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Made available in DSpace on 2015-05-14T12:59:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Arquivototal.pdf: 2770528 bytes, checksum: ffc60fc08aba8cb85f5a803d43b32322 (MD5) Previous issue date: 2012-08-31 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / This study describes the preparation and characterization using several analytical techniques of crystalline solid dispersions of glibenclamide (GB) with sodium lauryl sulphate (SLS) or polyvinylpyrrolidone (PVP K30), exhibiting improved solubility in relation to the active pharmaceutical ingredient (API). The crystallinity of the drug in the solid dispersions with SLS prepared using spray-drying or evaporation under reduced pressure decreased by just 1.9% and 4.2% respectively in comparison with the API. The preparation of solid dispersions of GB with both SLS and PVP K30 by spray-drying using the surface-attached method resulted in improved dissolution of GB (9.0 ± 1.0% and 69.9 ± 9.3% at 60 min., respectively), in relation to the API (16.9 ± 6.2% at 60 min.). Thermal analysis data showed that no significant difference in the temperature of GB melting peak was observed in the solid dispersions with SLS and PVP K30 prepared by spray drying in relation to the temperature observed in the API or in the physical mixtures. This supports the idea that GB did not undergo amorphization in the solid dispersions. The infra-red spectroscopy data also corroborate the lack of GB amorphization since the amide NH-stretch band was present in the solid dispersions spectra and this band is reported to be absent in the spectrum of amorphous GB. Electron microscopy data revealed that solid dispersions prepared by rotary evaporation under reduced pressure are composed of particles with higher sphericity, uniformity and a more thorough dispersion of the hydrophilic carrier (SLS) than dispersions prepared by rotary evaporation under reduced pressure, which may explain the differences observed in the dissolution profile of the dispersions prepared by the two techniques. The solid dispersions of GB with PEG1500 and PEG6000 by spray drying also resulted in crystalline dispersions, but thermal analysis data support the idea of eutectic mixture between GB and carriers, which is corroborated by literature data. Taken together our results demonstrate that the solid dispersions of GB described in this study resulted in improved dissolution without evidence of significant amorphization. / Este trabalho descreve a preparação e caracterização por diversas técnicas analíticas, de dispersões sólidas cristalinas de glibenclamida (GB) com lauril sulfato de sódio (LSS), polivinilpirrolidona (PVP K30) e polietileno glicóis (PEG1500 e PEG6000). A cristalinidade do fármaco nas dispersões sólidas com LSS preparadas utilizando-se secagem por aspersão ou evaporação rotatória foi medida utilizando difração de raios-X de pó e diminuiu a cristalinidade em apenas 1,9% e 4,2% respectivamente, em comparação com o ingrediente farmacêutico ativo (IFA). A preparação de dispersões sólidas, tanto com LSS quanto com PVP K30, utilizando secagem por aspersão pelo método de adsorção de superfície resultou em aumento de dissolução da GB (99,9 ± 1,0% e 69,9 ± 9,3% aos 60 minutos, respectivamente), em comparação com o IFA (16,9 ± 6,2% aos 60 minutos). Os dados de análise térmica demonstram que não houve alteração significativa da temperatura do pico de fusão da GB nas dispersões sólidas com LSS e PVP K30 preparadas por secagem por aspersão em relação à temperatura observada para o IFA ou para as misturas físicas, o que corrobora que a GB não sofreu amorfização nas dispersões sólidas. A análise por espectroscopia no infravermelho também corroborou a ausência de amorfização da GB, uma vez que os espectros das dispersões sólidas de GB (tanto com LSS quanto com PVP K30) preparadas por secagem por aspersão mantiveram a banda de estiramento característico do grupo N-H amida, que se sabe ser completamente suprimida no espectro descrito na literatura para a GB amorfa. As dispersões obtidas por secagem por aspersão apresentam partículas circulares, mais uniformes e com maior dispersão do carreador hidrofílico (LSS) do que as dispersões preparadas por evaporação sob pressão reduzida, o que talvez explique as diferenças observadas no perfil de dissolução. As dispersões sólidas de GB com PEG1500 e 6000 também demonstraram que a GB manteve sua cristalinidade, mas os dados de análise térmica mostram a formação de uma mistura eutética nestas dispersões sólidas, o que é confirmado por dados da literatura. Tomados em conjunto, nossos resultados demonstram que as dispersões sólidas de GB aqui descritas resultaram em aumento de dissolução do fármaco sem evidência de amorfização significativa.

