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Avaliação do efeito do plasma rico em plaquetas na cicatrização de feridas cutâneas induzidas em ratosMENDONÇA, Andréa Aparecida dos Santos 10 February 2014 (has links)
O reparo de tecidos lesionados pode se dar por regeneração ou
cicatrização, sendo que o início desse processo de cura ocorre pela ação de
fatores de crescimento que atuam no sítio da lesão estimulando a quimiotaxia,
fibroplasia e angiogênese tecidual. A utilização do Plasma Rico em Plaquetas
(PRP) em lesões teciduais possui grande potencial terapêutico, pois estimula a
cicatrização e a regeneração, desenvolve a neovascularização, reduz o
processo inflamatório e o risco de infecções, além de fornecer uma rápida
hemostasia ao local. Por meio da indução de feridas na região dorsal dos ratos,
o presente trabalho avaliou o efeito do PRP na cicatrização de feridas
cutâneas, mediante avaliação histológica. Foram utilizados 36 ratos albinos
Wistar, no qual duas feridas foram feitas, no mesmo animal, na região mediana
dorsal. Nada foi aplicado a uma ferida e a mesma foi preenchida apenas com o
coágulo (Grupo Controle), enquanto que na outra aplicou-se o PRP (Grupo
Experimental). Os animais foram eutanasiados no 2º dia (nove animais), no 4º
dia (nove animais), no 7º dia (nove animais) e no 14º dia (nove animais) após o
procedimento cirúrgico, e os espécimes foram processados para analise
microscópica. Os resultados mostraram que nos períodos avaliados não houve
diferenças histomorfológicas relevantes entre as feridas tratadas com o PRP e
as controle e não houve diferenças estatísticas em relação às variáveis
estudadas nos dois grupos. / The repair of injured tissues can occur by regeneration or healing, and
the beginning of this healing process takes place by the activity of growth
factors at the injury site stimulating chemotaxis, angiogenesis and tissue
fibroplasia. The use of Platelet Rich Plasma (PRP) in tissue lesions has great
therapeutic potential because it stimulates healing and regeneration, promotes
neovascularization, reduce inflammation and the risk of infection, as well as to
provide rapid hemostasis at the injury site. Through the induction of wounds on
the dorsal region of rats, we evaluated, by histological approaches, the effect of
PRP on wound healing. We used 36 albino Wistar rats in which two incisions
were made on the dorsal medial region. Nothing was applied to one of the
wounds, and thus, it was only filled with the blood clot (Control Group); while the
other wound received PRP (Experimental Group). Animals were euthanized on
day 2 (nine animals), 4 (nine animals), 7 (nine animals), and 14 (nine animals)
after the surgery procedure, and tissue samples were processed for
macroscopic and microscopic analyses. Results failed to show significant
morphometric differences between PRP-treated and control wounds.
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Responsividade das Células Natural Killer Uterinas DBA+ e alterações comportamentais frente ao Tratamento com CiclofosfamidaHORVATH, Renato de Oliveira 29 July 2015 (has links)
Durante a gestação, observamos um influxo de linfócitos para a região mesometrial de camundongos denominados de células Natural Killer Uterinas (uNK). Estas células desempenham funções importantes no início da gestação, como a manutenção da tolerância materna ao feto, angiogênese e remodelação das artérias espiraladas. Sua capacidade citolítica é reduzida podendo ser ativada caso haja algum desequilíbrio entre citocinas pró e anti-inflamatórias durante a gestação. A ciclofosfamida é um medicamento usado no tratamento de doenças autoimunes e câncer. Trata-se de um teratógeno, sendo que seu uso pode levar a alterações macroscópicas e microscópicas, bem como, a redução da viabilidade gestacional em camundongos. O objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos da ciclofosfamida no útero e nas células uNK de camundongos no 10° ddg, por meio da análise morfológica, citoquímica e estereológica concomitantemente a análise da viabilidade gestacional e no comportamento destes animais nos parâmetros de depressão e ansiedade. Nossos resultados mostraram que a ciclofosfamida provoca rapidamente o aumento de