Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 449079.pdf: 13871444 bytes, checksum: e0066e8269af7789f4e8bf48e9d2231c (MD5) Previous issue date: 2013-03-19 / Melanism is a very common coat color polymorphism in felids, and has been defined as an increased production of dark melanin which generates a general darkening of the organism s tegument. Such coloration variation in mammals is often be regulated by the action of two genes and their products: MC1R and ASIP. Eumelanin (dark pigment) is produced when the Melanocortin-1 receptor (MC1R) is activated by the binding of the Alpha Melanocyte Stimulating Hormone (α-MSH). In contrast, MC1R activation is inhibited by the binding of the antagonist peptide ASIP (Agouti Signaling Protein), whose action leads to a switch to pheomelanin (light pigment) synthesis. Melanism has been documented in 13 out of 37 extant felid species, in some cases reaching high frequencies at the population level. A previous studies has indicated that this phenotype arose multiples times in the Felidae, with three different species exhibiting unique mutations associated with this trait (EIZIRIK et al., 2003). In this context, the present study aimed to identify the mutations implicated in this phenotype in five other felid species, and to investigate in more detail the evolutionary dynamics of melanism in the Felidae. In the first article, we revealed two additional cases of species-specific mutations involved in melanism in Asian wild cats, Panthera pardus and Pardofelis temminckii, and discuss the role of the ASIP gene in the evolution of this mutant phenotype. In the second manuscript, we analyzed the evolution of melanism in an endemic lineage of Neotropical felids belonging to the genus Leopardus. This lineage includes three species of small wild cats that were the focus of this study: L. colocolo, L. guigna e L. geoffroyi. The presence of melanism in these closely-related species, along with relatively high frequencies (ranging from 20% to 30%) of this phenotype observed in some areas of their geographic distribution, suggests that natural selection may be involved in the origin and evolution of this trait. In this context, we identified three novel mutations in the ASIP and MC1R genes, each of them strongly associated with melanism in one of the analyzed species, and revealed that natural selection may have played a role in the evolutionary history of melanism in this lineage of felids. / O melanismo ? um polimorfismo de colora??o bastante comum em felinos, definido como a ocorr?ncia de uma acentuada produ??o de melanina escura que gera o escurecimento geral do tegumento do organismo. Sabe-se que esta varia??o da colora??o em mam?feros ? frequentemente regulada pela a??o de dois genes e seus produtos: MC1R e ASIP. A eumelanina (pigmento escuro) ? produzida quando o receptor de melanocortina-1 (MC1R) ? ativado pelo horm?nio estimulante de melan?cito (α-MSH). Ao contr?rio, a ativa??o do MC1R ? inibida pela liga??o de um antagonista chamado prote?na sinalizadora de agouti (ASIP), cuja a??o leva ? troca da produ??o de eumelanina para feomelanina (pigmento claro). O melanismo foi documentado em 13 das 37 esp?cies atuais de fel?deos e, em alguns casos, alcan?a altas frequ?ncias em n?vel populacional. Um estudo anterior indicou que o fen?tipo surgiu m?ltiplas vezes em Felidae, com tr?s esp?cies diferentes apresentando muta??es independentes associadas ao mesmo (EIZIRIK et al., 2003). Assim, este estudo teve por objetivo identificar as muta??es respons?veis por esta caracter?stica em outras cinco esp?cies de fel?deos e analisar a din?mica evolutiva do melanismo na fam?lia Felidae. No primeiro artigo, revelamos dois casos adicionais de muta??es esp?cie-espec?ficas envolvidas no melanismo de fel?deos asi?ticos, Panthera pardus e Pardofelis temminckii e discutimos o papel do gene ASIP na evolu??o deste fen?tipo mutante. No segundo manuscrito, uma abordagem em n?vel gen?mico foi utilizada para analisar a evolu??o do melanismo em uma linhagem end?mica de fel?deos neotropicais pertencentes ao g?nero Leopardus. Nesta linhagem est?o inclusas tr?s esp?cies de pequenos fel?deos que foram o principal foco desta an?lise: L. colocolo, L. guigna e L. geoffroyi. A presen?a do melanismo nestas esp?cies evolutivamente pr?ximas, associada a frequ?ncias relativamente altas (20-30%) deste fen?tipo em determinadas ?reas de suas distribui??es geogr?ficas, sugere que a sele??o natural pode estar envolvida na origem e evolu??o dessa caracter?stica. Neste contexto, identificamos tr?s novas muta??es nos genes ASIP e MC1R, cada uma delas fortemente associada ao melanismo em uma das esp?cies investigadas, e revelamos que a sele??o natural parece ter influenciado a hist?ria evolutiva deste fen?tipo nesta linhagem de fel?deos.