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Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Biologia Vegetal. / Made available in DSpace on 2012-10-20T19:22:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 191868.pdf: 972839 bytes, checksum: bed97be693f7a5fdf77d4111dfc4c512 (MD5) / No Brasil, a ocorrência de bromélias está intimamente relacionada à área de domínio da Floresta Atlântica. As bromélias epifíticas exercem forte influência nos processos e manutenção dos ecossistemas. Sua distribuição está ligada, entre outros fatores, à intensidade luminosa e à umidade, o que as tornam hábitat-dependentes. A fragmentação e alteração da floresta leva à uma drástica alteração de suas populações. Pouco se conhece sobre como os diferentes níveis de alteração da floresta podem afetar a estrutura da comunidade de bromélias epifíticas e como esta varia nos estádios sucessionais. Desta forma, o presente trabalho teve por objetivo avaliar a composição florística e a distribuição espacial de bromélias epifíticas em diferentes estádios da sucessão secundária: Capoeirinha (CAP1), Capoeira (CAP2), Capoeirão (CAP3), Floresta Secundária (FS) e, também em Floresta Primária (FP). O estudo foi desenvolvido na Floresta Ombrófila Densa, no Parque Botânico do Morro Baú, Ilhota/SC. Para amostrar a flora de bromélias epifíticas, cada forófito foi considerado uma unidade amostral, definido pelo método de quadrantes centrados. Em cada estádio foram amostrados 60 forófitos com o DAP (diâmetro à altura do peito = 1,30m) = 5cm para os estádios CAP2 e CAP3, =10cm para a FS e =15cm para a FP; espécies não arbóreas do estádio CAP1, com o DAS (diâmetro à altura do solo) = 2 cm. Para o registro da distribuição vertical, o forófito foi divido em intervalos de altura de dois metros a partir do solo e levantados presença/ausência de espécies e grau de cobertura de bromélias, avaliado por uma escala de pontuações, onde cada ponto correspondeu a um intervalo de porcentagem: 0= 0%; 1= 1% a 25%; 2= 26% a 50%; 3= 51% a 75%; 4= 76% a 100%. Foram registradas 27 espécies, pertencentes a oito gêneros e duas sub-famílias. Vriesea incurvata foi a espécie mais freqüente em todos os estádios estudados. FP apresentou o maior número de espécies (24) e a maior diversidade (H'=2,69), e o CAP3, o menor número (11 spp) e diversidade (H'=1,98). Não houve registro de bromélias adultas nos dois primeiros estádios e plântulas começaram a ocorrer a partir do estádio CAP2. Além do decréscimo do número de espécies, ocorreu também uma diminuição no grau de cobertura e número de forófitos colonizados por bromélias adultas e plântulas, em direção à FP. Aechmea caudata e Vriesea atra, podem ser sugeridas como indicadoras características de FP por terem sido encontradas exclusivamente nesse ambiente. Não foi encontrada especificidade entre bromélias epifíticas e espécies forofíticas. Preferência por padrão de casca foi encontrado em todos os estádios. A relação entre o DAP e o número de espécies de bromélias foi mais forte que este com o parâmetro altura, e esta relação aumentou gradativamente em direção à FP. A maior concentração de espécies e indivíduos de bromélias da FS e FP ocorreu nas regiões de início de copa e final de fuste e, no CAP3, entre a região basal e de copa. As espécies variaram na amplitude de distribuição e alturas de preferência de estádio para estádio, alcançando, de modo geral, alturas mais elevadas na FP. Em todos os estádios, destacaram-se as espécies com dispersão anemocórica. Espécies em floração podem ser encontradas ao longo de todo o ano, sendo janeiro, fevereiro e março os meses que apresentaram o maior número de espécies em floração. Bromélias-tanque corresponderam a 85% das espécies. As condições microclimáticas necessárias para o estabelecimento e desenvolvimento das bromélias epifíticas foram encontradas a partir do estádio CAP3.

