Orientador: Glauco Issamu Miyahara / Coorientador: José Fernando Garcia / Banca: Eder Ricardo Biasoli / Banca: Luiz Alberto Veronese / Resumo: O vírus Epstein-Barr (EBV) faz parte da família herpesvirus humano e está relacionado com doenças benignas e malignas de cabeça e pescoço e sua possível relação com o carcinoma espinocelular (CEC) oral tem sido estudada. O objetivo deste estudo foi detectar a presença do EBV em pacientes com CEC oral e mucosa normal, correlacionando os achados com as variáveis clínico-patológicas, fatores de risco e sobrevida. Foi aplicada a nested-PCR em peças parafinizadas de CEC oral, sendo 20 amostras de assoalho bucal, 25 de língua e 12 de orofaringe. Também foi utilizado grupo controle, sem carcinoma espinocelular, com 19 amostras de mucosa oral normal. O vírus foi encontrado em 10% das amostras de assoalho bucal e 12% de língua, não sendo detectado na orofaringe. Para as amostras de mucosa normal a prevalência foi de 15,79%. Não houve diferença estatisticamente significante entre a presença do vírus e as variáveis: localização anatômica, sexo, idade, tabagismo, etilismo, estadiamento clínico, gradação histológica, esvaziamento cervical e sobrevida. Os resultados sugerem que o EBV não participa isoladamente da carcinogênese oral / Abstract: The Epstein-Barr virus (EBV) is part of human herpesvirus family being associated with benign and malignant diseases head and neck. Its possible relation with oral squamous cell carcinoma (OSCC) has been studied. The aim of this study was to detect the presence of EBV in patients with OSCC and normal mucosa, correlating the findings with clinicopathologic variables, risk factors and patient's survival. Nested PCR was applies in paraffin embedded samples of OSCC being 20 samples of mouth floor, 25 tongue and 12 oropharyngeal. A control group composed of 19 normal oral mucosa samples was used. The virus was found in 10% of mouth floor samples, 12% of tongue not being detected in oropharynx. The prevalence in oral mucosa samples was 15.79%. There was no statistically significant differences between the virus presence and the variables: anatomical localization, gender, age, smoking, alcoholism, clinical stage, histological grade, neck dissection and patient's survival. The results suggest that EBV alone did not have participation in carcinogenesis or oral SCC / Mestre

O carcinoma espinocelular (CEC) de cabeça e pescoço é uma neoplasia maligna que implica em baixas taxas de sobrevida e prognóstico desfavorável. A perda de adesão do epitélio e a migração celular são processos biológicos envolvidos na carcinogênese. O objetivo desse estudo foi descrever o padrão de expressão da molécula cinase de adesão focal (FAK) e suas formas fosforiladas, FAK-Tyr576 e FAK-Tyr925, em amostras de CEC no centro do tumor (CT) e zona de invasão (ZI) e no tecido epitelial não neoplásico adjacente a estes tumores (EA). De acordo com a graduação histopatológica, 48,1% do total das amostras de CEC são de grau moderado. Segundo o sistema pTNM, 62,9% eram T1 e T2, 64,8% não apresentaram metástase regional e não houve metástase à distância. O tempo máximo de acompanhamento foi de 5,9 anos e obteve-se a proservação final de 46 dos 54 pacientes, onde foi observado que 58,1% apresentaram boa evolução e 41,9% exibiram evolução ruim. A média em anos para que os pacientes obtivessem o status de evolução ruim foi de 5,01. Quanto ao estadiamento clínico, houve maior imunomarcação no estádio IVa quando comparado ao estádio II no EA da FAK Tyr-576 e ocorreu maior expressão no estádio IVb quando comparado ao estádio I no CT da FAK Tyr-576. Os pacientes que apresentaram evolução ruim após o período máximo de acompanhamento tiveram alta expressão no EA e na ZI da FAK Tyr-576 e no CT da FAK Tyr-925. Na ZI, o aumento de expressão da FAK está associado ao aumento da expressão da FAK Tyr-576. À medida que há aumento da expressão no EA há aumento da expressão na ZI na FAK Tyr-576. E quando há aumento da expressão no EA há aumento da marcação na ZI na FAK Tyr-925. Apesar do papel de todas as FAKs fosforiladas não estar claro, mas sabendo-se que são essas FAKs que estão ativas no câncer, a partir dos dados do presente trabalho pode-se sugerir que a avaliação da marcação FAK Tyr -576 no EA, no CT e na ZI venha a fazer parte da rotina no diagnóstico histopatológico e das margens da peça operatória, como norteadores da conduta terapêutica e do protocolo de acompanhamento. / Squamous cell carcinoma (SCC) of the head and neck is a malignant neoplasm that implies low rates of survival and poor prognosis. The loss of adhesion and cell migration are biological processes involved in carcinogenesis. The aim of this study was to describe the pattern of expression of focal adhesion kinase molecule (FAK) and its phosphorylated forms, FAK-Tyr576, FAK-Tyr925, in SCC samples in the center of the tumor (CT) and invasion zone (ZI) and non-neoplastic epithelial tissue adjacent to these tumors (EA). According to histopathological grading, 48,1% of SCC samples are moderate. According to the system pTNM, 62,9% were T1 and T2, 64.8%, had no regional metastasis and no distant metastasis. The maximum time of follow up was 5,9 years and was obtained as the final proservation 46 of 54 patients, where it was observed that 58,1% of patients had good prognosis and 41,9% of patients had poor prognosis. The average years for patients to obtain the poor prognosis of status was 5.01. As for clinical staging, there was greater immunostaining in the stadium IVa compared to stage II in EA Tyr-576. And FAK expression was higher in stage IVb when compared to CT in stage I of FAK Tyr-576. Patients with poor prognosis after the maximum follow-up period had high expression in EA and ZI of FAK Tyr-576 and CT of FAK Tyr-925. In ZI, increased expression of FAK is associated with increased FAK Tyr-576 expression. As there is increased expression in EA's increased expression in ZI in FAK Tyr-576. And when there is increased expression in EA's increased marking the ZI in FAK Tyr-925. Despite the role of all phosphorylated FAKs not clear, but given that these are FAKs that are active in cancer, from the present data it can be suggested that the evaluation of expression of FAK Tyr 576 in EA, CT and ZI will be part of the routine histopathological diagnosis and surgical specimen margins, as guiding the therapeutic management and monitoring protocol.