Submitted by Setor de Tratamento da Informa??o - BC/PUCRS (tede2@pucrs.br) on 2015-05-14T20:39:01Z No. of bitstreams: 1 468555 - Texto Completo.pdf: 8199104 bytes, checksum: 8319f77be38697b0864185d6a700fdf3 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-05-14T20:39:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 468555 - Texto Completo.pdf: 8199104 bytes, checksum: 8319f77be38697b0864185d6a700fdf3 (MD5) Previous issue date: 2015-03-10 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico - CNPq / Financiadora de Estudos e Projetos - Finep / Glioblastoma (grade IV) is among the most prevalent primary intracranial tumors and is considered a challenge in oncology and neurosurgery due to the highly aggressive nature, and the elevated mortality rates. The location of the tumor and its invasive nature avoid the standard-of-care therapy, which includes surgical resection followed by radiotherapy and chemotherapy. Nevertheless, the current gold standard treatment has not been effective to prevent tumor evolution, as indicated by the poor survival rates. In this context, we analyzed the GPCRs for kinin and the high-voltagegated calcium channels (VGCC) as feasible new therapeutic approaches in malignant gliomas. Thereby, the signaling triggered by bradykinin or the disruption of calcium signaling might contribute with pivotal mechanisms underlying glioma progression, such as cell proliferation. Therefore, the aim of this study was to further evaluate the relevance of B1 (B1R) and B2 (B2R) kinin receptors as well as the P/Q- and N-type VGCC in glioma development, by using in vitro and in vivo glioma model. Cell culture assay showed that the treatment with the selective B1R des-Arg9-BK (1-100 nM) and B2R BK (1-100 nM) agonists induced a marked enhancement of cell proliferation and viability through ERK1/2 and PI3K/Akt signaling, according to evaluation of U-138MG and U-251MG cell lines. Meanwhile, the incubation of either B1R SSR240612 (1-30 ?M) or B2R HOE-140 (1-100 ?M) antagonists induced a marked cell death with mixed apoptosis/necrosis characteristics. The in vivo mouse model of GL261-induced glioma of C57/BL6 or B1R and B2R knockout mice showed an uncontrolled tumor growing in KOB1R mice. Conversely, there was no significant change of the tumor development in KOB2R mice. Notably, the genetic ablation or the pharmacological combined antagonism of B1R and B2R (SSR240612; 25 nmol/site + HOE-140; 50 pmol/site) diminished the tumor progression as well as the mitotic index of the GL261-induced glioma. To understand the potential anti-tumor effects of the blockade of P/Q- and Ntype VGCC, we used animal-derived inhibitors namely PhTx3-3 (P/Q-type blocker) and Ph?1? (N-type blocker) from P. nigriventer, or MVIIC (P/Q-type blocker) and MVIIA (N-type blocker) from C. magus. The PhTx3-3 (0.3 - 100 pM), Ph?1? (0.3 - 100 pM) and MVIIA (0.3 - 100 pM) displayed a significant inhibitory effect on proliferation and viability of M059J, U-138MG and U-251MG glioma tested cell lines, and evoked cell death mainly with apoptosis characteristics. In the glioblastoma in vivo model, the Ntype VGCC blockade by either Ph?1? (50 pmol/site; i.c.v. and i.t.) or MVIIA (10pmol/site; i.c.v.) caused significant reductions of glioma growth and progression. Of note, the N-type inhibition by Ph?1? and MVIIA led to a marked increase of GFAPactivated astrocytes and Iba-1-positive microglia in the peritumoral area, which might be related to the inhibitory effects of immune system in tumor development. Using molecular and pharmacological approaches, our data provide clear evidence on the beneficial effects of the simultaneous inhibition of both B1R and B2R as well as the P/Q- and N-type blockade on glioma development. Thus, we propose that the combined selective antagonism of B1R and B2R, such as the P/Q-, and especially NP type high-VGCC inhibition could markedly modify the tumor progression, which might represent an attractive alternative for the treatment of malignant gliomas in the future. / O glioblastoma apresenta a maior incid?ncia entre todos os gliomas e se caracteriza como o mais agressivo e fatal (grau IV) dos tumores prim?rios do SNC. Atualmente o glioblastoma ? considerado uns dos grandes desafios da oncologia e da neurocirurgia, devido ao seu car?ter altamente agressivo. A sobrevida m?dia dos pacientes ? bastante baixa e o progn?stico ? desfavor?vel, j? que a grande maioria destes tumores apresenta um padr?o difuso e infiltrativo de crescimento, o que dificulta as abordagens atuais para a terapia tumoral. Neste estudo foram analisados os efeitos dos receptores da fam?lia dos GPCRs de cininas e dos canais de c?lcio voltagem dependentes (CCVD) como base para poss?veis alvos no tratamento dos gliomas malignos, a fim de caracterizar novas abordagens terap?uticas. O efeito da sinaliza??o desencadeada pela BK e da sinaliza??o Ca2+-dependente pode estar envolvida na regula??o do crescimento e progress?o dos gliomas e na migra??o das c?lulas tumorais. Neste sentido, este trabalho visou explorar o papel dos receptores B1 (B1R) e B2 (B2R) de cininas e da sinaliza??o de Ca2+ via CCVD tipo-P/Q e -N em modelo de glioma in vitro e in vivo. Ensaios em cultura celular utilizando as linhagens de glioma humano U-138MG e U-251MG demonstraram que a ativa??o dos B1R e B2R pelo uso dos agonistas desarg9-BK (1-100 nM) e BK (1-100 nM) aumentou a prolifera??o das linhagens celulares testadas, atrav?s da ativa??o das vias ERK1/2 e PI3K/Akt. Enquanto que a exposi??o aos antagonistas seletivos para estes receptores, SSR240612 (1-30 ?M) e HOE-140 (1-100 ?M), provocou intensa morte celular com caracter?sticas de necrose/apoptose. A parte in vivo compreendeu a t?cnica de implante das c?lulas GL261 de glioma (grau IV) em animais C57/BL6 e knockout para os B1R e B2R. A dele??o apenas do B1R provocou um importante crescimento tumoral nos animais knockout para este receptor, enquanto que os animais com dele??o de B2R n?o tiveram o desenvolvimento tumoral alterado. Notavelmente, tanto a dele??o g?nica como o antagonismo farmacol?gico combinado dos receptores B1 e B2 (SSR240612; 25 nmol/s?tio + HOE-140; 50 pmol/s?tio) diminuiu o crescimento tumoral e o ?ndice mit?tico dos gliomas implantados. Para compreender o envolvimento dos CCVD tipo-P/Q e -N na fisiopatologia dos gliomas foram utilizadas fra??es da toxina da aranha Phoneutria nigriventer (PhTx3-3 bloqueadora de canais do tipo-P/Q; Ph?1? bloqueadora de canais do tipo-N) e ?