células uNK no útero, bem como, diminuição na expressão de N-acetil-D-galactosamina em seus grânulos e superfície, atingindo primeiramente células uNK menos diferenciadas próximas ao mesométrio, e posteriormente células mais diferenciadas em regiões mais próximas ao embrião. Seu efeito drástico na gestação provocou ainda diminuição no número de células uNK após 48h de sua administração, concomitante ao aparecimento de muitos sítios em reabsorção, diminuindo a viabilidade gestacional, bem como, estabelecimento de comportamento semelhante ao doentio nesses animais, causando 100% de perda embrionária diagnosticada em nosso estudo da prenhez a termo / During pregnancy, we observed an influx of lymphocytes into the region of mice mesometrial decidua. These cells are natural killer cells (NK), presenting different behavior and phenotype of circulating NK cells. Uterine Natural Killer Cells (uNK) play important roles in early pregnancy, such as maintaining maternal tolerance to the fetus, angiogenesis and remodeling of the spiral arteries. Their cytolytic capacity is reduced during pregnancy and can be activated if there is an imbalance between pro and anti-inflammatory cytokines. Cyclophosphamide is a drug used in treating autoimmune diseases and cancer. It is known that it is a teratogen, and its use can lead to macroscopic and microscopic changes, as well as the reduction of viability pregnancy in mice. The objective of this study was to evaluate the effects of cyclophosphamide in the uterus and in cells uNK (morphological analysis, cytochemistry and stereological) on the 10th ddg, as well as its effects on behavior related to depression and anxiety. Our results showed that cyclophosphamide rapidly increased uNK cells number in the uterus as well as decreased expression of N-acetyl-D-galactosamine in their granules and surface, early reaching less differentiated uNK cells near the mesometrium, and latter more differentiated uNK cells closer to the embryo. His dramatic effect on pregnancy still caused a decreasing in the number of uNK cells 48 after the drug administration, concomitant with the appearance of many resorption implantation sites, decreasing of gestational viability, as well as, establishment of sickness-like behavior, causing 100% of embryo loss diagnosed in the pregnancy to term. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES
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Avaliação da expressão e do papel dos microRNAs mmu-miR-155-5p e mmu-miR-146b-5p durante a infecção pulmonar causada pela bactéria Pseudomonas aeruginosaTANA, Fernanda de Lima 26 April 2017 (has links)
Pseudomonas aeruginosa é um importante patógeno humano oportunista capaz de causar severas infecções em pacientes imunodeprimidos e em pacientes que apresentam fibrose cística. Para desencadear uma resposta efetiva contra a infecção pela P. aeruginosa é necessário uma primeira linha de reconhecimento desta bactéria pelo sistema imunológico inato. Apesar do desencadeamento da resposta imune inata ser benéfica no controle da infecção pela P. aeruginosa, esta resposta deve ser controlada. Estudos recentes têm começado a esclarecer como os miRNAs desempenham papéis fundamentais na regulação de processos como infecção, resposta imune e inflamação participando da modulação da resposta imune. Dada a relevância da bactéria P. aeruginosa nos processos infecciosos em humanos e estimulados pela necessidade de desvendar os mecanismos de regulação da reposta imune contra esta bactéria, o objetivo deste trabalho foi avaliar o papel do mmu-miR-155-5p e mmu-miR-146b-5p expressos em camundongos infectados pelas cepas ATCC 27853 e PA14 da bactéria P. aeruginosa. Para avaliar o nível de expressão dos mmu-miR-155-5p e mmu-miR-146b-5p e das citocinas IL-1β, IL-6 e IL-12 in vitro, o RNA total foi extraído de células Raw 264.7, macrófagos derivados da medula óssea (BMDM) e de células dendríticas derivadas da medula óssea (BMDC) para análise de PCR em tempo real. Após a infecção das células Raw 264.7, BMDMs e BMDCs foi possível observar que a expressão dos miRNAs e das citocinas ocorreu de forma dependente em cada tipo celular infectado. Para as análises in vivo camundongos C57BL/6 foram infectados