Submitted by Jean Medeiros (jeanletras@uepb.edu.br) on 2016-12-05T12:12:19Z No. of bitstreams: 1 PDF - Jamesson de Macedo Andrade.pdf: 4828789 bytes, checksum: eabb6500a6b9b6696d06f824c8150ff7 (MD5) / Approved for entry into archive by Secta BC (secta.csu.bc@uepb.edu.br) on 2016-12-06T19:17:12Z (GMT) No. of bitstreams: 1 PDF - Jamesson de Macedo Andrade.pdf: 4828789 bytes, checksum: eabb6500a6b9b6696d06f824c8150ff7 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-12-06T19:17:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PDF - Jamesson de Macedo Andrade.pdf: 4828789 bytes, checksum: eabb6500a6b9b6696d06f824c8150ff7 (MD5) Previous issue date: 2016-07-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Introduction: Oral squamous cell carcinoma (OSCC) in young individuals has increased in recent years with incidence ranged of 1.4% to 13.0% and the literature has suggested a more aggressive biological behavior that OSCC in older individuals. Immunoexpression of Activin A, Ki-67 and Bcl-2 were studied in various malignant neoplasms, although researches comparing the immunoexpression these markers in OSCC between young and older individuals are scarce. Objectives: To evaluate immunoexpression of activin A, Ki-67 and Bcl-2 in cases of tongue squamous cell carcinoma (TSCC) between young and older patients and verify the association of this immunoexpression with clinicopathological parameters (tumor size, node metastasis, distant metastasis and clinical stage) and histopathological grade of malignancy. Material and methods: The sample was composed for 60 cases of TSCC, diagnosed in two hospitals of reference in oncology in Paraíba state, Brazil. It was considered two groups: 30 cases of young (≤45y) and 30 cases of older (≥60y). Clinical parameters were obtained of medical records. For morphological analysis utilized the histopathological grade of malignancy, proposed by Bryne et al (1992). Immunohistochemical analysis was realized of quali- quantitative manner for polyclonal antibody Activin A and quantitative manner for antibodies Ki-67 and Bcl-2. Statistical analysis utilized Chi-square, Fisher’s exact, Mann Whitney and Spearman’s Correlation (P<0.05). Results: In regarding to clinical and morphological parameters between groups, there was significant difference to tumor size (P=0.024). In older patients, tumor size was associated to T1-T2. Although without significant difference (P>0.05) the older patients were predominantly diagnosed in earlier clinical stage (I/II) and young patients in later clinical stage (III/IV). In both groups, TSCC were classified as high grade of malignancy (P>0.05). The median of Activin A in TSCC was 55 (range, 7.5 to 112.5) in young patients and 65 (range, 40.0 to 90.0) in older patients (P=0.428). Significant difference in the immunoexpression of Activin A was observed in relation to clinical state (III/IV) in older patients (P=0.04). The median of immunoexpression of Ki-67 in TSCC was 46.9 (range, 29.9 to 56.3) in young patients and 34.8 (28.0 to 48.5) in older patients (P=0.085). Significant difference in the immunoexpression of Ki-67 was observed in relation to histological grade of malignancy in both groups, where in young patients was associated to high grade (P=0.039) and olderly patients was associated to low grade (P=0.047). The median of immunoexpression of Bcl-2 in TSCC was 8.85 (range, 3.97 to 16.62) in young patients and 13.3 (range, 7.47 to 25.55) in olderly patients (P=0.049). There was no significant difference was observed in immunoexpression of Bcl-2 in relation to clinical or morphological parameters, in either age groups (P>0.05). In addition, it was observed positive correlation between immunoexpression of Activin A and Bcl-2 in older patients (r=0.370, P=0.044). Conclusions: Based on these results, it is suggested that the difference in