-conotoxinas provenientes do Conus magus (MVIIC bloqueadora de canais do tipo-P/Q; MVIIA bloqueadora de canais do tipo-N). Os experimentos in vitro evidenciaram que o bloqueio dos canais de Ca2+ tipo-P/Q e -N pelas toxinas PhTx3-3 (0.3 - 100 pM), Ph?1? (0.3 - 100 pM) e MVIIA (0.3 - 100 pM) inibiram a prolifera??o e a viabilidade das linhagens celulares M059J, U-138MG e U-251MG de glioma humano, com intensa caracter?stica de morte celular por apoptose. Os resultados utilizando o modelo de glioblastoma in vivo, demonstraram que ambas as toxinas bloqueadoras dos canais do tipo-N, Ph?1? (50 pmol/s?tio) e MVIIA (10 pmol/s?tio), foram efetivas em diminuir o crescimento e a progress?o tumoral nos animais tratados, com intensa ativa??o de astr?citos e micr?glia, destacando o poss?vel envolvimento do sistema imune na inibi??o do crescimento tumoral. Atrav?s do uso de ferramentas moleculares e farmacol?gicas, nossos resultados demonstraram o envolvimento importante tanto dos B1R e B2R de cininas, como dos CCVD tipo-P/Q e -N no desenvolvimento dos gliomas malignos. Desta maneira, podemos propor que o bloqueio farmacol?gico combinado de antagonistas seletivos para os receptores B1 e B2, assim como a inibi??o dos CCVD tipo-P/Q e -N surgem como potenciais alvos terap?uticos no manejo dos tumores cerebrais e podem representar alternativas promissoras no tratamento dos gliomas.

Submitted by Setor de Tratamento da Informa??o - BC/PUCRS (tede2@pucrs.br) on 2016-09-01T14:18:40Z No. of bitstreams: 1 DIS_ANGELICA_DA_PAZ_RAMIREZ_COMPLETO.pdf: 2409049 bytes, checksum: 1aa9c09c978ce2b26c7b1afbd06c2eec (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-01T14:18:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DIS_ANGELICA_DA_PAZ_RAMIREZ_COMPLETO.pdf: 2409049 bytes, checksum: 1aa9c09c978ce2b26c7b1afbd06c2eec (MD5) Previous issue date: 2016-03-09 / Schistosomiasis is a trematode infection caused by Schistosoma mansoni. The parasitosis occurs mainly in northern Minas Gerais and northeastern States in Brazil. There has been a significative reduction in morbidity and prevalence of schistosomiasis in some areas. However, the parasitosis is still considered an infection that is expanding geographically. The first autochthonous case in Esteio, Rio Grande do Sul (RS) was diagnosed in 1997. Since that date, 28 individuals were found infected with S.mansoni and have been followed up by the Grupo de Parasitologia Biom?dica at PUCRS. The objective of the present study was to investigate and update data indicating a possible interruption of transmission. Serum samples were collected from the individuals previously identified with the infection and from school-aged children at Vila Pedreira, Esteio. From children, urine samples were also collected and tested with the rapid test ?point of care? for detection of cathodic circulating antigen (POC-CCA). Serum samples were examined by Western-blot (WB), with S.mansoni microsomal antigen (MAMA). 18 children were positive at POC-CCA test. None of the positive results with molecular methods were positive by Helmintex. Transmission interruption in Esteio may probably have occurred, but its certification needs a long-term monitoring as well as adjustment of best suited methods for this challenging task. / A esquistossomose mans?nica ? uma infec??o causada por um tremat?deo, Schistosoma mansoni. No Brasil, as ?reas de maior ocorr?ncia s?o o norte de Minas Gerais e nordeste do pa?s. Nos ?ltimos anos, houve uma redu??o significativa na morbidade e preval?ncia desta infec??o em algumas regi?es. No entanto, a esquistossomose ainda ? considerada uma doen?a parasit?ria em expans?o geogr?fica. Em 1997, foi diagnosticado o primeiro caso aut?ctone em Esteio, no Rio Grande do Sul (RS). Desde ent?o, 28 pessoas foram confirmadas com esquistossomose e monitoradas pelo Grupo de Parasitologia Biom?dica da PUCRS. O objetivo deste estudo foi investigar e atualizar indicadores de interrup??o da esquistossomose em Esteio, RS. Neste trabalho foram coletadas amostras de sangue de indiv?duos ex-infectados por S. mansoni e de crian?as em idade escolar de Vila Pedreira, Esteio. As crian?as tiveram tamb?m coletadas amostras de urina. As amostras de sangue de foram analisadas pelo m?todo de Western-blot (WB), utilizando o ant?geno microssomal de S. mansoni (MAMA) e as urinas pelo teste r?pido utilizando ant?geno circulante cat?dico (POC-CCA). Resultados positivos foram confirmados pelo m?todo Helmintex. 18 crian?as tiveram resultado positivo para POC-CCA. Nestes casos os resultados da sorologia e do m?todo Helmintex foram negativos. Existe a possibilidade de interrup??o da transmiss?o da esquistossomose em Esteio, por?m a certifica??o desta interrup??o depende da continuidade por muito tempo, do monitoramento e ajuste dos m?todos mais adequados para esta finalidade.