via intratraqueal com as cepas ATCC 27853 e PA14 de P. aeruginosa para análises de UFCs, RT-qPCR, histopatologia e estereologia. Apenas a cepa PA14 foi recuperada no pulmão e baço dos animais, onde não foi observado variação na expressão do mmu-miR-155-5p nem aumento significativo de uma série de citocinas efetoras. As análises histopatológicas demostraram intenso processo inflamatório difuso apresentando número maior de células inflamatórias, diminuição no número de alvéolos e do volume da estrela quando comparados aos animais não infectados e animais infectados pela cepa avirulenta. No pulmão dos animais infectados com a cepa ATCC 27853, observou-se aumento de expressão de mmu-miR-155-5p e mmu-miR-146b-5p, das citocinas inflamatórias. A identificação das redes de regulação dos miRNAs em estudo mostrou importantes alvos diretos e indiretos associados à resposta imune inata que podem estar comprometidas durante a expressão diferencial de mmu-miR-155-5p e mmu-miR-146b-5p em favorecimento ou em detrimento da resolução da infecção pela P. aeruginosa. Os resultados obtidos até o momento
permitem sugerir que a infecção pela P. aeruginosa exerce uma modulação na expressão de miRNAs e consequentemente na resposta imune contra esta bactéria e que a virulência de diferentes cepas de P. aeruginosa influenciam na expressão dos miRNAs mmu-miR-155-5p e mmu-miR-146b-5p, de citocinas pró-inflamatórias e na patologia. Mais estudos são necessários para desvendar os mecanismos pelos quais cepas virulentas da P. aeruginosa conseguem subverter a resposta imune e garantir a sua replicação no hospedeiro. / Pseudomonas aeruginosa is an important opportunistic human pathogen capable of causing
severe infections in immunocompromised patients and in patients with cystic fibrosis. To
trigger an effective response against infection by P. aeruginosa is required a first line of
recognition of this bacterium by the innate immune system. Although the innate immune
response is beneficial in the control of P. aeruginosa infection, this response should be
controlled. Recent studies have begun to clarify how miRNAs play key roles in regulating
processes such as infection, immune response and inflammation by participating in the
immune response modulation. Due to the importance of the P. aeruginosa bacterium in
infectious processes in humans and stimulated by the need to uncover the mechanisms of
regulation of the immune response against this bacterium, the objective of this study was to
evaluate the role of mmu-miR-155-5p and mmu-miR-146b -5p expressed in mice infected
with strains ATCC 27853 and PA14 of the bacterium P. aeruginosa. To assess the level of
expression of mmu-miR-155-5p and mmu-miR-146b-5p and the cytokines IL-1β, IL-6 and
IL-12 in vitro, the total RNA was extracted from Raw 264.7 cells, bone marrow derived
macrophages (BMDM) and bone marrow-derived dendritic cells (BMDC) for real-time PCR
analysis. After infection of the Raw 264.7, BMDMs and BMDCs cells, it was possible to
observe that the expression of miRNAs and cytokines occurred in a dependent manner in each
infected cell type. For the in vivo analyzes C57BL / 6 mice were infected intratracheally with
the strains ATCC 27853 and PA14 of P. aeruginosa for analysis of CFU, RT-qPCR,
histopathology and stereology. Only the PA14 strain was recovered in the lungs and spleens
of the animals, where no variation in the expression of mmu-miR-155-5p or a significant
increase in a series of effector cytokines was observed. Histopathological analyzes
demonstrated an intense diffuse inflammatory process, presenting a larger number of
inflammatory cells, a decrease in the number of alveoli and the volume of the star when
compared to uninfected animals and animals infected by the avirulent strain. In the lung of
animals infected with ATCC 27853 strain, increased expression of mmu-miR-155-5p and
mmu-miR-146b-5p, of inflammatory cytokines was observed. The identification of regulatory
networks of the miRNAs under study showed important direct and indirect targets associated
with the innate immune response that may be compromised during the differential expression
of mmu-miR-155-5p and mmu-miR-146b-5p in favor or detriment of P. aeruginosa infection.