biological behavior of TSCC between young and old may be related to different pathogenesis. In young patients, it is suggested that the pathogenesis of TSCC is associated with increased cell proliferation, while in olderly patients, pathogenesis of TSCC is associated evasion of apoptosis, being regulated by activin A. / Introdução: O carcinoma de células escamosas oral (CCEO) em indivíduos jovens tem aumentado nos últimos anos, com incidência variando de 1,4% a 13%, e a literatura tem sugerido um comportamento biológico mais agressivo que o CCEO em indivíduos idosos. A imunoexpressão da Ativina A, Ki-67 e Bcl-2 tem sido estudada em vários processos neoplásicos malignos, embora pesquisas comparando a imunoexpressão desses marcadores em CCEO, entre indivíduos jovens e idosos, ainda são escassas. Objetivos: avaliar a imunoexpressão da Ativina A, Ki-67 e Bcl-2, em casos de carcinomas de células escamosas de língua (CCEL) imunoexpressão com os parâmetros clínicos (tamanho do tumor, metástase linfonodal, metástase à distância e estágio clínico) e grau histopatológico de malignidade. Material e métodos: A amostra foi composta por 60 casos de CCEL, diagnosticados em dois hospitais de entre pacientes jovens e idosos e verificar a associação desta referência em oncologia do estado da Paraíba, Brasil. Considerou-se dois grupos: jovens (≤45 anos, n=30) e idosos (≥60 anos, n=30). Os dados clínicos foram obtidos dos prontuários médicos e na análise morfológica utilizou-se o sistema de gradação histopatológico de malignidade (SGHM), proposto por Bryne et al. (1992). A análise imunoistoquímica foi realizada de forma quali-quantitativa para o anticorpo policlonal Ativina A e de forma quantitativa para os anticorpos monoclonais Ki-67 e Bcl-2. Para as análises estatísticas foram utilizados os testes de Qui-quadrado, exato de Fisher, Mann-Whitney e correlação de Spearman (p<0,05). Resultados: Em relação aos parâmetros clínicos e morfológicos entre os grupos, houve diferença significativa para o tamanho do tumor (p=0,024), em que nos pacientes idosos, o tamanho do tumor foi associado a T1-T2. Embora sem diferença significativa (p>0,05), os pacientes idosos foram predominantemente diagnosticados em estágios clínicos iniciais (I/II) e os pacientes jovens em estágios clínicos mais avançados (III/IV). Em ambos os grupos, o CCEL foi classificado como de alto grau de malignidade (p>0,05). A mediana da Ativina A em CCEL foi de 55 (7,5-112,5) em pacientes jovens e 65 (40,0-90,0) em pacientes idosos (p=0,428). Foi observada diferença significativa na imunoexpressão de Ativina A em relação ao estágio clínico (III/IV) em pacientes idosos (p=0,04). A mediana da imunoexpressão de Ki-67 em pacientes jovens com CCEL foi de 46,9 (29,9-56,3) e 34,8 (28,0-48,5) em pacientes idosos (p=0,085). Foi observada diferença significativa na imunoexpressão de Ki-67 em relação ao grau histopatológico de malignidade em ambos os grupos, onde em pacientes jovens foi associada ao um alto grau (p=0,039) e pacientes idosos ao baixo grau (p= 0,047). A mediana da imunoexpressão de Bcl-2 em CCEL foi 8,85 (3,97-16,62) em pacientes jovens e 13,3 (7,47-25,55) em pacientes idosos (p=0,049). Não foi observada diferença significativa, na imunoexpressão de Bcl-2 em relação aos parâmetros clínicos ou morfológicos, em ambos os grupos (p>0,05). Além disso, observou-se correlação positiva entre a imunoexpressão da Ativina A e Bcl-2 em pacientes idosos (r=0,370; p=0,044). Conclusões: Baseado nesses resultados, sugere-se que a diferença no comportamento biológico do CCEL entre jovens e idosos pode estar relacionada a patogenias distintas. Nos pacientes jovens, sugere-se que a patogenia do CCEL esteja associada a um maior índice de proliferação celular, enquanto que nos pacientes idosos, a patogenia do CCEL esteja associada a evasão da apoptose, sendo regulada pela ativina A.

