Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 462081.pdf: 1430487 bytes, checksum: 4c2af366716f369356b61bcee2b250d0 (MD5) Previous issue date: 2014-08-25 / Brazil is a large country, were each region shows a particular pattern of admixture population. To evaluate the agreement between different forensic anthropology tools to determine ancestry and sex in a region of this country, we perform morphological and genetic analysis in a sample of 25 crania from cemeteries and Universities from Porto Alegre metropolitan region, south of Brazil. Those analysis consists in cranioscopy evaluation of 8 cranial traits, 16 craniometric measurements, and allele amplification of 13 autosomal short tandem repeats (STRs) loci of the CODIS system (TPOX, D3S1358, FGA, D5S818, CSF1PO, D7S820, D8S1179, TH01, vWA, D13S317, D16S539, D18S51, D21S11) plus other two loci (D2S1338, D19S433) and amelogenin, using the Identifiler? Plus Kit loci Amelogenin and The NGM Kit loci. Genetics and morphological data were then compared to ancestral populations' database of cranial measurements, Howells and Hanihara database, and STR allele frequencies from individuals of African, Amerindian and European origin. Our results showed cranioscopy and craniometry based on Hanihara database were the most accurate morphological tools to determine sex, and probably ancestry as well. This can be explained by the fact that Howells database is not composed of populations who effectively colonized Brazil, and a more resembled craniometric database could turn Brazilian forensic identification analysis more precise and accurate. / Porto Alegre ? a maior cidade do Rio Grande do Sul, sul do Brasil. Sua popula??o ? composta principalmente por descendentes de portugueses, com a contribui??o de outras popula??es europeias, africanos e ind?genas. Neste estudo, para a estimativa da ancestralidade e sexo, foram utilizadas as metodologias de cranioscopia (8 caracteres), craniometria (16 medidas/?ndices) e a an?lise de marcadores gen?ticos STR em uma amostra de 25 cr?nios provenientes da regi?o metropolitana de Porto Alegre, sul do Brasil. A an?lise craniom?trica da ancestralidade foi realizada por meio de an?lise discriminante utilizando a dist?ncia de Mahalanobis, com o software FORDISC 3.0 baseado no banco craniom?trico de Howells, e com o software Statistica 12 utilizando o banco craniom?trico de Hanihara. Foram utilizados os 13 (STRs) loci do sistema CODIS (CSF1PO, D3S1358, D5S818, D7S820, D8S1179, D13S317, D16S539, D18S51, D21S11, FGA, TH01, TPOX, vWA) acrescido de mais dois loci STR (D2S1338, D19S433) e Amelogenina, utilizando os kits AmpFlSTR Identifiler? Plus Kit e AmpFlSTR NGM da Applied Biosystems?. A compara??o dos resultados entre os dados craniom?tricos e de marcadores STR demonstra que as duas metodologias apresentam resultados pouco concordantes. Em se tratando da compara??o da craniometria usando dois bancos de dados distintos, o banco de Hanihara se mostrou mais preciso na determina??o do sexo e, possivelmente, da ancestralidade, se comparado ao banco de Howells. Isso pode se dever ao fato de que o banco Hanihara ? composto de indiv?duos de popula??es europeias, africanas e ind?genas originais similares as que efetivamente colonizaram o Brasil. Os resultados obtidos indicam a necessidade de um banco de dados craniom?trico contendo popula??es ancestrais brasileiras, o que seria importante para aumentar a efici?ncia das identifica??es em Antropologia Forense no Brasil.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 462290.pdf: 2133615 bytes, checksum: 5c5628b9cc5fd71ee1dcc7d68f182c36 (MD5) Previous issue date: 2014-08-22 / Tuberculosis (TB) is an infectious disease caused mainly by Mycobacterium tuberculosis. The increasing number of infected patients among immune compromised populations and emergence of drug-resistant strains has created urgent need of new strategies to treat TB. Understanding relevant pathways (as the purine salvage) will reveal details of M. tuberculosis that might be used to develop new strategies to combat this pathogen. Hypoxanthine-guanine phosphoribosyltransferase (HGPRT) is an enzyme from the purine phosphoribosyltransferase (PRTase) family and catalyzes the conversion of hypoxanthine or guanine and 5-phosphoribosyl-α-1-pyrophosphate (PRPP) to inosine 5 -monophosphate (IMP) or guanosine 5 -monophosphate (GMP), and pyrophosphate (PPi). Here we describe the mode of action of M. tuberculosis HGPRT (MtHGPRT) through kinetic and thermodynamical analysis. Experiments were also performed to determine the oligomeric state in solution, pH, temperature and solvent isotope effects. These data allows us to compare MtHGPRT to homologues from other species and look for similarities and differences in its mechanism and constants. We hope the experiments presented here will contribute to the understanding of this pathogen purine salvage pathway. / A Tuberculose (TB) ? uma doen?a infecciosa causada principalmente por Mycobacterium tuberculosis. O aumento de pacientes