The results obtained to date suggest that the infection by P. aeruginosa exerts a modulation in the expression of miRNAs and consequently in the immune response against this bacterium and that the virulence of different strains of P. aeruginosa influence the expression of miRNAs mmu-miR- 155-5p and mmu-miR-146b-5p, of proinflammatory cytokines and in pathology. Further studies are needed to uncover the mechanisms by which virulent P. aeruginosa strains can subvert the immune response and ensure replication in its host. / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais - FAPEMIG
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Desenvolvimento de software para análises computacionais de genomas e metagenomas marinhos / Software development for computational analyses of marine genomes and metagenomesVieira, Náyra Menezes 14 June 2013 (has links)
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Previous issue date: 2013-06-14 / The study of the diversity and microbial taxonomy is very important to better understand of the micro-organisms ecology. The microbial taxonomy has undergone important changes with the advent of genomic. Until recently the taxonomy exclusively depended of the DNA-DNA hybridization for define species and to describe new species. From the analysis of the genomic signatures (Average Amino Acid Identity (AAI) e Karlin signature) is possible to determine the similarity between microbial genomes. However, the calculations of those signatures requires time. The automation those calculations using a software was the objective of this dissertation. For develop the software was chosen, for its multiplatform characteristics, the Java language, which allows the use of the software in operational systems Windows, Linux and iOS. For develop was used Eclipse VE and batch files for integrate with Blast 2.2.25+ used for comparison of the identity between genomes. The new software performs calculations AAI and Karlin signature for multiple genomes and metagenomes in real time. It s allowed studies about the genus Mycoplasma and the species Phrochlorococcus marinus. This species comprises 10 species according to the analysis of Karlin and AAI and indicates the need for taxonomy review. The Mycoplasma genus is polyphyletic and possibly comprises different genera. This study advances the taxonomic knowledge about relevant groups in marine habitats, besides create a useful tool for analyses of genome and metagenome. / O estudo da diversidade e taxonomia microbiana é de suma importância para o melhor entendimento da ecologia de microrganismos. A taxonomia microbiana tem passado por importantes transformações com o advento da genômica. Até recentemente a taxonomia dependia exclusivamente da hibridização de DNA-DNA para determinação de espécies e descrição de espécies novas. A partir da análise de assinaturas genômicas (Identidade Média de Aminoácidos (AAI) e Assinatura de Karlin) é possível agora determinar a similaridade entre genomas microbianos. Porém, o cálculo destas assinaturas também consome tempo. A automatização destes cálculos por meio de um software foi o objetivo desta dissertação de mestrado. Para a construção do software foi escolhida a linguagem Java por sua característica multiplataforma, que permite utilização em sistemas operacionais Windows, Linux e iOS. Para o desenvolvimento foi utilizado o software Eclipse VE e arquivos batch para integração com o Blast versão 2.2.25+ utilizado para comparação de identidade entre genomas. O novo software realiza os cálculos de AAI e assinatura de Karlin para múltiplos genomas e metagenomas em tempo real. O novo software permitiu o estudo da taxonomia do gênero Mycoplasma e da espécie Phrochlorococcus marinus. De acordo com as análises da assinatura e AAI esta espécie compreenderia 10 outras espécies, o que indica a necessidade de revisão taxonômica. Já o gênero Mycoplasma é polifilético e compreende possivelmente diferentes gêneros. O presente estudo avança o conhecimento taxonômico de grupos relevantes no meio marinho, além de criar uma ferramenta útil para análise de genomas e metagenomas.
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Composição e abundância do fitoplâncton do sudoeste da reserva biológica do lago Piratuba (Amapá, Brasil)Dias, Maxley Barbosa 10 January 2007 (has links)
Submitted by Dominick Jesus (dominickdejesus@hotmail.com) on 2016-01-26T18:05:05Z
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Previous issue date: 2007-01-10 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / The present study was done on the southwest of the Lago Piratuba Biological Reserve, on
Araguari river floodplain, Amapá coast region, Brazil. The environments were the lakes
Comprido de Cima, Bacia, Lodão, Ventos, Grande and Comprido de Baixo and the Araguari
River downstream. This region is submitted to an influence of the semidiurnal tide from the
Amazon River sediments plume and the periodical local rain regime. The ecological
characterization of the phytoplankton community was done by to seasonal samples (rainy and
less rainy season). Information from physical and chemical factors (pH, electrical conductivity,
turbidity, water transparency, water temperature, salinity), climatological (precipitation) and
hydrological (hydrometric level and river discharge). Phytoplankton was represented by 178 taxa.