Submitted by Setor de Tratamento da Informa??o - BC/PUCRS (tede2@pucrs.br) on 2016-10-04T10:48:59Z No. of bitstreams: 1 DIS_BRUNO_COUTO_GIACOBBO_COMPLETO.pdf: 3325467 bytes, checksum: 539cc1eb4d805644ba436db429ede065 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-04T10:48:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DIS_BRUNO_COUTO_GIACOBBO_COMPLETO.pdf: 3325467 bytes, checksum: 539cc1eb4d805644ba436db429ede065 (MD5) Previous issue date: 2016-03-31 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / Tuberculosis (TB) is an infectious disease caused mainly by Mycobacterium tuberculosis and is one of the most devastating public health problems worldwide. Furthermore, MDR-TB and XDR-TB treatments are limited and recommended medicines are often not available revealing an urgent need for new anti-TB alternatives. In the present study, a series of 2-(quinolin-4-yloxy)acetamides were synthesized for further evaluation of minimum inhibitory concentration (MIC) against Mycobacterium tuberculosis (Mtb) strains. Moreover, a preliminary structure-activity relationship (SAR) study was also performed. The synthesized compounds were evaluated in a whole-cell assay against M. tuberculosis H37Rv and drug-resistant clinical isolate. The most active molecules against M. tuberculosis H37Rv (MIC <1?M) were selected for cytotoxicity study in Vero cells. The results showed that the molecular volume and hydrophobicity at the N-arylamide portion, the effect hydrogen bond donor on the acetamide moiety and an H-bond acceptor at 4-position of the quinoline ring represent three pharmacophoric groups important for antimycobacterial action. Further, the synthesized compounds 6a, 6h, 12d-f, and 12i-n were active against drug-resistant strains (MICs ? 0,001?M) with devoid of apparent cytotoxicity to Vero (IC50s ? 20 ?M). Therefore, these data indicate that this class of compounds may furnish candidates for future development, and to provide drug alternatives for tuberculosis treatment / A tuberculose (TB) ? uma doen?a infecciosa causada principalmente por Mycobacterium tuberculosis e ? um dos problemas de sa?de p?blica mais devastadores no mundo. Al?m disso, tratamentos de XDR-TB e MDR-TB s?o limitados e os medicamentos recomendados frequentemente n?o est?o dispon?veis, ressaltando uma necessidade urgente de novas alternativas anti-TB. No presente estudo, uma s?rie de 2-(quinolin-4-iloxi)acetamidas foi sintetizada para posterior avalia??o da concentra??o inibit?ria m?nima (MIC) frente a cepas de Mycobacterium tuberculosis (Mtb). Al?m disso, um estudo preliminar da rela??o estrutura-atividade (SAR) tamb?m foi realizado. Os compostos sintetizados foram avaliados no ensaio in vitro frente ao M. tuberculosis cepas H37Rv e isolado cl?nico resistente a f?rmacos. Os compostos mais ativos frente ao M. tuberculosis H37Rv (MIC < 1?M) foram selecionados para estudos de viabilidade em c?lulas Vero. Os resultados mostraram que o volume molecular e a hidrofobicidade na por??o N-arilamida, o efeito doador liga??o de hidrog?nio na por??o acetamida e o receptor na posi??o 4 do anel quinol?nico representam tr?s grupos farmacof?ricos importantes para a a??o antimicobacteriana. Al?m disso, os compostos sintetizados 6a, 6h, 12d-f, e 12i-n foram ativos frente a cepa resistente aos medicamentos (MIC ? 0,001?M) com desprovida citotoxicidade aparente para Vero (IC50 ? 20 ?M). Portanto, estes dados indicam que esta classe de compostos pode apresentar candidatos para o desenvolvimento futuro, e oferecer alternativas de medicamentos para o tratamento da tuberculose.