infectados entre a popula??o imunocomprometida e a emerg?ncia de cepas resistentes a drogas criam uma necessidade de novas estrat?gias para tartar a TB. Entender como funcionam as vias metab?licas relevantes, como a via de salvamento de purinas, poder? revelar detalhes do M. tuberculosis que poder?o ser ?teis para o desenvolvimento de novas estrat?gias de combate a este pat?geno. A hipoxantina-guanina fosforribosiltransferase (HGPRT) ? uma enzima da familia das purina fosforribosiltransferases (PRTase) e catalisa a convers?o de hipoxantina ou guanina e 5-fosforribosilpirofosfato-α-1-pirofosfato (PRPP) em inosina 5 -monofosfato (IMP) ou guanosina 5 -monofosfato (GMP) respectivamente, com a libera??o de pirofosfato inorg?nico (PPi). Aqui n?s descrevemos o modo de a??o da HGPRT de M. tuberculosis (MtHGPRT) atrav?s de an?lises cin?ticas e termodin?micas. Tamb?m foram realizados experimentos para determinar o estado oligom?rico da enzima em solu??o e os efeitos de pH, temperatura e efeitos isot?picos do solvente. Esses dados nos permitem comparar a MtHGPRT com hom?logos de outras esp?cies e procurar por similaridades e diferen?as nos seu mecanismo e constantes. N?s esperamos que os experimentos apresentados aqui contribuam para o entendimento da via de salvamento de purinas desse pat?geno.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 383074.pdf: 317111 bytes, checksum: 586824978be7b33eb0edbe3378f0449d (MD5) Previous issue date: 2006-09-12 / Introdu??o Devido a sua estrutura mineralizada e inerte, ao seu tamanho e a sua localiza??o, dentes molares e pr?-molares s?o considerados boas fontes para obten??o do DNA necess?rio para a identifica??o molecular de pessoas. V?rias metodologias t?m sido empregadas para obten??o de DNA a partir dos dentes, sendo que o uso do equipamento de pulveriza??o criog?nica Freezer mill ? para a pulveriza??o e da coluna concentradora MicroconTM-100 s?o procedimentos padr?o mais utilizados e difundidos. O uso conjunto dessas duas metodologias ?, por?m, demorado e de custo elevado. N?s desenvolvemos este trabalho com o objetivo de testar e padronizar um novo m?todo econ?mico e r?pido para a obten??o de DNA de dentes para estudos forenses. O resultado deste trabalho vem a atender aos interesses do Conv?nio de Coopera??o entre o Programa de P?s-Gradua??o em Biologia Celular e Molecular da PUCRS (PPGBCM-PUCRS) e o Instituto-Geral de Per?cias (IGP-RS) da Secretaria da Justi?a e da Seguran?a P?blica do Rio Grande do Sul (SJS-RS), o qual visa desenvolver pesquisas que atendam ?s necessidades de avan?o na linha de investiga??o da Biologia Forense. Material Foram utilizados dentes molares ou pr?-molares provenientes de 26 cad?veres n?o identificados previamente, depositados no DML-RS. Para cada cad?ver avaliado foi registrado seu estado geral de apresenta??o, o tempo estimado de morte, a idade e o local onde o cad?ver foi encontrado. Os dentes foram retirados dos cad?veres, armazenados por no m?nimo 24 horas a 80?C e, posteriormente, utilizados nos testes. A escolha dos corpos foi aleat?ria, abrangendo v?rios est?gios de decomposi??o, tempo de morte e locais onde foram encontrados. Metodologia Material Foram utilizados dentes molares ou pr?-molares provenientes de 26 cad?veres n?o identificados previamente, depositados no DML-RS. Para cada cad?ver avaliado foi registrado seu estado geral de apresenta??o, o tempo estimado de morte, a idade e o local onde o cad?ver foi encontrado. Os dentes foram retirados dos cad?veres, armazenados por no m?nimo 24 horas a 80?C e, posteriormente, utilizados nos testes. A escolha dos corpos foi aleat?ria, abrangendo v?rios est?gios de decomposi??o, tempo de morte e locais onde foram encontrados. Metodologia Para a economia: (I) foi usado o moinho mineral?gico IKA (Ika do Brasil RJ- Brasil), de baixo custo em compara??o ao uso do Freezer mill?; (II) foi usado precipita??o do DNA com o uso de isopropanol, de baixo custo em compara??o ao uso do MicroconTM-100. Para a rapidez: foi testado o tempo de duas horas para a incuba??o do tecido no tamp?o de lise celular em compara??o ao tempo padronizado de 12 horas. Procedimentos: N?s usamos o moinho mineral?gico IKA para obten??o de tecido pulverizado dos dentes a fim de extrair DNA na quantidade e qualidade necess?rias para a obten??o de perfil gen?tico. Cada amostra foi mo?da e separada em quatro subamostras, nas quais foi avaliado o tempo de incuba??o (2 ou 12 horas de incuba??o) e o m?todo de precipita??o final do DNA (MicroconTM 100 ou isopropanol). A quantidade e a qualidade do DNA obtido foram testadas. A viabilidade de uso do DNA nuclear e do DNA mitocondrial obtido foi verificada pela capacidade de amplifica??o por t?cnica de Polymerase Chain Reaction (PCR) das amostras atrav?s do uso dos kits apropriados. Resultados e Discuss?o: A utiliza??o do moinho mineral?gico IKA para pulveriza??o de tecido foi eficaz em todas as amostras testadas. As amostras processadas com MicroconTM-100 n?o apresentaram diferen?as significativas na quantidade de DNA obtido