Although, these ecosystems are located in a great ecotone, they present a low specific diversity in
contrast to the high specific diversity from other Amazonian environments. Lakes presented
higher specific richness and diversity than the River. On both seasonal periods, lakes and
Araguari River presented low phytoplankton composition complexity, described by C-strategists
species, represented predominantly by cryptophytes and chrysophytes. These species are
characteristic of shallow and turbid environments. The presence of estuarine species increases the
diversity in some lakes and in Araguari River. They also contribute to the complexity increase of
the phytoplanktonic community. The spatial uniformity between lakes probably is related to the
low variation between the physical and chemical conditions. However, the river phytoplankton
composition changed with the horizontal gradient observed for the physical and chemical factors
when it comes near the delta. The environmental characteristics favoured the dominance of
species form the functional groups S, X 1 , X 3 and Y in distinct points of the lakes and the Araguari
River. They were also linked with the low significant incidence of desmids. The relevant
regulatory factors on the phytoplankton population composition and abundance on these
environments were the conspicuous variation on the water column between both seasonal
periods, the water from the daily tide in the river and some lakes estudied, the presence of
currents on lakes, the constant mixture on the water column and the low water transparency,
especially on the less rainy season. / O presente estudo foi desenvolvido a sudoeste da Reserva Biológica do Lago Piratuba, na
planície de inundação do rio Araguari, região costeira do estado do Amapá, Brasil. Os ambientes
estudados compreendem os lagos Comprido de Cima, Bacia, Lodão, Ventos, Grande e Comprido
de Baixo e o baixo curso do rio Araguari. Esta região localiza-se em área de intenso
hidrodinamismo, sofrendo influência de maré semidiurna, da pluma de sedimentos do rio
Amazonas e da freqüência e periodicidade das chuvas locais. A caracterização ecológica da
comunidade fitoplanctônica desses ecossistemas foi feita a partir de duas amostragens sazonais
(chuvoso e menos chuvoso). Foram realizadas análises físicas e químicas (pH, condutividade
elétrica, turbidez, transparência da água, temperatura da água, salinidade), climatológicas
(pluviosidade) e hidrológicas (nível hidrométrico e vazão do rio). As populações fitoplanctônicas
foram quantificadas pelo método da sedimentação em microscópio invertido. O fitoplâncton
esteve representado por 178 táxons. Apesar dos sistemas encontrarem-se em uma grande área de
ecótono, do ponto de vista do fitoplâncton a diversidade específica foi baixa em comparação com
a alta diversidade específica registrada para o fitoplâncton de outros ambientes amazônicos. Os
lagos apresentaram maior riqueza específica e diversidade do que o trecho rio estudado. Nos dois
períodos sazonais os lagos e o rio Araguari apresentaram baixa complexidade em a composição
florística, marcada por espécies C-estrategistas, representadas principalmente por criptofíceas e
crisofíceas características de ambientes rasos, turbulentos e com elevada turbidez. No entanto, a
presença de algas mixohalinas, além de aumentar a diversidade do rio Araguari e de alguns lagos,
principalmente no período menos chuvoso, também contribuíram para o relativo aumento da
complexidade da comunidade fitoplanctônica em certos lagos. A uniformidade espacial entre os
lagos provavelmente está relacionada à baixa variabilidade das condições abióticas. Já no rio, a
composição fitoplanctônica acompanhou o gradiente horizontal observado para as variáveis
físicas e químicas, à medida que se aproximava da foz. As características do ambiente
favoreceram a dominância de espécies dos grupos funcionais S, X 1 , X 3 e Y em pontos distintos
dos lagos e do rio Araguari e a presença pouco significativa das desmídias. A marcante variação
da coluna d’água entre os dois períodos sazonais, a entrada da maré diária no rio e em alguns
lagos estudados, a presença de corrente nos lagos, mistura constante da coluna d’água e a baixa
transparência, principalmente no período menos chuvoso configuraram-se como fatores
reguladores relevantes na composição e abundância das populações fitoplanctônicas desses
ambientes.
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Fator neurotr?fico derivado do c?rebro na s?ndrome da fibromialgiaHaas, Lisete 10 January 2008 (has links)
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Previous issue date: 2008-01-10 / O fator neurotr?fico derivado do c?rebro (BDNF) ? uma prote?na end?gena respons?vel por regular a sobreviv?ncia neuronal e a plasticidade sin?ptica do sistema nervoso perif?rico e central, O BDNF tem sido estudado em situa??es patol?gicas incluindo condi??es como a depress?o e a dor cr?nica, e tem sido citado nos est?mulos sensoriais nociceptivos e na hipersensibilidade ? dor. Resultados recentes da literatura mostraram aumento do BDNF no soro e l?quor de pacientes com fibromialgia (FM). Neste estudo mensuramos os n?veis s?ricos do BDNF em 30 pacientes com FM e 30 controles saud?veis pareados por sexo e idade analisados por enzima imunoensaio. Os pacientes com FM apresentaram n?veis numericamente superiores do BDNF (FM= 167,1 ? 171,2 ng/ml) quando comparados com o grupo controle (Controles= 113,8 ? 149,6 ng/ml), chegando perto do limite de signific?ncia estat?stica (p=0.056; teste de Mann-Whitney). No entanto, somente 6 dos 30 controles apresentaram valores superiores ? mediana (15/15) dos pacientes com fibromialgia (129 ng/ml) (p= 0,029, teste exato de Fisher bi-caudal). N?o houve correla??o entre os n?veis de BDNF no soro e idade, tempo de doen?a, escore de dor, pontos de dor e escore da HAM-D. Quanto ao tratamento com antidepressivos n?o encontramos diferen?as significativas entre os grupos. Os nossos resultados confirmaram os achados de estudos recentes do aumento dos n?veis s?ricos do BDNF em pacientes com FM, sugerindo que o BDNF pode estar envolvido na fisiopatologia da FM, mesmo com elevados n?veis de depress?o.