Submitted by Setor de Tratamento da Informa??o - BC/PUCRS (tede2@pucrs.br) on 2016-12-23T13:17:24Z No. of bitstreams: 1 DIS_BRUNO_DALLAGNOL_PARCIAL.pdf: 1004622 bytes, checksum: f24e6bdb92018aba52853bc890c3dc2c (MD5) / Made available in DSpace on 2016-12-23T13:17:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DIS_BRUNO_DALLAGNOL_PARCIAL.pdf: 1004622 bytes, checksum: f24e6bdb92018aba52853bc890c3dc2c (MD5) Previous issue date: 2015-03-18 / Anaplasma marginale is a vector-borne pathogen that causes a disease known as anaplasmosis. To date, there are no sequenced genomes of Brazilian strains available. The aim of this work was to compare whole genomes of Brazilian strains of A. marginale (Palmeira and Jaboticabal) with genomes of strains from other regions (North-American and Australian strains). Genome sequencing was performed by next-generation sequencing. Reads were mapped using the genome of the Florida strain of A. marginale as a reference sequence. Identification of single nucleotide polymorphisms (SNPs) and insertions/deletions (INDELs) was performed. Data showed significant differences between the two Brazilian strains, and their comparison with North-American strains (Florida and St. Maries) revealed more nucleotide differences than with Australian strains (Gypsy Plains and Dawn). These results shed light into the evolutionary history of A. marginale and provide the first genome information of South American isolates. Assessing sequences of the genomes of strains from different regions is essential to increase knowledge of the pan-genome of this rickettsia. / Anaplasma marginale ? um pat?geno transmitido por vetores que causa uma doen?a conhecida como anaplasmose. At? o momento, n?o h? genomas sequenciados de cepas brasileiras dispon?veis. O objetivo deste trabalho foi comparar genomas completos de cepas brasileiras de A. marginale (Palmeira e Jaboticabal) com genomas de cepas de outras regi?es (cepas norte-americanas e australianas). O sequenciamento do genoma foi realizado por sequenciamento de alto rendimento. As reads foram mapeadas utilizando o genoma da cepa Florida de A. marginale como uma sequ?ncia de refer?ncia. A identifica??o de polimorfismos de nucleot?deo ?nico (SNPs) e inser??es/dele??es (INDELs) foi realizada. Os dados mostraram diferen?as significativas entre as duas cepas brasileiras, e sua compara??o com as cepas norte-americanas (Fl?rida e St. Maries) revelou mais diferen?as de nucleot?deos do que com as cepas australianas (Gypsy Plains e Dawn). Esses resultados lan?am luz sobre a hist?ria evolutiva de A. marginale e fornecem a primeira informa??o gen?mica de isolados da Am?rica do Sul. Avaliar sequ?ncias dos genomas de cepas de diferentes regi?es ? essencial para aumentar o conhecimento do pangenoma desta rickettsia.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 462081.pdf: 1430487 bytes, checksum: 4c2af366716f369356b61bcee2b250d0 (MD5) Previous issue date: 2014-08-25 / Brazil is a large country, were each region shows a particular pattern of admixture population. To evaluate the agreement between different forensic anthropology tools to determine ancestry and sex in a region of this country, we perform morphological and genetic analysis in a sample of 25 crania from cemeteries and Universities from Porto Alegre metropolitan region, south of Brazil. Those analysis consists in cranioscopy evaluation of 8 cranial traits, 16 craniometric measurements, and allele amplification of 13 autosomal short tandem repeats (STRs) loci of the CODIS system (TPOX, D3S1358, FGA, D5S818, CSF1PO, D7S820, D8S1179, TH01, vWA, D13S317, D16S539, D18S51, D21S11) plus other two loci (D2S1338, D19S433) and amelogenin, using the Identifiler? Plus Kit loci Amelogenin and The NGM Kit loci. Genetics and morphological data were then compared to ancestral populations' database of cranial measurements, Howells and Hanihara database, and STR allele frequencies from individuals of African, Amerindian and European origin. Our results showed cranioscopy and craniometry based on Hanihara database were the most accurate morphological tools to determine sex, and probably ancestry as well. This can be explained by the fact that Howells database is not composed of populations who effectively colonized Brazil, and a more resembled craniometric database could turn Brazilian forensic identification analysis more precise and accurate. / Porto Alegre ? a maior cidade do Rio Grande do Sul, sul do Brasil. Sua popula??o ? composta principalmente por descendentes de portugueses, com a contribui??o de outras popula??es europeias, africanos e ind?genas. Neste estudo, para a estimativa da ancestralidade e sexo, foram utilizadas as metodologias de cranioscopia (8 caracteres), craniometria (16 medidas/?ndices) e a an?lise de marcadores gen?ticos STR em uma amostra de 25 cr?nios provenientes da regi?o metropolitana de Porto Alegre, sul do Brasil. A an?lise craniom?trica da ancestralidade foi realizada por meio de an?lise discriminante utilizando a dist?ncia de Mahalanobis, com o software FORDISC 3.0 baseado no banco craniom?trico de Howells, e com o software Statistica 12 utilizando o banco craniom?trico de Hanihara. Foram utilizados os 13 (STRs) loci do sistema CODIS (CSF1PO, D3S1358, D5S818, D7S820, D8S1179, D13S317, D16S539, D18S51, D21S11, FGA, TH01, TPOX, vWA) acrescido de mais dois loci STR (D2S1338, D19S433) e Amelogenina, utilizando os kits AmpFlSTR Identifiler? Plus Kit e AmpFlSTR NGM da Applied Biosystems?. A compara??o dos resultados entre os dados craniom?tricos e de marcadores STR demonstra que as duas metodologias apresentam resultados pouco concordantes. Em se tratando da compara??o da craniometria usando dois bancos de dados distintos, o banco de Hanihara se mostrou mais preciso na determina??o do sexo e, possivelmente, da ancestralidade, se comparado ao banco de Howells. Isso pode se dever ao fato de que o banco Hanihara ? composto de indiv?duos de popula??es europeias, africanas e ind?genas originais similares as que efetivamente colonizaram o Brasil. Os resultados obtidos indicam a necessidade de um banco de dados craniom?trico contendo popula??es ancestrais brasileiras, o que seria importante para aumentar a efici?ncia das identifica??es em Antropologia Forense no Brasil.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 462290.pdf: 2133615 bytes, checksum: 5c5628b9cc5fd71ee1dcc7d68f182c36 (MD5) Previous issue date: 2014-08-22 / Tuberculosis (TB) is an infectious disease caused mainly by Mycobacterium tuberculosis. The increasing number of infected patients among immune compromised populations and emergence of drug-resistant strains has created urgent need of new strategies to treat TB. Understanding relevant pathways (as the purine salvage) will reveal details of M. tuberculosis that might be used to develop new strategies to combat this pathogen. Hypoxanthine-guanine phosphoribosyltransferase (HGPRT) is an enzyme from the purine phosphoribosyltransferase (PRTase) family and catalyzes the conversion of hypoxanthine or guanine and 5-phosphoribosyl-&#945;-1-pyrophosphate (PRPP) to inosine 5 -monophosphate (IMP) or guanosine 5 -monophosphate (GMP), and pyrophosphate (PPi). Here we describe the mode of action of M. tuberculosis HGPRT (MtHGPRT) through kinetic and thermodynamical analysis. Experiments were also performed to determine the oligomeric state in solution, pH, temperature and solvent isotope effects. These data allows us to compare MtHGPRT to homologues from other species and look for similarities and differences in its mechanism and constants. We hope the experiments presented here will contribute to the understanding of this pathogen purine salvage pathway. / A Tuberculose (TB) ? uma doen?a infecciosa causada principalmente por Mycobacterium tuberculosis. O aumento de pacientes infectados entre a popula??o imunocomprometida e a emerg?ncia de cepas resistentes a drogas criam uma necessidade de novas estrat?gias para tartar a TB. Entender como funcionam as vias metab?licas relevantes, como a via de salvamento de purinas, poder? revelar detalhes do M. tuberculosis que poder?o ser ?teis para o desenvolvimento de novas estrat?gias de combate a este pat?geno. A hipoxantina-guanina fosforribosiltransferase (HGPRT) ? uma enzima da familia das purina fosforribosiltransferases (PRTase) e catalisa a convers?o de hipoxantina ou guanina e 5-fosforribosilpirofosfato-&#945;-1-pirofosfato (PRPP) em inosina 5 -monofosfato (IMP) ou guanosina 5 -monofosfato (GMP) respectivamente, com a libera??o de pirofosfato inorg?nico (PPi). Aqui n?s descrevemos o modo de a??o da HGPRT de M. tuberculosis (MtHGPRT) atrav?s de an?lises cin?ticas e termodin?micas. Tamb?m foram realizados experimentos para determinar o estado oligom?rico da enzima em solu??o e os efeitos de pH, temperatura e efeitos isot?picos do solvente. Esses dados nos permitem comparar a MtHGPRT com hom?logos de outras esp?cies e procurar por similaridades e diferen?as nos seu mecanismo e constantes. N?s esperamos que os experimentos apresentados aqui contribuam para o entendimento da via de salvamento de purinas desse pat?geno.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 397347.pdf: 984527 bytes, checksum: 31dff3f15a7d672c6b5eff5f99ffff0d (MD5) Previous issue date: 2008-12-18 / A les?o pulmonar aguda (LPA) ? uma s?ndrome caracterizada por inflama??o pulmonar aguda e persistente, com edema pulmonar devido ao aumento da permeabilidade vascular. Na LPA ocorre uma les?o do epit?lio alveolar e do endot?lio capilar por diferentes mediadores pr?-inflamat?rios, principalmente, pelas citocinas liberadas em resposta ? grande variedade de insultos. A gera??o de radicais livres (RLs) ? outro importante mecanismo de les?o utilizado pelos neutr?filos, que s?o capazes de gerar muitas das altera??es encontradas na LPA. Sabe-se que a produ??o end?gena de glutamato estimula uma variedade de mediadores inflamat?rios, incluindo metab?litos do ?cido araquid?nico, RLs e ?xido n?trico (NO). O primeiro relato de que os receptores NMDA poderiam estar envolvidos na fisiopatologia pulmonar ocorreu atrav?s da demonstra??o que o tratamento com um inibidor seletivo desse receptor (MK-801) prevenia o edema pulmonar provocado pelo aumento de NMDA instilado na traqu?ia de ratos sob ventila??o mec?nica. O objetivo deste trabalho foi avaliar o uso do antagonista de receptor NMDA (MK- 801) como protetor no dano oxidativo em modelo experimental de LPA. Foram utilizados ratos