quando incubadas por 2 ou 12 horas, o que permite aceitar que uma incuba??o de duas horas ? suficiente para o procedimento padr?o. O mesmo foi verificado nos subgrupos, nos quais, a precipita??o foi realizada com isopropanol. Com o uso do MicroconTM-100 obteve-se uma concentra??o superior de DNA quando comparado ao uso do isopropanol (p<0,001). No entanto, a precipita??o por isopropanol obteve um DNA de pureza superior ao do DNA processado com MicroconTM-100 (p<0,001). Dos 26 casos avaliados, dentes de 20 corpos tiveram seu DNA nuclear autoss?mico identificado com sucesso e, em dois dos 20 casos, foi tamb?m utilizada com sucesso a an?lise do cromossomo Y, n?o excluindo v?nculo patril?neo. Os seis demais casos apenas foram identificados pela an?lise do DNA mitocondrial, n?o excluindo o v?nculo matril?neo. A menor concentra??o de DNA derivada da precipita??o realizada com isopropanol parece ter sido compensada pela maior pureza do material uma vez que houve similaridade do n?meros de loci analisados com sucesso quando se comparam MicroconTM-100 e isopropanol. O estado geral do cad?ver, o tempo estimado de morte, a idade e o local onde o cad?ver foi encontrado n?o foram significativamente associados com a quantidade ou a qualidade do DNA obtido, bem como com o n?mero de loci analisados com sucesso. Conclus?o: A utiliza??o do moinho mineral?gico IKA para pulveriza??o de tecido foi eficaz e pode substituir o uso do Freezer mill? reduzindo o custo dos procedimentos. A precipita??o com isopropanol foi eficaz e pode substituir o uso do MicroconTM-100 reduzindo ainda mais o custo dos procedimentos. Um tempo de duas horas para a incuba??o do tecido no tamp?o de lise celular foi eficaz para reduzir o tempo dos procedimentos. Os experimentos desenvolvidos neste trabalho testaram e padronizaram um novo m?todo r?pido e econ?mico para a obten??o de DNA de dentes para estudos forenses, que pode ser empregado em outros caso de identifica??o de cad?veres humanos. O resultado deste trabalho poder? atender aos interesses do Conv?nio de Coopera??o entre o PPGBCM-PUCRS e o IGP-RS no desenvolvimento e no avan?o na linha de investiga??o da Biologia Forense.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 383071.pdf: 1037097 bytes, checksum: 64845ab6c2bfb968dc78afc6dab91fc8 (MD5) Previous issue date: 2006-06-28 / A avalia??o da citotoxicidade dos materiais dentais ? de grande import?ncia na Odontologia. O formocresol (FC) e o tricresol formalina (TC) s?o duas medica??es utilizadas na odontologia para desinfec??o do canal radicular, que cont?m formalde?do na sua formula??o. Estes produtos s?o considerados bons antimicrobianos, mas pesquisas a respeito da toxicidade destes medicamentos ainda s?o necess?rias. O presente estudo avaliou in vitro a citotoxicidade do formalde?do, do FC e do TC, utilizando tr?s linhagens celulares estabelecidas, as c?lulas HeLa, NIH3T3 e Hep2, cultivadas em condi??es padr?o. As c?lulas foram deixadas em contato com cada produto durante 1, 2, 3, 4 ou 5 minutos, sendo ent?o incubadas por 24 horas, 48 horas ou 7 dias. O teste de citotoxicidade utilizado foi o ensaio MTT. Os resultados deste estudo mostraram que os produtos testados foram t?xicos ?s diferentes linhagens celulares estabelecidas, em todas as condi??es testadas. O formocresol foi o produto que apresentou menor citotoxicidade, sendo este resultado estatisticamente significante quando comparado com o tricresol formalina e o formalde?do.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 397347.pdf: 984527 bytes, checksum: 31dff3f15a7d672c6b5eff5f99ffff0d (MD5) Previous issue date: 2008-12-18 / A les?o pulmonar aguda (LPA) ? uma s?ndrome caracterizada por inflama??o pulmonar aguda e persistente, com edema pulmonar devido ao aumento da permeabilidade vascular. Na LPA ocorre uma les?o do epit?lio alveolar e do endot?lio capilar por diferentes mediadores pr?-inflamat?rios, principalmente, pelas citocinas liberadas em resposta ? grande variedade de insultos. A gera??o de radicais livres (RLs) ? outro importante mecanismo de les?o utilizado pelos neutr?filos, que s?o capazes de gerar muitas das altera??es encontradas na LPA. Sabe-se que a produ??o end?gena de glutamato estimula uma variedade de mediadores inflamat?rios, incluindo metab?litos do ?cido araquid?nico, RLs e ?xido n?trico (NO). O primeiro relato de que os receptores NMDA poderiam estar envolvidos na fisiopatologia pulmonar ocorreu atrav?s da demonstra??o que o tratamento com um inibidor seletivo desse receptor (MK-801) prevenia o edema pulmonar provocado pelo aumento de NMDA instilado na traqu?ia de ratos sob ventila??o mec?nica. O objetivo deste trabalho foi avaliar o uso do antagonista de receptor NMDA (MK- 801) como protetor no dano oxidativo em modelo experimental de LPA. Foram utilizados ratos Wistar, machos. Os animais foram divididos em 4 grupos experimentais: Grupo 1: Inje??o intratraqueal (I.T.) de 1 mL de solu??o salina (n=6); grupo 2: Indu??o da LPA atrav?s da inje??o de LPS intratraqueal (100 \g/100 g de peso