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Influ?ncia dos testes de triagem para detec??o de sangue nos exames imunol?gicos e de gen?tica forenseAlmeida, Juliana Piva de 31 March 2009 (has links)
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Previous issue date: 2009-03-31 / Manchas de sangue s?o vest?gios de grande import?ncia para a elucida??o de um crime. Sangue dilu?do, invis?vel a olho nu, ou em superf?cies escuras, pode ser detectado utilizando reagentes especiais, atrav?s dos chamados "testes presuntivos". Os efeitos dos testes preliminares para sangue utilizando luminol, Luminol 16?, Bluestar? Forensic e benzidina sobre os m?todos de inibi??o da antiglobulina humana, imunocromatogr?fico para hemoglobina humana e sobre o exame de DNA foram avaliados nesse trabalho. As manchas de sangue foram produzidas atrav?s da aplica??o de 2 μL de sangue venoso em fragmentos de tecido branco (100% algod?o). As amostras foram submetidas aos exames presuntivos e deixadas para secar por 48 horas antes da realiza??o dos testes de inibi??o da antiglobulina humana e imunocromatogr?fico para hemoglobina humana. O DNA foi extra?do pelo m?todo org?nico e quantificado com Quantifiler? Human DNA Quantification (Applied Biosystems) em 48 horas, 7 dias, 30 dias ou 120 dias ap?s a aplica??o dos reagentes. As amostras tratadas com ambas as prepara??es de luminol ou com Bluestar? Forensic obtiveram resultado positivo nos exames imunol?gicos, mostrando que n?o influenciam nos testes confirmat?rios para sangue humano. As 20 amostras tratadas com benzidina tiveram resultado negativo no teste de inibi??o da antiglobulina humana. Das 20 amostras submetidas ao teste imunocromatogr?fico, 18 obtiveram resultado negativo, evidenciando o efeito delet?rio da benzidina sobre os testes confirmat?rios para sangue humano. Atrav?s de PCR em tempo real foi poss?vel observar que, 48 horas ap?s contato com a solu??o de benzidina, as amostras tiveram o DNA degradado. Todos os reagentes testados causaram degrada??o do DNA, em diferentes extens?es, ap?s 120 dias de sua aplica??o.
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Diversidade gen?tica de isolados de Salmonella Enteritidis avaliada por FAFLP (An?lise de fragmentos polim?rficos amplificados e fluorescentes) e MLST (Tipifica??o por sequenciamento de m?ltiplos loci)Kober, M?rcia de Vargas 22 January 2010 (has links)
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Previous issue date: 2010-01-22 / A Salmonella Enteritidis ? uma das principais bact?rias causadoras de gastrenterite, tamb?m podendo ser respons?vel por doen?as sist?micas. A adequada caracteriza??o deste microrganismo ? essencial nos estudos epidemiol?gicos. Neste contexto, este estudo avaliou a utiliza??o de dois m?todos moleculares, Tipifica??o por Sequenciamento de M?ltiplos loci (MLST) e An?lise de Fragmentos Polim?rficos Amplificados e Fluorescentes (FAFLP), para a diferencia??o de 32 isolados de S. Enteritidis oriundos de diferentes fontes do sul do Brasil, bem como de cinco isolados de S. Enteritidis provenientes de outras ?reas geogr?ficas. Tamb?m foram inclu?dos neste estudo quatro isolados pertencentes a outros sorovares (S. Panama, S. Senftenberg, S. Typhimurium e Salmonella [4,5:-:1,2]. As duas t?cnicas escolhidas para este trabalho j? foram empregadas concomitantemente para analisar diferentes sorotipos de Salmonella, mas este estudo ? o primeiro a utiliz?-las para a diferencia??o de um mesmo grupo de isolados de S. Enteritidis. O esquema desenvolvido para o MLST incluiu a amplifica??o de fragmentos de dois genes constitutivos (hemD e mdh) combinado com dois genes de virul?ncia (ssaQ e slyA), aumentando, assim, a capacidade discriminat?ria do m?todo. Ambas as t?cnicas apresentaram altos ?ndices de poder discriminat?rio, calculados pelo ?ndice de diversidade de Simpson, 0,99 e 0,88 para FAFLP e MLST, respectivamente. Al?m disso, os m?todos avaliados tamb?m mostraram-se eficientes na discrimina??o de isolados de diferentes sorovares de Salmonella. Entretanto, a FAFLP e a MLST n?o foram capazes de diferenciar isolados provavelmente n?o relacionados epidemiologicamente, bem como n?o agruparam isolados pertencentes a um mesmo fagotipo. Desta forma, os resultados obtidos sugerem que ambas as t?cnicas podem ser ferramentas ?teis para a an?lise epidemiol?gica molecular de isolados de Salmonella, inclusive para um sorovar com grande homogeneidade gen?tica como a S. Enteritidis.