O carcinoma espinocelular (CEC) de cabeça e pescoço é uma neoplasia maligna que implica em baixas taxas de sobrevida e prognóstico desfavorável. A perda de adesão do epitélio e a migração celular são processos biológicos envolvidos na carcinogênese. O objetivo desse estudo foi descrever o padrão de expressão da molécula cinase de adesão focal (FAK) e suas formas fosforiladas, FAK-Tyr576 e FAK-Tyr925, em amostras de CEC no centro do tumor (CT) e zona de invasão (ZI) e no tecido epitelial não neoplásico adjacente a estes tumores (EA). De acordo com a graduação histopatológica, 48,1% do total das amostras de CEC são de grau moderado. Segundo o sistema pTNM, 62,9% eram T1 e T2, 64,8% não apresentaram metástase regional e não houve metástase à distância. O tempo máximo de acompanhamento foi de 5,9 anos e obteve-se a proservação final de 46 dos 54 pacientes, onde foi observado que 58,1% apresentaram boa evolução e 41,9% exibiram evolução ruim. A média em anos para que os pacientes obtivessem o status de evolução ruim foi de 5,01. Quanto ao estadiamento clínico, houve maior imunomarcação no estádio IVa quando comparado ao estádio II no EA da FAK Tyr-576 e ocorreu maior expressão no estádio IVb quando comparado ao estádio I no CT da FAK Tyr-576. Os pacientes que apresentaram evolução ruim após o período máximo de acompanhamento tiveram alta expressão no EA e na ZI da FAK Tyr-576 e no CT da FAK Tyr-925. Na ZI, o aumento de expressão da FAK está associado ao aumento da expressão da FAK Tyr-576. À medida que há aumento da expressão no EA há aumento da expressão na ZI na FAK Tyr-576. E quando há aumento da expressão no EA há aumento da marcação na ZI na FAK Tyr-925. Apesar do papel de todas as FAKs fosforiladas não estar claro, mas sabendo-se que são essas FAKs que estão ativas no câncer, a partir dos dados do presente trabalho pode-se sugerir que a avaliação da marcação FAK Tyr -576 no EA, no CT e na ZI venha a fazer parte da rotina no diagnóstico histopatológico e das margens da peça operatória, como norteadores da conduta terapêutica e do protocolo de acompanhamento. / Squamous cell carcinoma (SCC) of the head and neck is a malignant neoplasm that implies low rates of survival and poor prognosis. The loss of adhesion and cell migration are biological processes involved in carcinogenesis. The aim of this study was to describe the pattern of expression of focal adhesion kinase molecule (FAK) and its phosphorylated forms, FAK-Tyr576, FAK-Tyr925, in SCC samples in the center of the tumor (CT) and invasion zone (ZI) and non-neoplastic epithelial tissue adjacent to these tumors (EA). According to histopathological grading, 48,1% of SCC samples are moderate. According to the system pTNM, 62,9% were T1 and T2, 64.8%, had no regional metastasis and no distant metastasis. The maximum time of follow up was 5,9 years and was obtained as the final proservation 46 of 54 patients, where it was observed that 58,1% of patients had good prognosis and 41,9% of patients had poor prognosis. The average years for patients to obtain the poor prognosis of status was 5.01. As for clinical staging, there was greater immunostaining in the stadium IVa compared to stage II in EA Tyr-576. And FAK expression was higher in stage IVb when compared to CT in stage I of FAK Tyr-576. Patients with poor prognosis after the maximum follow-up period had high expression in EA and ZI of FAK Tyr-576 and CT of FAK Tyr-925. In ZI, increased expression of FAK is associated with increased FAK Tyr-576 expression. As there is increased expression in EA's increased expression in ZI in FAK Tyr-576. And when there is increased expression in EA's increased marking the ZI in FAK Tyr-925. Despite the role of all phosphorylated FAKs not clear, but given that these are FAKs that are active in cancer, from the present data it can be suggested that the evaluation of expression of FAK Tyr 576 in EA, CT and ZI will be part of the routine histopathological diagnosis and surgical specimen margins, as guiding the therapeutic management and monitoring protocol.

Orientador: Prof. Dr. Herculano da Silva Martinho / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do ABC, Programa de Pós-Graduação em Biotecnociência, 2017.

Introduction: The oral squamous cell carcinoma (OSCC) is the most common malignancy of the oral cavity and can manifest itself as an ulcer, one exophytic lesion or a nodule of varying consistency anywhere in the mouth, being tongue the most commited place. There is evidence that inflammation caused by the repair process due to an incisional biopsy or similar trauma, can stimulate the transformation and/or progression of tumor cells, and that is real the possibility of promoting tumor growth called out by the inflammatory response and the repair process. Objective: Evaluate the influence of inflammation in the process of oral carcinogenesis through macroscopical and histological analysis and enzyme immunoassay. Material and Method: An experimental study was conducted in Wistar rats subdivided into negative control group (group 0), positive control groups (1A and 1B), groups submitted to inflammatory stimulus (2A and 2B) and groups subject to the administration of corticosteroids (3A and 3B), in which groups 1A, 2A and 3A were induced for 15 weeks and the groups 1B, 2B and 3B for 33 weeks, by brushing the 4NQO diluted in 0.7% propylene glycol on the tongue of the animals. Macroscopic and histological studies were performed to characterize the lesions, besides enzyme immunoassay to evaluate interleukins 2 and 10 in the development and progression of oral carcinogenesis. Results: Macroscopic analysis revealed that whitish mucosa was observed in all animals submitted to the application of 4NQO. White and/or erythematous plates were found in all groups, with high prevalence between animals induced for more weeks. Lesions in later stages were found only in one animal in 1A group, one animal in 1B group and two animals in 2B group. The mean score of epithelial dysplasia was 30.3 (1A), 51.0 (1B), 29.8 (2A), 41.8 (2B), 30.8 (3A) and 34.0 (3B), with difference statistically significant (p<0.05) between 1A x 1B, 1B x 2B and 1B x 3B. Concerning to IL-2 and IL-10 concentrations, there was no difference statistically significant between groups (p> 0.05), but there was