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Este trabalho é resultado de uma pesquisa para determinar a prevalência das enteroparasitoses e sobretudo da amebíase em indivíduos residentes em áreas urbana e rural do Município de São João do Piauí, onde as condições de higiene e de saneamento básico são precárias, sem água tratada para a maioria dos moradores. Na primeira etapa, foram recolhidas 791 amostras de fezes e constatou-se que 58% dos indivíduos apresentavam um ou mais parasito intestinal, incluindo alguns de interesse médico; na segunda etapa, realizou-se a diferenciação das amebas do Complexo Entamoeba histolytica / Entamoeba dispar em 33 amostras de fezes frescas das 172 amostras positivas, que revelou a prevalência de 39% para a forma patogênica e invasiva Entamoeba histolytica. A análise de amostras de soro pela técnica de Imunofluorescência indireta para avaliar a possibilidade de ocorrência de casos de amebíase extraintestinal, revelou que apenas 5% dos soros testados apresentavam títulos de anticorpo anti-Entamoeba histolytica, sugerindo que a colonização por Entamoeba histolytica não necessariamente induz a produção de resposta imune humoral e que a ocorrência de quadros invasivos o abscesso hepático não é comum na região / This work is the result of research to determine the prevalence of enteroparasitosis, particularly amoebiasis, in individual who reside in the rural and urban areas of São João do Piauí municipality where basic sanitary and hygienic conditions are precarious, the water having no types of treatment for the majority of people. In the first step, 791 stools samples were collected and it was confirmed that 58% of the individuals presented one or more intestinal parasites, including some of medical interest; in the second step, a differentiation was made between the amoebas of the Entamoeba histolytica / Entamoeba dispar complex in 33 fresh stool of 172 positive samples which revealed a prevalence of 39% of the pathogenic and invasive form of Entamoeba histolytica. The analysis of serum samples by Indirect Immunofluorescence techinique to evaluate the probability of occurrence of extra-intestinal amoebiasis reveled only 5% of the tested sera suggesting that antibody titles of Entamoeba histolytica do not necessarily colonize the humoral immune response and that invasive events such as hepatic abscess are not common in this region

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2018-11-01T15:30:56Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Daniel Pereira Cavalcante - 2018.pdf: 1689683 bytes, checksum: f7e099cdea49d38708f07e5f523e5d8b (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2018-11-01T15:49:18Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Daniel Pereira Cavalcante - 2018.pdf: 1689683 bytes, checksum: f7e099cdea49d38708f07e5f523e5d8b (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-11-01T15:49:18Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Daniel Pereira Cavalcante - 2018.pdf: 1689683 bytes, checksum: f7e099cdea49d38708f07e5f523e5d8b (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2018-10-04 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Ghrelin is a recently discovered peptide, mainly produced in the stomach and involved in body's energy-maintenance processes. Ghrelin exerts its actions by activating the growth hormone secretagogue receptor (GHS-R). A number of studies have investigated the involvement of ghrelin in the modulation of emotional behavior. In this context, evidence shows the presence of GHS-R receptors in the dorsal raphe nucleus (DRN), the main source of serotonergic neurons that innervate encephalic structures involved in emotional control. Our study aims to evaluate the effects of the pharmacological manipulation of ghrelin receptors located in the DRN on the expression of the behavioral responses of Wistar rats. Such responses were assessed in the elevated T maze (ETM), an experimental model that allows the measurement, in the same animal, of two defensive behavioral strategies, inhibitory avoidance and escape. Our results showed that the intra-DRN infusion of ghrelin impaired the acquisition of inhibitory avoidance, an anxiolytic-like effect, and facilitated the expression of escape response in the ETM, indicating a panicogenic-like effect. The intra-DRN administration of the ghrelin receptor (GHS-R1a) antagonist PF-04628935 did not alter the behavioral tasks assessed in the ETM. Finally, our results revealed that intra-DRN infusions of PF-04628935 prior to the administration of ghrelin into this area neutralized the behavioral