corporal) e tratamento com solu??o salina intraperitoneal (I.P.) ap?s indu??o da LPA (n=6); grupo 3: Indu??o da LPA e tratamento com MK-801 (0.3 mg/kg I.P.) ap?s indu??o da LPA (n=6) e grupo 4: Indu??o da LPA e tratamento com MK-801 (0.3 mg/kg I.T.) ap?s indu??o da LPA (n=6). Doze horas ap?s o tratamento, os animais foram anestesiados para a retirada do sangue por pun??o retro-orbital, coleta do lavado broncoalveolar (LBA) e posteriormente, submetidos ? eutan?sia por decapita??o para coleta do tecido pulmonar. O tratamento com MK-801 promoveu uma diminui??o na concentra??o de prote?nas totais, uma diminui??o na atividade da lactato desidrogenase (LDH), al?m de diminuir o n?mero de c?lulas inflamat?rias no LBA. No tecido pulmonar ocorreu uma diminui??o do dano oxidativo avaliado atrav?s dos n?veis de TBARS e NO, e um aumento nos n?veis de antioxidantes como a CAT, SOD, GSH e SH. Tamb?m observamos uma melhora do processo inflamat?rio atrav?s da an?lise histopatol?gica do tecido pulmonar. Podemos concluir atrav?s de nossos resultados que o tratamento com MK-801 promoveu uma melhora do processo inflamat?rio, uma melhora nos n?veis de antioxidantes e uma diminui??o do dano oxidativo em ratos com LPA induzida atrav?s da inje??o intratraqueal de LPS.

A leucemia linfóide aguda de células T (LLA-T) é um tipo agressivo de câncer hematológico que surge a partir da transformação maligna de progenitores de células T. Apesar do progresso significativo no tratamento atual, os desafios concentram-se na morbidade após os regimes de quimioterapia convencionais e na sobrevida pós-recaída. Além disso, os pacientes com LLA-T apresentam pior prognóstico quando comparados àqueles com precursores de células B, consequentemente, novas abordagens terapêuticas ainda se fazem necessárias para aprimorar os resultados naquele subtipo. YM-155 é um derivado imidazólico originalmente classificado como supressor transcricional de survivina e tem demonstrado potente efeito antiproliferativo sobre uma grande variedade de tumores humanos, porém a atividade desse composto ainda é pouco explorada em linhagens de células T. Dessa forma, o objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos de YM-155 no crescimento e morte celular em linhagens de LLA-T infantil. O presente estudo demonstrou que YM-155 exibiu atividade antiproliferativa e potente efeito indutor de apoptose nessas células, na qual a linhagem JURKAT mostrou ser mais sensível ao tratamento em relação a CCRF-CEM, apresentando o valor de CI50, respectivamente, 73,11 ± 7,65 nM e 2,17 ± 0,08 μM. Além disso, YM-155 diminuiu significativamente a capacidade de formação de colônias e induziu o bloqueio do ciclo celular da CCRF-CEM na fase S e, na linhagem JURKAT, diminuiu substancialmente a população em G2/M e aumentou a fração Sub-G1. No entanto, em ambas, não foi observada a inibição da expressão de survivina após tratamento com YM-155, assim como a inibição da expressão dos genes VEGF e Bcl-xL, o que sugere que esse composto, em linhagens LLA-T mutadas para TP53, esteja atuando de forma independe da inibição de survivina e do fator de transcrição SP-1. Conclui-se que YM-155 é eficaz na redução do crescimento e aumento de morte celular, portanto representa um agente antitumoral promissor em linhagens de leucemia linfóide aguda de células T. / T-cell acute lymphoblastic leukemia (T-ALL) is an aggressive hematological cancer that arises from the malignant transformation of T-cell progenitors. Despite the significant progress in current treatment, challenges remain the lifelong morbidity after present chemotherapy regimens and post-relapse survival. Additionally, patients with T-ALL have poor prognosis compared to those with B-cell precursor, consequently, novel therapeutic approaches are still needed to improve the outcome in this cohort. YM-155 is an imidazolium derivative originally discovered as supressant of survivin transcription and has potent antiproliferative effects on a variety of human cancer, but, YM-155 effect in T-ALL cell line is underexplored. Based on this information, the present study aimed to evaluate YM-155 effect on cell lines derived from pediatric T-ALL. The drug exhibited antiproliferative activity and induced apoptosis. JURKAT cells (IC50 value: was 73.11 ± 7.65 nM) was more sensitive to treatment than CCRF-CEM (IC50 value: 2.17 ± 0.08 uM). Moreover, YM- 155 decreased clonogenic capacity and affected cell cycle dynamic. In CCRF- CEM, the treatment induced S phase arrest and, in JURKAT cells, decreased G2/M population and increased sub-G1 fraction. However, in both cell line, inhibition of survivin expression was not observed after treatment with YM-155, as well as the inhibition of VEGF and Bcl-xL genes expression, suggesting that this compound, in p53-deficient T-ALL cell line, is acting independently of survivin and SP-1 transcription factor inhibition. This results reinforcing the likelihood of using YM-155 as a therapeutic approach to combat leukemia and increase knowledge about mechanisms in vitro.