a visible increase in IL-10 levels in 1A group, early stage of tumor transformation, suggesting that IL-10 increase can interfere in this transformation. Evaluating IL-2 between A and B groups (15 and 33 weeks of indução, respectively), it was noticed a more marked difference between the groups 2A and 2B (inflammatory stimulus), while between groups 3A and 3B (corticosteroids), the concentration remained virtually unchanged. Conclusion: It is suggested that the inflammatory stimulus is not sufficient to cause any histological alteration, but the use of corticosteroids appears to interfere with tumor progression; it is necessary to carry out new studies to evaluate the IL -2 and IL-10 concentrations in a larger sample and/or within the lesions, relating them to the concentrations in the peripheral blood. / Introdução: O carcinoma de células escamosas orais (CCEO) é o tumor maligno mais comum da cavidade oral e pode se manifestar como uma úlcera, uma lesão exofítica ou um nódulo de consistência variável em qualquer parte da boca, sendo a língua o sítio mais acometido. Existem evidências de que a inflamação, provocada pelo processo de reparo decorrente de uma biópsia incisional ou de traumas semelhantes, pode estimular a transformação e/ou progressão das células tumorais, e que é real a possibilidade de promoção do crescimento tumoral acarretado pela resposta inflamatória e pelo processo de reparo. Objetivo: Avaliar a influência da inflamação no processo de carcinogênese oral através de análise macroscópica, histológica e imunoenzimática. Material e Método: Foi realizado um estudo experimental em ratas Wistar subdivididas em grupos controle negativo (grupo 0), controles positivos (1A e 1B), grupos submetidos a estímulo inflamatório (2A e 2B) e grupos submetidos à administração de corticosteroide (3A e 3B), em que os grupos 1A, 2A e 3A foram induzidos por 15 semanas e os grupos 1B, 2B e 3B por 33 semanas, através do pincelamento de 4NQO a 0,7% diluído em propilenoglicol na língua dos animais. Estudo macroscópico e análise histológica foram realizados para caracterização das lesões desenvolvidas, além de ensaio imunoenzimático para avaliação das interleucinas 2 e 10 no desenvolvimento e progressão da carcinogênese oral. Resultado: A análise macroscópica revelou que mucosa de aspecto esbranquiçado foi observada em todos os animais submetidos à aplicação de 4NQO. Lesões brancas e/ou placas eritematosas foram encontradas em todos os grupos, com predomínio entre os animais induzidos por mais semanas. Lesões exofíticas foram observadas somente em um animal do grupo 1A, um animal do grupo 1B e dois animais do grupo 2B. O escore médio de displasia epitelial foi de 30,3 (1A), 51,0 (1B), 29,8 (2A), 41,8 (2B), 30,8 (3A) e 34,0 (3B), com diferença estatística significante (p<0,05) entre os grupos 1A x 1B, 1B x 2B e 1B x 3B. Com relação às concentrações de IL-2 e IL-10, não foi encontrada diferença estatisticamente significante entre os grupos (p>0,05), porém houve um aumento visível da IL-10 no grupo 1A, estágio inicial de transformação tumoral, sugerindo que o aumento de IL-10 possa interferir nessa transformação. Avaliando a IL-2 entre os grupos A e B (15 e 33 semanas de indução, respectivamente), notou-se uma diferença mais acentuada entre os grupos 2A e 2B (estímulo inflamatório), enquanto que, entre os grupos 3A e 3B (corticosteroide), a concentração permaneceu praticamente inalterada. Conclusão: O estímulo inflamatório não foi suficiente para causar alteração histológica, mas o uso do corticosteroide interferiu na progressão tumoral; é necessária a realização de novos estudos que avaliem as concentrações de IL-2 e IL-10 em uma amostra maior e/ou dentro das lesões, relacionando-os com as concentrações no sangue periférico, para confirmação dos achados.

MicroRNAs regulam processos celulares e tumorigênese. O carcinoma epidermoide de cabeça e pescoço (CECP) é a sexta neoplasia mais comum no mundo e não existe consenso sobre características moleculares representativas deste tumor. O receptor de fator de crescimento epidemal (EGFR), bem como efetores de sua via de sinalização, podem ser regulados por miRNA-7. Avaliamos a expressão de EGFR e miRNA-7 em amostras tumorais e livres de tumor, observando maior expressão em tumores. O papel do miRNA-7 em CECP foi investigado através de estudo de ganho de função em linhagem celular de carcinoma epidermoide de cabeça e pescoço e em queratinócito oral e por PCR Array direcionado para genes de vias mediadas por EGF. A super-expressão do miRNA-7 alterou a expressão de diversos genes na linhagem celular de carcinoma, resultando na diminuição da proliferação, possivelmente relacionada com a diminuição da expressão gênica e proteica de p70S6K1. Em queratinócitos orais não houve alteração significativa na expressão dos genes avaliados. Concluímos que miRNA-7 interfere na progressão do ciclo celular através da regulação de p70S6K1. A resposta diferente de dois tipos celulares à super-expressão do miRNA-7 mostra a complexidade de suas vias de regulação. / MicroRNAs regulate gene expression. Alterations in microRNA expression are involved in the progression of cancers. MiRNA-7 regulates epidermal growth factor receptor (EGFR) signaling and multiple other genes involved in EGFR-related pathways. Head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) is the six most common cancer in the world, with no consensus on molecular markers for prognosis. We assessed EGFR and miRNA-7 expression levels in HNSCC and tumor-free samples. MiRNA-7 was over-expressed in tumor. Aiming to understand the role of miRNA-7 and EGFR regulation in HNSCC, we over-expressed this molecule in an oral squamous cell carcinoma cell line and in normal oral keratinocytes, and evaluated the expression level of genes of the EGFR signaling pathway using a PCR Array. Most genes were deregulated in the cell line. Cell cycle arrest, possibly due to the down-regulation of p70S6K1, was observed. This deregulation was not detected, in keratinocytes. We conclude that miRNA-7 can interfere in cell cycle progression through targeting p70S6K1 but this action varies according to the molecular background of a given pathology. The understanding of this complexity in gene regulation in critical for therapeutic application of miRNAs.

