de susceptibilidade e grau de mutagenicidade. Posteriormente foram analisados por one-way Anova com pós-teste de Tukey. Os valores de IC50 obtidos nas análises de MTT das células expostas ao TTO foram de 0,2% para a HaCaT, 0,14% para a HSC-3 e 0,17% para a SCC-25. Para a exposição ao terpinen-4ol, os valores de IC50, foram 0,5%, 0,3% e 0,45% para as linhagens HaCaT, HSC-3 e SCC-25, respectivamente. O gama-terpineno, não demonstrou atividade citotóxica expressiva, não sendo possível calcular o IC50. O TTO não demonstrou mutagenicidade nas linhagens HaCaT e HSC-3. O terpinen-4-ol, não foi capaz de produzir mutagenicidade em nenhuma das linhagens em estudo. Conclui-se que tanto o TTO quanto o terpinen-4-ol apresentam capacidade citotóxica sobre as linhagens HaCaT, HSC-3 e SCC-25. O TTO não foi mutagênico nas linhagens... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The essential oil of Melaleuca alternifolia (tea tree oil - TTO) consists of about 100 components, and the highest concentration are terpinen-4-ol and gammaterpinene. Studies of their cytotoxic capacity have shown effect on malignant neoplastic lineages. The aim of this study was to evaluate the cytotoxic and mutagenic capacity of TTO and main soluble components, terpinen-4-ol and gama-terpinene in cell cultures. Two lineages of oral squamous cell carcinoma and a keratinocyte cell were analyzed: (1) colorimetric analysis Metiltetrazolium (MTT); (2) Micronucleus assay. The results were expressed as susceptibility tests and degree of mutagenicity. The statistical test used in the analysis was one-way ANOVA (Tukey test). The IC50 values obtained from the MTT analysis of cells exposed to TTO were 0.2% for HaCaT, 0.14% for HSC-3, and 0.17% for SCC-25. For exposure to terpinen-4ol, IC50 values were 0.5%, 0.3% and 0.45% for HaCaT, HSC-3 and SCC-25, respectively. The gamma-terpinene didn't show significant cytotoxic activity, therefore it was impossible to calculate the IC50. The TTO was unable to produce mutagenicity in HSC-3 and HaCaT. The terpinen-4-ol was not mutagenic in any of the lineages tested. In conclusion, both the TTO and terpinen- 4-ol had cytotoxic capacity on HaCaT, HSC-3 and SCC-25. The TTO was unable to produce mutagenicity in HSC-3 and HaCaT. The terpinen-4-ol was not mutagenic in any of the lineages tested. / Mestre

Orientadora: Mirela Tinucci Costa / Banca: Rosemeri de Oliveira Vasconcelos / Banca: Renée laufer Amorim / Resumo: O carcinoma de células escamosas é uma neoplasia maligna que emerge dos queratinócitos e corresponde a aproximadamente 5% dos tumores cutâneos dos cães. Os tumores de células basais são compostos quase exclusivamente por células basais e apresentam uma incidência de 4 a 12% entre as neoplasias cutâneas caninas. O carcinoma de células escamosas e o tumor de células basais são neoplasias comumente registradas na clínica de pequenos animais. As caderinas compreendem uma classe de moléculas de adesão celular expressas na superfície de todas as camadas epidérmicas. A E-caderina é a principal caderina envolvida na adesão celular epitelial. A redução de sua expressão está envolvida com a progressão de alguns tipos de câncer, principalmente os carcinomas, seu poder metastático, e ainda na definição do prognóstico. Não há muitos estudos na veterinária com relação à expressão dessas moléculas em tumores. O fator de crescimento do endotélio vascular (VEGF) é um potente mitógeno para células endoteliais e sua expressão tem sido relacionada com o aumento da angiogênese tumoral. O VEGF além de estimular a angiogênese, produz colagenase e outras enzimas degradativas que facilitam a saída das células neoplásicas para a circulação, além de estimularem o crescimento das células tumorais. O objetivo desse estudo foi avaliar a expressão da E-caderina e do fator de crescimento do endotélio vascular (VEGF) em tecidos caninos histologicamente classificados como carcinoma de células escamosas e tumor de células basais, buscando-se uma correlação com o grau histológico desses tumores. A expressão normal e reduzida da Ecaderina apresentou diferenças significativas comparando-se o tumor de células basais com o carcinoma de células escamosas quando avaliada pelo teste de Fisher...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The squamous cell carcinoma (SCC) is a malignant epithelial neoplasm of keratinocytes and accounts for about 5% of the canine skin neoplasms The basal cells tumors (BCT) are made up almost entirely of basal cells and accounts for 4 to 12% of the canine skin neoplasms. Squamous cell carcinoma and basal cell tumor are neoplasms commonly seen in the Small Animal Practice. The cadherins are a group of cellular adhesion molecules that are expressed on the surface of all epidermic layer. The Ecadherin is the main cadherin involved in epithelial cellular adhesion; the decrease in its expression is related to the progression of some types of cancer, specially carcinomas, to its metastatic characteristics, and to the prognosis. There are few studies in Veterinary Medicine researching the expression of this molecule in canine tumors. The vascular endothelial growth factor (VEGF) is a potent mitogen to endothelial cells and its expression has been correlated with increased tumoral angiogenesis. Besides stimulating angiogenesis, VEGF produces colagenase and other enzymes thus helping neoplastic cells scape into the vascular system and stimulating tumoral cell growth. The goal of this study was to evaluate E-cadherin's and vascular endothelial growth factor expression in canine tissues that were classified as squamous cell carcinoma or basal cell tumor, and to find a correlation with the histological grade of the tumors. Both normal and decreased expression of E-cadherin had significant differences when comparing squamous cell carcinoma to basal cell tumor using the Fisher test (P=0,0039). Also, in some samples the more differentiated neoplastic cells had a higher intensity of color than the less differentiated...(Complete abstract, click electronic access below) / Mestre