As leishmanioses são um conjunto de doenças cuja maioria tem caráter zoonótico e são causadas por protozoários parasitos do gênero Leishmania, além de ameaçarem cerca de 350 milhões de indivíduos em 98 países. O tratamento é feito à base de antimoniais pentavalentes desde a década de 40, anfotericina B e pentamidina, porém a toxicidade destes, a persistência dos efeitos colaterais e a duração do tratamento são as principais dificuldades na terapia dos pacientes que apresentam tal doença. Neste contexto, a busca de novos fármacos menos tóxicos e mais eficazes é de extrema importância. Como há relatos na literatura de que a associação compostos de prata e ligantes diimínicos apresenta atividade leishmanicida, o presente estudo avaliou a atividade anti-Leishmania in vitro e in vivo de compostos orgânicos contendo este metal em sua estrutura (JB3, JB4, JB5, JB5SF e JB6), além dos ligantes 2-tionaimidazolina e fenantrolina e os prováveis mecanismos de ação. Para tanto, foram feitas análises das atividades leishmanicidas em promastigotas e amastigotas, no contexto in vitro, para a determinação do IC50, além da citotoxicidade em macrófagos peritoneais murinos para determinação do CC50. Para avaliar os possíveis mecanismos de ação destes compostos, foram feitos ensaios de inibição enzimática, utilizando isoforma r-CPB2.8; eletroforese para avaliar degradação do DNA; microscopia de força atômica e dosagem de óxido nítrico. Para análise in vivo foi utilizado PCR em tempo real para quantificar a carga parasitária de hamsters infectados com L. (L.) infantum chagasi após tratamento experimental. O composto que apresentou melhores resultados sobre atividade anti-promastigota e anti-amastigota de L. (L.) amazonensis (8,06 μg/mL, 1,30 μg/mL, respectivamente) e L. (L.) infantum chagasi (1,46 μg/mL, 8,21 μg/mL, respectivamente) foi o JB5, e o que apresentou menor toxicidade foi o 2-tionaimidazolina. Como alguns compostos apresentaram uma toxicidade considerável, avaliou-se este parâmetro no ligante fenantrolina e obteve-se CC50 = 30,80 μg/mL, concluindo que este contribui consideravelmente para a toxicidade dos compostos. Com isso, avaliou-se a atividade leishmanicida contra as formas do parasito do JB5SF (sem o grupamento fenantrolina) e obteve-se IC50 de 1,80 e 8,91 μg/mL. Apesar do 2-tionaimidazolina ter sido o de menor toxicidade não foi tão eficiente para reduzir a carga parasitária das amastigotas teciduais quanto o Glucantime. Contudo, o composto JB5SF que apresentou o maior índice de seletividade (40,34) foi capaz de reduzir a carga parasitária das amastigotas teciduais, apresentando estatística semelhante, no fígado comparado com o fármaco de referência. Os compostos não apresentaram atividade inibitória significativa frente à cisteíno proteases (rCPB2.8) e nem degradação do DNA do parasito. Especificamente o JB5SF na concentração de 5,0 μg/mL não produziu modificações na membrana do protozoário e não alterou significativamente a área da superfície do macrófago infectado. Todavia, o JB5SF na concentração de 10,0 μg/mL e associado ao LPS levou o macrófago infectado a uma maior produção de NO quando comparado ao não tratado. Embora não tenha sido definido o mecanismo de ação do composto sobre o parasito pode-se inferir que o mesmo pode contribuir com a resposta imune estimulando as células macrofágicas no processo de fagocitose. / Leishmaniasis is a group of diseases most of which are zoonotic and are promoted by protozoan parasites of Leishmania genus, threatening around 350 million individuals in 98 countries. Since 1940s, treatment is based on pentavalent antimonials, amphotericin B and pentamidines, however the toxicity of these, the persistence of side effects and the duration of treatment are the main difficulties in the therapy of patients with such disease. In this context, the research for new, less toxic and more effective drugs is of utmost importance. As reported on literature, the association of silver compounds and diimine binders has leishmanicidal activity, the present study evaluated the anti-Leishmania activity in vitro and in vivo of organic compounds containing this metal in its structure (JB3, JB4, JB5, JB5SF And JB6), in addition to the 2-thionaimidazoline and phenanthroline binders and these probable activity mechanisms. With this aim, analyzes of leishmanicidal activities in promastigotes and amastigotes, in vitro context, were performed for IC50 determination, in addition to cytotoxicity in murine peritoneal macrophages using MTT methodology to CC50 determination. Evaluating possible mechanisms of these compounds action, enzymatic inhibition assays were performed using