effects obtained in the ETM. Taken together, our data reveal an important involvement of the ghrelin central signaling system in the mediation of defensive behavioral responses that have been associated with generalized anxiety and panic disorders. / A grelina é um peptídeo recentemente descoberto, produzido principalmente no estômago e envolvido nos processos de manutenção de energia do organismo. A grelina exerce suas ações ao ativar o receptor secretagogo do hormônio do crescimento (GHS-R). Uma série de estudos tem investigado o envolvimento da grelina na modulação de comportamentos emocionais. Neste contexto, evidências mostram a presença de receptores GHS-R no núcleo dorsal da rafe (NDR), principal fonte de neurônios serotonérgicos que inervam estruturas encefálicas envolvidas no controle emocional. O objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos obtidos com a manipulação farmacológica dos receptores de grelina localizados no NDR sobre a expressão das respostas comportamentais de esquiva inibitória e fuga de ratos. Tais respostas foram avaliadas no labirinto em T elevado (LTE), modelo experimental que possibilita a medida, em um mesmo animal, de duas estratégias comportamentais defensivas, a esquiva inibitória e a fuga. Os dados de nosso estudo mostraram que a infusão intra-NDR de grelina prejudicou a aquisição da resposta de esquiva inibitória, um efeito ansiolítico, e facilitou a expressão da resposta de fuga dos animais no LTE, um efeito panicogênico. A administração intra-NDR do antagonista de receptores de grelina (GHS-R1a) PF-04628935 não modificou as respostas comportamentais defensivas avaliadas no LTE. Por fim, nossos dados mostraram que a infusão de PF-04628935 previamente à injeção de grelina no NDR foi capaz de bloquear os efeitos comportamentais obtidos no LTE. Tomadas em conjunto, as evidências obtidas em nosso estudo apontam para um importante envolvimento do sistema central de sinalização do peptídeo grelina na mediação de respostas comportamentais defensivas que têm sido associadas aos transtornos de ansiedade generalizada e do pânico.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2017-03-13T19:52:38Z No. of bitstreams: 1 renatadacostabarrossilva.pdf: 1433857 bytes, checksum: f5d2ce8839102f4ecd28191491a39c39 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2017-03-16T12:52:39Z (GMT) No. of bitstreams: 1 renatadacostabarrossilva.pdf: 1433857 bytes, checksum: f5d2ce8839102f4ecd28191491a39c39 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-16T12:52:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 renatadacostabarrossilva.pdf: 1433857 bytes, checksum: f5d2ce8839102f4ecd28191491a39c39 (MD5) Previous issue date: 2016-12-14 / FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Os ruminantes são animais capazes de utilizar a fibra contida nos vegetais como alimento devido a atuação de microrganismos contidos em seu trato digestivo. A prospecção por organismos da microbiota ruminal com potencial capacidade de degradação de celulose e xilana tem grande importância em atividades antrópicas e processos industriais. Foram realizadas coletas semanais de conteúdo ruminal de bovinos fistulados para posterior isolamento de bactérias com o auxílio da metodologia desenvolvida por Hungate (1966) com modificações e outros meios de cultura específicos para microrganismos do rúmem. Os isolados foram avaliados quanto as suas características morfo-tintoriais com o auxílio da coloração de Gram e quanto a motilidade mediante inoculação em meio SIM suplementado. Também foi avaliado o metabolismo energético dos isolados por meio de teste respiratório, assim como o seu perfil enzimático com a utilização de zimogramas. Uma vez caracterizados, os isolados foram acondicionados em freezer -20ºC para caracterização molecular e posterior inclusão na coleção de microrganismos da Embrapa. No total foram obtidos 67 isolados, sendo destes 52 cocos Gram positivos, 10 bacilos Gram negativos e 5 bacilos Gram positivos. O teste de motilidade revelou que apenas 12 dos 67 isolados eram móveis e no teste respiratório observou-se que 14 eram anaeróbios estritos. Os zimogramas demonstraram que 14 isolados são celulolíticos e 53 são xilanolíticos. Pelos kits comerciais de identificação microbiana, das 67 linhagens bacterianas isoladas, 49,3% foram identificadas no nível de espécie com identidade aceitável (15,15%) ou boa identificação (34,15%), enquanto que 50,7% linhagens não foram identificadas pela técnica utilizada. Os isolados foram agrupados em biogrupos, de acordo com as semelhanças em seus perfis bioquímicos, e uma ribotipagem