Made available in DSpace on 2016-08-19T17:37:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO_SULAYNE JANAYNA ARAUJO GUIMARAES.pdf: 2540252 bytes, checksum: 857ace608d3bf1b7e0a27229b8b53d98 (MD5) Previous issue date: 2014-12-03 / FUNDAÇÃO DE AMPARO À PESQUISA E AO DESENVOLVIMENTO CIENTIFICO E TECNOLÓGICO DO MARANHÃO / The anal squamous cell carcinoma (SCCA) is rare, but its incidence has increased and have often been associated with human papilloma presence virus (HPV). Objective: In order to determine the prevalence of HPV infection in this histological variant, the study analyzed paraffin embedded samples of anal carcinoma in patients treated at the University Hospital of the Federal University of Maranhão (HUUFMA) and Maranhão Institute of Oncology Aldenora Bello (IMOAB) between 2001 and 2011. Methods: samples of anal cancer were included whose histological slides and paraffin blocks contained in patient files diagnosed in the Pathology Services IMOAB and HUUFMA and allowed confirmation of the diagnosis and evaluation of the proposed criteria this work. We collected demographic variables relating to the profile and clinical partner in the medical records and pathological reports of 27 patients. The tissue samples preserved in paraffin blocks were sent for DNA extraction using Qiagen column and Xylene Kit. The β-globin constitutive gene was amplified to certify the integrity of DNA in the samples. Later, there was amplification of HPV DNA by reaction technique Polymerase Chain (PCR) using the primer and SPF10 genotyping by reverse hybridization. Results: Among the patients evaluated, 74.07% were women; and 40.75% of the patients were aged between 42 and 52 years. Risk factors such as smoking (22.22%) and alcohol consumption (11.11%) were recorded in this group. Metastases were detected in 11.11% of cases with two cases of distant metastasis to the liver, rectum and vagina. HPV detection was at 81.48% of the positive samples. HPV16 was detected in 100% of the positive samples. High prevalence of HPV 11 was detected also in 11/27 (40.74%). Multiple infections showed 45.45% (10/22) of prevalence in the sample. Conclusion: Our results provide further evidence in support of the strong association of high-risk HPV infection in the development of anal SCC also highlighting a concern with late diagnosis and the need for monitoring and preventive measures for anal carcinoma. / Introdução: O carcinoma anal de células escamosas (SCCA) é raro, porém sua incidência vem aumentando e têm sido frequentemente associado à presença do papiloma vírus humano (HPV). Objetivo: Com o objetivo de verificar a prevalência da infecção por HPV nessa variante histológica, o estudo analisou amostras parafinadas de carcinoma anal em pacientes atendidos no Hospital Universitário da Universidade Federal do Maranhão (HUUFMA) e no Instituto Maranhense de Oncologia AldenoraBello (IMOAB), entre 2001 e 2011. Método: Foram incluídas amostras de câncer anal cujas lâminas histológicas e blocos parafinados constavam nos arquivos de pacientes diagnosticados nos Serviços de Anatomia Patológica do IMOAB e no HUUFMA e permitiram confirmação do diagnóstico e avaliação dos critérios propostos neste trabalho. Foram coletados variáveis referentes ao perfil sócio demográfico e clinico nos prontuários e nos laudos anatomopatológicos de 27 pacientes. As amostras de tecido conservadas em blocos de parafina foram encaminhadas para extração de DNA usando Xilol e Kit de coluna Qiagen. O gene constitutivo β-globina foi amplificado para atestar a integridade do DNA nas amostras. Posteriormente, realizou-se a amplificação do DNA do HPV pela técnica de Reação em Cadeia da Polymerase (PCR) utilizando o primer SPF10 e genotipagem por hibridização reversa. Resultados:Dentre os pacientes avaliados, 74,07% eram mulheres; e 40,75% dos pacientes estavam na faixa etária entre os 42 e 52 anos. Fatores de risco, como tabagismo (22,22%) e etilismo (11,11%) foram registrados no grupo estudado. Metástases foram detectadas em 11,11% dos casos tendo dois casos de metástase à distância para o fígado, reto e vagina. A detecção de HPV foi positiva em 81,48% das amostras. O HPV16 foi detectado em 100% das amostras positivas. Foi detectada alta prevalência também do HPV11 em 11/27 (40,74%). As infecções múltiplas apresentaram 45,45% (10/22) de prevalência na amostra estudada. Conclusão: Nossos resultados fornecem evidências adicionais em apoio à forte associação da infecção pelo HPV de alto risco no desenvolvimento do CCS anal, destacando também uma preocupação com o diagnóstico tardio e a necessidade de monitoramento e medidas de prevenção para o carcinoma anal.