Wistar, machos. Os animais foram divididos em 4 grupos experimentais: Grupo 1: Inje??o intratraqueal (I.T.) de 1 mL de solu??o salina (n=6); grupo 2: Indu??o da LPA atrav?s da inje??o de LPS intratraqueal (100 \g/100 g de peso corporal) e tratamento com solu??o salina intraperitoneal (I.P.) ap?s indu??o da LPA (n=6); grupo 3: Indu??o da LPA e tratamento com MK-801 (0.3 mg/kg I.P.) ap?s indu??o da LPA (n=6) e grupo 4: Indu??o da LPA e tratamento com MK-801 (0.3 mg/kg I.T.) ap?s indu??o da LPA (n=6). Doze horas ap?s o tratamento, os animais foram anestesiados para a retirada do sangue por pun??o retro-orbital, coleta do lavado broncoalveolar (LBA) e posteriormente, submetidos ? eutan?sia por decapita??o para coleta do tecido pulmonar. O tratamento com MK-801 promoveu uma diminui??o na concentra??o de prote?nas totais, uma diminui??o na atividade da lactato desidrogenase (LDH), al?m de diminuir o n?mero de c?lulas inflamat?rias no LBA. No tecido pulmonar ocorreu uma diminui??o do dano oxidativo avaliado atrav?s dos n?veis de TBARS e NO, e um aumento nos n?veis de antioxidantes como a CAT, SOD, GSH e SH. Tamb?m observamos uma melhora do processo inflamat?rio atrav?s da an?lise histopatol?gica do tecido pulmonar. Podemos concluir atrav?s de nossos resultados que o tratamento com MK-801 promoveu uma melhora do processo inflamat?rio, uma melhora nos n?veis de antioxidantes e uma diminui??o do dano oxidativo em ratos com LPA induzida atrav?s da inje??o intratraqueal de LPS.

Submitted by Ricardo Cedraz Duque Moliterno (ricardo.moliterno@uefs.br) on 2015-09-15T01:16:18Z No. of bitstreams: 1 Disserta??o+de+Juliana+Andrade_PPGBiotec.pdf: 1768229 bytes, checksum: bb090cd36fb6e87ace64aecf5e4d3280 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-09-15T01:16:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Disserta??o+de+Juliana+Andrade_PPGBiotec.pdf: 1768229 bytes, checksum: bb090cd36fb6e87ace64aecf5e4d3280 (MD5) Previous issue date: 2013-09-30 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / Dengue is an endemic disease caused by Aedes aegypti Linnaeus that besides have caused major epidemics in recent years in Brazil, does not have an effective vaccine. The larvae of these mosquitoes demonstrates high resistance to chemical larvicides commonly used in vector control activities and therefore some plants ictiot?xicas studies are targets for discovery of promising substances present in plant extracts that can be leveraged or even transformed into natural insecticides. This work began with an ethnobiological study conducted in the municipality of Maragogipe by using open and semi-structured interviews with local residents in order to collect information in different sociocultural levels, focusing on which plant is commonly used as ichthyotoxic, and then with possible larvicidal effect. Outo of the ichthyotoxic plants recorded, the species most cited was Phyllanthus acuminatus Vahl. The crude extract of the leaf and stem of this plant, as well as their different concentrations were tested in larvae of the mosquito A. aegypti checking the mortality rate at 24 and 48 hours at laboratory conditions to 25?C in a growth chamber to assess its action as biopesticide agent. Although not standardized a suitable dosage of a larvicide from natural plant extracts tested, it was found that in higher concentrations it is possible to achieve the desired effect contributing to breaking the cycle of development of dengue vector and contributing to the reduction the indiscriminate use of synthetic larvicides that have high power toxicity. / A dengue ? uma endemia disseminada pelo Aedes aegypti Linnaeus que al?m de ter provocado grandes epidemias nos ?ltimos anos no Brasil, ainda n?o possui uma vacina efetiva. A larva deste mosquito demonstra grande resist?ncia aos larvicidas qu?micos comumente usados nas a??es de controle do vetor e, portanto, algumas plantas ictiot?xicas s?o alvos de estudos para descoberta de subst?ncias promissoras presentes em extratos vegetais que possam ser aproveitados ou at? transformados em inseticidas naturais. Este trabalho iniciou-se com o estudo etnobiol?gico conduzido no munic?pio de Maragogipe, utilizando entrevistas abertas e semi-estruturadas com os moradores locais com o objetivo de coletar informa??es em n?veis socioculturais distintos, enfocando qual planta ? comumente utilizada como ictiot?xica e com poss?vel efeito larvicida. Das plantas identificadas como ictiot?xicas, a mais citada pela comunidade visitada foi a esp?cie Phyllanthus acuminatus Vahl. O extrato bruto do caule e da folha desta planta, assim como suas diferentes concentra??es, foram testados em larvas do mosquito A. aegypti verificando a taxa de mortalidade em 24 e 48 horas em condi??es de laborat?rio com temperatura de 25?C em c?mara B.O.D. a fim de avaliar a sua a??o como agente bioinseticida. Embora n?o tenha sido padronizada uma dosagem adequada de um larvicida natural a partir de extratos da planta testada, verificou-se que em maiores concentra??es ? poss?vel obter o efeito desejado contribuindo para o rompimento no ciclo de desenvolvimento do vetor da dengue e colaborando para a diminui??o no uso indiscriminado de larvicidas sint?ticos que apresentam alto poder de toxidade.