foi realizada com até três integrantes de cada biogrupo. A reação só foi possível com os bacilos Gram positivos e negativos. Um integrante de cada ribotipo e até três de cada biogrupo foram selecionados para amplificação a região do DNA codificadora do rRNA 16S e posterior sequenciamento. Após análise das sequências de DNA resultantes, as espécies Selenomonas ruminantium, Streptococcus sp., Pseudobutyrivibrio sp. e Lactobacillus vitulinus foram identificadas entre os isolados. Um dos isolados não obteve identificação satisfatória. Foi possível avaliar que não houve alterações significativas no perfil da comunidade bacteriana frente as diferentes dietas. A comparação entre os resultados dos dois métodos de identificação indicou que os kits bioquímicos utilizados no trabalho não são aconselhados para a identificação de bactérias ruminais. O sequenciamento da região do DNA codificadora do rRNA 16S ainda é a forma de identificação mais segura. A identificação de isolados potencialmente celulolíticos e xilanolíticos como Selenomonas ruminantium e Lactobacillus vitulinus constitui novas evidências da presença de atividade fibrolítica em indivíduos dessas espécie. Mais estudos devem ser realizados de forma a comprovar a expressão de fitases por essas bactérias. Os resultados obtidos nesse estudo são importantes para a melhor compreensão do ecossistema ruminal e futuramente podem contribuir para o melhoramento da hidrólise de material lignocelulósico na indústria. / Ruminants are animals capable of utilizing the fiber contained in vegetables as feed due to the microrganisms present in their digestive tract. The prospection of organisms with potential ability to degrade cellulose and xylan in the rumen microbiota is of great importance in anthropogenic activities and industrial processes. Samples of ruminal content were collected weekly from fistulated bovines for later bacteria isolation by making use of the technique described by Hungate (1966) with modifications by Bryant and Burkey (1951). The isolates were evaluated regarding their morphotintorial characteristics by using Gram stain and regarding their motility by inoculation in supplemented SIM media. The isolates energetic metabolism was also evaluated by respiratory test, as well as their enzymatic profile by zymmograms. Once characterized, the isolates were stored in -20ºC freezer for molecular identification and later inclusion in the EMBRAPA microorganism collection. A total of 67 isolated were obtained, of which 52 were Gram positive cocci, 10 were Gram negative rods and 5 were Gram positive rods. The motility test revealed that only 12 out of the 67 isolates were motile and in the respiratory test it was possible to observe that 14 bacteria were obligate anaerobes. The zymmograms showed that 14 isolates were potencially cellulolytic and 53 were potencially xylanolytic. The commercial biochemical identification kits revealed that out of the 67 bacteria, 49,3% obtained species identification with acceptable (15,15%) or good identification (34,15%), while 50,7% were not identified by this technique. The isolates were grouped in biogroups, according to the similarities in their biochemical profiles, and up to three integrals were chosen for ribotyping. The reaction was only possible with the rods. One member of each ribotype and up to three members of each biogroup were selected for amplification of the DNA region that encodes the 16S rRNA and later sequencing. After analysis of the resulting sequences, the species Selenomonas ruminantium, Streptococcus sp., Pseudobutyrivibrio sp. e Lactobacillus vitulinus were identified among the isolates. One of the isolates did not present satisfactory identification. It was possible to evaluate that the two different diets did not cause significant changes in the bacterial community profile. The comparison between both identification methods showed that the biochemical kits utilized during this research should not be used for the identification of ruminal bacteria. The sequencing of the the DNA region that encodes the 16S rRNA is still the safest form of identification. The identification of potencially cellulolytic and xylanolytic isolates as Selenomonas ruminantium and Lactobacillus vitulinus presents new evidence of the fibrolytic activity in individuals from those species. More studies are needed so as to verify the phytase expression by those bacteria. The results in this study are important for better comprehension of the rumen ecosystem and, in the future, could contribute to improvements in the industrial hydrolysis of lignocellulosic material.