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Efeitos da capsaicina em c?lulas estreladas hep?ticasBitencourt, Shanna 17 August 2012 (has links)
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Previous issue date: 2012-08-17 / Liver fibrosis is the wound healing response to repeated injury of the liver. It is characterized by disruption of the liver architecture associated with increased expression of extracellular matrix components. Hepatic stellate cells (HSCs) play a key role in the process of fibrogenesis. In normal liver, HSCs are quiescent and its main function is to store vitamin A. During liver injury, these cells undergo activation, become myofibroblasts and acquire fibrogenic properties. Capsaicin, the active ingredient of red pepper has been extensively studied in recent years for possessing a wide range of pharmacological properties, including analgesic, anti-inflammatory, antiproliferative and anticarcinogenic in a variety of cell types. Therefore, the aim of this study was to investigate the in vitro effects of capsaicin on deactivation, differentiation and proliferation of HSCs, besides studying the possible mechanisms involved. The results showed that capsaicin is capable of inducing the quiescent phenotype in HSCs via PPARγ activation and blockage of TGF-β signaling. Increased levels of antifibrotic cytokines (IFN-γ and IL-10) and the reduction of pro-inflammatory and pro-fibrotic mediators (COX-2, MCP-1, type I collagen) showed that capsaicin inhibits the activation and migration of these cells. Furthermore, the mechanism used by capsaicin to inhibit cell proliferation is via cell cycle arrest. These findings demonstrate that capsaicin has the potential to be a novel therapeutic agent in the treatment of liver fibrosis due to its antifibrogenic and antiproliferative actions. / A fibrose hep?tica ? a resposta cicatricial do f?gado a les?es repetidas, caracterizada pelo rompimento da arquitetura hep?tica associada ao aumento da express?o dos componentes da matriz extracelular. As c?lulas estreladas hep?ticas (HSCs) desempenham um papel-chave no processo de fibrog?nese. No f?gado normal, as HSCs encontram-se em sua forma quiescente de dep?sito de vitamina A. Durante a les?o hep?tica, essas c?lulas passam por uma ativa??o fenot?pica, tornam-se miofibroblastos e adquirem propriedades fibrog?nicas. A capsaicina, princ?pio ativo da pimenta vermelha, tem sido muito estudada nos ?ltimos anos por possuir uma extensa gama de propriedades farmacol?gicas, que incluem efeitos analg?sicos, anti-inflamat?rios, antiproliferativos e anticarcinog?nicos em uma variedade de tipos celulares. Por essa raz?o, o objetivo deste estudo foi investigar os efeitos in vitro da capsaicina na inativa??o, diferencia??o e prolifera??o das HSCs, al?m de estudar os poss?veis mecanismos envolvidos. Os resultados obtidos mostraram que a capsaicina ? capaz de induzir o fen?tipo quiescente nas HSCs via ativa??o de PPARγ e bloqueio da sinaliza??o de TGF-β. O aumento nos n?veis de citocinas antifibr?ticas (IFN-γ e IL-10) e a diminui??o de mediadores pr?inflamat?rios e pr?-fibr?ticos (COX-2, MCP-1, col?geno tipo I) comprovaram que a capsaicina inibe a ativa??o e migra??o dessas c?lulas. Al?m disso, o mecanismo utilizado pela capsaicina para inibir a prolifera??o celular ? via parada do ciclo celular. Essas descobertas mostram que a capsaicina tem potencial para ser um novo agente terap?utico no tratamento da fibrose hep?tica devido a suas a??es antifibrog?nicas e antiproliferativas.