r-CPB2.8 isoform; electrophoresis to evaluate DNA degradation; atomic force microscopy and nitric oxide dosage to evaluate the interaction of these with the parasite and/or macrophage. For in vivo analysis, real-time PCR was performed to quantify the parasite bulk of hamsters infected with L. (L.) infantum chagasi after experimental treatment. The compound that presented the best results on L. (L.) amazonensis (8.06 μg/mL, 1.30 μg/mL, respectively) and L. (L.) infantum chagasi (1.46 μg/mL, 8.21 μg/mL, respectively) activity was JB5, and that showed the lowest toxicity was 2- thionamidazoline. As some compounds presented considerable toxicity, this trait was evaluated on the phenanthroline binder and CC50 was equal 30.80 μg/mL, concluding that this contributes considerably to compounds toxicity. Therefore, the leishmanicidal activity against JB5SF parasite forms (without the phenanthroline group) was evaluated and IC50 ranging from 1.80 and 8.91 μg/mL. Although 2-thionaimidazoline showed the lowest toxicity, it was not as efficient to reduce the amastigotes tissue parasitic bulk as Glucantime. However, the compound JB5SF that had the highest selectivity index (40,34) was able to reduce the parasitic load of the tissue amastigotes, presenting similar statistics, in the liver compared to the reference drug. The evaluated compounds showed no significant inhibitory activity against cysteine proteases (rCPB2.8) and no degradation of parasite DNA. Specifically, 5.0 μg/mL of JB5SF did not produce protozoal membrane modifications and did not alter the significantly surface area of the infected macrophage. However, 10.0 μg/mL JB5SF concentration associated with LPS increased NO production in infected macrophage when compared to untreated. Although the compound action mechanism on the parasite has not been defined, it is possible inferred that the same could contribute to immune response by stimulating macrophages in phagocytosis process

As discussões atuais rumo ao desenvolvimento sustentável exigem a identificação de indicadores confiáveis com os quais se possa gerenciar informações sobre as dimensões econômicas, sociais e ambientais. Este trabalho é uma tentativa de avaliar a sustentabilidade nos países em nível mundial levando em consideração indicadores econômicos, sociais e ambientais. Como primeiro passo, foram definidas 19 variáveis dos indicadores econômicos, sociais e ambientais para 175 países para serem avaliados alguns no ano de 2013 e outros em 2014 conforme dados disponíveis. Dois métodos de Apoio Multicriterial foram usados para análise: TOPSIS (Technique for Order Preference by Similarity to Ideal Solution), para ordenação das alternativas e posteriormente o AHP (Analytic Hierarchic Process) para ponderar os pesos com base em análises de especialistas. Os resultados da pesquisa demonstram quais países possuem um desenvolvimento sustentável mais equilibrado em nível econômico social e ambiental conjuntamente. Nesse caso, os três países mais sustentáveis são Suíça, Suécia e Noruega. Adicionalmente essa pesquisa apresenta quais países se destacam em cada indicador separadamente. Espera-se que os resultados obtidos sirvam de base nas tomadas de decisão, em outros trabalhos da mesma linha e que potencializem sempre as melhores escolhas nas diversas vertentes da sustentabilidade. / The current discussions towards sustainable development require the identification of reliable indicators which they can manage information about the economic, social and environmental dimensions. This research is an attempt to evaluate the sustainability in worldwide countries taking into account economic, social and environmental indicators. As a first step 19 variables were defined of economic, social and environmental indicators for 175 countries to be evaluated based on data obtained in 2013 and 2014 as available in World Bank and United Nations.Two methods were used for support Multicriteria decision analysis: TOPSIS (Technique for Order Preference by Similarity to Ideal Solution) to order the alternatives and subsequently AHP (Analytic Hierarchic Process) with focus on define the weights based on expert analysis. The research results demonstrate which countries have a more balanced sustainable development in environmental, social and economic level together. In this case, the three most sustainable countries are Switzerland, Sweden and Norway. Additionally this research shows which countries are more sustainable taking into account each indicator separately. It is expected that the results provide a basis in decision-making and it contribute to the best choices in all aspects of sustainability.