El uso intensivo de herbicidas en suelos de la región Pampeana plantea una preocupante situacióon ambiental. Sin embargo, no hay información sobre los efectos adversos de estos agroquímicos sobre los procesos biológicos del suelo en los agroecosistemas de la región. En esta tesis se evaluaron los impactos de tres herbicidas de uso extendido (glifosato, ácido 2,4-diclorofenoxiacetico [2,4-D] y metsulfuron-metil) sobre las comunidades microbianas de suelos, con un enfoque metodológico integrador. Se recolectaron tres diferentes tipos de suelos (Haplustol tıpico, Paleustol petrocálcico, Argiudol típico) en establecimientos agrícolas ubicados en el sur de la provincia de Buenos Aires, con historia de exposición a los herbicidas. Se estudiaron los efectos de corto plazo sobre la microbiota tras la aplicación de diferentes dosis de herbicidas en microcosmos de suelo. La actividad microbiana se evaluó midiendo la liberación de CO2 del suelo y actividades enzimáticas (deshidrogenasas [DHA] e hidrólisis de fluoresceína [FDA]). También se determinó número de bacterias (bacterias aerobias heterótrofas cultivables [AHB]), biomasa activa (respiración inducida por sustrato [SIR]) y riqueza funcional (utilizacion de sustratos carbonados). El metsulfurón-metil tuvo efectos mínimos sobre la comunidad microbiana, afectando solo la respiración en un suelo con pH ligeramente alcalino. Con las dosis mas bajas utilizadas de glifosato y 2,4-D se observaron efectos agudos, transitorios y reversibles, sobre la actividad microbiana, la biomasa activa, la abundancia de bacterias y la riqueza metabólica. Las técnicas actuales para obtener un rápido patron de utilización de sustratos carbonados de las comunidades microbianas de suelos (i.e., community-level physiological profiling o CLPP) dan una visión limitada y parcial de la estructura de las comunidades, con escasa relación con las actividades que estas llevan a cabo in situ. En esta Tesis se optimizó un método alternativo de CLPP, basado en la detección fluorométrica de consumo de oxígeno en el sistema de microplaca BD Oxygen Biosensor System (BDOBS). Este dispositivo permite la incubación de suspensiones de suelo densas y ofrece la capacidad de manipular los factores experimentales (i.e. adicion de nutrientes y sustratos, agregado de inhibidores selectivos, etc.). El análisis BDOBS-CLPP de microcosmos de suelos tratados con 2,4-D y glifosato mostro cambios mínimos en la utilización de sustratos en las comunidades microbianas. Con el sistema BDOBS se detecto la degradación aeróbica del 2,4-D en un suelo tratado experimentalmente, mientras que en los microcosmos tratados con glifosato no se verificó degradación. El análisis de tolerancia de la comunidad microbiana inducida por polución (PICT) en un suelo con historia de exposición al 2,4-D revelo que este suelo alberga una microbiota tolerante al herbicida. En consecuencia, la población degradadora aumento luego de la adición del herbicida al suelo y se aislaron bacterias degradadoras capaces de utilizar el herbicida como unica fuente de carbono y energía. Estos aislamientos se identificaron como Cupriavidus necator, portadores de genes de degradación posiblemente homólogos a los encontrados en C. necator JMP134, el organismo en el que mas se ha estudiado la degradación del 2,4-D. En conclusión, estos herbicidas no tuvieron efectos considerables sobre la microbiota de suelos agrícolas que han tenido una exposición previa a los agroquímicos. / The intensive use of herbicides in agricultural soils of the Pampas region is a matter of environmental concern. However, information on the side-effects of agrochemicals on biological processes is scarce. This thesis dealt with the impacts of three widely used, post-emergence herbicides (glyphosate, 2,4dichlorophenoxyacetic acid (2,4D) and metsulfuron-methyl) on soil microbial communities, by an integrated methodological approach. Three different types of soils (Typic Haplustoll, Petrocalcic Paleustoll, Typic Argiudoll) were collected from agricultural fields located in the south of the province of Buenos Aires, with reported history of herbicide application. Short-term effects on microbial communities after treatment with different doses of the herbicides were studied in soil microcosms. Microbial activity was examined by CO2-evolution and enzyme activities (dehydrogenase activity [DHA] and fluorescein diacetate [FDA] hydrolysis); bacterial numbers (culturable aerobic heterotrophic bacterial [AHB]), active biomass (substrateinduced respiration (SIR)) and functional richness (carbon sources utilization) were also assessed. Metsulfuron-methyl had the least pronounced effects on soil microbial community, with only minor detectable effects on CO2 evolution in a soil with relatively high pH. Short-term, reversible effects on microbial activity, active biomass, bacterial abundance and functional richness were observed with low rates of 2,4D and glyphosate. Current approaches for rapid assessment of carbon source utilization by whole soil communities (i.e., community-level physiological profiling or CLPP) provide a limited, biased view of microbial community structure with little connection to in situ activities. In this Thesis an alternative CLPP approach based upon fluorometric detection of oxygen consumption in the microtiter platform BD Oxygen Biosensor System (BDOBS) was optimized. This tool allows the incubation of thick soil suspensions together with flexible manipulation of experimental factors (i.e. nutrient and substrates amendments, selective inhibitors, etc.). The BDOBS-CLPP of soil microcosms treated with low rates of 2,4-D and glyphosate showed minor changes in substrates utilization by microbial communities. Significant aerobic degradation was detected in 2,4-D-treated soils with the BDOBS, but not in glyphosate-amended microcosms. Pollution-induced community tolerance (PICT) testing of a soil with history of exposure to 2,4-D revealed that this soil harbors an herbicidetolerant microbial community. Accordingly, the 2,4-D-degrader population increased after herbicide addition to soil, and degrading bacteria were isolated that used it as the only C and energy source. These isolates were identified as Cupriavidus necator, carrying degrading genes most likely homologous to the ones found in C. necator JMP134, the model organism for 2,4-D degradation. To conclude, these herbicides exerted no major effects on microbial communities of agricultural soils that had been previously exposed to these agrochemicals.