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A enzima chiquimato quinase (EC 2.7.1.71) de Mycobacterium tuberculosis como alvo para o desenvolvimento de drogasRosado, Leonardo Astolfi 19 April 2013 (has links)
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Previous issue date: 2013-04-19 / Tuberculosis remains as one of the main cause of mortality worldwide due to a single infectious agent, Mycobacterium tuberculosis. The aroK-encoded Mycobacterium tuberculosis Shikimate Kinase (MtSK), shown to be essential for survival of bacilli, catalyzes the phosphoryl transfer from ATP to the carbon-3 hydroxyl group of shikimate (SKH), yielding shikimate-3-phosphate and ADP. Here we present purification to homogeneity, and oligomeric state determination of recombinant MtSK. Biochemical and biophysical data suggest that the chemical reaction catalyzed by monomeric MtSK follows a rapid-equilibrium random order of substrate binding, and ordered product release. Isothermal titration calorimetry (ITC) for binding of ligands to MtSK provided thermodynamic signatures of non-covalent interactions to each process. A comparison of steady-state kinetics parameters and equilibrium dissociation constant value determined by ITC showed that ATP binding does not increase the affinity of MtSK for SKH. In addition, there appears to be a positive free energy coupling of 3.2 kJ mol-1 for SKH binding to MtSK:Mg2+ATP binary complex, which suggest that ATP displays negative cooperativity for SKH binding. We suggest that MtSK would more appropriately be described as an aroL-encoded type II shikimate kinase. Our manuscript also gives thermodynamic description of SKH binding to MtSK and data for the number of protons exchanged during this bimolecular interaction. The negative value for the change in constant pressure heat capacity (ΔCp) and molecular homology model building suggest a pronounced contribution of desolvation of non-polar groups upon binary complex formation. Thermodynamic parameters were deconvoluted into hydrophobic and vibrational contributions upon MtSK:SKH binary complex formation. Data for the number of protons exchanged during this bimolecular interaction are interpreted in light of astructural model to try to propose the likely amino acid side chains that are the proton donors to bulk solvent following MtSK:SKH complex formation. / A tuberculose se mant?m como uma das principais causas de mortalidade ao redor do mundo devido a um ?nico agente infeccioso, o Mycobacterium tuberculosis. O gene aroK que codifica a enzima Chiquimato quinase de Mycobacterium tuberculosis (MtSK), que se mostrou essencial para a sobreviv?ncia do bacilo, catalisa a transfer?ncia de um grupo fosforil do ATP para o chiquimato (SKH), resultando em chiquimato-3-fosfato e ADP. O presente trabalho apresenta a purifica??o da prote?na MtSK at? a homogeneidade e a determina??o de seu estado oligom?rico em solu??o. Estudos bioqu?micos e biof?sicos apresentados nesta tese sugerem que a rea??o catalisada pela MtSK monom?rica segue um mecanismo de equil?brio r?pido ordenado aleat?rio na adi??o dos substratos e uma libera??o ordenada sequencial dos produtos. A an?lise por calorimetria de titula??o isot?rmica (ITC) das intera??es n?o covalentes da enzima MtSK com diferentes ligantes resultou na determina??o de assinaturas termodin?micas para cada um desses eventos de liga??o. A compara??o entre as constantes de afinidade obtidas por espectrofotometria e ITC demostraram que o ATP n?o aumenta a afinidade da prote?na MtSK pelo SKH. Al?m disso, foi determinada em + 3,2 kJ mol-1 a energia livre de acoplamento do SKH ao complexo bin?rio MTSK:Mg2+ATP, sugerindo que o ATP possui uma cooperatividade negativa em rela??o ao SKH. Esse trabalho sugere que a MtSK deveria ser mais apropriadamente descrita como uma chiquimato quinase do tipo II codificada pelo gene aroL. Adicionalmente, estre trabalho demonstra a descri??o termodin?mica do SKH se ligando a MtSK aonde os resultados sugerem o n?mero de pr?tons que est?o sendo trocados durante a intera??o bimolecular. O valor negativo encontrado para a capacidade calor?fica em press?o constante (ΔCp) e o modelo molecular por homologia criado sugerem uma pronunciada contribui??o na dessolvata??o de grupos apolares relacionados ? forma??o do complexo. As constantes termodin?micas foram separadas na contribui??o hidrof?bica e vibracional relacionadas ? forma??o do complexo bin?rio MtSK:SKH. Os resultados obtidos relacionados ? transfer?ncia de pr?tons durante a forma??o do complexo bin?rio foram analisados tendo como refer?ncia o modelo estrutural da enzima MtSK constru?do neste trabalho. De acordo com as cadeias laterais que fazem contato com o SKH no modelo proposto, se pode indicar que os amino?cidos Arg58 e Arg136 atuam como fonte de pr?tons durante a forma??o do complexo bin?rio.
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