Introdução: A comissura anterior constitui-se em área de infiltração do câncer glótico, mesmo em estádio precoce. Objetivo: Avaliar o acometimento por tumor da cartilagem da comissura anterior em espécimes de laringectomia frontolateral. Métodos: Foram incluídos 48 pacientes submetidos à laringectomia frontolateral por carcinoma espinocelular T1b/T2. Aspectos epidemiológicos, clínicos e análise morfológica histopatológica foram avaliados. Resultados: Quarenta e dois pacientes (87,5%) tinham lesões T1b e seis (12,5%), T2. Trinta e quatro casos (70,8%) apresentaram tecido sadio entre o tumor e a cartilagem tireoidea, 10 casos (20,8%) tinham tumor contíguo à cartilagem e, em quatro casos (8,3%), houve invasão da cartilagem. Não houve maior risco de desfecho adverso nos grupos com infiltração ou tumor adjacente à cartilagem. Grau de diferenciação, índice mitótico, irregularidade nuclear, presença de nucléolo e necrose tumoral não tiveram relação com invasão da cartilagem. Conclusão: A infiltração da cartilagem tireoidea ocorreu em 8,3% dos tumores e não mudou o desfecho em pacientes submetidos à laringectomia fronto-lateral. As características morfológicas não apresentaram significado estatístico / Introduction: The anterior commissure is an area of glottic cancer infiltration, even in early stages. Objective: To evaluate the involvement of cartilage by the tumor of the anterior commissure in surgical specimens of frontolateral laryngectomy. Methods: 48 patients who had undergone frontolateral laryngectomy for T1b/T2 squamous cell carcinoma were included. Epidemiological and clinical aspects as well as morphological histopathological analysis were evaluated. Results: 42 patients (87,5%) had T1b lesions and 6 (12,5%) had T2. Thirty-four cases (70,8%) showed healthy tissue between the tumor and thyroid cartilage, 10 cases (20,8%) had a tumor contiguous with cartilage; and in 4 cases (8,3%) there was cartilage invasion. There was no major risk of adverse closure in the groups with the infiltration or tumor adjacent to cartilage. Grade of cellular differentiation, mitotic index, nuclear irregularity, the presence of nucleolus and tumoral necrosis were not related to cartilage invasion. Conclusion: the infiltration of thyroid cartilage occurred in 8,3% of tumors and did not change the outcome in patients submitted to partial frontolateral laryngectomy. The morphological characteristics did not show any statistical significance

INTRODUÇÃO: A maioria dos pacientes com CECP é diagnosticada em estágios avançados da doença, apresentando taxas de sobrevida insatisfatórias. Em carcinomas localmente avançados e irressecáveis, o tratamento padrão na rotina do ICESP é a QRT a base de cisplatina. Entretanto, cerca de dois terços desses pacientes apresentam recidiva local, à distância ou óbito em cinco anos. Entender os mecanismos de resistência a QRT e descobrir marcadores que possam indicar resposta ao tratamento continuam sendo um desafio. Os microRNAs possuem papel chave nos mecanismos de resistência a QRT, sendo possível quantificá-los em saliva. Neste estudo avaliamos a expressão de microRNAs na saliva de pacientes com CEC de cavidade oral e orofaringe e se esses microRNAs estão contidos dentro de microvesículas. MÉTODOS: Por meio de revisão da literatura e análises in sílico, selecionamos 8 microRNAs para serem avaliados: miR-15a-5p, 21-5p, 23a-3p, 125b-5p, 142-3p, 200b-3p, 296-5p e 503-5p. A expressão dos microRNAs foi determinada por PCR quantitativo na saliva livre de células de 70 pacientes portadores de CEC de cavidade oral e orofaringe localmente avançado e irressecável, em diferentes estágios da progressão da doença: antes de iniciar tratamento (G1), com falha do tratamento (G2) e livre da doença há 2 anos (G3) e em 28 voluntários sadios (G0). Microvesículas foram isolados por ultracentrifugação ou exoQuick, analisados por Microscopia Eletrônica de Transmissão (MET), Nanosight e para determinação da expressão do miR-21-5p. RESULTADOS: Os miRs-296-5p e 503-5p foram indetectáveis na maioria das amostras testadas. Quando comparamos os grupos em diferentes situações clínicas, encontramos diferença significativa na expressão do miR-21-5p (p=0.005), miR-23a-3p (p=0,026), miR-125-5p (p=0,013), miR-142-3p (p=0,033) e miR-200b-3p (p=0,031). Observou-se aumento na expressão dos miRs 21-5p (p=0,001), 23a-3p (p=0,004), 125b-5p (p=0,026) e 142-3p (p=0,005) na saliva dos pacientes em G1 em relação ao voluntários sadios (G0). O grupo G3 também apresentou maior expressão do mir-21-5p (p=0,018), 125b-5p (p=0,002) e 200b-3p (p=0,014) comparado ao G0, assim como o grupo G2 teve maior expressão