Submitted by Caroline Xavier (caroline.xavier@pucrs.br) on 2017-10-24T13:28:26Z No. of bitstreams: 1 TES_ANA_CAROLINA_REIMANN_RIES_COMPLETO.pdf: 2171271 bytes, checksum: 3de99b9106ee2728d32a48eedccd9591 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-24T13:28:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TES_ANA_CAROLINA_REIMANN_RIES_COMPLETO.pdf: 2171271 bytes, checksum: 3de99b9106ee2728d32a48eedccd9591 (MD5) Previous issue date: 2017-03-23 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / Studies on diversity and biology of insects colonizing carcasses exposed to the natural environment have gradually increased and contributed to the development of forensic entomology in Brazil. These surveys provide information that may assist in estimating the postmortem interval (PMI) and in the resolution of other issues related to the legal scope. This study aimed to characterize the fauna of insects associated with exposed pig carcasses in the region of Porto Alegre, Rio Grande do Sul, Brazil, relating the effects of biotic and abiotic factors to the community of these organisms. In addition, alternative methodologies were investigated, based on DNA barcode analysis, to identify species of necrophagous Diptera of forensic interest for the study site. Experiments were conducted in the months of January and September of 2014, relating them to hot and dry and cold and wet seasons, respectively. As experimental model, domestic male pigs of approximately 12 kg were used. Immediately after death, carcasses were placed in metal cages under a modified "Shannon" trap. For sampling adult insects, active collections of winged insects were made and pitfall traps were used for the terrestrial ones. For the collection of immature insects, trays containing sawdust were placed under the carcass. The tray?s contents were later removed and transferred to plastic pots with an organza cover to allow them to cramp and complete their development until emergence. Collections were performed daily, as well as photographic records to characterize the stages of decomposition. Abiotic data such as temperature, relative humidity and rainfall were obtained from the National Institute of Meteorology (INMET). In total, 16.321 insects belonging to orders Diptera (78 species) and Coleoptera (56 species) were collected. Four stages of decomposition were recognized: fresh, bloated, decay and dry. In the hot and dry season with temperature averages of 31.3? C, relative air humidity of 55.3% and total rainfall of 13.1 mm, the decomposition occurred in 10 days, and 2.326 specimens were collected. In the cold and wet season, with temperature averages of 19.3? C, humidity of 78.4% and total precipitation of 161.4 mm, the decomposition lasted 34 days, and 13.995 specimens were collected. Diptera was predominant in both seasons and represented the only order of insects that used the carcass as a resource for the development of their offspring, including those belonging to the families Calliphoridae, Muscidae and Sarcophagidae. Beetle diversity was higher in the cold and wet season, with representatives of Dermestes maculatus (Dermestidae), Euspilotus azureus (Histeridae) and Oxelytrum discicolle (Silphidae). Differing from other similar studies in the hot and dry season, there was an increase in the number of accidental insects (Chrysomelidae), a fact that can be attributed to the high temperatures recorded, evidencing the strong influence of abiotic factors on the diversity of the community of insects that colonized the carcasses. For the molecular characterization, 40 male individuals of seven species of flesh flies of forensic interest were morphologically determined previously. Fragments were obtained from the COI (cytochrome c oxidase subunit I) region of the mitochondrial DNA of approximately 595bp length, which were useful for differentiation and characterization of the different taxa proposed here.Thus, the results obtained