A falta de previsibilidade de prognósticos favoráveis aos defeitos ósseos provocados por lesões de furca de grau III tem estimulado diferentes estudos com o objetivo de obter reparação e regeneração com melhora nos resultados. O objetivo deste estudo é avaliar a eficácia da carboapatita nanométrica (HAPNC) sintetizada por pesquisadores da Unifal-MG, como reparador ósseo em lesão de furca grau III de molares inferiores de ratos albinos wistar. Dentes acometidos por lesão de furca classe III na maioria das vezes são condenados e extraídos por não responderem de maneira positiva ao tratamento habitual destinado a estes tipos de lesão. A HAPNC já foi testada pelo grupo e constatou-se que possibilita reparação óssea em defeitos críticos em tíbia o que sugere a sua avaliação em defeitos classe III de furca. Foram utilizados 30 ratos Wistar Rattus norvegicus, machos, com peso entre 300gr e 500gr, divididos aleatoriamente em dois grupos: controle e com HAPNC. Os grupos foram subdivididos em três subgrupos de acordo com o tempo experimental de 1 dia, 60 e 90 dias. Após esses intervalos os animais foram submetidos a exames tomográficos e radiológicos e em seguida submetidos a eutanásia. A mandíbula foi dissecada e o primeiro molar inferior esquerdo removido em bloco com osso circundante. As amostras foram fixadas em paraformaldeído 4% em tampão fosfato, incluídos em parafina e os cortes corados com azul de toluidina e fucsina básica. O presente estudo foi apreciado e aprovado pela Comissão de Ética no Uso de Animais (CEUA- UNIFAL) sob o protocolo 619/2015. Os exames de imagem foram realizados em tomadas radiográficas, após a fixação das hemimandíbulas, com cortes no sentido axial para o crânio, em norma lateral para as hemimandíbulas. As tomadas de tomografia computadorizada foram realizadas ainda com o animal anestesiado na posição supina e cabeça imóvel, nos três sentidos de corte axial, coronal e transversal. Resultados demostram eficácia da HAPNC no reparo ósseo em defeito de furca classe III. Este projeto foi realizado com o apoio da Capes. / The lack of predictability of favorable prognosis for bone defects caused by grade III furcation lesions has stimulated different studies in order to obtain repair and regeneration with improved results. The aim of this study is to evaluate the effectiveness of nanometric carboapatita (HAPNC) synthesized by researchers at Unifal-MG, as bone repair in injury class III furcation of molars of Wistar albino rats. Teeth affected by injury furcation class III most often are condemned and taken not respond positively to the usual treatment for these types of injuries. The HAPNC has been tested by the group and it was found that enables bone repair critical defects in tibia suggesting its evaluation in class III furcation defects. Thirthy Wistar Rattus Norvegicus were used, males weighing between 300gr and 500gr, randomly divided into two groups: control and HAPNC. The groups were subdivided into three subgroups according to the experimental period of 1 day, 60 and 90 days. After these intervals, the animals were subjected to computed tomography and radiological exams and then euthanized. The mandible was dissected and the first lower left molar removed en bloc with the surrounding bone. The samples were fixed in 4% paraformaldehyde in phosphate buffer, embedded in paraffin and sections stained with toluidine blue and basic fuchsin. This study was evaluated and approved by the Ethics Committee on Animal Use (CEUA- UNIFAL) under the protocol 619/2015. Imaging tests were performed on radiographs after the fixing of mandibles, with cuts in the axial direction to the skull in lateral norm for HMs. Computed tomography taken were also held with the anesthetized animal supine and motionless head in the three-way axial, coronal and cross section. Results demonstrate efficacy of HAPNC in bone repair in furcation defects class III. This project was carried out with the support of Capes.