do mir-15a-5p (p=0,023) e 23a-3p (p=0,017) comparado ao grupo G0. O grupo G2 apresentou menor expressão do miR-200b-3p (p= 0,019) e maior expressão do miR-15a-5p (p=0,057) em relação ao grupo G3. Além disso, os pacientes tabagistas e/ou etilistas apresentaram maior expressão relativa do miR-21-5p (p=0,001 e p=0,046, respectivamente) e os etilistas também tiveram maior expressão do miR-200b-3p (p=0,013). Com relação à resposta inicial do paciente ao tratamento avaliada pelo médico bem como, com a resposta a longo prazo (recidiva, status global e prognóstico), a expressão dos miR-15a-5p, miR-125b-5p, miR-23a-3p e miR-142-3p apresentaram associação com sobrevida livre de progressão e sobrevida global, porém não atingiram significância estatística. Microvesículas foram detectadas na saliva tanto na MET como na contagem no nanosight. A expressão do miR-21-5p foi predominantemente detectada dentro de microveículas em relação ao sobrenadante livre de vesículas. CONCLUSÕES: Alguns dos microRNAs analisados foram diferencialmente expressos entre os diferentes grupos estudados, a expressão do miR-21 foi associada ao tabagismo e etilismo e a do miR-200b com etilismo e a expressão de alguns microRNAs podem estar associadas à resposta ao tratamento e ao prognóstico dos pacientes / BACKGROUND: Most patients with HNSCC are diagnosed in advanced stages of the disease, with unsatisfactory survival rates. In locally advanced and unresectable carcinoma, the standard treatment in ICESP is cisplatin based QRT. However, about two-thirds of these patients have local recurrence, distance or death within five years. Understanding the QRT resistance mechanisms and discovery of markers that may indicate benefit of treatment is a great challenge. MicroRNAs have key role in the mechanisms of QRT resistance and are detectable in saliva. In the present study we analyzed the expression of microRNAs in the saliva from oral cavity/oropharynx squamous cell carcinoma (OSCC) patients and whether these microRNAs are contained within exosomes. METHODS: Through a review of studies in the literature and by in silico analysis, we choose 8 microRNAs to be evaluated: miR-15a-5p, 21-5p, 23a-3p, 125b-5p, 142-3p, 200b-3p, 296-5p and 503-5p. The expression of microRNAs was determined by quantitative PCR in the cell-free saliva from 70 locally advanced and unresectable OSCC patients at different stages of disease progression: treatment naive (G1), after treatment failure (G2) and disease free for at least 2 years (G3) and 28 healthy volunteers (G0). Exosomes were isolated by ultracentrifugation or exoQuick, analyzed by transmission electron microscopy (MET), Nanosight quantification and by determination of the miR-21-5p expression. RESULTS: The miRs-296-5p and 503-5p were undetectable in almost all saliva samples. Significant differences was observed in the expression of miR-21-5p (p=0.005), miR-23a-3p (p=0.026), miR-125-5p (p=0.013) miR-142-3p (p=0.033) and miR-200b-3p (p=0.031) among the groups analyzed. The expression of miRs 21-5p (p=0.001), 23a-3p (p=0.004), 125b-5p (p=0.026) and 142-3p (p=0.005) were high in saliva of G1 patients as compared to heath volunteers (G0). The G3 group also showed higher expression of mir-21-5p (p=0.018), 125b-5p (p=0.002) and 200b-3p (p=0.014) and G2 presented higher expression of miR-15a-5p (p=0.023) and 23a-3p (p=0.017) as both compared to the G0. The group G2 presented lower expression of the miR-200b-3p (p=0.019) and higher expression of the miR-15a-5p (p=0.057) as compared to the G3 group. In addition, saliva from the smokers and/or drinkers patients showed high relative expression of the miR-21-5p (p=0.001 e p=0.046; respectively) compared to former drinker/smokers and drinkers also showed high expression of the miR-200b-3p (p=0.013). In relation to the initial response to treatment assessed by the physician, as well the long-term response (relapse, global status and prognosis), the expression of the miR-15a-5p, miR-125b-5p, miR-23a-3p e miR-142-3p showed association with progression-free survival and overall survival, however did not reach statistical significance. Microvesicles were detected in saliva by both MET as the count in nanosight. The expression of the miR-21-5p was predominantly detected in microvesicles in relation to the supernatant. CONCLUSIONS: Some of the microRNAs analyzed were differentially expressed between the different groups, the expression of the miR-21 was associated with smoking and drinking habits and of the miR-200b with drinking habits and the expression of some microRNAs may be associated with the treatment response and prognosis of the patients