here evidenced the importance of regional studies on taxa of forensic importance, mainly due to the biotic and abiotic influences on the local community associated with the carcasses. / Estudos sobre a diversidade e biologia de insetos que colonizam carca?as expostas ao ambiente natural t?m aumentado gradativamente e contribu?do para o fomento da entomologia forense no Brasil. Essas pesquisas trazem informa??es que podem auxiliar na estimativa do intervalo p?s-morte (IPM) e na resolu??o de outras quest?es relacionadas ao ?mbito legal. Esse trabalho teve como objetivo caracterizar a fauna de insetos associados a carca?as de su?nos expostas na regi?o de Porto Alegre, Rio Grande do Sul, Brasil, relacionando os efeitos dos fatores bi?ticos e abi?ticos sobre a comunidade destes organismos. Adicionalmente, foram investigadas metodologias alternativas, a partir da an?lise do DNA barcode, para identifica??o de esp?cies de d?pteros necr?fagos de interesse forense para o local de estudo. Os experimentos foram conduzidos nos meses de janeiro e setembro de 2014, relacionando-os as esta??es quente e seca e fria e ?mida, respectivamente. Como modelo experimental foram utilizados su?nos dom?sticos machos de aproximadamente 12 kg. Imediatamente ap?s a morte as carca?as foram dispostas em gaiolas met?licas sob uma armadilha modificada do tipo ?Shannon?. Para a amostragem dos insetos adultos foram feitas coletas ativas para insetos alados e armadilhas de queda do tipo pitfall para os terrestres. Para a coleta de imaturos foram dispostas bandejas sob a carca?a contendo serragem, a qual tinha seu conte?do removido e transferido para potes pl?sticos com cobertura de organza para permitir que empupassem e completassem seu desenvolvimento at? a emerg?ncia. As coletas foram realizadas diariamente, assim como os registros fotogr?ficos para caracteriza??o dos est?gios de decomposi??o. Dados abi?ticos tais como temperatura, umidade relativa do ar e precipita??o foram obtidos junto ao Instituto Nacional de Meteorologia (INMET). Ao todo foram coletados 16.321 insetos pertencentes ?s ordens Diptera (78 esp?cies) e Coleoptera (56 esp?cies). Quatro est?gios de decomposi??o foram reconhecidos: fresco, gasoso, avan?ado e seco. Na esta??o quente e seca, com m?dias de temperatura de 31,3 ?C, umidade relativa do ar de 55,3% e precipita??o total de 13,1mm, a decomposi??o ocorreu em 10 dias, tendo sido coletados 2.326 esp?cimes. J? na esta??o fria e ?mida, com m?dias de temperatura de 19,3 ?C, umidade de 78,4% e precipita??o total de 161,4mm, a decomposi??o durou 34 dias, tendo sido coletados 13.995 esp?cimes. Diptera foi predominante em ambas as esta??es e representou a ?nica ordem de insetos que utilizou a carca?a como recurso para o desenvolvimento de sua prole, dentre os quais aqueles pertencentes ?s fam?lias Calliphoridae, Muscidae e Sarcophagidae. A diversidade de besouros foi maior na esta??o fria e ?mida, com representatividade de Dermestes maculatus (Dermestidae), Euspilotus azureus (Histeridae) e Oxelytrum discicolle (Silphidae). Diferindo de outros estudos semelhantes ocorridos na esta??o quente e seca, houve maior abund?ncia de insetos acidentais (Chrysomelidae), fato que pode ser atribu?do as altas temperaturas registradas, evidenciando a forte influ?ncia dos fatores abi?ticos sobre a diversidade da comunidade de insetos que colonizaram as carca?as. Para a caracteriza??o molecular foram previamente determinados morfologicamente 40 indiv?duos machos de sete esp?cies de sarcofag?deos de interesse forense. Foram obtidos fragmentos da regi?o COI (citocromo oxidase I) do DNA mitocondrial de aproximadamente 595 pb, os quais se mostraram ?teis para diferencia??o e caracteriza??o dos distintos t?xons aqui propostos. Dessa forma, os resultados aqui obtidos evidenciam a import?ncia de estudos regionais sobre os t?xons de import?ncia forense, sobretudo decorrente das influ?ncias abi?ticas sobre a comunidade local associada ?s carca?as.