Made available in DSpace on 2016-08-17T18:39:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DissMKA.pdf: 1355556 bytes, checksum: 015ec3f0d664f509359ce4430140c3c1 (MD5) Previous issue date: 2007-03-14 / Financiadora de Estudos e Projetos / The development of the biotechnology has permitted to achieve, among other biotechnological products, many recombinant proteins which are largely used as vaccines, hormones, enzymes and other ways of human therapeutic activity. This is possible because the multidisciplinary: through the technology of the recombinant DNA the region that encode gene of interest is cloned in a system of adequate expression for super-expression of the correspondent protein and, through the technology of bioprocess is possible to increase the obtaining scale of the recombinant product assuring its reproducibility, integrity and functionality. Involving these two areas of knowledge, this works intends to express an heterolog protein, the Canacistatina, deriving from sugar cane, through an eucariotic expression system Sf9/baculovirus. This implies in the construction of a recombining baculovirus, containing the cDNA which codifies to the Canacistatina, and also the characterization of the cultivation of Sf9 cells, and of the process of infection by baculovirus, in kinetics and physiologic therms. In order to obtain these purposes it was done experiments of cultivation of Sf9 cells in Schott bottles of 100 mL, with work volume of 20 mL, in 27° C. In these experiments it was analyzed the optimum conditions of velocity agitation, inoculum s density, culture environment, and also the role of substrates. In relation to these parameters, it was observed that a better cell growth can be conduced in a 100 rpm of agitation, in an inoculum s density of 1x106 cell/ml, using a combination of 1:1 between the mediums SF900 II and TNM-FH (Medium 50%), without the necessity of addition of Bovine Fetal Sorum. This last aspect represents a great advantage in relation to the bioprocesses, in a way that it uses Sf9 cells already known. It was construed the recombining baculovírus containing the Canacistatina s gene through the modified genome of the baculovirus Autographa californica Multiple Nuclear Polihedrosis Virus and the infection experiments of Sf9 cells was made under three MOI values (1, 5 e 10 pfu/cell) in the two culture mediums. The betters results indicates to infection of Sf9 cells in 50% Medium using MOI= 5 pfu/cell, conditions that the Canacistatina s productivity reached 28 µg/106cel. / O desenvolvimento da biotecnologia tem permitido a obtenção, entre tantos produtos biotecnológicos, de muitas proteínas recombinantes utilizadas amplamente como vacinas, hormônios, enzimas e outras formas de atividade terapêutica humana. Isto é possível através da multidisciplinaridade, onde por tecnologia do DNA recombinante clona-se a região codificadora do gene de interesse em um sistema de expressão adequado para super-expressão da proteína correspondente e, pela tecnologia de bioprocessos torna-se possível o aumento de escala de obtenção do produto recombinante, garantindo sua reprodutibilidade, integridade e funcionalidade. Envolvendo estas duas áreas do conhecimento, o presente trabalho tem como objetivo a expressão de uma proteína heteróloga, a Canacistatina, natural da cana-de-açúcar, através do sistema de expressão eucariótico células Sf9/baculovírus. Isto abrange a construção de um baculovírus recombinante, contendo o cDNA que codifica para a Canacistatina, e a caracterização do cultivo de células Sf9 e do processo de infecção por baculovírus, em termos cinéticos e fisiológicos. Para estes fins, foram realizados experimentos de cultivo de células Sf9 em frascos Schott de 100 mL, com volume de trabalho de 20 mL, a 27ºC, nos quais foram analisadas as condições ótimas de velocidade agitação, densidade de inóculo, meio de cultura e também o papel dos substratos, obtendo-se que um crescimento celular otimizado pode ser conduzido a 100 rpm de agitação, com densidade de inóculo de 1x106 cel/ml e utilizando uma combinação 1:1 entre os meios SF900 II e TNM-FH (Meio 50%), sem a necessidade de adição de Soro Fetal Bovino. Este último aspecto representa uma grande vantagem em relação aos bioprocessos utilizando células Sf9 já conhecidos. Foi construído o baculovírus recombinante contendo o gene da Canacistatina a partir do genoma modificado de Autographa californica Multiple Nuclear Polihedrosis Virus e os experimentos de infecção de células Sf9 foram realizados sob três valores de MOI (1, 5 e 10 pfu/cel) nos dois meios de cultura. Os melhores resultados obtidos apontam para a infecção de células Sf9 em Meio 50% com MOI de 5,0 pfu/cel, condições nas quais a produtividade de Canacistatina alcançou 28 µg/106cel.