De acordo com a Organização Mundial de Saúde, a doença de Chagas, causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi, ainda faz parte do grupo de doenças negligenciadas, uma vez que ainda são escassos os investimentos destinados às pesquisas para desenvolvimento de novas drogas, de modo que as opções terapêuticas são limitadas. Sendo assim, é evidente a necessidade de estudos com a finalidade de desenvolver novos medicamentos eficazes na quimioterapia da doença. A espécie Tithonia diversifolia, o margaridão, é uma planta considerada invasora no Brasil, sendo encontrada ao longo de rodovias e em terrenos baldios. As lactonas sesquiterpênicas (LSTs) isoladas desta planta, possuem ação anti-inflamatória e anti-parasitária, dentre outras ações farmacológicas. Nesse sentido, o objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade tripanocida in vitro do extrato de lavagem foliar rico em LSTs (ELF) e da tagitinina C (TC) extraídos de T. diversifolia, isolados e em combinação com benznidazol (Bz). Adicionalmente, foi avaliado o potencial dos tratamentos, em monoterapia e combinados, em relação à capacidade de induzir a cura parasitológica, prevenir ou reduzir o índice de miocardite e suas influências na resposta imune celular e humoral de animais experimentalmente infectados pela cepa Y do T.cruzi. Os resultados demonstraram que tanto o ELF quanto a TC isolada possuem atividade tripanocida in vitro, apresentando a IC50 de 0,6426 μg/mL e 0,4022 μg/mL, respectivamente. Tais resultados foram considerados promissores quando comparados à IC50 de 9,32 μg/mL do fármaco de referência Bz. Ainda foi observado que o ELF e a TC reduziram em 32% e 51%, respectivamente, o índice de infecção por amastigotas em células H9c2, enquanto o Bz inibiu 36%. Nos experimentos in vivo, foi verificado que tanto o ELF quanto a TC foram capazes de suprimir a parasitemia dos animais experimentalmente infectados pela cepa Y, sendo observada uma potencialização desta atividade quando as LSTs foram combinadas ao Bz, uma vez que o tratamento com ELF+Bz induziu a 70% de cura nos animais, o mesmo índice foi observado no tratamento com Bz em monoterapia. Já a combinação TC+Bz foi capaz de suprimir totalmente a parasitemia e os testes do critério de cura confirmaram um índice de 100% de cura entre os animais submetidos a este tratamento. Através da dosagem de citocinas, foi observado que as terapias combinadas inibiram a produção de IFN-γ e TNF-α, importantes citocinas pró-inflamatórias ligadas à lesão tecidual associada à doença de Chagas, e foi verificado também que animais submetidos aos tratamentos contendo as LSTs apresentaram maiores produções da citocina IL-10, o que sugere uma modulação da resposta imunológica induzida pela atividade anti-inflamatória das LSTs. O benefício da modulação da resposta imune também foi evidenciado pela ausência e/ou redução de miocardite nos animais que receberam o tratamento combinado com ELF+Bz e TC+Bz. De maneira geral, nossos resultados demonstram que o tratamento combinado entre TC e Bz é promissor, pois além de induzir ao índice de cura superior ao Bz em monoterapia, ainda preveniu a miocardite nos animais. Além disso, as LSTs são capazes de interferir na resposta imune do hospedeiro, podendo esta interferência estar relacionada a melhor prognóstico da doença. / According to the World Health Organization, Chagas' disease, caused by the protozoan Trypanosoma cruzi, is still part of the neglected diseases group, since investments for research into new drug development are scarce, therapeutic options are limited. Thus, the need for studies with the purpose of developing new drugs effective in the chemotherapy of the disease is evident. The Tithonia diversifolia species, daisy, is a plant considered invasive in Brazil, being found along highways and in vacant lots. The sesquiterpene lactones (STLs) isolated from this plant have anti-inflammatory and anti-parasitic action, among other pharmacological actions. In this sense, the objective of this work was to evaluate the trypanocidal activity of foliar lavage extract in STLs (ELF) and tagitinin C (TC) extracted from T. diversifolia, isolated and in combination with benznidazole (Bz). In addition, the potential of monotherapy and combined treatments in relation to the ability to induce parasitological cure, and to prevent or reduce the myocarditis index and its influences on the cellular and humoral immune response of experimentally infected animals by T.cruzi Y strain were evaluated. The results demonstrated that both the ELF and the isolated TC have trypanocidal activity in vitro, presenting the IC50 of 0.6426 μg/mL and 0.4022 μg/mL, respectively. These results were considered promising when compared to the IC50 of 9.32 μg/mL of the reference drug Bz. It was also observed that ELF and TC reduced the rate of infection by amastigotes in H9c2 cells by 32% and 51%, respectively, while Bz inhibited 36%. In the in vivo experiments, it was verified that both ELF and TC could suppress the parasitemia of the animals experimentally infected by strain Y, being observed a potentiation of this activity when the STLs were combined with Bz, once the treatment with ELF + Bz induced 70% cure in the animals, the same rate was observed in the treatment with Bz monotherapy. The TC + Bz combination could completely suppress the parasitaemia and the tests of the curing criterion confirmed a cure rate of 100% among the animals submitted to this treatment. Through dosing of cytokines has been observed that combination therapy inhibited the production of IFN-γ and TNF-α, important inflammatory cytokines related to tissue injury associated with Chagas’ disease, and was also found that animals subjected to treatments containing the STLs, presented higher IL-10 cytokine productions, suggesting a modulation of the immune response induced by the anti-inflammatory activity of the STLs. The benefit of modulation of the immune response was also evidenced by the absence and / or reduction of myocarditis in the animals receiving combined treatment with ELF + Bz and TC + Bz. In general, our results demonstrate that the combined treatment between TC and Bz is promising, since in addition to inducing the cure rate superior to Bz in monotherapy, it still prevented the myocarditis in the animals. In addition, the STLs are capable of interfering in the immune response of the host, and this interference may be related to a better prognosis of the disease. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES